O polimorfismo de IL28B foi descrito como fator importante na patogênese de infecções causadas por alguns vírus. O objetivo desta pesquisa foi avaliar se polimorfismos (SNP rs8099917 IL28B e SNP rs12979860) foram associados na presença de HAM/TSP. Métodos: O estudo incluiu 188 pacientes do Instituto de Infectologia \"Emilio Ribas\" de São Paulo, divididos em três grupos: 117 Indivíduos infectados pelo HTLV-1 (49 assintomáticos e 68 com HAM TSP), 47 Pacientes monoinfectados pelo vírus da Hepatite C (HCV) e 24 coinfectados pelo HTLV- 1 e HCV. Amostras de sangue foram coletadas, e o PBMC separado através da centrifugação por gradiente de densidade Ficoll-Hypaque. O DNA foi extraído usando um kit comercial, e armazenado a - 80 ° C e, a carga proviral do HTLV-1 foi quantificada. Os SNPs da IL28B na região rs8099917 e rs12979860 foram analisados em todos os grupos por PCR StepOnePlus. Resultados: A análise estatística usando modelo multivariado que incluiu as variáveis: gênero, idade, e carga proviral do HTLV-1, mostrando que o polimorfismo IL28B SNP rs12979860 não foi associado com a HAM/TSP. Em contraste, o SNP rs8099917 GG alelo foi associada com HAM/TSP, quando comprado aos indivíduos assintomáticos (OR = 6,25; IC95% = 1,22- 32,00). Conclusão: Pessoas com SNP rs8099917 genótipo GG podem apresentar uma resposta imune distinta contra a infecção pelo HTLV-1. Assim, parece razoável sugerir que uma pesquisa de polimorfismos IL28BSNP rs8099917 deve ser realizada em todos os indivíduos HTLV-1, a fim de monitorar o risco de desenvolvimento da doença. / The polymorphism of IL28B was described as important in the pathogenesis of infections caused by some viruses. The aim of this research was to evaluate whether IL28B gene polymorphisms (SNP rs8099917 and SNP rs12979860) were associated with HAM/TSP. Methods: The study included 188 patients of the Institute of Infectious Diseases \"Emilio Ribas\" of São Paulo, they formed three groups: 117 subjects infected with HTLV-1(49 asymptomatic and 68 with HAM TSP), 47 chronic HCV monoinfected patients and 24 co-infected with HTLV-1 and HCV. Blood samples were collected and PBMC separated by density gradient centrifugation in Ficoll-Hypaque. DNA was extracted using a commercial kit, and the DNA was stored at -80 ° C for later analysis. Thereafter, the proviral load of individuals with HTLV-1 was quantified SNPs rs12979860 and rs8099917 in the region of IL28B were analyzed in all groups by PCR StepOnePlus system in real time. Results: A multivariate model analysis, including gender, age, and HTLV-1 DNA proviral load, showed that IL28B polymorphism SNP rs12979860 was not independently associated with HAM/TSP outcome. In contrast, the SNP rs8099917 allele GG was independently associated with HAM/TSP outcome (OR=6.25; IC95%=1.22- 32.00). Conclusion: Persons with SNP rs8099917 genotype GG may present a distinct immune response against HTLV-1 infection. So, it seems reasonable to suggest that a search for IL28B polymorphisms should be performed for all HTLV-1-infected subjects in order to monitor their risk for disease development; however, since this is the first description of this finding in the literature, we should first replicate this study with more HTLV-1-infected persons to strengthen the evidence already provided by our results.

A Doença de Gaucher (DG) é a doença lisossômica de depósito mais frequente, sendo causada pela deficiência da atividade da enzima β-glicosidase ácida (GBA), que é responsável pela degradação de glicosilceramidas nos lisossomos. Seu déficit resulta no acúmulo intracelular de glicosilceramidas formando as chamadas Células de Gaucher. A DG é dividida em três grupos baseada na ausência (tipo 1) ou presença e gravidade de envolvimento do sistema nervoso central (tipo 2 e 3). A demonstração da deficiência da atividade da GBA é considerada o método padrão ouro para o diagnóstico, sendo complementada pela medida da atividade da enzima quitotriosidase (QT), que é considerada um biomarcador para a DG. Embora a função exata das células de Gaucher ainda permaneça desconhecida, acredita-se que elas secretam fatores que induzem resposta inflamatória e a produção de espécies reativas. Sabe-se que a instituição do tratamento por reposição enzimática (TRE) diminui significativamente a atividade da QT, porém essa diminuição não chega até os níveis de normalidade. A deficiência da GBA na DG também induz uma cascata de eventos, culminando secundariamente na produção de espécies reativas. Visto isso, o objetivo deste trabalho foi mensurar os níveis de citocinas próinflamatórias (IL-6, TNF-α e IL-17a), proteína S100B em pacientes com DG com e sem tratamento por reposição enzimática e relacioná-los com a atividade da QT, e também, determinar o nível de alguns marcadores de dano oxidativo como substancias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), conteúdo de carbonilas, atividade da catalase (CAT) e superoxido dismutase (SOD) e mensurar o conteúdo total de sulfidrilas (SH), marcadores da defesa antioxidante, visando um método auxiliar para o diagnóstico e acompanhamento do tratamento destes pacientes. Observamos que os níveis de IL-6 em pacientes DG sem tratamento foi duas vezes maior do que os encontrados nos indivíduos saudáveis e que a instituição do TRE provoca uma diminuição significativa nos níveis de IL-6 no soro dos pacientes. Também foi observada uma correlação positiva entre os níveis de IL-6 e a atividade da QT, ou seja, quanto maior a atividade da QT, maior os níveis de IL-6 no soro de pacientes em tratamento. Já as outras citocinas pró-inflamatórias mensuradas, TNF-α e IL-17a, não apresentaram diferença significativa entre os indivíduos saudáveis e os pacientes Gaucher, bem como a medida da proteína S100B. Nos fatores oxidativos observamos alterações na CAT, SOD e sulfidrilas, o que sugere que pacientes DG sofrem mudanças na produção de espécies reativas quando comparados aos indivíduos normais. Este aumento na CAT, SOD e sulfidrilas poderia estar relacionado com a prevenção do aumento do peróxido de hidrogênio e a prevenção de danos lipídicos. No entanto, os outros três parâmetros (TBARS, carbonila e relação SOD / CAT) não demonstraram uma diferença significativa entre os grupos. Com isso, concluímos que a IL-6 mostrou-se a melhor ferramenta a ser utilizada juntamente com a QT para auxiliar no diagnóstico e acompanhamento do tratamento de pacientes DG.

Resumo não disponível

A ventilação mecânica apresenta-se como uma forma de suporte ventilatório comumente utilizada nas unidades de terapia intensiva (UTI), entretanto a sua utilização está associada ao desenvolvimento de pneumonia nosocomial, lesão pulmonar associada a ventilação mecânica (VM) e consequente aumento da mortalidade. Devido a estes fatores a retirada precoce dos pacientes em ventilação mecânica é recomendada1. Define-se o desmame como a transição da ventilação mecânica para a ventilação espontânea, podendo este processo ser gradual ou abrupto, o qual representará 40% do tempo total de ventilação mecânica2,3. O processo de desmame é iniciado quando o paciente apresenta resolução parcial ou total da causa que indicou a VM, contudo, há ainda uma diversidade de fatores clínicos e fisiológicos que serão considerados para a tomada de decisão4. Da mesma forma, pode ser utilizar índices preditores de sucesso ou falha com o objetivo de avaliar o prognóstico do processo. 5,. Após o inicio do processo de retirada do paciente da VM, deve-se selecionar a modalidade ventilatório mais adequada para a descontinuação da VM6. Apesar disso, nenhuma desta avaliações ou destes índices consideram a inflamação como possível fator interferente no processo de desmame dos pacientes em VM. O objetivo do estudo é avaliar os fatores inflamatórios sistêmicos em pacientes submetidos a um protocolo de desmame e sua relação com o sucesso e falha. Trata-se de um estudo transversal desenvolvido em uma Unidade de Terapia Intensiva (UTI) de um hospital privado de Porto alegre, Brasil, que possui 31 leitos adultos clínicos. A população final do estudo foi constituída por 54 pacientes com VM há mais de 48 horas e que foram extubados, no período de fevereiro a novembro de 2012. Foram coletados dados demográficos e parâmetros clínicos, além de amostras sanguíneas para avaliação das interleicinas 1β, 6, 8, 10, assim como TNFα e proteína C reativa (PCR). A falha de extubação foi observada em 20 (37%) pacientes. Os pacientes que falharam a extubação, em comparação com os que não falharam, apresentaram menor índice de respiração rápida e superficial (IRRS) e aumento significativo na PCR 48 horas após a extubação, Oobservamos ainda que para cada aumento em uma unidade dos fatores inflamatórios há o aumento no risco de falha no desmame, sendo o TNFα apresenta 2.27 (1.001 – 4.60, p=0.049), IL6 2.23 (1.06 – 6.54, p=0.037), IL8 2.66 (1.06 – 6.70, p=0.037) e IL10 2.08 (1.01 – 4.31, p=0.04) e, quando correlacionamos o IRRS com a IL1, observamos uma correlação inversa entre as variáveis (r=-0.51, p=0.04). Nós concluímos que há um aumento de PCR nos pacientes que falharam no desmame e que o aumento das interleucinas inflamatórias está associado à maior prevalência de falha neste processo. E o IRRS pode não ser tão efetivo nos pacientes que apresentam inflamação sistêmica. / Mechanical ventilation is presented as a form of ventilatory support commonly used in intensive care units (ICUs), but its use is associated with the development of nosocomial pneumonia, lung injury associated with mechanical ventilation (MV) and consequent increase in mortality . Due to these factors early withdrawal of patients on mechanical ventilation is recommended1. It is defined as the weaning transition from mechanical ventilation to spontaneous ventilation , and this process may be gradual or abrupt, which represent 40 % of the total duration of mechanical ventilation2,3. The weaning process is initiated when the patient shows partial or complete resolution of the case which indicated the VM , however, there is still a diversity of clinical and physiological factors that will be considered for decision making4. Similarly , indices predictors of success or failure with the objective of evaluating the prognosis of the process can be used 5. After the start of the patient retained the VM process , you must select the most appropriate modality for ventilatory discontinuation of MV6. Yet no reviews of this or these indices consider inflammation as a possible influencing factor in the process of weaning from MV patients . The objective of the study is to evaluate the systemic inflammatory factors in patients undergoing weaning protocol and its relation to success and failure. This is a cross-sectional study conducted in a Intensive Care Unit (ICU) of a private hospital in Porto Alegre, Brazil , which has 31 adult beds clinicians. The final study population consisted of 54 patients with VM for more than 48 hours and who were extubated in the period from February to November 2012. Demographic and clinical parameters were collected , and blood samples for assessment of interleicinas 1β , 6 , 8 , 10 as well as TNF and C-reactive protein (CRP). The extubation failure was observed in 20 (37 %) patients. Patients who failed extubation , compared with those who did not fail , had fewer breathing fast and shallow (IRRS) and significant increase in PCR 48 hours after extubation , also observed that for each increase of one unit of inflamatory factors there the increased risk of weaning failure , and the TNF shows 2:27 (1.001 - 4.60, p = 0.049), IL6 2:23 (1.06 to 6.54, p = 0.037), IL8 2.66 (1.06 - 6.70, p = 0.037) and IL10 2:08 (1.01 to 4.31, p = 0.04) , and when the IRRS correlated with IL-1 , we observed an inverse correlation between the variables (r = -0.51, p=0.04) . We conclude that there is an increase of CRP in patients who failed to wean and that increased inflammatory interleukins is associated with higher prevalence of failure in this process, and IRRS may not be as effective in patients with systemic inflammation.

Base teórica: Pacientes com alguns distúrbios psiquiátricos, como transtorno bipolar e depressão maior apresentam alteração de biomarcadores ligados à inflamação, estresse oxidativo e neurotrofinas. A relação entre estas susbstâncias tornou possível a criação de um Índice de Toxicidade Sistêmica (ITS) aplicável a algumas desordens psiquiátricas. Transtornos do humor são comuns em pacientes com fibromialgia (FM), despertando o interesse no estudo destes biomarcadores e do ITS nesta síndrome. Objetivos: Determinar os níveis de citocinas (IL-6, IL-10, IL-8 e TNF-α), de Brain-derived Neurotrophic Factor (BDNF) e de marcadores de estresse oxidativo (carbonil e TBARS - Thiobarbituric Acid Reactive Substances) em pacientes femininas com FM, relacionando com dados clínicos, níveis de depressão/qualidade de vida e comparando a mulheres saudáveis. Métodos: Foram avaliados os níveis de IL-6, IL-10, IL-8, TNF-α, BDNF, carbonil e TBARS em um estudo transversal incluindo 69 pacientes femininas com FM e 61 mulheres saudáveis. Os níveis de interleucinas foram medidos por citometria de fluxo, as concentrações de BDNF foram avaliadas pelo método de ELISA, e os marcadores de estresse oxidativo foram estudados por espectrofotometria (TBARS) e determinação de grupos carbonil. Além disso, o grupo com FM foi avaliado pelo Questionário de Impacto da Fibromialgia – Fibromyalgia Impact Questionnaire (FIQ) e pelas escalas de depressão de Hamilton e de Beck. Resultados: Os grupos tinham a mesma faixa etária (44,5 ± 6,4 anos no grupo FM e 44,0 ± 6,7 no grupo saudável; p = 0,613). As pacientes com FM tinham, caracteristicamente, longa duração de doença (8,5 ± 6,5 anos), importante impacto na qualidade de vida (FIQ 70,2 ± 17,8) e a maior parte apresentou depressão em algum grau (82,6% pelo BDI e 87,0% pelo HDRS). Os níveis séricos de IL-10 foram significativamente maiores no grupo com FM (p = 0,006), enquanto as demais citocinas, BDNF e marcadores de estresse oxidativo não diferiram entre os grupos. Não houve correlação significativa entre os diversos biomarcadores, tornando impossível o cálculo do ITS para pacientes com FM. Conclusão: Este estudo foi o primeiro a testar um índice conjunto de biomarcadores, já avaliados isoladamente em estudos prévios, em pacientes com FM. No entanto, a ausência de correlação estatística entre os níveis séricos destas substâncias não permitiu o cálculo do ITS e sua aplicação em FM, tal como em distúrbios do humor. No entanto, observamos níveis significativamente maiores de IL-10 em pacientes fibromiálgicas, resultado que merece avaliação específica em pesquisas futuras. / Background: Patients with certain psychiatric diseases, such as bipolar disorder and major depression present alteration of biomarkers related to inflammation, oxidative stress and neurotrophins. The relationship between these substances made possible the creation of a Systemic Toxicity Index (STI) applicable to some psychiatric disorders. Mood disorders are common in patients with fibromyalgia (FM), arousing the interest in the study of these biomarkers and STI in this syndrome. Objectives: Determine the levels of cytokines (IL-6, IL-10, IL-8 and TNF-α), Brain-derived Neurotrophic Factor (BDNF) and markers of oxidative stress (carbonyl and TBARS - Thiobarbituric Acid Reactive Substances) in female patients with FM, correlating with clinical data, levels of depression/quality of life and comparing to healthy women. Methods: We evaluated the levels of IL-6, IL-10, IL-8, TNF-α, BDNF, TBARS and carbonyl in a cross-sectional study including 69 female FM patients and 61 healthy women. Interleukins levels were measured by flow cytometry, BDNF concentrations were tested by ELISA method, and oxidative stress markers were studied spectrophotometrically (TBARS) and by the determination of carbonyl groups. In addition, the FM patients were evaluated by the Fibromyalgia Impact Questionnaire (FIQ) and Hamilton and Beck`s depression scales. Results: The groups had the same age range (44.5 ± 6.4 years in the FM group and 44.0 ± 6.7 in the healthy group; p = 0.613). The FM patients have characteristically long disease duration (8.5 ± 6.5 years), relevant impact on quality of life (FIQ 70.2 ± 17.8) and most presented depression in some level (82.6% by BDI and 87.0% by HDRS). Serum levels of IL-10 were significantly higher in the FM women (p = 0.006), while the other cytokines, BDNF and oxidative stress biomarkers did not differ between the groups. There was no significant correlation between the various biomarkers, making it impossible to calculate STI for patients with FM. Conclusion: This study was the first to test an index of a biomarkers set, already evaluated in isolation in previous studies, in patients with FM. However, the absence of statistical correlation between serum levels of these substances did not allow the calculation of STI and its application in FM, such as in mood disorders. However, we observed significantly higher levels of IL-10 in FM patients, a result that deserves in-depth evaluation in future surveys.

Orientador: Ana Paula de Souza Pardo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-14T23:49:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_NailaFrancisPaulode_D.pdf: 4618139 bytes, checksum: 5b6009780de9c20dba293517d2d3eb6c (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A doença periodontal crônica é caracterizada pela inflamação e destruição dos tecidos periodontais, podendo levar à perda dos dentes. Está claro que a periodontite é influenciada pela genética do hospedeiro, constituição do biofilme bucal e o hábito de fumar. Sabe-se que a interleucina 8 (IL-8) é a principal molécula atrativa de neutrófilos. Essas células são as primeiras a chegar aos locais inflamados e além de realizar fagocitose, participam também da destruição do tecido periodontal. Sabe-se também que os patógenos que causam a periodontite são reconhecidos por proteínas receptoras de membrana denominadas receptores Toll-like (TLR), que uma vez acionados iniciam a resposta imune inata. IL8 e TLRs são expressos constitutivamente por células bucais e estão superexpressos na periodontite. Em particular, a IL-8 está ainda aumentada em indivíduos com periodontite crônica fumantes. A expressão gênica é controlada por diferentes mecanismos, incluindo a metilação de DNA. A metilação em dinucleotídeos CpG presentes em promotores de genes inibe a expressão do gene, podendo silenciar por completo a expressão gênica. Assim, o objetivo deste estudo foi analisar o padrão de metilação no DNA nas regiões promotoras dos genes IL8, TLR2 e TLR4 em células bucais e sanguíneas de indivíduos com periodontite crônica fumantes e não fumantes. Também, analisar os níveis de transcritos destes genes quando encontrado diferença no padrão de metilação entre os grupos, a fim de associar o padrão de metilação com a transcrição gênica. Amostras de DNA foram purificadas de células da mucosa bucal, de tecido gengival e tecido sanguíneo de indivíduos saudáveis e com periodontite crônica fumantes e não fumantes. A metilação no gene IL8 foi investigada pela transformação com bissulfito de sódio seguida pela técnica de PCR Específica para Metilação. A análise de metilação nos genes TLR2 e TLR4 foi realizada utilizando o método de Digestão Enzimática Sensível à Metilação. Após o tratamento pelo bissulfito de sódio (IL8) ou digestão enzimática (TLRs), DNA foi amplificado por PCR, submetido à eletroforese em gel de poliacrilamida 10% corado pelo SYBR Gold. Os níveis de transcritos foram analisados utilizando PCR Quantitativo. A análise estatística foi realizada pelo teste de x2 e Kruskal-Wallis para metilação e expressão gênica, respectivamente. A correlação entre metilação versus expressão foi realizada a partir do teste de coeficiente não linear de Spearman. Os resultados indicam que para células epiteliais da mucosa bucal, a frequência de desmetilação no gene da IL8 é maior no grupo periodontite crônica, independente do hábito de fumar, em comparação ao grupo saudável (p<0,0001). Não foram detectadas diferenças no padrão de metilação no tecido gengival e sanguíneo entre os grupos. Foram encontrados maiores níveis de transcritos de IL-8 no grupo periodontite em comparação ao grupo saudável (p=0,007), entretanto, não há relação entre o padrão de metilação e expressão gênica (p>0,05). Para o gene TLR2, não foram detectadas diferenças no padrão de metilação entre os grupos em nenhum tecido estudado (p>0,05). Para o gene TLR4, foi encontrada massiva desmetilação na mucosa bucal e para tecido gengival a desmetilação foi ainda maior, principalmente dentro do grupo periodontite (p=0,03). / Abstract: Chronic periodontal disease is characterized by inflammation and destruction of periodontal tissues, culminating in teeth loss. It is clear that periodontitis is influenced by host genetic, biofilm, and smoking habit. There are some important molecules involved on the pathogenesis of periodontitis. Interleukin (IL-8) is responsible for inducing chemotaxis, which is the directed migration of neutrophil to a site of inflammation. Neutrophil contributes to the elimination of the infecting bacteria and tissue destruction. Infecting bacteria are recognized by transmembrane receptors called Toll-like receptors (TLR), which recognized molecular pattern of microorganisms. The recognition of a variety of microorganisms components by individual TLRs induces innate immune responses. IL8 and TLRs are constitutively expressed by buccal cells and they are upregulated during periodontitis. Genetic transcription is regulated by different pathways, including DNA methylation. Methylation in CpG dinucleotides of gene promoters downregulates the levels of transcription and may even silence the gene transcription completely. So, the objective of this study was to analyze the pattern of DNA methylation in the promoter region of IL8, TLR2 and TLR4 genes in oral cells and blood tissue from healthy subjects and subjects with chronic periodontitis smokers and non-smokers. We also investigated the levels of mRNA expressed when different methylation status were found amoung groups. DNA samples were purified from buccal mucosa, gingival tissue and blood tissue of healthy subjects and subjects with chronic periodontitis smokers and non-smokers. Methylation of IL8 gene was investigated using sodium bisulphite modification followed by Methylation Specific PCR. Methylation analysis of TLRs genes were performed using Specific Methylation-Sensitive Restriction Enzymes. After sodium bisulphate modification (IL8) or enzymatic digestion (TLR2 and TLR4), DNA was amplified by PCR and the results were visualized after electrophoresis on 10% polyacrylamide gels stained by SYBR Gold. Levels of mRNA were analised using Real Time PCR. The statistical analysis was performed using the test of x2 and Kruskal-Wallis test for methylation status and gene expression, respectively. The correlation among methylation status versus gene expression was performed using no linear coefficient test of Spearman. The results indicate that frequency of IL8 gene demethylation is higher in individuals with chronic periodontitis, independent of smoking habit, than healthy group (p<0.0001). Differences were not detected in the methylation status in gingival tissue and blood tissue among the groups. Higher levels of IL-8 mRNA are expressed in periodontitis group than healthy group (p=0.007), however, we did not observe a relationship between IL8 gene methylation and gene expression. No significant difference was observed for TLR2 gene promoter among groups in all studied tissues (p>0.05). TLR4 gene promoter showed massive demethylation in oral mucosa and for gingival tissue it was even higher, mainly in periodontitis group (p=0.03). / Doutorado / Histologia e Embriologia / Doutor em Biologia Buco-Dental

Orientador: Luis Carlos Spolidorio / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-10T20:01:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Neves_KarinaAntunes_D.pdf: 1751187 bytes, checksum: adac4b09e6d649c2ec3a0006d3b1ae83 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Vários relatos na literatura sugerem que a Ciclosporina A (CsA) aumenta a remodelação óssea com a reabsorção excedendo a formação, resultando em perda óssea. Os mecanismos da perda óssea associada à CsA são complexos e envolvem marcadores ósseos celulares e produtos dos osteoblastos e osteoclastos. Dentre os mediadores imunológicos, a CsA parece ter efeitos na produção de óxido nítrico (NO), o qual exerce efeitos bifásicos sobre o osso. O objetivo do presente trabalho foi avaliar os efeitos da CsA sobre o osso através da mensuração da densidade mineral óssea (BMD), análise bioquímica (fosfatase alcalina total, cálcio sérico e fósforo) e relacionar com a expressão de NO e TNFa pelos macrófagos peritoniais de camundongos. Sessenta camundongos foram divididos em 4 grupos e receberam injeções subcutâneas diárias de CsA 50mg/kg peso corporal, durante os períodos de 7, 14, 28 e 60 dias (n=lO) e o controle recebeu solução salina (n=5). Amostras sanguíneas foram obtidas através de punção cardíaca e foram analisados: cálcio sérico, fósforo e fosfatase alcalina. Os macrófagos peritoniais foram obtidos de cada camundongo, 3 dias após a injeção intraperitonial de tioglicolato de sódio. As células foram incubadas com lipopolossacarídeo . (LPS) e os sobrenadantes foram usados para o ensaio de produção de NO e TNFa. As radiografias digitais dos fêmures foram obtidas através de um sistema de imagem digital, CDRR. A densidade mineral óssea -(BMD) foi avaliada com o auxílio do software Photoshop 7,0 (Microsoft, 2003). A concentração dos marcadores séricos ósseos variou com o tempo de administração da CsA. Houve diminuição de cálcio após 28 dias e fósforo e ALP após 7 dias. A BMD diminuiu significativamente na epífise distal dos fêmures, a partir de 14 dias e na epífise proximal, somente após 60 dias, nos camundongos submetidos ao tratamento com CsA. A produção de NO e TNF-a aumentou significativamente nos camundongos tratados com CsA (período de 7 e 14 dias). A partir dos resultados do presente trabalho confirmamos que a CsA induziu perda óssea. Houve um sinergismo entre a perda óssea e a diminuição de ALP' cálcio e fósforo sérico, assim como o aumento dos níveis de NO e TNF-a / Abstract: Several reports suggest that Cyclosporin A (CsA) causes increased bone turnover and remodeling with resorption exceeding formation, resulting in bone loss. The mechanism of CsA-induced bone loss is complex and can involve cellular bone markers and osteoblasts and osteoclasts products. CsA seems to have effects on nitric oxide (NO) production, which has a biphasic effect on osteoclastic bone resorption. The aim of the present study was to evaluate the effects of the CsA on bone by Bone Mineral Density (BMD), biochemical analysis (Total Alkaline Phosphatase - ALP and serum calcium) and to relate them with the expression of NO and Tumor necrosis factor alpha (TNFa.) by peritoneal macrophage of mice. Sixty male mice were distributed into 4 groups and CsA (Sandimmun Novartis) was injected subcutaneously in a daily dose of 50mg/kg body weight during the periods of 7, 14, 28 and 60 days (n=10), whereas control mice received saline solution (n=5). Blood samples were obtained by direct cardiac puncture. Serum calcium and total alkaline phosphatase levels were obtained. Macrophages were obtained trom the peritoneal cavities of treated and control mice 3 days after intraperitoneal administration of sodium thyoglycollate. Cells were incubated with lipopolysaccharide (LPS). After incubation, the culture supernatants were used for NO-and TNFa production assays. Digital radiographs of femurs were obtained with the use of a computerized imaging system, CDR R. Bone mineral density (BMD) measurements were made with the help of the software Photoshop 7,0 (Microsoft, 2003). The concentration of serum bone markers varied with the period of CsA administration. There was a significant decrease in the calcium levels after 28 days and ALP after 7 days. The BMD decreased significantly on distal epiphysis of femurs after 14 days and on proximal epiphysis after 60 days, in the mice submitted to CsA therapy. NO and TNF-a production had a significant increase in mice treated with CsA (7 and 14 days). Based on the results ofthe present study we confirmed that CsA induces bone loss in vivo. There was a synergism between the bone loss and the decrease of alkaline phosphatase, and calcium, and the increase ofNO and TNF-a / Doutorado / Patologia / Doutor em Estomatopatologia

Orientador: Silvana Pereira Barros / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-11T01:50:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marques_MarceloRocha_D.pdf: 1159258 bytes, checksum: b480791f2296297d8bf75042e1af33c1 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: O hormônio paratireóideo (PTH), um mediador da remodelação óssea, é o principal regulador da homeostasia do cálcio, sendo capaz de promover reabsorção e aposição ósseas. Em trabalhos realizados recentemente, foi verificado que o tratamento com PTH, administrado de maneira intermitente, diminuiu a perda óssea e também células inflamatórias no tecido gengival, em ratos com periodontite induzida. No intuito de melhor explicar os resultados obtidos nesses trabalhos, doença periodontal foi induzida em primeiros molares de ratos e após 15 e 30 dias de tratamento com PTH os animais foram sacrificados com o objetivo investigar o periodonto para: 1) avaliar a expressão gênica, por meio de RT-PCR, e localizar, por meio de reação imunohistoquímica, algumas citocinas inflamatórias (IL-1b, IL-6, TNF-alfa) e certas metaloproteinases da matriz (MMP-2 e MMP-9), 2) verificar, por meio de histoquímica, a atividade de fosfatase ácida tatarato resistente (TRAP) na superfície óssea alveolar, e 4) medir a atividade gelatinolítica das MMPs 2 e 9. Como resultados, observou-se que o PTH diminuiu a expressão de mRNA para MMP-2 (15 e 30 dias experimentais) e IL-6 (30 dias experimentais) nas gengivas dos animais estudados; que a localização de IL-1beta, MMP-2 e MMP-9 se deu basicamente no tecido conjuntivo da gengiva, e que a IL-6 foi detectada principalmente na superfície do osso alveolar. O número de células TRAPpositivas foi diminuído nos animais tratados 30 dias com PTH, e atividade gelatinolítica de MMP-9 foi diminuída após 15 dias de tratamento com o hormônio. Dentro dos limites deste estudo, pode-se concluir que a administração intermitente de PTH pôde modular moléculas (MMP-2, MMP-9, IL-6 e número de células TRAP-positivas) que têm relação com degradação tecidual na doença periodontal em ratos / Abstract: Intermittent Parathyroid hormone (PTH) administration has been used as an anabolic agent, and when it is administrated in rats with induced periodontitis, it is able to decrease alveolar bone loss, and reduce the inflammatory cells on the marginal gingival tissue. A possible action of the PTH in cytokines and metalloproteinase (MMPs), related with breakdown tissue in periodontitis, was hypothesized. After inducing periodontitis with cotton ligature in rats and PTH intermittent treatment during 15 and 30 days, inflamed gingival tissue was removed, and a decrease of IL-6 and MMP-2 mRNA expression was observed by semi-quantitative RT-PCR analysis. Zymography assay demonstrated that PTH treatment decreased MMP-9 activity after 15 experimental days. After jaw decalcification, TRAP positive cells were found in higher number on the alveolar bone surface in the group without PTH treatment, after 30 experimental days. Using immunohistochemistry, MMP-2, MMP-9, IL-beta and TNF-alpha were identified in all groups and they were found on the gingival tissue and IL-6 on alveolar bone surface. Within the limits of this study, it can be concluded that intermittent PTH administration may modulate IL-6, MMP-2, MMP-9 and TRAP-positive cells in experimental periodontitis / Doutorado / Histologia e Embriologia / Doutor em Biologia Buco-Dental

Introdução: Nas últimas décadas, a reestenose tem sido o \"calcanhar de Aquiles\" da intervenção coronária percutânea (ICP), limitando seus resultados no médio e longo prazo. Estudos preliminares demonstraram que após a injúria inicial com catéter balão e/ou com stents coronarianos, há desnudação endotelial, dissecção, deposição plaquetária e atração de leucócitos como resposta imediata, podendo levar à reestenose no seguimento mais tardio. A injúria local na parede arterial após implante de stent pode promover a expressão genética e liberação de mediadores inflamatórios, interleucinas, proteínas de fase aguda e fatores de coagulação, deposição de plaquetas e formação de trombos. Estes processos podem estar diretamente relacionados ao prognóstico da doença cardiovascular, porém são escassos os estudos que caracterizem a resposta inflamatória aguda pós-implante de stent coronariano e à ocorrência de eventos adversos. Objetivos: Neste estudo, pretendeu-se avaliar os efeitos de dose de ataque de Rosuvastatina (40mg) sobre a resposta inflamatória aguda após implante de stent coronariano, bem como correlacionar as variações das concentrações de citocinas e a respectiva expressão gênica. Métodos: Pacientes portadores de doença coronária estável sem uso de estatina (há mais de 7 dias), submetidos à intervenção coronária percutânea eletiva em artéria coronária nativa foram randomizados para receberem dose única de ataque de rosuvastatina (40 mg via oral, 3 horas prévias ao procedimento; Grupo Tratado (GT); n=63) versus Grupo Controle (GC) (Ausência da administração de rosuvastatina); n=61. Foram obtidas amostras do sangue periférico antes da administração via oral da medicação (A), 3 horas após medicação (B) e 3 horas após implante do stent coronariano (C). Avaliou-se hemograma completo, dosagem de proteína C reativa (PCR), óxido nítrico (NO) e análise da expressão dos genes e das proteínas, por meio de RT-qPCR e multiplex luminex, dos mediadores IL-1 ?, IL-6, IL-8, PAI-1, MCP- 1, TNF-? e TGF-?. Os pacientes foram acompanhados clinicamente por doze meses após o procedimento. Resultados: Os grupos não apresentaram diferenças significantes em relação às características clínicas, angiográficas e técnicas, com exceção da ICP para lesões em bifurcação, mais comum no GC (19,7% versus 6,2%; p=0,032). Para a expressão gênica, observou-se redução para IL-6 (p<0,001), da IL-1 ? (p=0,016) e PAI-1 (p=0,002) no Grupo Tratado. Para as interleucinas analisadas, observou-se uma diminuição progressiva nas concentrações de IL-6 0,209 pg/ml (IC 0,156;0,28 p<0,001), IL-1? 0,491 pg/ml (IC 0,349;0,692; p<0,001) e PAI-1 0,986 pg/ml com pinteração<0,001) no Grupo Tratado. Houve redução da concentração de PCR no tempo C no GT (p=0,04). Para o NO, ocorreu elevação dos valores do tempo A para C no Grupo Tratado (p=0,004). Na fase intra-hospitalar, ocorreu mais infarto periprocedimento entre os pacientes do Grupo Controle (23% vs 4,7%; p=0,004). No acompanhamento clínico de 12 meses ocorreram mais eventos combinados no Grupo Controle GC (9,8% vs 1,6%; p=0,058). Conclusão: Os resultados deste estudo demonstraram que a rosuvastatina em sua dose de ataque máxima preconizada (40mg), reduz os níveis séricos de marcadores inflamatórios agudos (IL-1 ?, IL-6, PAI-1 e PCR), com incremento dos valores de NO após ICP. / Restenosis remains as the \"Achilles\' heal\" of interventional cardiology, limiting the mid to long term efficacy of percutaneouos coronary interventions (PCI). Preliminary studies have shown that after initial injury with balloon catheter and/or metallic stents, there is endothelial denudation, dissection, platelet deposition and leukocyte attraction as an immediate response, which might limit the late benefits of PCI. Local injury to the arterial wall after stent implantation may promote the gene expression and release of inflammatory mediators, interleukins, acute phase proteins and coagulation factors, platelet deposition and thrombus formation, which are directly related to the prognosis of cardiovascular disease. Despite their importance, there are few studies that characterize the acute inflammatory response after coronary stent implantation and correlate it to the occurrence of adverse events.Objectives: We sougth to evaluate the effects of the loading dose of Rosuvastatin (40mg) on the acute inflammatory response after PCI with mettalic stents, as well as to correlate the variations in cytokine levels and their respective gene expression. Methods: Patients with stable coronary disease without statin (>=7 days) undergoing elective PCI to de novo lesions in the native coronary arterywere randomized to receive a loading dose of 40 mg of rosuvastatin [N = 63] versus a control group (CG) (absence of loading dose); [N = 61]. Blood samples were obtained prior to oral administration of the statin (A), 3 hours after medication (B) and 3 hours after PCI (C). The following laboratory tests were conducted: complete blood count, C-reactive protein (CRP), nitric oxide (NO) and analysis of gene and protein expression by means of RT-qPCR and multiplex luminex, IL-1 mediators, IL-6, IL-8, PAI-1, MCP-1, TNF-? and TGF-?. Clinical follow up was achieved up to 12 months after the procedure. Results: The groups did not significantly differ regarding clinical, angiographic and procedure characteristics, except for the higher amount of bifurcation lesions in the CG (19.7% versus 6.2%, p = 0.032). Among patients pre treated wit the statin, there was a reduction in gene expression for IL-6 (p <0.001), IL-1? (p = 0.016) and PAI-1 (p = 0.002). For the IL analyses, a progressive decrease in the concentrations of IL-6 0.209 pg / ml (IC 0.156; 0.28 p <0.001), IL-1? 0.491 pg / ml (IC 0.349; 0.692, p <0.001) and PAI-1 0.986 pg / ml with paving <0.001) were observed among patients treated with the statin. Furthermore, a progressive reduction in the concentration of CRP was observed in the three timepoints among patients of the rosuvastatin cohort (p = 0.04). An increase in NO concentration was observed from timepoint A to C in the statin group (p = 0.004). During the in hospital period, more periprocedural MI occurred among patients in the control group (23% vs 4.7%, p = 0.004). Also, 12-month MACE rate was higher in the control group (9.8% vs 1.6%, p = 0.058). Conclusion: Pre loading with high dose of rosuvastatin resulted in a marked reduction in the expression of the main inflammatory markers (IL-1 ?, IL-6, PAI-1 and CRP) associated with restenosis after PCI with stents. Additionally, an increase in the NO blood concentration and expression was noticed among these patients.

Encefalite auto-imune experimental (EAE) é o modelo animal da doença humana esclerose múltipla. Foi demonstrado que as estatinas podem ter efeitos benéficos na EAE. Diversos mecanismos de ação foram descritos para explicar esses efeitos, entre eles: estímulo a expressão de HO-1, inibição da expressão de Toll-like receptors (TLR) e inibição da produção de citocinas de padrão Th1. Estudamos o efeito de uma estatina, a sinvastatina, na evolução clínica da EAE e seus mecanismos de ação. Também avaliamos o papel do TLR4 na EAE. O tratamento com sinvastatina melhorou a evolução clínica da EAE nas doses de 1 e 5 mg/kg/dia. A análise do infiltrado celular no SNC mostrou mudança do padrão de diferenciação dos linfócitos com menor porcentagem de células produtoras de IL-17 nos grupos tratados em relação aos controles. Os animais TLR-4 -/- apresentaram melhor evolução da doença. Concluímos que o tratamento com sinvastatina melhora a evolução clínica da EAE através da inibição da produção de IL-17 e que animais TLR-4 -/- têm melhor desfecho clínico na EAE que os controles. / Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is considered the experimental model for the human multiple sclerosis disease. It has been demonstrated that statins, used as lipid-lowering agents, can have beneficial effects on EAE. Several actions have been described to explain these effects: enhancement of HO-1 expression, inhibition of Toll-like receptors expression and inhibition of Th1 cytokines. We have investigated the effect of a statin, simvastatin, on EAE clinical development and the mechanisms behind those effects. Simvastatin treatment ameliorated EAE clinical outcome at doses 1 and 5 mg/kg/day. SNC cellular infiltrates analysis showed altered pattern of differentiation with decreased percentage of IL-17-producing T lymphocytes in treated group comparing with controls. TLR4 -/- mice showed better clinical development. We concluded that simvastatin treatment ameliorates EAE clinical outcome through inhibition of IL-17 production. Mice TLR4 -/- have better EAE clinical outcome than WT controls.