a. Do ponto de vista metodológico dois problemas foram enfrentados neste trabalho: i) extração dos RNA\'s e ii) fracionamento das células das glândulas salivares de R. angelae. i) O processo prático elaborado para resolver o primeiro problema se constituiu numa variação da técnica clássica de extração com fenol. Jogando com a presença de detergente e variações de pH e de temperatura, foi possível se chegar a um método que garante a extração e um fracionamento parcial de, praticamente, todo RNA celular. Com extrações a baixa temperatura obtém-se preferencialmente rRNA e tRNA. O RNA refratário a extração com fenol a frio tem propriedades do RNA nuclear, mas o citoplasma, também parece conter classes de RNA somente extraíveis a quente. A dificuldade de extração do RNA nuclear com fenol frio, foi especulativamente interpretada como uma propriedade das RNP\'s que encerram esta classe de RNA. A grande vantagem deste método de extração está no fato de ter permitido isolar, com as extrações a alta temperatura, frações de RNA enriquecidas em produtos de transcrição específicos de determinados períodos do desenvolvimento larval. ii) O fracionamento celular das glândulas salivares não é alcançado pela aplicação das técnicas tradicionais de fracionamento de tecido. Em vista disso foi necessário procurar uma alternativa experimental para êste caso. Combinando um enzima proteolítico com a ação de detergentes não iônicos foi conseguido um método útil para o fracionamento das células das glândulas salivares. Êste método foi aplicado nesta tese para um estudo inicial das RNP\'s e da transferência do rRNA do núcleo para o citoplasma nas células das glândulas salivares. b. Foi possível verificar com êste trabalho que o rRNA é sintetizado inicialmente na forma de um precursor primário de 37s, o qual é processado no interior do núcleo para dar as espécies maduras de rRNA segundo o esquema: (Ver no arquivo) No 3º período do 4º estádio do desenvolvimento larval de R. angelae, a síntese de rRNA é intensa. Neste mesmo período observa-se claramente um nucleolo típico na base do cromossomo X. No período seguinte ocorre uma redução na síntese das formas maduras de rRNA. Esta queda de síntese é desencadeada por um bloqueio ao nível do processamento dos precursores nucleares de rRNA citoplasmático. Estudos citológicos tem revelado que neste período o nucleolo sofre uma aparente desagregação. c. Os resultados de incorporação de uridina-H3 mostraram que o 3º e 4º períodos tem uma velocidade de síntese de RNA muito à do 2º período. No 4º período quando a síntese de rRNA é inibida aumenta de importância a síntese de outras classes de RNA. Aparentemente é muito intensificada a síntese de RNA nuclear. Êstes resultados são interpretados como consequência da ativação de novos genes nesta época do desenvolvimento larval. Êstes fatos não são inesperados pois este estágio se caracteriza pelo desenvolvimento de \"puffs\" gigantes, os quais são específicos do tecido e do período de desenvolvimento. O 5º período parece representar uma fase de transição entre uma época de ativa síntese de RNA e outra onde a atividade transcritiva sofre uma redução drástica, provavelmente devido à histólise do tecido que vai ocorrer logo em seguida. d. Os dados apresentados nesta tese são considerados sob todos os aspectos significativos. Com isto faz-se uma tentativa de discussão crítica, no sentido de avaliar a importância do sistema glândulas salivares de R. angelae, como modelo de estudo para a genética molecular dos organismos superiores. / Not available

Nosso laboratório investiga os mecanismos moleculares que promovem o estabelecimento de padrões de expressão gênica regulados no desenvolvimento em eucariotos superiores. Como modelo, utilizamos o gene de pufe de DNA BhC4-1, que é amplificado e expresso de modo regulado na glândula salivar e na glândula protorácica no final do quarto estadio larval de B. hygida. Estudos funcionais em D. melanogaster resultaram na identificação de módulos cis-reguladores (MCRs) na região promotora do gene BhC4-1. O MCR de glândula anelar de 67 bp (-253/-187), promove a expressão de BhC4-1-lacZ na glândula anelar a partir do final do desenvolvimento embrionário. O MCR de glândula salivar de 129 bp (-186/-58), dirige a expressão do transgene nas glândulas salivares de prépupas. A glândula anelar é o principal órgão endócrino larval e em D. melanogaster é o resultado da fusão das glândulas protorácicas (responsáveis pela síntese de hormônios esteroides), corpus allatum (síntese de hormônio juvenil) e corpus cardiacum (glândula neuroendócrina). Neste trabalho foram obtidas 12 linhagens independentes transformadas com uma construção que contém o fragmento (-253/+40) do promotor do gene de pufe de DNA BhC4-1 clonado à montante do gene repórter GFP. O genótipo destas linhagens foi validado utilizando-se Southern blots. Inicialmente as 12 linhagens obtidas foram analisadas quanto ao padrão de expressão de GFP em larvas de terceiro estadio e em prépupas 2 horas. Em conjunto, esta análise revelou que o padrão de expressão de GFP é bastante variável nestas linhagens. A análise do padrão de expressão da proteína repórter foi estendida em duas linhagens representativas da série (- 253/+40)/GFP. Nestas linhagens a expressão de GFP é inicialmente detectada na glândula salivar durante o estágio de prépupa e na glândula anelar a partir do terceiro estadio larval. Diferentemente do anteriormente observado em linhagens (-253/+40)/lacZ, nestas linhagens não detectamos a expressão de GFP em tempos do desenvolvimento anteriores ao terceiro estadio larval. Experimentos de interação gênica revelaram que na ausência do fator de transcrição br, a expressão de GFP é mantida na glândula anelar e abolida na glândula salivar de larvas de terceiro estadio. Os resultados dos experimentos de interação gênica corroboram dados anteriores que indicavam que o conjunto de fatores de transcrição que regulam a expressão de BhC4-1-lacZ na glândula anelar é distinto daquele que promove a expressão do gene na glândula salivar. As linhagens obtidas neste trabalho constituem uma ferramenta a ser utilizada na caracterização de fatores de transcrição tecido-específicos que regulam o gene BhC4-1 na glândula anelar e/ou na glândula salivar a partir do final do desenvolvimento larval. / Our laboratory investigates the molecular mechanisms that promote the establishment of developmentally regulated gene expression patterns in metazoans. As a model, we employ the BhC4-1 DNA puff gene, which is amplified and expressed in a regulated manner in the salivary gland and in the prothoracic gland at the end of the fourth larval instar in B. hygida. Functional studies in D. melanogaster resulted in the identification of cis-regulatory modules (CRMs) in the BhC4-1 promoter region. The 67 bp (-253/-187) ring gland CRM drives BhC4-1-lacZ expression in the ring gland from late embryonic development. The 129 bp (-186/-58) CRM salivary gland drives transgene expression in the prepupal salivary glands. The ring gland is the major endocrine organ, and comprises the prothoracic glands (synthesis of ecdysteroid hormones), corpus allatum (synthesis of juvenile hormone) and corpus cardiacum (neuroendocrine gland). In this work, 12 independent lines transformed with a construct containing the BhC4-1 promoter fragment (- 253/+40) cloned upstream of the reporter gene GFP were obtained. The genotype of each line was validated using Southern blots. Initially, the 12 obtained lines were analyzed to investigate the pattern of GFP expression in the third instar larvae and in the 2 hours prepupae. This initial screening revealed that the pattern of GFP expression is highly variable in these lines. The developmental pattern of GFP expression was extended in two representative (- 253/+40)/GFP lines. In these lines, GFP expression is initially detected in the larval and prepupal salivary glands and in ring gland third instar. Differently from previously observed in (-253/+40)/lacZ lines, in these lines we did not detect GFP expression at developmental times prior to the third larval instar. Gene interaction experiments revealed that in the absence of the br transcription factor, GFP expression is maintained in the ring gland and abolished in the salivary gland of third instar larvae. The results of gene interaction experiments corroborate previous data indicating the set of transcription factors that regulate BhC4-1-lacZ expression in the ring gland is distinct from that which promotes gene expression in salivary glands. The lines obtained in this work constitute a tool to characterize the tissue-specific transcription factors that regulate BhC4-1 gene in the ring gland and/or in the salivary gland from the end of the larval development.

O processo de secreção salivar é dependente de energia, consome glicose e pode mobilizar glicogênio na glândula submandibular. Nos ratos diabéticos a produção de saliva estimulada é reduzida e ocorre acúmulo de glicogênio nas glândulas parótida e submandibular. O objetivo deste trabalho foi avaliar in vivo o metabolismo de glicogênio das glândulas salivares, submandibular e parótida, de ratos diabéticos após o estimulo com agonistas colinérgico e adrenérgico e também analisar se os animais alimentados ou com restrição alimentar overnight apresentam diferenças no metabolismo de glicogênio das glândulas salivares nas condições estudadas. Os ratos foram divididos em grupos controles (C) e diabéticos (D). Após 30 dias da indução do diabete com estreptozotocina i.p. 60mg/kg p.c., os animais foram subdivididos em alimentados ou em jejum, anestesiados com pentobarbital 50mg/kg p.c. e hidrato de cloral 400mg/kg p.c, administrado i.p. 7,5 mg/kg p.c de pilocarpina ou 5 mg/kg p.c. de isoproterenol, os ratos foram eutanasiados 0(T0), 30(T30), 60(T60) and 120(T120) minutos após a injeção do agonista. As glândulas SM e P foram removidas e analisadas quanto ao conteúdo de proteína total, glicogênio, atividade da glicogênio sintase (GS) e da glicogênio fosforilase (GP), ativa (a) e total (t). Os dados foram analisados estatisticamente pelo ANOVA e o teste de Tukey (p>0,05). A concentração de proteína total não foi afetada pela doença diabetes, nem pela administração dos agonistas, mas apresentou-se maior nos grupos em jejum quando comparados aos grupos alimentados. A concentração de glicogênio inicial foi maior nos ratos diabéticos quando comparados ao controles nas glândulas SM e P. O estímulo com a pilocarpina e com o isoproterenol na SM dos ratos alimentados e em jejum promoveu a degradação do glicogênio observada em T30 e posterior recuperação do conteúdo até o T120 nos grupos controles e diabéticos. Na P os agonistas não mobilizaram o glicogênio no grupo controle e sim no grupo diabético. As enzimas GP e GS tiveram a atividade alterada pelos agonistas e pela doença diabetes, porém não apresentaram um padrão nas condições estudadas. Os animais em jejum apresentaram menor conteúdo de glicogênio que os diabéticos nas glândulas SM e parótida e as enzimas GS apresentou um aumento na relação da forma ativa e total nos grupos em jejum e a GP apresentou menores valores que foi mais evidente na glândula SM. A injeção dos sialogogos apresentou efeitos diferentes no metabolismo de glicogênio das glândulas P e SM, assim como nos animais diabéticos / The salivary secretion process is energydependent, consumes glucose and might mobilize glycogen in the submandibular glands. In diabetics rats the stimulated saliva flow rate is reduced and accumulate glycogen in submandibular (SM) and parotid (P). The aim of this work was evaluated in vivo glycogen metabolism in the SM and P of diabetic rats stimulated with adrenergic or cholinergic agonists, and to analyze if there are any differences in the glycogen metabolism in fed or unfed (alimentary fasting overnight) animals.The rats were divided in control (C) and diabetic (D) groups. Thirty days after diabetes induction with streptozotocin (60mg/kg b.w. i.p.), the animals were subdivided in fed or unfed, anaesthetized with pentobarbital (50mg/kg b.w. i.p.). and chloral hydrate (400mg/kg b.w. i.p.), injected pilocarpine (7.5mg/kg b.w.) or isoproterenol (5mg/kg b.w.) intraperitoneally, and euthanized 0(T0), 30(T30), 60(T60) and 120(T120) minutes post-injection of the agonists. SM and P were excised and assessed for glycogen and protein content and glycogen synthase (GS) and phosphorylase (GP) active (a) and total (t) activities. Data was statistically analyzed by ANOVA and Tukeys test (p<0.05). Protein concentration didn´t alter by diabetes or agonist injections but was higher in unfed when compared to the fed rats. Increased initial glycogen content was found in both groups of glands in diabetic rats when compared to the control group. Pilocarpine and isoproterenol stimulus promoted glycogen degradation in SM of fed and unfed rats on T30 and the T120 SM control and diabetic groups recovered glycogen content as the initial T0 values. In P the agonist mobilized glycogen just in diabetic group. The GP and GS activities were different and didnt present a pattern in this study´s condition. The unfed animals present glycogen content diminished when compared to fed animal in both glands and the relation of active and total glycogen synthase was higher in fast animals and lesser specific activities of active and total glycogen phosphorilase that were more evident in submandibular glands. The secretagogues injection presents different effects on glycogen metabolism of P and SM even so in diabetic animals.

O fluoreto (F) é um axioma toxicológico. Embora seja indiscutível a importância da sua utilização na prevenção de cárie, muito se discute a respeito da racionalização do seu uso em termos da sua toxicidade e benefícios. Muitos trabalhos sugerem que o F em diferentes concentrações induz o estresse oxidativo em diversos tecidos de diferentes animais experimentais. O presente estudo teve como objetivo avaliar a influência da administração do fluoreto de sódio (NaF) em dois protocolos experimentais, um agudo e outro a longo termo, em alguns parâmetros indicativos do estresse oxidativo nas glândulas submandibular (SM) e parótida (PA) de ratos. No experimento agudo, os animais do grupo experimental foram tratados com uma dose única intraperitoneal de NaF (15 mg F-/kg p.c.), enquanto que os animais do grupo controle receberam dose equivalente de NaCl a 0,9%. Os animais foram sacrificados 1, 3, 6, 12 e 24 horas após a injeção. Já no experimento a longo termo, os ratos do grupo experimental foram tratados com 100 ppm de F- adicionados na água de beber por 30, 60 e 90 dias; enquanto que o grupo controle recebeu água proveniente do sistema de abastecimento público. Após o período experimental, os animais foram eutanasiados e as glândulas salivares SM e PA foram removidas, além do sangue, que também foi coletado. Foi estudada a atividade das enzimas antioxidantes superóxido dismutase (SOD) e catalase (CAT), além da determinação dos níveis de peroxidação lipídica (MDA), proteínas totais e glicose sangüínea. Os resultados mostraram um aumento da glicemia dos animais que receberam o NaF, tanto no experimento agudo como no experimento a longo termo. Além disso, o F interferiu no sistema de defesa antioxidante das glândulas salivares de ratos. Tanto a SOD como a CAT, apresentaram alterações nas suas atividades em ambas glândulas, SM e PA, no experimento agudo e a longo prazo. Os níveis de peroxidação lipídica aumentaram nos animais do grupo experimental e este aumento foi observado tanto nas amostras de sangue como nas glândulas SM e PA de ambos os protocolos experimentais. Não foram observadas alterações na concentração de proteínas de ambas as glândulas, SM e PA, no experimento agudo. Já no experimento a longo prazo, o F provocou aumento da concentração de proteínas na glândula SM após 90 dias e diminuição deste conteúdo na glândula PA após 30 e 60 dias. Os resultados obtidos sugerem que F provocou alterações no sistema de defesa antioxidante e aumentou os níveis de peroxidação lipídica no sangue e nas glândulas salivares SM e PA de ratos. / Fluoride (F) is a toxicological axiom. Many reports have proposed that in varying concentrations, F induces increased reactive oxygen species generation, enhanced lipid peroxidation and impairs the antioxidant enzyme defence system in blood and tissues of experimental animals causing several biochemical alterations. Although the most pronounced effects of F intake are manifested in bones and teeth, soft tissues are also affected. Due to the paucity of reports investigating the short- and long-term effects of varied doses of F on soft tissues, especially salivary glands, this study aimed to evaluate the acute and long-term effects of sodium fluoride (NaF) exposure on antioxidant enzyme defence system and lipid peroxidation in the submandibular (SM) and parotid (PA) salivary glands of rats. For the acute investigation, the experimental groups of rats were injected intraperitoneally with NaF solution (15 mg F-/kg b.w.), while control groups were administered the same volume of sodium chloride solution (0,9%). The animals were euthanized in groups 1, 3, 6, 12 and 24 hours after injection. To evaluate long-term exposure effects, experimental groups of rats were administered 100 pmm F- in their drinking water for 30, 60 and 90 days. The control groups were provided with untreated tap water over the same periods. In all groups, after euthanization the SM and PA glands of each rat were extracted and analyzed for superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT) activities, malondialdehyde (MDA), protein and blood glycemia content. For both acute and long-term experiments, the experimental groups demonstrated higher levels of glycemia, altered levels of SOD and CAT in both glands, and increased levels of MDA in blood and salivary tissues of both glands. There were no differences in protein content for the acute experiment, but in the long-term experiment, increased protein levels were observed after 90 days in the SM gland and decreased protein levels were observed in the PA gland after 30 and 60 days. These results suggest that F impaired the antioxidant defence system and enhanced the levels of MDA in blood and SM and PA salivary glands of rats.

O corpo lúteo é uma glândula endócrina transitória cuja formação e manutenção são dependentes da angiogênese. O bFGF (basic Fibroblast Growth Factor) é um dos mais importantes fatores de crescimento angiogênicos no corpo lúteo que, além de possuir propriedades mitogênicas, modula a diferenciação e migração celular. Recentes estudos sugerem a participação desse fator como modulador local de funções nas células luteínicas. Sendo assim, objetivou-se caracterizar a expressão da proteína e do mRNA do bFGF em corpo lúteo de búfalas em diferentes estágios do ciclo estral e também em búfalas superovuladas em fase luteínica média. Foram utilizados corpos lúteos (CLL) de 15 búfalas, os quais foram divididos em cinco grupos: corpo hemorrágico (CH), corpo lúteo maduro (CL), CL em regressão (CR), corpo albicans (CA) e corpo lúteo de animais superovulados (CS). As amostras foram fixadas em formol tamponado a 4%, depois desidratadas em uma série de etanol com concentrações crescentes e incluídas em Histosec&reg;. Cortes de 5mm de espessura foram submetidos a imuno-histoquímica para posterior localização tecidual da proteína do bFGF. Para a localização do mRNA, cortes de 10mm foram submetidos à Hibridização in situ. A expressão do bFGF foi detectada nas células luteínicas, endoteliais e perivasculares nos diferentes estágios do ciclo estral e também no CL de animais superovulados. A fase luteínica média (CL) foi a fase do ciclo estral de maior expressão da proteína e do mRNA deste fator tanto nas células luteínicas quanto endoteliais e perivasculares. Os animais superovulados apresentaram expressão da proteína ainda mais intensa que animais não tratados em fase de CL, indicando ser este tratamento um estimulador da função ovariana tanto em relação à angiogênese quanto à proliferação de células luteínicas. A expressão espaço-temporal do bFGF no CL de búfalas difere em parte do padrão descrito para bovinos, nos quais o bFGF encontra-se expresso em maior intensidade nas células luteínicas em fase de CH ou fase luteínica inicial. Expressão diferencial de isoformas entre as duas espécies nas várias fases do ciclo estral pode levar a uma diferença de detecção pelo anticorpo utilizado.na imuno-histoquímica da proteína. Os resultados obtidos apontam para um papel local do bFGF na modulação das funções do CL de búfalas ao longo do ciclo estral e também em fase de CL em animais superovulados. / Corpus luteum (CL) is a transitory endocrine gland which formation and maintenance are angiogenesis-dependent. The bFGF (basic Fibroblast Growth Factor) is one of the most important angiogenic growth factors in CL which, besides possessing mitogenic properties, modulates the differentiation and cellular migration. Recent studies suggest the participation of this factor as local modulator of luteal cell functions. The present study intends therefore to characterize the expression of the protein and mRNA of bFGF in water buffalo CL in different stages of the estrous cycle and in buffaloes? CL on day 6 after ovulation of animals submitted to superovulatory treatment. For the present study we used 15 corpora lutea of water buffalo, which were divided in five groups: corpus hemorragicans (CH), mature corpus luteum (CL), CL in regression (CR), corpus albicans (CA) and CL of superovulated animals (CS). The samples were fixed in 4% buffered formol solution, dehydrataded in a serie of ethanol in growing concentrations and included in Histosec&reg;. Sections of 5 &#956;m thickness were submitted to immunohistochemistry for subsequent histological localization of bFGF. For the localization of bFGF mRNA, sections of 10 &#956;m thickness were submitted to in situ Hybridization. Expression of bFGF was identified in luteal, endothelial and perivascular cells in different stages of estrous cycle and also in CL of superovulated animals. The middle luteal phase showed the most prominent expression of protein and mRNA of the factor in luteal as well as endothelial and perivascular cells. Superovulated animals expressed the protein in a more intensive way than that of untreated animals in the middle luteal phase, indicating that this treatment is probably an stimulator of the ovarian function related to the angiogenesis and also to the proliferation of cells. The. space-temporary expression of bFGF in the CL of water buffalo differs partially from that described for the bovine CL, in which bFGF is expressed in larger intensity in luteal cells of the initial luteal phase (CH). Isoforms differential expression between the two species during CL life span could lead to differences in protein antibody detection pattern. The results point toward a local role of bFGF in the modulation of CL functions in water buffalo along the estrous cycle and also in the of CL in superovulated animals.

Para as análises de imagens mamográficas, médicos radiologistas fazem uso de monitores médicos especializados, capazes de proporcionar laudos seguros, uma vez que devem oferecem resolução adequada, níveis corretos de luminância e contraste dentro do padrão DICOM - Digital Imaging and Communications in Medicine (Comunicação de Imagens Digitais na Medicina). Este trabalho teve como objetivo avaliar a qualidade dos monitores específicos para mamografia digital, através de testes propostos pelo Report N 3 da American Association of Physicists in Medicine AAPM usando medidores calibrados de luminância (fotômetro) e padrões TG18 em testes quantitativos e qualitativos. Avaliou-se as condições de luz ambiente e outros indicadores básicos de desempenho, como, distorção geométrica, ruído, resolução, reflexão, uniformidade da luminância, o cumprimento resposta contraste de luminância para padrão DICOM e padrão anatômico das mamas. Em resposta, o teste que mais apresentou não conformidade foi à variação excessiva com o padrão de resposta contraste DICOM Grayscale Standard Display Function (GSDF), apresentando não conformidade em (100%) dos monitores analisados. Nos demais testes, todos os monitores de 5MP e o de 3MP apresentaram conformidade nos parâmetros avaliados. Em uma ação corretiva para as não conformidades, indica-se a realização de calibrações e procedimentos de verificação de controle de qualidade feitas por profissionais capacitados ou orientados. / For the analysis of mammographic images, radiologists make use of specific medical monitors, able to provide insurance reports, as they offer appropriate resolution, correct levels of luminance and contrast within the standard DICOM - Digital Imaging and Communications in Medicine (Communication Images digital in Medicine). This study aims to evaluate the quality of specific monitors for digital mammography, by testing the calibrated luminance meters (photometer) and TG18 standards in quantitative and qualitative methods proposed by Report No. 3 of American Association of Physicists in Medicine AAPM. It was evaluated the ambient light conditions and other basic performance indicators, such as, the as geometric distortion, noise, resolution, reflection, luminance uniformity, contrast luminance response compliance to DICOM standard and anatomical pattern of the breasts. The results showed that non-compliance test fails when visualizing low-contrast objects (100% of monitors analyzed) in the response pattern contrast DICOM Grayscale Standard Display Function (GSDF). For the other tests, all monitors of 5 and 3MPixel presented in agreement to the evaluated parameters. For a further corrective action for instance, non-compliance, it may be indicate to perform calibrations and verification of quality control developed by trained or oriented professionals.

As abelhas sem ferrão (Hymenoptera: Meliponini) possuem um sistema sexual haplodiplóide com determinação sexual complementar em um único lócus. Tal sistema é uma grande carga genética para o grupo e, assim, a diversidade genética de machos que se agregam nas proximidades dos ninhos é essencial para minimizar as chances de endogamia. As interações entre os indivíduos da colônia nas abelhas sem ferrão são diversas e grande parte delas é mediada por compostos químicos. A comunicação química é maior entre as rainhas e suas operárias, mas compostos químicos também são importantes para o acasalamento das rainhas. Como muitos machos se agregam nos eventos reprodutivos, é possível coletar e obter uma boa representatividade local de indivíduos e assim analisar certos caracteres que estruturam essas populações. Desse modo, o presente estudo teve como objetivos: (1) analisar quimicamente rainhas virgens e fisogástricas de Tetragonisca angustula; (2) analisar o perfil químico de machos dentro e fora dos ninhos; (3) analisar a diversidade genética das agregações de machos, quantas colônias contribuem com machos para formar essas agregações e avaliar qual o parentesco entre agregações de machos e rainhas dos ninhos onde havia agregações; (4) avaliar o potencial de dispersão dos machos de seus ninhos de origem até as agregações; (5) analisar morfometricamente machos compondo agregações de diferentes localidades. Técnicas de criação in vitro de rainhas virgens e instalação de ninhos-armadilha foram utilizadas a fim de otimizar a coleta de indivíduos. Nossos resultados indicam que rainhas virgens e rainhas fisogástricas são quimicamente distintas. Embora ambas possuam compostos voláteis atrativos sexualmente para os machos, as rainhas virgens possuem exclusivamente octadecenoato de octadecila e nerol em suas glândulas de Dufour e extratos cefálicos, respectivamente. Os machos que vivem dentro e os que vivem fora dos ninhos são semelhantes quimicamente, possuindo diversos ácidos carboxílicos em seus extratos cefálicos. Cinco agregações, contando com 376 machos, foram analisadas geneticamente sendo os machos provenientes de 83 colônias. Em média, eles se deslocaram ± 612 metros de seus ninhos de origem até as agregações. Essas agregações são muito semelhantes geneticamente entre si, não formando unidades distintas. Somente 3.45% dos machos das agregações eram aparentados às rainhas, o que diminui a probabilidade de inbreeding. Por fim, populações de machos de três localidades distintas puderam ser separadas com boa acuidade de acordo os dados morfométricos. Concluímos que existe comunicação química mediando a interação macho-rainha. A quantidade de colônias em uma determinada área contribui para a grande quantidade de indivíduos e para a diversidade genética das agregações. Os indivíduos nessas agregações são pouco aparentados e podem vir de colônias geograficamente muito distantes. A morfometria é útil em agrupar os machos de diferentes localidades / The stingless bees (Hymenoptera: Meliponini)present a haplodiploid sex determination system with complementary sex determination in a single locus. Such a system is a large genetic load for the group and thus the genetic diversity of male\'s aggregations near the nests is essential to minimize the chances of inbreeding. The interactions among the stingless bees nestmates are diverse and chemical compounds mediate most. The chemical communication is higher among the queens and their workers, but chemicals are also important for mating of queens. As the amount of males that aggregate near the nests with gynes is very large, these events allow us to collect and evaluate a local representation of males and thus to analyze certain characters that structure these populations. Thus, this study aimed to: (1) chemically analyzing virgin and physogastric queens of Tetragonisca angustula, (2) analyze the chemical profile of males inside and outside their nests, (3) analyze the genetic diversity of the aggregations of males, how many colonies contribute with males to these aggregations and to assess the relatedness between queens and males, (4) evaluate the potential dispersion of males from their nests to aggregations, (5) analyze morphometrically males composing aggregates of different locations. Techniques for rearing virgin queens in vitro and installation of trap-nests were used to optimize the sampling of individuals. Our results indicate that virgin queens and physogastric queens are chemically distinct. Although both present volatile compounds sexually attractive to males, virgin queens have exclusively nerol and ethyl octadecenoate in their cephalic extracts and Dufour\'s glands, respectively. Males from both types(living inside and outside their nests) are chemically similar, possessing several carboxylic acids in their cephalic extracts. About 83 colonies contributed for five aggregations with 376 males. On average, they moved ± 612 meters from their nest of origin to aggregations. These aggregations are genetically very similar to each other, without forming discrete units. Only 3.45% of the males are related to queens. Finally, populations of males of three different locations could be morphometrically separated with good accuracy. We conclude that there is chemical communication mediating the interaction male-queen. The number of colonies in one area contributes to the large number of individuals and the genetic diversity of the aggregations. Individuals in these aggregations are not related and can originate from distant colonies. The morphometry is useful to group the males from different localities

Introdução: As glândulas salivares humanas passam por diversos e complexos processos durante o período de desenvolvimento, até que adquiram maturidade estrutural para desempenhar sua função, a formação e secreção de saliva. Considerada essencial à saúde e homeostase da cavidade oral, a saliva é um fluido aquoso que depende de um mecanismo de transporte entre as membranas celulares por meio das aquaporinas. A família de proteínas aquaporinas possui treze membros. Somente algumas dessas proteínas atuam nas glândulas salivares formando poros na bicamada lipídica das membranas celulares facilitando o transporte de água e pequenos solutos, cruciais à regulação da qualidade e quantidade de saliva secretada. Proposição: Diante deste cenário, avaliamos por meio da técnica de imunoistoquímica o padrão de expressão das aquaporinas 1, 3 e 5 de glândulas salivares em desenvolvimento, com o intuito de contribuir com informações de base para futuras pesquisas. Metodologia: 47 espécimes parafinados de glândulas salivares em desenvolvimento, de diferentes sítios da cavidade oral de 20 fetos humanos, com idade entre 14 e 25 semanas, foram submetidos à técnica de imunoperoxidase. Os resultados foram analisados, de acordo com o estágio da morfogênese glandular e localização da expressão das aquaporinas. Resultados: Na fase de botão, houve a expressão das aquaporinas 1, 3 e 5 em todas as células epiteliais; na fase pseudoglandular, a expressão dessas proteínas foi vista nos ductos rudimentares (com exceção da aquaporina 1) e nas porções terminais (futuros ácinos); na fase canalicular as aquaporinas foram principalmente detectadas nos ácinos rudimentares e ductos. Finalmente, na fase de botão terminal, as aquaporinas 3 e 5 foram detectadas nas membranas das células acinares e os ductos expressaram todas as aquaporinas. Conclusão: O presente trabalho evidenciou a imunoexpressão das aquaporinas 1, 3 e 5 nas glândulas salivares humanas durante o período de embriogênese. A análise topográfica dessas proteínas nos permitiu identificar diferenças no padrão de expressão entre as diferentes regiões estruturais e estágios do desenvolvimento glandular, sugerindo diferentes papéis para cada proteína / Introduction: The human salivary glands morphogenesis depends on complex processes during the development period until they reach full structural maturity to perform its function - the synthesis and secretion of saliva. The saliva is a complex aqueous fluid considered essential to health and homeostasis of the oral cavity; its synthesis depends on several molecular mechanisms, including the transport of water, solutes, ions, amongst others across the cell membranes. The aquaporin family of proteins is essential in this process. This protein family consists of thirteen members that form channels across the cell membrane facilitating water and small solutes transportation, crucial to the regulation of quality and quantity of secreted saliva. Aims: In this scenario, we evaluated, using the immunohistochemistry technique, the expression pattern of aquaporins 1, 3 and 5 in the different phases of salivary glands development, in order to understand the role of these protein in the formation of human salivary gland morphogenesis. Methodology: 47 specimens of paraffin embedded human salivary glands at various developmental phases were included in the study. The specimens were derived from various sites of the oral cavity of 20 human fetuses aged between 14 and 25 weeks of gestation. All specimens were subjected to the imunohistochemical immunoperoxidase technique. The results were qualitatively and semiquantitatively analyzed according to the stage of glandular morphogenesis and express location of aquaporin. Results: In the bud stage, there was expression of aquaporin 1, 3 and 5 in all glandular epithelial cells; in pseudoglandular stage, the expression of these proteins was seen in rudimentary ducts (except aquaporin-1) and the terminal end buds (future acini); in the canalicular phase the aquaporins were mainly detected in the rudimentary ducts and acini. Finally, in terminal bud stage, the aquaporin 3 and 5 were detected in the membranes of the ducts and acinar cells expressed all aquaporins. Conclusion: This study showed the presence of aquaporins 1, 3 and 5 in human salivary glands during embryogenesis period. The topographic analysis of these proteins allowed us to identify differences in the expression pattern between the different structural regions and stages of glandular development, suggesting different roles for each of these proteins

Orientador: Silvia Rodrigues Machado / Resumo: Leguminosae é a terceira maior família dentre as Angiospermas, é cosmopolita, podendo ocorrer em florestas tropicais úmidas, florestas secas, savanas, regiões mediterrâneas e desérticas. Papilionoideae, subfamília com maior riqueza de espécies de Leguminosae, apresenta Phaseoleae como uma de suas tribos de maior importância econômica e alto número de espécies. Cajaninae, por sua vez, é a maior subtribo de Phaseoleae, destacando-se por apresentar aproximadamente 490 espécies distribuídas em 10 gêneros. Os representantes desta subtribo possuem distribuição pantropical, com apenas Rhynchosia e Eriosema ocorrendo nos neotrópicos. De modo geral, as espécies desta subtribo ocorrem em campos graminosos, florestas tropicais secas, regiões semiáridas, áreas degradadas e ambientes propensos à passagem do fogo. A ocorrência das espécies de Cajaninae nestes diferentes ambientes pode estar relacionada à presença de estruturas secretoras, como glândulas vesiculares e tricomas de base bulbosa. Apesar do conhecimento sobre a existência destas estruturas peculiares neste grupo desde o século 19, nenhum estudo detalhado de anatomia, ultraestrutura ou estudos com enfoque evolutivo haviam sido realizados. A subtribo tem sido considerada monofilética, porém os poucos trabalhos filogenéticos existentes abordam Phaseoleae como um todo, possuindo uma amostragem muito baixa dos representantes de Cajaninae, o que não esclarece sua monofilia. Considerando o pouco conhecimento sobre as relações filogené... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Leguminosae is the third largest family among Angiosperms, is cosmopolitan, occurring in humid tropical forests, dry forests, savannas, Mediterranean and desert regions. Papilionoideae, a subfamily with the highest species richness of Leguminosae, presents Phaseoleae as one of its tribes of major economic importance and high number of species. Cajaninae, in turn, is the largest subtribe of Phaseoleae, standing out to present approximately 490 species distributed in 10 genera. The representatives of this subtribe have pantropical distribution, with only Rhynchosia and Eriosema occurring in the neotropics. The species of this subtribe occur in greenfields, dry tropical forests, semi-arid regions, degraded areas and environments prone to fire. The occurrence of Cajaninae species in these different environments may be related to the presence of secretory structures, such as vesicular glands and bulbous based-trichomes. Despite the knowledge about the existence of these peculiar structures in this group since the 19th century, no detailed study of anatomy, ultrastructure or evolutionary approach studies had been performed. The subtribe has been considered monophyletic, but the few existing phylogenetic works address Phaseoleae as a whole, having a very low sampling of Cajaninae representatives, which does not clarify its monophyly. Considering the little knowledge about the phylogenetic relationships in Cajaninae, on the secretory structures that are peculiar to this group and the... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Durante o desenvolvimento de holometálobos alguns tecidos são eliminados/remodelados durante a metamorfose. A autofagia age nesse processo degradando componentes citoplasmáticos, inicialmente isolando-os em dupla membrana, estrutura chamada autofagossomo e esses conteúdos são degradados por hidrolases lisossomais. Porém, aspectos apoptóticos podem estar presentes nesse processo, como o envolvimento de caspases e a fragmentação nuclear. Alterações morfológicas na glândula salivar e no corpo gorduroso, que são bons exemplos de órgãos que sofrem morte celular programada (MCP) no desenvolvimento de R. americana, foram analisados por microscopia de luz e eletrônica. Durante a remoção desses órgãos, núcleos apresentam morfologia condensada e com fragmentação confirmada por TUNEL. Ambos tecidos mostraram formação de autofagossomos, mas a glândula salivar completa o processo de MCP durante a metamorfose. Genes antiapoptóticos e autofágicos que têm importante papel na MCP foram caracterizados. MCP em R. americana apresenta cooperação de aspetos da autofagia e da apoptose. / In the development of holometabolous insects, some tissues are eliminated/remodelated during metamorphosis. Autophagy acts in this process by degrading cytoplasm contents, initially by surrounding them within a double membrane, a structure called autophagosome and its contents are degraded by lysosomal hydrolases. However, some features of apoptotic cell death may be present in this process, such as the involvement of caspases and nuclear fragmentation. Morphological changes of salivary gland and fat body, good examples of organs that suffer programmed cell death (PCD) during R. americana development, were analyzed by light and electron microscopy. During the removal of these organs, nuclei present fragmented and condensed morphology, confirmed by TUNEL assay. Both tissues show the formation of autophagosomes, but the salivary gland completes the process of PCD during metamorphosis. Antiapoptotic and autophagic genes that play important function in the PCD, were characterized. R. americana PCD occurs with the cooperation of autophagy and apoptosis features.