Estudamos 32 crianças com HC devido à agenesia ou ectopia tireoideana para mutações no PAX8 e 30 crianças com hipoplasia da tireóide para mutações no rTSH. Todos os exons de ambos os genes foram amplificados a partir do DNA genômico, seguido por seqüenciamento direto. Encontramos, em dois pacientes com ectopia, duas alterações no gene PAX8, uma no promotor, e outra no exon um. Os outros indivíduos estudados apresentaram as seqüências codificáveis dos genes PAX8 e rTSH normais. Em relação ao caráter funcional e ensaios de luciferase verificamos que no promotor a resposta transcricional diminuiu significativamente na presença de TSH, por um mecanismo dependente de cAMP / We studied 32 children with hypothyrodism (CH) from thyroid agenesis or ectopia for PAX8 mutations, and 30 children with thyroid hypoplasia for rTSH mutations. All exons of both genes were amplified from the genomic DNA, then sequenced directly. We found two alterations in the PAX8 gene in two patients, one in the promoter and the other in exon one. The other children had normal sequences in both PAX8 and rTSH genes. In relation to functional character and luciferase assays, we verified that transcriptional response was significantly reduced in the presence of TSH by a cAMP dependant mechanism

Objectives: The introduction of neonatal screening programs (NSP) led to an increased in detection of congenital hypothyroidism (CH). This increase may be due to ethnic composition (predominance of Iberian and Asian people), environmental factors (temperature and iodine intake) and inclusion of cases of transient CH and hyperthyrotropinemia, defined by moderate elevation of TSH with normal T4. The main objectives of this study were to evaluate, in children with altered neonatal screening tests in the NSP in the Northeastern Brazilian Sergipe state, the evolution for permanent or temporary condition and to evaluate the mean incidence of permanent CH, hyperthyrotropinemia and transient TSH elevation. Subjects and methods: Review of medical records of children with altered neonatal and confirmatory TSH from 2004 to 2010 (levels more than 5.2 μU/ml and 4.2 μU/ml, respectively), followed at the Clinic of Pediatric Endocrinology of the University Hospital of the Federal University of Sergipe. From the confirmatory serum TSH values, children were classified as initial CH: serum TSH > 10.0 μU/ml; or suspect CH: serum TSH > 4.2 μU/ml and ≤ 10.0 μU/ml. According to follow-up parameters, the final diagnosis included three categories. Permanent CH: Serum TSH > 10.0 μU/ml, independent of T4 levels or current use of thyroxine; or without l-thyroxine use serum TSH level between 4.2 μU/ml and 10.0 μU/ml, but with low free T4 or total T4. Hyperthyrotropinemia: children without l-thyroxine use with serum TSH level between 4.2 μU/ml and 10.0 μU/ml with normal free T4 and total T4. Transient TSH elevation: Initial CH or suspect CH children which normalized in the follow up without l-thyroxine treatment (serum TSH ≤ 4.2 μU/ml, free T4 ≥ 0.79 ng/dl and total T4 ≥ 7.2 μg/dl). The mean incidence of permanent CH, hyperthyrotropinemia and transient TSH elevation in the period was calculated by dividing the number of children with each category for the total number of children screened. Results: The initial diagnosis included 37 cases of initial CH (18.1%) and 167 suspect CH (81.9%). The final diagnosis included 46 cases of permanent CH (22.5%); 56 hyperthyrotropinemia (27.5%) and 102 transient TSH elevation (50.0%). Out of the 37 cases of initial CH, it was found 23 (62.2%) of permanent CH; 9 (24.3%) of hyperthyrotropinemia; and 5 (13.5%) of transient TSH elevation. Out of the 167 suspects, it was found 23 (13.8%) of permanent CH, 47 (28.1%) of hyperthyrotropinemia and 97 (58.1%) of transient TSH elevation. We found a mean incidence of 1:4166 of permanent CH, 1:3448 of hyperthyrotropinemia and 1:1887 of transient TSH elevation. 86.5% of children with an initial diagnosis of CH and 41.9% of suspicions have permanent condition (CH or hyperthyrotropinemia). Conclusions: The follow-up of children with initial diagnosis and suspicion is necessary to characterize the permanence or not of the disorder, since the prediction of the evolution of children with initial CH or suspect is difficult. / Objetivos: A introdução dos programas de triagem neonatal (PTN) propiciou o aumento na detecção do hipotireoidismo congênito (HC). Este aumento pode estar ligado à composição étnica (predomínio em ibéricos e asiáticos), fatores ambientais (temperatura e ingestão de iodo) e inclusão de casos de HC transitório e da hipertirotropinemia, definida pela elevação moderada do TSH com T4 normal. Os objetivos principais deste estudo foram avaliar em crianças com teste de triagem neonatal alterado no PTN em Sergipe, no nordeste do Brasil, a evolução para condição permanente ou transitória e avaliar a incidência média do HC permanente, da hipertirotropinemia e da elevação transitória do TSH. Sujeitos e métodos: Foi realizada revisão dos prontuários das crianças convocadas no período de 2004 a 2010, com TSH neonatal e confirmatório alterados (maior que 5,2 μU/ml e 4,2 μU/ml, respectivamente), acompanhados no Ambulatório de Endocrinologia Pediátrica do Hospital Universitário da Universidade Federal de Sergipe. A partir dos valores do TSH sérico confirmatório, as crianças foram classificadas como HC inicial: TSH sérico > 10,0 μU/ml; ou suspeito HC: TSH sérico > 4,2 μU/ml e ≤ 10,0 μU/ml. De acordo com parâmetros do seguimento, o diagnóstico final incluiu três categorias. HC permanente: TSH sérico > 10,0 μU/ml, independente de valores de T4 ou do uso de l-tiroxina; ou sem l-tiroxina com TSH sérico entre 4,2 μU/ml e 10,0 μU/ml, mas com T4 livre ou T4 total baixos; Hipertirotropinemia: Criança sem l-tiroxina, com TSH sérico entre 4,2 μU/ml e 10,0 μU/ml, com T4 livre e T4 total normais; Elevação transitória do TSH: Criança HC inicial ou suspeito HC que normalizou no seguimento, sem a l-tiroxina (TSH sérico ≤ 4,2 μU/ml, T4 livre ≥ 0,79 ng/dl e T4 total ≥ 7,2 μg/dl). A incidência média do HC permanente, da hipertirotropinemia e da elevação transitória do TSH no período foi calculada dividindo-se o número de crianças com cada uma das três condições pelo número total de crianças triadas. Resultados: No diagnóstico inicial tivemos 37 casos de HC inicial (18,1%) e 167 suspeitos HC (81,9%). No diagnóstico final tivemos 46 casos de HC permanente (22,5%); 56 de hipertirotropinemia (27,5%) e 102 de elevação transitória do TSH (50,0%). Dos 37 casos HC inicial encontramos 23 (62,2%) de HC permanente; 9 (24,3%) de hipertirotropinemia; e 5 (13,5%) de elevação transitória do TSH. Dos 167 suspeitos encontramos 23 (13,8%) de HC permanente, 47 (28,1%) de hipertirotropinemia e 97 (58,1%) de elevação transitória do TSH. Encontramos uma incidência média de 1:4166 de HC permanente, 1:3448 de hipertirotropinemia e 1:1887 de elevação transitória do TSH. 86,5 % das crianças com diagnóstico inicial de HC e 41,9 % das suspeitas apresentam condição permanente (HC ou hipertirotropinemia). Conclusões: O seguimento das crianças seja com o diagnóstico inicial de HC ou de suspeição é necessário para caracterizar a permanência ou transitoriedade do distúrbio, haja vista que a predição da evolução destas crianças é difícil.

Introdução: O hipotireoidismo congênito é a causa mais frequente de retardo mental evitável, cuja prevalência é de 1/3000 crianças nascidas vivas. Pode ser causado por disgenesia tireoideana (80% dos casos) ou por defeitos de síntese hormonal (20% restantes). As disormonogêneses tem sido associadas a mutações nos genes da tireoperoxidase (TPO), tireoglobulina, dual oxidase 2, pendrina, desalogenase e do simportador sódio/iodo. A tireoperoxidase (TPO) é uma glicoproteína de 105 KDa, localizada na membrana apical do tireócito, responsável pela organificação do iodeto. Até o momento 54 mutações, associadas ao hipotireoidismo congênito foram identificadas no gene TPO. Objetivos: Este estudo visou rastrear mutações no gene TPO em pacientes com hipotireoidismo congênito, com defeito total ou parcial de incorporação de iodeto, e associar o defeito genético com o fenótipo do paciente. Casuística e Métodos: Foram estudados 34 pacientes com hipotireoidismo congênito, 13 com DIIT (descarga de iodeto >50%) e 21 com DIIP (descarga de iodeto entre 25 e 50%) por possível defeito no gene TPO. Os métodos empregados foram: extração do DNA genômico de sangue periférico, amplificação por PCR do promotor e dos 17 exons do gene TPO e dos 33 exons do gene DUOX2 , eletroforese em gel de gradiente denaturante (DGGE) e seqüenciamento. Resultados: Foram identificadas 8 novas alterações de seqüências que levam a troca de aminoácidos: Leu68Ile, Gly319Glu, Ala426Gly, Arg584Gln, Val618Met, Pro883Leu, Ala909Thr, A909fsX49; e 4 já descritas na literatura: 396fsX76, Gln660Gly, Arg665Trp, Cys838Ser. Dois pacientes com DTII apresentaram mutações em homozigose, e dois pacientes (um com DTII e um com DPII) eram portadores de alterações em heterozigose composta. Seis pacientes eram portadores de um único alelo da TPO afetado (três com DPII e três com DTII). Foram identificados também 33 polimorfismos (10 novos). Apenas polimorfismos foram identifiados no gene DUOX2. Conclusão: Foi verificada alta freqüência de mutações monoalélicas em pacientes com DIIT e DIIP. Em ambos os grupos as mutações se localizaram ao longo de todo o gene, tanto no domínio extracelular como no intracelular da proteína. Somente duas mutações foram identificadas em mais de um paciente, mostrando a heterogeneidade genotípica da doença nesta população / I ntroduction: Congenital Hypothyroidism affects 1/3000 birth, is caused by thyroid gland dysgenesis (80%) or inborn errors of the thyroid hormone biosynthesis (20%). Genetics defects of the genes for thyroid peroxidase, (TPO), thyroglobulin, sodium/iodine simporter, dual oxidase 2, and pendrine have been associated to dyshormonogenesis. TPO is a glycoprotein of 105 KDa situated in the apical membrane of the thyroid cell, responsible for iodide organification. At least 54 mutations have been identified in patients with dyshormonogenesis. Objectives: The aim of the study was to identify TPO gene mutations in patients with congenital hypothyroidism with total (DIIT) and partial (DIIP) iodide organification defects and to associate the genetic defect with the phenotype of the patient. Patients and Methods: Thirty four patients with congenital hypothyroidism, 13 with DIIT (iodide discharge >50%) and 21 patients with DIIP (iodide discharge between 25- 50%) due to possible TPO gene defect. Extraction of genomic DNA from peripheral blood, PCR amplification of the promoter, 17 exons of TPO gene and of the 33 exons of DUOX2 gene, denaturant gradient gel electrophoreses (DGGE) and sequencement were performed. Results: Eight new sequence alterations were identified: Leu68Ile, Gly319Glu, Ala426Gly, Arg584Gln, Val618Met, Pro883Leu, Ala909Thr, A909fsX49; and four previously described mutations: 396fsX76, Gln660Gly, Arg665Trp, Cys838Ser. Homozygous mutations were identified in two patients with DTII. Ttwo patients (one with DTII and one with DPII) were carrying compound heterozygous mutations. TPO monoallelic mutations were identified in six patients (3 with DPII and 3 with DTII). Thirty three polymorphisms had also been identified (10 news). Conclusion: High frequency of TPO monoallelic mutations was detected in patients with DIIT and DIIP. In both groups of patients the mutations were located all throughout the gene, in the extracellular as well as in the intracellular domain. Only two mutations have been identified in more than one patient, indicating the genotypic heterogeneity of the illness in this population

Estudamos 32 crianças com HC devido à agenesia ou ectopia tireoideana para mutações no PAX8 e 30 crianças com hipoplasia da tireóide para mutações no rTSH. Todos os exons de ambos os genes foram amplificados a partir do DNA genômico, seguido por seqüenciamento direto. Encontramos, em dois pacientes com ectopia, duas alterações no gene PAX8, uma no promotor, e outra no exon um. Os outros indivíduos estudados apresentaram as seqüências codificáveis dos genes PAX8 e rTSH normais. Em relação ao caráter funcional e ensaios de luciferase verificamos que no promotor a resposta transcricional diminuiu significativamente na presença de TSH, por um mecanismo dependente de cAMP / We studied 32 children with hypothyrodism (CH) from thyroid agenesis or ectopia for PAX8 mutations, and 30 children with thyroid hypoplasia for rTSH mutations. All exons of both genes were amplified from the genomic DNA, then sequenced directly. We found two alterations in the PAX8 gene in two patients, one in the promoter and the other in exon one. The other children had normal sequences in both PAX8 and rTSH genes. In relation to functional character and luciferase assays, we verified that transcriptional response was significantly reduced in the presence of TSH by a cAMP dependant mechanism

Objectives: The introduction of neonatal screening programs (NSP) led to an increased in detection of congenital hypothyroidism (CH). This increase may be due to ethnic composition (predominance of Iberian and Asian people), environmental factors (temperature and iodine intake) and inclusion of cases of transient CH and hyperthyrotropinemia, defined by moderate elevation of TSH with normal T4. The main objectives of this study were to evaluate, in children with altered neonatal screening tests in the NSP in the Northeastern Brazilian Sergipe state, the evolution for permanent or temporary condition and to evaluate the mean incidence of permanent CH, hyperthyrotropinemia and transient TSH elevation. Subjects and methods: Review of medical records of children with altered neonatal and confirmatory TSH from 2004 to 2010 (levels more than 5.2 μU/ml and 4.2 μU/ml, respectively), followed at the Clinic of Pediatric Endocrinology of the University Hospital of the Federal University of Sergipe. From the confirmatory serum TSH values, children were classified as initial CH: serum TSH > 10.0 μU/ml; or suspect CH: serum TSH > 4.2 μU/ml and ≤ 10.0 μU/ml. According to follow-up parameters, the final diagnosis included three categories. Permanent CH: Serum TSH > 10.0 μU/ml, independent of T4 levels or current use of thyroxine; or without l-thyroxine use serum TSH level between 4.2 μU/ml and 10.0 μU/ml, but with low free T4 or total T4. Hyperthyrotropinemia: children without l-thyroxine use with serum TSH level between 4.2 μU/ml and 10.0 μU/ml with normal free T4 and total T4. Transient TSH elevation: Initial CH or suspect CH children which normalized in the follow up without l-thyroxine treatment (serum TSH ≤ 4.2 μU/ml, free T4 ≥ 0.79 ng/dl and total T4 ≥ 7.2 μg/dl). The mean incidence of permanent CH, hyperthyrotropinemia and transient TSH elevation in the period was calculated by dividing the number of children with each category for the total number of children screened. Results: The initial diagnosis included 37 cases of initial CH (18.1%) and 167 suspect CH (81.9%). The final diagnosis included 46 cases of permanent CH (22.5%); 56 hyperthyrotropinemia (27.5%) and 102 transient TSH elevation (50.0%). Out of the 37 cases of initial CH, it was found 23 (62.2%) of permanent CH; 9 (24.3%) of hyperthyrotropinemia; and 5 (13.5%) of transient TSH elevation. Out of the 167 suspects, it was found 23 (13.8%) of permanent CH, 47 (28.1%) of hyperthyrotropinemia and 97 (58.1%) of transient TSH elevation. We found a mean incidence of 1:4166 of permanent CH, 1:3448 of hyperthyrotropinemia and 1:1887 of transient TSH elevation. 86.5% of children with an initial diagnosis of CH and 41.9% of suspicions have permanent condition (CH or hyperthyrotropinemia). Conclusions: The follow-up of children with initial diagnosis and suspicion is necessary to characterize the permanence or not of the disorder, since the prediction of the evolution of children with initial CH or suspect is difficult. / Objetivos: A introdução dos programas de triagem neonatal (PTN) propiciou o aumento na detecção do hipotireoidismo congênito (HC). Este aumento pode estar ligado à composição étnica (predomínio em ibéricos e asiáticos), fatores ambientais (temperatura e ingestão de iodo) e inclusão de casos de HC transitório e da hipertirotropinemia, definida pela elevação moderada do TSH com T4 normal. Os objetivos principais deste estudo foram avaliar em crianças com teste de triagem neonatal alterado no PTN em Sergipe, no nordeste do Brasil, a evolução para condição permanente ou transitória e avaliar a incidência média do HC permanente, da hipertirotropinemia e da elevação transitória do TSH. Sujeitos e métodos: Foi realizada revisão dos prontuários das crianças convocadas no período de 2004 a 2010, com TSH neonatal e confirmatório alterados (maior que 5,2 μU/ml e 4,2 μU/ml, respectivamente), acompanhados no Ambulatório de Endocrinologia Pediátrica do Hospital Universitário da Universidade Federal de Sergipe. A partir dos valores do TSH sérico confirmatório, as crianças foram classificadas como HC inicial: TSH sérico > 10,0 μU/ml; ou suspeito HC: TSH sérico > 4,2 μU/ml e ≤ 10,0 μU/ml. De acordo com parâmetros do seguimento, o diagnóstico final incluiu três categorias. HC permanente: TSH sérico > 10,0 μU/ml, independente de valores de T4 ou do uso de l-tiroxina; ou sem l-tiroxina com TSH sérico entre 4,2 μU/ml e 10,0 μU/ml, mas com T4 livre ou T4 total baixos; Hipertirotropinemia: Criança sem l-tiroxina, com TSH sérico entre 4,2 μU/ml e 10,0 μU/ml, com T4 livre e T4 total normais; Elevação transitória do TSH: Criança HC inicial ou suspeito HC que normalizou no seguimento, sem a l-tiroxina (TSH sérico ≤ 4,2 μU/ml, T4 livre ≥ 0,79 ng/dl e T4 total ≥ 7,2 μg/dl). A incidência média do HC permanente, da hipertirotropinemia e da elevação transitória do TSH no período foi calculada dividindo-se o número de crianças com cada uma das três condições pelo número total de crianças triadas. Resultados: No diagnóstico inicial tivemos 37 casos de HC inicial (18,1%) e 167 suspeitos HC (81,9%). No diagnóstico final tivemos 46 casos de HC permanente (22,5%); 56 de hipertirotropinemia (27,5%) e 102 de elevação transitória do TSH (50,0%). Dos 37 casos HC inicial encontramos 23 (62,2%) de HC permanente; 9 (24,3%) de hipertirotropinemia; e 5 (13,5%) de elevação transitória do TSH. Dos 167 suspeitos encontramos 23 (13,8%) de HC permanente, 47 (28,1%) de hipertirotropinemia e 97 (58,1%) de elevação transitória do TSH. Encontramos uma incidência média de 1:4166 de HC permanente, 1:3448 de hipertirotropinemia e 1:1887 de elevação transitória do TSH. 86,5 % das crianças com diagnóstico inicial de HC e 41,9 % das suspeitas apresentam condição permanente (HC ou hipertirotropinemia). Conclusões: O seguimento das crianças seja com o diagnóstico inicial de HC ou de suspeição é necessário para caracterizar a permanência ou transitoriedade do distúrbio, haja vista que a predição da evolução destas crianças é difícil.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Thyroid hormones are essential for normal brain development. Therefore thyroid disease may be responsible for the onset of severe neurological disorders. The proper functioning of the maternal thyroid gland, especially during the early stages of pregnancy, plays an important role in ensuring that the offspring have normal brain and body development.We aimed to investigate the impact of experimental gestational hypothyroidism (EGH) on nociceptive threshold and motor activity in the offspring at different postnatal ages (7th, 15th, 23rd, 30th, 60th and 120th postnatal days; PND) in rats. EGH was induced with methimazole (MMI) 0.02% in drinking water from day 9 of gestation until birth. The offspring was assessed for thermal and mechanical nociception using the tail-flick test and vonFrey filaments. Rota-Rod test and grip strength were used to assess motor function. EGH reduced thermal, but not mechanical threshold at all ages studied (p <0.05). Differently, 60 days old females offspring from MMI-treated dams (f-OMTD) were not affected by EGH when tested in the tail-flick. Only males OMTD presented a deficient locomotor performance using the Rota-Rod test (p < 0.01 at 60th PND), and the grip strength meter (p < 0.05 at 120th PND), in comparison to offspring from water-treated dams (OWTD). In conclusion, EGH promotes hypersensitivity to noxious thermal, but not mechanical stimulus, whereas motor performance is reduced and thermal hypernociception remains present, both only in mature males OMTD, suggesting the presence of a protective factor in females. / Os hormônios tireoideanos são essenciais para o desenvolvimento normal do cérebro. Portanto, doenças da tireóide podem ser responsáveis pelo aparecimento de graves distúrbios neurológicos. O bom funcionamento da glândula tireóide materna, especialmente durante os primeiros meses da gravidez, desempenha um papel importante para garantir que os filhotes apresentem adequado desenvolvimento corporal e cerebral. No presente estudo, investigou-se o impacto do hipotireoidismo gestacional experimental (HGE) na sensibiliade mecânica e térmica e desempenho locomotor na prole em diferentes idades pós-natais (7, 15, 23, 30, 60 e 120 dias pós-natais; DPNs). O HGE foi induzido adicionando metimazol (MTZ), a uma concentração de 0,02%, em água potável a partir do dia 9 de gestação até o parto. A prole foi avaliada para sensibilidade térmica e mecânica através dos testes tail-flick e vonFrey, respectivamente. Os testes Rota-Rod e o Grip Strength Meter foram utilizados para avaliar a função motora da prole. Assim, nossos dados demonstraram que o HGE não alterou a sensibilidade mecânica, no entanto, reduziu a latência térmica até o 1º mês de vida dos filhotes (7, 15, 23 e 30 DPN). Aos 60 DPNs, somente os filhotes machos de mães tratadas com MTZ durante o período gestacional apresentaram redução na latência térmica (p<0,05). Acrescido a isto, estes mesmos machos apresentaram desempenho locomotor deficiente aos 60 DPNs e força de preensão reduzida aos 120 DPNs (p<0,01 e p<0,05, respectivamente), em comparação com filhotes de mães eutireóideas. As mesmas alterações não foram observadas na prole do sexo feminino. Em conclusão, o HGE não altera a sensibilidade mecânica da prole, porém promove hipersensibilidade a estímulos térmicos nocivos, sendo que, na fase adulta (60 DPN), apenas os machos são afetados. Ademais, o desempenho motor é reduzido somente em machos, sugerindo a presença de algum fator de proteção no sexo feminino.

A principal função da glândula tireoide é a produção dos hormônios T3 e T4, que promovem a regulação do consumo energético no organismo. O hipotireoidismo congênito (HC) é um distúrbio metabólico sistêmico, onde a produção de T3 e T4 no período neonatal é insuficiente. O HC por disormonogênese é uma doença causada por erros inatos na síntese de T3 e T4, com herança autossômica recessiva. Já foram descritas mutações nos genes NIS, SLC26A4, DUOX2, DUOXA2, TPO, TG e DEHAL-1. O defeito na organificação do iodeto (DOI) é o mais comum na disormonogênese, sendo a falha mais frequente na TPO, seguida pelas proteínas DUOX2 e DUOXA2. A TPO é responsável pela oxidação do iodeto, pela iodação da tireoglobulina e pelo acoplamento das tirosinas iodinizadas. Já foram descritas 70 mutações ao longo de todo o gene TPO. Por ser uma heme peroxidase, a TPO requer H2O2 para sua função. O principal núcleo catalítico gerador de H2O2 na tireoide é o complexo DUOX2/DUOXA2. Foram descritas 25 mutações no gene DUOX2 e uma única mutação no gene DUOXA2. Em estudo anterior, avaliamos pacientes com HC após os 3 anos de idade para estabelecimento do diagnóstico etiológico, através de dosagem de TG sérica, ultrassonografia, captação e mapeamento da tireoide com 131I. Sete pacientes apresentaram DOI. Nestes pacientes avaliamos o gene TPO e identificamos diversos SNPs já descritos na literatura. Um paciente apresentou a mutação p.Q660E em heterozigose, outro paciente o SNP p.R584Q em homozigose, e um terceiro paciente as alterações p.Q660E e p.584Q em heterozigose composta. Os objetivos deste estudo foram pesquisar mutações dos genes DUOX2 e DUOXA2 nos pacientes com DOI e realizar o estudo funcional da alteração p.R584Q na TPO. Para o estudo molecular, extraímos o DNA de leucócitos periféricos dos pacientes e seus familiares, seguido de amplificação por PCR, e sequenciamento automático, e os resultados comparados com as sequencias normais de cada gene (GenBank). Na análise funcional da alteração p.R584Q na TPO, células HeLa foram transfectadas com plasmídios pcDNA contendo o gene da TPO normal e alterado, e a atividade das proteínas produzidas pelas células foi avaliada pelo sistema AmplexRed. Análises in silico foram realizadas com os programas de bioanálise PolyPhen, MutationTaster, SIFT e PSIPRED. Ao final do estudo molecular, no gene DUOX2, identificamos 20 SNPs previamente descritos, incluindo o SNP funcional p.H678R (rs57659670), presente em heterozigose em 3 pacientes. Também identificamos a nova substituição p.A1087V em heterozigose em um paciente. De acordo com dados dos programas de bioanálise, a alteração p.A1087V é prejudicial e o SNP p.H678R é tolerável. No gene DUOXA2 identificamos 5 polimorfismos previamente descritos e nenhuma mutação. No estudo funcional, verificamos uma diminuição significativa da atividade da TPO portadora da alteração p.R584Q em comparação à proteína normal (5% de atividade residual; p=0,0193). De acordo com os dados dos programas de bioanálise, a alteração p.R584Q é prejudicial. Três pacientes não apresentaram alterações nas regiões estudadas dos genes TPO, DUOX2 e DUOXA2. As revisões dos dados clínicos e laboratoriais sugerem a presença de outras proteínas alteradas, como TG, Pendrina ou receptor do TSH. Um paciente apresentou a nova alteração p.A1087V na DUOX2 em heterozigose e nenhuma outra alteração nas regiões estudadas dos genes avaliados. Cogitamos a presença de alterações em regiões não avaliadas ou ainda a expressão monoalélica de DUOX2. O SNP funcional p.H678R na DUOX2 foi identificado em três pacientes com alterações na TPO: um com a alteração p.R584Q em homozigose, outro com a p.R584Q e a mutação p.Q660E em heterozigose composta. Estes dois pacientes apresentam os dois alelos da TPO alterados, justificando o DOI. O terceiro caso apresentou apenas a mutação p.Q660E em heterozigose, podendo apresentar alterações em regiões não avaliadas ou ainda a expressão monoalélica da TPO. Concluímos que definimos o diagnóstico molecular de 4 dos nossos pacientes, que apresentaram importantes alterações nos genes avaliados, e ressaltamos que a alteração p.R584Q na TPO provoca perda da atividade, causando DOI / The main role of the thyroid gland is to produce T3 and T4, which promote the regulation of body energy intake. Congenital hypothyroidism (CH) is a systemic metabolic disorder where T3 and T4 production during neonatal period is insufficient. CH due to dyshormonogenesis is a disease caused by inborn errors in T3 and T4 synthesis, with autosomal recessive inheritance. Mutations in NIS, SLC26A4, DUOX2, DUOXA2, TPO, TG and DEHAL-1 genes have been described. The iodide organification defect (IOD) is the most common cause of dyshormonogenesis, being the TPO defect the most frequent, followed by defects in DUOX2 and DUOXA2 proteins. TPO is responsible for iodide oxidation, tyrosine iodination and its coupling. Seventy mutations have been described throughout the gene. As a heme peroxidase, TPO requires H2O2 to its regular function. The main catalytic core for H2O2 generation in thyroid is the DUOX2/DUOXA2 complex. Twenty five mutations have been described in DUOX2 gene and only one mutation in DUOXA2 gene. In our previous study, we evaluated patients with CH after 3 years of age to establish their etiologic diagnosis, by combining serum TG, thyroid ultrasound, and radioiodide uptake with 131I. Seven patients were diagnosed with IOD. In these patients, we evaluated TPO gene and identified several already described SNPs. One patient had the p.Q660E mutation in heterozygous state, another patient had the SNP p.R584Q in homozygous state and a third one had p.Q660E and p.584Q in compound heterozygous state. The aims of this study were to search for mutations in DUOX2 and DUOXA2 genes in patients with IOD and perform a functional study of TPO p.R584Q change. For the molecular study, DNA was extracted from peripheral blood leukocytes of each patient and parents, followed by PCR, and automatic sequence, and the results were compared with normal sequences of each gene (GenBank). For functional analysis of TPO p.R584Q, HeLa cells were transfected with pcDNA plasmids containing normal and altered TPO gene and the protein activity was assessed by AmplexRed system. In silico analyzes were performed with the bioanalysis programs: PolyPhen, MutationTaster, SIFT and PSIPRED. At the end of the molecular study, in DUOX2 gene we identified 20 previously described SNPs, including the functional p.H678R SNP (rs57659670), present in heterozygous state in 3 patients. We also identified the new p.A1087V change in heterozygous state in one patient. According to bioassay programs datas, p.A1087V change is damage and p.H678R SNP is tolerable. In DUOXA2 gene we identified five previously described polymorphisms and no mutation. In TPO functional study, we observed a significant activity decrease of TPO p.R584Q compared to normal TPO (5% of activity; p=0.0193). According to bioassay programs datas, p.R584Q is damaging. Three patients showed no changes in TPO, DUOX2 and DUOXA2 genes studied regions. A review of clinical and laboratory data suggested the presence of other altered proteins, such as TG, Pendrin or TSH receptor. One patient had the new DUOX2 p.A1087V alteration in heterozygous state and no other changes in the studied regions of evaluated genes, suggesting that there could be changes in other nonevaluated regions or the monoallelic expression of DUOX2. The functional DUOX2 p.H678R SNP was identified in three patients with changes in TPO: one with p.R584Q change in homozygous state and another one with p.R584Q and p.Q660E in compound heterozygous state. These cases have the two alleles of TPO changed, justifying their IOD. A third case showed only the TPO p.Q660E mutation in heterozygous state. We speculate that the patient may present changes in regions nonevaluated or the monoallelic expression of TPO. We conclude that we defined the molecular diagnosis of four patients, that showed significant changes in evaluated genes, and that TPO p.R584Q change is functionally harmful, causing IOD

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Maternal thyroid hormones (THs) are crucial for fetal development, especially to the central nervous system. Changes in maternal THs levels during pregnancy can result in many organic disorders over the life of the offspring. We aimed to investigate the impact of the lack of maternal THs during the pregnancy in the memory, anxiety and motor function in the offspring. Hypothyroidism was induced by ad libitum administration of 0.02% methimazole (MMI) in drinking water, from 9th day of pregnancy until delivery day. At 75 and 120 postnatal day (75 and 120 PND), the offspring (males) from MMI-treated dams (OMTD) and water-treated dams (OWTD) were subjected to different tests: i. spontaneous alternation (SAT), object recognition (OR), hole board (HB), free exploration paradigm (FEP), catalepsy (CT) and open field (OF). To evaluate short term memory we used SAT and OR. State and trait anxiety were evaluated by HB and FEP, respectively. The motor function was accessed by CT and OF. Statiscal test for homoscedasticity (Levene) and normality (Shapiro-Wilks) were applied. Data with normal distribution and homoscedastic were analyzed by unpaired one sample t-test. Non-normal and non-homoscedastic data were analyzed by non-parametric Mann Whitney test. When required, two-way ANOVA followed by Bonferroni post-hoc was used. Both, SAT and OR showed that OMTD had lower short term memory. In SAT, OMTD presented lower percentage of complete alternations compared to OWTD, at 75 and 120 PND, (p<0.001; p<0.01, respectively). At 75 and 120 PND, OMTD were not able to discriminate new and old objects (p=0.26; p=0.70) in OR test. OMTD spent less time exploring both objects, but only at 120 PND, regardless of the session (p<0.01). A decreased anxiety state was evidenced in OMTD by the increased number of head-dip on the HB test, both at 75 (p<0.05) and 120 PND (p<0.05), as well as by the increase in time spent in head-dip, only at 120 PND (p<0.01). Moreover, no changes were observed on the anxiety profile of OMTD subjected to FEP in both studied ages. We also observed an increase on the cataleptic behavior on OMTD, by the greater time spent in the apparatus bar, both at 75 (p<0.05) and 120 PND (p<0.01). The ambulation on OF didn´t differed between the groups. Thus, this study demonstrated, for the first time, that the lack of maternal THs during the pregnancy reduces the short-term memory, motor function and state anxiety of offspring of rats. The increased catatonic behavior in OMTD suggests loss of motivation and/or anhedonia. / Os hormônios tireoidianos (HTs) maternos são essenciais para o desenvolvimento orgânico do feto, sobretudo na maturação do sistema nervoso central. Alterações na concentração dos HTs maternos durante a gestação podem implicar no aparecimento de distúrbios orgânicos diversos ao longo da vida da prole. O objetivo do estudo foi investigar as repercussões da carência dos hormônios tireoidianos maternos durante a gestação na memória, ansiedade e função motora na prole de ratas. O hipotireoidismo foi induzido pela administração ad libitum de metimazol 0,02% na água de beber, do 9º dia de gestação até o dia do parto. Aos 75 e 120 dias pós-natal (75 e 120 DPN), machos das proles de mães hipotireoidianas (PMH) e eutireoidianas (PME) foram submetidos aos testes de alternação espontânea (TAE), reconhecimento de objetos (RO), placa perfurada (PP), paradigma da exploração livre (PEL), teste de catalepsia (TC) e campo aberto (CA). Para avaliar memória de curto prazo foram utilizados TAE e RO. Ansiedade estado e traço foram avaliadas respectivamente pelo teste de PP e pelo PEL. A função motora foi acessada pelo TC e CA. Os dados obtidos foram analisados por meio dos testes de homocedasticidade (Levene) e de normalidade (Shapiro-Wilks). Para dados com distribuição normal e homocedásticos foram realizados os testes t de Student não pareado e de uma amostra. Dados não normais ou não homocedásticos foram analisados pelo teste não paramétrico de Mann Whitney. Quando sob influência de dois fatores de variação, os dados foram analisados por ANOVA de duas vias, seguido do pós-teste de Bonferroni. O TAE e o RO mostraram que PMH têm comprometimento da memória de curto prazo. O TAE revelou que a PMH apresentou menor porcentagem de alternações completas quando comparada a PME, tanto aos 75 quanto aos 120 dias pós-natal (DPN), (p<0,001; p<0,01, respectivamente). Aos 75 e 120 DPN, a PMH não foi capaz de discriminar o objeto novo do antigo (p=0,26; p=0,70, respectivamente) no RO. Somente aos 120 DPN se observou menor tempo total de exploração de objetos na PMH, independente da sessão (p<0,01). Menor estado ansioso foi evidenciado na PMH pelo maior número de head-dip na PP, tanto aos 75 DPN (p < 0,05) como aos 120 DPN (p< 0,05), bem como pelo maior tempo de permanência no head-dip, somente aos 120 DPN (p< 0,01). Por outro lado, não foram identificadas mudanças no perfil ansioso da PMH submetidas ao PEL em nenhuma das idades estudadas. Aumento do comportamento de catalepsia foi observado na PMH, que apresentou maior o tempo de permanência na barra do aparato, tanto aos 75 DPN (p < 0,05) quanto aos 120 DPN (p< 0,01). A ambulação no CA não diferiu entre os grupos. Assim, este trabalho demonstrou, pela primeira vez, que a carência de HTs maternos durante gestação reduz a memória de curto prazo, a função motora e a ansiedade estado da prole de ratas. O aumento do comportamento de catatonia na PMH aventa ainda a possibilidade de perda de motivação e/ou anedonia.

INTRODUÇÃO: O Hipotireoidismo congênito (HC) é uma das endocrinopatias mais frequentes em pediatria e pode causar retardo mental e do crescimento, se não for tratado precocemente. A determinação do nível do hormônio estimulador da tireoide em sangue total após o nascimento (TSHneo) constitui uma estratégia efetiva para o rastreamento de HC, embora não exista consenso em relação aos níveis considerados seguros para essa detecção. Muitos serviços utilizam os valores de corte do TSH neonatal de 10,0 e 15,0 ?UI/mL, por ensaios imunofluorimétricos. OBJETIVO: Analisar a capacidade de detecção dos casos de hipotireoidismo congênito por diferentes níveis de corte do TSH neonatal e os efeitos destes sobre o sistema de triagem neonatal para essa doença, em nascidos vivos avaliados pelo Programa de Triagem Neonatal (PTN) da rede pública do Estado de Mato Grosso (MT), de 01 de janeiro de 2010 a 31 de dezembro de 2012. MÉTODOS: Estudo de coorte, de corte transversal, com coleta retrospectiva de dados obtidos a partir do banco de dados do Serviço de Referência em Triagem Neonatal do Estado de Mato Grosso, de nascidos vivos no período 01/01/2010 a 31/12/2012 e avaliados pelo PTN-MT. Estes foram divididos em dois grupos: I. Controle: Crianças com exame de triagem neonatal normal; II. Estudo: Crianças com HC. Análise estatística incluiu o uso do teste qui-quadrado ou exato de Fischer para análise das características dos recém-nascidos entre os grupos e o teste t de Student ou não paramétrico de Mann-Whitney para análise dos níveis de TSH em sangue total de ambos os grupos e, avaliação das concentrações de TSH e T4 livre no soro, em crianças com HC. Construiu-se uma curva ROC (Receiver Operating Characteristic), para a avaliação dos pontos de corte do TSHneo. O nível de significância foi p<0,05. RESULTADOS: Entre as 111.705 crianças triadas pelo Programa, 50 tiveram o diagnóstico de HC, sob o ponto de corte do TSHneo de 5,0 ?UI/mL. A prevalência da doença foi de 1:2.234 nascidos vivos. A cobertura do Programa estadual foi de 73,9%. Para o Grupo II, os níveis do TSHneo foram superiores a 20,0 ?UI/mL em 61,4% das crianças e, os níveis de TSH no soro excederam este valor em 83,7%. A curva ROC identificou o ponto de corte do TSHneo de 5,03 ?UI/mL, como o correspondente à sensibilidade de 100% e a maior especificidade associada (93,7%). A área observada sob a curva foi de 0,9898 (p<0,0001). CONCLUSÕES: Observou-se uma cobertura inadequada do PTN-MT. O ponto de corte do TSH neonatal de 5,0 ?UI/mL, adotado pelo PTN-MT, foi confirmado pela curva ROC como o mais seguro para detectar HC e determinou a elevada prevalência da doença no Estado de Mato Grosso / INTRODUCTION: Congenital hypothyroidism (CH) is a very common pediatric endocrine disorder and can cause mental and growth retardation without early treatment. Measuring the total blood thyroid-stimulating hormone level after birth (TSHneo) is an effective screening strategy for CH, although there is not yet a consensus on the appropriate diagnostic levels. Many services use the neonatal TSH cut-off points of 10.0 and 15.0 uIU/mL per imunofluorimetric assay. OBJECTIVE: The aim of the present study was to analyze the ability of various TSHneo cutoff values to detect CH and their effects on the Newborn Screening Program (NSP) of the State of Mato Grosso (MT) from January 1, 2010, to december 31, 2012. METHODS: Cohort study, cross-sectional, based on retrospective data collection obtained from the database of the Reference Service for Neonatal Screening of the State of Mato Grosso, for all live births from January 1, 2010, to December 31, 2012, reviewed by NSP-MT. The infants were divided into two groups: I-Control: infants with normal newborn screening tests and II-Study: infants with CH. Statistical analysis included the chi-square or Fisher\'s exact test to compare the characteristics of the newborns from both groups and Student\'s t-test or the non-parametric Mann-Whitney test to analyse the total blood TSH level from both groups of infants and evaluate the serum TSH and free thyroxine (T4) concentrations in infants with CH. A Receiver Operating Characteristic (ROC) curve was constructed to assess the TSHneo cutoff values. The significance level was p < 0.05. RESULTS: Using a TSHneo cutoff value 5.0 uIU/mL, 50 out of 111,705 screened infants were diagnosed with CH. The prevalence of CH was 1:2,234 live births. The state program coverage was 73.9%. For Group II, the TSHneo levels were higher than 20.0 uIU/mL in 61.4% of infants, and the serum TSH levels exceeded that level in 83.7%. The ROC curve showed that a TSHneo cutoff value of 5.03 uIU/mL had 100% sensitivity and the greatest associated specificity (93.7%). The area under the curve was 0.9898 (p < 0.0001). CONCLUSIONS: An inadequate coverage of the NSP-MT was observed. The ROC curve confirmed that the TSHneo cutoff value of 5.0 ?IU/mL adopted by the NSP-MT was the safest for detecting CH and determined the high prevalence of disease that was found in the State of Mato Grosso

INTRODUÇÃO: O Hipotireoidismo congênito (HC) é uma das endocrinopatias mais frequentes em pediatria e pode causar retardo mental e do crescimento, se não for tratado precocemente. A determinação do nível do hormônio estimulador da tireoide em sangue total após o nascimento (TSHneo) constitui uma estratégia efetiva para o rastreamento de HC, embora não exista consenso em relação aos níveis considerados seguros para essa detecção. Muitos serviços utilizam os valores de corte do TSH neonatal de 10,0 e 15,0 ?UI/mL, por ensaios imunofluorimétricos. OBJETIVO: Analisar a capacidade de detecção dos casos de hipotireoidismo congênito por diferentes níveis de corte do TSH neonatal e os efeitos destes sobre o sistema de triagem neonatal para essa doença, em nascidos vivos avaliados pelo Programa de Triagem Neonatal (PTN) da rede pública do Estado de Mato Grosso (MT), de 01 de janeiro de 2010 a 31 de dezembro de 2012. MÉTODOS: Estudo de coorte, de corte transversal, com coleta retrospectiva de dados obtidos a partir do banco de dados do Serviço de Referência em Triagem Neonatal do Estado de Mato Grosso, de nascidos vivos no período 01/01/2010 a 31/12/2012 e avaliados pelo PTN-MT. Estes foram divididos em dois grupos: I. Controle: Crianças com exame de triagem neonatal normal; II. Estudo: Crianças com HC. Análise estatística incluiu o uso do teste qui-quadrado ou exato de Fischer para análise das características dos recém-nascidos entre os grupos e o teste t de Student ou não paramétrico de Mann-Whitney para análise dos níveis de TSH em sangue total de ambos os grupos e, avaliação das concentrações de TSH e T4 livre no soro, em crianças com HC. Construiu-se uma curva ROC (Receiver Operating Characteristic), para a avaliação dos pontos de corte do TSHneo. O nível de significância foi p<0,05. RESULTADOS: Entre as 111.705 crianças triadas pelo Programa, 50 tiveram o diagnóstico de HC, sob o ponto de corte do TSHneo de 5,0 ?UI/mL. A prevalência da doença foi de 1:2.234 nascidos vivos. A cobertura do Programa estadual foi de 73,9%. Para o Grupo II, os níveis do TSHneo foram superiores a 20,0 ?UI/mL em 61,4% das crianças e, os níveis de TSH no soro excederam este valor em 83,7%. A curva ROC identificou o ponto de corte do TSHneo de 5,03 ?UI/mL, como o correspondente à sensibilidade de 100% e a maior especificidade associada (93,7%). A área observada sob a curva foi de 0,9898 (p<0,0001). CONCLUSÕES: Observou-se uma cobertura inadequada do PTN-MT. O ponto de corte do TSH neonatal de 5,0 ?UI/mL, adotado pelo PTN-MT, foi confirmado pela curva ROC como o mais seguro para detectar HC e determinou a elevada prevalência da doença no Estado de Mato Grosso / INTRODUCTION: Congenital hypothyroidism (CH) is a very common pediatric endocrine disorder and can cause mental and growth retardation without early treatment. Measuring the total blood thyroid-stimulating hormone level after birth (TSHneo) is an effective screening strategy for CH, although there is not yet a consensus on the appropriate diagnostic levels. Many services use the neonatal TSH cut-off points of 10.0 and 15.0 uIU/mL per imunofluorimetric assay. OBJECTIVE: The aim of the present study was to analyze the ability of various TSHneo cutoff values to detect CH and their effects on the Newborn Screening Program (NSP) of the State of Mato Grosso (MT) from January 1, 2010, to december 31, 2012. METHODS: Cohort study, cross-sectional, based on retrospective data collection obtained from the database of the Reference Service for Neonatal Screening of the State of Mato Grosso, for all live births from January 1, 2010, to December 31, 2012, reviewed by NSP-MT. The infants were divided into two groups: I-Control: infants with normal newborn screening tests and II-Study: infants with CH. Statistical analysis included the chi-square or Fisher\'s exact test to compare the characteristics of the newborns from both groups and Student\'s t-test or the non-parametric Mann-Whitney test to analyse the total blood TSH level from both groups of infants and evaluate the serum TSH and free thyroxine (T4) concentrations in infants with CH. A Receiver Operating Characteristic (ROC) curve was constructed to assess the TSHneo cutoff values. The significance level was p < 0.05. RESULTS: Using a TSHneo cutoff value 5.0 uIU/mL, 50 out of 111,705 screened infants were diagnosed with CH. The prevalence of CH was 1:2,234 live births. The state program coverage was 73.9%. For Group II, the TSHneo levels were higher than 20.0 uIU/mL in 61.4% of infants, and the serum TSH levels exceeded that level in 83.7%. The ROC curve showed that a TSHneo cutoff value of 5.03 uIU/mL had 100% sensitivity and the greatest associated specificity (93.7%). The area under the curve was 0.9898 (p < 0.0001). CONCLUSIONS: An inadequate coverage of the NSP-MT was observed. The ROC curve confirmed that the TSHneo cutoff value of 5.0 ?IU/mL adopted by the NSP-MT was the safest for detecting CH and determined the high prevalence of disease that was found in the State of Mato Grosso