Orientador: Pablo Agustin Vargas / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-20T06:52:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fonseca_FelipePaiva_M.pdf: 2031852 bytes, checksum: 891d082818e43f0fa54efa8553fba38c (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Tumores de glândulas salivares correspondem à cerca de 3 a 6% de todos os tumores de cabeça e pescoço, apresentando uma ampla variação quanto à freqüência dos diferentes tipos histológicos e seus respectivos cursos clínicos. Desta forma, a determinação de novos marcadores moleculares que estejam relacionados com o comportamento biológico destas neoplasias se faz necessário e o uso da técnica de tissue microarray (TMA) ou micro-arranjo tecidual representa uma ferramenta altamente eficaz para a identificação destes marcadores. Sendo assim, o objetivo do presente estudo é avaliar as características clinicopatológicas de 493 neoplasias de glândulas salivares e descrever os princípios técnicos de construção de blocos de micro-arranjo tecidual, assim como suas vantagens e desvantagens para o estudo destes tumores. Para isto, os prontuários de um centro de patologia médica e de um centro de patologia oral compreendidos entre os anos de 2001 e 2011 foram revisados e os dados clinico patológicos coletados, enquanto que a construção dos blocos de TMA foi realizada por meio de equipamento manual de arranjo tecidual em matriz, onde três áreas tumorais representativas foram selecionadas e incluídas no bloco receptor. Após a obtenção dos resultados, foi observado que o adenoma pleomórfico e o carcinoma mucoepidermóide representaram as neoplasias benigna e maligna de glândulas salivares mais freqüentes e após a construção de 12 blocos de TMA foi possível obter boa representatividade utilizando-se cilindros de 1,0, 2,0 ou 3,0 mm, especialmente em neoplasias sólidas. Portanto, a distribuição dos tumores de glândulas salivares na amostra estudada está de acordo com os achados relatados anteriormente na literatura e a técnica de TMA apresenta-se como uma metodologia de alto rendimento e baixo custo no estudo de tumores de glândulas salivares / Abstract: Salivary gland tumors account for 3 to 6% of the head and neck tumors, with a broad variation in the incidence of their different histological subtypes and their respective clinical courses. For this reason, the determination of new molecular markers truly associated to the biological behavior of these neoplasias becomes necessary and the use of tissue microarray (TMA) technique represents a high-throughput laboratory tool for identifying such markers. The aim of the present study is to evaluate the clinic-pathological features of 493 salivary gland neoplasias and to describe the technical principles for construction of TMA blocks, as well as their advantages and disadvantages regarding the study of salivary gland tumors. For this, medical charts of a general pathology service and of an oral pathology service from 2001 to 2011 were reviewed and the clinic-pathological data acquired, whereas TMA blocks were constructed using a manual tissue arrayer by selecting three representative neoplastic areas to be included in the recipient block. Following the acquisition of the results, it was observed that pleomorphic adenoma and mucoepidermoid carcinoma represented the most frequent benign and malignant neoplasias, respectively, and that after the building of 12 TMA blocks it was possible to obtain high representative cores by using 1.0, 2.0 and 3.0 mm cylinders, especially in solid neoplasias. Hence, the distribution of salivary gland tumors in the sample studied is in agreement with the findings reported previously in the literature and the TMA technique presents as a high-throughput and low-cost methodology in salivary gland tumors study / Mestrado / Patologia / Mestre em Estomatopatologia

A oviparidade é o modo reprodutivo ancestral dos répteis e a viviparidade surgiu diversas vezes independentemente nos Squamata. O cenário evolutivo mais aceito para a evolução da viviparidade em répteis Squamata propõe que ela é uma adaptação a baixas temperaturas e que resulta de aumentos graduais e progressivos na quantidade de desenvolvimento embrionário ocorrendo dentro do útero antes da postura dos ovos. Essa transição é frequentemente tida como irreversível. No presente trabalho as cobras-dágua da tribo Hydropsini foram utilizadas como modelo para testar de forma comparativa diversas predições derivadas desse cenário. Especificamente, foi avaliado se a evolução da viviparidade na tribo (1) seria um fenômeno irreversível, (2) se ela seria associada a modificações na morfologia uterina e na espessura da casca do ovo e (3) se ela seria correlacionada a regiões de climas frios. Diferentes métodos de análise não corroboram a suposta irreversibilidade da viviparidade e sugerem que a oviparidade em algumas espécies possa ser resultado de reversões. A aquisição da viviparidade em Hydropsini foi acompanhada de modificações importantes na morfologia uterina que incluem a diminuição das dimensões das glândulas uterinas que secretam o material que compõe a casca de ovo. A hipótese de que os aumentos na retenção uterina são acompanhados por diminuição na espessura da casca do ovo não foi corroborada. Por fim, o teste das predições da hipótese do clima frio não obteve suporte para baixas temperaturas como pressão seletiva favorecendo a origem da viviparidade nos Hydropsini. Hipóteses alternativas para explicar a origem da viviparidade na tribo são exploradas. / Oviparity is the ancestral reproductive mode of reptiles and viviparity evolved multiple times independently in Squamata. The most accepted evolutionary scenario for the evolution of viviparity in squamate reptiles suggests that it is an adaptation to low temperatures and that it arises from progressive and gradual increases in the amount of intrauterine embryonic development before egg-laying. In this study, the water snakes of the tribe Hydropsini were used as model system to test, within a comparative framework, several predictions derived from the gradualist scenario for the evolution of viviparity in Squamata. Specifically, it was evaluated if the evolution of viviparity in the tribe (1) is an irreversible phenomenon, (2) if it is associated with changes in uterine morphology and eggshell thickness and (3) if it is correlated to cold climates. The different analytical methods used did not corroborate the irreversibility of viviparity and suggest that oviparity may be revolved in some species. The evolutionary acquisition of viviparity in Hydropsini was accompanied by important uterine changes, including the reduction of the glands that secrete the shell components. The hypothesis that the increases in egg retention are accompanied by decreasing eggshell thickness was not corroborated. Finally, it was not found support for the test of the predictions derived from the cold climate hypothesis for the evolution of viviparity in Hydropsini. Alternative hypothesis explaining this reproductive mode in the group were explored.

O corpo lúteo é uma glândula endócrina temporária que regula tanto o ciclo estral quanto a prenhez, apresentando extrema dependência de aporte sanguíneo adequado. O tratamento superovulatório aumenta a concentração sérica de progesterona (P4) e conseqüentemente as taxas de concepção e de prenhez. Esse trabalho objetivou quantificar a vascularização dos corpora lútea (CLL) de animais controle e superovulados, correlacionando-a com a P4 sérica e expressão de VEGF e seus receptores. Foram utilizadas 30 búfalas, cujos CLL foram divididos em cinco grupos: superovulados (receberam 400 mg de FSH divididos em doses diárias decrescentes: 80 mg, 60 mg, 40 mg e 20mg a cada 12 horas durante 4 dias), corpos hemorrágicos (CH), corpo lúteo maduro (CL), CL em regressão (CR) e corpo albicans (CA), que não receberam nenhum tratamento. Três CLL de cada grupo foram fixados em formol tamponado para quantificação da densidade vascular e imunolocalização de VEGF, VEGFR-1 e VEGFR-2. Os três restantes foram injetados com resina Mercox para análise da microvascularização. Amostras de sangue foram coletadas e a P4 mensurada através de RIA convencional. A densidade capilar média encontrada foi de 37,78 ± 8,89; 17,8 ± 3,33; 11,92 ± 3,57; 10,83 ± 2,42 e 3,46 ± 1,66 vasos/ mm2 respectivamente para os cinco grupos, indicando maior vascularização (p<0,001) para o grupo superovulado. A microvasculatura apresentou comportamento semelhante para ambos os grupos, revelando apenas maior densidade da rede capilar dos CLL de animais superovulados, o que se refletiu nos valores séricos de progesterona que foram significativamente maiores (p<0,05) para estes animais, com concentração média de 5,58 ( 0,97ng/ml vs 2,02 ( 0,16 ng/ml para os animais controle na mesma fase. O VEGF, bem como seus receptores (VEGFR-1 e VEGFR-2) foram encontrados imunohistoquimicamente no CLL de búfalas. A imunoreatividade para o VEGF e receptores, pode ser observada nas células endoteliais e luteínicas a partir do 2° dia após a ovulação (p.o.) até a fase de corpo lúteo em regressão (17° dia p.o.), com forte reação nas fase luteínicas inicial e média. A imunoreatividade foi mais intensa nos animais submetidos a superovulação. / Corpus luteum is a temporary organ, which regulates the estrous cycle and pregnancy; it is extremely dependent on vascularization. During corpus luteum life span P4 production is associated with an increase of capillary number known as angiogenesis. The angiogenic process is modulated by many factors, including VEGF (vascular endothelial growth factor), which is considered the most important of them. Hyperstimulation of ovarian function, a largely spread technique employed in cattle raising, is associated with high levels of estradiol and P4, as well as an increase of capillary invasion of the new formed CL. This study intended to quantify the vascularization of normal and superovulated corpora lutea (CLL), trying to correlate this parameter with blood P4 concentrations and expression of VEGF and its receptors. For that purpose thirty buffalo cows were divided into five groups: superovulated (received 400 mg FSH divided in decreasing doses of 80 mg, 60 mg, 40 mg e 20mg 12/12h during 4 days), corpus hemorragicans (CH), mature corpus luteum (CL), regression CL (CR) e corpo albicans (CA), that received no treatment and were slaughtered at days 2, 9, 17 and 26 after ovulation. After slaughter ovaries were collected and corpora lutea prepared as follows: three animals from each group had their CLL fixed in buffered formol solution, cut into 0,5 cm pieces, dehydrated in increasing ethanol concentrations, cleared in xylene and embedded in paraffin using conventional procedures. Five µm slices were prepared for quantification of vascular density and immunolocalization of VEGF, VEGFR-1 and VEGFR-2. The ovaries of the remaining animals were injected with Mercox resin through ovarian artery in order to have the microvascularization evaluated by electron scanning microscopy. Blood samples were collected and P4 measured through conventional RIE. Capillary density during CL life span was 37,78 ± 8,89; 17,8 ± 3,33; 11,9 ± 3,57; 10,83 ± 2,42 and 3,46 ± 1,66 vessels/ mm2 respectively for superovulated (CS), CH, CL, CR and CA, indicated higher vascularization (p<0,001) for superovulated group. The microvasculature showed similar behavior: the density of capillary network was higher in CLL of superovulated animals. Values of serum progesterone were significantly higher (p<0,05) for CS animals: 5,58 ± 0,97 ng/ml vs 2,02 ± 0,16 ng/ml for control animals in the same stage of estrous cycle. The VEGF system and its receptors (VEGFR-1 e VEGFR-2) were immunolocalized in CLL of buffalo cows. The immunoreactivity could be detected in endothelial and luteal cells since day two post ovulation (p.o.) until the stage of regression corpus luteum (Day 17 p.o.), with strong immunostaining at the early and midluteal phase. The immunostaining was more intense in CLL of animals submitted to superovulation.

Durante o desenvolvimento de holometálobos alguns tecidos são eliminados/remodelados durante a metamorfose. A autofagia age nesse processo degradando componentes citoplasmáticos, inicialmente isolando-os em dupla membrana, estrutura chamada autofagossomo e esses conteúdos são degradados por hidrolases lisossomais. Porém, aspectos apoptóticos podem estar presentes nesse processo, como o envolvimento de caspases e a fragmentação nuclear. Alterações morfológicas na glândula salivar e no corpo gorduroso, que são bons exemplos de órgãos que sofrem morte celular programada (MCP) no desenvolvimento de R. americana, foram analisados por microscopia de luz e eletrônica. Durante a remoção desses órgãos, núcleos apresentam morfologia condensada e com fragmentação confirmada por TUNEL. Ambos tecidos mostraram formação de autofagossomos, mas a glândula salivar completa o processo de MCP durante a metamorfose. Genes antiapoptóticos e autofágicos que têm importante papel na MCP foram caracterizados. MCP em R. americana apresenta cooperação de aspetos da autofagia e da apoptose. / In the development of holometabolous insects, some tissues are eliminated/remodelated during metamorphosis. Autophagy acts in this process by degrading cytoplasm contents, initially by surrounding them within a double membrane, a structure called autophagosome and its contents are degraded by lysosomal hydrolases. However, some features of apoptotic cell death may be present in this process, such as the involvement of caspases and nuclear fragmentation. Morphological changes of salivary gland and fat body, good examples of organs that suffer programmed cell death (PCD) during R. americana development, were analyzed by light and electron microscopy. During the removal of these organs, nuclei present fragmented and condensed morphology, confirmed by TUNEL assay. Both tissues show the formation of autophagosomes, but the salivary gland completes the process of PCD during metamorphosis. Antiapoptotic and autophagic genes that play important function in the PCD, were characterized. R. americana PCD occurs with the cooperation of autophagy and apoptosis features.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Guilherme Pepino Bastos.pdf: 4641063 bytes, checksum: b561cc3e6ce8ff140fb329e91d1cc713 (MD5) Previous issue date: 2015-09-25 / Background: The digital infrared imaging thermography is a non-invasive imaging exam of easy performance accurately to measure temperatures of the areas of the animals body. The objective was to study the physiological variations of the surface temperature of the mammary gland, vulva, pelvis, thorax and abdomen with digital infrared imaging thermography in negative dairy cattle with California mastitis test (CMT) in different seasons, and the influence of climatic factors in these temperatures. Materials, Methods & Results: 18 Holstein cows, pregnant and non pregnant were used, negative for the California Mastitis Test, grazing on Urochloa decumbens pasture, receiving 2 kg of corn / animal / day, mineral mix and ad libitum water. Infrared thermography was performed every 30 days, for five months: January, February, March, April and May with thermographic camera (E40®, FLIR, Sweden) in the areas of the body: vulva, mammary gland, pelvis, abdomen and thorax. The thermal images (thermograms) were processed using the Flir Tools 2.1® program. The climatic factors: room temperature and relative humidity were monitored with globe thermometer (ITitwtg 2000®, Instrutemp, Brazil). Data were analyzed by analysis of variance and the average compared by 5% Tukey test. For room temperature data, relative humidity, rectal temperature and for the areas of the body we used Pearson correlation to 5%. For climatic factors, among the samples, room temperature and relative humidity, there was a significant difference (P <0.05). To the skin surface temperatures of the body areas examined: vulva, pelvis, ischium, abdomen, thorax and mammary gland, among the samples, there were differences (P <0.05) with lower temperatures of the areas in March and May samples, compared to the months of January, February and April. The average temperatures of the surfaces of the examined areas vary for the vulva between 33 °C and 38 °C; ischium, pelvis and abdomen between 30 °C and 37 °C; teats between 28 °C and 37 °C; Cistern of mammary quarter between 32 °C and 38 °C; and thorax from 31 °C to 37 °C. There were significant correlations (P<0.01) between: rectal temperature x room temperature (0.49); Rectal temperature x relative humidity (- 0.37). To the surface temperatures of all areas of the body examined, there were significant correlations (P<0.01) with the room temperature between 0.73 and 0.85; and between - 0.57 and - 0.75 for the relative humidity. Discussion: The animals showed no behavioral change during the thermography examination. In dairy cattle it is recommended the use of infrared thermography as a routine test to measure the temperatures of the areas of the body. Climatic factors, room temperature and relative humidity influence the rectal temperatures and the body surfaces of the cows. Conclusions: The areas of the body examined by infrared thermography showed different temperatures, in the same data collection, showing physiological temperature variations that assist in the clinical evaluation of each of the areas examined. The thermographic images were saved and processed easily, quickly and in a practical way, recommending the use of thermal imaging by infrared for routine as imaging test complementary to the clinical examination of the mammary gland and of the body areas in dairy cattle. / Introdução: A termografia digital por infravermelho é um exame de imagem não invasive de fácil realização com precisão para mensurar temperaturas das áreas do corpo dos animais. Objetivou-se estudar as variações fisiológicas relevantes às variações de temperatura da superfície da glândula mamária, vulva, pelve, tórax e abdômen com termografia digital por infravermelho em vacas de leite negativas ao California mastitis test (CMT), em diferentes épocas do ano, e a influência de fatores climáticos nessas temperaturas. Materiais, Metodos & Resultados: Foram utilizadas 18 vacas da raça Holandesa, gestantes e não gestantes, negativas para a California Mastitis Test, mantidas em pastagem Urochloa decumbens, recebendo 2 kg de milho/animal/dia, sal mineral e água ad libitum. Termografia por infravermelho foi realizada a cada 30 dias, durante cinco meses; de janeiro a maio, com câmera termográfica (E40®, FLIR, Suécia) nas áreas do corpo: vulva, glândula mamária, pelve, abdome e tórax. As imagens térmicas (termogramas) foram processadas usando o programa Flir Tools 2.1®. Os fatores climáticos: temperatura ambiente e umidade relativa do ar foram monitoradas com termômetro de globo (ITitwtg 2000®, Instrutemp, Brasil). Os dados foram analisados pela análise de variância e as médias comparadas pelo teste de Tukey a 5%. Para os dados da temperatura do ambiente, umidade do ar, temperatura retal e das áreas do corpo, utilizou-se correlação de Pearson a 5%. Para os fatores climáticos, entre colheitas, temperatura ambiente e umidade relativa do ar, houve diferença significativa (P<0,05). Para as temperaturas da superfície da pele das áreas do corpo examinadas: vulva, pelve, ísquio, abdomen, tórax e glândula mamária, entre colheitas, houve diferença (P<0,05) com menores temperaturas das áreas nas colheitas de março e maio, em relação aos meses de janeiro, fevereiro e abril. As temperaturas médias das superficies das áreas examinadas variaram para a vulva entre 33°C e 38°C; ísquio, pelve e abdomen entre 30°C e 37°C; tetos entre 28°C e 37°C; cisterna do quarto mamário entre 32°C e 38°C; e tórax entre 31°C a 37°C. Houve correlações significativas (P<0,01) entre: temperatura retal x temperatura ambiente (0,49); temperatura retal x umidade relativa do ar (- 0,37). Para as temperaturas da superfície de todas as áreas do corpo examinadas, houve correlações significativas (P<0,01) com a temperatura ambiente entre 0,73 e 0,85; e entre 0,57 e 0,75 para a umidade relativa do ar. Discussão: Os animais não apresentaram mudança de comportamento durante o exame de termografia. Em vacas leiteiras recomenda-se o uso da termografia por infravermelho como exame de rotina para mensurar as temperaturas das áreas do corpo. Os fatores climáticos temperatura ambiente e umidade relativa do ar influenciam nas temperaturas retal e das superficies do corpo das vacas. Conclusões: As áreas do corpo examinadas pela termografia por infravermelho apresentaram temperaturas distintas, em uma mesma colheita de dados, mostrando variações fisiológicas de temperatura que auxiliam na avaliação clínica de cada uma das áreas examinadas. A temperatura ambiente e a umidade relativa do ar influenciam na temperatura retal e de áreas da superfície do corpo. As imagens termográficas foram salvas e processadas com facilidade, rapidez e de forma prática, recomendando-se o uso da termografia por infravermelho de rotina como exame de imagem complementar ao exame clinico da glândula mamária e de áreas do corpo em vacas de leite.

A esquistossomose é uma doença causada por trematódeos do gênero Schistosoma. Dentre os genes identificados no transcriptoma do parasita, membros da família gênica SmVAL (Schistosoma mansoni Venom Allergen-Like) foram apontados como candidatos vacinais. SmVALs foram identificadas em secreções de cercárias e esquistossômulos cultivados in vitro, os transcritos SmVAL4 e 24 foram localizados nas glândulas acetabulares de germ ball e a proteína nativa SmVAL4 foi identificada em extrato de cercárias, indicando funções durante a penetração da pele. Já os transcritos SmVAL13 e 14 foram localizados na glândula esofágica anterior de vermes adultos, sugerindo papéis no processo de alimentação sanguínea. A imunização com as proteínas rSmVAL4, 6, 7, 13, 14 e 18 coadministradas não protegeu camundongos contra o desafio experimental, porém, observou-se uma diminuição do número de fêmeas e do número de ovos no grupo imunizado. A investigação de funções para as proteínas secretadas mostrou que a rSmVAL18 interage com plasminogênio in vitro favorecendo a invasão do hospedeiro. / Schistosomiasis is a disease caused by trematodes of the genus Schistosoma. Among the genes identified in the parasite transcriptome, members of SmVAL (Schistosoma mansoni Venom Allergen-Like) gene family were proposed as vaccine candidates. SmVALs were identified in cercariae and schistosomule secretions in vitro, the SmVAL4 and 24 transcripts were located to the germ ball acetabular glands and SmVAL4 native protein was identified in cercariae extract, indicating functions in skin penetration. On the other hand, SmVAL13 and 14 transcripts were located to the anterior esophageal gland of adult worms, suggesting roles in the blood feeding processes. Immunization with rSmVAL4, 6, 7, 13, 14 and 18 proteins co-administered did not protected mice against experimental challenge, however, there was a decrease in the number of females and the number of eggs in the immunized group. The investigation of functions for secreted proteins showed that rSmVAL18 interacts with plasminogen in vitro thus favoring the host invasion.

Nas secreções glandulares de anfíbios, muitos dos compostos isolados apresentam ação antifúngica e/ou antibacteriana, cuja função é protegê-los contra infecções, uma vez que estes animais habitam ambientes inóspitos. Os peptídeos têm-se destacado dentre os compostos com atividade antimicrobiana isolados de venenos de diversos animais. Além disso, compostos de natureza não proteica presentes nestas secreções têm demonstrado ação antimicrobiana. O objetivo deste estudo foi, primeiramente, isolar e caracterizar, estruturalmente, compostos com atividade antifúngica relevante. Em um segundo momento, foi realizar um estudo comparativo, através de técnicas ômicas, dos compostos presentes nas secreções das glândulas mucosas e parotoides. Os ensaios antimicrobianos, in vitro, foram realizados com fungos, leveduras e bactérias. O material de baixa massa molecular da água de diálise das secreções das glândulas parotoides apresentou atividade antimicrobiana sobre, principalmente, os fungos filamentosos. Este mesmo material foi submetido a uma filtração em gel, resultando em 11 frações as quais foram testadas contra Microsporum canis no ensaio de diluição seriada. A fração 9 mostrou atividade antifúngica e foi submetida a uma cromatografia de fase reversa, resultando em 9 frações, as quais foram testados contra M. canis. Destas frações, as frações 1 e 9 demonstraram, respectivamente, atividade fungicida e fungistática contra M. canis. No segundo momento, as secreções de ambas as glândulas foram analisadas por nanocromatografia líquida de ultra eficiência acoplada a um espectrômetro de massas de alta resolução. Desta análise, foram obtidos 11.034 compostos, distribuídos entre as secreções de ambas as glândulas. Todos os íons obtidos foram fragmentados (MS/MS) e submetidos à análise no programa PEAKS 6. Foram obtidas 511 sequências de peptídeos e/ou sequências parciais de proteínas das secreções das glândulas mucosas, enquanto que para as secreções das glândulas parotoides foram obtidas 110 sequências. Nas secreções das glândulas mucosas, a maior parte das sequências de aminoácidos são de compostos com massas moleculares entre 1 e 3 kDa, o que corresponde a 82% das sequências obtidas. Já para as secreções das glândulas parotoides, a maioria das sequências de aminoácidos são correspondentes aos peptídeos/proteínas com massas moleculares entre 1 e 2 kDa, o que representa 55% do total de sequências obtidas para esta secreção. As sequências foram analisadas pelo BLAST e revelou que um peptídeo presente nas secreções das glândulas parotoides apresenta 66,7% de identidade com o peptídeo antimicrobiano conhecido como ponericin-G2. Entre as sequências encontradas para as secreções das glândulas mucosas, o destaque foi para o precursor do peptídeo brevinin-1, com identidade de 31,2%. Todas as frações obtidas da filtração em gel das secreções das glândulas mucosas e parotoides foram direcionadas à análise por espectrometria de massas MALDI-TOF, o que resultou em maiores informações sobre a natureza dos compostos presentes nestas frações. A fração 8 das secreções das glândulas mucosas foi fracionada por cromatografia de fase reversa, resultando em 7 frações denominadas Pep1-Pep7. O composto denominado Pep7 teve sua massa molecular (6,012 kDa) determinada através da espectrometria de ressonância ciclotrônica de íons por transformada de Fourier com ionização por electrospray. Os peptídeos Pep4, Pep6 e Pep7 foram sequenciados pelo método de degradação de Edman. Estes peptídeos mostraram identidades com peptídeos antimicrobianos das famílias das tigerinin, shepherin e microcin e brevinins, respectivamente. Este estudo demonstrou que há compostos com atividade antimicrobiana significativa nestas secreções, principalmente para fungos filamentosos. Além disso, foi o primeiro a fazer uma análise comparativa dos compostos presentes nas secreções das glândulas mucosas e parotoides de R. schneideri, destacando a presença de peptídeos antimicrobianos / In amphibian glandular secretions, many of the isolated compounds have antifungal and/or antibacterial action, whose function is to protect the animal against infections, since they usually inhabit inhospitable environments. Peptides have been highlighted among antimicrobial compounds isolated from several venomous animals. In addition, non-proteic compounds present in these secretions have demonstrated antimicrobial action. The aim of this study was to isolate and structurally characterize antifungal compounds from Rhinella schneideri parotoid and mucous secretions. Moreover, in this study it was also performed a comparative study of the composition of mucous and parotid gland secretion by omics techniques. The low molecular weight material from parotoid gland secretion showed antimicrobial activity against filamentous fungi and bacteria. The low molecular weight material that showed antimicrobial activity was subjected to gel filtration, resulting in 11 fractions that were tested against Microsporum canis in serial dilution assay. The fraction 9 showed antifungal activity and it was subjected to a reversed phase chromatography, resulting in 9 fractions, which were tested against M. canis. Among them, fraction 1 and 9 showed fungicidal and fungistatic activity against M. canis, respectively. Gland secretion and the respective low molecular weight material were subjected to gel filtration and, each obtained fraction was analyzed by SDSTricine- PAGE. Secretion of the both glands were also quantitatively analyzed by nano ultraperformance liquid chromatography hyphenated to a high-resolution mass spectrometer. It was obtained 6,460 compounds distributed among secretions of both glands. All obtained ions were fragmented (MS/MS) and analyzed by PEAKS 6 program. 511 sequences were obtained from mucous gland secretion, against 110 sequences from parotoid gland secretion. In mucous gland secretion, most of the amino acid sequences (82%) are compounds with molecular masses between 1 and 3 kDa, while for parotoid gland secretion, most of sequences (55%) correspond to peptides/proteins with molecular masses between 1 and 2 kDa. Sequences were analyzed by BLAST, reveling a peptide in parotoid gland secretion that presents 66.7% of identify with an antimicrobial peptide known as ponericin-G2. Among sequences found in mucous gland secretion, the highlight was to one presenting 31.2% of identify with brevinin-1 precursor. All fractions obtained from gel filtration of the mucous and parotoid gland secretions were analyzed by MALDI-TOF mass spectrometry, which resulted in more informations about the nature of the compounds present in these secretions. Fraction 8 from mucous gland secretion was fractionated by reversed phase chromatography on C18 column, resulting in seven fractions denominated Pep1-Pep7. Pep7 presented a molecular mass of 6.012 kDa when analyzed by Fourier transform ion cyclotron resonance mass spectrometry. In this analysis, six precursor ions were identified, but no sequence was obtained. Pep4, Pep6 and Pep7 were sequenced by Edman degradation method. These peptides showed identity with tigerinin, shepherin and microcin and brevinins, respectively. This study revealed compounds with significant antimicrobial activity in the analyzed secretions, especially to filamentous fungi. In addition, it was the first to perform a comparative analysis of compounds present in mucous and parotoid gland secretion from R. schneideri toad, highlighting the presence of antimicrobial peptides

O Brasil possui o maior rebanho bovino comercial do mundo com sua produção baseada, predominantemente, em animais de origem zebuína (Bos indicus), com níveis do potencial genético de produção inferiores aos animais Bos taurus. Com a possibilidade de emprego de técnicas de genética molecular, a seleção de indivíduos melhoradores para acasalamento e multiplicação repercutem nos índices de produtividade e produção. A utilização de melhores métodos de estudo da variação genética no nível mole cular representa benefícios especialmente nos casos de resistência a doenças, já que essas características apresentam baixa herdabilidade e são afetadas pelo ambiente. O estudo da genética molecular visando o aumento da saúde da glândula mamária de bovinos apresenta a vantagem de poder selecionar animais em idades precoces, antes da produção, para ambos os sexos e, no caso dos machos reprodutores, sem a necessidade de aguardar por informações da saúde da glândula mamária observada somente na descendência dos animais. Para identificar genes com responsabilidade de conferir resistência à mastite bovina, a doença mais importante da bovinocultura, foram realizados diversos experimentos que envolveram um gene do complexo principal de histocompatibilidade (MHC &#150; Major Histocompatibility Complex). Os experimentos com o gene BoLA-DRB3, do MHC, permitiram identificar um alelo novo, desenvolver uma técnica mais eficiente de genotipagem de animais e verificar a distribuição dos alelos em animais da raça Gir Leiteira. Foram também construídas biliotecas de cDNA utilizando a metodologia de ORESTES e tecido de glândula mamária de animais europeus e zebuínos infectados com Staphylococcus aureus . 6.481 sequências expressas (ESTs), obtidas por meio da metodologia de ORESTES, foram depositadas em bases públicas como o GenBank (http://www.ncbi.nih.nlm.gov/) e TIGR (http://www.tigr.org), sendo 5.950 provenientes de animais Bos indicus, o que significou um aumento de vinte vezes no volume de informações disponíveis sobre o transcriptoma de bovinos zebuínos ao tempo deste estudo. / Brazil is the largest cattle commercial herd in the world, mainly based in zebu (Bos indicus) with lower genetic potential than taurus-derived animals. Molecular genetics brought the possibility of better selection of animals for breeding, which increases production levels. The use of molecular methods for studying genetic variation is especially advantageous for disease resistance because of low herdability and envir onment effects. Selection by means of molecular genetics in dairy cattle can be done before production, for males and females. To identify genes responsible for conferring resistance to Mastitis, the most important cattle disease, we studied one gene from the MHC (Major Histocompatibility Complex). The experiments with this MHC gene (BoLA-DRB3) identified a new allele in cattle, developed a genotyping technique, and estimate allelic frequencies for Dairy Gir cows (Bos indicus). CDNA libraries from mammary gland tissues infected with Staphylococcus aureus were also constructed and characterized. 6,481 ESTs (Expressed Sequence Tags) were deposited in GenBank (http://www.ncbi.nih.nlm.gov/) and TIGR (http://www.tigr.org), being 5,950 from Bos indicus cows, which increased by 20-fold the volume of sequence data from the zebu transcriptome, at the time when this study was conducted.

O teleósteo Astyanax altiparanae, popularmente conhecido como lambari importância econômica e ecológica. Poucos são os trabalhos que visam demonstrar a morfologia dos testículos de brasileiros. O objetivo deste estudo foi classificar e demonstrar as alterações morfológicas do testículo de Astyanax altiparanae ao longo do ciclo gonadal e quantificar tais alterações. Foram encontrados os estádios: regredido, maturação inicial, maturação média, maturação final e regressão. O estudo ultraestrutural revelou que as células secretoras que revestem os ductos possuem organelas relacionadas à síntese de macromoléculas e gotículas de lipídio. O estudo imuno-histoquímico revelou detalhes da distribuição de receptor de andrógeno, claudina-1, citoqueratina, actina, colágeno do tipo I, laminina e fibronectina neste órgão. O presente trabalho revelou que os machos de Astyanax altiparanae são capazes de desenvolver o intersexo, já que foram encontrados oócitos no interior dos testículos de alguns indivíduos. / The Astyanax altiparanae (Characiformes, Characidae), popularly known as lambari, is a fish that has ecologic and economic importance. Morphological studies on testis of South American teleost species are not frequently found in the appropriated literature. The aim of this work was to show the changes in the morphology of the testis of Astyanax altiparanae occurred through the gonadal cycle. It was found five stages of the gonadal cycle: regressed, early maturation, mid maturation, late maturation and regression. Ultrastructural study, reveals that secretory cells showed a great amount of organelles responsible for macromolecules synthesis, and lipids droplets. Immunohistochemical studies reveal details of the distribution of androgen receptor, claudin-1, actin, cytokeratin, type I collagen fibers, laminin and fibronectin in this organ. This work demonstrated that males of Astyanax altiparanae were able to develop the intersex, once oocytes were found in the testis of some individuals.

A pele dos anfíbios possui uma grande diversidade de glândulas responsáveis por diversas funções. Glândulas cutâneas sexualmente dimórficas (GCSDs) são geralmente encontradas em machos e podem formar macroglândulas conhecidas como regiões \"inchadas\". Dendrobatoidea é o único clado de anfíbios em que machos adultos possuem um inchaço no dedo IV, supostamente associado ao amplexo cefálico que também é exclusivo da superfamília. No entanto, poucos estudos referentes a este caráter foram realizados e sua histologia nunca foi examinada. Buscamos caracterizar as morfologias do inchaço, avaliar a distribuição anatômica de suas glândulas e realizar sua análise taxonômica. Observamos as morfologias externa e interna das mãos de machos e fêmeas adultos e juvenis de 27 espécies da superfamília e fizemos a histologia das mãos de todos os indivíduos para comparar os dedos e os tipos glandulares presentes neles. Realizamos análises histoquímicas para diferenciar e descrever os tipos glandulares encontrados e para determinar se encontramos GCSDs na região do inchaço, analisamos também a pele do dorso de alguns dendrobatóideos. Encontramos glândulas granulosas e mucosas comuns no dorso e nos dedos de todos os indivíduos. Exclusivamente nos machos adultos com o inchaço, encontramos glândulas mucosas especializadas de tipos I, II e III no dedo IV. Glândulas de tipo I estão presentes em todos os machos que apresentam o inchaço do dedo IV, de tipo II estão restritas aos Dendrobatidae e de tipo III ocorrem apenas em Anomaloglossus stepheni. Observamos ainda que machos de espécies anteriormente codificadas sem o inchaço possuem o inchaço no dedo IV e corroboramos a existência do caráter pela presença dos tipos glandulares descritos. Segundo nossa amostragem, a presença do inchaço e de glândulas de tipo I no inchaço é uma sinapomorfia de Dendrobatoidea, com ausência secundária nas espécies que não possuem o caráter. A presença de glândulas de tipo II é uma sinapomorfia de Dendrobatidae, com perdas independentes em duas espécies e a presença de glândulas de tipo III é uma autapomorfia de An. Stepheni. Trazemos, portanto, informações que poderão guiar estudos em diversos campos como: comportamento reprodutivo, bioquímica das secreções glandulares e taxonomia dos dendrobatóideos / Amphibians possess a great diversity of skin glands, among which sexually dimorphic skin glands (SDSGs) are present in males and can form macroglands usually referred to as \"swollen\" regions. Dendrobatoidea is the only clade in which adult males present a swollen in finger IV supposedly associated with the cephalic amplexus, also exclusive to the superfamily. However, few studies of this character have been carried out and the histology of the structure has never been examined. We characterized the different morphologies of the swelling, assessed the anatomical distribution of its glands and tested its homology by taxonomic analysis. We studied the external and internal morphologies and the histology of the hands of adult males and females and juveniles of 27 species to compare all fingers and its gland types. To compare and describe the gland types found at the fingers we ran histochemical studies. We also analyzed the skin of the dorsum of dendobatoid frogs to determine if the gland types found at the swollen region were in fact SDSGs. Our findings showed typical serous and mucous glands at the dorsum and fingers of all individuals and we discovered specialized mucous glands of types I, II and III only at males with the swollen fourth finger. Type I glands are present in all males with the swelling, type II are restricted to Dendrobatidae and type III occur only in Anomaloglossus stepheni. We have also observed that males whose fourth finger was previously coded as \"without the swelling\" had in fact the swelling present, a fact corroborated by the presence of the specialized gland types. According to our samplings, the presence of the swelling in finger IV and of type I glands is a synapomorphy of Dendrobatoidea, with secondary absence at species without the swelling. The presence of type II glands is a synapomorphy of Dendrobatidae and the presence of type III glands is an autapomorphy of An. Stepheni. Our findings will guide studies in the most diverse fields such as dendrobatoid\'s reproductive behavior, biochemistry of glandular secretion and taxonomy