OBJETIVOS: Comparar a expressão placentária de células natural killer deciduais (dNK), e a expressão sérica e placentária de suas citocinas reguladoras em gestações gemelares com pré-eclâmpsia (grupo pré-eclâmpsia, GPE) e sem comorbidades (grupo-controle, GC). MÉTODOS: Estudo transversal do tipo caso-controle, desenvolvido na Clínica Obstétrica do HC-FMUSP no período de julho de 2015 a junho de 2017. Foram obtidas amostras das regiões deciduais placentárias, para avaliação, por meio de técnica de imuno-histoquímica, da expressão de células dNK e suas interleucinas (IL) 10, 12 e 15, em pacientes que contemplaram os critérios de inclusão e concordaram em participar do estudo. Além disso, estas pacientes tiveram amostra sérica colhida no terceiro trimestre para dosagem de IL-10, IL-12 e IL-15 - por meio de kit comercial Milliplex®, que utiliza a tecnologia Luminex® xMAP®, da EMDMillipore (Merck Millipore Co., Alemanha) - e de fatores relacionados à angiogênese, como soluble fms-like tyrosine kinase-1 (sFlt-1) e placental growth factor (PlGF) - por meio de ensaio com imunoanalisador COBAS e411 (Roche Diagnostics, Alemanha). Os valores obtidos para as análises placentárias e séricas foram comparados entre o GPE e o GC, e a significância estatística estabelecida foi p < 0,05. RESULTADOS: Foram selecionadas 30 pacientes, sendo 20 no GC e 10 no GPE. Não se observaram diferenças significativas com relação às características maternas, gestacionais e de desfechos perinatais entre os dois grupos, exceto pela idade gestacional de início do pré-natal, menor no GPE (12,5 vs. 20,0 semanas, p = 0,015). Quanto à avaliação placentária, houve maior expressão de IL-15 no GPE (p = 0,001), e não houve diferença entre os grupos quanto à expressão placentária local de células dNK (p = 0,999), IL-10 (p = 0,063) e IL-12 (p = 0,135). Com relação às interleucinas séricas maternas, demonstrou-se aumento significativo nos níveis de IL-10 (22,7 vs. 11,9 pg/mL, p = 0,024) e IL-15 (15,9 vs. 7,4 pg/mL, p = 0,024) no GPE com relação ao GC, sem diferença entre os grupos para IL-12 (102,5 vs. 61,5 pg/mL, p = 0,373). A dosagem dos fatores relacionados à angiogênese demonstrou maiores níveis séricos maternos de sFlt-1 (15920 vs. 7978 pg/mL, p = 0,009) e da razão sFlt-1/PlGF (88,71 vs. 24,63, p = 0,002), e menores valores de PlGF (193,0 vs. 340,6 pg/mL, p = 0,036) no GPE. CONCLUSÃO: Observou-se maior concentração sérica materna tanto de fatores pró quanto anti-inflamatórios no GPE, quando comparado ao GC. Entretanto, não foram observadas diferenças entre os grupos quanto à expressão placentária de IL-10, importante fator anti-inflamatório. Estes achados podem sugerir que a tentativa sérica materna de equilibrar estas interleucinas não alcançou resposta localmente na placenta, contribuindo para o desenvolvimento da doença no GPE / OBJECTIVES: To compare the placental expression of decidual natural killer cells (dNK) and serum and placental expression of their regulatory cytokines in twin pregnancies with preeclampsia (preeclampsia group, PEG) and uncomplicated twin pregnancies (control group, CG). METHODS: This was a case-control study, developed in a tertiary referral center, from July 2015 to June 2017. Samples of the placental decidual region were obtained and analyzed by immunohistochemistry technique for the expression of dNK cells and interleukins (IL) 10, 12 and 15, in patients who met the inclusion criteria. In addition, maternal serum sample was collected in the third trimester for the dosage of IL-10, IL-12 and IL-15 - by means of a commercial Milliplex® kit using Luminex® xMAP® technology from EMDMillipore (Merck Millipore Co., Germany) - and angiogenesis factors, such as soluble fms-like tyrosine kinase-1 (sFlt-1) and placental growth factor (PlGF) - by COBAS e411 immunoassay (Roche Diagnostics, Germany). The values obtained for the placental analyzes and maternal circulating factors were compared between PEG and CG and the statistical significance was set at p < 0.05. RESULTS: Thirty patients were selected, 20 in CG and 10 in PEG. There were no significant differences in maternal, gestational and perinatal outcomes between the two groups, except for the gestational age at the onset of prenatal care, which was lower in PEG (12.5 vs. 20.0 weeks, p = 0.015). PEG showed strong immunostaining for IL-15 (p = 0.001) when compared to CG, with no difference between the groups concerning the placental expression of dNK (p = 0.999), IL-10 (p = 0.063), and IL -12 (p = 0.135). Relating to maternal circulating interleukins, a significant increase in IL-10 (22.7 vs. 11.9 pg/mL, p = 0.024) and IL-15 (15.9 vs. 7.4 pg/mL, p = 0.024) was observed in PEG, with no difference between the groups for IL-12 (102.5 vs 61.5 pg/mL, p = 0.373). We also demonstrated higher maternal levels of sFlt-1 (15920 vs. 7978 pg/mL, p = 0.009) and sFlt-1/PlGF ratio (88.71 vs. 24.63, p = 0.002) and lower levels of PlGF (193 vs. 340.6 pg/mL, p = 0.036) in PEG. CONCLUSION: A higher maternal serum concentration of both pro- and anti-inflammatory factors was observed in the PEG. However, no difference was found between the groups regarding the placental expression of IL-10, an important anti-inflammatory factor. These findings may suggest that the maternal serum attempt to balance these interleukins did not reach local placental response, which contribute to the development of the disease in the PEG

OBJETIVOS: Comparar a expressão placentária de células natural killer deciduais (dNK), e a expressão sérica e placentária de suas citocinas reguladoras em gestações gemelares com pré-eclâmpsia (grupo pré-eclâmpsia, GPE) e sem comorbidades (grupo-controle, GC). MÉTODOS: Estudo transversal do tipo caso-controle, desenvolvido na Clínica Obstétrica do HC-FMUSP no período de julho de 2015 a junho de 2017. Foram obtidas amostras das regiões deciduais placentárias, para avaliação, por meio de técnica de imuno-histoquímica, da expressão de células dNK e suas interleucinas (IL) 10, 12 e 15, em pacientes que contemplaram os critérios de inclusão e concordaram em participar do estudo. Além disso, estas pacientes tiveram amostra sérica colhida no terceiro trimestre para dosagem de IL-10, IL-12 e IL-15 - por meio de kit comercial Milliplex®, que utiliza a tecnologia Luminex® xMAP®, da EMDMillipore (Merck Millipore Co., Alemanha) - e de fatores relacionados à angiogênese, como soluble fms-like tyrosine kinase-1 (sFlt-1) e placental growth factor (PlGF) - por meio de ensaio com imunoanalisador COBAS e411 (Roche Diagnostics, Alemanha). Os valores obtidos para as análises placentárias e séricas foram comparados entre o GPE e o GC, e a significância estatística estabelecida foi p < 0,05. RESULTADOS: Foram selecionadas 30 pacientes, sendo 20 no GC e 10 no GPE. Não se observaram diferenças significativas com relação às características maternas, gestacionais e de desfechos perinatais entre os dois grupos, exceto pela idade gestacional de início do pré-natal, menor no GPE (12,5 vs. 20,0 semanas, p = 0,015). Quanto à avaliação placentária, houve maior expressão de IL-15 no GPE (p = 0,001), e não houve diferença entre os grupos quanto à expressão placentária local de células dNK (p = 0,999), IL-10 (p = 0,063) e IL-12 (p = 0,135). Com relação às interleucinas séricas maternas, demonstrou-se aumento significativo nos níveis de IL-10 (22,7 vs. 11,9 pg/mL, p = 0,024) e IL-15 (15,9 vs. 7,4 pg/mL, p = 0,024) no GPE com relação ao GC, sem diferença entre os grupos para IL-12 (102,5 vs. 61,5 pg/mL, p = 0,373). A dosagem dos fatores relacionados à angiogênese demonstrou maiores níveis séricos maternos de sFlt-1 (15920 vs. 7978 pg/mL, p = 0,009) e da razão sFlt-1/PlGF (88,71 vs. 24,63, p = 0,002), e menores valores de PlGF (193,0 vs. 340,6 pg/mL, p = 0,036) no GPE. CONCLUSÃO: Observou-se maior concentração sérica materna tanto de fatores pró quanto anti-inflamatórios no GPE, quando comparado ao GC. Entretanto, não foram observadas diferenças entre os grupos quanto à expressão placentária de IL-10, importante fator anti-inflamatório. Estes achados podem sugerir que a tentativa sérica materna de equilibrar estas interleucinas não alcançou resposta localmente na placenta, contribuindo para o desenvolvimento da doença no GPE / OBJECTIVES: To compare the placental expression of decidual natural killer cells (dNK) and serum and placental expression of their regulatory cytokines in twin pregnancies with preeclampsia (preeclampsia group, PEG) and uncomplicated twin pregnancies (control group, CG). METHODS: This was a case-control study, developed in a tertiary referral center, from July 2015 to June 2017. Samples of the placental decidual region were obtained and analyzed by immunohistochemistry technique for the expression of dNK cells and interleukins (IL) 10, 12 and 15, in patients who met the inclusion criteria. In addition, maternal serum sample was collected in the third trimester for the dosage of IL-10, IL-12 and IL-15 - by means of a commercial Milliplex® kit using Luminex® xMAP® technology from EMDMillipore (Merck Millipore Co., Germany) - and angiogenesis factors, such as soluble fms-like tyrosine kinase-1 (sFlt-1) and placental growth factor (PlGF) - by COBAS e411 immunoassay (Roche Diagnostics, Germany). The values obtained for the placental analyzes and maternal circulating factors were compared between PEG and CG and the statistical significance was set at p < 0.05. RESULTS: Thirty patients were selected, 20 in CG and 10 in PEG. There were no significant differences in maternal, gestational and perinatal outcomes between the two groups, except for the gestational age at the onset of prenatal care, which was lower in PEG (12.5 vs. 20.0 weeks, p = 0.015). PEG showed strong immunostaining for IL-15 (p = 0.001) when compared to CG, with no difference between the groups concerning the placental expression of dNK (p = 0.999), IL-10 (p = 0.063), and IL -12 (p = 0.135). Relating to maternal circulating interleukins, a significant increase in IL-10 (22.7 vs. 11.9 pg/mL, p = 0.024) and IL-15 (15.9 vs. 7.4 pg/mL, p = 0.024) was observed in PEG, with no difference between the groups for IL-12 (102.5 vs 61.5 pg/mL, p = 0.373). We also demonstrated higher maternal levels of sFlt-1 (15920 vs. 7978 pg/mL, p = 0.009) and sFlt-1/PlGF ratio (88.71 vs. 24.63, p = 0.002) and lower levels of PlGF (193 vs. 340.6 pg/mL, p = 0.036) in PEG. CONCLUSION: A higher maternal serum concentration of both pro- and anti-inflammatory factors was observed in the PEG. However, no difference was found between the groups regarding the placental expression of IL-10, an important anti-inflammatory factor. These findings may suggest that the maternal serum attempt to balance these interleukins did not reach local placental response, which contribute to the development of the disease in the PEG

Os avanços relacionados à ciência dos biomateriais e engenharia tecidual buscam esclarecer os mecanismos envolvidos na resposta biológica associada ao uso desses dispositivos e sua interação com o sistema imune. Neste estudo, avaliou-se a resposta imune e inflamatória desenvolvida em camundongos frente à implantação de membrana de cortical óssea bovina no tecido subcutâneo, em implantação única e sequencial de duas membranas, assim como os possíveis mecanismos envolvidos no processo de reconhecimento e reabsorção desse biomaterial, de acordo com análise histomorfométrica, enzimática e molecular. Após a implantação da membrana, sinais de reabsorção que antes eram notados em pontos isolados, aos poucos se unem até sua completa degradação, observada somente após 15 dias. Todo o processo de reabsorção da membrana é acompanhado por uma reação inflamatória de magnitude moderada, seguida pelo declínio do número de leucócitos, surgimento de células gigantes multinucleadas e formação de uma cápsula de tecido conjuntivo fibroso. A cinética de TNF- e MMP-2, MMP-8, MMP-9 e MMP-13 apresentou um padrão de produção decrescente, entretanto os níveis dos inibidores de metaloproteinases (TIMPs) e TGF- parecem atuar de forma inversa. A velocidade de reabsorção após duas implantações consecutivas da membrana foi maior quando comparada ao grupo de animais que sofreu apenas uma implantação, porém os resultados do teste de hipersensibilidade do tipo tardia (DTH) demonstraram que a membrana é biocompatível, pois não elicitou resposta imunológica exacerbada após uma segunda implantação, confirmando então a natureza não imunogênica desse biomaterial. Finalmente, os animais CD14KO e MyD88KO apresentaram uma reabsorção mais lenta da membrana implantada, quando comparados aos animais C57Bl/6 (WT), demonstrando que as moléculas CD14 e MyD88 estão envolvidas no reconhecimento do biomaterial e desempenham importante papel no processo de reabsorção da membrana de cortical óssea bovina, indicando a participação de PAMPs e/ou DAMPs na resposta biológica gerada por esse biomaterial. / Advances related to the biomaterials science and tissue engineering seek to clarify the mechanisms involved in the biological response associated with the use of those devices and their interaction with the immune system. This study evaluated the inflammatory and immune response developed in mice after implantation bovine bone cortical membrane in subcutaneous tissue, in both, unique and sequential implantation of 2 membranes, as the mechanisms involved in this biomaterial recognition and resorption process, on regards to histomorphometric, enzymatic and molecular analysis. After membrane implantation, previously observed signs of resorption in isolated spots, gradually unite until their complete degradation after 15 days. The whole membrane resorption process is accompanied by a moderate inflammatory reaction, followed by a decline in the leukocytes number, appearance of multinucleated giant cells and formation of a capsule of fibrous connective tissue. The kinetics of TNF-, MMP-2, MMP-8, MMP-9 e MMP-13 showed a pattern of decreasing production, however, levels of metalloproteinases inhibitors (TIMPs) and TGF- seem to act in reverse way. The resorption rate after two successive membrane implantations was higher when compared to the group which suffered only one implantation, however, the results of delayed test hypersensity (DTH) demonstrated that the membrane is biocompatible, that is, it does not elicited too high immune response after a second position, confirming the non immunogenic nature of this biomaterial. Eventually, CD14KO and MyD88KO strains showed a slower membrane resorption when compared to animals C57Bl/6, demonstrating that the CD14 and MyD88 molecules are involved in biomaterial recognition and play an important role in bovine cortical bone membrane resorption process, indicating that PAMPs and/or DAMPs are involved in biological response generated by this biomaterial.

Os estágios avançados da DPOC são longos e dolorosos processos onde há o aumento dos sintomas, fazendo com que o paciente entre em um ciclo vicioso de deterioração da capacidade física, dispneia, ansiedade e isolamento social. Deste modo, o exercício vem se mostrando um componente importante na DPOC, auxiliando no tratamento medicamentoso para a redução dos sintomas e melhora da qualidade de vida. Neste contexto, não há muitos relatos na literatura sobre o papel da atividade física no padrão de secreção de citocinas e na resposta proliferativa de pacientes com DPOC. Além disso, não há muita concordância sobre o comprimento do telômero e fenótipo celular quando a comparados tabagistas que não desenvolvem a doença e pacientes com DPOC. O objetivo deste trabalho foi comparar alguns parâmetros imunológicos entre pacientes com DPOC e indivíduos tabagistas sem DPOC, e em pacientes com DPOC antes e após o programa de reabilitação oferecido no Hospital das Clínicas da FMUSP. As coletas de sangue foram realizadas em dois momentos para o grupo DPOC (pré e pós-programa de reabilitação pulmonar), e em um único momento para o grupo tabagista. Estas amostras foram processadas para obtenção de células mononucleares do sangue periférico, onde foram analisados os seguintes parâmetros: proliferação celular e apoptose, fenotipagem de linfócitos, comprimento relativo do telômero e dosagem de citocinas. Verificamos que indivíduos tabagistas possuem menores quantidades de proteína C reativa que pacientes com DPOC, e uma tendência a maior número de linfócitos. Além disso, o comprimento relativo do telômero em tabagistas é maior do que em pacientes com DPOC, especialmente em linfócitos TCD8+, e em menor grau em linfócitos TCD4+. Linfócitos TCD8+ de portadores de DPOC apresentaram maiores porcentagens de células terminalmente diferenciadas, sugerindo exaustão celular destes linfócitos, e menores porcentagens de células de memória central e memória efetora. Pacientes com DPOC apresentam maiores quantidades de citocinas comparados aos tabagistas sem DPOC. Já na comparação pré e pós-reabilitação verificamos menores quantidades de leucócitos, menores pontuações nos questionários de sintomas, e maiores distâncias percorridas no teste de caminhada de 6 minutos. Na avaliação da linfoproliferação, para as células estimuladas com mitógeno (fitohemaglutinina) e antígenos (citomegalovirus e Haemophilus influenza) foi possível verificar melhora na resposta linfoproliferativa dos pacientes no período pós-reabilitação, assim como maiores níveis da citocina imunoreguladora IL-10. Deste modo concluímos que pacientes com DPOC possuem um perfil mais pró-inflamatório e de diferenciação terminal que tabagistas sem a doença e que exercício físico é capaz de modular o ambiente inflamatório melhorando alguns parâmetros da resposta imune celular / The advanced stages of COPD are long and painful with increase of symptoms making the patients enter a vicious cycle of deterioration of physical capacity, dyspnea, anxiety and social isolation. Therefore, the exercise shows an important component of COPD pathogenesis, assisting in pharmacological treatment, reducing symptoms and enhancing life quality. In this context, there are no concise reports in literature about the role of physical activity in the pattern of cytokine secretion and proliferative response in COPD patients. Besides this, there is no consensus in the data comparing smokers with COPD and smokers without COPD. Because of this, we compared some immune parameters of smokers with COPD and smokers without COPD, and evaluated the cellular immune response before and after a rehabilitation program offered at the Hospital das Clínicas FMUSP. Blood collection was performed in two moments in the COPD group (before and after the rehabilitation program), and once in smokers without COPD. After that the samples were processed to peripheral blood mononuclear cells isolation, in which were analyzed the cellular proliferation and apoptosis, the lymphocyte phenotypic characteristics, the telomere length and the cytokines levels in serum and culture supernatants. Smokers without COPD have lower levels of C reactive protein, and a trend to greater percentages of lymphocytes than in smoker with COPD. The telomere length of COPD patients was shorter than that of smokers without COPD, especially in TCD8+ lymphocytes, with a non-significant trend in the TCD4+ lymphocytes. The TCD8+ subpopulation of COPD patients comprised greater percentages of terminally differentiated cells, and lower percentages of central memory and effector memory cells, suggesting a bias to more terminally differentiated (and eventually exhausted) cells. Moreover, the levels of pro inflammatory cytokines were greater in COPD patients. Evaluation of the exercise effect, we found greater quantities of leucocytes, lower scores in the symptoms questionnaires and longer distances in the six minute walk test after the rehabilitation program. Besides this, the proliferative response to the mitogen phytohemaglutinin, and the antigens from cytomegalovirus and nontypeable Haemophilus influenza were all improved after the exercise program with greater levels of secretion of the anti-inflammatory cytokine IL-10. In conclusion, COPD patients have a pro inflammatory profile and a bias for more terminally differentiated (and eventually exhausted) cells when compared with smokers without COPD, and that the exercise program is capable of modulating the inflammatory microenvironment enhancing some parameters of the cellular immune response

Os estágios avançados da DPOC são longos e dolorosos processos onde há o aumento dos sintomas, fazendo com que o paciente entre em um ciclo vicioso de deterioração da capacidade física, dispneia, ansiedade e isolamento social. Deste modo, o exercício vem se mostrando um componente importante na DPOC, auxiliando no tratamento medicamentoso para a redução dos sintomas e melhora da qualidade de vida. Neste contexto, não há muitos relatos na literatura sobre o papel da atividade física no padrão de secreção de citocinas e na resposta proliferativa de pacientes com DPOC. Além disso, não há muita concordância sobre o comprimento do telômero e fenótipo celular quando a comparados tabagistas que não desenvolvem a doença e pacientes com DPOC. O objetivo deste trabalho foi comparar alguns parâmetros imunológicos entre pacientes com DPOC e indivíduos tabagistas sem DPOC, e em pacientes com DPOC antes e após o programa de reabilitação oferecido no Hospital das Clínicas da FMUSP. As coletas de sangue foram realizadas em dois momentos para o grupo DPOC (pré e pós-programa de reabilitação pulmonar), e em um único momento para o grupo tabagista. Estas amostras foram processadas para obtenção de células mononucleares do sangue periférico, onde foram analisados os seguintes parâmetros: proliferação celular e apoptose, fenotipagem de linfócitos, comprimento relativo do telômero e dosagem de citocinas. Verificamos que indivíduos tabagistas possuem menores quantidades de proteína C reativa que pacientes com DPOC, e uma tendência a maior número de linfócitos. Além disso, o comprimento relativo do telômero em tabagistas é maior do que em pacientes com DPOC, especialmente em linfócitos TCD8+, e em menor grau em linfócitos TCD4+. Linfócitos TCD8+ de portadores de DPOC apresentaram maiores porcentagens de células terminalmente diferenciadas, sugerindo exaustão celular destes linfócitos, e menores porcentagens de células de memória central e memória efetora. Pacientes com DPOC apresentam maiores quantidades de citocinas comparados aos tabagistas sem DPOC. Já na comparação pré e pós-reabilitação verificamos menores quantidades de leucócitos, menores pontuações nos questionários de sintomas, e maiores distâncias percorridas no teste de caminhada de 6 minutos. Na avaliação da linfoproliferação, para as células estimuladas com mitógeno (fitohemaglutinina) e antígenos (citomegalovirus e Haemophilus influenza) foi possível verificar melhora na resposta linfoproliferativa dos pacientes no período pós-reabilitação, assim como maiores níveis da citocina imunoreguladora IL-10. Deste modo concluímos que pacientes com DPOC possuem um perfil mais pró-inflamatório e de diferenciação terminal que tabagistas sem a doença e que exercício físico é capaz de modular o ambiente inflamatório melhorando alguns parâmetros da resposta imune celular / The advanced stages of COPD are long and painful with increase of symptoms making the patients enter a vicious cycle of deterioration of physical capacity, dyspnea, anxiety and social isolation. Therefore, the exercise shows an important component of COPD pathogenesis, assisting in pharmacological treatment, reducing symptoms and enhancing life quality. In this context, there are no concise reports in literature about the role of physical activity in the pattern of cytokine secretion and proliferative response in COPD patients. Besides this, there is no consensus in the data comparing smokers with COPD and smokers without COPD. Because of this, we compared some immune parameters of smokers with COPD and smokers without COPD, and evaluated the cellular immune response before and after a rehabilitation program offered at the Hospital das Clínicas FMUSP. Blood collection was performed in two moments in the COPD group (before and after the rehabilitation program), and once in smokers without COPD. After that the samples were processed to peripheral blood mononuclear cells isolation, in which were analyzed the cellular proliferation and apoptosis, the lymphocyte phenotypic characteristics, the telomere length and the cytokines levels in serum and culture supernatants. Smokers without COPD have lower levels of C reactive protein, and a trend to greater percentages of lymphocytes than in smoker with COPD. The telomere length of COPD patients was shorter than that of smokers without COPD, especially in TCD8+ lymphocytes, with a non-significant trend in the TCD4+ lymphocytes. The TCD8+ subpopulation of COPD patients comprised greater percentages of terminally differentiated cells, and lower percentages of central memory and effector memory cells, suggesting a bias to more terminally differentiated (and eventually exhausted) cells. Moreover, the levels of pro inflammatory cytokines were greater in COPD patients. Evaluation of the exercise effect, we found greater quantities of leucocytes, lower scores in the symptoms questionnaires and longer distances in the six minute walk test after the rehabilitation program. Besides this, the proliferative response to the mitogen phytohemaglutinin, and the antigens from cytomegalovirus and nontypeable Haemophilus influenza were all improved after the exercise program with greater levels of secretion of the anti-inflammatory cytokine IL-10. In conclusion, COPD patients have a pro inflammatory profile and a bias for more terminally differentiated (and eventually exhausted) cells when compared with smokers without COPD, and that the exercise program is capable of modulating the inflammatory microenvironment enhancing some parameters of the cellular immune response

A dinâmica da leishmaniose visceral humana na Amazônia brasileira é pouco conhecida e nos últimos anos tem aumentado a incidência da doença principalmente no Estado do Pará. Os objetivos do estudo foram: I) identificar indivíduos com infecção sintomática e/ou assintomática por Leishmania (L.) infantum chagasi, II) estudar os dois tipos de infecção, tanto clínica quanto imunologicamente, e III) estudar a taxa de prevalência da infecção. O estudo foi de corte transversal com 946 indivíduos de ambos os sexos, com idade a partir de 1 ano, vivendo em área endêmica de leishmaniose visceral americana (LVA), município de Barcarena, Pará, Brasil. Para o diagnóstico da infecção, foram usadas a reação dérmica de hipersensibilidade retardada (Reação Intradérmica de Montenegro) - RIM e a Reação de Imunofluorêscencia Indireta (RIFI). Foram diagnosticados 120 casos de infecção com taxa de prevalência de 12.6%; 8 casos mostraram alta soro-reatividade (1.280 a 120.240) IgG utilizando-se o teste da RIFI e nenhuma reação na RIM; 4 casos foram típicos de LVA e outros 4 casos de infecção subclínica oligossintomática. Os dois métodos imunológicos usados simultaneamente com o exame clínico permitiram a identificação de 5 perfis clínico-imunológicos: Infecção Assintomática (IA) 73,4%; Infecção Subclínica Resistente(ISR) 15%; Infecção Subclínica Oligossintomática (ISO) 3%; Infecção Sintomática (IS=LVA) 3% e, Infecção Inicial Indeterminada (III) 5% / The dynamic of the human visceral leishmaniasis in the Amazon region is not well known and the incidence of the diseases in the last years have increase mainly in the Para state. The objectives the study were I) to identify individuals with symptomatic and/or asymptomatic infection due to Leishmania (L.) i. chagasi, II) to study the two types of infection, both clinically and immunologically, and III) to study the prevalence rate of infection. This was a cross-sectional study with a cohort of 946 individuals, of both sexes, with age from one year old onward, living in an endemic area of American Visceral Leishmaniasis (AVL), municipality of Barcarena, Pará State, Brazil. For the diagnosis of infection, the delayed hypersensitivity skin reaction (LST) and the indirect fluorescent antibody test (IFAT) were used. One hundred twenty cases of infection were diagnosed, with a prevalence rate of 12.6%; 8 cases showed high seroreactivity (1.280 to 10.240, IgG) in IFAT and no reaction in the LST; 4 cases being of typical AVL and other 4 cases of subclinical oligosymptomatic infection. The two immunological methods used simultaneously, with the clinical examination enabled to identify 5 clinical-immunological profiles: Asymptomatic Infection (AI) 73.4%; Subclinical Resistant Infection (SRI) 15%; Subclinical Oligosymptomatic Infection (SOI) 3%; Symptomatic Infection (SI=AVL) 3% and, Indeterminate Initial Infection (III) 5%

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-03-27T14:02:09Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AnaliseImunologicaGenotoxica.pdf: 1336666 bytes, checksum: 4e5571e62941a2f1f595da14f8696549 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-04-06T12:47:08Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AnaliseImunologicaGenotoxica.pdf: 1336666 bytes, checksum: 4e5571e62941a2f1f595da14f8696549 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-06T12:47:08Z (GMT). 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A administração de 50 mg/kg de CY nos roedores, possibilitou observar uma significativa diminuição dos parâmetros de celularidade e peso relativo dos órgãos linfóides. A imunidade humoral dos roedores sofreu supressão, visto que foi realizada a análise da titulação de anticorpos, o ensaio sobre as células formadoras de placa e o teste de hemólise. Foram realizadas quatro inoculações desse imunossupressor e a periodicidade entre as inoculações foi determinada pela recuperação dos níveis de normalidade dos parâmetros supracitados. Nas duas vezes que foi administrada a droga, houve redução no número de linfócitos e posteriormente diminuição de neutrófilos, porém somente no segundo contato com a CY foi observada a imunossupressão. A análise da genotoxicidade da ciclofosfamida (CY) foi analisada através do ensaio cometa e foi de suma importância, pois dectamos danos genômicos ocorridos no DNA , expostos às diferentes doses da ciclofosfamida (CY), que foram de 50 mg/kg nas duas primeiras fases e de 25 mg/kg nas duas últimas fases do experimento. Além disso, foi verificado que os efeitos genotóxicos são cumulativos a cada dose de CY aplicada, pois mesmo sendo administrado na terceira fase, a metade da concentração (25 mg/kg) das duas inoculações inicias CY, o índice de danos não correspondeu a metade dos índices de danos da primeira e da segunda administração. Entretanto, ao analisarmos imunologicamente e genotoxicamente os roedores, nosso trabalho possibilitará testar novos esquemas terapêuticos de imunossupressão. / The development of this work has given up due to the need to better understand the immune system, taking into account the diversity of experimental immunosuppression models as well as the variety of immunological responses and genotoxic differences these, related species, the drug and doses used. Thus, aim of this study was to analyze the effects on the immune system and genotoxic effects in Rattus norvegicus Wistar, after inoculation of the alkylating agent cyclophosphamide (CY). The administration of 50 mg / kg in rodents CY, possible to observe a significant decrease in the parameters of cellularity and relative weight of lymphoid organs. The humoral immunity of rodents has undergone deletion, since the analysis of the antibody titration was performed on the test plate forming cells and hemolysis testing. four inoculations that immunosuppressant and the intervals between the inoculations was determined by recovery of normal levels of the above parameters were performed. Both times the drug was administered, there was a reduction in the number of lymphocytes and neutrophils subsequently decreased, but only the second contact CY was observed immunosuppression. The analysis of the genotoxicity of cyclophosphamide (CY) was analyzed using the comet assay and was of paramount importance because dectamos genomic damage occurring in DNA exposed to different doses of cyclophosphamide (CY), which were 50 mg / kg in the first two phases and 25 mg / kg during the last two phases of the experiment. Furthermore, it was found that the genotoxic effects are cumulative with each CY dose applied, because even being administered in the third phase, the middle concentration (25 mg / kg) of the two inoculations initial CY the damage index does not correspond to half damage indices of the first and second vaccination. However, the analysis and immunologically genotoxicamente rodents, our work will enable testing new therapeutic immunosuppression regimens.

CAPES / Este trabalho tem como objetivo principal a proposição de um sistema híbrido baseado em Computação Natural que seja capaz de solucionar, de forma eficiente, diferentes instâncias do problema de Despacho Econômico de Energia Elétrica com efeito de ponto de válvula. Para isso está sendo proposta uma abordagem baseada em um Algoritmo Cultural, o qual tem como espaço populacional um Algoritmo Imunológico Artificial. No espaço de crenças são utilizados quatro tipos de conhecimentos: situacional, normativo, topográfico e histórico. Nos protocolos de comunicação, a função de aceitação e dinâmica e a função de influência e baseada em um Sistema de Inferência Fuzzy, o qual define o possível percentual de aplicação de cada um dos conhecimentos. Para avaliar o paradigma proposto são utilizadas três instâncias do problema do Despacho Econômico de Energia Elétrica. Os resultados mostram que a introdução de um Sistema de Inferência Fuzzy, auxiliando a decisão do tipo de conhecimento a ser aplicado, pode trazer benefícios nos resultados. Na comparação com os resultados reportados na literatura, observa-se que a abordagem, apesar de não ter seus parâmetros otimizados para cada caso, e competitiva com os algoritmos do estado-da-arte. / The main objective of this work is the proposal of a hybrid system based on Natural Computing approaches, which is capable of efficiently solving different instances of the Economic Load Dispatch problem of electrical energy with valve-point effect. For this purpose it is developed a new approach based on Cultural Algorithm, which has as its population space an Artificial Immune System. In the belief space, we use four knowledge types: situational, normative, topographical and historical. In the communication protocols, the acceptance function is dynamic and the principal influence function is based on a Fuzzy Inference System which defines the probable percentage of application of each knowledge type. Three instances of the Economic Load Dispatch with Non-smooth Cost Functions problem are used to evaluate the proposed paradigm. The results show that the introduction of fuzzy systems to support the decision of which type of knowledge must be applied can bring benefits to the obtained results. Although its parameters were not optimized for each case of study, the proposed algorithm performed likewise the state-of-the-art algorithms.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Salmonellosis is a public health problem that involves issues in animal health and food handling practices that require combined actions to minimize its effects. This disease is a zoonosis with the greatest impact on public health throughout the world due to: high endemicity, high mortality and especially by its difficult to control and the development of antimicrobial resistance. This last issue has led the search for alternatives of control which includes probiotics, prebiotics and organic acids. Another important factor is the elucidation of the role of the immune system of the bird which is still largely unknown due to the complexity of this pathogen and the availability of more sensitive immunological techniques. In addition, rapid and accurate diagnoses which can detect all serotypes are utopian today. Therefore the need for more knowledge in this field is critical to a plan to control Salmonella spp. This work - divided into two chapters - aims to establish parameters of immune lymphocytes circulating through the technique of flow cytometry in birds infected with Salmonella Enteritidis and treated with organic acids, as well as evaluate the efficiency of phenotypic diagnosis by conventional microbiological method compared with quantitative methods, and the genotypic method, through the Real-time PCR in poultry samples from naturally and artificially infected with Salmonella spp. Thus, was noticed in the first study that groups not infected had higher average number of lymphocytes T CD4+, CD8β+, MHC IIbright+ and TCRVβ1+ and the infected group had a higher proportion of circulating cells and gradual recovery was observed when treatment was effective in bacterial reduction. In the second study there was variability in the behavior of different samples and there was no significant difference between the phenotypic and genotypic tests used. However no significant difference were note by x2 test between the phenotypic and genotypic methods evaluated in this experiment. / A Salmonelose é um problema de saúde coletiva a qual envolve questões de sanidade animal e de manejo de alimentos que requerem práticas conjugadas para minimizar seus efeitos. Essa enfermidade é uma das zoonoses com maior impacto sobre a saúde pública em todo o mundo devido à: elevada endemicidade, morbidade, difícil controle e, sobretudo, pelo desenvolvimento de resistência a antimicrobianos. Este último tem levado a busca de alternativas no controle as quais incluem probióticos, prebióticos e os ácidos orgânicos. Outro fator importante é a elucidação do papel do sistema imune da ave com relação a este micro- organismo, o qual é ainda pouco conhecido devido à complexidade deste patógeno e a indisponibilidade de técnicas imunológicas mais sensíveis. Além disso, um diagnóstico rápido e preciso capaz de detectar todos os sorotipos de Salmonella spp. ainda são utópicos. Portanto a necessidade de mais conhecimento neste campo é fundamental para estabelecer um plano de controle deste patógeno. Este trabalho - dividido em dois capítulos - teve como objetivo estabelecer parâmetros imunitários de linfócitos circulantes, através da técnica de citometria de fluxo, em aves contaminadas com Salmonella Enteritidis e tratadas com ácidos orgânicos, bem como avaliar a eficiência do diagnóstico fenotípico, pelo método microbiológico convencional comparado com métodos microbiológicos quantitativos, e com o método genotípico, pela técnica de Real-time PCR, em amostras de aves infectadas com Salmonella spp. de forma natural e experimental. Com isso percebeu-se no primeiro estudo (Capítulo 1) que grupos não infectados apresentaram maior quantidade média de linfócitos T CD4+, CD8β+, MHC IIbright+ e TCRVβ1+ e o grupo infectado apresentou maior proporção de células circulantes e um retorno gradual foi observado quando o tratamento foi eficaz na redução bacteriana. No segundo estudo (Capítulo 2) existiu variabilidade no comportamento das amostras natural e experimentalmente infectadas em relação ao número de aves positivas e a técnica utilizada para a sua detecção. No entanto não houve diferença significativa pelo teste de Qui-quadrado entre os métodos fenotípicos e genotípicos avaliados neste experimento.

Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2012-12-03T15:52:09Z No. of bitstreams: 1 flavia_m_m_castro_ioc_bcm_0051_2011.pdf: 1677435 bytes, checksum: f9e5532070b14495eac22a682f175d18 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-12-03T15:52:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 flavia_m_m_castro_ioc_bcm_0051_2011.pdf: 1677435 bytes, checksum: f9e5532070b14495eac22a682f175d18 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / O Vírus linfotrópico humano de células T (HTLV) causa a Paraparesia espástica tropical/mielopatia associada ao HTLV-1 (TSP/HAM). A TSP/HAM é caracterizada por uma paraparesia crônica e progressiva com danos na medula espinhal. Outras doenças inflamatórias podem estar associados à TSP/HAM, como dermatite, meningite, encefalopatia, alveolite pulmonar, uveíte e miopatias. Pacientes com TSP/HAM e miopatias apresentam fraqueza muscular, atrofia e infiltrado inflamatório no tecido muscular, composto por linfócitos T CD4+ infectados pelo HTLV-1 ou não infectados e células T CD8+ HTLV-1 específicas. Isto sugere a participação do sistema imune no desenvolvimento desta doença. Estudos in vitro mostraram que células T HTLV-1+ ou seu sobrenadante podem gerar danos no tecido muscular, sem que o músculo esteja infectado. Neste contexto, nosso projeto visou determinar se ocorre modulação de expressão gênica de moléculas relacionados à migração celular em células musculares humanas após tratamento com sobrenadante concentrado de células T infectadas pelo HTLV-1, quando comparadas ao tratamento com solução salina. Observamos um aumento de expressão em cinco genes de integrinas, de dois genes que codificam cadeias de laminina, e também de três metaloproteinases, em células musculares tratadas com sobrenadante concentrado de células infectadas pelo HTLV-1. Nosso último objetivo foi confirmar a especificidade da modulação da expressão gênica causada por fatores secretados por células T infectadas pelo HTLV-1. A análise comparativa entre as células musculares tratadas com sobrenadante concentrado de célula T infectada versus célula T não infectada mostrou apenas um gene modulado entre esses dois grupos, o gene que codifica a proteína trombospondina-1. Em conclusão, mostramos que linfócitos infectados pelo HTLV-1 podem secretar fatores capazes de modular a expressão de genes relacionados à migração celular, como os genes de integrinas, moléculas de adesão, moléculas de matriz extracelular e metaloproteinases em células musculares esqueléticas. Considerando que dados semelhantes foram observados com sobrenadantes de linfócitos T ativados de linhagem Jurkat (não infectada por HTLV-1), é provável que fatores secretados pelos linfócitos infectados por HTLV-1 decorram de seu estado de ativação. / The human T cell lymphotropic virus (HTLV) can cause HTLV-1-associated myelopathy/tropical spastic paraparesis (HAM/TSP). HAM/TSP is characterized by a chronic and progressive paraparesis with spinal cord damage. Other diseases can be associated with HAM/TSP, such as dermatitis, meningitis, encephalopathy, pulmonary alveolitis, uveitis, and myopathies. HAM/TSP patients with myopathies present muscle weakness, atrophy and inflammatory infiltrate in muscle tissue, composed by infected and uninfected CD4+ T lymphocytes and HTLV-1 specific CD8+ T cells. These findings suggest the participation of the immune system during disease development. In vitro studies showed that HTLV-1-infected cells or their culture supernatants can generate muscle damage, even without muscle infection. In this context, our project aims to determine whether cellular migration-related genes are modulated in human muscle cells treated with culture supernatant from HTLV-1 infected T cells, or exposed only to phosphate buffered saline. We observed increased expression of five integrin, two laminin chain and three matrix metallopeptidases genes in muscle cells treated with supernatants from HTLV-1-infected cells. An additional goal was to confirm the specificity of gene expression modulation caused by soluble factors released by HTLV-1-infected cells. Thus, we analyzed modulation of gene expression in muscle cells treated with supernatants from either T cells infected or not by HTLV- 1. In these assays, we found alteration only in the thrombospondin-1 gene, which was down- regulated. In conclusion, we showed that HTLV-1-infected lymphocytes can secrete factors that are capable to modulate migration-related genes, such as genes of integrins, adhesion molecules, extracellular matrix molecules and matrix metallopeptidases in skeletal muscle cells. Considering that similar data were also observed with supernatant from an activated T lymphocyte lineage not infected by HTLV-1 (Jurkat cells), it is possible that secreted factors from HTLV-1 infected lymphocytes are related to its activation state.