Esse trabalho teve como objetivo estudar aspectos importantes das estratégias reprodutivas de machos e fêmeas de Bothrops jararaca do clado norte (CN) e sul (CS) e das ilhas de Búzios (SP), Ilhabela (SP) e ilha dos Franceses (ES). Para isso, foram analisados exemplares de B. jararaca preservadas de diversas coleções zoológicas. Machos e fêmea de B. jararaca do CN foram significativamente maiores que os machos e fêmeas CS, no entanto tiveram cabeças relativamente menores e foram menos robustos. Fêmeas do CN têm em média maior fecundidade e filhotes maiores do que fêmeas do CS. O ciclo reprodutivo de machos e fêmeas de ambas as populações é sazonal e não variou entre as estações do ano. Fêmeas do CN e do CS tem cópula outonal. A vitelogênese tem início no final do verão e fêmeas grávidas são observadas a partir do final do inverno. Nascimentos de B. jararaca de ambos os clados podem ser observados principalmente no verão e podem se estender até o início do outono. A estocagem de espermatozoides no útero e no infundíbulo foi observada principalmente no outono e inverno. Ciclos reprodutivos de machos de ambos os clados são considerados do tipo pós-nupcial ou do tipo I. O início da produção de espermatozoides é na primavera e a fase ativa pode ser observada no verão. No outono e no inverno, os testículos estão inativos. Estocagem de espermatozoides nos ductos deferentes foi observada durante todos os meses do ano e o segmento sexual renal (SSR) apresentou a fase mais ativa (fase secretora) na primavera e verão (sincronizado com a espermatogênese nos testículos) e fase não secretora no outono e no inverno. Esse padrão dos ciclos dos machos foi observado em ambos os clados. Dessa forma, foram observadas variações geográficas nas características de histórias de vida entre as populações do CN e CS, porém, não foram observadas diferenças entre os padrões de ciclos reprodutivos. Assim, o ciclo reprodutivo de machos e fêmeas de B. jararaca do CN e do CS são conservativo na espécie. / This research aimed to study important aspects of reproductive strategies in male and female of Bothrops jararaca from north clade (CN), south clade (CS) including the islands of Búzios (SP), Ilhabela (SP), and Franceses (ES). We analyzed specimens of B. jararaca preserved on several zoological collections. Male and female of B. jararaca from CN were significantly longer than male and female from CS, however they had relatively smaller heads and were less robust. Male and female of B. jararaca from CN were significantly larger than individuals from CS, had relatively smaller heads and were less robust. Females from CN had on average higher fecundity and larger offspring than females of CS. The reproductive cycle of males and females from both populations was seasonal and the timing of events was also similar between clades. Females of CN and CS have autumn mating season. The vitellogenesis starts in the end of the summer and pregnant females are observed from late winter. Births of B. jararaca occurred from early summer to the beginning of autumn. Sperm storage in the uterus and infundibulum was mainly observed during autumn and winter. Reproductive cycles of male of both clades are type postnuptial or a type I. The beginning of the sperm production occurs in spring and the active phase was observed in the summer. During autumn and winter, the testicles are inactive. Sperm storage in the different ducts was observed throughout the year and the sexual segment of the kidney (SSK) shows a more active phase during spring and summer and non-secretory phase on autumn and winter. This pattern of cycles of male was observed in both clades. In conclusion, there is geographical variation in life-history characteristics between CN and CS populations. However, differences among the reproductive cycle pattern were not evident. Then, the reproductive cycles of male and female of CN and CS are conservative in the species.

Esse trabalho teve como objetivo estudar aspectos importantes das estratégias reprodutivas de machos e fêmeas de Bothrops jararaca do clado norte (CN) e sul (CS) e das ilhas de Búzios (SP), Ilhabela (SP) e ilha dos Franceses (ES). Para isso, foram analisados exemplares de B. jararaca preservadas de diversas coleções zoológicas. Machos e fêmea de B. jararaca do CN foram significativamente maiores que os machos e fêmeas CS, no entanto tiveram cabeças relativamente menores e foram menos robustos. Fêmeas do CN têm em média maior fecundidade e filhotes maiores do que fêmeas do CS. O ciclo reprodutivo de machos e fêmeas de ambas as populações é sazonal e não variou entre as estações do ano. Fêmeas do CN e do CS tem cópula outonal. A vitelogênese tem início no final do verão e fêmeas grávidas são observadas a partir do final do inverno. Nascimentos de B. jararaca de ambos os clados podem ser observados principalmente no verão e podem se estender até o início do outono. A estocagem de espermatozoides no útero e no infundíbulo foi observada principalmente no outono e inverno. Ciclos reprodutivos de machos de ambos os clados são considerados do tipo pós-nupcial ou do tipo I. O início da produção de espermatozoides é na primavera e a fase ativa pode ser observada no verão. No outono e no inverno, os testículos estão inativos. Estocagem de espermatozoides nos ductos deferentes foi observada durante todos os meses do ano e o segmento sexual renal (SSR) apresentou a fase mais ativa (fase secretora) na primavera e verão (sincronizado com a espermatogênese nos testículos) e fase não secretora no outono e no inverno. Esse padrão dos ciclos dos machos foi observado em ambos os clados. Dessa forma, foram observadas variações geográficas nas características de histórias de vida entre as populações do CN e CS, porém, não foram observadas diferenças entre os padrões de ciclos reprodutivos. Assim, o ciclo reprodutivo de machos e fêmeas de B. jararaca do CN e do CS são conservativo na espécie. / This research aimed to study important aspects of reproductive strategies in male and female of Bothrops jararaca from north clade (CN), south clade (CS) including the islands of Búzios (SP), Ilhabela (SP), and Franceses (ES). We analyzed specimens of B. jararaca preserved on several zoological collections. Male and female of B. jararaca from CN were significantly longer than male and female from CS, however they had relatively smaller heads and were less robust. Male and female of B. jararaca from CN were significantly larger than individuals from CS, had relatively smaller heads and were less robust. Females from CN had on average higher fecundity and larger offspring than females of CS. The reproductive cycle of males and females from both populations was seasonal and the timing of events was also similar between clades. Females of CN and CS have autumn mating season. The vitellogenesis starts in the end of the summer and pregnant females are observed from late winter. Births of B. jararaca occurred from early summer to the beginning of autumn. Sperm storage in the uterus and infundibulum was mainly observed during autumn and winter. Reproductive cycles of male of both clades are type postnuptial or a type I. The beginning of the sperm production occurs in spring and the active phase was observed in the summer. During autumn and winter, the testicles are inactive. Sperm storage in the different ducts was observed throughout the year and the sexual segment of the kidney (SSK) shows a more active phase during spring and summer and non-secretory phase on autumn and winter. This pattern of cycles of male was observed in both clades. In conclusion, there is geographical variation in life-history characteristics between CN and CS populations. However, differences among the reproductive cycle pattern were not evident. Then, the reproductive cycles of male and female of CN and CS are conservative in the species.

Os venenos do gênero Bothrops induzem efeitos locais caracterizados por hemorragia, necrose, edema e dor intensa. Apesar da importância clínica do fenômeno de dor, os estudos sobre os mecanismos envolvidos na gênese deste fenômeno são ainda escassos. Além disso, não existem dados sobre a capacidade do antiveneno em neutralizar este fenômeno. Neste trabalho foi investigada, a capacidade dos venenos de Bothrops jararaca, Bothrops asper e da miotoxina III (Fosfolipase A2, variante Asp 49), uma toxina isolada do veneno de Bothrops asper, em induzir hiperalgesia em ratos, a mediação química deste fenômeno e a capacidade dos antivenenos em neutralizar esta ação dos venenos. A possível correlação entre a hiperalgesia e a resposta edematogênica causada pelos venenos ou miotoxina foi também avaliada. O limiar de dor foi determinado antes e em diferentes tempos após a administração dos venenos ou toxina, empregando o teste de pressão de pata de rato. Para o estudo da resposta edematogênica, o aumento do volume das patas posteriores foi determinado por pletismografia. Os venenos e a toxina, administrados por via intraplantar, nas doses de 5µg (VBj), 15µg (VBa) ou 10µg (MIII), induziram hiperalgesia e edema, com respostas máxima na 1a (VBj, MIII) ou 2a (VBa) hora, não sendo mais detectadas na 24a hora. Para o estudo da neutralização, foram utilizados o antiveneno botrópico produzido no Instituto Butantan e o antiveneno polivalente produzido no Instituto Clodomiro Picado da Costa Rica, administrados por via endovenosa, 15 min. ou imediatamente antes ou 15 min. após a injeção dos venenos. O AVIB, quando injetado 15 min. antes do VBj, foi capaz de reverter a hiperalgesia induzida pelo veneno. Em relação ao edema, esta inibição foi observada quando o antiveneno foi administrado 15 min. ou imediatamente antes do VBj. Por outro lado, o AVCP não interferiu com a dor e o edema acarretados pelo VBa. Quando o VBj e o VBa foram incubados, in vitro, por 30 min., a 370C com os AV correspondentes, a hiperalgesia e o edema foram abolidos. Estes resultados indicam que a incapacidade do AVCP, quando administrado in vivo, de bloquear a hiperalgesia e o edema induzidos pelo VBa, não é consequência da ausência de anticorpos específicos no antiveneno, uma vez que estes efeitos foram inibidos quando o veneno foi pré-incubado com o antiveneno. Para avaliação da mediação química da hiperalgesia e do edema, os animais foram submetidos a tratamentos com inibidores de síntese, antagonistas de receptores, anticorpos ou drogas depletoras destes mediadores. Os resultados mostraram que o Hoe-140, dexametasona e NDGA inibem a hiperalgesia induzida pelo VBa, enquanto que apenas a prometazina interferiu com o edema causado pelo veneno. A hiperalgesia induzida pela MIII foi revertida pelo tratamento com prometazina, metisergida, Hoe-140, dexametasona e por NDGA, enquanto que o edema foi inibido apenas por prometazina e dexametasona. Estes dados sugerem que: a) a MIII é um importante componente do veneno para a geração de hiperalgesia, b) a bradicinina e os derivados da lipoxigenase são mediadores da dor acarretada pelo VBa e pela MIII, c) histamina e serotonina participam também da hiperalgesia induzida pela miotoxina e d) a histamina é mediador do edema induzido pelo VBa e pela MIII. Com relação à hiperalgesia induzida pelo VBj, somente o tratamento com Hoe-140 diminuiu este fenômeno, indicando a participação da bradicinina. Por outro lado, este tratamento não foi capaz de interferir com o edema induzido por este veneno. Cabe ressaltar que TEIXEIRA et al. (1994) demonstraram a participação de eicosanóides e PAF na hiperalgesia induzida pelo VBj. Os dados em conjunto sugerem ainda, dissociação entre os fenômenos de dor e edema acarretados por ambos os venenos e pela miotoxina. / Bothrops venoms cause pronounced local tissue-damage characterized by hemorrhage, myonecrosis, edema and pain. Venom-induced pain has been poorly investigated, despite its clinical relevance. Furthermore, the ability of antivenom to neutralize hyperalgesia induced by these venoms is not known. In the present study the hyperalgesia and edema induced by Bothrops jararaca (BjV) and Bothrops asper (BaV) venom and by myotoxin III-MIII (Asp49- phospholipase A2), a toxin isolated from BaV, were investigated. The chemical mediators involved in these phenomena and the ability of the antivenom to neutralize the hyperalgesia and edema induced by these venoms were also investigated. Pain threshold was assessed before and at several intervals after venom injection, using the rat paw pressure test. Edema of paw was measured phethysmographically at the same periods of time. The intraplantar injection of BjV (5µg/paw), BaV (15µg/paw) or MIII (10µg/paw) caused hyperalgesia and edema, whose peak were observed at the 1st (BjV, MIII) or 2nd (BaV) hours after venom/toxin administration, decreasing thereafter. For neutralization studies, the antivenoms produced either at Instituto Butantan from Brazil (AVIB) or Instituto Clodomiro Picado from Costa Rica (AVCP) were administered intravenously 15 min prior to, or immediately before, or 15 min after venoms injection. When the antivenom from Instituto Butantan was injected 15 min. before BjV, the hyperalgesia and edema were abolished. Furthermore, partial inhibition of edema was also observed when the antivenom was injected together with BjV. On the other hand, hyperalgesia and edema induced by BaV were not modified by AVCP. Incubation of BjV and BaV, for 30 min. at 37oC, with the antivenoms in vitro, abolished the hyperalgesia and edema. The inability of the in vivo treatment with antivenom in abolishing hyperalgesia and edema induced by BaV seems not to be related to the lack of neutralizing antibodies in antivenom, because neutralization was achieved in pre-incubation experiments. In order to investigate the chemical mediation of hyperalgesia and edema induced by the venoms or toxin, animals were treated with several drugs. Pretreatment with Hoe-140, dexamethasone and NDGA blocked the hyperalgesia induced by BaV, whereas only promethazine reduced the edema induced by this venom. The MIII-induced hyperalgesia was blocked by promethazine, methysergide, Hoe-140, dexamethasone and NDGA, whereas the edema was reduced only by promethazine and dexamethasone. These results suggest that: a) MIII may contribute to the BaV-induced hyperalgesia, b) bradykinin and leukotrienes mediate the BaV- and MIII-induced pain and MIII; c) histamine and serotonin also participate in the myotoxin-induced hyperalgesia and d) the edema induced by BaV and MIII is mediated by histamine. Pre-treatment of the animals with Hoe-140 abolished BjV-induced hyperalgesia, suggesting that bradykinin may mediate the venom-induced hyperalgesia. However, this treatment did not modify the BjV-induced edema. It is important to stress that previous studies have shown that BjV-induced hyperalgesia is mediated, at least partially, by eicosanoids and PAF (TEIXEIRA et al.,1994). The data presented herein also suggest that distinct mechanisms may be involved in the development of hyperalgesia and edema induced by both venoms and myotoxin III.

Os acidentes ofídicos são considerados um grande problema de saúde pública e no Estado de São Paulo a serpente Bothrops jararaca é o agente considerado mais relevante epidemiologicamente. O antiveneno é o único medicamento oficialmente aprovado para o tratamento de picadas de serpentes e, apesar de ser eficaz em diversos aspectos, mostra-se ineficaz em relação a complicações secundárias do envenenamento, como o estresse oxidativo/nitrosativo, caracterizado por um desequilíbrio no estado redox, que pode ser extremamente deletério aos pacientes. Portanto, vê-se necessária a busca por terapias complementares que possam combater o estresse oxidativo/nitrosativo. Ademais, distúrbios da hemostasia observados em envenenamentos pela B. jararaca, tais como a plaquetopenia, a hipofibrinogenemia e o aumento da atividade do fator tissular (TF) plasmático podem ter também como causa indireta o estresse oxidativo/nitrosativo, induzido por componentes do veneno de B. jararaca (BjV). Recentemente, demonstrou-se que a regulação da atividade biológica do TF, a proteína responsável pela iniciação da cascata de coagulação in vivo, pode ser controlada pela isomerase de dissulfeto proteico (PDI) e que a atividade da PDI é inibida in vivo pela quercetina-3-rutinosídeo (rutina), um antioxidante natural encontrado em plantas e alimentos. Considerando essas premissas, o presente trabalho objetivou investigar em camundongos injetados com o veneno de B. jararaca (BjV): (a) a ocorrência de distúrbios do estado redox; (b) as alterações hematológicas e hemostáticas (em plasma e tecidos) associadas ao desequilíbrio do estado redox; (c) a atividade da rutina como agente modulador sobre essas alterações. Para isso, camundongos Swiss (30-35 g) foram divididos em 4 grupos experimentais: controle salina (salina, controle negativo), controle rutina (rutina+salina), BjV+salina (BjV+salina, controle positivo) e BjV+rutina (BjV+rutina, tratamento). Após 3, 6 e 24 h da administração dos tratamentos (via s.c.), foram coletados sangue e fragmentos de tecidos para posteriores análises. O envenenamento induziu um aumento de espécies reativas, diminuição da capacidade antioxidante total, alterações hematológicas (plaquetopenia, neutrofilia e diminuição de eritrócitos), distúrbios hemostáticos (hipofibrinogenemia, prolongamento do tempo de protrombina e aumento da atividade de TF no plasma), além de diminuir a expressão proteica de PDI no coração. A rutina não inibiu in vitro a atividade biológica de proteínas presentes no BjV (metaloproteinases, serinaproteases, fosfolipases A2 e L-aminoácido oxidases) e nem mesmo a agregação plaquetária induzida pelo veneno. No entanto, a administração do veneno incubado com rutina foi capaz de reduzir os níveis de espécies reativas, impedir a queda de eritrócitos, normalizar os níveis de fibrinogênio e o tempo de protrombina e alterar a atividade de TF e expressão proteica de TF e PDI em tecidos. Desse modo, concluímos que a rutina foi capaz de favoravelmente modular importantes alterações hemostáticas e de estado redox no envenenamento por B. jararaca, o que indica seu grande potencial como agente terapêutico complementar em envenenamentos / Snakebites are a major public health issue and in São Paulo State, and Bothrops jararaca snakes are considered the most important agents epidemiologically. Antivenom is the only officially approved treatment for snakebites and although effective in many aspects, it is ineffective in combating secondary complications induced by envenomation, e.g. oxidative/nitrosative stress (ONS), which can be extremely deleterious to patients. Therefore, it is necessary to search for new complementary therapies that could attenuate ONS. Furthermore, the hemostatic disturbances in B. jararaca envenomation - characterized by the presence of thrombocytopenia, hypofibrinogenemia and increased tissue factor (TF) activity in plasma - could be indirectly evoked by ONS induced by B. jararaca venom (BjV) components. Recently, the biological activity of TF - the protein responsible for initiating the extrinsic pathway of the coagulation cascade - was demonstrated to be regulated by protein disulfide isomerase (PDI), which in turn, can be inhibited in vivo by quercetin-3-rutinose (rutin), a natural antioxidant found in plants and diet. Based on that, the present study aimed to investigate in mice injected with BjV: (a) the alterations in redox status in plasma and tissues; (b) the hematological/hemostatic disturbances (in plasma and tissues) associated with the imbalance in redox status; (c) the activity of rutin as a modulatory agent on those alterations. Swiss mice (30-35 g) were divided in four experimental groups: saline control (saline, negative control), rutin control (rutin+saline), BjV+saline (BjV+saline, positive control) and BjV+rutin (BjV+rutin, treatment) and after 3, 6 and 24 h of the injection of treatments (s.c. route), blood and tissues were collected to further analyses. Envenomation induced an increase in reactive species, a decrease in total antioxidant capacity, hematological alterations (thrombocytopenia, neutrophilia and a decrease in red blood cell counts), hemostatic disturbances (hypofibrinogenemia, prolonged prothrombin time and an increase in the TF activity in plasma), and a decrease in protein expression of PDI in the heart. In vitro, rutin failed to inhibit the biological activity of the main BjV enzymes (metalloproteinases, serine proteases, phospholipases A2 and L-amino acid oxidases) and BjV-induced platelet aggregation. However, when the venom was incubated with rutin, there were reduced reactive species levels, less intense red blood cell drops, recovery of fibrinogen levels and prothrombin time, and alteration of TF activity and protein expression of TF and PDI in tissues. Therefore, we conclude that rutin favorably modulated important hemostatic and redox status alterations in B. jararaca envenomation, indicating its great potential as a complementary therapeutic agent for snakebites

Em 1987 o Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde iniciou o uso do Veneno Botrópico de Referência Nacional (VBRN), que é a primeira extração das serpentes B. jararaca recém-chegadas da natureza. Em 10 anos notou-se uma queda de 67,65% na recepção de serpentes ao Instituto Butantan (IB), e na distribuição geográfica, resultando em uma maior heterogeneidade na composição do VBRN. Assim, comparamos os venenos das serpentes nascidas em cativeiro (VP) do Laboratório de Herpetologia do IB com o VBRN, para verificar a possibilidade de incorporar o VP na preparação dos lotes do VBRN. O VP mostrou-se estatisticamente semelhante ao VBRN nos testes de dosagem de proteínas, SDS-PAGE, 2DE, cromatografia, atividade fosfolipásica, ELISA, Western blotting, dose mínima coagulante (plasma) e hemorrágica, enquanto para as atividades de L-aminoácido oxidase, caseinolítica, zimografia e dose mínima coagulante (fibrinogênio) o VP mostrou-se diferente do VBRN. Para as doses letais e efetiva dos venenos o pool do VP com VBRN foi mais eficaz do que os VP e o VBRN sozinhos. / In 1987, The National Institute of Quality Control in Health in Brazil (INCQS) established the Brazilian Reference Bothrops Venoms (BRBV), which should be composed of the first extractions of newcomers wild snakes. In 10 years there has been a decrease of 67.65% in the reception snakes to Butantan Institute (IB), and geographic distribution, resulting in a higher heterogeneity in BRBV composition. So, we compared the venom samples of snakes born in captivity (SVP) of IB Herpetology Laboratory with BRBV to check the possibility of incorporating the SVP in the preparation of batches of BRBV. SVP was statistically similar to BRBV the proteins dosage, SDS-PAGE, 2DE, chromatography, phospholipase, ELISA, Western blotting, minimum coagulant dose (plasma) and hemorrhage dose, while for L-amino acid oxidase activity, caseinolytic, zymography and minimum coagulant dose (fibrinogen) SVP was shown to be different from BRBV. For effective and lethal doses of pool with SVP and BRBV it was more effective than SVP and BRBV alone.

Orientador: Selma Maria de Almeida Santos / Banca: Henrique Bartolomeu Pereira Vaz / Banca: Ligia Pizzatto do Prado / Banca: Leonardo de Oliveira / Banca: Phelipe Oliveira Favaron / Resumo: A reprodução é essencial para a perpetuação das espécies e por esta razão este é um tema central no estudo da biologia de qualquer animal. Nesta tese apresento dados inéditos sobre diversos aspectos reprodutivos de algumas espécies de jararacas, incluindo B. cotiara, B. alternatus, B. pubescens, B. diporus, B. mattogrossensis, B. neuwiedi e B. pauloensis. Além da caracterização de eventos reprodutivos como produção de gametas, estocagem de esperma e formação de plugs copulatórios, também descrevo pela primeira vez em serpentes a presença de esperma no segmento sexual renal de B. pubescens e a intersexualidade em B. moojeni e B. erythromelas. A influência dos fatores ambientais e da inércia filogenética sobre a determinação dos padrões reprodutivos nestas serpentes foi avaliada por meio de (1) comparações entre a época de ocorrência dos eventos reprodutivos entre as diferentes espécies que indicaram a influência de ambos os fatores; (2) reconstruções de caráter ancestral que apontaram para um forte conservatismo filogenético em relação ao dimorfismo sexual e alta variabilidade em relação ao padrão de maturidade sexual; (3) análises estatísticas cujos resultados indicam que não há relação entre o aumento de parâmetros como temperatura e pluviosidade e o ciclo dos machos de B. pubescens, espécie utilizada como modelo. Embora a predominância de eventos de acasalamento durante o outono e nascimentos no verão indique um forte componente filogenético na determinação dos eventos... / Abstract: Reproduction is essential for the perpetuation of any species. That is why it is a central theme for studies on the biology of any organism. Here, I present new data on several aspects of reproduction for Bothrops species, including B. cotiara, B. alternatus, B. pubescens, B. diporus, B. mattogrossensis, B. neuwiedi and B. pauloensis. The characterization of reproductive events such as gametogenesis, sperm storage, formation of mating plugs and activity of the sexual segment of the kidneys (SSK) is provided. I also describe the presence of sperm inside the SSK for the first time in a snake species and intersexuality in B. moojeni and B. erythromelas. I evaluated the influence of environmental factors and phylogenetic inertia in the determination of reproductive events in these snakes by (1) a comparison of the timing of reproductive events between species which indicates that both factors may be important, (2) ancestral character state reconstructions showing a strong phylogenetic conservatism in sexual dimorphism with females being the larger sex and high variability in sexual maturity between species, (3) statistical analysis indicating that male reproductive variables do not vary according to temperature and rain in B. pubescens. Although there are many observations of reproductive events outside the expected periods for Bothrops species (mainly for timing of ovulation, pregnancy and sperm storage strategies), reports of mating and births are concentrated in autumn and summer, respectively, showing that although phylogenetic inertia has a high influence on the conserved timing of these reproductive events in Bothrops, environmental factors may also play a role in the plasticity observed in some species and individuals / Doutor

Com o objetivo de avaliar dois tipos de sutura e três tipos de material de síntese, foram ambientadas 16 serpentes da espécie Bothropoides jararaca em um recinto em anexo ao bloco cirúrgico de ensino e pesquisa da Faculdade de Veterinária da UFRGS. Após a adaptação os animais foram submetidos à neuro-leptoanalgesia e foram feitas cinco incisões de cinco cm ao longo da serpente. Cada incisão foi suturada de maneira diferente usando as combinações aposição-mononáilon, aposição-ácido-poliglicólico, aposição-octil-2-cianoacrilato, eversão-mononáilon e eversão-ácido-poliglicólico. Foram feitas duas biópsias e a cicatrização cirúrgica foi avaliada clínica e histologicamente. Cada amostra foi analisada individualmente, recebendo escore relativo à presença de heterófilos, macrófagos, linfócitos e fibroblastos e esses resultados foram submetidos análise estatística. Além disso, foi avaliado o conjunto de reações celulares e sua evolução no tempo. Clinicamente houve diferença significativa entre os tipos de suturas,onde o padrão aposicional cicatrizou de maneira mais efetiva e desejável comparado ao de eversão, que dificultou as ecdises e fez uma cicatriz menos estética. Histologicamente não houve significância na reação aos diferentes tipos de materiais testados, porém em três semanas foi encontrada uma quantidade de linfócitos e heterófilos superior comparado às amostras em seis semanas. / Wondering how the skin of snakes healing comparing two different kinds of closure and three different kinds of materials, sixteen snakes Bothropoides jararaca were housing in a room at the Veterinary College of the Federal University of Rio Grande do Sul. After adaptation period the surgeries were performed. Under anesthesia, five incisions along the snake, five centimeters long, were made and then sutured with five different combinations: aposicion-mononylon, apocision-poliglicolic acid, aposicion-octil-2-cianoacrilate, eversion-mononylon and eversion-poliglicolic acid. Two biopsies were made, three and six weeks after surgery. The snakes were clinically checked to evaluate the evolution of healing. All the samples were individually evaluated quantitatively observing macrophages, heterophiles, lymphocyts and fibroblasts and received a score. These result were submitted to the statistic analyses. There was a clinical relevance comparing the aposicional suture over the eversion suture, wich means that the aposicional suture healed much better than the evertion suture, facilitating the ecdise and even giving much better esthetic appearance to the wound. Unlike the eversion suture, wich made the ecdise more difficult and gave to the wound a non-plastic appearance. Comparing materials there were no significant difference between them, despite the octil-2-cianoacrilate that gave to the wound a great appearance. The histology did not shown any significant difference, exception to the time of the wound, where the lymphocyts and heterophiles had a higher presence in the thirty week compared to the sixth week. In three weeks the fibloblasts were dispersed in the tissue, unlike in six weeks, they were much more organized.

Orientadora: Profa Dra Carlos Alberto Silva / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biotecnociência, 2016. / No Brasil a especie com maior numero de registros de acidentes ofidicos e a serpente Bothrops jararaca (Bj). Os efeitos causados pelo envenenamento amplamente caracterizados sao inflamacao no local, edema, necrose tecidual no local da picada e, acoes sistemicas, como hemorragia, coagulopatia e hipotensao arterial. Os efeitos observados ocorrem em funcao da presenca de metaloproteinases, fosfolipase, disintegrinas e peptideos biologicamente ativos presentes no veneno. Apesar disso, nao ha relatos na literatura sobre os eventuais efeitos do envenenamento no sistema reprodutor masculino de pacientes acidentados. Assim, em linhas gerais, o presente estudo visa avaliar os efeitos de componentes presentes no veneno de Bj sobre o testiculo de camundongos. Animais machos (n=6 por grupo) com 2 meses de idade, com peso entre 30 e 35 g foram separados em dois grupos. No primeiro grupo, estao os animais tratados com fracao peptidica (FP), solucao contendo componentes presentes no veneno de Bj com peso molecular inferior a 10 KDa, via intratesticular (i.t) na dose de 5¿Êg diluida em 20 ¿ÊL de solucao salina em dose unica, enquanto que o outro grupo recebeu FP com concentracao de 5¿Êg diluida em 20 ¿ÊL de solucao salina durante 15 dias via intraperitoneal (i.p). Apos o periodo de tratamento, os animais foram eutanasiados e tiveram os testiculos fixados e submetidos a analises morfologica e morfotmetrica. Posteriormente, um outro grupo de animais (n=6) foi tratado via intramuscular, e fragmentos de musculo e testiculo foram submetidos a analise por FT-Raman. Os resultados mostraram que a FP, quando injetada via i.p ou via i.t, provocam intensas alteracoes no epitelio seminifero. Ainda, a FP promoveu o aumento na quantidade de alguns tipos celulares (Espermatocito paquiteno; Espermatide circular; e Figuras meioticas) com papel importante na espermatogenese quando tratados via i.p, e diminuicao no numero de celulas germinativas (Esermatocito paquiteno; Espermatide circular; Espermatogonia tipo B; e Espermatocito zigoteno) durante os estadios de espermiogenese quando tratados via i.t., sendo que os valores de celulas obtidas apresentam diferencas estatisticas com valor de p<0,05. Para avaliar os efeitos toxicologicos do veneno sobre o testiculo, foi empregada a tecnica FT-Raman, que se mostrou efetiva na caracterizacao do envenenamento analisando fragmentos de musculo estriado esqueletico, assim como, pelas analises morfologica do musculo e niveis sericos de creatino quinase. Entretanto, quando aplicada a tecnica FT-Raman na analise de testiculo, nao foi possivel identificar alteracoes que evidenciaram a acao toxicologica do veneno sobre este orgao. Apesar disso, analise dos espectros pelo estudo dos componentes principais, verificou-se diferencas no grupo tratado com veneno botropico em relacao ao controle. Assim, os dados obervados abrem possibilidades de estudo utilizando outras tecnicas para avaliar niveis de expressao de proteinas importantes que indicam eventuais comprometimentos da espermatogenese. / The Bothrops jararaca snake shows the highest number of accidents recorded by the health ministry in Brazil. The effects caused by envenomation can be characterized by edema, tissue necrosis in the local bite and, systemic actions, such as bleeding, coagulopathy and hypotension. These effects are caused by metalloproteinases, phospholipase, disintegrins andbiologically active peptides present in the venom. However, there are no reports in the literature. In the present study, we evaluated if the envenomation effects induced via i.m cause changes on the testis functionality. Male animals at 2 months of age and weighing between 30g and 35g, were divided into 2 groups. The first one received peptide fraction (FP), solution containing components present in Bj venom with a molecular weight below 10 kDa, with dose about 5ìg diluted in 20ìL of saline solution, via intratestis (i.t) in single dose, while the second group received FP 5ìg diluted in 20ìL of saline solution via intraperitoneal (i.p) once a day, during 15 days. Subsequently another group of animals was poisoned, so induced via intramuscular, and testis and muscle were collected after 24h of treatment, and the fragments were subjected to analysis by FT-Raman. FP affected the seminiferous epithelium structure in the groups treated via i.p. and via i.t. Quantitative analysis of seminiferous epithelium showed an increase of some cell types (Spermatocyte pachytene; Spermatid circular; and Meiotic figures) with an important role in spermatogenesis when treated via i.p., and decrease in the number of germ cells (Spermatocyte pachytene; Spermatid circular; Spermatogonia type B, and Spermatocyte zygotene) during the stages of spermatogenesis when treated via i.t. The differences of number of germ cells obtained between the groups show statistical diference with p value <0.05. To evaluate the toxicological effects of the poison on the testis, we used the FT-Raman. The technique was effective in muscle fragments analyses. confirming morphology analysis and the level of creatine kinase, however, when applied the FT-Raman technique in testicular analysis was not possible to identify changes that can complete toxicological poison action on this body as to derail matured germ cells, although further analysis of the spectra, which uses key components, showed differences, opening possibilities to invest time in different analyzes that can prove or disprove this hypothesis.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-11-25Bitstream added on 2014-06-13T20:22:03Z : No. of bitstreams: 1 motta_yp_dr_botfmvz.pdf: 1035450 bytes, checksum: 6aeb7583602a97ca559f4e1cd97d4ada (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente projeto teve como objetivo quantificar os níveis de citocinas moduladoras da inflamação, entre estas TNF-α, interleucina-1β (IL-1β), IL-6, IL-10 e INF-γ e comparar o efeito do tratamento convencional com o efeito do tratamento complementado com extrato da planta Mikania glomerata na intoxicação experimental por Bothropoides jararaca e Crotalus durissus terrificus. Foram usados ratos Wistar divididos em 5 grupos: C – controle, VC - veneno crotálico + soro antifidico, VB – veneno botrópico + soro antiofídico, VCM - veneno crotálico + soro antiofídico + Mikania glomerata e VBM - veneno botrópico + soro antiofídico + Mikania glomerata. As citocinas foram quantificadas no soro, homogenato da pata e na cultura de células esplênicas, pelo teste de ELISA em três momentos (M1- 30 minutos, M2- seis horas e M3- 24 horas após a inoculação do veneno). O veneno botrópico mostrou um potencial para estimular as citocinas inflamatórias como IL-6, IL-1β, TNF-α quando essas foram quantificadas no soro, no sobrenadante do homogenato da pata e nas culturas de células esplênicas. O tratamento com extrato da planta teve como principal efeito o retardo ou uma menor produção dessas citocinas. Os animais que receberam o veneno crotálico demonstraram principalmente um aumento ou diminuição de algumas citocinas como IL-10, IL-6 e IFN-γ quando quantificadas no soro, homogenato da pata e cultura de células esplênicas. O extrato da planta teve ação anti-inflamatória causando diminuição das citocinas inflamatórias e aumento de citocinas anti-inflamatórias. Assim pode-se concluir que os acidentes ofídicos são capazes de causar liberação de citocinas provocando lesões teciduais e a planta mostrou-se eficiente para diminuição de algumas dessas citocinas / This experiment aimed to quantify the pro-inflammatory cytokine levels, including TNF-α, interleukin-1β (IL-1β) and IL-6 as well as the anti-inflammatory ones such as IL-10 and INF-γ. It was also our objective to compare the effect of the conventional treatment to the treatment complemented with Mikania glomerata plant in the experimental intoxication using Bothropoides jararaca and Crotalus durissus terrificus venom. Wistar rats were randomly divided into 5 groups: C – control, VC – Crotalus venom + antivenom serum, VB – Bothrops venom + antivenom, VCM - Crotalus venom + antivenom + Mikania glomerata and VBM - Bothrops venom + antivenom + Mikania glomerata. Cytokines were quantified in the serum, paw homogenates, and spleen cell culture by ELISA test in three different moments (M1- 30 minutes, M2- 6 hours and M3- 24 hours after venom injection). Bothrops venom showed an ability to stimulate inflammatory cytokines such as IL-6, IL-1β, and TNF-α, when they were quantified in the serum, paw homogenate supernatant and spleen cell cultures. The plant extract, it was responsible for a delay or even a lowering in the cytokine production. The animals that received Crotalus venom displayed an increase or decrease of certain cytokines such as IL-10, IL-6 and IFN-γ when they were quantified in the serum, paw homogenate and spleen cell cultures. The plant extract, in this case, had an anti-inflammatory effect diminishing the inflammatory cytokines and increasing the anti-inflammatory ones. Therefore, it can be said that snakebites are capable of triggering the release of cytokines that will lead to tissue damage and the plant proved to be efficient in diminishing some of those cytokines

Orientador: Michiko Sakate / Banca: Regina Kiomi Takahira / Banca: Maria Lúcia Gomes Lourenço / Banca: Maria Terezinha Serrão Peraçoli / Banca: Rosa Maria Barilli Nogueira / Resumo: O presente projeto teve como objetivo quantificar os níveis de citocinas moduladoras da inflamação, entre estas TNF-α, interleucina-1β (IL-1β), IL-6, IL-10 e INF-γ e comparar o efeito do tratamento convencional com o efeito do tratamento complementado com extrato da planta Mikania glomerata na intoxicação experimental por Bothropoides jararaca e Crotalus durissus terrificus. Foram usados ratos Wistar divididos em 5 grupos: C - controle, VC - veneno crotálico + soro antifidico, VB - veneno botrópico + soro antiofídico, VCM - veneno crotálico + soro antiofídico + Mikania glomerata e VBM - veneno botrópico + soro antiofídico + Mikania glomerata. As citocinas foram quantificadas no soro, homogenato da pata e na cultura de células esplênicas, pelo teste de ELISA em três momentos (M1- 30 minutos, M2- seis horas e M3- 24 horas após a inoculação do veneno). O veneno botrópico mostrou um potencial para estimular as citocinas inflamatórias como IL-6, IL-1β, TNF-α quando essas foram quantificadas no soro, no sobrenadante do homogenato da pata e nas culturas de células esplênicas. O tratamento com extrato da planta teve como principal efeito o retardo ou uma menor produção dessas citocinas. Os animais que receberam o veneno crotálico demonstraram principalmente um aumento ou diminuição de algumas citocinas como IL-10, IL-6 e IFN-γ quando quantificadas no soro, homogenato da pata e cultura de células esplênicas. O extrato da planta teve ação anti-inflamatória causando diminuição das citocinas inflamatórias e aumento de citocinas anti-inflamatórias. Assim pode-se concluir que os acidentes ofídicos são capazes de causar liberação de citocinas provocando lesões teciduais e a planta mostrou-se eficiente para diminuição de algumas dessas citocinas / Abstract: This experiment aimed to quantify the pro-inflammatory cytokine levels, including TNF-α, interleukin-1β (IL-1β) and IL-6 as well as the anti-inflammatory ones such as IL-10 and INF-γ. It was also our objective to compare the effect of the conventional treatment to the treatment complemented with Mikania glomerata plant in the experimental intoxication using Bothropoides jararaca and Crotalus durissus terrificus venom. Wistar rats were randomly divided into 5 groups: C - control, VC - Crotalus venom + antivenom serum, VB - Bothrops venom + antivenom, VCM - Crotalus venom + antivenom + Mikania glomerata and VBM - Bothrops venom + antivenom + Mikania glomerata. Cytokines were quantified in the serum, paw homogenates, and spleen cell culture by ELISA test in three different moments (M1- 30 minutes, M2- 6 hours and M3- 24 hours after venom injection). Bothrops venom showed an ability to stimulate inflammatory cytokines such as IL-6, IL-1β, and TNF-α, when they were quantified in the serum, paw homogenate supernatant and spleen cell cultures. The plant extract, it was responsible for a delay or even a lowering in the cytokine production. The animals that received Crotalus venom displayed an increase or decrease of certain cytokines such as IL-10, IL-6 and IFN-γ when they were quantified in the serum, paw homogenate and spleen cell cultures. The plant extract, in this case, had an anti-inflammatory effect diminishing the inflammatory cytokines and increasing the anti-inflammatory ones. Therefore, it can be said that snakebites are capable of triggering the release of cytokines that will lead to tissue damage and the plant proved to be efficient in diminishing some of those cytokines / Doutor