Desde a década de 90, uma nova família de moléculas de origem protéica e com características hormonais vem sendo estudada em plantas. Esse grupo de novas moléculas, coletivamente chamado de peptídeos hormonais, está envolvido com defesa, reprodução, crescimento e desenvolvimento. RALF, que é um desses novos peptídeos, é ubíquo em plantas e está envolvido com desenvolvimento vegetal. Em Arabidopsis existem 34 genes semelhantes ao RALF (AtRALFs). Nosso grupo mostrou que AtRALF1 é processado de um precursor maior por uma subtilase. Arabidopsis possui 56 subtilases, o objetivo deste trabalho é identificar a subtilase responsável pelo processamento do AtRALF1. Predição da localização subcelular e análise da expressão in silico, ambas confirmadas por análise da expressão por RT-PCR e fusões proteicas com a proteína verde fluorescente, permitiram reduzir para sete o número de subtilases candidatas. Cruzamentos entre mutantes nocaute ou plantas de baixa expressão por RNAi dessas sete subtilases com plantas superexpressoras do AtRALF1 identificaram as subtilases AtSBT6.1 (At5g19660) e AtSBT5.3 (At2g04160) como prováveis envolvidas no processamento do prepropeptídeo AtRALF1. / Since the 90s, a new family of molecules of protein origin and with hormone characteristics has been studied in plants. This group of new molecules, collectively named peptide hormones, is involved in defense, reproduction, growth and development. RALF, one of these peptides, is ubiquitous in plants and is involved in plant development. In Arabidopsis there are 34 RALF-like genes (AtRALFs). Our group has shown that AtRALF1 is processed from a larger precursor by a subtilase. Arabidopsis has 56 subtilases, our goal is the identification of the specific subtilase that is responsible for the AtRALF1 processing. Prediction of subcelular localization and in silico gene expression analysis, both confirmed by RT-PCR expression analysis and chimeric proteins with green-fluorescent protein, allowed the reduction of the initial 56 candidates to only 7 subtilases. Crosses between knockout mutants or RNAi plants expressing low levels of subtilases with overexpressors of AtRALF1 identified the subtilases AtSBT6.1 (At5g19660) and AtSBT5.3 (At2g04160) as potentialy involved in the prepropeptide AtRALF1 processing.

A presente dissertação parte da constatação de certa controvérsia em torno dos benefícios e malefícios da utilização de contraceptivos hormonais, o que tem levado jovens a modificar suas práticas contraceptivas por conta de algumas preocupações. Dentre esses métodos, estão os métodos baseados nos sinais primários da fertilidade, praticados enquanto uma forma de “contracepção natural” e/ou de “monitoramento da saúde” associada a um projeto feminista. Desenvolvo algumas reflexões a partir da descrição de algumas práticas discursivo-materiais relativas a essas práticas, buscando compreender seus efeitos em termos de enquadramentos de corpos/sujeitos sexuados/generificados. Em diálogo com as teorias feministas neomaterialistas sobre ciência e da tecnologia, bem como com os estudos sociais da ciência e tecnologia, realizei observações em grupos de mulheres em redes sociais dedicadas ao tema, além de entrevistas semiestruturadas, visando apreender suas práticas relativas a esse tipo de tecnologia. Além disso, a fim de evidenciar a especificidade da configuração pesquisada frente a outras que relacionam (auto)conhecimento e projetos feministas, realizo um contraste ao longo do trabalho com o movimento de autoajuda feminista presente nos Estados Unidos no fim dos anos 1960 e início dos anos 1970, a partir da mediação do trabalho da historiadora Michelle Murphy. Tendo em vista normas de gênero que associam as mulheres à reprodução e contracepção, tal trabalho revela algumas estratégias de conformação e resistência que essas relações implicam e possibilitam. Ademais, nos ajuda a entender como se dão essas articulações heterogêneas que borram fronteiras entre sexo e gênero - e natureza e cultura, dentre outras - e como as mulheres dessa geração manipulam tais categorias quando tratam de contracepção e saúde. / This dissertation starts from the finding of a controversy about the benefits and harms of the use of hormonal contraceptives, which has led worried young women to modify their contraceptive practices. Among these methods, there are the fertility awareness based methods, practiced in a form of “natural contraception” and / or “health monitoring” associated with feminist projects. It develops some reflections from the description of material-discursive practices, seeking their effects in terms of sexed bodies / gendered subjects. In dialogue with neo-materialist feminist theories on science and technology as well as with social studies of science and technology, I have observed women’s groups in social networks dedicated to the topic and performed semi-structured interviews with some of them, aiming at apprehend their practices regarding this kind of technology. Additionally, in order to evidence the specificity of the researched configuration vis-a-vis others that relate (self)knowledge and feminist projects, I contrast it with the feminist self-help movement present in the United States in the late 1960s and early 1970s, mediated by the research of the historian Michelle Murphy. Since gender norms associate women to reproduction and contraception, this work reveals some of the conformation and resistance strategies that this configuration implies and enables. Furthermore, it helps us to understand how these heterogeneous articulations that blur the boundaries between sex and gender - and nature and culture, among others – are enacted and how women manipulate these categories when dealing with contraception and health.

O estudo endócrino-reprodutivo com o uso da extração e dosagem de metabólitos de esteroides em excretas tem sido proposta como uma ferramenta extremamente útil por não ser invasiva e permitir estudos longitudinais com grande número de coletas de amostras sem produzir estresse, além de ser viável em psitacídeos. Assim, este estudo objetivou descrever e comparar as concentrações de metabólitos de glicocorticoides, testosterona, estrógeno e progesterona em excretas de ararajubas em diferentes categorias reprodutivas, com o uso de técnicas não invasivas, além de validar fisiologicamente os ensaios para dosagens desses metabólitos em excretas da espécie. Para isso, foram utilizadas 24 (vinte e quatro) ararajubas, das quais foram coletados excretas durante diferentes fases reprodutivas, sendo: sem atividade reprodutiva, em atividade de incubação de ovos e em atividade de postura de ovos. Além disso, foram feitos desafios com aplicação de ACTH e GnRH, para validação dos ensaios. Como resultados, obtivemos picos de concentração de metabólitos de glicocorticoides após aplicação de ACTH e picos de concentração de metabólitos de testosterona nos machos após aplicação do GnRH, validando fisiologicamente os ensaios para mensurar estes metabólitos hormonais; os ensaios para mensurar metabólitos de estrógeno e progesterona foram validados biologicamente. Foram observados valores semelhantes de metabólitos de glicocorticoides entre as diferentes categorias reprodutivas, porém diferentes nos metabólitos de testosterona, estrógeno e progesterona, com valores maiores durante postura (testosterona e estrógeno), e maiores na postura com relação aos animais sem atividade reprodutiva (progesterona). / The endocrine and reproductive study using the extraction and quantification of metabolites of steroids in excreta has been proposed as an extremely useful tool for being non-invasive and allow longitudinal studies with large numbers of samples collected without producing stress, and is feasible in parrots. Thus, this study aimed to describe and compare the concentrations of metabolites of glucocorticoids, testosterone, estrogen and progesterone in the excretes golden conures in different reproductive categories, with the use of non-invasive techniques, and validate physiologically assays for determination of these metabolites in the excreta species. For this, we used 24 (twenty four) golden conures, which excreta were collected during different reproductive phases, as follows: no reproductive activity, activity in the incubation of eggs and egg-laying activity. Additionally, challenges were performed with application of ACTH and GnRH for validation tests. We observed peak concentrations of glucocorticoid metabolites after administration of ACTH and peak concentrations of metabolites of testosterone in males after application of GnRH, physiologically validating assays to measure these hormone metabolites; tests to measure metabolites of estrogen and progesterone were biologically validated. Values of glucocorticoid metabolites were similar between different reproductive categories, but between metabolites of testosterone, estrogen and progesterone were different, with higher values during posture (testosterone and estrogen), and higher in posture toward animals without reproductive activity (progesterone) .

A presente dissertação parte da constatação de certa controvérsia em torno dos benefícios e malefícios da utilização de contraceptivos hormonais, o que tem levado jovens a modificar suas práticas contraceptivas por conta de algumas preocupações. Dentre esses métodos, estão os métodos baseados nos sinais primários da fertilidade, praticados enquanto uma forma de “contracepção natural” e/ou de “monitoramento da saúde” associada a um projeto feminista. Desenvolvo algumas reflexões a partir da descrição de algumas práticas discursivo-materiais relativas a essas práticas, buscando compreender seus efeitos em termos de enquadramentos de corpos/sujeitos sexuados/generificados. Em diálogo com as teorias feministas neomaterialistas sobre ciência e da tecnologia, bem como com os estudos sociais da ciência e tecnologia, realizei observações em grupos de mulheres em redes sociais dedicadas ao tema, além de entrevistas semiestruturadas, visando apreender suas práticas relativas a esse tipo de tecnologia. Além disso, a fim de evidenciar a especificidade da configuração pesquisada frente a outras que relacionam (auto)conhecimento e projetos feministas, realizo um contraste ao longo do trabalho com o movimento de autoajuda feminista presente nos Estados Unidos no fim dos anos 1960 e início dos anos 1970, a partir da mediação do trabalho da historiadora Michelle Murphy. Tendo em vista normas de gênero que associam as mulheres à reprodução e contracepção, tal trabalho revela algumas estratégias de conformação e resistência que essas relações implicam e possibilitam. Ademais, nos ajuda a entender como se dão essas articulações heterogêneas que borram fronteiras entre sexo e gênero - e natureza e cultura, dentre outras - e como as mulheres dessa geração manipulam tais categorias quando tratam de contracepção e saúde. / This dissertation starts from the finding of a controversy about the benefits and harms of the use of hormonal contraceptives, which has led worried young women to modify their contraceptive practices. Among these methods, there are the fertility awareness based methods, practiced in a form of “natural contraception” and / or “health monitoring” associated with feminist projects. It develops some reflections from the description of material-discursive practices, seeking their effects in terms of sexed bodies / gendered subjects. In dialogue with neo-materialist feminist theories on science and technology as well as with social studies of science and technology, I have observed women’s groups in social networks dedicated to the topic and performed semi-structured interviews with some of them, aiming at apprehend their practices regarding this kind of technology. Additionally, in order to evidence the specificity of the researched configuration vis-a-vis others that relate (self)knowledge and feminist projects, I contrast it with the feminist self-help movement present in the United States in the late 1960s and early 1970s, mediated by the research of the historian Michelle Murphy. Since gender norms associate women to reproduction and contraception, this work reveals some of the conformation and resistance strategies that this configuration implies and enables. Furthermore, it helps us to understand how these heterogeneous articulations that blur the boundaries between sex and gender - and nature and culture, among others – are enacted and how women manipulate these categories when dealing with contraception and health.

A presente dissertação parte da constatação de certa controvérsia em torno dos benefícios e malefícios da utilização de contraceptivos hormonais, o que tem levado jovens a modificar suas práticas contraceptivas por conta de algumas preocupações. Dentre esses métodos, estão os métodos baseados nos sinais primários da fertilidade, praticados enquanto uma forma de “contracepção natural” e/ou de “monitoramento da saúde” associada a um projeto feminista. Desenvolvo algumas reflexões a partir da descrição de algumas práticas discursivo-materiais relativas a essas práticas, buscando compreender seus efeitos em termos de enquadramentos de corpos/sujeitos sexuados/generificados. Em diálogo com as teorias feministas neomaterialistas sobre ciência e da tecnologia, bem como com os estudos sociais da ciência e tecnologia, realizei observações em grupos de mulheres em redes sociais dedicadas ao tema, além de entrevistas semiestruturadas, visando apreender suas práticas relativas a esse tipo de tecnologia. Além disso, a fim de evidenciar a especificidade da configuração pesquisada frente a outras que relacionam (auto)conhecimento e projetos feministas, realizo um contraste ao longo do trabalho com o movimento de autoajuda feminista presente nos Estados Unidos no fim dos anos 1960 e início dos anos 1970, a partir da mediação do trabalho da historiadora Michelle Murphy. Tendo em vista normas de gênero que associam as mulheres à reprodução e contracepção, tal trabalho revela algumas estratégias de conformação e resistência que essas relações implicam e possibilitam. Ademais, nos ajuda a entender como se dão essas articulações heterogêneas que borram fronteiras entre sexo e gênero - e natureza e cultura, dentre outras - e como as mulheres dessa geração manipulam tais categorias quando tratam de contracepção e saúde. / This dissertation starts from the finding of a controversy about the benefits and harms of the use of hormonal contraceptives, which has led worried young women to modify their contraceptive practices. Among these methods, there are the fertility awareness based methods, practiced in a form of “natural contraception” and / or “health monitoring” associated with feminist projects. It develops some reflections from the description of material-discursive practices, seeking their effects in terms of sexed bodies / gendered subjects. In dialogue with neo-materialist feminist theories on science and technology as well as with social studies of science and technology, I have observed women’s groups in social networks dedicated to the topic and performed semi-structured interviews with some of them, aiming at apprehend their practices regarding this kind of technology. Additionally, in order to evidence the specificity of the researched configuration vis-a-vis others that relate (self)knowledge and feminist projects, I contrast it with the feminist self-help movement present in the United States in the late 1960s and early 1970s, mediated by the research of the historian Michelle Murphy. Since gender norms associate women to reproduction and contraception, this work reveals some of the conformation and resistance strategies that this configuration implies and enables. Furthermore, it helps us to understand how these heterogeneous articulations that blur the boundaries between sex and gender - and nature and culture, among others – are enacted and how women manipulate these categories when dealing with contraception and health.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2016-06-09T14:56:06Z No. of bitstreams: 1 Sandra Maria Souza da Silva.pdf: 1116227 bytes, checksum: 547243820615bfc6e7266bb8181631ec (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-09T14:56:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sandra Maria Souza da Silva.pdf: 1116227 bytes, checksum: 547243820615bfc6e7266bb8181631ec (MD5) Previous issue date: 2013-02-14 / Cimetidine, a H2 receptor blocker parietal cell acts as xenoestrogênica substance. Chronic use produces hormonal disorders and toxicity in the male reproductive system in addition to reducing the 2-hydroxylated estradiol and increase serum levels of estradiol and prolactin in women leading to hyperprolactinemia, which may be a risk factor for cancer. The neurohormone melatonin one synthesized by the pineal gland plays a key role in reproductive function by regulating the production of estrogen, progesterone and prolactin. The study tested the hypothesis that melatonin can block or reduce the estrogenic effects of cimetidine on the uterine stromal interfering with estrogen receptors in the content of collagen and hormonal levels (estrogen, progesterone and prolactin) in adult rats. We used 45 albino rats randomly divided into three experimental groups: I rats treated with placebo (control), II rats treated with cimetidine (50mg/kg/animal) and III rats treated with cimetidine (50mg/kg/animal) associated melatonin (200μg/100g/animal) for 7, 14 and 19 days. The results revealed that cimetidine has allowed more intensive markings of estrogen receptors in animals treated for 19 days, in addition to causing higher intensity distribution of collagen fibers in the endometrium and higher serum levels of estradiol and progesterone and reduce prolactin, whereas melatonin associated with blocking these effects cimetidine. Thus, it is concluded that melatonin has cytoprotective activity of cimetidine effects on endometrial stroma reducing or preventing the increase in collagen synthesis by fibroblasts by regulating the activity of serum estradiol as well as the expression of its receptors endometrial, while maintaining normal levels of progesterone and prolactin. / O cloridrato de cimetidina, um bloqueador de receptores H2 das células parietais gástricas, que age reduzindo a secreção de ácido no estomago, tem sido estudado como substância xenoestrogênica. O uso crônico da cimetidina produz distúrbios hormonais e toxicidade no aparelho reprodutor masculino, além de reduzir o estradiol 2-hidroxilado e aumentar níveis séricos de estradiol e prolactina em mulheres levando a hiperprolactinemia, que pode ser fator de risco para o câncer. A melatonina um neurohormônio, sintetizado pela glândula pineal tem importante papelna função reprodutiva, regulando a produção de estrógeno, progesterona e prolactina. Na referida pesquisa testouse a hipótese de que a melatonina pode bloquear ou reduzir os efeitos estrogênicos da cimetidina sobre o estroma uterino interferindo nos receptores de estrógeno, no teor de fibras colágenas e nos níveis hormonais (estrógeno, progesterona e prolactina) em ratas adultas.Utilizou-se 45 ratas albinas, pesando entre 167 a 284g, foram distribuídas de forma aleatória em três grupos experimentais:i) ratas tratadas com placebo (controle);ii) ratas tratadas com cimetidina (50mg/kg/animal) e iii) ratas tratadas com cimetidina (50mg/kg/animal) associado à melatonina (200μg/100g/animal) por 7, 14 e 19 dias. Os resultados revelaram que a cimetidina permitiu marcações mais intensas de receptores de estrógenos nos animais tratados por 19 dias, além de ocasionar maior intensidade da distribuição de fibras colágenas no endométrio e maiores níveis séricos de estradiol e prolactina e redução da progesterona, enquanto que a melatonina associada à cimetidina bloqueou esses efeitos. Assim, conclui-se que a melatonina apresenta atividade citoprotetora aos efeitos da cimetidina no estroma endometrial reduzindo ou impedindo o aumento na síntese de fibras colágenas pelos fibroblastos por regular a atividade de estradiol sérico, bem como a expressão dos seus receptores endometriais, além de manter os níveis normais de progesterona e prolactina.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-11-30T11:20:19Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rodrigo Fernandes de Lima - 2015.pdf: 2077886 bytes, checksum: 41cc0e061b83ff79f5098eb054d1fcda (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-11-30T11:21:55Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rodrigo Fernandes de Lima - 2015.pdf: 2077886 bytes, checksum: 41cc0e061b83ff79f5098eb054d1fcda (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-30T11:21:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rodrigo Fernandes de Lima - 2015.pdf: 2077886 bytes, checksum: 41cc0e061b83ff79f5098eb054d1fcda (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-03-06 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The neonatal development is stimulated by various hormonal interactions. Environmental pollutants that mimic steroid hormones, such as bisphenol A (BPA) can cause changes in the pattern of development of the prostate, leading to lifelong lesions. The objective of this study was to determine whether neonatal exposure to BPA affects the development of prostate gerbils males and females. For this, the newborns were exposed to environmental levels (LBPA - 40 μ / kg / day) and high dose (HBPA - 4 mg / kg / day) of BPA, from 1st to the 7th day of life. On the eighth day, the prostatic complexes were collected and processed for morphological analysis, stereological and immunohistochemistry. It was observed through the three-dimensional reconstruction that in males the prostatic buds have elongated in a "V" form towards the ventral condensed mesenchyme (VMP). The stereological data of males showed a significant increase in the relative frequency of the mesenchymal compartment in the LBPA group compared to other groups (p ≤ 0.05). The AR-positive cells became significantly more frequent in the periurethral mesenchyme (PEM), ventral epithelial buds (VB) and muscle layer (SM) in the BPA group. There was a reduction in the frequency of PCNA-positive cells in the periurethral buds (PeB) and in the SM of the LBPA group. In females, the three-dimensional reconstruction showed that PeBs can emerge from one or both sides of the urethra and it was also visible a significant paraurethral mesenchyme (MAP) reduction in the BPA group. Only females of the HBPA group apparently presented paraurethral buds (PAB) more developed. In the LBPA group it was observed an increase in the AR-positive cells frequency in the PeM and a decrease of these cells in the PeB and mesenchyme paraurethral (PaM). In the HBPA group the AR-positive cells were more frequent in the PeM and PaB and reduced in PeB and PaM. PCNA-positive cells became significantly less frequent in the PaB and PaM of LBPA and HBPA groups. Regarding the ER-α positive cells in the group LBPA females showed a reduction in the immunoblots of PeM and MS, whereas in the group HBPA this reduction occurred only in the PaM. This study revealed that the postnatal development of the prostate of female gerbils occurs earlier and are morphologically distinct from what occurs in males of the same species. Furthermore, it can be seen that the BPA exerted a proliferative effect on the prostate gland of males and females with eight days of postnatal life, though females being more susceptible to this environmental chemicals. / O desenvolvimento neonatal é estimulado por diversas interações hormonais. Os poluentes ambientais que mimetizam hormônios esteróides, como o bisfenol-A (BPA), podem causar alterações no padrão de desenvolvimento da próstata, levando a lesões ao longo da vida. O objetivo deste estudo foi verificar se a exposição neonatal ao BPA afeta o desenvolvimento da próstata de gerbilos machos e fêmeas. Para isso, os recém-nascidos foram expostos a níveis ambientais (LBPA – 40 μ/kg/dia) e doses elevadas (HBPA – 4 mg/kg/dia) de BPA, do 1° ao 7º dia de vida. No oitavo dia, os complexos prostáticos foram coletados e processados para as análises morfológica, estereológica e imunohistoquímica. Com a reconstrução tridimensional observamos que nos machos os brotos prostáticos se alongaram em forma de “V” em direção ao mesênquima condensado ventral (VMP). Os dados estereológicos dos machos demonstraram um aumento significativo na frequência relativa do compartimento mesenquimal do grupo LBPA em relação aos demais grupos (p ≤ 0,05). As células AR-positivas tornaram-se significativamente mais frequentes no mesênquima periuretral (PeM), brotos epiteliais ventrais (VB) e camada muscular (SM) dos grupos tratados com BPA. Ocorreu uma redução na frequência de células PCNA-positivas nos brotos periuretrais (PeB) e na SM do grupo LBPA. Em fêmeas, a reconstrução tridimensional demonstrou que os PeBs podem emergir de um ou ambos os lados da uretra e também foi visível uma significativa redução do mesênquima parauretral (PaM) nos grupos tratados com BPA. Apenas as fêmeas do grupo HBPA apresentaram brotos parauretrais (PaB) aparentemente mais desenvolvidos. No grupo LBPA observou-se um aumento na frequência de células AR-positivas no PeM e uma diminuição destas células no PeB e mesênquima parauretral (PaM). No grupo HBPA as células AR-positivas tornaram-se mais frequentes no PeM e PaB, contudo sofreram redução no PeB e PaM. Células PCNA-positivas tornaram-se significativamente menos frequentes no PaB e PaM dos grupos LBPA e HBPA. Em relação às células ER-α positivas, nas fêmeas do grupo LBPA observou-se uma redução das imunomarcações no PeM e SM, enquanto que no grupo HBPA essa redução ocorreu apenas no PaM. Este estudo revelou que o desenvolvimento pós-natal da próstata de fêmeas de gerbilos é mais precoce e morfologicamente distinto do que ocorre nos machos da mesma espécie. Além disso, pode-se observar que o BPA exerceu um efeito antiproliferativo sobre a glândula prostática de machos e fêmeas com oito dias de vida pós-natal, sendo as fêmeas mais susceptíveis a este químico ambiental.

Desde a década de 90, uma nova família de moléculas de origem protéica e com características hormonais vem sendo estudada em plantas. Esse grupo de novas moléculas, coletivamente chamado de peptídeos hormonais, está envolvido com defesa, reprodução, crescimento e desenvolvimento. RALF, que é um desses novos peptídeos, é ubíquo em plantas e está envolvido com desenvolvimento vegetal. Em Arabidopsis existem 34 genes semelhantes ao RALF (AtRALFs). Nosso grupo mostrou que AtRALF1 é processado de um precursor maior por uma subtilase. Arabidopsis possui 56 subtilases, o objetivo deste trabalho é identificar a subtilase responsável pelo processamento do AtRALF1. Predição da localização subcelular e análise da expressão in silico, ambas confirmadas por análise da expressão por RT-PCR e fusões proteicas com a proteína verde fluorescente, permitiram reduzir para sete o número de subtilases candidatas. Cruzamentos entre mutantes nocaute ou plantas de baixa expressão por RNAi dessas sete subtilases com plantas superexpressoras do AtRALF1 identificaram as subtilases AtSBT6.1 (At5g19660) e AtSBT5.3 (At2g04160) como prováveis envolvidas no processamento do prepropeptídeo AtRALF1. / Since the 90s, a new family of molecules of protein origin and with hormone characteristics has been studied in plants. This group of new molecules, collectively named peptide hormones, is involved in defense, reproduction, growth and development. RALF, one of these peptides, is ubiquitous in plants and is involved in plant development. In Arabidopsis there are 34 RALF-like genes (AtRALFs). Our group has shown that AtRALF1 is processed from a larger precursor by a subtilase. Arabidopsis has 56 subtilases, our goal is the identification of the specific subtilase that is responsible for the AtRALF1 processing. Prediction of subcelular localization and in silico gene expression analysis, both confirmed by RT-PCR expression analysis and chimeric proteins with green-fluorescent protein, allowed the reduction of the initial 56 candidates to only 7 subtilases. Crosses between knockout mutants or RNAi plants expressing low levels of subtilases with overexpressors of AtRALF1 identified the subtilases AtSBT6.1 (At5g19660) and AtSBT5.3 (At2g04160) as potentialy involved in the prepropeptide AtRALF1 processing.

RALFs são peptídeos hormonais de aproximadamente 5kD que regulam negativamente o alongamento celular. Dentre suas atividades biológicas, a alcalinização do meio extracelular e a inibição do alongamento celular são tidas como associadas, pois a acidificação do meio extracelular é necessária para a expansão celular. A atividade de alcalinização e a de inibição do crescimento são medidas em dois ensaios distintos: o ensaio de alcalinização do meio extracelular de células em suspensão e o ensaio do crescimento de raiz primária de plantas jovens. Buscando-se fazer ambas as avaliações da inibição da expansão celular e da alcalinização em um único modelo de estudo, tomou-se como medida da expansão celular o volume das células decantadas (VCD). Quando o tampão MES ou o pré-tratamento com \"Fusicoccin\" foi utilizado para se atenuar o efeito de alcalinização do AtRALF1, verificou-se que o efeito de inibição do alongamento celular não sofreu alteração. Em arabidopsis são encontrados nove peptídeos RALF, que apresentam alta similaridade com o RALF original de tabaco. Com exceção do AtRALF4, todos são capazes de alcalinizar o meio extracelular e inibir raízes. A comparação da estrutura primária do AtRALF4 com os demais RALFs mostra que poucos resíduos são distintos entre eles, sugerindo que estes possam ser os determinantes das atividades de inibição e alcalinização. A alteração de um destes resíduos, AtRALF4(N92A), é capaz de restaurar a capacidade do AtRALF4 de inibir as raízes sem, no entanto, recuperar a atividade de alcalinização. Quando três outros resíduos exclusivos do AtRALF4 foram substituídos pelos seus correspondentes do AtRALF1, observa-se uma restauração parcial da alcalinização, desta vez, sem alterar a capacidade de inibir as raízes. Recentemente, foi mostrado pelo nosso grupo que o peptídeo AtRALF1 induz a expressão de genes relacionados ao rearranjo da parede celular. Quando verificado por PCR quantitativa, contatou-se que somente os peptídeos mutantes que apresentam atividade de inibição do crescimento são capazes de promover uma indução semelhante. Ainda, utilizando gel indicador de pH, verificou-se que plantas transgênicas super-expressando AtRALF1 (35S:AtRALF1) acidificam o meio durante seu crescimento de maneira semelhante a plantas selvagens. O peptídeo de defesa AtPEP1, a exemplo dos peptídeos RALF, também promove a alcalinização do meio extracelular. A utilização de drogas para reproduzir ou atenuar o efeito de alcalinização promovido por este peptídeo sugere que a expressão dos genes responsivos a AtPEP1 também não está relacionada à alteração na atividade das próton-ATPases. Finalmente, quando mutantes para ambos os receptores de AtPEPs foram utilizados (atpepr1/r2) em gel indicador de pH, verificou-se que estes alcalinizam o pH da rizosfera na presença do peptídeo. Nossos dados somados sugerem uma dissociação das atividades biológicas de alcalinização do meio extracelular e de inibição da expansão celular. A alteração na atividade das próton-ATPases pode não ser apenas uma mensagem secundária do efeito biológico, mas sim outra fonte de informação independente e ainda pouco explorada como tal. / RALFs are 5kD peptide hormones that negatively regulates cell expansion. Among the biological activities of the RALF peptide, the extracellular alkalinization and cellular expansion inhibition were previously suggested to be associated, once the extracellular acidification is required to cell expansion. Usually, the alkalinization and cell expansion inhibition activities are evaluated in two different assays, the cell suspension medium alkalinization and the plantlet root growth inhibition. We manage to set an assay in which both cell expansion inhibition and extracellular alkalinization activities could be evaluated. Using the package suspension cell volume through decantation as a value of cell expansion, we evaluated the relation between alkalinization and cell expansion inhibition in different conditions. When the MES buffer or the pre-treatment with Fusicoccin was used to arrest the AtRALF1 extracellular alkalinization, the package cell volume inhibition activity was not affected. There are 9 RALF peptides encoded in arabidopsis plants that are closely related with the first isoform isolated from tobacco. With exception of the AtRALF4, all those isoforms are able to alkalinize the extracellular medium and arrest root growth. Comparing the AtRALF4 with other eight isoforms, we verified that are few different amino acids between them, suggesting that those amino acids could be essential for the biological activities. The rescue of one of those amino acids, AtRALF4(N92A), was able to regain the root growth inhibition activity of the AtRALF4 peptide, although the extracellular alkalinization activity was not restored. When three other AtRALF4 amino acids were substituted by their AtRALF1 correspondent, there is a partial rescue of the extracellular alkalinization activity, but no alterations in the root growth inhibition. We had recently shown that the AtRALF1 peptide induces the expression of genes related to cell wall rearrangement. The quantitative PCR analyses demonstrates that only the mutant peptides that are able to arrest root growth are also able to induce the gene expression. When submitted to a pH indicator, it was verified that AtRALF1 overexpressing plants acidifies it during its growth, as much as wild type plants.The defense peptide AtPEP1, similarly of AtRALF1, also triggers extracellular alkalinization. The use of proton-pump chemical modulators to simulate or arrests AtPEP1 extracellular alkalinization activity suggests that the gene expression of the AtPEP1-responsive genes is not related to changes in plasma membrane proton pump activity. Finally, when double mutants for both the AtPEP1 receptors (atpepr1/r2) were submitted to a pH gel indicator, it was seen that they alkalinize the rhizosphere pH in the presence of the AtPEP1 peptide. Our data suggests that the extracellular alkalinization and arrest of cell expansion activities are dissociated. The proton pump modulation activity may not be only a secondary messenger, but another source of information independent and yet to be explored.

RESUMO STOCCO, B. Avaliação do efeito de contraceptivos hormonais sobre a hemostasia. 2011. 92f. Dissertação (Mestrado). Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2011. Introdução: Mais de 100 milhões de mulheres no mundo fazem uso de métodos contraceptivos hormonais. Apesar de seu desejado efeito na contracepção, sua metabolização ocorre no fígado estimulando a síntese de proteínas plasmáticas, dentre elas, as que controlam os sistemas de coagulação e fibrinólise, conferindo um estado de hipercoagulabilidade em suas usuárias. A literatura aponta também alterações no metabolismo dos lipídios e carboidratos, além de modular a expressão de moléculas de adesão presentes no endotélio. Para combater os efeitos indesejáveis destes medicamentos, baixas concentrações de estrógenos e diferentes progestágenos foram introduzidos, pois, a estes últimos é conferida a atividade anti estrogênica destas formulações. Estudos independentes sugerem que progesteronas de terceira e quarta geração possuem atividade anti-estrogênica menor em relação as de segunda geração. Objetivos: avaliar a ocorrência de alterações hemostáticas, analisar o perfil lipídico e quantificar moléculas de adesão no soro ou plasma da população feminina brasileira usuária de contraceptivos orais de segunda e quarta gerações. Materiais e Métodos: 70 participantes distribuídas em quatro grupos a saber : grupo I (controle- 20 pacientes); grupo II (DRSP/30EE- 20 pacientes); grupo III (DRSP/20EE- 16 pacientes) e grupo IV (LNG/30EE-14 pacientes). Foram avaliados os seguintes parâmetros: TP, Fator VII, TTPA, Fator XII, Fibrinogênio, Fator 1+2, Proteína C, Proteína S, Antitrombina, D dímeros, PAI 1, VCAM, ICAM, E- selectina, HDL, LDL,VLDL, Colesterol total e Triglicérides. Resultados e discussões: grupo II promoveu diminuição em TP e Prot. S; e aumento em HDL,VLDL,Col. total e TG; grupo III diminuiu TP, TTPA, Prot.S, ICAM e VCAM ; e aumentou Fibrinogênio, D-dímeros, HDL,VLDL,Col. total e TG e grupo IV diminuiu TP, Prot.C e aumentou ICAM e VCAM. Conclusões: Dos medicamentos estudados apontamos que: o grupo II promoveu alterações significativas no perfil lipídico caracterizando um estado pró-trombótico, apesar de apresentar o maior aumento nos valores de HDL e poucas alterações associadas à hipercoagulabilidade; o grupo III promoveu o maior número de alterações hipercoagulantes, alterou também perfil lipídico contribuindo para um estado pró- trombótico, embora tenha apresentado proteção endotelial e o grupo IV foi o medicamento que promoveu melhor proteção endotelial, não alterou perfil lipídico e ocasionou poucas alterações associadas à hipercoagulabilidade / Introduction: More than 100 million women in the world make use of hormonal contraceptives. In spite of its desired effect on contraception, its metabolization occurs at liver, estimulating the synthesis of the plasmatic proteins, among them, the ones that control the coagulation system and fibrinolysis, confering a hypercoagulability state in their users. The literature also points changes in the metabolism of lipids and carbohydrates, besides modulate the expression of adhesion molecules present in the endothelium. Trying to combat undesirable effects of these drugs, low concentrations of estrogen and different progestogens were introduced, because, the antiestrogenic activity of these drugs is assigned to the progesterone used. Independent papers suggest that third and fourth generation progesterones have a smaller antiestrogenic activity in relation to the second generation one. Objectives: evaluate the occurrence of hemostatic alterations, analyze the lipid profile and quantify adhesion molecules in serum or plasma on the Brazilian female population who is user of contraceptives from second and fourth generation. Material and Methods: 70 participants were distributed into four groups: group I (control- 20 patients); group II (DRSP/30EE- 20 patients); group III (DRSP/20EE- 16 patients) and group IV (LNG/30EE- 14 patients). From these were assessed the following parameters: PT, Factor VII, APTT, Factor XII, Fibrinogen, Factor 1+2, Protein C, Protein S, Antithrombin, Ddimmers, PAI 1,VCAM, ICAM, E- selectin, HDL, LDL, VLDL, Total Cholesterol and Triglycerides.Results and discussion: group II promoted a decrease in PT and Prot.S; and an increase in HDL,VLDL, Total cholesterol and TG; group III decreased PT, APTT, Prot.S, ICAM and VCAM ; and increased Fribrinogen, D- dimers, HDL,VLDL,Total Cholesterol and TG and group IV decreased PT, Prot.C and increased ICAM and VCAM.Conclusions: among the drugs studied we aim that: the group II promoted significant changes in lipid profile featuring a pro- thrombotic state, in spite of presented the highest increase in the levels of HDL and few alterations associated to hypercoagulability; group III promoted the biggest number of hypercoagulability alterations, this drug also changed the lipid profile contributing to a pro-thrombotic state, although it has presented endothelial protection and the group IV it was the drug that promoted the best endothelial protection, did not change lipid profile and caused few alterations associated with hypercoagulability