Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-11-27T17:22:07Z No. of bitstreams: 1 Andréa Mendes Pereira Ativação de celulas... 2006.pdf: 40276494 bytes, checksum: 9f4656b98e4c74bae9c81e7797e85988 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-27T17:22:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Andréa Mendes Pereira Ativação de celulas... 2006.pdf: 40276494 bytes, checksum: 9f4656b98e4c74bae9c81e7797e85988 (MD5) Previous issue date: 2006 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / Visando avaliar futuramente o potencial de citocinas na indução de resposta imune celular específica do tipo ThI quando associadas a antígeno(s) recombinante(s) de Leishmania chagasi/infantum no cão, a combinação de IL-2 e IL-12 caninas recombinantes é analisada no presente trabalho. Aqui, descrevemos a clonagem do DNA complementar (cDNA) e, pela primeira vez, a expressão de IL-2 canina recombinante biologicamente ativa em Escherichia coli e por células de mamífero. Para expressão em E. coli, utilizou-se a construção pRSET-calL- 2, anteriormente gerada por nosso grupo. Para expressão em células de mamíferos, foi realizada a clonagem do cDNA de IL-2, sintetizado por reação de transcrição reversa seguida de reação da polimerase em cadeia (RT-PCR) a partir do RNA total de células mononucleares do sangue periférico (CMSP) de cão estimuladas com concanavalina A (Con-A), no vetor pcDNAS.l, gerando a construção pcDNA3.1-caIL-2. O sucesso da clonagem em ambos os vetores de expressão foi confirmado a partir do sequenciamento de DNA e comparação dos resíduos de nucleotídeos com a seqüência de IL-2 canina previamente descrita por outro grupo de investigadores. A IL-2 canina recombinante (rcaIL-2) foi obtida como proteína de fiisão contendo cauda de histidina a partir da transformação de E. coli BL21(DE3)pLysS com pRSET- caIL-2, purificada por cromatografia de afinidade e renaturada por diálise. Além disso, a forma nativa de rcaIL-2 foi secretada no sobrenadante de cultura de células COS-7 transfectadas com a construção pcDNA3.1-caIL-2. A atividade proliferativa de rcaIL-2 sobre células CTLL-2 foi demonstrada em concentrações de até 220 pg/mL da citocina purificada a partir da expressão em E. coli e até a diluição de 1:256 do sobrenadante de COS-7 contendo rcaIL-2. A proteína biologicamente ativa foi capaz de manter a proliferação de CMSP de cães sadios por até 12 dias de cultivo quando as células foram tratadas com 50 ng/mL de IL-2 canina obtida de E. coli e por 10 dias com diluições de até 1:200 do sobrenadante de COS-7 contendo a citocina, na ausência de estímulo prévio ou concomitante. A proliferação foi dose-dependente, com ponto máximo ocorrendo no 8° dia de cultivo. A produção de interferon gama (IFN-y) por CMSP de cães sadios estimuladas com sobrenadante de COS-7 contendo IL-2 ou contendo IL-12 não foi significantemente maior que a produção basal. No entanto, um efeito sinérgico sobre a produção in vitro de IFN-y ocorreu quando concentrações subótimas de ambas as citocinas foram associadas. Diante dos resultados obtidos, a construção pcDNA3.1-caIL-2 e ambas as formas de IL-2 canina recombinante obtidas, assim como as condições experimentais aqui descritas, poderão ser utilizadas no futuro para o estudo do potencial de IL-2, associada ou não a IL-12, como modulador da resposta imune in vitro e in vivo de cães, durante o desenvolvimento de uma vacina ou imunoterapia para leishmaniose visceral canina. / Aiming to study in the fiiture the role of cytokines in inducing specific ThI cellular immune response when associated to Leishmania chagasi/infantum recombinant antigen(s) in dogs, the combination of recombinant canine IL-2 and IL-12 is analysed in the present study. Herein, we describe complementary DNA (cDNA) cloning and, for the first time, the expression of biologically active recombinant canine IL-2 in Escherichia coli and mammal cells. The construction pRSET-caIL-2, previously generated by our group, was used for E. coli expression. For mammalian expression, canine IL-2 cDNA was synthesized by reverse transcription followed by polymerase chain reaction (RT-PCR), using cDNA from a healthy dog’s peripheral blood mononuclear cells (PBMC) stimulated with concanavalin A (Con-A) and cloned into pcDNA3.1, generating the construction pcDNA3.1-caIL-2. Success in canine IL-2 cDNA cloning was accessed in both expression vectors by DNA sequencing and was confirmed by comparing nucleotides residues with canine IL-2 sequence previously described by other investigators. Recombinant canine IL-2 (rcaIL-2) was expressed as His-tag fiision protein after E. coli BL21(DE3)pLysS transformation with pRSET-caIL-2, purified by affinity chromatography and renatured through dialysis. In addition, the native form was secreted in culture supematants of pcDNA3.1-caIL-2 transfected COS-7 cells. A proliferative activity was demonstrated in CTLL-2 cells when the recombinant protein was diluted at 220 pg/mL of purified cytokine from E. coli expression or when COS-7 supernatant was diluted at 1:256. The biologically active protein was able to induce proliferation of PBMC of six healthy dogs until 12 days of culture when cells were treated with 50 ng/mL of E. coli expressed-IL-2 or until 10 days when treated with 1:200 COS-7 supernatant dilution containing the cytokine, without previous or concomitant stimulus. The proliferative effect was dose-dependent and maximum at 8th day of culture. Interferon-gamma (IFN-y) production by PBMC of eight healthy dogs induced by COS-7 IL-2 or IL-12-containing supematants was not significantly higher than the baseline production. However, the association of suboptimal concentrations of both cytokines induced synergistic effect upon in vitro IFN-y production by PBMC. Based on the presented results, the construction pcDNA3.1-caIL-2 or both recombinant protein forms obtained, as well as the experimental conditions described here, can be used in the future to evaluate the potential role of IL-2, associated or not to canine IL-12, as a modulator of in vitro and in vivo immune response of dogs during the development of a vaccine or immunotherapy for canine visceral leishmaniasis.

Made available in DSpace on 2015-10-06T13:03:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-21. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:18:20Z : No. of bitstreams: 1 000848977.pdf: 1255909 bytes, checksum: e72eb452aeeef227b5ad181b4d572e4f (MD5) / Leishmaniasis are protozoan zoonotic diseases transmitted in the Americas by female sandflies of the genus Lutzomyia infected by Leishmania infantum chagasi during blood feeding. Although dogs are well established as the main reservoirs for the disease in urban areas, various reports of cats naturally infected worldwide may indicate an important role of this species in the disease cycle. Since the detection of circulating antibodies in infected cats is difficult, and infected cats in endemic areas are reportedly less likely to develop clinical signs when compared to dogs, this study aimed to evaluate cats living in endemic area by means of parasitological and serological (ELISA and IFAT), real time PCR and Montenegro skin test (MST), in order to use the later test to identify infected cats that did not develop antibody titers or clinical signs of the disease. For this purpose, 96 adult cats, regardless of sex, symptomatic or asymptomatic, from Araçatuba, São Paulo, were evaluated. Considering the results of qPCR and/or parasitological examination, the prevalence of infection in the evaluated population was 55.21% (53/96). Of the infected cats, 58.49% (31/53) were asymptomatic, 62.26% (33/53) females and 41.51% (22/53) aged between 1 and 3 years (p = 0.0002). Most of the infected cats had low antibody titers (37/53, 69.81%) and showed no clinical alterations (24/37, 64.86%). Only two (2.08%) were seroreactive by IFAT with titers of antibodies equal to 1:40. All 96 cats showed negative to MST with leishmanin of L. infantum chagasi (4.107 parasites/mL). Of these, 11 cats were selected and just one was positive to MST with leishmanin of L. (L.) amazonensis (107 parasites/mL). These findings indicate that qPCR demonstrated efficacy and should be used for visceral leishmaniasis diagnosis in cats and the MST, in the conditions in which it was tested, does not constitute a tool for identifying cats infected by L. infantum chagasi

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-22Bitstream added on 2014-06-13T20:44:56Z : No. of bitstreams: 1 penhafilho_rac_dr_jabo.pdf: 670109 bytes, checksum: 048e4ba89a0df3d41f36db27a93c0f9b (MD5) / Salmonella Enteritidis (SE) causa doença transmitida por alimentos (DTA) em humanos. Carne de frango e ovos frequentemente estão associados a esses casos. O controle da infecção em aves, baseia-se em medidas de biossegurança, incluindo-se a vacinação. Tem sido comum a utilização de vacinas vivas (VV) e inativadas (Bacterinas - BA), porém pouco se sabe sobre os mecanismos imunes desencadeados pelas vacinas contra SE. Neste estudo, utilizaram-se quatroprogramas vacinais (VV; VV+VV; BA; VV+BA) em galinhas leves de variedade branca para postura de ovos de mesa, vacinadas com 5 e/ou 25 dias de vida, e desafiadas aos 45 dias de vida com SE. No dia anterior à infecção (1 DAI) e 1, 6 e 9 dias pós-infecção (DPI), cinco aves/grupo foram sacrificadas para amostragem. A população de linfócitos CD4+ e CD8+ foi avaliada por imuno-histoquímica em tonsilas cecais e fígado; citocinas foram quantificadas por RT-qPCR em tempo real em tonsilas cecais e baço; níveis de IgG e IgM foram mensurados por ELISA no soro e IgA em lavado intestinal. Os níveis de imunoglobulina (IgG, IgM e IgA) estavam significativamente mais altos em aves vacinadas com BA, do 1 DAI ao 9 DPI, em comparação aos grupos vacinados somente com VV. Os níveis de IFN-γ, na tonsila cecal, eram similares em todos os grupos após o desafio. Antes do desafio (1 DAI), IL-10 foi altamente expressa em baço de aves que receberam somente BA (25 dias de vida), sugerindo o desenvolvimento de resposta por linfócitos T CD4+ auxiliar 2 (Ta2), reforçado pelos altos níveis de IgG encontrados neste grupo (p<0.05). Os níveis de TGF-β4 e das citocinas pró-inflamatórias IL-6 e TNFSF15 eram bastante elevados no grupo que recebeu VV+VV. A vacinação por via oral com VV aumentou significativamente o fluxo de linfócitos T CD8+ para as tonsilas cecais após o desafio. Isso poderia... / Salmonella Enteritidis (SE) causes foodborne infection in humans. Poultry meat and eggs are frequently associated with these cases. The control of this bacterium is based on sanitary measures and mainly, vaccination of chicken flocks. Vaccine programs are used worldwide to control SE in poultry flocks. Live (LV) and killed vaccines (KV) are often combined, although few studies regarding immune mechanisms developed by SE vaccines are available. In this work, four vaccine programs were studied (LV; LV+LV; KV; LV+KV) in white layer-hens vaccinated at 5 and/or 25 days-old and challenged at 45 days-old with SE. At 1 day before (dbi) and 1, 6 and 9 days post-infection (DPI), five birds/group were sacrificed for sampling. The population of CD4+ and CD8+ T cells was evaluated by immunohistochemistry in caecal tonsils and liver, cytokines were quantified by real time RT-qPCR in caecal tonsils and spleen; IgG, IgM and IgA levels were measured by ELISA in serum and the latter in intestinal washes. The immunoglobulin levels (IgG, IgM and IgA) were significantly higher in birds vaccinated with KV, from 1 dbi to 9 DPI, than in groups that received only LV. In caecal tonsils, IFN-γ levels were similar in all groups after challenge. Before challenge (1 dbi), IL-10 was highly expressed in spleen of birds that received only KV (25 days-old), suggesting the development of the T CD4+ helper 2 (Th2) type of immune response, reinforced by high IgG levels against SE seen in this group (p<0.05). TGF-β4 and the proinflammatory cytokines IL-6 and TNFSF15 were higher in caecal tonsils in the group that received LV+LV. Vaccination by oral route with LV clearly increased the influx of CD8+ T cells in caecal tonsils after challenge. This could be correlated with the better control of SE noticed in groups that received at least one dose of LV, including... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-05-21Bitstream added on 2015-04-09T12:47:39Z : No. of bitstreams: 1 000814747.pdf: 821876 bytes, checksum: d4d584e2c4157af6634d7bbf44844fa4 (MD5) / O tifo aviário é uma doença sistêmica causada por Salmonella enterica subesp. enterica sorovar Gallinarum biovar Gallinarum (SG). Esta bactéria é altamente patogênica para aves em qualquer idade, causando mortalidade inclusive em aves adultas. No entanto, a progressão dos sinais clínicos em galinhas pode diferir entre as diferentes variedades de aves. Aves de variedade branca são consideradas mais resistentes e dificilmente se observa mortalidade. Aves de variedade vermelha são suscetíveis e desenvolvem quadros clínicos mais severos com altas taxas de mortalidade. O objetivo do presente estudo foi avaliar o desenvolvimento da doença e infiltrado de linfócitos T γδ durante a infecção por SG em diferentes variedades de aves. Neste trabalho, utilizaram-se 50 aves comerciais para postura de variedade branca e 60 aves comerciais para postura de variedade vermelha que foram distribuídas em quatro grupos: grupo A (controle de aves brancas), grupo B (aves brancas infectadas), grupo C (controle de aves vermelhas) e grupo D (aves vermelhas infectadas). As aves dos grupos B e D foram desafiadas aos 30 dias de vida com SG. Às 6 horas pós-infecção (6 hpi) e 1, 3 e 5 dias pós-infecção (dpi), três aves/grupo foram eutanasiadas para amostragem. A população de linfócitos T γδ foi avaliada por imuno-histoquímica em tonsilas cecais e fígado; citocinas foram quantificadas por RT-qPCR em tempo real em tonsilas cecais e baço e amostras de sangue para análises bioquímicas séricas. As lesões macroscópicas foram mais intensas nas aves do grupo D, a partir do 3º dpi, em comparação com as aves do grupo B. As contagens bacterianas no baço e fígado tiveram maiores quantidades nas aves do grupo D no 3° e 5° dpi. Após o 6° dpi, as aves do grupo D começaram a sucumbir ao tifo aviário, diferente das aves do grupo B, que não apresentaram nenhuma mortalidade. Aves do grupo B tiveram maiores quantidades das proteínas ... / The fowl typhoid is a systemic disease of chickens caused by Salmonella enteric subsp. enteric serovar Gallinarum biovar Gallinarum. This bacterium is highly pathogenic for chickens at any age, causing mortality even in adult birds. The progress of clinical signs differs among different lines of chickens. White lines of chickens are considered resistant and hardly mortality is observed. Chickens of brown lines are more susceptible and develop severe clinical signs with high mortality rates. The aim of this study was to evaluate the development of the disease and γδ T cells influx during the infection with SG in different varieties of layer-hens. In this study, 50 commercial layer-hens of white lines were used and 60 commercial layer-hens of brown lines were divided into 4 groups: group A (control for white layers), group B (infected white layers), group C (control for brown layers) and group D (infected brown layers). Chickens in groups B and D were challenged at 30 days-old with SG. At 6 hours post-infection (6 hpi) and 1, 3 and 5 days post-infection (dpi), three hens per group were sacrificed for sampling. The population of γδ T cells was evaluated by immunohistochemistry in caecal tonsils and liver; cytokines were quantified by real time RT-qPCR in caecal tonsils and spleen and samples of serum were used for biochemistry analysis. The macroscopic lesions were more intense in the hens of group D, at 3 dpi, in comparation with the group B. The bacterial numbers in spleen and liver from chickens in the group D were higher at 3 and 5 dpi. After 6 dpi, the mortality caused by fowl typhoid, began in group D. Differently, group B had no mortality. The group B had higher amounts of the proteins ceruloplasmin, albumin and α1- acid glycoprotein, in comparation to group D, but did not show statistical difference (p>0.05). The protein levels PM=99.000 Da, PM=90.000 Da and transferrin were significantly higher in group B (p<0.05) at ...

Made available in DSpace on 2014-08-27T14:36:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-27Bitstream added on 2014-08-27T15:57:19Z : No. of bitstreams: 1 000777542.pdf: 3582573 bytes, checksum: 9ab819f44a28c132e77dd5a3505a269c (MD5) / Immunostimulants have been used as alternative to prevent disease outbreaks in fish farm. Products derived from Aloe vera are popular around the world due to their medicinal properties, including immunostimulatory, and represent potentially an inexpensive alternative for the control of fish diseases. The purpose was to evaluate A. vera effects in stress and innate immune responses of pacu (Piaractus mesopotamicus), fish of economic value in Brazilian farming. Fish were fed, for 10 days, with four diets: control diet, and diets with 5 g kg-1 (0.5%), 10 g kg-1 (1%) and 20 g kg-1 (2%) of A. vera. Thereafter, fish were transported for 4 hours (166 g L-1) (Experiment 1) and then experimentally infected with Aeromonas hydrophila or injected with PBS buffer (sham), by intraperitoneal via (IP) (Experiment 2). Fish were sampled at the initial condition (before transport, n=10), transport arrival (n=11), 12 and 24 hours after transport without IP (Recovery; n=8) and also at 12 and 24 hours after transports with IP (Challenge; A. hyd. or PBS, n=8). Transport increased the cortisol and glucose levels and reduced the leukocyte respiratory burst (LRB) and hemolytic activity of alternative complement pathway (ACH) of control fish, while A. vera prevented the LRB and ACH reduction at arrival. Serum lysozyme concentration (SLC) increased at 24 h after transport in A. vera infected fish. LRB, SLC and ACH of fish feeding A. vera (2%) were significantly higher, 24 h after the bacterial infection, than in control fish. A. vera enhanced the innate immune responses tested in pacu and reinforces the possibility for medicinal herbs added to fish food as an alternative method to prevent diseases in fish

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Núcleo de Medicina Tropical, 2015. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2015-10-22T19:18:29Z No. of bitstreams: 1 2014_LucianadeMagalhãesLeite.pdf: 1270360 bytes, checksum: f9582b45977ddfcb93b63a0232a75246 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2015-10-23T13:57:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_LucianadeMagalhãesLeite.pdf: 1270360 bytes, checksum: f9582b45977ddfcb93b63a0232a75246 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-23T13:57:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_LucianadeMagalhãesLeite.pdf: 1270360 bytes, checksum: f9582b45977ddfcb93b63a0232a75246 (MD5) / As leishmanioses representam um complexo de doenças com uma importante diversidade clínica e epidemiológica. A Leishmaniose Visceral Canina (LVC) é uma zoonose endêmica no Brasil, anteriormente restrita a áreas rurais, mas, recentemente tem ocorrido expansão no processo de urbanização da Leishmaniose Visceral. A imunidade inata participa dos mecanismos de defesa contra a leishmânia e ainda está pouco compreendida na leishmaniose canina. O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta imunitária inata dos fagócitos de cães naturalmente infectados por Leishmania spp. em comparação com cães normais, pela avaliação da fagocitose e capacidade de produzir moléculas microbicidas. Foram utilizados 30 cães, sem raça definida, maiores que um ano de idade, sendo 22 cães machos e 8 fêmeas, que foram distribuídos em dois grupos: 15 cães não infectados utilizados como controle normal e 15 cães naturalmente infectados pela Leishmania spp. Foram feitos o exame clínico, o hemograma e os testes bioquímicos. Foram avaliadas a fagocitose de Saccharomyces cerevisiae pelos neutrófilos e monócitos do sangue periférico, pelos receptores para padrões moleculares de patógenos e pelos receptores para opsoninas. A produção de ânions superóxido foi avaliada pelo teste do NBT, a produção de peróxido de hidrogênio pela oxidação do vermelho neutro na presença de peroxidase e a produção de óxido nítrico foi quantificada pela presença de nitrito no sobrenadante das culturas utilizando reagente de Griess, estimuladas ou não com LPS. Os cães com leishmaniose apresentaram os seguintes sinais clínicos característicos da doença: alopecia (33%), descamação (46%), úlcera na pele (20%), onicogrifose (26%), caquexia (46%), linfoadenomegalia (40%), ceratoconjuntivite (53%). Os cães com leishmaniose apresentaram anemia normocrômica e normocítica, plaquetopenia e leucopenia, com neutrofilia relativa e desvio à esquerda. Os cães com leishmaniose apresentaram diminuição da atividade sérica da alanina aminotransferase (ALT) em relação a cães normais. Não foram observadas diferenças na concentração sérica da creatinina. As proteínas totais (PT) mostraram-se aumentadas em cães com leishmaniose as custas do aumento das globulinas, sendo que não houve diferença na concentração sérica de albumina entre cães com leishmaniose e cães normais. Cães com leishmaniose apresentaram menor capacidade fagocitária pelos neutrófilos do que cães normais quando avaliados pelos r eceptores para padrões moleculares de patógenos. A fagocitose facilitada por opsoninas mostrou que o número de leveduras ingeridas por neutrófilo foi maior em cães com leishmaniose em relação aos controles normais. Não houve diferença entre a capacidade fagocitária pelos monócitos de cães com leishmaniose e cães controle normal quando avaliados pelos receptores para padrões moleculares de patógenos, nas proporções de 5 ou 20 leveduras não sensibilizadas por monócito. Monócitos de cães com leishmaniose apresentaram maior capacidade fagocitária em comparação aos de cães normais, quando avaliados pelos receptores para opsoninas, tanto na proporção de 5 quanto na proporção de 20 leveduras sensibilizadas por monócito. A porcentagem de redução do NBT basal pelos fagócitos de cães com leishmaniose foi menor do que a dos cães controle. Quando utilizamos a concentração de 5 μg/mL de LPS, observamos que cães controles normais apresentaram um aumento da produção de óxido nítrico em relação aos cães controles normais. Entretanto, nos cães com leishmaniose houve diminuição na produção de óxido nítrico quando estimulados com 5 μg/mL de LPS em relação a sua produção basal. Observamos maior produção basal de peróxido de hidrogênio pelos cães com leishmaniose. Nossos resultados mostraram que há uma deficiência dos neutrófilos de cães com leishmaniose tanto na fagocitose quanto na produção de moléculas microbicidas, como os ânions superóxido. Entretanto, os monócitos desses cães embora apresentem uma maior capacidade fagocitária do que os cães normais, mostram uma menor capacidade de produzir óxido nítrico, que é uma das principais moléculas microbicidas para as leishmânias. Estas alterações do sistema imunitário inato podem favorecer o escape do parasito do sistema imunitário do hospedeiro, assim perpetuando sua sobrevivência. Ademais, o aumento da produção de peróxido de hidrogênio pelos monócitos, pode estar contribuindo para restringir em parte a multiplicação do parasito, mas o seu excesso pode também estar contribuindo nos mecanismos de imunopatogenia. Nossos dados contribuem para uma maior compreensão dos mecanismos de defesa da imunidade inata e da imunopatogenia da leishmaniose em cães e podem contribuir para a busca de novos alvos para drogas imunomoduladoras que possam auxiliar no tratamento contra a leishmaniose. ______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Leishmaniasis represent a complex disease with a significant clinical and epidemiological diversity. The Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) is a zoonosis endemic in Brazil, previously restricted to rural areas, but recently there has been expansion in the urbanization process of Visceral Leishmaniasis. Innate immunity participates in the defense mechanisms against Leishmania and is still poorly understood in canine leishmaniasis. The objective of this study was to evaluate the innate immune response of phagocytes of naturally infected dogs to Leishmania spp. compared to healthy dogs, and to evaluate phagocytosis and microbicide molecule production by phagocytes. Thirty dogs, mixed breed, higher than one year old, 22 males and 8 females, were separated into two groups: 15 uninfected dogs used as healthy control, 15 dogs naturally infected by Leishmania spp. The clinical examination, the blood cell count and biochemical tests were assessed. Phagocytosis of Saccharomyces cerevisiae by neutrophils and monocytes were assessed through pathogen-associated molecular pattern and opsonin receptors. The production of superoxide anions was assessed by the NBT test. Hydrogen peroxide production was evaluated by neutral red oxidation and nitric oxide production by the Griess reagent, with or without LPS. Leishmania infected-dogs showed the following clinical characteristics: alopecia (33%), peeling (46%), skin ulcers (20%), onychogryphosis (26%), cachexia (46%), lymphadenopathy (40%), keratoconjunctivitis (53%). Leishmania infected-dogs showed normochromic and normocytic anemia, thrombocytopenia and leukopenia with neutrophil relative increment and a left shift. Leishmania infected- dogs showed decreased serum activities of alanine aminotransferase (ALT) compared to healthy control. No differences were observed in serum creatinine. The total protein (TP) was increased in Leishmania infected-dogs due to an increase in globulins, and there was no difference in serum albumin concentration between dogs with leishmaniasis and healthy controls. Leishmania infected-dogs showed lower phagocytic capacity by neutrophils than healthy dogs when evaluated by pathogen-associated molecular pattern receptors. Phagocytosis facilitated by opsonins showed that the number of ingested yeast per neutrophil was higher in Leishmania infected-dogs when compared to healthy controls. There was no difference between the phagocytic capacity of monocytes by Leishmania infected-dogs and healthy control when evaluated by pathogen-associated molecular pattern receptors. Monocytes from leishmaniasis animals showed higher phagocytic capacity when compared with healthy dogs, as assessed by the opsonin receptors. NBT percent reduction was lower in leishmaniasis than control dogs. When the concentration of 5 mg / mL of LPS was use, it was observed that healthy control dogs showed an increase in nitric oxide production when compared to control dogs. However, in dogs with leishmaniasis decreased nitric oxide production was observed when monocytes were stimulated with 5 / ml LPS. Higher baseline production of hydrogen peroxide by dogs with leishmaniasis was observed. Our results showed that there is a deficiency in neutrophils of Leishmania infected-dogs, both to phagocytosis as production of microbicidal molecules, such as superoxide anions. However, monocytes from leishmaniasis animals showed a higher phagocytic capacity than healthy dogs, showed a decreased capability to produce nitric oxide, which is a major microbicides molecule to Leishmania. These changes in innate immune system may favor the parasite scape from host immune system, thus maintaining their survival. In addition, the increased production of hydrogen peroxide by monocytes may contribute to impair the growth of parasites, but its excessive production may contribute to the immunopathogenesis of the disease. Our data contribute to enhance the understanding of the defense mechanisms of innate immunity and the immunopathogenesis of the disease in dogs. This knowledge may contribute as new targets for immunomodulatory drugs improving treatment against leishmaniasis.

Dissertação de mestrado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde para a obtenção do título de Mestre em Ciências da Saúde. / A presença de infecção durante a gravidez pode aumentar consideravelmente a incidência de transtornos neurodesenvolvimentais nos filhos, em especial esquizofrenia e autismo, além de ansiedade e depressão. Desde 2005 a Organização Mundial da Saúde (OMS) recomenda que mulheres grávidas sejam vacinadas contra influenza A. No entanto, a utilização desta vacina durante a gravidez permanece limitada, devido às preocupações sobre o desenvolvimento do feto e os possíveis efeitos teratogênicos, uma vez que a gravidez é um critério de exclusão para a participação em ensaios clínicos com vacinas. Assim, o presente estudo teve como objetivo avaliar os parâmetros comportamentais de déficit olfatório, ansiedade, atividade locomotora e comportamento tipo-depressivo, além dos níveis de neurotrofinas (NTs) na prole adulta de ratas Wistar submetidas à vacinação contra influenza A e comparar esses parâmetros na prole de ratas induzidas a uma infecção com PolyI: C durante a gestação. Utilizaram-se ratas Wistar gestantes, as quais foram divididas em três grupos: 1) grupo controle que recebeu salina; 2) grupo administrado com a vacina contra influenza A (H1N1); 3) grupo PolyI: C, submetido a uma única injeção de PolyI: C; todas administradas no 9º dia de gestação. Após o desmame, os filhotes machos e fêmeas foram agrupados conforme o tratamento materno e, ao completarem 60 dias, ambas as proles foram submetidas aos testes comportamentais: discriminação olfatória, labirinto em cruz elevada, atividade locomotora e splash teste. Após os testes, os animais foram decapitados e suas estruturas cerebrais (córtex frontal, hipocampo, estriado e bulbo olfatório - BO) retiradas para análises dos níveis de fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF) e fator de crescimento neuronal (NGF). De modo geral, os resultados apontaram que a ativação imune materna (AIM) por PolyI: C foi capaz de induzir déficit olfatório, um comportamento tipo-depressivo e alterou a atividade locomotora na vida tardia da prole, independentemente do gênero, confirmando que a infecção pré-natal está implicada nos transtornos neurodesenvolvimentais. Em relação aos efeitos da vacina H1N1 na gestação sobre a prole adulta, ao associar os resultados comportamentais e os níveis de NTs, observou-se que a vacina apenas alterou o comportamento tipo-depressivo nos ratos machos. Todavia, o fato dos níveis cerebrais de BDNF e NGF estarem diminuídos nestes animais poderia contribuir na compreensão deste achado 8 comportamental, uma vez que a redução das NTs pode comprometer a angiogênese e neurogênese cerebral e, em consequência, influenciar na resposta comportamental dos animais H1N1. Verificou-se ainda que a vacina contra influenza A na gravidez aumentou os níveis de BDNF apenas no córtex frontal de ratas fêmeas, sugerindo que os níveis desta NT foram influenciados pela vacina H1N1 durante a gestação, a qual pode ter exercido um efeito protetor a longo prazo, embora somente neste parâmetro neuroquímico. Por fim, dados da literatura confirmam que vacinação na fase pré-natal induz uma resposta imune protetora em processos neuronais, como a neurogênese, e no comportamento da prole adulta, sugerindo que os possíveis mecanismos de mediação do desenvolvimento do cérebro pós-natal estão relacionados aos fatores neurotróficos, bem como à liberação de citocinas e questões hormonais, as quais devem ser investigadas em pesquisas posteriores.

Orientador: Aulus Cavalieri Carciofi / Banca: Lilian Rose Marques de Sá / Banca: Luciana Domingues de Oliveira / Resumo: A relação entre o envelhecimento e os componentes da dieta, carboidratos e proteínas, microbiota e produtos de fermentação no intestino, histologia e imunidade intestinal e imunidade sistêmica, são pontos importantes para a nutrição de cães, mas muito pouco estudados. Neste estudo foram analisados os efeitos da idade e das fontes de proteína e carboidrato sobre a digestibilidade dos nutrientes, produtos de fermentação, pH, microbiota e IgA das fezes, parâmetros imunológicos sanguíneos e histologia da mucosa gastrointestinal de cães. O ensaio seguiu esquema fatorial 3 x 2, com três rações e duas idades, gerando seis tratamentos experimentais. Foram empregados três blocos de 12 cães cada, sendo seis cães adultos (2,6 ± 0,9 anos) e seis idosos (10,2 ± 1,0 anos) com duas repetições por tratamento em cada bloco, totalizando seis repetições (cães) por tratamento. As rações experimentais foram: dieta com fibra insolúvel não fermentável a base de cana-de-açúcar (FC) e farinha de vísceras de frango; dieta com 30% de farelo de soja (FS), em substituição a farinha de vísceras de frango; dieta com fibra fermentável e parcialmente solúvel a base de polpa de beterraba (PBe). Os dados obtidos foram avaliados por análise de variância pelo procedimento MIXED do SAS, considerando-se os efeitos de bloco, animal e ração e suas interações. Médias foram comparadas pelo teste de Tukey (P<0,05). Os resultados de histologia da mucosa do trato digestivo foram comparados pelo teste de Kruskal-Wallis e o pós-teste de Dunn (P<0,05). Na dieta PBe houve interação entre idade e os coeficientes de digestibilidade aparente (CDA), sendo estes menores para os idosos (P<0,05). As contagens de colônias de anaeróbios totais, aeróbios totais, Lactobacillus spp e Bifidobacterium apresentaram interação idade e dieta (P<0,05). Para estas bactérias cães adultos alimentados com ... / Abstract: A relação entre o envelhecimento e os componentes da dieta, carboidratos e proteínas, microbiota e produtos de fermentação no intestino, histologia e imunidade intestinal e imunidade sistêmica, são pontos importantes para a nutrição de cães, mas muito pouco estudados. Neste estudo foram analisados os efeitos da idade e das fontes de proteína e carboidrato sobre a digestibilidade dos nutrientes, produtos de fermentação, pH, microbiota e IgA das fezes, parâmetros imunológicos sanguíneos e histologia da mucosa gastrointestinal de cães. O ensaio seguiu esquema fatorial 3 x 2, com três rações e duas idades, gerando seis tratamentos experimentais. Foram empregados três blocos de 12 cães cada, sendo seis cães adultos (2,6 ± 0,9 anos) e seis idosos (10,2 ± 1,0 anos) com duas repetições por tratamento em cada bloco, totalizando seis repetições (cães) por tratamento. As rações experimentais foram: dieta com fibra insolúvel não fermentável a base de cana-de-açúcar (FC) e farinha de vísceras de frango; dieta com 30% de farelo de soja (FS), em substituição a farinha de vísceras de frango; dieta com fibra fermentável e parcialmente solúvel a base de polpa de beterraba (PBe). Os dados obtidos foram avaliados por análise de variância pelo procedimento MIXED do SAS, considerando-se os efeitos de bloco, animal e ração e suas interações. Médias foram comparadas pelo teste de Tukey (P<0,05). Os resultados de histologia da mucosa do trato digestivo foram comparados pelo teste de Kruskal-Wallis e o pós-teste de Dunn (P<0,05). Na dieta PBe houve interação entre idade e os coeficientes de digestibilidade aparente (CDA), sendo estes menores para os idosos (P<0,05). As contagens de colônias de anaeróbios totais, aeróbios totais, Lactobacillus spp e Bifidobacterium apresentaram interação idade e dieta (P<0,05). Para estas bactérias cães adultos alimentados ... / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-15Bitstream added on 2014-06-13T20:36:05Z : No. of bitstreams: 1 marujo_mv_me_jabo.pdf: 288377 bytes, checksum: 375976f0740d39f1692444c9ab347118 (MD5) / Dois experimentos foram conduzidos com o objetivo de avaliar os efeitos da inclusão de celulose purificada, como fonte de fibra insolúvel, na dieta de leitões recém-desmamados. No experimento I, o desempenho, a incidência de diarreia e o tempo de trânsito das dietas no trato gastrintestinal foram avaliados em 72 leitões desmamados aos 21 dias de idade. No experimento II, foram utilizados 32 leitões recém-desmamados para determinar o pH e a viscosidade da digesta no estômago, intestino delgado e ceco; a morfologia e a microbiologia intestinal; os pesos dos órgãos gastrintestinais, do fígado e do pâncreas, e a imunidade animal. Em ambos os experimentos, os tratamentos consistiram de uma dieta basal com adição de 0,0; 1,5; 3,0 ou 4,5% de celulose purificada. O delineamento em blocos completos casualizados foi utilizado em todos os experimentos para controlar variações no peso vivo inicial. Os abates foram realizados aos 35 e 50 dias de idade. O aumento no nível de celulose purificada resultou em efeito quadrático na conversão alimentar, no consumo diário de ração e na incidência de diarreia. Aos 35 dias de idade, o peso relativo do ceco, o pH do intestino delgado, a altura das vilosidades e a relação altura das vilosidades (AV)/profundidade das criptas (PC) do jejuno apresentaram efeito quadrático, enquanto a relação AV/PC do duodeno aumentou linearmente com o aumento do nível de inclusão de celulose purificada. Aos 50 dias de idade, o peso relativo do ceco e do cólon, a contagem de Lactobacillus spp. na porção distal do intestino delgado e a morfologia intestinal do jejuno (AV, PC e relação AV/PC) apresentaram resposta quadrática, enquanto o peso relativo do pâncreas reduziu linearmente com o aumento no nível de celulose purificada. A imunidade dos animais e as viscosidades do conteúdo estomacal... / Two experiments were conducted to evaluate the effects of purified cellulose inclusion in the diets of newly weaned piglets. In trial I, performance, incidence of diarrhea, and gastrointestinal transit time were evaluated from 72 pigs weaned at 21 days of age. In trial II, a total of 32 pigs newly weaned were used to determine pH and viscosity of gastric content, small intestine and cecal digesta, intestinal morphology and microbiology, gastrointestinal organs, liver and pancreas weights, and animal immunity. In both experiments, dietary treatments consisted of a basal diet with 0.0, 1.5, 3.0, or 4.5% of added purified cellulose. The randomized complete block design was used in all experiments to control for variations in initial body weight. The piglets were slaughtered at the age of 35 and 50 days. Increasing purified cellulose level resulted in a quadratic effect on feed conversion ratio, daily feed intake and incidence of diarrhea. At 35 days of age, relative cecum weight, small intestine pH, villous height and villous height (VH):crypt depth (CD) ratio in the jejunum showed a quadratic effect, whereas VH:CD ratio in the duodenum linearly increased with the increasing level of purified cellulose inclusion. At 50 days of age, relative cecum and colon weight, Lactobacillus spp. count in the distal portion of the small intestine, and intestinal morphology in the jejunum (VH, CD, and VH:CD ratio) had a quadratic response, whereas relative pancreas weight was linearly decreased with the increasing purified cellulose level. Animal immunity and viscosities of gastric content and small intestine digesta were not affected by dietary treatments. The inclusion of purified cellulose to the diets reduced the gastrointestinal transit time and levels between 2.3 to 2.8% in the diet of newly weaned piglets provided the best results... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-13Bitstream added on 2014-06-13T18:56:57Z : No. of bitstreams: 1 evora_pm_me_jabo.pdf: 744641 bytes, checksum: a5e0ac8088bb4b297b55998c84f9c100 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Resultados no Brasil demonstraram, ao contrário de laboratórios dos EUA e Japão, que o cão doméstico não desenvolve resistência ao carrapato Rhipicephalus sanguineus. Além disso, populações de R. sanguineus do Brasil e da Argentina apresentam diferenças biológicas, morfológicas e genéticas marcantes sendo a primeira mais próxima filogeneticamente do R. turanicus da África e a segunda do R. sanguineus da Europa, o que explicaria, em parte, as diferenças citadas acima. Objetivou-se investigar, de forma comparativa, possível aquisição de resistência em cães domésticos após três infestações sucessivas com R. sanguineus, linhagens Brasil e Argentina. Cães domésticos da raça Dachshund, machos e fêmeas, de três meses a um ano de idade, “naive”, foram utilizados como hospedeiros. Os cães (n= 10) foram distribuídos em dois grupos (G1 e G2) com cinco animais cada e infestados três vezes com R. sanguineus: G1- linhagem brasileira, e G2- linhagem argentina. Avaliaram-se: parâmetros biológicos dos carrapatos, histopatologia dos sítios de fixação na 1a e 3a infestações e titulação de anticorpos séricos dos cães pelo teste ELISA. Resultados dos parâmetros biológicos indicaram melhor desempenho alimentar e reprodutivo das teleóginas após infestações sucessivas, em ambos os grupos. Biópsias do sitio de fixação dos carrapatos revelaram, em ambos os grupos, infiltrado inflamatório com predomínio de células mononucleares 24 horas pós- liberação dos carrapatos e predominantemente neutrofílico em todas as infestações na 48a, 72a e 144a horas pós-liberação. O teste ELISA revelou baixa produção de anticorpos séricos no G2, em infestações sucessivas, e maior produção pós-segunda e terceira infestações no G1. Também demonstrou... / Contrarily to that observed in U.S.A and Japan, previous results from Brazil have shown that domestic dogs do not develop resistance to the dog tick Rhipicephalus sanguineus. In addition, populations of R. sanguineus from Brazil and Argentina have biological, morphological and genetic differences, being the first phylogenetically closest to R. turanicus from Africa and the second to R. sanguineus from Europe, what could explain, at least in part, the differences reported above. The aim now was to investigate, in a comparative way, the possible acquisition of resistance in domestic dogs after three successive infestations with R. sanguineus ticks, Brazil and Argentina strains. For this, “naive” domestic dogs of the breed Dachshund, males and females, aged three months to one year were used. The hosts (n = 10) were divided into two groups with five animals each, infested thrice with R. sanguineus: G1- Brazil strain; G2- Argentina strain. It was evaluated: i. biological parameters of ticks in each infestation; ii. histopathology of their fixation sites in different times (24, 48, 72 and 144 hours) post-tick release in the 1st and 3rd infestations, including inflammatory cell counting; iii. titration of dog sera antibodies by ELISA. Results of the biological parameters indicated better engorged females feeding and reproductive performances after successive infestations in both groups. Biopsies of the ticks´ attachment sites in the 1st and 3rd infestations revealed, in both groups, predominantly mononuclear inflammatory cells infiltrates 24 hours post-tick release and predominantly neutrophylic in all infestations at 48, 72 and 144 hours post-tick release. The ELISA revealed low antibody titers in G2, in successive infestations, and increased titers post second and third infestations, in G1. It also revealed cross-reactivity between the... (Complete abstract click electronic access below)