Made available in DSpace on 2013-08-07T19:05:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000412115-Texto+Completo-0.pdf: 1421285 bytes, checksum: 45019602bb21738c0816090a64e131f0 (MD5) Previous issue date: 2008 / The islets transplantation is an alternative for the treatment of type 1 diabetes mellitus. However, during the process of isolation, there are large cell loss, mainly on the periphery of the pancreatic islet. The reactive oxygen species (ROS) contribute significantly in this process affecting the viability of these cells for transplant. Various efforts are being made in an attempt to minimize the damage caused by the release and production of ROS. Presenting important role in cytoprotection and reducing training and free radicals, the fructose-1,6- bisphosphate is a metabolic regulator that stimulates the catabolic reactions of glycolysis, contributing to improved preservation of the tissue in front of organs such as heart ischemia, liver and kidneys. Facing these characteristics, the fructose-1,6-bisphosphate may present an opportunity to use the isolation of islets in an attempt to promote cellular protection. A study using FBP during the isolation of pancreatic islets in mice, analyzing the counting and cell viability, as well as the measurement of free radicals. In this study found no effect at different concentrations of FBP versus control, both in the counting of pancreatic islets as in its viability. In the measurement of free radicals neither the action cytoprotector was observed at doses of FBP studied. / O transplante de ilhotas surge como uma alternativa para o tratamento do diabetes mellitus tipo 1. Entretanto, durante o processo de isolamento, há grande perda celular, principalmente na periferia da ilhota pancreática. As espécies reativas de oxigênio (ROS) contribuem significativamente neste processo afetando a viabilidade destas células para transplante. Vários esforços estão sendo feitos na tentativa de minimizar os danos causados pela liberação e produção de ROS. Apresentando importante papel de citoproteção e redução da formação e liberação de radicais livres, a frutose-1,6-bisfosfato é um regulador metabólico que estimula as reações catabólicas da glicólise, contribuindo para melhora da preservação do tecido frente à isquemia em órgãos como coração, fígado e rins. Diante destas características, a frutose-1,6-bisfosfato pode apresentar uma possibilidade de uso no isolamento de ilhotas na tentativa de promover proteção celular. Foi realizado um estudo utilizando FBP durante o isolamento de ilhotas pancreáticas de camundongos, analisando a contagem e a viabilidade celular, assim como a mensuração de radicais livres. Nesse trabalho não foi encontrado efeito nas diferentes concentrações de FBP versus controle, tanto na contagem de ilhotas pancreáticas quanto nas suas viabilidades. Na mensuração dos radicais livres também não foi observado a ação citoprotetora nas doses de FBP estudadas.

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Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-07-12T18:31:16Z No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_ Luciano Silva Santos.pdf: 68293759 bytes, checksum: e08fa92a1a464c69aa2ced5f53822c73 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-07-12T18:31:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_ Luciano Silva Santos.pdf: 68293759 bytes, checksum: e08fa92a1a464c69aa2ced5f53822c73 (MD5) / O ameloblastoma (AB) e o carcinoma espinocelular (CEC) são tumores benignos e malignos, respectivamente, que acometem os ossos e tecidos maxilares, com propriedades de invasibilidade consideráveis levando a tratamento muitas vezes mutiladores. As células de Langerhans (CLs) são células dendríticas, responsáveis pela apresentação de antígenos aos Linfócitos T, que desempenham importante função nos tecidos epiteliais, bem como na patogênese dessas lesões. O presente estudo analisou a expressão das células de Langerhans, utilizando a técnica imuno-histoquímica através dos marcadores imunológicos CD1a e Langerina, bem como a expressão da angiogênese utilizando o anticorpo CD34, em 25 casos de ameloblastoma (AB) e 23 casos de carcinoma espinocelular (CEC). As células dendríticas foram observadas em 88 % dos ameloblastomas e em 100% dos carcinomas espinocelulares, mostrando associação estatisticamente significante (p-valor<0,001). Tanto nos ameloblastomas como nos carcinomas espinocelulares, as CLs exibiram formas arredondada e dendrítica, em todas as camadas epiteliais, com predominância desta última na camada suprabasal. Apesar de existir uma correlação inversa entre a microdensidade vascular (MDV) e a densidade de CLs, nos CECs, e uma correlação direta entre esses mesmos parâmetros, nos ABs, não foi observada representatividade estatística entre essas correlações. Dos resultados obtidos conclui-se que as células de Langerhans parecem influenciar na imunopatogênese das lesões aqui estudadas, possivelmente com um papel modulador nos carcinomas espinocelulares e inflamatório nos ameloblastomas. / Salvador

Orientador: José Roberto Bosqueiro / Banca: Margarida Júri Saeki / Banca: Débora Cristina Damasceno / Resumo: O aumento da secreção de insulina estimulada por glicose é um mecanismo adaptativo observado nas ilhotas pancreáticas de animais resistentes à insulina. Estudos relatam que os ácidos graxos livres estimulam a secreção de insulina através da ativação do GPR40. Diante destes fatos, investigamos a secreção de insulina, a expressão de proteínas da via do GPR40 nas células ß e a participação dos lipídios na resistência à insulina induzida por dexametasona, através do tratamento com o redutor de lipídios bezafibrato. Os grupos receberam gavagem uma vez ao dia durante 28 dias: Controle (CTL) e DEXA com goma arábica 5% (1 ml/kg, peso corpóreo); BEZA e BEZA-DEXA com bezafibrato (300 mg/kg, p.c.). Nos últimos 5 dias de tratamento os grupos receberam injeções intraperitoniais: CTL e BEZA de solução salina (1 ml/kg, p.c.); DEXA e BEZA-DEXA de dexametasona (Decadron® 1,0 mg/kg, p.c). A secreção de insulina estimulada por glicose aumentou nos grupos BEZA e DEXA. BEZA-DEXA exibiu diminuição dos níveis de ácidos graxos livres, triglicérides e de insulina, mas não houve elevação dos níveis de glicose no sangue. Além disso, houve melhora na resistência à insulina e restauração do padrão de secreção de insulina, em comparação ao grupo DEXA. Nas ilhotas dos animais BEZA-DEXA a expressão das proteínas GPR40, PLCß1 e PKCδ foi significativamente maior em relação aos valores obtidos em DEXA. Esta via permaneceu inalterada nas ilhotas de DEXA e BEZA. Em conclusão, o tratamento com bezafibrato melhorou a função das células ß e impediu a indução de resistência à insulina pelo tratamento com dexametasona, mas os mecanismos não são conhecidos. O aumento na secreção de insulina em DEXA aparentemente não está relacionado com a ativação do GPR40. Contrariando a literatura, apesar da redução na secreção de insulina, as ilhotas dos animais BEZA-DEXA apresentaram ativação da via do GPR40 / Abstract: Increased glucose-stimulated insulin secretion is an adaptive mechanism exhibited by pancreatic islets from insulin resistant animal. Studies report that the free fatty acids stimulate the insulin secretion via GPR40. As such, we investigate the expression of GPR40 in ß-cells and the involvement of lipids in dexamethasone-induced IR, by lipid-lowering therapy with bezafibrate. Groups received once daily gavage for 28 days: Control (CTL) and DEXA with gum Arabic 5% (1.0 mg/kg, body weight); BEZA and BEZA-DEXA with bezafibrate (300 mg/kg, b.w.). In the last 5 days of the treatment groups received intraperitoneal injections: CTL and BEZA of saline (1.0 mg/kg, b.w.); DEXA and BEZA-DEXA of dexamethasone (Decadron® 1.0 mg/kg, b.w.). The glucose-stimulated insulin secretion increased in the DEXA and BEZA groups. BEZA-DEXA shows decrease in fatty acids, triglycerides and insulin levels, but not raised blood glucose levels. In addition, there was improved in insulin resistance and restoration the insulin secretory pattern, when compared to DEXA group. In BEZA-DEXA islets, GPR40, PLCß1 and PKCδ protein content was significantly higher than DEXA. This pathway remained unchanged in DEXA and BEZA islets. In conclusion, bezafibrate treatment improved ß-cell function and prevented dexamethasone-induced IR, but the mechanisms are not known. Augmented insulin secretion in DEXA appears to be unrelated to the activation of the GPR40. Contrary to the literature, despite the reduction in insulin secretion, BEZA-DEXA islets showed activation of the GPR40 pathway / Mestre

Orientador: Antonio Carlos Boschero / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-06T07:06:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Arantes_VanessaCristina_D.pdf: 1696436 bytes, checksum: 2db258b560bf7ee0ec64de7441adfe76 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Em animais, a desnutrição intra-uterina exerce efeitos marcantes sobre o desenvolvimento fetal e pós-natal. Sabe-se que animais desnutridos apresentam níveis elevados de ácidos graxos plasmáticos e esses, por sua vez, são responsáveis por alterar a secreção de insulina. Neste trabalho, verificamos a expressão do fator de transcrição PDX-1, da p38/SAPK2, o metabolismo da glicose e a secreção de insulina em ilhotas de ratos mantidos durante o período fetal e da lactação com uma dieta normoprotéica (17% de proteína) ou hipoprotéica (6% de proteína). Cultivamos as ilhotas por 48 horas em meio de cultura contendo 5.6 mM/L de glicose, na ausência ou presença de0.6 mM/L de ácido palmítico. A secreção de insulina em ilhotas isoladas em resposta 16,7 mmol/L de glicose foi reduzida em ratos desnutridos, no entanto, quando na presença de ácido graxo, observou-se um aumento. Em 2.8 mmol glicose/L,houve diminuição do metabolismo da glicose em ilhotas de desnutridos .Entretanto, quando estimuladas com 16.7 mmol/L de glicose, tanto as ilhotas de desnutridos como as do controle, apresentaram acentuada redução na oxidação da glicose, na presença de ácido graxo. Os níveis de mRNA do PDX-1 e da insulina aumentaram significativamente quando na presença de ácido graxo em ambos os grupos. O efeito do ácido palmítico sobre a expressão protéica de PDX-1 e da p38/SAPK2 apresentou-se similar em ambos os grupos, mas o aumento foi muito mais evidente em ilhotas de desnutridos. Esses resultados demonstram a complexa relação entre nutrientes no controle da secreção de insulina e mostram queos ácidos graxos desempenham um papel importante na homeostasia da glicose, por afetar mecanismos moleculares e as vias de acoplamentsecreção de insulina / Abstract: A severe reduction in insulin release in response to glucose is consistently noticed in protein-deprived rats and is attributed partly to the chronic exposure to elevated levels of free fatty acids. Since the pancreatic and duodenal transcription factor homeobox 1 (PDX-1) is important for the maintenance of B-cell physiology, and since PDX-1 expression is altered in the islets of rats fed a low protein diet, we assessed PDX-1 and insulin mRNA expression, as well as PDX-1 and p38/SAPK2 protein expression, in islets from young rats fed low (6%; LP) or normal (17%; C) protein diets and maintained for 48 h in culture medium containing 5.6 mmol glucose/L with or without 0.6 mmol palmitic acid/L. We also measured glucoseinduced insulin secretion and glucose metabolism. Insulin secretion by isolated islets in response to 16.7 mmol glucose/L was reduced in LP compared to C rats. In the presence of free fatty acids, there was an increase in insulin secretion in both groups At 2.8 mmol glucose/L, the metabolism of this sugar was reduced in LP islets, regardless of the presence of this fatty acid. However, when challenged with 16.7 mmol glucose/L, LP and C islets showed a severe reduction in glucose oxidation in the presence of free fatty acid. The PDX-1 and insulin mRNA were significantly higher when free fatty acid was added to the culture medium in both groups of islets.The effect of palmitic acid on PDX-1 and p38/SAPK2 protein levels was similar in LP and C islets, but the increase was much more evident in LP islets. These results demonstrate the complex interrelationship between nutrients in the control of insulin release and support the view that fatty acids play an important role in glucose homeostasis by affecting molecular mechanisms and stimulus/secretion coupling pathways / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Jose Roberto Bosqueiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-11T17:39:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Quallio_Silvana_M.pdf: 957537 bytes, checksum: 0c375a9b9290585b85244a414a6ea02d (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Introdução e objetivos: O aumento nos níveis de glicose circulante é o principal estímulo para a secreção de insulina. A insulina se liga a receptores de membrana desencadeando diversas respostas celulares. Qualquer alteração na sensibilidade à insulina pode levar a disfunções fisiológicas como a resistência à insulina observada em pacientes diabéticos tipo 2 (T2DM). Experimentalmente, essa condição patológica pode ser mimetizada pela administração de altas doses de glicocorticóides, provendo assim um bom modelo para seu estudo. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a plasticidade das ilhotas pancreáticas submetidas à variação na necessidade secretória de insulina por indução de resistência periférica ao hormônio por tratamento com dexametasona e posterior interrupção do tratamento. Métodos: Ratos wistar com 90 dias de vida foram tratados com dexametasona (1mg/kg, ip) por 5 dias consecutivos (DEX). Em outro grupo (DEX10), os animais foram tratados da mesma maneira e avaliados 10 dias após o último dia da administração de dexametasona. Ratos controle (CTL) receberam administração de NaCl 0,9% apenas. As ilhotas foram isoladas pelo método da colagenase. A expressão de proteínas foi feita por immunoblotting. As análises morfométricas foram realizadas microscopicamente. Resultados: O grupo DEX exibiu marcante resistência periférica à insulina, que foi revertida após o período de 10 dias no grupo DEX10. As ilhotas do grupo DEX apresentaram alterações funcionais e morfológicas como aumento da secreção de insulina estimulada por secretagogos, da área, da densidade e tendência de aumento na massa de células ß ao contrário do grupo DEX10. O conteúdo de proteínas relacionadas ao ciclo celular como a CD2 e CDK4 e a fosforilação da AKT aumentou em ilhotas do grupo DEX, mas retornou aos níveis do CTL em ilhotas DEX10. Conclusão: Estes resultados mostram a plasticidade do pâncreas endócrino haja vista a habilidade de se adaptar a situações que exigem maior ou menor demanda de insulina / Abstract: Introduction and aims: Insulin binds to plasma membrane receptors leading to a variety of cellular responses. Malfunction in any of the insulin cell signalling pathways in target tissues may lead to several conditions and diseases, like hyperglycemia, insulin resistance and type 2 diabetes mellitus (T2DM). These effects may be experimentally reproduced using high doses of glucocorticoids, providing thus a good model for the study of T2DM. The aims of this study were to evaluate the plasticity of pancreatic islets subject to variation on the need for insulin secretory induction of peripheral resistance to the hormone by treatment with dexamethasone and subsequent treatment interruption. Methods: Male wistar rats (90 days old) were treated with dexamethasone (1mg/kg, ip) for 5 consecutive days (DEX). In another group (DEX10), the animals were treated in the same way and assessed 10 days after the last day of administration. Control rats (CTL) received equivalent volume of vehicle. Protein expression was assayed trough immunoblotting. Morphometric analyses were done using a optical microscope and specific digital analysis programs. Results: DEX group showed marked peripheral insulin resistance, reverted after the recovering period in the DEX10 group. DEX islets showed functional and morphological changes, like increased insulin secretion, superficial area, population density, and a tendency for increase in the total mass content of beta cell. Cell cycle proteins CD2 and CDK4 and AKT phosphorylation were increased in the DEX group when compared to CTL group. All these effects were reverted in the group DEX10. Conclusions: These results show that the endocrine pancreas possess a plasticity regarding the capacity of pancreatic islets to adapt themselves to situations where a higher or lower demand for insulin is needed. / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Magister Scientiae (Medical Bioscience) - MSc(MBS) / Athymic nude mouse models have been extensively used to study biological behaviour of normal and diseased human tissues. In such models, immune-deficient mice act as hosts for cysts constructed from human material. A unique biocyst model that entails transplantation of human vaginal cysts into athymic nude mice has been implemented to study diseases of oral mucosa. To date, only one immunohistochemical study of this biocyst model has been reported. Nevertheless, conclusions made in that study were only based on the observed expression patterns of human and murine markers. Statistical assessment of immunohistochemical data had been omitted by the investigator. Therefore, the objective of this study was to further delineate the immunohistochemical profile of normal human vaginal tissue and human vaginal tissue that had been xenografted into nude mice.Experimental cysts constructed from human vaginal mucosa were xenografted into athymic nude mice and harvested 9-weeks post transplantation. Immunohistochemical analysis of normal human vaginal tissue and human vaginal tissue that had been xenografted into nude mice was performed using a panel of human and murine markers. Expression patterns of human and murine markers were assessed. Human markers included cytokeratin 1,cytokeratin 5, cytokeratin 13, cytokeratin 14, collagen type IV, laminin, elastin, fibronectin,Langerhans cells and VEGFR-3. Murine markers included collagen type IV, laminin,fibronectin, Langerhans cells and VEGFR-2. Staining intensities were quantified and statistically analysed using one-way ANOVA with subsequent Friedman’s test for multiple comparisons. Since the sample size was small, the power of the test statistic was enhanced by including Dunn’s post-test for further multiple comparisons. A strong positive expression of all cytokeratins was detected in both normal and xenografted vaginal tissues. Human markers that exhibited weak to moderate positive expression were collagen IV, laminin, fibronectin and VEGFR-3. Human elastin and human Langerhans cells exhibited strong and varying expression patterns respectively. Weak expression patterns for all murine markers were reported, with an exception of VEGFR-2 which was negatively expressed in all xenografted vaginal tissues. Significant differences (P<0.05) in the mean staining intensities between normal and xenografted vaginal tissues were reported for cytokeratin 1, fibronectin and Langerhans cells. There were no statistical differences (P>0.05) in the mean staining intensities for other markers.In conclusion, immunohistochemical studies proved that human vaginal tissue could not only survive in nude mice, but could also become active and develop structures necessary for survival, in this case, a newly formed stromal layer. The epithelium and stromal layer exhibited a human ecosystem.

Erdheim-Chester disease is a rare non-Langerhans cell histiocytic disorder. It is primarily a disease of the long bones. Pulmonary involvement in systemic disease is detected in about half the reported cases. Isolated lung involvement is extremely rare with no clear recommendations for treatment. A 52-year-old caucasian male was evaluated for 1.9 cm × 1.6 cm spiculated nodule in the right upper lobe. Pulmonary function testing and bronchoscopy with endobronchial ultrasound, transbronchial biopsy, and microbiology were inconclusive. Positron emission tomography-computed tomography (PET-CT) was significant for the avidity in same lung nodule along with mediastinal and hilar adenopathy but no bone involvement. Wedge resection with histopathology and immunohistochemistry reported a fibrohistiocytic infiltrate in bronchovascular distribution which was positive for CD68 and negative for CD1A, S100, and BRAF V600E mutation. Magnetic resonance imaging brain ruled out central nervous system involvement. The rarity of the condition along with the complex pathology makes it difficult to diagnose and hence intervene appropriately.

京都大学 / 0048 / 新制・課程博士 / 博士(医学) / 甲第20976号 / 医博第4322号 / 新制||医||1026(附属図書館) / 京都大学大学院医学研究科医学専攻 / (主査)教授 髙折 晃史, 教授 岩田 想, 教授 中川 一路 / 学位規則第4条第1項該当 / Doctor of Medical Science / Kyoto University / DFAM