Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Aretha.pdf: 947108 bytes, checksum: f5ca682ce13d6abc69dc5e8e029e1235 (MD5) Previous issue date: 2009-04-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Apesar da descoberta da ação leishmanicida dos antimoniais pentavalentes ter sido o fato de maior impacto na terapêutica da leishmaniose visceral (LV), seus efeitos tóxicos e o longo tempo de tratamento ainda limitam seu uso. Como droga de segunda escolha é utilizado o desoxicolato de anfotericina B, um antibiótico com alta atividade anti-Leishmania, sendo seu uso também restrito em virtude de sua alta toxicidade. Portanto, o grande desafio ao longo dos anos tem sido o desenvolvimento de novos medicamentos ou novas formulações de drogas já existentes, bem como a utilização de terapia combinada. Neste sentido, nos propusemos a avaliar o efeito da associação do antimoniato de meglumina e desoxicolato de anfotericina B (DAMB) e da atividade de uma nova formulação de anfotericina B (CAMB) na infecção experimental com L. (L.) chagasi. Os ensaios in vitro foram realizados utilizando macrófagos peritoneais murinos infectados com L. (L.) chagasi tratados com diferentes concentrações das drogas. A atividade das drogas foi determinada pela porcentagem de macrófagos infectados tratados em relação ao controle não tratado. Para avaliar o efeito da combinação foi utilizado o método da Razão Fixada Modificado e para classificar as interações foram utilizados como cuttoffs a média dos ΣFICs de 0,5 e 4. Os resultados demonstraram que a associação entre o antimoniato de meglumina e DAMB apresentou um efeito aditivo, com ΣFIC variando entre 0,65 e 1,02 para a CI50. Na análise in vitro da atividade de CAMB utilizamos como controle o DAMB e nossos resultados demonstraram uma atividade semelhante entre as duas drogas, com CI50 de 0,017 e 0,021 µg/mL para CAMB e DAMB respectivamente, no entanto apresentou uma menor citotoxicidade em relação a DAMB. Nos experimentos de infecção in vivo a CAMB não apresentou atividade quando administrada por via oral utilizando as doses de 1 e 5 mg/kg/dia durante 15 dias; enquanto que DAMB administrado por via intraperitoneal mostrou-se altamente eficaz, sugerindo que o uso de doses mais elevadas e vias alternativas de administração da CAMB ainda devem ser avaliadas para confirmar esses achados. / Despite the discovery of action antileishmanial of Pentavalent antimonials have been the fact that a greater impact on the therapeutic of visceral leishmaniasis, toxic effects and long-term treatment still limit their use. As the second drug of choice is the use of deoxycholate amphotericin B, an antibiotic with high anti-Leishmania activity, and its use is also restricted because of its high toxicity. The major challenge is the development of new drugs, or new formulations of standard drugs, and therapeutic regimens like drugs combinations. Thus, we evaluate the effect of association between meglumine antimoniate and anphotericin B desoxycholate and antileishmanial activity of a new formulation (CAMB) of amphotericin B in the experimental infection with Leishmania (Leishmania) chagasi. Peritoneal macrophages from mice infected with L. chagasi treated with different drugs. Drug activity was determined from the percentage of infected cells in drug-treated cultures in relation to nontreated cultures. In vitro drug interactions were assessed using a modified fixed-ratio method and to classify the interactions, means ΣFICs of 0.5 and 4 were used as cutoffs. The interaction of meglumine antimoniate and DAMB was additive with mean ∑FICs of 0,65 to 1.02 at the IC50 level. To analysis in vitro activity of CAMB was used as control DAMB, and the results showed a similar activity between the two drugs, with IC50 of 0,017 and 0,021µg/mL for CAMB and DAMB respectively, however showed a lower cytotoxicity compared to DAMB. However, in vivo infection mice, CAMB showed no efficacy when administered orally at doses of 1 and 5mg/kg/day for 15 consecutive days, while DAMB injected intraperitoneally was highly effective, suggesting that the use of higher doses and alternative routes of administration of CAMB yet to be evaluated to confirm these findings.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao de Debora Maria Pires Goncalves Barreira.pdf: 7893356 bytes, checksum: 73f7565f4fa0af37c7e9308a6bf8d2dc (MD5) Previous issue date: 2008-12-19 / Noroviruses (NoVs) are a major etiological agent of sporadic acute gastroenteritis worldwide. The aim of this study were to detect, to quantify and to determine the genotype of NoVs from children up to three years old symptomatic (with gastroenteritis) and asymptomatic (without gastroenteritis), in the emergency room of Hospital Infantil Nossa Senhora Glória (HINSG), in Vitória-ES, between February 2003 and June 2004. NoVs were investigated by RT-PCR in a total of 319 fecal specimens from children up to three years old with (n=229) and without (n=90) acute diarrhea. NoVs were quantified by real time RT-PCR, sequenced and genotyped by phylogenetic analysis. NoVs were detected in 17% (40/229) and 13% (12/90) of symptomatic and asymptomatic children, respectively. Five NoVrotavirus A mixed infections were observed in symptomatic children. Out of the 52 positive strains, 51 were grouped as NoV GII and one as GI. Data from sequencing and phylogenetic analyses classified 20 strains into the following genotypes: GII/4 (9/13), GII/3 (1/13), GII/6 (2/13) and GII/14 (1/13) in symptomatic and GII/3 (6/7) and GII/8 (1/7) in asymptomatic children. The median RNA viral loads were 8.39 and 7.15 log10 copies/g of fecal specimens for symptomatic and asymptomatic children, respectively (p=0.011). NoV load was lower when it was present in a mixed infection with rotavirus A (p=0.0005). Vomiting and diarrhea were observed in 97.5% of the positive cases without association with viral load. This study demonstrates a great diversity of NoV strains circulating in this geographic area, and reports GII/8 and GII/14 in the American Continent for the first time. In addition, it confirms GII/4 as the most prevalent genotype in symptomatic children and identified GII/3 in an important frequency, especially in asymptomatic children. Furthermore, preliminary results show that symptomatic patients present a viral load that is significantly greater than asymptomatic children (p=0.011) and suggest that rotavirus A may have a suppressor effect on NoV replication when mixed infection occurs / Norovírus (NoVs) são importantes agentes etiológicos de gastroenterite aguda em todo o mundo. O objetivo deste estudo foi detectar, quantificar e determinar o genótipo de NoVs em crianças de até três anos de idade, sintomáticas (com gastroenterite aguda) e assintomáticas (sem gastroenterite aguda), atendidas no pronto socorro do Hospital Infantil Nossa Senhora Glória (HINSG), no período de fevereiro de 2003 a junho de 2004, na cidade de Vitória, Espírito Santo, Brasil. NoVs foram pesquisados por RT-PCR em um total de 319 amostras fecais de crianças com (n=229) e sem (n=90) sintomas de gastroenterite. RNA de NoVs foram quantificados por RT-PCR em tempo real, seqüenciados e submetidos a análise filogenética. NoVs foram detectados em 17% (40/229) e em 13% (12/90) de crianças sintomáticas e assintomáticas, respectivamente. Foram observadas cinco infecções mistas de NoV-rotavírus A nas crianças sintomáticas. Os genogrupos de NoVs foram caracterizados como: GII (51/52) e GI (1/52). Seqüenciamento e análises filogenéticas classificaram 20 cepas nos seguintes genótipos: 9 GII/4 (45%), 1 GII/3 (5%), 2 GII/6 (10%) e 1 GII/14 (5%) em crianças sintomáticas e 6 GII/3 (86%) e 1 GII/8 (14%) em crianças assintomáticas. A mediana da concentração de RNA viral foi de 8,39 versus 7,15 log10 cópias/g de fezes para crianças sintomáticas e assintomáticas, respectivamente (p=0,011). A concentração de NoVs foi menor quando presente em infecção mista com rotavirus (p=0,003). Vômito e diarréia foram observados em 97,5% dos casos positivos e não apresentaram associação com concentração viral. Este estudo demonstra uma grande diversidade de cepas de NoVs na área geográfica do estudo, evidencia GII/4 como o genótipo mais prevalente nas crianças sintomáticas e destaca GII/3 em uma importante frequência, especialmente em crianças assintomáticas. Ainda, revela os genótipos GII/8 e GII/14 pela primeira vez no continente americano. Os resultados preliminares mostram uma concentração fecal de NoVs em pacientes sintomáticos significantemente maior do que em pacientes assintomáticos e sugere que os rotavírus A podem ter uma ação supressora na replicação de NoVs quando ocorre em infecção mista

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao de CARLOS GUSTAVO VIEIRA DE MORAIS Mestrado.pdf: 1404624 bytes, checksum: af980fd6a0eace35ef57ef3976406694 (MD5) Previous issue date: 2009-02-16 / Microscopy smear is the primary method for diagnosing pulmonary tuberculosis (TB). The method is fast, inexpensive, and specific for Mycobacterium tuberculosis. However, its sensitivity is relatively low, especially in patients with paucibacillary disease which emphasizes the need for improving and/or development of new methodologies. In this context, the aim of this study was to standardize and assess the accuracy of smear microscopy using polycarbonate membranes after centrifugation of sputum samples by filtration (BacFil System) in TB diagnosis. First, we evaluated the system components and established its operating conditions. Then, to assess the system performance, a total of 450 spontaneous sputum samples from 331 patients suspected of having TB was submitted to direct smear and, after that, digested with NALC and divided into two aliquots. One aliquot was concentrated and submitted to smear microscopy and culture, while the other was treated with a solution containing sodium hypochlorite, ethanol and Triton and filtered through 13mm membranes with 0,8μm pore size in the BacFil System. After filtering, the membranes were transferred to slides, stained and a microscopic semi-quantitative analysis was done. The BacFil System showed a sensitivity of 90,8% (82,7 95,9) compared to 64,4% (53,4 74,3) and 59,5% (43,3 74,4) for the centrifugation method and direct smear, respectively. The method demonstrated a highly significant enhancement in sensitivity, operational safety, low cost and also spares the use of a centrifuge. Although BacFil is a very promising method for early diagnosis of TB, we consider it must be improved and evaluated in a multicentric study (Phase III) before its use in a laboratory routine / A baciloscopia é o principal método para o diagnóstico da Tuberculose (TB), em razão de sua simplicidade, rapidez e baixo custo. Porém sua sensibilidade é baixa, principalmente nas formas paucibacilares da doença o que corrobora a necessidade de aprimoramento ou desenvolvimento de novas metodologias. Diante deste fato, nos propusemos padronizar e avaliar a acurácia do exame de baciloscopia em membrana de policarbonato após concentração de amostras de escarro por filtração (Sistema BacFil), para o diagnóstico da tuberculose pulmonar. Na primeira fase do estudo foram avaliados os componentes do protótipo do sistema e estabelecido suas condições operacionais. Na segunda fase, para avaliação do sistema, um total de 450 amostras de escarro espontâneo de 331 pacientes com suspeita clínica de TB foi submetido à confecção de esfregaços diretos, em seguida, digerido com NALC e dividido em duas alíquotas. Uma alíquota foi concentrada e submetida ao exame de cultura para micobactérias e ao exame de baciloscopia. A segunda alíquota foi tratada com uma solução contendo hipoclorito de sódio, etanol e Triton e em seguida filtrada através de membranas de 13 mm com poros de 0,8m pelo Sistema BacFil. Após o procedimento de filtração as membranas foram transferidas para lâminas, coradas e examinadas semi-quantitativamente no microscópio. Ao analisarmos os resultados deste estudo verificamos que o Sistema BacFil proporcionou uma sensibilidade de 90,8% (82,7 95,9) e especificidade de 100% quando comparado ao exame de cultura. Superior as sensibilidades de 64,4% (53,4 74,3) e 59,5% (43,3 74,4) encontrados respectivamente pelos métodos de concentração por centrifugação e esfregaço direto. Ao avaliarmos criticamente a performance deste método constatamos ainda que o mesmo apresenta segurança operacional, elevada acurácia para o diagnóstico, baixo custo econômico e dispensa o uso de centrifuga. Apesar de reunir estas características que o credencie como um método promissor para o diagnóstico rápido da tuberculose, consideramos ainda que este protótipo (BacFil) deva ser aperfeiçoado e submetido a um estudo multicêtrico (Fase III) para validar a sua performance no diagnóstico da tuberculose pulmonar em condições de rotina

A utilização da terapia antiretroviral, atualmente mais amplamente acessível, implica na permanência da identificação da resistência viral e monitoramento da doença como itens importantes em adultos e pacientes pediátricos infectados pelo vírus da imunodeficiência humana tipo 1. Os principais marcadores da infecção por HIV-1, utilizados no monitoramento da infecção e curso da doença, são as contagens de células T CD4+ e a carga viral. Ambos são úteis como parâmetros indicadores para o início da terapia e na avaliação de sua eficácia. Além disto, a sua associação a testes de genotipagem para a identificação de mutações de resistência viral, pode auxiliar na indicação da conduta clínica mais adequada. No presente estudo, analisamos os valores da carga viral e taxas de linfócitos T CD4+ e CD8+ na avaliação do status imunológico de 25 crianças com indicação para a terapia antiretroviral, condicionando o regime terapêutico aos resultados do teste de genotipagem. A identificação dos subtipos virais foi feita por análise filogenética e a genotipagem incluiu a análise dos genes protease e transcriptase reversa do HIV-1. Dezoito amostras foram agrupadas no subtipo viral B e três no subtipo F1; cepas recombinantes também foram observadas, sendo uma BF, duas BD e uma DF. Dezoito crianças apresentaram mutações conferindo resistência viral aos inibidores da transcriptase reversa análogos de nucleosídeo e sete crianças apresentaram resistência aos inibidores não-análogos, com seis relatando resistência a nevirapina, delavirdina e efavirenz. Além disto, duas crianças, nas quais a terapia havia sido descontinuada dois a três anos antes da avaliação do teste de genotipagem, apresentaram as mutações K101E, K103N e G190A, conferindo resistência às três drogas. As mutações mais frequentes para o gene da transcriptase reversa foram observadas nos codons M41L, M184V e T215FY. Entretanto, dez crianças apresentaram relevante número de mutações de resistência viral, variando entre cinco a dez, que conferiram resistência a no mínimo quatro e até onze drogas antiretrovirais. Para o gene da protease, as mutações de resistência mais comuns foram observadas nos codons M46I, D30N e I54LV. Treze crianças apresentaram resistência viral a, no mínimo, duas e até 12 drogas. A adequação da terapia antiretroviral altamente potente (HAART), de acordo com o padrão de resistência viral, permitiu observar aumento dos valores de células T CD4+ em 12 dos 25 pacientes pediátricos, demonstrando melhoria na sua condição de imunodeficiência associada ao HIV. Decréscimos importantes da carga viral foram observados em 17 crianças, com níveis indetectáveis de RNA HIV alcançados em 13 delas, sendo 11 com linhagens virais resistentes a múltiplas drogas. O desenvolvimento de linhagens virais resistentes é uma das principais razões da falha terapêutica. Mesmo considerando outros fatores causais, tais como aderência, metabolismo e níveis adequados das drogas, a identificação do perfil de resistência viral é um importante fator na conduta para a adequação de esquemas terapêuticos, dando suporte ao uso racional das drogas antiretrovirais em programas de tratamento. / With antiretroviral therapy becoming more widely available nowadays, Human Immunodeficiency Virus type 1 resistance identification and monitoring of disease remains of great importance in adults and infected children. The major HIV-1 infection markers usually used for monitoring viral infection and disease course are CD4+ T cell counts or percentages and HIV viral load. Both of them are helpful indicating when to start therapy and evaluating its efficacy. Also, their association with genotyping tests to identify viral resistant mutations may help clinicians for the most adequate clinical conduct. In the present study, we assessed HIV-1 viral load and CD4+ and CD8+ T lymphocyte rates for the immunological status evaluation of 25 antiretroviral-treated children managing therapeutic regimens according to genotyping test results. Drug resistance evaluation was done using genotyping covering protease and reverse transcriptase genes. Additionally, all of the 25 vertically HIV-1 infected children were assessed for viral subtyping throughout phylogenetic analysis. Eighteen samples clustered at B subtype and three clustered at F1 subtype; one BF, two BD and one DF recombinant strains were also observed. Eighteen children presented, at least, one mutation conferring resistance to the nucleoside reverse transcriptase inhibitors, and seven children presented resistance to the non-nucleoside inhibitors, with six resistant to all three drugs, nevirapine, delavirdine, and efavirenz. In addition, two children in whom the therapy had been discontinued two to three years before testing presented K101E, K103N, and G190A mutations conferring resistance to the all three drugs. Reverse transcriptase gene mutations were more frequently observed at codons M41L, M184V, and T215FY. However, ten children presented an important number of viral resistance mutations, ranging from five to ten mutations, conferring resistance to at least four to up to eleven antiretroviral drugs. Protease gene mutations were more frequently seen at codons M46I, D30N, and I54LV. Thirteen children presented viral resistance to at least two to up to twelve drugs. The management of the highly active antiretroviral therapy (HAART) according to viral resistance in our group of pediatric patients allowed an increase in CD4+ T cell counts and/or percentage in 12 of the 25 children, showing an improvement in their HIV-associated immunodeficiency status. Important viral burden declines were observed in 17 children, and HIV RNA undetectable levels were reached in 13 of them. Among these 17 children, 11 were multi-drug resistant. The development of resistant viral strains is one of the main reasons for failure of antiretroviral therapy. Even considering other causal factors such as compliance of the patient, metabolism of drugs and drug levels, viral resistance profile identification is an important factor in the management of therapeutic regimens, supporting the rational use of antiretroviral drugs by treatment programs.

A mastite bovina é comprovadamente um dos maiores problemas atuais da pecuária leiteira no Brasil e no mundo, acarretando ônus aos produtores, à indústria e ao consumidor final. Foram analisadas 240 amostras de leite proveniente de animais com mastite clínica e de animais com mastite subclínica, criados em propriedades leiteiras de alta produção, da região do Planalto Médio, Rio Grande do Sul. Houve isolamento de 250 agentes bacterianos em 218 amostras (90,8%) e 65 agentes leveduriformes em 39 amostras (16,25%). Foram identificados 10 gêneros e 12 espécies de bactérias, sendo os gêneros Staphylococcus, Corynebacterium e Nocardia responsáveis por 88% dos isolados. Foram identificados 08 gêneros (29 espécies) de leveduras além de 02 gêneros de fungos semelhantes a leveduras (04 espécies), sendo os gêneros Candida, Pichia, Cryptococcus e Rhodotorula responsáveis por 80% das espécies isoladas.Apenas 03 amostras apresentaram crescimento puro de leveduras, o restante estando associado com isolamentos bacterianos, o que demonstra uma importante relação entre fungos e bactérias na etiologia das mastites. Mais de 90% dos agentes leveduriformes isolados tiveram crescimento em temperaturas acima de 37ºC, demonstrando seu potencial patogênico. Verificou-se que a prevalência de mastite fúngica na região é significante e fortemente relacionada com a presença de agentes bacterianos, o tratamento inadequado com produtos antimicrobianos e a saúde do úbere. / The bovine mastitis is one of the largest problems of dairy herds in Brazil and all over the world, resulting in losses to producers, to the industry and to the final consumer. High production dairy herds were analyzed in Planalto Médio, Rio Grande do Sul, were 240 samples with clinical and subclínica mastitis were collected. There was the isolation of 250 bacterial agents in 218 samples (90,8%) and 65 yeast organisms in 39 samples (16,25%). There was identification of 10 genera and 12 species of bacteria, and 88% of the isolates were from genera Staphylococcus, Corynebacterium and Nocardia. There was the identification of 08 genera (29 species) of yeasts and 02 genera of yeast-like organisms (04 species), and 80% of the isolates were from genera Candida, Pichia, Cryptococcus and Rhodotorula. Only 03 samples presented pure growth of yeasts, the remaining was associated with bacterial isolations, which demonstrates an important relationship between yeasts and bacteria in the etiology of the mastitis. More than 90% of the yeast isolates had growth in temperatures above 37ºC, which demonstrates their pathogenic potential. It was verified that in this particularly region, the occurrence of mastitis caused by yeasts has a significant importance and are closely related with the bacterial agents' presence, the inadequate treatment with antibiotic products and udder’s health.

O resultado deste estudo foi dois artigos relacionados às lesões intestinais encontradas e presença de agentes associados a infecção por PCV2 e um terceiro artigo sobre a associação entre a presença de lesões histopatológicas em diferentes porções do trato intestinal e a carga viral presente nestas regiões e nas fezes. O primeiro artigo apresenta as lesões macroscópicas e microscópicas encontradas em 79 animais da fase de crescimento. As principais lesões macroscópicas foram: aumento de tamanho dos linfonodos mesentéricos (56), enterite necrótica (24), edema mesentérico (20), linfangectasia (15) e espessamento da parede do íleo (5). Marcação IHQ anti-PCV2 foi associada com depleção de células caliciformes (24), atrofia e fusão de vilosidades do íleo (18) e dilatação de vasos linfáticos (11). Foi observada a presença de co-infecções por Escherichia coli (5) Lawsonia intracellularis (1), Brachyspira spp.(4), Salmonella spp. (17), rotavírus (6) e calicivírus entérico (6). O segundo artigo avaliou 63 casos de enterite necrótica, nos quais o cólon foi o principal local onde foi observada necrose, aparecendo em 55 casos. Em 24 casos observou-se co-infecção de PCV2 e Salmonella spp. As alterações descritas: depleção de células caliciformes, índice apoptótico elevado em enterócitos do cólon, e marcação de IHQ positiva no citoplasma de enterócitos sugerem o envolvimento de PCV2 nos casos de enterocolite necrótica. A carga viral de PCV2 no trato intestinal, fezes e sangue de suínos, avaliada pela técnica de PCR em tempo real, associada com lesões histológicas e marcação de IHQ, bem como a interpretação destes resultados foi detalhadamente descrita no terceiro artigo. / The result of this study are presented in two articles describing intestinal lesions and the presence of associated agents with PCV2 and a third article that describes the association between the presence of histopathological lesions in different areas of the intestinal tract and viral load present in those areas and in the feces. The first report showed macroscopical and microscopical lesions in samples collected from 79 growing pigs. The main macroscopical lesions were: enlargement of mesenteric lymph-nodes (56), necrotic enteritis (24), mesenteric edema (20), limphangectasy (15) and thickening of the ileal wall (5). Immunohistochemistry (IHC) staining anti-PCV2 was associated with depletion of goblet cells (24), villous fusion and atrophy of the ileum (18) and dilatation of lymphatic vessels (11). It was observed the presence of co-infections with Escherichia coli (5) Lawsonia intracellularis (1), Brachyspira spp. (4), Salmonella spp. (17), rotavirus (6) and enteric caliciviruses (6). The second article evaluated 63 cases of necrotic enteritis, in which the colon was the main target of necrotic lesions, observed in 55 cases. In 24 cases co-infection with PCV2 and Salmonella spp. was observed. The main findings described: depletion of goblet cells, high apoptotic rate in colon enterocites and positive anti-PCV2 IHC staining in cytoplasm of enterocites suggests the involvement of PCV2 in cases of necrotic enterocolitis. The viral load of PCV2 in intestinal tract, feces and blood of swine, associated with histological lesions and IHC staining, evaluated by Real time PCR technique, as well as the interpretation of these results were described in details in the third article.

O presente trabalho objetivou avaliar diferenças na patogenicidade de 19 cepas de B. pilosicoli isoladas de casos de diarréia em suínos no Estado do Rio Grande do Sul. Foi utiliza o modelo experimental em pintos de um dia, que possui boa eficiência quando usado para a infecção oral com a B. pilosicoli, pois permite a consistente colonização cecal dos animais inoculados. Através dessa infecção experimental, buscou-se estabelecer diferenças de patogenicidade entre cepas de referência da B. pilosicoli e cepas dessa espécie isoladas previamente de casos de diarréia em leitões no Rio Grande do Sul. Foram inoculadas 21 cepas de origem suína e duas cepas controle (uma a referência da espécie, P43/6/78 e um isolado humano, P16). Os animais foram inoculados por via oral com uma suspensão de bactérias vivas multiplicadas em meio líquido, num inóculo de 0,8 mL contendo 1x106 espiroquetas na fase logarítmica de crescimento. Decorridos 21 dias após a infecção experimental, os animais foram sacrificados e os cecos fixados em formalina 10% tamponada, processados para exame histológico e os cortes examinados através da coloração pela prata e com uma técnica imunohistoquímica. Com o uso da coloração pela prata, 65% dos animais mostraram colonização pela B. pilosicoli do epitélio do cecal. Houve diferenças no tipo de colonização, consistindo de aderência contínua, aderência focal ou presença de bactérias livres na luz intestinal. Com a técnica de imunohistoquímica, 76,2% das cepas mostraram colonização. Dessa forma, concluiu-se que a imunohistoquímica foi superior à coloração pela prata para a avaliação da colonização intestinal dos pintos, pois foi capaz de detectar 11,2% de cepas colonizadoras a mais do que a coloração pela prata Um segundo experimento visou avaliar a transmissão horizontal da infecção por B. pilosicoli. Para tal, foram mantidos em contato na mesma gaiola, pintos inoculados com a bactéria e animais chamados “contatos”, não inoculados. Com o uso da coloração pela prata, 23,8 % apresentaram-se positivos e, pela imunohistoquímica, 54,2 % foram positivos. Aqui também a imunohistoquímica revelou-se mais eficiente do que a coloração pela prata. Como conclusão desse experimento, as cepas de campo analisadas mostraram alta capacidade de difusão horizontal. Um achado inesperado foi a presença de figuras elongadas dentro do citoplasma das células epiteliais cecais entre alguns animais inoculados. Essas estavam presentes em 33,3 % das cepas, quando analisadas através da coloração pela prata. Pelos dados obtidos, não foi possível concluir que as figuras fossem Brachyspira pilosicoli, pois poderia tratar-se de outra bactéria intracelular ou artefato. Entretanto, como recentemente (no ano de 2003) foi realizado o primeiro registro por microscopia eletrônica de um achado de Brachyspira spp. intracelular, esse achado poderia significar uma alta capacidade invasiva entre as cepas analisadas. Novos estudos serão realizados e, caso comprovado, esse fato poderia auxiliar em muito o entendimento da patogenia da infecção pela B. pilosicoli, pouco clara até o momento.

Resumo não disponível.

A implementação de programas de controle de salmonela em suínos, com objetivo de diminuir os riscos de infecção alimentar em humanos, exige métodos rápidos e baratos para medir a intensidade da infecção, bem como reduzir seus fatores de risco. A partir disso, desenvolveu-se um teste de ELISA, utilizando antígeno lipopolissacarídeo do sorovar Typhimurium, pela sua similaridade antigênica com os sorovares prevalentes em suínos no Rio Grande do Sul. O teste padronizado foi utilizado na determinação da soroprevalência em 65 rebanhos suínos, os quais participaram de estudo para identificação de fatores de risco. As granjas foram classificadas em três categorias de soroprevalência, baixa (até 40%), média (40-70%) e alta (mais de 70%) prevalência, estabelecidas como variável explicada. As respostas do questionário contituíram as variáveis explicativas. Aquelas associadas à variável explicada pelo teste de χ2 (p ≤ 0,1) foram submetidas à análise fatorial de correspondência múltipla (AFCM). Paralelamente, foram avaliados seis desinfetantes (amônia quaternária, glutaraldeído, iodóforo, hipoclorito de sódio (1 e 0,1%), fenol e ácido peracético) frente a amostras de Salmonella Typhimurium isoladas de suínos. Os produtos foram testados na presença e ausência de matéria orgânica, sob duas diferentes temperaturas e, posteriormente, frente a 8 isolados com diferentes perfis de resistência antimicrobiana, por um tempo de contato de 5 minutos. O teste de ELISA identificou a soroconversão nos animais inoculados (7 dias p.i.) e contatos (21 dias p.i.), bem como o aumento no número de animais positivos após infecção natural (28,6% para 76,9%). A sensibilidade e a especificidade do teste foram respectivamente de 92 e 100%. Após adaptações para suco de carne, estabelecendo o soro como referência, a sensibilidade do teste para suco de carne foi de 88,12% e a especificidade 70,43%. Em análise de concordância entre os testes, o índice kappa foi de 5,78, com p=0,002 no teste MacNemar. A AFCM identificou a associação da maior soroprevalência com o seguinte grupo de variáveis: nas granjas terminadoras, uso de ração peletizada, distribuição de dejetos a menos de 100m do local de captação de água, não utilização de comedouro do modelo comedouro/bebedouro, transporte com freteiro misturando animais de várias granjas; enquanto nas granjas de ciclo completo apareceram ingredientes de ração desprotegidos de outros animais, ausência de controle de roedores, ração seca, ausência de cerca, não uso da pintura com cal após lavagem e desinfecção e a entrada de outras pessoas além do técnico na granja. Todos os desinfetantes foram eficazes na ausência de matéria orgânica, nas duas temperaturas testadas. Entretanto, quando na presença de matéria orgânica ou após cinco minutos de contato, somente o hipoclorito de sódio (1%), fenol e o ácido peracético foram eficazes. Dessa forma, ao estabelecer uma ferramenta sorológica para medir a infecção pelos principais sorovares de Salmonella que afetam os suínos no sul do Brasil e identificar fatores de risco associados à alta soroprevalência, será possível dar início à implementação e validação de protocolos de controle da infecção em rebanhos.

Orientador : Rafael Frederico Bruns / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Tocoginecologia. Defesa : Curitiba, 21/07/2017 / Inclui referências : f. 66-77 / Resumo: Objetivo: Comparar o desempenho do método utilizado atualmente para o diagnóstico ultrassonográfico de microcefalia no período pré-natal, o Escore z (considerado padrão-ouro), com a curva de Percentis (mais utilizada na prática clínica). Material e Método: Foram selecionadas gestantes que fizeram seus exames ultrassonográficos de pré-natal em uma clínica privada de Curitiba. As medidas da circunferência craniana fetal foram avaliadas qualitativamente. Também foram classificadas conforme a sua distribuição na curva proposta por Hadlock et al., segundo os Percentis e Escore z, em suspeitas de microcefalia de acordo com 4 critérios (medidas abaixo do 5o Percentil; medidas abaixo do 2o Percentil; medidas de 2 DP abaixo da média esperada para a idade gestacional e medidas a 3 DP abaixo da média esperada para a idade gestacional). As medidas que não se enquadravam nesses critérios foram consideradas normais. Um questionário foi aplicado às gestantes para determinar se a suspeita ou a ausência de suspeita de microcefalia eram confirmadas após o parto. Resultados: Foram analisados 1683 exames ultrassonográficos de 400 gestantes, realizados nos 2º e 3º trimestres da gravidez, sendo 640 (38%) no 2º trimestre e 1043 (62%) no 3º trimestre. Ao se adotar o limiar de -3DP da média para a idade gestacional, em 0,9% dos exames o feto foi considerado microcéfalo; utilizando o corte de -2DP o valor foi de 4,2% exames positivos para microcefalia; com medidas abaixo do 2o percentil foram 3,9% e abaixo do 5o percentil foram 8%. Nenhum dos fetos da amostra teve a suspeita de microcefalia confirmada após o parto. A especificidade variou de 92 a 99,1% (para corte abaixo do 5o percentil e abaixo de 3DP, respectivamente). Foi encontrada diferença significativa (p<0,001) entre os dois trimestres quanto à proporção de casos suspeitos de microcefalia. Conclusão: Utilizar a curva de Percentis para suspeitar de microcefalia fetal aumenta a probabilidade de falsos positivos. Apesar do critério de corte da circunferência craniana em "abaixo do 2o percentil" e em "- 2DP" apresentarem eficácia semelhante no diagnóstico de microcefalia, é o Escore z que deve ser utilizado para diagnosticar essa anomalia. Descritores: Microcefalia; Ultrassonografia Pré-natal; Infecção Congênita; Zika Vírus; Circunferência craniana. / Abstract: Purpose: To compare the performance of the currently method used for the ultrasonographic diagnosis of prenatal microcephaly, the z-score (considered gold standard), with the percentis curve (most used in clinical practice). Material and Method: were selected pregnant women who performed their prenatal ultrasound exams in a private clinic in Curitiba, Brazil. Measurements of fetal head circumference were qualitatively evaluated. They were also classified according to their distribution in the curve proposed by Hadlock et al, according to the percentiles and z-score, in suspected microcephaly according to 4 criteria (measures below the 5th percentile, measures below the 2nd percentile; measures 2 SD below the expected average for gestational age, and measures 3 SD below the expected average for gestational age). Measures that did not meet these criteria were considered normal. A questionnaire was applied to pregnant women to determine whether the suspicion or absence of suspected microcephaly was confirmed after birth. Results: A total of 1683 ultrasound exams of 400 pregnant women performed in the 2nd and 3rd trimesters of pregnancy were analyzed, 640 (38%) in the 2nd trimester and 1043 (62%) in the 3rd trimester. When adopting the threshold -3SD below average for gestational age, in 0.9% of the exams the fetus was considered microcephalus; using the threshold of -2SD, the result was 4.2% positive for microcephaly; 3.9% had measures below the 2nd percentile, and 8% below the 5th percentile. None of the fetuses in the sample had the suspected microcephaly confirmed after delivery. The specificity varied from 92 to 99.1% (for threshold below the 5th percentile and below -3SD, respectively). A significant difference (p <0.001) was found between the two trimesters regarding the proportion of suspected cases of microcephaly. Conclusion: To use the Percentis curve to suspect fetal microcephaly increases the propability of false positives. Although the cranial circumference at "below the 2nd percentile" and at "-2DP" have similar efficacy in the ultrasound diagnosis of microcephaly, it is the z score that should be used to diagnose this anomaly. Key words: Microcephaly; Ultrasonography, Prenatal; Congenital Infection, Zika Virus, Cephalometry.