O objetivo do presente estudo foi determinar a cinética e a integridade e funcionalidade da membrana plasmática após a seleção espermática com um filtro de membrana sintética em câmaras de PVC com dois diâmetros diferentes e dois tempos de filtração. Foram utilizados 12 ejaculados de três garanhões. Imediatamente após a coleta, o sêmen foi diluído com leite desnatado (T0) e analisado. Duas câmaras diferentes em PVC foram produzidas com dois joelhos conectados com um tubo dividido ao meio por um filtro de membrana sintética com poros de 5 μm. Uma câmara de 26 mm e a outra de 36 mm de diâmetro interno. Foi colocado leite desnatado a 37° C em um lado da câmara (A). No outro lado da câmara (B) depositou-se uma amostra do sêmen diluído, com um número conhecido de espermatozoides. Após 7 e 15 min, obteve-se uma amostra do lado "A" de cada câmara e calculou-se a concentração espermática e analisou-se o sêmen. A motilidade total, a motilidade progressiva e a integridade da membrana plasmática melhoraram (P <0,05) após a filtração em ambos os dispositivos e tempos de filtração. A concentração espermática foi menor (P <0,05) em ambas as câmaras nos dois tempos em relação ao T0. O dispositivo de filtração demonstra ser uma alternativa prática e fácil para a seleção espermática. A seleção usando as câmaras permite um aumento da cinética e da integridade da membrana e funcionalidade independente do tempo e do diâmetro do dispositivo. / The aim of the present study was to determine the kinetics and plasma membrane integrity and functionality after sperm selection with a synthetic membrane filter in PVC chambers with two different diameters and two filtrations times. A total of 12 ejaculates from three stallions was used. Immediately after collection semen was diluted with skim milk (T0) and analyzed. Two different chambers in PVC were made with two elbows connected with a pipe divided in half by a 5 μm pore synthetic membrane filter. One chamber had an inner diameter of 26 mm and the other 36 mm. Skim milk at 37° C was placed in a side of the chamber (A). In the other side of the chamber (B) a sample of the extended semen, with known number of spermatozoa was deposited. After 7 and 15 min a sample was obtained from the ‘A’ side of each chamber and sperm concentration was calculated and semen analyzed. Total motility, progressive motility and plasma membrane integrity were improved (P<0.05) after filtration in both devices and filtration times. Concentration was lower (P<0.05) in both chambers at all times in relation to T0 semen. The filtration device demonstrates to be a practical and easy alternative for sperm selection. Selection using the chambers allows an increase in kinetics and membrane integrity and functionality independent of time and device diameter.

A técnica de inseminação artificial (IA) por laparoscopia em ovinos foi utilizada pela primeira vez em 1982, o que tornou viável a utilização econômica do sêmen congelado nesta espécie. Os experimentos foram realizados com o objetivo de determinar as taxas de prenhez de ovelhas inseminadas por laparoscopia, utilizando 50 x 106 espermatozóides descongelados e capacitados in vitro. No experimento 1, foi utilizado sêmen de um reprodutor e 67 ovelhas com estros sincronizados, divididas aleatoriamente entre os grupos: sêmen congelado (SC1) e sêmen congelado capacitado in vitro (SCC1). As ovelhas foram submetidas à IA, com 50x106 espermatozóides, 56 e 60 horas, respectivamente, após a retirada das esponjas impregnadas com progesterona. No grupo SCC1, a taxa de prenhez foi de 48,39% (15/31) significativamente superior a do grupo SC1 de 25% (9/36). No experimento 2, utilizou-se um reprodutor e 100 ovelhas com os estros sincronizados, distribuídas aleatoriamente entre três grupos: sêmen fresco (SF2), SC2 e SCC2. Nos grupos SF2 e SC2 as fêmeas foram inseminadas com 100x106 espermatozóides e 56 horas após a retirada da progesterona. No grupo das fêmeas inseminadas com espermatozóides capacitados in vitro, utilizou-se 50x106 espermatozóides e um intervalo de 60 horas após retirada da progesterona. As taxas de prenhez diagnosticadas nos diferentes grupos experimentais foram: SF2 60,9% (25/41), SC2 56,70% (17/30) e SCC2 44,90% (13/29), não existindo diferença estatística entre os grupos. Os experimentos realizados mostraram a viabilidade doemprego, na espécie ovina, da IA por laparoscopia utilizando 50x106 espermatozóides descongelados e capacitados in vitro. / The ovine artificial insemination (AI) by laparoscopy was described the first time in 1982, since this time frozen semen became a tool for use under field conditions. Today one research goal is to achieve high preganancies rates after AI using a reduced number of frozen/thawed spermatozoa per dosis. The experiments were carried out with the objective to determine the pregnancy rate of ewes inseminated by laparoscopy, using 50 x 106 thawed and in vitro capacited spermatozoa. In the experiment 1 was used semen of one fertily ram and 67 ewes with synchronized estrus. The females were randomly distributed among two experimental groups: inseminated with frozen semen (SC1) or frozen and in vitro capacitated semen (SCC1). The ewes were submitted to the AI with 50x106 spermatozoa, 56 (SC1) or 60 (SCC1) hours, respectively, after retreat of the intra vaginal device impregnated with progesterona. In the group SCC1 the pregnancy rate was 48,39% (15/31) significantly different from the 25% (9/36) observed in the group SC1. In the experiment 2 was used one fertily ram and 100 ewes with synchronized estrus, distributed randomly among three groups: inseminated with fresh semen (SF2), 100 x 106 spermatozoa, SC2, 100 x 106 frozen spermatozoa and SCC2, 50 x 106 frozen and in vitro capacited spermatozoa. The moment of the laparoscopic AI was the same as used in the experiment 1: 56 (SF2 and SC2) or 60 (SCC2) hours, respectively, after retreat of the intra vaginal device impregnated with progesterona. The observed pregnancy rates were similar among the experimental groups: SF2 60,9% (25/41), SC2 56,70% (17/30) and SCC2 44,90% (13/29). Our experiments showed the ability of frozen/thawed and in vitro capacitated ovine spermatozoa to in vivo fertilize and promote the development of pregancies. In conclusion, itis possible to use 50x106 frozen/thawed and in vitro capacited spermatozoa for ovine laparoscopic AI.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:37:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_carlos_ferreira.pdf: 649296 bytes, checksum: 99fb2b37d32c0a7abfe862b1269cfdbf (MD5) Previous issue date: 2013-03-26 / The common use of pooled sperm doses (composed of sperm of two or more boars) in artificial insemination (AI) in swine limits the precise evaluation of individual boar fertility. Thus, marginal differences in potential fertility among boars are clouded by the use of heterospermic AI. This study had the objective of identifying the contribution of individual boars for the paternity of progeny generated by heterospermic AI. Four boars were used as sperm donors (A, B, C and D). After collection, ejaculates from those boars were used to compose homospermic and heterospermic doses (AB, AC, AD, BC, BD and CD), all including 3.0 x 109 spermatozoa in 80 ml. A total of 511 females were inseminated. The paternity of 4.119 piglets was determined through the use of SNP (Single nucleotide polymorphism) markers : 3.558 from heterospermic AI; and 461 from homospermic AI. The comparison of paternity per pool showed that the pool AC was the only one in which each boar contributed similarly for paternity (P > 0.05), whereas differences between boars occurred in all other pools (P < 0.05). The greatest contribution for paternity of piglets occurred for boar D, which sired nearly 60% of all piglets boar in the pools in which that boar took part. These results indicate that in most of the heterospermic AI, individual boars contribute distinctly for the paternity of the piglets, even though each boar contributes with the same sperm concentration in the pooled sperm doses. Key / O uso generalizado de pool de sêmen (dois ou mais machos compondo a dose) em inseminações artificiais comerciais limita a análise dos dados de fertilidade dos reprodutores. Pequenas diferenças no potencial fecundante dos machos doadores são ocultadas pelo uso de doses heterospérmicas. Este trabalho teve por objetivo identificar a contribuição individual de reprodutores suínos para a composição da progênie gerada por inseminação artificial heterospérmica. Foram utilizados quatro reprodutores suínos. Após a coleta dos ejaculados foram elaboradas doses inseminantes (DI) homospérmicas (A, B, C e D) e DI heterospérmicas, formando os pools (AB, AC, AD, BC, BD e CD) contendo 3,0 x 109 espermatozoides em 80 ml. Foram inseminadas 511 fêmeas. A determinação da paternidade foi através de marcadores SNP (Single nucleotide polymorphism). Foram genotipadas amostras de um total de 4.019 leitões, 3.558 provenientes de IA heterospérmicas e 461 provenientes de IA homospérmicas. Durante a análise do percentual de paternidade por pool, constatou-se que AC foi o único grupo em cada macho contribuiu igualmente para o tamanho das leitegadas (P > 0,05), nos demais pools foi observada diferença estatística significativa (P<0,05). A avaliação das doses heterospérmicas revelou que as médias mais elevadas foram de pools formados pelo reprodutor D, que contribuiu com aproximadamente 60% do total de nascidos (TN) em seus pools. Conforme os resultados obtidos, na maioria dos casos estudados não há contribuição semelhante na quantidade de leitões nascidos, ainda que a concentração de células espermáticas de cada um dos machos seja idêntica na formação das DIs.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:37:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_jorgea_pradiee.pdf: 964026 bytes, checksum: e100969ef5fb9f72ec9bf73b616695fd (MD5) Previous issue date: 2013-02-22 / In an attempt to diminish the structural damage to the plasma membrane, due to free radicals and reactive oxygen species (ROS), the antioxidants β-mercaptoethanol (BME) and cysteine (CIS) were tested for semen cryopreservation and in vitro maturation (IVM) and culture (IVC) of ovine embryos. Semen samples from four rams of the Crioula Lanada breed were collected with artificial vagina twice weekly (n = 23). Samples of four rams were pooled and split in six treatments: T1, control without antioxidant, T2, with 2mM BME, T3, with 5mM BME, T4, with 2mM BME and 5mM cysteine; T5, with 5 mM BME and 5mM cysteine, and T6 with 5 mM cysteine. Semen was diluted in tris-egg yolk-glycerol and stored in straws of 0.25 mL containing 100 x 106 spermatozoa. Cooling and freezing were performed using a TK3000 and thawing was performed at 37°C for 20 s. Sperm motility, membrane integrity and mitochondrial activity and acrosome, before freezing and after thawing, did not differ between treatments (P> 0.05). Quantification of ROS and total antioxidant activity after thawing were similar between treatments (P> 0.05). At the tested concentrations, the inclusion of BME, and cysteine did not affect sperm viability after thawing. In the first experiment of IVP, the inclusion of 20 mM of BME in IVM and IVC of embryos was compared to a control treatment without antioxidants. There was no deleterious effect of antioxidant on the cleavage rate (control: 70.0%; BME: 69.8%). However, the rate of development to the blastocyst stage with BME (5.2%) was lower (P <0.001) than with the control (16.9%). In the second experiment, we tested the association of 50 mM BME and 600 mM of CIS in IVM and IVC. There was no difference between control and BME/CIS (P> 0.05), for cleavage (60.3% and 64.3%, respectively) and embryonic development rates (33.6% and 36.6 %, respectively). The addition of 20 mM of isolated BME in IVM and IVC sheep embryos was associated with decreased embryonic development to blastocyst. However, the addition of antioxidants BME, and cysteine in combination, did not affect the rates of cleavage and embryo development to blastocyst. Therefore, the combination of antioxidants and CIS BME used in freezing ram semen and PIV, did not improve the treatments that have been added, albeit at different concentrations. / Na tentativa de diminuir os danos estruturais na membrana plasmática, devido aos radicais livres e espécies reativas de oxigênio (ROS), os antioxidantes β-mercaptoetanol (BME) e cisteína (CIS) foram testados na criopreservação de sêmen e na maturação (MIV) e cultivo (CIV) in vitro de embriões de ovinos. Amostras de sêmen de quatro carneiros da raça Crioula Lanada foram coletadas com vagina artificial, duas vezes por semana (n = 23). As amostras dos quatro machos foram combinadas em pool e divididas em seis tratamentos: T1, Controle, sem antioxidante; T2, com 2mM BME; T3, com 5mM BME; T4, com 2mM BME e 5mM de cisteína; T5, com 5mM BME e 5mM de cisteína; e T6 com 5mM de cisteína. O sêmen foi diluído em tris-gema-glicerol e estocado em palhetas de 0,25 mL contendo 100 x 106 espermatozoides. O resfriamento e o congelamento foram realizados em máquina TK3000 e o descongelamento foi realizado a 37ºC por 20 s. A motilidade, a integridade da membrana espermática e do acrossoma e a atividade mitocondrial, antes do congelamento e após o descongelamento, não diferiram entre os tratamentos (P> 0,05). A quantificação de ROS e da atividade antioxidante total pós-descongelamento foram semelhantes entre os tratamentos (P> 0,05). Nas concentrações testadas, a inclusão de BME e cisteína não influenciou a viabilidade espermática pós-descongelamento. No primeiro experimento de PIV, a inclusão de 20 μM de BME na MIV e CIV de embriões foi comparada a um tratamento controle sem antioxidantes. Não houve efeito deletério do antioxidante sobre a taxa de clivagem (Controle: 70,0%; BME: 69,8%). Porém, a taxa de desenvolvimento até o estágio de blastocisto no tratamento BME (5,2%) foi inferior (P<0,001) à do controle (16,9%). No segundo experimento, foi testada a associação de 50 μM de BME e 600 μM de CIS, na MIV e CIV. Não houve diferença entre os tratamentos controle e BME/CIS (P>0,05), quanto às taxas de clivagem (60,3% e 64,3%, respectivamente) e de desenvolvimento embrionário (33,6% e 36,6%, respectivamente). A adição isolada de 20 μM de BME na MIV e CIV de embriões ovinos foi associada com redução no desenvolvimento embrionário até blastocisto. Porém, a adição dos antioxidantes BME e cisteína, em associação, não afetou as taxas de clivagem e desenvolvimento embrionário até blastocisto. Assim, a associação dos antioxidantes BME e CIS usados no congelamento de sêmen ovino e na PIV, não promoveu melhora dos tratamentos em que foram adicionados, ainda que em concentrações diferentes.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_guilherme_van_der_laan.pdf: 723829 bytes, checksum: 399e8e1ec5f5ec9b7f77f1ffa1d0af80 (MD5) Previous issue date: 2007-11-30 / Adding extenders to poultry semen is currently used in artificial insemination programs to optimize the management of genetically superior males. Fresh semen fertility usually declines after 1 hour of collection, raising the need to use diluents and low temperatures to store semen for longer periods. Low density lipoprotein (LDL), extracted from the egg yolk, is used as a component of various mammalian semen diluents, however its application on poultry semen has not been evaluated. Regarding cryopreservation, different methodologies have been developed during the past years. One alternative is to use dimethylacetamide (DMA) as a cryoprotectant. The best results with DMA are obtained when semen is subjected to ultra-fast freezing, in pellets, and to a fast thawing at 60ºC. The objective of this work was to establish protocols to preserve rooster sperm, focusing on the use of LDL as a component of the refrigeration diluent, and on DMA as a internal cryoprotectant for freezing. To reach these objectives, the effect of adding different levels of LDL liposomes to the cooling diluent, upon the quality characteristics of semen refrigerated at 5 °C, was evaluated. The quality of semen frozen with DMA, packed in straws or pellets, and thawed in three different temperatures was also evaluated. The results obtained allow to conclude that: adding 6% of LDL liposomes to the cooling diluent preserves the general sperm quality, suggesting that improvements on fertility could be obtained if a limit in lipoprotein supplementation is imposed; body temperature (40°C) is most suitable for thawing sperm frozem with DMA; and packing sperm in straws is more efficient than packing in pellets. This last observation is of great value, since storing semen in straws is more appropriate due to sanitary reasons, and more convenient for ejaculates identification, especially for field application of genetic banks. / A adição de diluentes ao sêmen de aves é uma prática rotineiramente empregada em programas de inseminação artificial para melhorar o manejo de machos geneticamente superiores. A fertilidade do sêmen fresco normalmente decai 1 hora após a coleta, por isso a necessidade do uso de diluentes e temperaturas hipotérmicas para o armazenamento do sêmen por períodos mais prolongados. A Lipoproteína de Baixa Densidade (LDL), extraída da gema de ovo, tem sido utilizada na composição de diversos diluentes de sêmen para mamíferos, porém, ainda não tinha sido avaliada a sua aplicação em diluentes de resfriamento para sêmen de aves. Em relação ao congelamento, diversos métodos foram desenvolvidos ao longo dos anos. Uma das alternativas é o uso da Dimetilacetamida (DMA) como crioprotetor. Os melhores resultados obtidos com DMA ocorrem quando o sêmen é submetido ao congelamento ultra-rápido na forma de pellets e a um rápido descongelamento à 60ºC. O objetivo deste trabalho foi o estabelecimento de protocolos de preservação de sêmen de galos, enfocando o uso de Lipoproteínas de Baixa Densidade (LDL) como um componente do diluente para resfriamento, e a Dimetilacetamida (DMA) como crioprotetor interno para o congelamento. Para isto, foi verificado o efeito da adição de diferentes níveis de lipossomas de LDL na composição do diluente de resfriamento, sobre as características de qualidade do sêmen resfriado à 5 °C. Também foi avaliada a qualidade do sêmen congelado utilizando DMA como crioprotetor, envasado em palhetas ou pellets, e descongelados em três diferentes temperaturas. Os resultados obtidos nestes estudos nos permitiram concluir que: a adição de lipossomas de LDL ao diluente de resfriamento mantém a qualidade geral dos espermatozóides quando adicionado na proporção de 6%; sugerindo que melhorias na fertilidade podem ser obtidas desde que seja respeitado um limite de adição desta lipoproteína ao diluente; a temperatura corporal (40°C) foi a mais apropriada para descongelamento de sêmen criopreservado com DMA; e ainda, o envase em palhetas é mais eficiente em relação ao pellet. Esta última observação é de grande valor, visto que o armazenamento do sêmen em palhetas é mais adequado por razões sanitárias, e mais conveniente para a identificação dos ejaculados, especialmente para a aplicação a campo de bancos genéticos.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2014-07-02T19:08:49Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_EcobiometriaTriplexDoppler.pdf: 3097752 bytes, checksum: 55cbdb823182d557787d6963ab196e7f (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-07-16T14:17:23Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_EcobiometriaTriplexDoppler.pdf: 3097752 bytes, checksum: 55cbdb823182d557787d6963ab196e7f (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-16T14:17:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_EcobiometriaTriplexDoppler.pdf: 3097752 bytes, checksum: 55cbdb823182d557787d6963ab196e7f (MD5) Previous issue date: 2011 / FINEP - Financiadora de Estudos e Projetos / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os objetos do trabalho foram: 1) realizar a ecobiometria do concepto para acompanhar o crescimento fetal e determinar a idade gestacional em Cebus apella; 2) descrever o momento em que os órgãos do feto são observados; 3) realizar a sexagem fetal; 4) avaliar o fluxo sanguíneo das artérias uterinas (AU) e umbilical (Aum), mensurando os índices de resistividade (IR) e pulsatilidade (IP); 5) observar a presença ou ausência da incisura protodiastólica (IPD) e do componente diastólico nas ondas de fluxo sanguíneo das AU e Aum, respectivamente, durante a gestação em C. apella. Seis fêmeas adultas da espécie C. apella foram selecionadas e, posteriormente, condicionadas para os procedimentos de colpocitologia ou contenção química. Para o monitoramento do ciclo reprodutivo das fêmeas e crescimento folicular, foram realizados exames colpocitológicos e ultrassonografia (US), respectivamente, para a escolha do melhor dia da monta natural ou inseminação artificial. Vinte dias após a cópula ou inseminação, era realizado o diagnóstico da gestação por meio da US. O dia de cada exame em relação ao parto foi contado em retrospecto (nascimento = dia 0). Os exames ultrassonográficos foram feitos nos dias -133, -113, -83, -53, -21 e -1 antes do parto. A US bidimensional em modo B foi utilizada para mensurar o saco gestacional do dia - 133 até -113; os diâmetros biparietal, fronto-occiptal, circunferência da cabeça e circunferência abdominal do dia -113 a -1; e comprimento do fêmur do dia -53 até -23, mostrando o aumento desses parâmetros com o avanço da gestação. O coração e o estômago começaram a ser visualizados no dia -113 e, os demais órgãos e a sexagem no dia -83. O Triplex Doppler foi empregado para avaliar o fluxo sanguíneo durante o período gestacional, mostrando uma diminuição nos IR e IP das AU e Aum, do dia -133 a -1, bem como observar o desaparecimento da IPD (dia -1) e aparecimento do componente diastólico (dia -53) na onda de fluxo sanguíneo das AU e Aum, respectivamente. Entre os dias -113 a -1, a média da freqüência cardíaca fetal, obtida pelo Triplex Doppler, foi de 189 ± 2,43 bpm. O presente trabalho permitiu determinar a idade gestacional, avaliar o crescimento anatômico do feto, descrever o momento em que os órgãos são visualizados e realizar a sexagem em C. apella. Constatou-se, também, que o fluxo sanguíneo das AU e Aum são importantes parâmetros para avaliar a vitalidade fetal em C. apella. / The objectives were to: 1) perform conceptus ecobiometry for fetal growth assessment and determine the gestational age in Cebus apella; 2) describe the moment that the fetal organs are observed; 3) perform fetal sex identification; 4) evaluate blood flow in the uterine (UA) and umbilical (Uma) arteries, by measuring the resistive index (RI) and pulsatility index (PI); 5) to note the presence or absence of the early diastolic notch (EDN) and diastolic flow in the UA and Uma flow waveforms, respectively, during gestational period in C. apella. Six adult females were selected and trained to allow vaginal swabs or sedation. Vaginal smears and ultrasography (US) were used to monitor the menstrual cycles and follicular growth, respectively, for choose the better day to natural mating or artificial insemination. Twenty days after mating or insemination, the diagnosis of gestation by US was done. The day of the examination relative to whelping was calculated in retrospect (whelping = Day 0). Ultrasonographic examinations were done on Days -133, -113, -83, -53, -21 and -1 before whelping. The B-mode US was used to measure the gestational sac on Days -133 to -113; the biparietal diameter, occipito-frontal diameter, head circumference and abdominal circumference on Days -113 to -1; and femur length on Days -53 to -23, showing that these parameters increased as gestational age advanced. The fetal heart and stomach were observed on Day -113 and, the other organs and fetal sex identification on Day -83. The Triplex Doppler was used to evaluate the blood flow during the gestational period, showing decrease on RI and PI of UA and Uma, on Days -133 to -1, as well as to note the absence of the EDN in the UA waveform on Day -1 and the presence of the Uma diastolic flow on Day -53. From Days -113 to -1, the mean of fetal heart rate, obtained by Triplex Doppler, was 189 ± 2,43 bpm. The current study enabled to determine the gestational age, to assess the fetal anatomical growth, to describe the moment that the organs were observed and to perform fetal sex identification in C. apella. We inferred that UA and Uma blood circulation were important end points to assess fetal vitality in C. apella.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-05-05T11:17:28Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_ProducaoInvitroEmbrioes.PDF: 1935608 bytes, checksum: 2cd63044454d30a88b39d3bc30f867e4 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-05-09T17:24:39Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_ProducaoInvitroEmbrioes.PDF: 1935608 bytes, checksum: 2cd63044454d30a88b39d3bc30f867e4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-09T17:24:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_ProducaoInvitroEmbrioes.PDF: 1935608 bytes, checksum: 2cd63044454d30a88b39d3bc30f867e4 (MD5) Previous issue date: 2014-06-13 / Trata-se da aplicação de biotecnicas de reprodução na espécie Pecari tajacu para melhorar seu potencial para a criação em cativeiro visando sua produção, conservação e multiplicação de recursos genéticos. Para determinar o tempo de maturação in vitro foram utilizados 48 fêmeas, foram selecionados 69 CCOs e divididos em 4 grupos por idade e tempo de MIV, e então submetidos a ativação partenogenética em Ionomicina e 6-DMAP. Para análise da progressão meiótica 165 oócitos foram divididos em 4 grupos conforme a suplementação de hormônios na MIV e tempo de maturação. Na criopreservação foram utilizados espermatozoides epididimários de 9 machos, diluídos em Tris-frutose e ACP-120 e divididos em grupos de refrigeração a 4ºC e congelamento a -196ºC e presença da glutationa (GSH), foram avaliados os parâmetros motilidade, vigor e viabilidade após a diluição a fresco e criopreservação. Para a produção de embriões, 97 oócitos após MIV de 36 horas foram divididos grupos de ativação partenogenética, FIV e ICSI. Através da ativação partenogenética obteve-se taxas de clivagens (47%) para os oócitos de fêmeas com menos de 2 anos submetidos a MIV em 36 horas, em todos os grupos observaram-se clivagens porém não houve diferenças significativas (P>0,05) entre os grupos analisados, observou-se taxa de blastocisto (15,4%) somente no grupo de oócitos ativados após MIV de 44 horas. Na analise da progressão meiótica, em todos os tempos analisados foram encontrados oócitos em MII. Na criopreservação dos espermatozoides observaram-se queda nos parâmetros analisados nos dois diluidores em todos os grupos, a presença da glutationa não interferiu significativamente nos parâmetros analisados. No resfriamento, as taxas de motilidade e viabilidade foram superiores no ACP-120 (> 50%) e no congelamento em tris-frutose (33% e 18%). A produção de embriões in vitro foi bem sucedida na ativação partenogenética (62,9%) e na ICSI (52,6%), na FIV as taxas foram baixas (7%), a produção de blastocisto ocorreu somente nos embriões partenotos (4,5%). Os resultados mostraram a viabilidade de biotecnicas reprodutivas como conservação de gametas, e produção in vitro de embriões na espécie Pecari tajacu. / This work considers the application of reproduction biotechniques on species Pecari tajacu designed to improve its potential for upbringing in captivity and aiming its production, conservation and the multiplication of genetical resources. To determine the maturation time in vitro, 48 females were utilized. An amount of 69 CCOs were selected and divided in 4 groups, per age and per time of MIV. They were then submitted to parthenogenetic activation in ionomycin and 6-DMAP. For the meiotic progression analysis, 165 oocytes were divided in 4 groups according to supplementation of hormones in MIV and time of maturation. For the cryopreservation, epididymal sperm of 9 males were utilized, diluted in Tris-fructose and ACP-120 and divided in groups of refrigeration at 4°C and freezing at -196 °C in the presence of glutathione (GSH), where the parameters of motility, vigor and viable sperm were evaluated, after fresh dilution and cryopreservation. For the embryo production, 97 oocytes after MIV of 36 hours were divided in groups of parthenogenetic activation, IVF and ICSI. Through parthenogenetic activation the rates of cleavages were obtained (47%) for the oocytes of females with less than 2 years of age, submitted to MIV in 36 hours. In all groups cleavages were observed, but with no significant difference (P>0,05) among the groups analysed. One blastocyst rate of 15,4% was observed only in the group of oocytes activated after MIV of 44 hours. In the meiotic progression analysis, in all times analyzed oocytes were found in MII. In the cryopreservation of the spermatozoa it was observed a drop of the parameters analyzed in the two extenders in all groups. The presence of glutathione did not interfere significantly in the parameters analyzed. In the freezing, the rates of motility and viable sperm were superior in ACP-120 (> 50%) and in the freezing in tris-fructose, 33% and 18%. The production of embryos in vitro was well succeeded in the parthenogenetic activation (62,9%) and in ICSI (52,6%). In IVF the rates were low (7%). The production of blastocyst occurred only in the partenotes embryos (4,5%). The results of this work showed the feasibility of reproductives biotechniques, such gametes conservation and in vitro production of embryos of the species Pecari tajacu.