O líquen plano oral (LPO) é uma doença inflamatória crônica de causa desconhecida, e seu potencial de malignização é um tema bastante controverso. Diversos estudos têm sugerido que pacientes portadores de líquen plano apresentam um maior risco de desenvolver câncer. Contudo, muitos autores acreditam que não haja dados suficientes que provem uma associação entre líquen plano e câncer. Para esses autores, a maioria dos casos que sofreram transformação maligna é decorrente de falhas no diagnóstico inicial da lesão. Portanto, objetivou-se avaliar a expressão imuno-histoquímica das proteínas relacionadas à apoptose e proliferação celular, respectivamente caspase-3 ativa, Bcl-2 e Ki-67 no LPO e em displasias epiteliais na tentativa de explicar a polêmica em relação ao potencial de transformação maligna do LPO e enfatizar a importância de um acompanhamento de longo prazo dos pacientes com esta doença. Com esse propósito, foram selecionadas 14 amostras de LPO, 14 amostras de leucoplasia com displasia epitelial, além de 09 amostras de mucosa bucal normal como controle. A avaliação da expressão de caspase-3 ativa, Bcl-2 e Ki-67 foi conduzida de acordo com a técnica da imunoperoxidase. A contagem das células imunomarcadas nas amostras de LPO, de leucoplasia com displasia epitelial e de mucosa bucal normal resultou em número destas células por mm2 nas diferentes regiões (camada basal, camada suprabasal e infiltrado inflamatório) para cada imunomarcador. A expressão de Bcl-2 em células epiteliais, da camada basal, ocorreu mais frequentemente no grupo da leucoplasia com displasia epitelial, com diferença estatística entre o grupo do LPO e o grupo controle. Verificou-se também, uma alta expressão da proteína Bcl-2 em células inflamatórias de lesões de LPO e de leucoplasia com displasia epitelial. A expressão do marcador Ki-67 foi superior em todos os níveis teciduais analisados nas lesões de LPO e de leucoplasia com displasia epitelial quando comparados com o grupo controle. Concluiu-se que a expressão mais elevada das proteínas Bcl-2 e Ki-67 nos casos de LPO e de leucoplasia com displasia epitelial, podem revelar a possibilidade da presença de alterações moleculares morfologicamente imperceptíveis. / The oral lichen planus (OLP) is a chronic inflammatory disease of unknown cause, and its malignant potential is a very controversial issue. Several studies have suggested that patients with lichen planus have a higher risk of developing cancer. However, many authors believe that there is insufficient evidence to prove an association between lichen planus and cancer. For these authors, most of the cases that had undergone malignant transformation is due to flaws in the lesion initial diagnosis. Therefore, the aim was to evaluate the immunohistochemical expression of proteins related to apoptosis and cell proliferation, respectively active caspase-3, Bcl-2 and Ki-67 in epithelial dysplasia and LPO in an attempt to explain the controversy regarding the potential malignant transformation of OLP and emphasize the importance of a long-term monitoring of patients with this disease. For this purpose, we selected 14 samples of OLP, 14 samples of leukoplakia with epithelial dysplasia, and 09 samples of normal oral mucosa as controls. The evaluation of the expression of active caspase-3, Bcl-2 and Ki-67 was conducted in accordance with the immunoperoxidase technique. The immunostained cells counting in samples of OLP, epithelial dysplasia in leukoplakia and normal oral mucosa resulted in a number of these cells per mm2 in the different regions (basal layer, suprabasal layer and inflammatory infiltrate) for each immunostained. The expression of Bcl-2 in epithelial cells, the basal layer, occurred more frequently in the group of leukoplakia with epithelial dysplasia, with statistical difference between the group of OLP and the control group. There was a high expression of Bcl-2 protein in inflammatory cells in OLP lesions and leukoplakia with epithelial dysplasia. The expression of the marker Ki-67 was superior in all analyzed tissue levels in OLP lesions and leukoplakia with epithelial dysplasia when compared to the control group. It was concluded that the highest expression of Bcl-2 protein and Ki-67 in cases of OLP and leukoplakia with epithelial dysplasia, can reveal the possible presence of molecular changes morphologically imperceptible.

O câncer de boca representa uma importante condição de saúde uma vez que apresenta um índice de mortalidade de 3% a 10% em todo o mundo e a maioria dos casos diagnosticados se apresentam em estádios avançados. O diagnóstico tardio do câncer de boca é um dos principais fatores que comprometem o prognóstico e a sobrevida do paciente. Muitos avanços ocorreram no campo da oncologia e mesmo assim os carcinomas de cabeça e pescoço continuam com altas taxas de morbidade e mortalidade. A ciclina D1 e o Ki-67 são marcadores biológicos que se destacam nas pesquisas atuais provavelmente relacionadas com a progressão tumoral. Dentro dos objetivos propostos, este estudo visou avaliar a expressão destes marcadores pela técnica de imunoistoquímica e correlacioná-las com os dados clínicos e morfológicos nos carcinomas de células escamosas da língua. Dos 30 pacientes estudados, 9 (30%) foram a óbito pela doença, 7 (23,3%) se encontram vivos com doença em atividade e 14 (46,7%) se encontram vivos sem atividade da doença. Dentre as análises estatísticas, observou-se que quanto maior o T, maiores são as chances de recidivas e menor a probabilidade de sobrevida livre de doença. O estadiamento T também mostrou possível associação com a ciclina D1 e Ki-67. Quanto maior a contagem dos marcadores pior foi a sobrevida global e a sobrevida livre de doença e a sobrevida global está inversamente relacionada ao estadiamento T e N. Enfatiza-se, portanto, a importância do estadiamento TNM para o seguimento dos carcinomas de células escamosas de língua e chama-se atenção para a relação positiva da expressão destes marcadores com a pior sobrevida destes pacientes. / Oral cancer is a major health condition since has a mortality rate of 3 % to 10 % worldwide, with most cases diagnosed in advanced stages are presented. Late diagnosis of oral cancer is one of the main factors that impact the prognosis and patient survival. Many advances have occurred in the field of oncology and still carcinomas of the head and neck continue with high rates of morbidity and mortality. The cyclin D1 and Ki-67 are biological markers that stand out in the current research probably related to tumor progression. Among the proposed objectives, this study aimed to evaluate the expression of these markers by immunohistochemistry and correlate them with clinical and morphological data in squamous cell carcinomas of the tongue. In 30 patients, 9 (30 %) died from the disease, 7 (23.3 %) are alive with active disease and 14 (46.7 %) were alive without disease activity . Among the statistical analysis, was observed that the higher the T, the greater the chances of recurrence and lower the probability of disease-free survival. The T stage also showed possible association with the cyclin D1 and Ki -67. The higher the count of markers was worse overall survival and disease-free survival and overall survival is inversely related to T and N staging. Emphasize, therefore, the importance of TNM staging for the monitoring of squamous cell carcinomas of the tongue and attention to the positive relationship between the expression of these markers with worse patient survival.

Orientador: Flávia de Rezende Eugênio / Banca: Renée Laufer Amorin / Banca: Maria Cecília Rui Luvizotto / Resumo: Ahiperplasiaprostática benigna(HPB) é a afecção mais comum da próstata canina, porém, a comparação dos diferentes métodos diagnósticos como o exame de palpação retal, citologia, histologia e imunoistoquímica é pouco estudada nesta espécie, diferentemente do que ocorre no homem. Este trabalho teve por objetivo estudar, em vinte cães idosos, as alterações cito e histológicas com emprego de imunomarcadores, na glândula prostática. Em todas as glândulas observou-se HPB cística, associada ou não à hiperplasia glandular ou estromal. A imunomarcação com citoqueratina (CK) AE1/AE3 foi relevante em ácinos com epitélio achatado ou com proliferação acentuada. A Vimentina (VIM) V9 teve expressão moderada em áreas com hiperplasia estromal acentuada. O toque retal e o lavado prostático mostraram ser métodos de auxílio no diagnóstico das prostatopatias, sendo indispensável o uso da histopatologia para um diagnóstico definitivo. O emprego de imunomarcadores teciduais prostáticos infere que próstatas com HPB demonstram alterações metabólicas que respondem à imunomarcação em células hiperplásicas. / Abstract: Benign Prostatic Hyperplasia (BPH) is the most common affection of the canine prostate, however, the comparison of different diagnostic methods for BPH through, digital rectal examination, cytology, histology and immunohistochemistry has a few studies in this specie, unlike man. The purpose of this study was understood, in twenty old dogs, cytology, histology alterations using immunomarkers in the prostate gland. All the glands showed the presence of cystic BPH, associated or not with glandular or stromal hyperplasia. The immunomarking with AE1/AE3 cytokeratine was relevant in alveoli with flat epytelium or with a strong proliferation. V9 Vimentine showed to be moderate in areas with a deep stromal hyperplasia. Rectal palpation and the prostatic washing product compose auxiliary diagnostic methods for prostatic diseases, being undismissable the use of histopathology for a conclusive diagnosis. Prostatic tissue immunomarkers employment to conclude that the prostate with HPB demonstrate metabolic changes which react with immunomarking in hyperplasic cells. / Mestre

Orientador: Katia Denise Saraiva Bresciani / Banca: Marcelo Vasconcelos Meireles / Banca: Solange Maria Gennari / Resumo: Doze gatas, sorologicamente negativas para Toxoplasma gondii, foram distribuídas em três grupos de quatro animais cada. Os animais dos grupos 1 e 2 foram infectados com cistos teciduais de T. gondii, por via oral, no terço médio de gestação, sendo: grupo 1 - isolado tipo I altamente virulento para camundongos; grupo 2 - isolado tipo III não virulento para camundongos; e grupo 3 - gatas controle não infectadas. Antes da infecção e durante todo o período experimental foram efetuadas avaliações clínicas. Amostras sangüíneas foram colhidas nos dias 0 (antes da inoculação), 15 e 30 dias pós-infecão para a realização de hemogramas e pesquisa de anticorpos contra T. gondii pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI 16). A infecção com o isolado de T. gondii virulento (tipo I) ocasionou diarréia, vômito, secreções ocular e vaginal e aborto de uma cria. Nas gatas inoculadas com o isolado tipo III não patogênico, foram observados diarréia, vômito, hiporexia, secreções nasal e ocular purulentas e um parto prematuro com natimortos. Todas as oito gatas infectadas com cistos teciduais de T. gondii apresentaram anticorpos contra T. gondii pela RIFI. Em dois filhotes da mesma ninhada, pertencentes ao grupo 1, foram detectados títulos de 16 e 64 aos 10 dias de vida. No grupo 2, títulos de 16, 32 e 32 foram detectados em três filhotes da mesma ninhada. Os resultados deste estudo demonstram que cistos teciduais de T. gondii de genótipos dos tipos I e III (pelo marcador SAG 2) provocaram transtornos reprodutivos semelhantes em gatas gestantes primoinfectadas. / Abstract: Twelve pregnant queens, serologically negative to Toxoplasma gondii, were distributed into three groups of four animals each. Animals were infected orally with tissue cysts of T. gondii, in the meddle third of their pregnancies as follows: group 1- was infected with isolate type I highly virulent for mice; group 2 - was infected with isolate type III not virulent for mice; group 3 - no infected control queens. Clinical profiles of the animals were determined before infection and during the whole experimental period. Blood samples of the queens were taken in the following days: 0 (before the inoculation), 15 and 30 days pos infection for blood count and for the antibodies detection against T. gondii by the indirect immunofluorescent antibody test (IFAT 16). Virulent T. gondii (type I) infection caused vomiting, diarrhea, purulent eye secretion, haemorrhagic vaginal secretion and abortion of one pregnancy. Queens infected with non pathogenic type III isolate developed diarrhea, emesis, hyporexia, purulent nose and ocular secretions and one premature stillbirth. In all eight infected queens with tissue cysts T. gondii antibody were detectable by IFAT. In two kittens of the same litter, from group 1, had been detected titers of 16 and 64 at 10 days of age. In group 2, titers of 16, 32 and 32 were detected in 3 kittens of the same litter. Infection with tissue cysts of types I and III (SAG 2 marker) of T. gondii isolates developed similar clinical and reproductive disturbance in primary infected pregnant queens. / Mestre

Resumo: O sistema OPG, RANK e RANKL é uma das mais importantes descobertas da biologia óssea. Essas proteínas regulam as atividades celulares na remodelação do tecido ósseo e na literatura há diversas investigações nos tecidos dentários. No entanto, no reimplante dentário, ainda não foram encontrados relatos. Foi objetivo deste trabalho, avaliar a imunomarcação das proteínas OPG, RANK e RANKL em dentes reimplantados de rato. Um grupo controle foi formado com quatro ratos no qual o reimplante dentário não foi realizado. Vinte e quatro ratos (Rattus norvegicus, albinus) tiveram seu incisivo superior extraído e depois reimplantado formando os seguintes grupos: grupo I - reimplante imediato; grupo II - reimplante tardio sem tratamento e grupo III - reimplante tardio com tratamento endodôntico (ressecção da papila dentária e preenchimento do canal com pasta de hidróxido de cálcio) e tratamento da superfície radicular (raspagem mecânica do ligamento periodontal necrosado e imersão em solução de flúor fosfato acidulado de sódio a 2,5%). Ao final dos períodos experimentais (10 e 60 dias) os ratos foram eutanasiados. Foram obtidos cortes longitudinais parafinados com 6μm de espessura. Os cortes foram submetidos à reação imunoístoquímica mediante a utilização de anticorpos primários para OPG, RANK e RANKL. Os resultados mostraram que a imunomarcação de OPG e RANKL ocorreu em todos os grupos e períodos estudados, muito embora RANKL não tenha sido observada no grupo reimplante imediato aos 60 dias. RANK foi observada somente aos 10 dias de todos os grupos no qual o reimplante foi realizado. A análise qualitativa dos resultados demonstrou que o sistema OPG, RANK e RANKL apresentou marcação evidente no reimplante tardio, sugerindo a efetiva participação no início do processo de reabsorção radicular, uma vez que aos 60 dias a imunomarcação foi discreta. / Abstract: The OPG, RANK and RANKL system is one of the most important discoveries in bone biology. These proteins are key regulators of bone remodeling and in the literature there are several studies of tooth resorption. However, in tooth replantation, reports have not been found. The purpose of this study was to determine the immunolabeling of OPG, RANK and RANKL in replanted teeth in rats, using immunohistochemistry methodology. A control group (no replanted teeth) was formed by four rats. Twenty-four rats (Rattus norvegicus, albinus) were submitted to the extraction of their upper right incisors. The replantation was performed according to the groups below: group I - immediate replantation; group II - delay replantation without treatment and group III - delay replantation with endodontic treatment (extirpation of papilla and the root canal filled with calcium hydroxide) and root surface treatment (periodontal ligament was removed with scalpel and teeth were immersed in 2% acidulated phosphate sodium fluoride). The animals were euthanized at the end of the experimental periods (10 and 60 days). Longitudinal 6μm slices embedded in paraffin were obtained. The slices were submitted to immunohistochemistry reaction by means of the primary antibodies for OPG, RANK and RANKL proteins. The results showed the expression of OPG in all groups and periods. RANKL expression was observed in all groups, except in the immediate replanted teeth group (60 days). RANK expression was observed only at 10 days in all groups which replantation was performed. The qualitative analysis of our findings indicated that the system OPG, RANK and RANKL presented strong expression in delayed replantation, suggesting effective participation at the beginning of root resorption, since at 60 days the immunostained cells were discreet. / Orientador: Wilson Roberto Poi / Coorientador: Roberta Okamoto / Banca: Sônia Regina Panzarini Barioni / Banca: Celso Koogi Sonoda / Banca: Luiz Guilherme Brentegani / Banca: Mirian Marubayashi Hidalgo / Doutor

Resumo: O tumor odontogênico adenomatóide (TOA) é um tumor benigno composto de epitélio odontogênico com uma variedade de padrões arquiteturais histológicos, embebido em um estroma de tecido conjuntivo maduro e caracterizado por um crescimento lento, porém progressivo. O tumor odontogênico epitelial calcificante (TOEC) é definido como uma neoplasia odontogênica epitelial localmente invasiva, caracterizada pela presença de material amilóide que pode se tornar calcificado. Ambos recentemente reclassificados pela Organização Mundial da Saúde como tumores de epitélio odontogênico, com estroma fibroso maduro e sem ectomesênquima odontogênico. Com o objetivo de contribuir para o estabelecimento de tratamentos e prognósticos mais precisos, através de um melhor entendimento do comportamento biológico destes tumores, este estudo se propôs aavaliar o potencial proliferativo dos dois tumores que por vezes apresentam aspectos histológicos coincidentes, utilizando a técnica histoquímica do AgNOR e a imunohistoquímica de evidenciação de PCNA, P53 e Ki-67. Foram utilizados 5 espécimes de cada tumor. A análise comparativa dos resultados quantitativos/ qualitativos da histoquímica de evidenciação das NORs e dos resultados imunohistoquímicos para os três anticorpos estudados confirmam o comportamento patológico neoplásico benigno do tumor odontogênico adenomatóide e do tumor odontogênico epitelial calcificante. Foi observada distribuição positiva do PCNA nas células epiteliais das áreas sólidas e adenomatóides do TOA e nas áreas sólidas de células epiteliais poliédricas do TOEC, o que permite sugerir estes sítios como os responsáveis pelo crescimento dos respectivos tumores. / Abstract: The adenomatoid odontogenic tumor (OAT) is a benign tumor composed of odontogenic epithelium in a variety of histoarquitectural patterns, embedded in a mature connective tissue stroma and characterized by slow but progressive growth. The calcifying epithelial odontogenic tumor (CEOT) is defined as an epithelial odontogenic neoplasia locally invasive, characterized by the presence of amiloyd material that may become calcified. Both were recently reclassified by World Health Organization as tumors of odontogenic epithelium, with mature fibrous stroma without odontogenic ectomesenchyme. With the aim of contributing to the achievement of more precise treatments and prognosis, based on a better understanding of the biological behavior of these tumors, this study proposed evaluation of the proliferative potential of both tumors that sometimes present similar histological patterns, using AgNOR histochemistry and imunohistochemical expression of PCNA, P 53 and Ki- 67. There were analyzed 5 specimens of each tumor. Comparative analysis of quantitative/qualitative results of the NORs staining and the histochemical expression results of the antibodies studied confirm the benign neoplastic pathological behavior of the AOT and CEOT and the positive expression of PCNA distributed among epithelial cells of solid nodules and adenomatoid structures of AOT and among the polyhedral epithelial CEOT cells allowed suggest these sites as the responsible ones for respective tumoral growth. / Orientador: Marcelo Macedo Crivelini / Coorientador: Ana Maria Pires Soubhia / Banca: Alvimar Lima de Castro / Banca: Luis Antonio de Assis Taveira / Banca: Mireile São Geraldo dos Santos Souza / Banca: Symonne Pimentel Castro de Oliveira Lima Parizotto / Doutor

Orientador: Christiane Pienna Soares / Banca: Christiane Pienna Soares / Banca: Rubens Rodrigues dos Santos Júnior / Banca: Luís Carlos Spolidório / Resumo: O câncer de laringe é a segunda neoplasia mais comum da região de cabeça e pescoço em todo o mundo. Além dos fatores de risco como fumo e consumo de àlcool, o desenvolvimento do câncer de laringe parece estar associado à infecção pelo Papilomavírus Humano (HPV). As moléculas HLA-G e HLA-E são moléculas HLA de classe I não- clássicas, que desempenham um papel no estabelecimento da manutenção da tolerância imunológica através da inibição de funções de células imunocompetentes. O presente estudo tem como objetivo avaliar a expressão de HLA-G e HLA-E pela técnica imunohistoquímica em biópsias laríngeas de 109 pacientes, 27 lesões benignas (papiloma laríngeo), 17 lesões pré- malignas (displasia leve, moderada ou acentuada), 10 carcinomas in situ de laringe, 27 carcinomas invasores sem metástase, 28 carcinomas invasores com metástase. Além das biópsias avaliadas, também foram analisadas 28 linfonodos cervicais dos pacientes com metástases. A molécula de HLA-G foi detectada em 45% das biópsias analisadas. Dentre os diferentes graus histológicos, a expressão da molécula HLA-G aparece aumentada nas lesões benignas, lesões pré- malignas e carcinomas in situ de laringe, e essa expressão diminui nos carcinomas invasores sem metástase, carcinomas invasores com metástase e nos linfonodos. HLA-E foi detectado em 62,04% das lesões como um todo, havendo um aumento da expressão de HLA-E nas lesões invasivas e nos linfonodos. Esta molécula parece estar associada com a instalação do carcinoma laríngeo. A freqüência do DNA do HPV foi baixa, sugerindo que o câncer de laringe esteja associado a outros fatores de risco. / Abstract: Laryngeal carcinoma is a second common malignant tumor of the head and neck around the world. Besides well-established risk factors like smoking and alcohol abuse, the development of laryngeal carcinoma is associated with human papillomavirus (HPV) infection. HLA-G and HLA-E are two non-classical class I molecules. Their antigens play a role in the establishment and maintenance of immune tolerance by inhibiting the functions of immunocompetent cells. The aim of the present retrospective study was to determine the expression of HLA-G and HLA-E immunoperoxidase in laryngeal biopsies from 109 patients, 27 in benign lesions (laryngeal papillomas), 17 premalignant lesions (low, moderate or severe dysplasia), 10 in situ laryngeal carcinomas, 27 laryngeal carcinomas without metastases, 28 laryngeal carcinomas with metastases. Besides all biopsies evaluated, were also analyzed 28 biopsies of patients with cervical lymph node metastases. The HLA-G molecule was detected in 45% of biopsies analyzed. Among the different histological grades, the expression of HLA-G molecule is increased in benign lesions, premalignant lesions and in situ laryngeal carcinomas, and this expression decreases in invasive carcinoma without metastasis, invasive carcinoma with metastasis and lymph nodes. HLA-E was detected in 62.04% of the lesions as a whole, with increased expression of HLA-E in invasive lesions and lymph nodes. This molecule seems to be associated with the installation of laryngeal carcinoma. The frequency of HPV DNA was low, suggesting that cancer of the larynx is associated with other risk factors. / Mestre

Resumo: Objetivos: O objetivo deste estudo foi avaliar a influência da ovariectomia (depleção de estrógeno), no processo de reparo de enxertos ósseos autógenos em bloco por meio da imunomarcação da PECAM-1 e osteocalcina (OCN), em ratas jovens e senis. Material e Métodos: Foram utilizadas 96 ratas (Wistar) fêmeas, sendo 48 ratas com idade de 3 meses, divididas em subgrupo Ovx, submetidas a cirurgia de ovariectomia e subgrupo Sham submetidas ao mesmo procedimento cirúrgico sem a remoção dos ovários; e 48 ratas com idade de 12 meses, também divididas em subgrupos Ovx e Sham. Transcorridos 30 dias da Ovx ou "sham", todos os animais receberam enxerto ósseo autógeno em bloco na mandíbula, tendo como área doadora o osso parietal da calvária. Os animais foram submetidos a eutanásia em 7, 14 e 28 dias. As peças foram submetidas à análises histométrica e imunoistoquímica. Esta foi realizada de forma semi-quantitativa, visando analisar as imunomarcações contra PECAM-1 e osteocalcina, avaliando-se a interferência do estrógeno neste processo. Resultados: Durante os períodos analisados, os subgrupos Sham apresentaram marcações da osteocalcina mais intensas quando comparadas com os subgrupos Ovx, independente da idade do animal. As marcações de PECAM-1 foram mais intensas nos subgrupos Sham aos 7 e 14 dias. Conclusão: Dentro dos limites deste estudo, concluímos que a depleção de estrógeno afeta negativamente o processo inicial da angiogênese e diminui a mineralização óssea. / Abstract: Objectives: The aim of this study was to evaluate the influence of the ovariectomy (estrogen depletion), on healing process of autogenous bone block grafts in young and aged rats, through the immunocolocalization of the PECAM-1 and osteocalcin (OC). Material and Methods: 96 female rats (Wistar) were used, being 48 rats with 3 months-old, divided in subgroups: Ovx, submitted the ovariectomy surgery and Sham, submitted to the same surgical procedure without the removal of the ovaries; and 48 female rats with 12 months-old, also divided in Ovx and Sham subgroups. After 30 days of Ovx or "sham" operation, all the animals received autogenous bone block graft in the jaw, harvested from the calvaria. The animals were euthanized in 7, 14 and 28 days postoperatively. The specimens were submitted to histometric and immunohistochemistry analysis. This was accomplished in a semi-quantitative way, to analyze the immunolocalizations against PECAM-1 and osteocalcin, evaluating the interference of the estrogen in this process. Results: During the analyzed periods, the Sham subgroups presented more intenses demarcations of osteocalcin when compared with the subgroups Ovx, regardless of age. The demarcations of PECAM-1 were more intenses in the "sham" subgroups to the 7 and 14 days. Conclusion: Within the limits of this study, the estrogen depletion affects the initial process of angiogenesis negatively and it reduces bone mineralization. / Orientador: Álvaro Francisco Bosco / Coorientador: Roberta Okamoto / Banca: Valdir Gouveia Garcia / Banca: Teresa Lúcia Colussi Lamano / Mestre

Resumo: Anticorpos monoclonais (AcMm) são imunoglobulinas produzidas por engenharia celular através da fusão de células tumorais com linfócitos B provenientes de organismos previamente imunizados contra o antígeno de interesse. As células recém criadas recebem a denominação de hibridomas, crescem indefinidamente em cultura por agregar características de imortalidade das células tumorais. A tecnologia de monoclonais compreende etapas seriadas, incluindo imunização, fusão, screening, clonagem, caracterização de especificidade dentre outras. O CD45 é um marcador expresso na superfície de todos os leucócitos humanos: linfócitos, eosinófilos, monócitos, basófilos e neutrófilos sendo, o maior componente da membrana de linfócitos, o que aumenta a probabilidade de obtenção de AcMm com este perfil em protocolos de imunização com linfócitos. Este marcador é amplamente utilizado em diagnóstico por citometria de fluxo, no acompanhamento de pacientes HIV+, na classificação de leucemias e linfomas, quantificação de células CD34+ para transplantes de medula óssea e, também em imunohistoqu ímica auxiliando na subtipagem das neoplasias, principalmente linfomas (Hodgkin, não Hodgkin e outras categorias) e leucemias de células B e T. Assim, este trabalho teve por objetivo a caracterização de anticorpo monoclonal anti-CD45 desenvolvido in house e validação deste em aplicações diagnósticas envolvendo citometria de fluxo e imunohistoqu ímica, comparando-o com anticorpos monoclonais comerciais, visando minimização dos custos dessas técnicas. Foram utilizadas 50 amostras de sangue excedente de doadores para o grupo controle e 48 amostras de sangue de pacientes HIV+ para validação do AcMm em citometria de fluxo e analisados 114 fragmentos em lâmina de Tissue Microarray - TMA provenientes de 38 amostras de amígdalas para validação do AcMm em imunohistoqu ímica... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Monoclonal antibodies (mAb) are immunoglobulins produced by cell engineering through fusion of tumor cells and B lymphocytes from organisms previously immunized against the antigen of interest, generating thus hybridomas that indefinitely grow in culture since they aggregate immortality characteristics of tumor cells capable of secreting antibodies. The production of such antibodies consists of sequential steps, including immunization, fusion, screening, cloning, and specificity characterization. CD45 is a marker expressed in the surface of all human leukocytes: lymphocytes, eosinophils, monocytes, basophils, and neutrophils. Besides, CD45 is the major component of lymphocyte membranes, which increases the probability of obtaining mAb presenting such profile in immunization procedures using lymphocytes. This marker has been widely used in diagnosis through flow cytometry, besides monitoring of HIV+ patients, classification of leukemia and lymphomas, quantification of CD34+ cells for bone marrow transplantation, and also in immunohistochemistry, helping in subtyping of neoplasms, mainly lymphomas (Hodgkin’s, non-Hodgkin and other categories) and B- and T-cell leukemia. Thus, this work aimed to characterize the in-house-developed anti-CD45 monoclonal antibody besides its validation in diagnostic applications involving flow cytometry and immunohistochemistry through comparison with commercial monoclonal antibodies in order to reduce the costs of such techniques. Fifty samples of extra blood from donors were used in the control group, and 48 blood samples from HIV+ patients were used for mAb validation in flow cytometry. For mAb immunohistochemical validation, 114 fragments from 38 amygdala samples were analyzed in a Tissue Microarray - TMA slide. In flow cytometry, the commercial anti-CD45 and the likely in-house-obtained anti-CD45 (LINB5 clone) did not significantly differ concerning cell... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Elenice Deffune / Coorientador: Marjorie de Assis Golim / Banca: Mirthes Uieda / Banca: Maria Aparecida Custódio Domingues / Mestre

Orientador: Elenice Deffune / Coorientador: Márjorie de Assis Golim / Banca: Rosimeire Aparecida Roela / Banca: Paulo Inácio da Costa / Banca: Rosimeire Aparecida Roela / Resumo: O sistema imunológico é dividido em imunidade natural e adquirido (humoral e celular). Os linfócitos B são os principais efetores da resposta humoral. Junto aos linfócitos T, mediam diversas reações imunológicas. Todos os leucócitos possuem antígenos de superfície (clusters of differentiation - CD) determinados que possuem as mais diferentes funções. As expressões destes CDs podem variar na maturação e na presença de patologias, sendo as de maior prevalência e gravidade as leucemias e linfomas, tornando-se marcadores importantes que podem ser avaliados por citometria de fluxo ou imunoquímica através do uso de anticorpos monoclonais murinos (AcMm). Após produção dos AcMm é necessário caracterizar e validá-los. Utilizou-se 11 clones que apresentaram especificidade somente contra linfócitos B. Pela técnica de Western Blotting, 5 anticorpos (3 do tipo IgM e 2 do tipo IgG) foram escolhidos de acordo com sua possível especificidade e importância clínica. A validação dos anticorpos tipo IgM foi realizada por citometria de fluxo utilizando anticorpo comercial para comparação de quantidade de células marcadas, sendo testados em 20 amostras de indivíduos normais e 20 de indivíduos portadores de neoplasias hematológicas diversas. O LINB B, que foi comparado com o anti-CD171 e anti-CD45RA, apresentando diferença estatística somente em relação ao anti-CD45RA, e identidade com o anti-CD171. O LINB C, que foi comparado com o anti-CD20 e anti-CD19, não apresentou diferença estatística significante quando frente a ambos anticorpos comerciais. No teste de regressão linear, houve maior correlação dos resultados com o anti-CD19. O LINB E foi comparado somente contra o anti-CD107b, havendo grande identidade entre os dois. Dos resultados apresentados, conclui-se que o LINBs B e E apresentam grandes chances de serem específicos contra... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The immunological system is divided into: natural immunity and acquired immunity (celular and humoral responses). The B lymphocytes are the main effectors of the humoral response. Together with the T lymphocytes, they make several immunological reactions. All leucocytes have antigens on the surface (clusters of differentiation - CD) that possess lot of functions. The expressions of these CDs may be altered during maturation and pathologies, like leukemia and lymphomas, becoming important markers that can be evaluated by flow cytometry or immunochemistry thought murine monoclonals antibodies (Mab). After production of Mabs it's necessary characterize and validated them. We used 11 clones that presented Mab against B lymphocytes only. By Western Blotting method 5 Mab (3 IgM and 2 IgG) were chosen according you possible especifity and clinical importance. The validation of IgM Mabs were made by flow cytometry using commercial antibody to compare the quantity of marked cells, being used 20 samples from normal people and 20 samples from person with hematological cancer. The LINB B, compared to anti-CD171 and anti-CD45RA, presented statistical difference from anti-CD45RA and identity to anti-CD171. The LINB C, compared to anti-CD19 and anti-CD20, didn't presented any statistical difference from both commercial antibodies, although it correlates better with anti-CD19. The LINB E was compared to anti-CD107b, where it appears great identity between then. By the present results, we conclude that LINB B and E need multicentre studies to expand validation, and LINB C, needs to increase the samples to have a statistical validation. The two IgGs LINB, possible anti-CD138, weren't test yet. / Mestre