Orientador: Marcus Antônio Rossi Feliciano / Coorientador: Geórgia Modé Magalhães / Coorientador: Ricardo Andres Ramirez Uscategui / Banca: Thiago Demarchi Munhoz / Banca: Pamela Rodrigues Reina Moreira / Banca: Paola Castro Moraes / Banca: Adriana Coelho de Souza / Resumo: As neoplasias mamárias em cadelas são as neoplasias mais comuns e metade dos tumores apresentam classificação histopatológica maligna no momento do diagnóstico. Objetivou-se neste estudo avaliar a fibrose tecidual e correlação com a malignidade nas neoplasias mamárias em cadelas. Foram selecionadas 85 amostras de nódulos mamários que foram divididos em Grupo 1: neoplasias mamárias benignas (n = 21); Grupo 2: neoplasias mamárias malignas (n = 64). Foram preparados cortes histopatológicos com hematoxilina e eosina e tricômio de Masson para vizibilização de tecido conjuntivo e avaliação de fibrose tecidual por meio da análise do programa Image ProPlus versão 4.5. Foi realizada análise estatística pelo teste de Kruskal Wallis, correlação pelo teste de Pearson e com o valor da mediana da porcentagem de fibrose nos tumores malignos foi testada a sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo e negativo, acurácia do teste para diagnóstico de malignidade e relação entre a porcentagem de fibrose e probabilidade do diagnóstico ser maligno pela regressão logística binária com nível de significância de 5% para todos os testes. A idade mais frequente foi 10 anos e diversas raças foram encontradas com predomínio de fêmeas mestiças. As lesões mamárias não neoplásicas foram hiperplasia ductal (4) e lobular (6) e as neoplasias benignas foram: adenoma cístico (1), complexo (4) e tubular (2) e tumor misto benigno (4). As neoplasias malignas foram carcinoma complexo (7), de células esca... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Breast neoplasms in bitches are the most common neoplasms and half of the tumors present malignant histopathological classification at the time of diagnosis. The objective of this study was to evaluate tissue fibrosis and the correlation with malignancy in mammary neoplasms in bitches. It was selected 85 samples of mammary nodules that were divided into Group 1: benign mammary neoplasms (n = 21); Group 2: malignant breast neoplasms (n = 64). Histopathological sections were prepared with hematoxylin and eosin and Masson's trichrome for the visualization of connective tissue and assessment of tissue fibrosis through the analysis of the Image ProPlus version 4.5 program. Statistical analysis was performed using the Kruskal-Wallis test, Pearson test correlation and the median percentage of fibrosis in malignant tumors. Sensitivity, specificity, positive and negative predictive value, test accuracy for malignancy diagnosis and relation between the percentage of fibrosis and the probability of diagnosis being malignant were tested by binary logistic regression with significance level of 5% for all tests. The most frequent age was 10 years and several races were found with predominance of mixed females. Non-neoplastic mammary lesions were ductal (4) and lobular hyperplasia (6) and benign neoplasms were: cystic (1), complex (4) and tubular (2) adenoma and benign mixed tumor (4). Malignant neoplasms were complex (7), squamous (2), tubulopapillary (18), solid (13) in situ carcinoma (3) and malignant mixed tumor (21). The most frequent histopathological grade was grade I (29) followed by grade II (28) and III (7). Fibrosis in malignant breast neoplasms was classified as severe (45), moderate (14), and discrete (5). Statistical analysis revealed a significant difference (p = 0.0284) in the percentage of fibr... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Cristiane Yume Koga Ito / Coorientadora: Marcia Hiromi Tanaka / Banca: Luana Marotta Reis de Vasconcellos / Banca: Bruno Mello de Matos / Banca: Soraya Carvalho da Costa / Banca: Daniel Freitas Alves Pereira / Resumo: A Fibrose Cística (FC) é uma doença genética de elevada prevalência global e que causa função anormal das glândulas exócrinas. As alterações nas funções das glândulas salivares podem impactar a saúde bucal que por sua vez podem influenciar a saúde geral. A boca pode representar um reservatório microbiano de potenciais patógenos e colonizadores das vias aéreas, causando infecções crônicas pulmonares. O objetivo deste estudo foi avaliar os impactos da FC na cavidade bucal, saliva e microbioma bucal. Foram incluídos no estudo 50 pacientes com diagnóstico de FC com idades de 3 a 20 anos, divididos em 2 grupos de acordo com o grau de severidade da doença determinado pelo escore de Shwachman-Kulczycki: G1 (baixa severidade) e G2 (alta severidade). Foi também incluído grupo controle pareado ao grupo de estudo quanto ao gênero e idade (G3, n=50). A presença de lesões de cárie foi avaliada. O impacto da FC sobre a saúde bucal foi avaliado por questionário preenchido pelos pais ou responsáveis. Amostra de saliva estimulada foi coletada de todos os pacientes. O microbioma bucal foi avaliado por Human Oral Microbe Identification using Next Generation Sequencing (HOMINGS) e metodologias de cultivo, para análise da microbiota potencialmente oportunista e cariogênica. Realizou-se ainda a análise proteômica da saliva e quantificação de imunoglobulinas salivares. Os resultados foram analisados e, de acordo com a distribuição dos dados e avaliação desejada, foram aplicados os testes estatístic... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract : Cystic Fibrosis (CF) is a genetic disease with high global prevalence that causes abnormal function of the exocrine glands. The functional alterations of salivary glands and saliva can impact the oral health and influence general health. Oral cavity may represent a microbial reservoir of potential pathogens that can colonize the airways and cause chronic pulmonary infections. The aim of this study is to evaluate the impact of cystic fibrosis on the oral cavity, saliva and oral microbiome. Fifty CF patients aged from 3 to 20 years were divided into two groups according to the disease severity determined by the Shwachman-Kulczycki score: G1 (low severity) and G2 (high severity). Also, age and gender paired control group was included in the study (G3, n = 50). The occurrence of caries was evaluated. The impact of CF on oral health was evaluated by a questionnaire filled by parents or responsible person. Stimulated whole saliva (WS) samples were collected from all patients. The oral microbiome was analyzed by Human Oral Microbe Identification using Next Generation Sequencing (HOMINGS) and by microbiological culture methodologies to evaluate the potential opportunistic and cariogenic microbiota. The proteomic analysis of saliva and quantification of salivary immunoglobulins were carried out. Statistical analysis was performed according to the normality of the data at a significance level of 5%. The applied questionnaire pointed out that oral health did not impact systemic health negatively, according to the parents in all groups. The groups of patients with CF had lower rates of dmft, DMFT, salivary flow rate and initial pH in comparison to the control group. The counts of staphylococcal and yeast from CF groups were significant higher than the controls. All fungal isolates were susceptible to the antifungal agents. Higher incidence of bacterial resistance was ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2016-05-17T16:51:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-09. Added 1 bitstream(s) on 2016-05-17T16:54:19Z : No. of bitstreams: 1 000864292.pdf: 560822 bytes, checksum: 00619648648254d006882132faf2729b (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / We investigated the presence of promastigotes of Leishmania spp. by immunohistochemical method in intestines, ovaries and salivary glands of Rhipicephalus sanguineus ticks in dogs. In this study, was used, 66 dogs positive and 33 negative for Leishmania spp. by immunoenzymatic test (ELISA), direct cytological examination and by polymerase chain reaction (PCR). A total of 990 ticks were collected from these 99 dogs, 10 per animal and these were dissected, with further separation of the intestines, ovaries and salivary glands. Slides of these organs were made for the implementation of immunohistochemistry (IHC). Also the real-time PCR was performed in these organs as well as the quantification of that parasite load. For real-time PCR of the guts, ovaries and salivary glands of ticks were detected positivities 93.94%, 46.97% and 27.27%, respectively. The average parasitic loads in the intestine were 9027.90 Leishmania/μL, the ovaries 411.66 Leishmania/μL and salivary glands 305.56 Leishmania/μL. Regarding the readings of IHC slides in 98.48% of the intestines, 13.64% of the ovaries and 7.58% of the salivary glands were positive for Leishmania spp. In view of these results shown by IHC technique, using the lipofosfoglicano primary antibody (LPG), we consider the possibility of the presence of promastigotes of Leishmania spp. in R. sanguineus organs / FAPESP: 2011/51113-4

Título original: Análise morfofisiológica in vitro da ação de extratos de glândulas salivares de fêmeas de carrapatos Rhipicephalus sanguineus (Acari: Ixodidae) sobre a linhagem J774 e macrófagos peritoneais de camundongos BALB/C / Orientador: Maria Izabel Souza Camargo / Banca: Fabiana Alonso Rocha / Banca: Patricia Ucelli Simioni / Resumo: A espécie Rhipicephalus sanguineus s. l., mais conhecida como "carrapato do cão", possui uma grande importância médico-veterinária, não só por espoliar seus hospedeiros, mas também por ser um potencial vetor de agentes patogênicos. O sucesso biológico desses ectoparasitas deve-se à produção de uma saliva complexa produzida pelas glândulas salivares, cujos compostos são capazes de modular o sistema imune inflamatório e hemostático dos hospedeiros. No entanto, mesmo com o conhecimento adquirido sobre o potencial da saliva no sistema imune-inflamatório dos hospedeiros, pouco se estudou sobre os mecanismos de ação dos extratos glandulares nessa resposta, e as alterações morfofisiológicas envolvidas. Desta forma, o presente projeto propôs a análise dos efeitos in vitro de extratos de glândulas salivares de fêmeas de carrapatos R. sanguineus s. l. com 2 e 4 dias de alimentação (EG2 e EG4) sobre macrófagos peritoneais de camundongos BALB/c e células da linhagem J774, observando possíveis variações na atividade e na morfofisiologia destas células em função das diferentes exposições ao extrato. Os resultados demonstraram que apenas a concentração de 4 µg/mL do extrato EG2 apresentou citotoxicidade sobre células da linhagem J774 quando expostas por 48 horas; as concentrações de 4 e 2 µg/mL de ambos os extratos estimularam perfis pró inflamatórios em macrófagos peritoneais de camundongos BALB/c; a concentração de 2 µg/mL no tempo de 48 horas de exposição e 1 µg/mL no de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The species Rhipicephalus sanguineus s. l., better known as "dog tick", has a great medical-veterinary importance, not only for spolling its hosts, but also because it is a potential vector of pathogens. Biological success of these ectoparasites is due to the production of a complex saliva produced by salivary glands, whose compounds are able to modulate the immune system inflammatory and hemostatic properties of the hosts. However, even with the knowledge acquired on the potential of saliva in the immune-inflammatory system of the hosts, little was studied about the mechanisms of action of glandular extracts in this response, and the morphophysiological changes involved. In this way, the present project proposed analysis of the in vitro effects of extracts of salivary glands from female ticks R. sanguineus s. l. with 2 and 4 days of feeding (EG2 and EG4) on peritoneal macrophages of BALB / c mice and J774 cells, noting possible variations in the activity and in the morphophysiology of these cells due to the different exposures to extract. The results demonstrated that only the concentration of 4 μg / mL of the extract EG2 showed cytotoxicity on cells of the J774 lineage when exposed by 48 hours; the concentrations of 4 and 2 μg / mL of both extracts stimulated pro-inflammatory response in peritoneal macrophages of BALB / c mice; the concentration of 2 μg / mL at the 48 hour exposure time and 1 μg / mL at the 24 hour exposure time of the EG2 and concentrations 2 and 1 μg / m... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Tese (doutorado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2009. / Inclui bibliografias / Estudo caso-controle de 102 adolescentes pareados por sexo e idade: grupo DM1, composto por 51 adolescentes com DM1 e grupo controle, composto por 51 adolescentes sem DM1. Indivíduos do grupo DM1 foram avaliados pelo tempo de DM1 e testes de hemoglobina g / The purpose of this study was to investigate the effects of type 1 diabetes mellitus (DM1) on the oral health of adolescents. A cross-sectional study was performed with 102 adolescents paired regarding sex and age: DM1 group, comprised of 51 adolescents w

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2007 / Bibliografia: f. 29-32 / Este estudo avaliou o efeito dos antidepressivos, Fluoxetina e Venlafaxina, sobre o tamanho (T), massa (M), volume celular (VC), das glândulas salivares parótidas de ratos e a velocidade do fluxo salivar (VFS). Além disso, avaliou a ação secretagôga da pi / Abstract: This study assessed the effect of the antidepressants, Fluoxetine and Venlafaxine, on the size (GS), mass (M), cellular volume (CV), of rat parotid salivary glands and salivary flow rate (SFR), as well as the secretagogue action of pilocarpine o

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-03-14T18:51:10Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 943385 bytes, checksum: 8adee72c3a2e9d49512f689910c76c69 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-14T18:51:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 943385 bytes, checksum: 8adee72c3a2e9d49512f689910c76c69 (MD5) Previous issue date: 2016-12-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Mastite causada por Escherichia coli tem a capacidade de estimular intensamente o sistema imunológico e desencadear rapida inflamação na glândula mamária. Em contraste, Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP), agente etiológico da paratuberculose, caracterizada por enterite granulomatosa crônica, pode infectar a glândula mamária sem estimular intensamente a resposta inflamatória. A interação dessas duas bactérias na glândula mamária ainda é desconhecida. Em alguns casos, tanto a eliminação de MAP pelo leite como pelas fezes podem ocorrer de forma passiva, após a infecção ascendente da glândula mamária ou após ingestão de MAP, respectivamente. Estes animais, chamados passive-shedders, são importantes como uma fonte de infecção a animais suscetíveis no rebanho. O objetivo deste estudo foi investigar a relação entre MAP e E. coli em células de glândula mamária sob condições experimentais e verificar a presença de animais passive-shedders. A relação entre uma cepa K-10 de MAP e E. coli isolada de leite mastítico em linhagem de células epiteliais mamárias (MAC-T) foi avaliada. As células previamente infectadas com MAP diminuíram a invasão de E. coli durante 120 min de experimentação. Contudo, a eficiência da translocação de E. coli e a viabilidade das células MAC-T não foram comprometidas. Ao contrário, células previamente infectadas por E. coli aumentaram a capacidade de translocação baso-apical de MAP até os 30 min e diminuiu aos 120min pós-infecção. A quantificação de citocinas relevou que a expressão de IL-1β aos 120min foi significativa (P<0.05) para células infectadas por MAP + E. coli e E. coli apenas. As expressões de MAPKp 38 e IL-10 não foram significativas, independente do tempo pós-infecção. Para detectar a ocorrência de animais passive-shedders, 10 propriedades foram previamente investigadas para a presença de MAP. Treze cabras foram positivas por cultura de fezes e/ou PCR de leite. Dentre os animais positivos, quatro (4/13) foram adquiridas e avaliados por IS900-PCR, cultura de fezes, de leite e de tecido, e sorologia (ELISA). Todos os resultados foram negativos no período de um ano, demonstrando que os animais realizaram o fenômeno pass-through e a contaminação ascendente da glândula mamária, sem tornarem-se infectados. No geral, esses resultados indicam que a presença de MAP nas células mamárias pode dificultar a capacidade de invasão de E. coli, mas quando no interior da célula mamária, translocam-se mais eficientemente. No entanto, quando as células são previamente infectadas por E. coli, MAP é rapidamente atraído da região subepitelial para a superfície celular. A produção de IL-1β intensifica a atração de macrófagos para o sítio de infecção, onde MAP se beneficia, infectando-os. / Mastitis caused by Escherichia coli can intensely stimulate the immune system and rapidly trigger inflammation in the mammary gland. In contrast, Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP), the etiological agent of paratuberculosis, characterized by chronic granulomatous enteritis, can infect the mammary gland without intensely stimulating the inflammatory response. The interaction of these two species in the mammary gland is still unknown. In some cases, both the elimination of MAP by milk and faeces may occur passively, either through ascending infection of the mammary gland or through ingestion of MAP, respectively. These animals are called passive- shedders and are important as a source of infection to susceptible animals in the herd. The aim of this study was to investigate the relationship between MAP and E. coli in mammary gland cells under experimental conditions and verify the presence of passive- shedder animals. The relationship between a K-10 strain of MAP and E. coli isolated from mastitic milk in mammary epithelial cell lines was evaluated. Cells previously infected by MAP decreased E. coli invasiveness during 120min experimentation. However, the efficiency of E. coli translocation was not compromised, nor was the viability of the MAC-T cells. In contrast, cells previously infected by E. coli showed increased basal-apical translocation capacity of MAP up to 30 min and decreased at 120 min postinfection. Quantification of cytokines showed that IL-1β expression at 120 min was significantly increased in cells infected by MAP + E. coli and E. coli only. Expression of MAPKp 38 and IL-10 were not significant, regardless of time postinfection. To determine the occurrence of passive-shedders, 10 properties were previously investigated for MAP detection. Thirteen goats were positive by faeces culture and/or milk PCR. Among the positive animals, four (4/13) were evaluated by IS900-PCR, feces culture, milk and tissue culture and serology (ELISA). All the results were negative over a one-year period, demonstrating that the animals performed pass- through phenomenon and upward contamination of the mammary gland without becoming infected. Together, these results indicate that the presence of MAP in mammary cells may hamper capacity of E. coli invasion, but when within the mammary cell, the bacteria evade more efficiently. However, when the cells are pre-infected by E. coli, MAP is rapidly attracted from the subepithelial region to the cell surface. IL-1β production enhances the attraction of macrophages to the site of infection, where MAP benefits by infecting them.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-05-23T11:58:33Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 664042 bytes, checksum: 760ba21f1908906030a13daa97304915 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-23T11:58:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 664042 bytes, checksum: 760ba21f1908906030a13daa97304915 (MD5) Previous issue date: 2017-02-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A grande extensão de área com cultura de soja intensificoua ocorrência de diversas pragas, dentre elas, o percevejo-marrom, Euschistus heros (Fabricius, 1798) (Pentatomidae). Os danos desta praga vêm se tornando cada vez mais expressivos, devido ao seu aumento populacional, manejo inadequado e resistência a inseticidas, o que resulta em perda de produtividade. As plantas apresentam mecanismos de defesa contra os insetos e, por sua vez, estes tentam burlar estas defesas. Estudos sobre a interação inseto/planta têm sido realizados analisando a via de defesa da planta e/ou enzimas digestivas das pragas. Entretanto, não há relatos sobre enzimas digestivas presentes no intestino e nas glândulas salivares do percevejo- marrom após interação com a soja, ao longo do tempo. Assim, este estudo teve como objetivo avaliar o perfil das enzimas presentes no intestino médio e nas glândulas salivares após serem alimentados com as cultivares IAC 24 (resistente) e IAC Foscarin 31 (susceptível). Sendo este o início dos estudos em relação ao controle desta praga com base em aspectos bioquímicos. Plantas, no estágio R5, foram infestadas com machos do percevejo. As avaliações foram realizadas em diferentes tempos de alimentação (0, 24, 48, 72 e 96 horas). Após cada tempo, retirou-se os intestinos e as glândulas salivares. As atividades das enzimas proteolíticas, amilase e lipase, foram realizadas de acordo com protocolos específicos. Tanto no intestino como nas glândulas salivares não foi detectada atividade de cisteíno proteases. No intestino médio, a atividade de proteases totais apresentou diferença para tempo, cultivar e interação cultivar x tempo. A amilase foi diferente somente para o tempo e lipase diferiu no tempo e na interação. Nas glândulas salivares, a atividade de proteases totais apenas diferiu em relação às cultivares analisadas. A amilase mostrou significância tanto para o tempo quanto para a interação e lipase foi significativa para as três fontes de variações avaliadas. Assim, observou- se o comportamento das enzimas responsivo a alimentação com os distintos cultivares. Estudos mais aprofundados são necessários para entender o porquê das oscilações registradas nas condições analisadas. / Great extension of soybean crop intensified the occurrence of several pests, including the brown stink bug Euschistus heros, which is considered one of the main soybean pests. Pest damage has become increasingly significant due to its population increase, inadequate management and resistance to insecticides, resulting in soybean productivity losses. Plants have defense mechanisms against insects, and these latter in turn try to cheat these defenses. Plant-insect interaction studies have been performed by analyzing plants defense-signaling pathways and/or pest’s digestive enzymes. However, digestive enzymes present in the gut and salivary glands of the stink bugafter his interaction with soybeans over the time has not been reported. Thus, the aim of this study was to assess the enzymatic profile present in the midgut and salivary glands of the stink bug after feeding with IAC 24 (resistant) and IAC Foscarin 31 (susceptible) soybean crop. This being the beginning of the studies in relation to the control of this pest based on biochemical aspects. Plants at the R5 stage were infected with male stink bug. Assessments were performed at different feeding times (0, 24, 48, 72 and 96 hours). After each time, midgut and salivary glands were removed. The proteolytic enzyme assays, amylase and lipase were performed according to specific protocols. Cysteine proteases activities were not detected in the midgut and salivary glands. In the midgut, total proteases activity presented difference for time, cultivar and cultivar x time interaction. Amylase activity was different only in time, meanwhile lipase differed in time and interaction. In the salivary glands, total proteases activity differed only in relation to the cultivars analyzed. Amylase activity showed significance for time and in interaction, while lipase was significant for the three sources of variations assessed. Thus, the behavior of the enzymes responsive to feeding with the different cultivars was observed. Further studies are needed to understand why the oscillations recorded under the conditions analyzed.

O câncer é um problema de saúde pública mundial, apresentando acréscimo na sua incidência a cada ano. O seu processo de evolução ainda não foi completamente desvendado, dificultando a elaboração de terapias adequadas. Na busca por um melhor prognóstico, pesquisas recentes têm discutido o papel das citocinas inflamatórias, do nicho perivascular e das células-tronco nos mecanismos de desenvolvimento e manutenção dos tumores malignos. Os tumores de glândula salivar representam uma pequena porcentagem das patologias malignas da região de cabeça e pescoço, podendo ocorrer em adultos e em crianças. O diagnóstico dificilmente é precoce e a taxa de sobrevida é extremamente baixa comparada aos demais tumores da região. Assim, este estudo teve como objetivo estudar as células provenientes dos tumores de glândula salivar do tipo adenoide cístico (CAC) e adenocarcinoma NOS (AdNOS) quanto ao seu perfil imunofenotípico, quanto à existência ou não de células-tronco tumorais nessa população, bem como investigar possíveis modificações na ativação de STAT3, Akt e ERK (moléculas envolvidas em vias de sinalização de manutenção do tumor), quando em contato com fatores secretados por células endoteliais. Foram coletados 5 CACs e 4 AdNOS, no Hospital da Universidade de Michigan (Ann Arbor, MI, EUA), durante 2010 e 2012. As células foram isoladas e caracterizadas em citometria de fluxo em P0 e P7, demonstrando um perfil de células CD44+ALDH+Lin- variando de 0,33 a 3,19% e 0,36 a 2,00%, respectivamente, entre 5 linhagens avaliadas. Na avaliação por western blotting, a e-caderina, o Snail e a actina de músculo liso foram ausentes em todos os tipos tumorais, enquanto que a citoqueratina 20 (Ck20) foi presente apenas nos AdNOS. Comparando os tumores com suas metástases, a presença de Ck20, p63 e β-catenina foi semelhante, enquanto que citoqueratina 7, a vimentina e o Bmi-1 foram maiores nas metástases. Tanto os AdNOS quanto CACs apresentaram receptores para IL-6, IL-8 e EGF. Foi observado que mediadores solúveis liberados pelas células endoteliais foram capazes de fosforilar STAT3, Akt e ERK em todas as células salivares estudadas, no entanto, a proteína recombinante humana IL-6, isoladamente, não foi capaz de ativar Akt. Orosferas foram geradas em todos os tipos tumorais, demonstrando o potencial de auto-renovação celular. Um maior número de esferas foi observado nas células metastáticas em relação às primárias. Células CD44+ALDH+, comparadas com CD44-ALDH-, geraram mais esferas, quando plaqueadas em alta densidade (5.000 células). No entanto, o inverso foi encontrado, quando uma única célula foi utilizada para o ensaio (p>0,05). Devido à dificuldade de obtenção e manipulação de células de tumores de glândula salivar, ainda há muito que se investigar mecanisticamente. Considerando a fosforilação de STAT3 na presença de IL-6, semelhante ao verificado em outros tumores, o uso de anticorpos contra IL-6, talvez sejam uma opção no futuro. / Cancer is a public health problem worldwide, with an increase in incidence every year. The process of its evolution is still not completely understood, hindering the development of appropriate therapies. In the search for a better prognosis, recent reports have discussed the role of inflammatory cytokines, perivascular niche and stem cells in the mechanisms of development and maintenance of malignant tumors. The salivary gland tumors represent a small percentage of malignancies of the head and neck and can occur in both adults and children. Early diagnosis is difficult and the survival rate is extremely low compared to other tumors in the same region. Thus, this study aimed to study cells from the adenoid cystic carcinoma (ACC) and adenocarcinoma NOS (AdNOS) tumors of salivary gland regarding its immunophenotypic profile and the existence or absence of tumor stem cells in this population, as well as investigate possible changes in the activation of STAT3, Akt and ERK (molecules involved in signaling pathways of tumor maintenance), when exposed to factors secreted by endothelial cells. ACCs (n=5) and AdNOS (n=4) were collected at the Hospital of the University of Michigan (Ann Arbor, MI, USA), during 2010 to 2012. Cells were isolated and characterized by flow cytometry at P0 and P7, showing a profile of ALDH+CD44+Lin- ranging from 0.33% to 3.19% and 0.36% and 2.00%, respectively, between 5 cell lines evaluated. In the protein profile, e-cadherin, Snail and SMA were absent in all tumor types. Ck20 was present only in AdNOS. Comparing primary tumors and their metastases, the presence of Ck20, and p63 β-catenin was similar, while Ck7, vimentin and Bmi-1 were higher in metastases. Both AdNOS as ACCs had receptors for IL-6, IL-8 and EGF. It was observed that soluble mediators released by endothelial cells were able to activate STAT3, Akt and ERK phosphorylation in all cells studied. However, recombinant human IL-6 alone was not able to activate Akt. Orospheres were generated in all tumor types, indicating the potential for cellular self-renewal. Highest number of spheres was observed in metastatic cells compared to primary. ALDH+CD44+ cells compared to ALDH-CD44- generated more spheres when plated in high density (5,000 cells), however, the opposite was found when one single cell seed was evaluated (p> 0.05). There is doubt if these cell markers would be consider for a stem cell model in salivary tumors. Due to the difficulty of obtaining and manipulating salivary gland tumor cells, there is still much to investigate mechanistically. As the phosphorylation of STAT3, in the presence of IL-6, was similar to that observed in other tumors, the use of antibodies against IL-6, may be an option in the future.

Submitted by Diogo Misoguti (diogo.misoguti@gmail.com) on 2016-06-30T17:50:23Z No. of bitstreams: 1 cp111463.pdf: 4432662 bytes, checksum: a585b229b3b920b2ee4fda25aa3206c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Diogo Misoguti (diogo.misoguti@gmail.com) on 2016-06-30T17:52:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 cp111463.pdf: 4432662 bytes, checksum: a585b229b3b920b2ee4fda25aa3206c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-30T17:52:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 cp111463.pdf: 4432662 bytes, checksum: a585b229b3b920b2ee4fda25aa3206c7 (MD5) Previous issue date: 2009 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / OBJETIVO: Este estudo teve como objetivo verificar as modificações causadas na proliferação celular e na expressão gênica da glândula mamária de ratas com 21, 35, 50 e 100 dias que foram expostas à 2,3,7,8 tetraclorodibenzo-p-dioxina (TCDD) durante a gestação (tratamento pré-natal) ou durante a lactação (tratamento pré-pubertal). MÉTODOS: Para o tratamento pré-natal, ratas Sprague-Dawley prenhas receberam no 15º dia após a concepção dose única de 3,0µg de TCDD/kg através de gavagem. Para o tratamento pré-pubertal, ratas lactantes receberam no 14º e 17º dias pós-parto 6,67ng ou 20,0ng de TCDD/g. Animais controles receberam volume equivalente de óleo de gergelim. Ao atingiram 21, 35, 50 e 100 dias de idade, as filhotes fêmeas das ratas que receberam TCDD foram sacrificadas e tiveram as glândulas mamárias extraídas para estudo do índice de proliferação celular e expressão gênica. Para o cálculo de índice de proliferação celular, dez ratas por grupo receberam uma injeção intraperitoneal de 200 mg/kg de 5-bromo-2’-deoxiuridina (BrdU) e através de imunohistoquímica foram identificadas as células que estavam proliferando em cada estrutura da glândula mamária. Outras dez ratas por grupo tiveram o RNA da glândula mamária extraído, e este foi utilizado para o estudo de expressão gênica através de microarrays. Para determinar os genes diferencialmente expressos utilizou-se o teste-t bayesiano empírico moderado. Genes diferencialmente expressos (p<0,01) foram então categorizados de acordo com a função biológica ou via canônica de ação. Ainda, genes que se destacaram foram validados através de RT-PCR em tempo real. RESULTADOS: O tratamento pré-pubertal alterou a proliferação celular nas glândulas mamárias das ratas com 35, 50 e 100 dias, principalmente nos botões terminais (TEBs). A análise da expressão gênica demonstrou que o número máximo de genes diferencialmente expressos foi observado nos animais com 100 dias que receberam TCDD durante a gestação. No tratamento pré-pubertal, observou-se que a alta dose causou mais alterações do que a dose baixa. Cyp1b1 foi o gene que mais sofreu aumento de expressão em diferentes idades. A categorização dos genes desregulados de acordo com a função biológica mostrou que TCDD tem uma ampla ação, principalmente após o tratamento pré-pubertal com maior dose. As classes de genes mais afetadas foram proto-oncogenes, genes supressores de tumor e genes relacionados com o metabolismo de lipídeos. A via de sinalização mais atingida foi a via de sinalização do receptor de aril-hidrocarbono (AhR). Também se observou alterações na expressão de genes participantes da via de metabolização do estradiol, aumentando a produção de metabólitos prejudiciais ao DNA. CONCLUSÕES: O tratamento com TCDD resultou em mudanças na proliferação celular e na expressão gênica da glândula mamária das ratas. As mudanças gênicas observadas indicam que a célula mamária é submetida a estímulos genotóxicos ao mesmo tempo em que genes de reparo de DNA e supressores do crescimento tumoral ficam ativados no intuito de manter a estabilidade genômica. / PURPOSE: This work studied the modifications in cell proliferation and gene expression in the rat mammary gland of animals 21, 35, 50 and 100 days old that were exposed to 2,3,7,8 tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) during pregnancy (prenatal treatment) or during lactation (prepubertal treatment). METHODS: For the prenatal treatment, pregnant Sprague-Dawley rats received on the 15th day post-conception, single dose of 3.0µg TCDD/kg through gavage. For the prepubertal treatment, lactate dams received on the 14th and 17th days post-delivery either 6.67ng or 20.0ng TCDD/g. Control group received equivalent volume of sesame oil. When the female offspring reached 21, 35, 50 and 100 days of age, they were sacrificed and their mammary gland extracted for cell proliferation and gene expression analyses. To calculate the cell proliferation index, ten rats per group received an intraperitoneal injection of 200 mg/kg of 5-Bromo-2'- deoxyuridine (BrdU) and through immunohystochemistry the cells in proliferation were identified in each mammary gland structure. Other ten rats per group had the RNA extracted from the mammary gland and used for gene expression analysis through microarrays. To determine the differentially expressed genes empirical Bayes moderated one sample t-test was performed. Differentially expressed genes (p<0.01) were categorized accordingly with biological function and canonical pathways. In addition, important genes were validated through real time RT-PCR. RESULTS: The prepubertal treatment modified the cell proliferation of 35, 50 and 100 days-old rat mammary gland, mainly in the terminal end buds (TEBs). The gene expression analysis showed that the maximum number of differentially expressed genes was reached in 100 days-old rats that received TCDD during pregnancy. The prepubertal treatment induced more changes with higher dose of TCDD. Cyp1b1 was the gene the most up-regulated genes at different ages. The categorization of the dysregulated genes according with their biological function showed that TCDD has a wide action, especially after the prepubertal treatment with high dose. The groups of genes more affected by TCDD were the proto-oncogenes, tumor suppressor genes and genes related to the metabolism of lipids. The most affected canonical pathway was the aryl hydrocarbon receptor signaling pathway. In addition, genes related to estradiol metabolism were modulated increasing the production of metabolites that damage the DNA. CONCLUSIONS: The TCDD treatment induced changes in the cell proliferation and gene expression of the rat mammary gland. The genomic changes observed indicate that the mammary cell is submitted to genotoxic stimuli and DNA repair genes as tumor suppressor genes are activated to keep the genomic stability. / CAPES: BEX 2829/05-3