Orientador : Gilberto de Nucci / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-17T10:52:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marangoni_RossanaAnderson_M.pdf: 1280913 bytes, checksum: f2bdf09b8d914991d8c83f51bef84581 (MD5) Previous issue date: 1992 / Resumo: Esta tese descreve a atividade do veneno de Phoneutria nigriventer na permeabilidade vascular em pele de rato e coelhos. Os animais foram anestesiados e, em seguida, injetados com uma mistura de azul de Evans (0.5 ml/kg, 2.5 %) e albumina marcada (1.5 ?Ci/Kg 125I-albumina). As substâncias a serem testadas foram injetadas intradermicamente no dorso dos animais em doses repetidas (6 sítios por dose). Após 30 minutos, foi coletado o sangue (punção cardíaca) e o mesmo foi sacrificado injetando-se sobredose de anestésico. Em seguida, a pele dorsal foi removida e os sítios foram cortados para contagem de radioatividade acumulada. O veneno bruto e dialisado de Phoneutria nigriventer (1-30 pg) aumentaram a permeabilidade vascular em pele de ratos e coelhos. Em pele de ratos, mepiramina e metisergida aboliram o edema induzido pelo veneno bruto, entretanto, o mesmo não foi observado com o veneno dialisado na presença de um vasodilatador. Em pele de coelhos, o efeito do veneno de Phoneutria nigriventer dialisado (30 µLg/sítio) na presença de PGE1, foi inibido significantemente pelo trasilol (inibidor inespecífico da calicreína plasmática), antagonista de receptor B2 e o mesmo foi potenciado na pelo de captopril. O inibidor específico de calicreína plasmática, "soybean trypsin inhibitor" não afetou significantemente o edema induzido pelo veneno. Entretanto, a formação de bradicinina in vitro pela incubação de plasma de coelho com tripsina foi abolida quando o plasma foi pré-incubado com (SBTI). O antagonista de receptores de PAF (WEB 2086), e o inibidor específico de lipoxigenase (BWA4C) não alteraram significativamente o edema induzido pela co-injeção de PNV e PGE1. Estes resultados indicam que o edema induzido pelo PNV é decorrente da ativação da calicreína tecidual / Abstract: The effect of Phoneutria nigriventer venom (PNV) injected intradermally on vascular permeability of both rat and rabbit skin have been investigated. Oedema formation was measured as the local extravascular accumulation at skin sites of intravenously injected 125I-human serum albumin. In both rat and rabbit PNV induced dose-dependent oedema which was greatly potentiated by the vasodilators calcitonin gene-related peptide and prostaglandin E1. In rats PNV-induced oedema was markedly reduced either by previous treatment of the animais with the histamine H1 antagonist mepyramine and the serotonin antagonist methysergide or when venom was dialysed, indicating a major role for histamine and serotonin. In rabbits, dialysis of the venom to remove histamine and serotonin did not reduce PNV-induced oedema, indicating presence of oedematogenic component(s) which is (are) different from the amines histamine or serotonin. Phoneutria nigriventer venom (10-30 µg/site) increased vascular permeability, which was inhibited by trasylol (10 µg/site) and the bradykinin B2 receptor antagonist D-Arg,[Hyp³,Thi5,8,D-Phe7]-Bk (3 nmol/site). In addition, the oedema induced by the venom was potentiated by the kininase II inhibitór captopril (1 nmol/site). The lipoxygenase inhibitor BWA4C (10 nmol/site) and the PAF antagonist WEB (100 nmol/site) had no effect on the venom-induced increase in vascular permeability. Incubation of rabbit plasma with Phoneutria nigriventer venom in vitro did not cause bradykinin formation. Further the plasma kallikrein inhibitor soybean trypsin inhibitor (10 µg/site), had no effect on the venom-induced increase in vascular permeability in rabbit skin. Our results indicate that the oedema produced by Phoneutria nigriventer venom is dependent on the activation of the tissue kallikrein-kinin system / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-10-08T21:48:44Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Charles Fernandes dos Santos Simões.pdf: 1267840 bytes, checksum: fd5cd699bcc0a35150281d99cfaa2efc (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-11-22T17:34:06Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Charles Fernandes dos Santos Simões.pdf: 1267840 bytes, checksum: fd5cd699bcc0a35150281d99cfaa2efc (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-22T17:34:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Charles Fernandes dos Santos Simões.pdf: 1267840 bytes, checksum: fd5cd699bcc0a35150281d99cfaa2efc (MD5) Previous issue date: 2015-09-11 / Nos últimos anos, novos desafios têm surgido para os pesquisadores no âmbito das ciências médicas; sobretudo, destacam-se: a procura por novas terapias contra câncer, a busca por novos agentes anti-inflamatórios que não apresentem as reações adversas típicas e o combate à multirresistência microbiana. Annona muricata L. (Annonaceae), conhecida vulgarmente como gravioleira e na medicina popular, tem sido empregado no tratamento de inflamações, febres, infecções e diabetes. Além disso, tem demonstrado ser potencialmente eficaz na terapia contra o câncer. Com base nisso, objetivou-se, nesse trabalho, analisar o perfil fitoquímico de extratos obtidos das folhas de A. muricata L. e executar uma triagem farmacológica visando a avaliação do seu potencial antimicrobiano, citotóxico e anti-inflamatório. Primeiramente, foi realizada a extração das folhas de A. muricata L., utilizando os solventes hexano, acetato de etila, etanol e água, através da técnica de Soxhlet e obteve-se como respostas os respectivos rendimentos (3,37%, 3,20%, 6,22% e 9,09%). Em seguida, através da técnica de Cromatografia em Camada Delgada (CCD), foram identificados os grupos de metabólitos secundários. Posteriormente, avaliou-se a atividade antimicrobiana dos quatro diferentes extratos em questão frente a cepas de bactérias Gram-positivas, Gram-negativas e de fungos leveduriformes, assim como as atividades citotóxicas frente à três diferentes linhagens de células tumorais e as atividades anti-inflamatórias através da avaliação da produção de óxido nítrico (NO). A triagem fitoquímica revelou a presença de mono e sesquiterpenos, triterpenos e esteroides, flavanoides, taninos, cumarinas e alcaloides. Os extratos hexânico e acetato de etila não apresentaram atividade frente às cepas testadas, já os extratos etanólico e aquoso exibiram atividade frente a cepas Gram-positivas, com halos de 19 mm frente a Micrococcus luteus, para o extrato etanólico, e 18 mm frente a Staphylococcus coagulase-negativa para o extrato aquoso, e em algumas Gram-negativas, 11 mm frente a Proteus mirabilis para o extrato etanólico, porém sem atividade frente aos fungos. A respeito da atividade citotóxica, todos os extratos apresentaram atividades inibitórias frente às linhagens testadas, sobretudo a linhagem HEp-2 onde todos apresentaram inibição de 100% na concentração avaliada. A ação anti-inflamatória dos extratos também foi efetiva, todos os extratos analisados reduziram a produção de NO induzida a níveis basais em todas as concentrações estudadas, especialmente os extratos etanólico e aquoso. Pode-se considerar que A. muricata trata-se de uma opção para a busca de novos agentes terapêuticos e como fonte de moléculas de grande interesse científico. Os resultados corroboraram com o seu uso tradicional, reforçando mais ainda sua comprovação científica a respeito de suas propriedades, possibilitando assim maiores estudos para a sua viabilidade terapêutica. / In the recent years, new challenges have arisen for researchers in the field of medical science such as the quest for new therapies against cancer, the search for new anti- inflammatory agents that do not represent the typical adverse reactions and also the the struggle against microbial multidrug resistance. Annona muricata L. (Annonaceae), commonly known as soursop and famous for its therapeutic properties in folk medicine, has been employed in the treatment of inflammations, fevers, infections and diabetes. Moreover, it has shown to be potentially effective in cancer therapy. On this basis, the goal of this work was to analyze the phytochemical profile of extracts obtained from the leaves of A. muricata L. and run a pharmacological screening aimed at assessing its antimicrobial, cytotoxic and anti-inflammatory potential. Firstly, the extraction process was employed in the leaves of A. muricata L., using several solvents such as hexane, ethyl acetate, ethanol and water by Soxhlet extractor and were obtained their respective yields as responses (3.37%, 3.20%, 6.22% and 9.09%). Then, through Thin Layer Chromatography (TLC), the groups of secondary metabolites were identified. Subsequently, the four different extracts were evaluated concerning the antimicrobial activity against strains of Gram-positive bacteria, Gram-negative, and yeast fungi, as well as the cytotoxic activity against three different tumor cell lines and also the anti-inflammatory activities by assessing the production of nitric oxide (NO). The phytochemical screening revealed the presence of mono and sesquiterpenes, triterpenes and steroids, flavonoids, tannins, alkaloids and coumarins. The hexane extracts and ethyl acetate showed no activity against the strains tested, since the ethanol and aqueous extracts showed activity against Gram-positive strains, with halos of 19 mm against Micrococcus luteus for ethanolic extract, and 18 mm against Staphylococcus coagulase-negative for the aqueous extract, and in some Gram-negative strains, 11 mm against Proteus mirabilis for the ethanolic extract, but without activity against the yeasts. Regarding the cytotoxic activity, all extracts showed inhibitory activities across the tested strains, especially Hep-2 line where all showed inhibition of 100% in the assessed concentration. The anti-inflammatory action of the extracts was also effective, since all analyzed extracts reduced NO production induced levels at all the concentrations studied, especially ethanol and aqueous extracts. It can be considered that A. muricata is an alternative to the search for new therapeutic and as a source of great scientific interest molecules agents. The results corroborate with its traditional use, further strengthening its scientific evidence regarding their properties, thus enabling further study for its therapeutic viability.

A inflamação pode representar papel importante em doenças cardiovasculares. A testosterona exerce importantes efeitos sobre a função vascular, que se encontra alterada na hipertensão arterial, podendo contribuir assim, para possíveis alterações na resposta inflamatória. Neste estudo, avaliamos a influência da hipertensão e da castração sobre o comportamento leucocitário em vênulas pós-capilares do leito mesentérico de ratos espontaneamente hipertensos, investigando a participação das moléculas de adesão nesse processo. Nossos resultados demonstraram que a hipertensão interfere no comportamento leucocitário e que os andrógenos podem ter participação neste processo. O número de leucócitos circulantes e os parâmetros hemodinâmicos não estão envolvidos nessas alterações. Nos ratos hipertensos, o aumento da expressão das moléculas de adesão P-selectina, ICAM-1, VCAM-1 e PECAM-1 contribuem para o aumento do rolamento e da adesão leucocitária e a castração corrige as alterações do comportamento leucocitário interferindo na expressão dessas moléculas. / Inflammation can have an important role in the cardiovascular diseases. Testosterone exerts important effects on the vascular function, which is altered in arterial hypertension, contributing for the possible alterations in inflammatory response. In this study we evaluated the influence of hypertension and the castration on the leucocytes behavior in post-capillaries venules of the mesenteric bed of spontaneously hypertensive rats, investigating the participation of the adhesion molecules. We have shown that the hypertension interfere in leukocyte behavior and androgens can participate in this process. In addition, circulating leukocyte and hemodynamics parameters are not involved in those alterations. The higher expression of adhesion molecules such as P-selectin, ICAM-1, VCAM-1 and PECAM-1 present in hypertensive rats, compared to the normotensive ones, contribute for the higher leukocyte rolling and adhesion. Furthermore, castration correct those alterations of the leukocyte behavior by modulating the expression of the adhesion molecule.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-02-20Bitstream added on 2014-06-13T20:09:08Z : No. of bitstreams: 1 batista_aap_me_botfm.pdf: 794304 bytes, checksum: fa2b18e42c88a75109fcc5e19ee952ff (MD5) / O presente trabalho teve como objetivo investigar os efeitos do parecoxibe, um antiinflamatório inibidor específico da COX-2, no intestino delgado e cólon do rato, pela medida da força de ruptura e avaliação morfológica intestinal. Foram utilizados 52 ratos distribuídos aleatoriamente, em um grupo controle constituído de 27 ratos que receberam solução fisiológica a 0,9% por via intramuscular (IM), na pata traseira direita em dose única diária por 4 dias; e em um grupo tratado, constituído por 24 ratos que receberam parecoxibe, na dose de 0,66 mg/ Kg de peso corpóreo, por via IM, na pata traseira direita, em dose única diária durante 4 dias. Todos os ratos foram sacrificados no 7o dia após início das injeções. No sacrifício foram retirados segmentos de intestino delgado e cólon de l 2 cm de extensão, para análise da força de ruptura e estudo microscópico. Os animais do grupo controle não apresentaram alterações no intestino delgado e cólon. Os fragmentos de cólon dos ratos tratados com parecoxibe tiveram a força de ruptura diminuída quando comparados com os do grupo controle. Na avaliação morfológica, o cólon dos ratos tratados com parecoxibe, mostrava-se com diminuição do número de glândulas caliciformes e com maior atividade mitótica do epitélio glandular. Assim, nas condições desse estudo experimental, concluímos que o parecoxibe diminui a força de ruptura e altera a morfologia do cólon. / Histological and mechanical alterations induced by parecoxib, a COX - 2 specific inhibitor non steroidal antiinflamatory, were studied. Fifty two rats were randomly assigned to 2 experimental groups: the first group with 27 rats, treated with saline 0,9% administrated IM for 4 days; the second group with 24 rats, treated with parecoxib, in a dose of 0,66 mg/kg of body weight IM for 4 days. All rats were sacrificed on day 7 of the follow-up. In the sacrifice day, segments of small intestine and colon were used to analyse breaking strength and histology. There were no histological and mechanical alterations in the first group. Colon segments from the rats treated with parecoxib had less breaking strength compared with control group. On histological evaluation, colon of rats from the second group showed less caliciform glands and bigger mitotic activity in glandular epithelium. We conclude that parecoxib decrease breaking strength and causes histological alterations in colon.

Resumo: O presente trabalho teve como objetivo investigar os efeitos do parecoxibe, um antiinflamatório inibidor específico da COX-2, no intestino delgado e cólon do rato, pela medida da força de ruptura e avaliação morfológica intestinal. Foram utilizados 52 ratos distribuídos aleatoriamente, em um grupo controle constituído de 27 ratos que receberam solução fisiológica a 0,9% por via intramuscular (IM), na pata traseira direita em dose única diária por 4 dias; e em um grupo tratado, constituído por 24 ratos que receberam parecoxibe, na dose de 0,66 mg/ Kg de peso corpóreo, por via IM, na pata traseira direita, em dose única diária durante 4 dias. Todos os ratos foram sacrificados no 7o dia após início das injeções. No sacrifício foram retirados segmentos de intestino delgado e cólon de l 2 cm de extensão, para análise da força de ruptura e estudo microscópico. Os animais do grupo controle não apresentaram alterações no intestino delgado e cólon. Os fragmentos de cólon dos ratos tratados com parecoxibe tiveram a força de ruptura diminuída quando comparados com os do grupo controle. Na avaliação morfológica, o cólon dos ratos tratados com parecoxibe, mostrava-se com diminuição do número de glândulas caliciformes e com maior atividade mitótica do epitélio glandular. Assim, nas condições desse estudo experimental, concluímos que o parecoxibe diminui a força de ruptura e altera a morfologia do cólon. / Abstract: Histological and mechanical alterations induced by parecoxib, a COX - 2 specific inhibitor non steroidal antiinflamatory, were studied. Fifty two rats were randomly assigned to 2 experimental groups: the first group with 27 rats, treated with saline 0,9% administrated IM for 4 days; the second group with 24 rats, treated with parecoxib, in a dose of 0,66 mg/kg of body weight IM for 4 days. All rats were sacrificed on day 7 of the follow-up. In the sacrifice day, segments of small intestine and colon were used to analyse breaking strength and histology. There were no histological and mechanical alterations in the first group. Colon segments from the rats treated with parecoxib had less breaking strength compared with control group. On histological evaluation, colon of rats from the second group showed less caliciform glands and bigger mitotic activity in glandular epithelium. We conclude that parecoxib decrease breaking strength and causes histological alterations in colon. / Orientador: Luis Eduardo Naresse / Coorientador: Oswaldo Melo da Rocha / Banca: Luis Eduardo Naresse / Banca: Shoiti Kobayasi / Banca: Luiz Roberto Montalar Verderesse / Mestre

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-08-27Bitstream added on 2014-08-13T18:01:18Z : No. of bitstreams: 1 000725292.pdf: 1356413 bytes, checksum: 9864b7ad4f4eb2a259a94c49faefdd28 (MD5) / A expressão das interleucinas no útero e das catelicidinas no plasma seminal podem ser responsáveis pela magnitude e persistência da resposta inflamatória uterina. Os objetivos desse estudo foram verificar a presença das catelicidinas no plasma seminal e caracterizar a resposta imune uterina pela expressão de interleucinas inflamatórias. O plasma seminal foi obtido por coleta de sêmen de 15 garanhões e submetido ao SDSPAGE e DOT-blotting. As éguas foram submetidas a um ciclo estral sem desafio uterino (T1), com infusão de plasma seminal (T2) e inseminação artificial (T3). Exame ultrassonográfico, citologia exfoliativa uterina e colheita de células para a expressão do RNAm das interleucinas por qPCR foram realizados durante 3 ciclos consecutivos aleatoriamente, 24 (M1), 48 (M2) e 72 horas (M3) após a indução da ovulação. A expressão do RNAm no endométrio das éguas resistentes e susceptíveis foi verificada para as interleucinas IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10 e TNF-α. A concentração total de proteínas no plasma seminal dos garanhões variou de 6,3 a 25,6 mg/mL. O SDS-PAGE revelou a existência de 3 bandas protéicas dentro do intervalo de peso molecular previamente citado na literatura para as catelicidinas equinas. Os garanhões avaliados mostraram quantidades de eCATH1 < 339,6ng, eCATH2 < 141,3ng e eCATH3 < 283,4ng. No momento M2 não foi possível diferenciar as éguas resistentes das susceptíveis pela citologia ou ultrassonografia independente da infusão com plasma seminal, inseminação artificial ou da ovulação, mas quando há presença de espermatozoides no útero a resposta inflamatória é mais intensa. Durante o momento M3, as éguas susceptíveis apresentaram maior volume de fluido uterino acumulado em todos os tratamentos com menor capacidade de limpeza uterina. Foi verificada maior expressão do RNAm das interleucinas pró-inflamatórias nas éguas susceptíveis e a expressão do RNAm da interleucina-10 é... / In the equine species, uterine interleukin expression and seminal plasma cathelicidins can modulate the magnitude and persistence of the post-breeding inflammatory reaction. The objectives were to verify the presence of cathelicidins in the stallion seminal plasma and characterize the uterine immune response by pro and anti-inflammatory interleukins. Seminal plasma was obtained by semen collection of 15 stallions and submitted to SDS-PAGE and DOT-blotting tests. Three experiments were designed to study interleukin expression during baseline (T1), after seminal plasma infusion (T2) and artificial insemination (T3). Endometrial cytology and cell collection as well as ultrassonographic evaluations were performed to access interleukin mRNA through qPCR during three randomly assigned consecutive estrous cycles, 24 (M1), 48 (M2) and 72 hours (M3) after an ovulation was induced. Endometrial mRNA expression in mares resistant and susceptible to persistent post-breeding endometritis was identified for the following pro-inflammatory cytokines: IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10 e TNF-α. Total seminal plasma protein concentrations ranged from 6.3 to 25.6 mg/mL. SDS-PAGE analysis identified the existence of three proteic bands with molecular weight similar to what was previously reported for equine cathelicidins. Evaluated stallions showed values < 339.6 ng for eCATH1, < 141.3 ng for eCATH2 and < 283.4 for eCATH3. At M2, resistant and susceptible mares could not be separated through cytology or ultrassonography, even though the presence of sperm strongly stimulates uterine inflammatory reaction. At M3, susceptible mares showed higher uterine fluid accumulation and lower uterine clearance. Pró-inflammatory mRNA expression was higher in susceptible mares and interleukin-10 mRNA expression was similar between resistant and susceptible mares

Submitted by Flávia Sousa (flaviabs@ufba.br) on 2013-04-16T11:46:36Z No. of bitstreams: 1 2011 - Mestrado PMPGCF - LSBA.pdf: 1732562 bytes, checksum: cd354183203beb07f32686e61db7971b (MD5) / Approved for entry into archive by Flávia Sousa(flaviabs@ufba.br) on 2013-05-06T11:41:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011 - Mestrado PMPGCF - LSBA.pdf: 1732562 bytes, checksum: cd354183203beb07f32686e61db7971b (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-06T11:41:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011 - Mestrado PMPGCF - LSBA.pdf: 1732562 bytes, checksum: cd354183203beb07f32686e61db7971b (MD5) / CNPq, FAPESB / A obesidade é considerada um problema mundial de saúde pública, freqüentemente associada à alterações metabólicas e cardiovasculares. No entanto, a sua relação com o desenvolvimento de lesões renais, principalmente no período da pós-menopausa, tem sido menos documentada e os mecanismos pouco elucidados. O objetivo desse estudo foi avaliar a função, estrutura e o perfil inflamatório renal em um modelo de obesidade induzida por dieta hiperlipídica em ratas ovariectomizadas. Vinte e seis ratas Wistar foram utilizadas, com peso inicial de 150 a 200 g. As ratas foram submetidas à ovariectomia ou cirurgia sham com 10 semanas de idade e consumiram ração padronizada controle ou ração hiperlipídica (54,4% de gordura), por um período de 24 semanas. Os animais foram divididos em quatro grupos distintos: DCS – ratas submetidas à dieta controle e à cirurgia sham (n=6); DCO – ratas submetidas à dieta controle e ovariectomia (n=6); DLS – ratas submetidas à dieta hiperlipídica e à cirurgia sham (n=6); DLO – ratas submetidas à dieta hiperlipídica e ovariectomia (n=8). O peso e a pressão sanguínea foram determinados semanalmente e amostras de sangue e urina foram coletadas ao longo do período experimental para análise da função renal. Os animais foram sacrificados 24 semanas após o fornecimento das dietas, e os rins removidos para os estudos histológicos, morfométricos, de imunoistoquímica e de biologia molecular. Os resultados demonstraram que as ratas ovariectomizadas submetidas à dieta hiperlipídica (DLO) apresentaram aumento do peso corporal médio, do tecido adiposo abdominal e da pressão arterial sistólica, quando comparados aos animais dos demais grupos experimentais. Esses animais apresentaram diminuição significativa da fração de excreção de sódio e aumento da excreção urinária de proteína e albumina. Não foram observadas alterações significativas da creatinina plasmática, da fração de excreção de potássio e do fluxo urinário entre os grupos experimentais. Foi observado um discreto aumento da taxa de filtração glomerular nesses animais. Os estudos histológicos e morfométricos mostraram alterações no córtex renal das ratas DLO, caracterizadas por infiltrado de células inflamatórias, atrofia e dilatação tubular, fibrose intersticial, adesão dos capilares à cápsula de Bowman, glomeruloesclerose e aumento da área do tufo glomerular. A marcação túbulo-intersticial para vimentina foi mais pronunciada no córtex renal das ratas do grupo DLO quando comparada aos grupos DCS e DCO. Além disso, as ratas do grupo DLO apresentaram maior número de macrófagos, linfócitos, PCNA (antígeno nuclear de proliferação celular), angiotensina II (AII), NF-kB (fator nuclear-kB) e aumento da expressão do RNAm de TNF-α(Tumor Necrosis Factor-α) no tecido renal. Os resultados demonstraram que a dieta hiperlípidica em ratas ovariectomizadas promoveu alterações histológicas discretas e focais, acompanhadas de alterações na função renal e na pressão sanguínea, sugerindo que macrófagos, linfócitos, AII, NF-kB e TNF-α devem contribuir para esse processo. / Vitória da Conquista - BA

Submitted by Flávia Sousa (flaviabs@ufba.br) on 2013-04-16T15:07:01Z No. of bitstreams: 1 2011 - Mestrado PMPGCF - ACSD.pdf: 1841343 bytes, checksum: 4419858b0b3e09d26efbe4bc8fee3815 (MD5) / Approved for entry into archive by Flávia Sousa(flaviabs@ufba.br) on 2013-05-06T11:42:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011 - Mestrado PMPGCF - ACSD.pdf: 1841343 bytes, checksum: 4419858b0b3e09d26efbe4bc8fee3815 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-06T11:42:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011 - Mestrado PMPGCF - ACSD.pdf: 1841343 bytes, checksum: 4419858b0b3e09d26efbe4bc8fee3815 (MD5) / CNPq, FAPESB / O aumento mundial da incidência de obesidade tem determinado um crescente interesse sobre as diversas alterações metabólicas associadas que aumentam os riscos do desenvolvimento de diabetes tipo 2 e de doenças cardiovasculares. O consumo de dietas com altas densidades energéticas, associado ou não a ausência do estrógeno, pode determinar um quadro de alterações metabólicas e inflamatórias, com modificação do perfil de distribuição do tecido adiposo, associado à resistência a insulina. O objetivo deste estudo foi verificar o impacto da ovariectomia sobre as alterações metabólicas e inflamatórias nos tecidos adiposo e hepático em modelos de obesidade baseado no fornecimento de dietas hipercalóricas para ratas. Ratas Wistar com dez semanas de idade foram submetidas aos procedimentos de ovariectomia ou “sham” e distribuídas entre três dietas: controle, hiperlipídica e hipersacarídica. Ao final de vinte e seis semanas de tratamento dietético, o grupo ovariectomizado tratado com dieta hiperlipídica apresentou o maior peso corporal dentre os grupos experimentais, bem como, maior depósito do tecido adiposo visceral e elevação dos níveis de pressão arterial sistólica. O perfil bioquímico plasmático não diferiu entre os grupos, no entanto o teste de tolerância a glicose revelou uma alteração especialmente nos grupos sham e ovariectomizado tratados com dieta hipersacarídica, demonstrando o maior impacto desta dieta sobre a resposta a sobrecarga de glicose. Mas foi o grupo ovariectomizado tratado com dieta hiperlipídica que apresentou os maiores níveis de insulina e do índice HOMA-IR (Homeostatic model assessment). Os grupos submetidos a dietas hipercalóricas também manifestaram infiltração gordurosa no fígado, os grupos sham e ovariectomizado tratados com dieta hipersacarídica com padrão microvesicular e os grupos sham e ovariectomizado tratados com dieta hiperlipídica desenvolveram esteatose hepática com padrão macrovesicular e infiltração inflamatória compatível com o quadro de esteato-hepatite. No tecido adiposo abdominal parametrial do grupo ovariectomizado tratado com dieta hiperlipídica também se observou uma maior infiltração de macrófagos/monócitos, com formação das estruturas do tipo “crown-like”. As dietas hipercalóricas hiperliídicas e hipersacarídicas determinaram respostas diferentes quanto ao ganho de peso dos animais, padrão de deposição de gordura corporal, mas ambas, resultaram em algum grau de resistência a insulina. A ovariectomia apenas apresentou impacto sobre as alterações metabólicas quando associada às dietas hipercalóricas. A presença de gordura ectópica armazenada nos hepatócitos e a maior infiltração de células inflamatórias no tecido adiposo e no parênquima hepático podem explicar em parte, o quadro de resistência a insulina desenvolvido, principalmente nos grupos que não apresentaram aumentos significativos do peso corporal e da gordura abdominal. / Vitória da Conquista - BA

Submitted by Gilvan Almeida (gilvan.almeida@icict.fiocruz.br) on 2016-10-11T17:34:20Z No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 72038.pdf: 3196059 bytes, checksum: 8c47650717cf5a0ee1266bcc0b5d389d (MD5) / Approved for entry into archive by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2016-10-24T11:51:02Z (GMT) No. of bitstreams: 2 72038.pdf: 3196059 bytes, checksum: 8c47650717cf5a0ee1266bcc0b5d389d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-24T11:51:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 72038.pdf: 3196059 bytes, checksum: 8c47650717cf5a0ee1266bcc0b5d389d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A dengue é caracterizada como a principal arbovirose humana, representando um grave problema de saúde pública. A superativação de células do sistema imune pode ser destacada como um dos fatores envolvidos na progressão da doença para as formas mais graves. Embora os monócitos sejam reconhecidos como importante fonte de citocinas, a participação das plaquetas na patogênese da dengue permanece pouco explorada. Recentemente, nosso grupo mostrou a contribuição da interação plaqueta-monócito na resposta inflamatória observada durante a dengue. De fato, o papel das plaquetas na resposta imune e inflamatória é cada vez mais frequente. Dentro deste contexto, foi proposto que plaquetas ativadas por estímulo específico sinalizam para mudanças fenotípicas nos monócitos, incluindo a diferenciação em células espumosas que é caracterizada pelo aumento da biogênese de corpúsculos lipídicos (CL) \2013 organelas citoplasmáticas dinâmicas ricas em lipídios relacionadas a processos inflamatórios e infecciosos. Nossos estudos prévios demonstraram um aumento da biogênese de CL tanto em leucócitos isolados de pacientes com a forma grave da doença quanto em células infectadas com o vírus dengue (DENV) in vitro, com participação na localização da proteína do capsídeo viral e na produção de partículas virais infecciosas. Entretanto, os mecanismos que regulam a biogênese e a função destas organelas durante a infecção pelo DENV precisam ser melhor caracterizados. Assim, pretende-se com este trabalho (i) analisar os mecanismos que levam à biogênese de CL em distintos tipos celulares infectados com o DENV in vitro; (ii) estudar os efeitos de plaquetas ativadas com o DENV in vitro sobre a imunomodulação dos monócitos, no que diz respeito, principalmente, à formação de CL; (iii) investigar o efeito de drogas que atuam na gênese de CL e o seu impacto na replicação viral e na secreção de mediadores inflamatórios Inicialmente, nossos resultados demonstram um aumento na formação e/ou tamanho de CL em distintos tipos celulares infectados in vitro, de uma maneira dependente da integridade viral, visto que o vírus inativado por aquecimento falhou em induzir a biogênese destas organelas. Observamos que a modulação da lipogênese e da formação de CL afetam a capacidade replicativa do vírus. Além disso, constatamos que o DENV é capaz de modular positivamente a expressão de genes envolvidos no metabolismo de lipídios, de forma independente do MIF \2013 citocina que induz a gênese de CL em monócitos \2013 secretado durante a infecção. Na segunda parte deste estudo, observamos que plaquetas ativadas com o DENV in vitro rapidamente formam agregados com monócitos quando comparado com plaquetas estimuladas com mock. Adicionalmente, plaquetas ativadas com o DENV sinalizam para que monócitos aumentem a expressão de COX-2 e a secreção de PGE2 e CXCL8/IL-8. De forma recíproca, observamos que estas células contribuem para uma maior ativação das plaquetas, que então secretam níveis elevados de CCL5/RANTES e CXCL4/PF4. Em seguida, constatamos que plaquetas ativadas com o DENV in vitro são capazes de promover a biogênese de CL em monócitos, de uma maneira dependente da enzima ácido graxo sintase Ao utilizarmos o C75, inibidor desta enzima, também observamos uma redução nos níveis de PGE2, mas não de CXCL-8/IL-8, sugerindo um papel dos CL na produção deste mediador lipídico. O MIF, secretado durante a ativação de plaquetas pelo DENV in vitro, também está envolvido na sinalização que culmina na formação de CL em monócitos expostos a plaquetas ativadas. De forma surpreendente, o sobrenadante de plaquetas ativadas com o DENV não induz a biogênese de CL em monócitos, sugerindo a importância do contato direto entre essas células. De fato, a interação com plaquetas ativadas mostrou-se crucial para que os monócitos respondam funcionalmente, incluindo a secreção de mediadores inflamatórios e o aumento da formação de CL. Por fim, a biogênese destas organelas é maior nos agregados formados com plaquetas ativadas com o DENV, corroborando esta hipótese. Sendo assim, esses dados fortemente sugerem que a interação direta com plaquetas ativadas com o DENV seja crucial para que os monócitos respondam com funções específicas e contribuam para a patogênese da doença. Portanto, o conjunto dos resultados obtidos nos revela a importância em estabelecer estratégias terapêuticas adequadas para controlar a resposta do hospedeiro frente à infecção, onde a própria modulação dos CL possa vir a representar um potencial alvo terapêutico para o tratamento da dengue / Dengue is characterized as the most important arthropod-borne human viral disease worldwide, representing a public health problem. Increased activation of immune cells could be involved in the progression of disease to severe forms. Although monocytes have been recognized as important sources of cytokines, the role of platelets in dengue pathogenesis remains understood. Recently our group showed the contribution of platelet-monocyte interaction to inflammatory responses observed in dengue. In fact, it is becoming increasingly clear that platelets have inflammatory functions and can influence innate response. Evidences suggest that specific stimuli-activated platelets can promote phenotypic changes in monocytes, including enhanced foam cell formation, that is characterized by an increase in lipid droplets (LD) \2013 dynamic cytoplasmic lipid-rich organelles, associated to inflammatory and infectious conditions \2013 biogenesis. Our previous works showed a significant increase in LD accumulation in leukocytes from dengue hemorrhagic fever patients, as well as in different cell types infected in vitro. Besides, these organelles were involved in capsid protein localization and virus particle morphogenesis. However, the mechanisms involved in LD biogenesis and function during dengue virus (DENV) infection still unclear. Therefore, this study aim to (i) investigate the mechanisms related to LD formation in distinct cell types during DENV infection; (ii) evaluate the roles of DENV-activated platelets on monocytes immunomodulation in vitro, focusing on LD biogenesis; (iii) analyze the effects of drugs that abrogate LD formation and your impact on viral replication and secretion of inflammatory mediators Our results demonstrate a significant increase in LD number and/or area in distinct cell types infected in vitro. Importantly, heat inactivated DENV failed to induce LD biogenesis in vitro. Besides, modulation of lipogenesis and LD formation, by C75- or triacsin C-treated cells, impair DENV replication. We also observe that DENV is able to modulate genes involved in lipid metabolism, in a MIF \2013 cytokine that induces LD genesis in monocytes \2013 independent fashion. In the second part of this study, we show that platelets exposed to DENV in vitro form aggregates with monocytes and activate signaling cascade in these cells, which culminates in CXCL8/IL-8 secretion. In addition, platelet-monocyte aggregates formation reciprocally increase platelet activation, observed by an enhanced production of CCL5/RANTES and CXCL4/PF4. DENV-activated platelets increase LD formation and COX-2 activation in monocytes, leading to secretion of PGE2. Damping LD biogenesis through treatment with the fatty acid synthase (FAS) inhibitor C75 prevents PGE2, but not CXCL8/IL-8, secretion by platelet-monocyte aggregates. We also demonstrate that DENV-activated platelets secrete high levels of MIF. LD formation in monocytes exposed to DENV-activated platelets is partially dependent on platelet-derived MIF However, the supernatant from DENV-activated platelets is not sufficient to induce LD biogenesis in monocytes. Finally, LD formation is higher in monocytes which have platelets adhered on surface compared to monocytes that do not contact platelets, suggesting that beyond soluble mediators, platelet adhesion is a major event in platelet-mediated modulation of lipid metabolism in monocytes. Thus, our results indicate that DENV infection promotes LD biogenesis and that this event seems to be dependent of host lipid metabolism, since specific inhibition of enzymes involved in lipogenesis blocks the formation of these organelles. This inhibition also leads to decreased DENV replication, suggesting a role of LD in this process. Moreover, our data provide new evidence that DENV-activated platelets modulate LD formation as well as cytokine signaling in monocytes, during cellular aggregates formation, and these events may contribute to dengue pathogenesis. Therefore, the modulation of LD formation might represent an attractive therapeutic target for dengue

Orientador: Marco Antonio Alvarenga / Coorientador: João Pessoa Araújo Junior / Banca: Frederico Ozanam Papa / Banca: Fabiana Ferreira de Souza / Banca: Rubens Paes de Arruda / Banca: Eduardo Malschitzky / Resumo: A expressão das interleucinas no útero e das catelicidinas no plasma seminal podem ser responsáveis pela magnitude e persistência da resposta inflamatória uterina. Os objetivos desse estudo foram verificar a presença das catelicidinas no plasma seminal e caracterizar a resposta imune uterina pela expressão de interleucinas inflamatórias. O plasma seminal foi obtido por coleta de sêmen de 15 garanhões e submetido ao SDSPAGE e DOT-blotting. As éguas foram submetidas a um ciclo estral sem desafio uterino (T1), com infusão de plasma seminal (T2) e inseminação artificial (T3). Exame ultrassonográfico, citologia exfoliativa uterina e colheita de células para a expressão do RNAm das interleucinas por qPCR foram realizados durante 3 ciclos consecutivos aleatoriamente, 24 (M1), 48 (M2) e 72 horas (M3) após a indução da ovulação. A expressão do RNAm no endométrio das éguas resistentes e susceptíveis foi verificada para as interleucinas IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10 e TNF-α. A concentração total de proteínas no plasma seminal dos garanhões variou de 6,3 a 25,6 mg/mL. O SDS-PAGE revelou a existência de 3 bandas protéicas dentro do intervalo de peso molecular previamente citado na literatura para as catelicidinas equinas. Os garanhões avaliados mostraram quantidades de eCATH1 < 339,6ng, eCATH2 < 141,3ng e eCATH3 < 283,4ng. No momento M2 não foi possível diferenciar as éguas resistentes das susceptíveis pela citologia ou ultrassonografia independente da infusão com plasma seminal, inseminação artificial ou da ovulação, mas quando há presença de espermatozoides no útero a resposta inflamatória é mais intensa. Durante o momento M3, as éguas susceptíveis apresentaram maior volume de fluido uterino acumulado em todos os tratamentos com menor capacidade de limpeza uterina. Foi verificada maior expressão do RNAm das interleucinas pró-inflamatórias nas éguas susceptíveis e a expressão do RNAm da interleucina-10 é... / Abstract: In the equine species, uterine interleukin expression and seminal plasma cathelicidins can modulate the magnitude and persistence of the post-breeding inflammatory reaction. The objectives were to verify the presence of cathelicidins in the stallion seminal plasma and characterize the uterine immune response by pro and anti-inflammatory interleukins. Seminal plasma was obtained by semen collection of 15 stallions and submitted to SDS-PAGE and DOT-blotting tests. Three experiments were designed to study interleukin expression during baseline (T1), after seminal plasma infusion (T2) and artificial insemination (T3). Endometrial cytology and cell collection as well as ultrassonographic evaluations were performed to access interleukin mRNA through qPCR during three randomly assigned consecutive estrous cycles, 24 (M1), 48 (M2) and 72 hours (M3) after an ovulation was induced. Endometrial mRNA expression in mares resistant and susceptible to persistent post-breeding endometritis was identified for the following pro-inflammatory cytokines: IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10 e TNF-α. Total seminal plasma protein concentrations ranged from 6.3 to 25.6 mg/mL. SDS-PAGE analysis identified the existence of three proteic bands with molecular weight similar to what was previously reported for equine cathelicidins. Evaluated stallions showed values < 339.6 ng for eCATH1, < 141.3 ng for eCATH2 and < 283.4 for eCATH3. At M2, resistant and susceptible mares could not be separated through cytology or ultrassonography, even though the presence of sperm strongly stimulates uterine inflammatory reaction. At M3, susceptible mares showed higher uterine fluid accumulation and lower uterine clearance. Pró-inflammatory mRNA expression was higher in susceptible mares and interleukin-10 mRNA expression was similar between resistant and susceptible mares / Doutor