Submitted by Nayara Passos (nayara.passos@ufpe.br) on 2015-03-05T12:28:50Z No. of bitstreams: 2 Dissertação Jordana da Silva.pdf: 1368489 bytes, checksum: 7de425e62adee4cedfd1e0797cac1e78 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-05T12:28:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação Jordana da Silva.pdf: 1368489 bytes, checksum: 7de425e62adee4cedfd1e0797cac1e78 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013 / CAPES / Neste trabalho, relatamos o desenvolvimento de um novo biossensor eletroquímico com base na interação de Concanavalina A (ConA) e filmes finos de polianilina (PANI) para detecção de lipopolissacarídeos (LPS) de Escherichia coli e ácido lipoteicóico de Staphylococcus aureus. O biossensor impedimétrico foi fabricado por automontagem da lectina ConA em eletrodo de aço modificado com PANI por meio de ligação covalente através do glutaraldeído. Espectroscopia de impedância elétrica (EIE), microscopia eletrônica de varredura (MEV) e espectroscopia Raman foram utilizadas para caracterizar o processo de montagem do eletrodo modificado e demonstraram que a ConA foi capaz de interagir com o LPS e ácido lipoteicóico testados. Em adição, medidas de EIE revelaram que a resistência à transferência de carga (RCT) aumenta consideravelmente após a reação da lectina com açúcares específicos presentes na molécula de LPS e ácido lipoteicóico. Os resultados mostraram que a lectina ConA manteve a sua atividade biológica e mudou a resposta eletroquímica. O bioeletrodo exibe uma resposta de impedância eletroquímica a lectina-lipopolissacarídeo/ácido lipoteicóico, num intervalo linear, com valores máximos de RCT em 200 μg/mL para E. coli (1,50 kΩ) e S. aureus (1,80 kΩ). Assim, o sistema de reconhecimento proporciona uma interface biomimética adequada para a detecção de componentes de bactérias gram-positivas e gram-negativas.

Submitted by Israel Vieira Neto (israel.vieiraneto@ufpe.br) on 2015-03-05T18:09:39Z No. of bitstreams: 2 Dissertação Arthur Clark.pdf: 949278 bytes, checksum: 78006d0f73ffcf14fef6406e3d4a8c16 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-05T18:09:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação Arthur Clark.pdf: 949278 bytes, checksum: 78006d0f73ffcf14fef6406e3d4a8c16 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012-08-03 / Poli-N-lactosamina (poliLacNAc) é uma estrutura fundamental nos glicoconjugados expressa especificamente em células/tecidos de forma associada ao desenvolvimento e carcinogênese. Beta-1,3-N-acetilglucosaminil transferases (β3GnTs) possuem um importante papel na síntese de poliLacNAc, entretanto a ação das β3GnTs na síntese in vivo continuam desconhecidos. A expressão de duas glicosiltransferases, β3GnT2 e β3GnT3, foram avaliadas em amostras cervicais uterinas normais e com lesões malignas (carcinoma escamoso) e prémalignas (NIC 1, 2 e 3) usando imunohistoquímica. Histoquímica com lectinas, com Phytolacca americana lectin (PWM) e Wheat germ agglutinin (WGA), também foi realizada para a análise da presença de cadeias de poliLacNAc e de N-acetilglucosamina (GlcNAc), respectivamente. β3GnT3 foi expressa em quase todas as amostras (99%) e β3GnT2 foi mais expressa nas amostras com lesões (p = 0,0093). A expressão de poliLacNAc (p = 0,0002) e GlcNAc (p = 0,0001) também se mostrou mais frequente nas amostras com lesões. Nossos dados sugerem que a β3GnT2 seja a principal enzima responsável pela síntese de cadeias de poliLacNAc na cérvice uterina e que ela possa ser utilizada como um potencial biomarcador para a presença de lesões.

BARI, Alfa Umaro. Lectinas de sementes de Parkia panurensis e de Parkia biglobosa: estudos físico-químicos e estruturais. 2015. 78 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia de Recursos Naturais)-Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by Coordenação PPGBiotec (ppgbiotec@ufc.br) on 2017-06-13T12:45:55Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_aubari.pdf: 376414 bytes, checksum: 46892f087d561316fb603a219add7360 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-06-13T21:26:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_aubari.pdf: 376414 bytes, checksum: 46892f087d561316fb603a219add7360 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-13T21:26:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_aubari.pdf: 376414 bytes, checksum: 46892f087d561316fb603a219add7360 (MD5) Previous issue date: 2015 / Lectins are proteins of non-immune origin with at least one non-catalytic domain that reversibly binds to specific mono or oligo saccharides and are widely distributed in the plant kingdom. These lectins are presented as valuable tools for biotechnological byplay important biological functions such as recognition of cancer cells, mitogenic agents, immune suppressants among others. In this work, it was isolated lectin from Parkia panurensis seed (Ppal) specifies to mannose and glucose by combining the techniques of ammonium sulfate fractionation and affinity chromatography on a sepharose-mannose column. The analysis of the physicochemical properties showed that Ppal can maintain its hemagglutination activity at a wide range of temperature and pH and also was dependent of metal ions Ca2+and especially Mn2+. By the electrophoresis (SDS-PAGE) analysis, the Ppal showed an electrophoretic profile composed of dual band, higher molecular weight approximately 45kDaand a smaller molecular weight of approximately30kDa. Studies to determine the three-dimensional structure of Parkia biglobosa seed lectin (PBL) showed the complete crystal structure of PBL complexed withα-methyl-manosídeo consists of a monomer in the asymmetric unit consists of threeβ-prism domains with homologous amino acid sequences arranged in tandem. The structure of the monomer has three carbohydrate binding sites, each binding site to carbohydrates is located in one of theβ-prism domains. All ligands showed different patterns of interaction with the residues of the carbohydrate binding site. / Lectinas são proteínas de origem não imune com no mínimo um domínio não catalítico que se liga de forma reversível a mono ou oligossacarídeos específicos e encontram-se largamente distribuídas no reino vegetal. As lectinas de sementes apresentam-se como valiosas ferramentas biotecnológicas por desempenharem importantes funções biológicos tais como reconhecimento de células cancerígenas, agentes mitogênicos, imunossupressores entre outras. Neste trabalho foi isolada uma lectina de sementes de Parkia panurensis (PpaL) específica por manose e glicose pela combinação das técnicas de fracionamento com sulfato de amônio e cromatografia de afinidade em coluna de Sepharose-manose. A análise das propriedades físico-química demonstrou que PpaL consegue manter a sua atividade hemaglutinante a ampla faixa de temperatura e pH. PpaL é uma proteína dependente dos íons metálico Ca2+ e principalmente o Mn2+. Pela analise de eletroforese (SDS-PAGE) PpaL apresentou um perfil eletroforético composto por dupla banda, uma maior com peso molecular de aproximadamente 45 kDa e outra menor com peso molecular de aproximadamente 30 kDa. Estudos para determinação de estrutura tridimensional de lectina de sementes de Parkia biglobosa demonstrou que a estrutura cristalina completa da PBL complexado com α-metil-manosídeo consiste de um monômero na unidade assimétrica formado por três domínios β-prisma com as sequências de aminoácidos homologas arranjado na forma de tandem. A estrutura do monômero apresenta três sítios de ligação a carboidratos, cada sitio de ligação a carboidratos está localizado em um dos domínios β-prisma. Todos os ligantes apresentaram diferentes padrões de interação com os resíduos do sitio de ligação a carboidrato.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:50:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1537_1.pdf: 9274527 bytes, checksum: 3a63d7fc1e96554e66a516ab6af4bddd (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Lectinas são proteínas presentes em diferentes organismos, dos quais são isoladas; possuem origem não imune e habilidade para se ligarem a carboidratos ou glicoconjugados, através de sítios específicos; forças de interação eletrostática e a presença de íons metálicos podem influenciar o processo de ligação. Neste trabalho, foram avaliadas a lectina de folhas de Bauhinia monandra, BmoLL, e a lectina do líquen Cladonia verticillaris, ClaveLL. A investigação e conseqüente emprego biotecnológico de lectinas como proteínas com ação antimicrobiana e inseticida, bem como sua utilidade em histoquímica no estudo e diagnóstico de patologias, estimularam a realização desta Tese. As lectinas foram avaliadas quanto a potencial ação contra bactérias e espécies fúngicas do gênero Fusarium, como proteínas inseticidas para a espécie de cupins Nasutitermes corniger, e também como ferramentas histoquímicas para a investigação histopatológica dos hipocampos de pacientes com doença de Alzheimer. BmoLL e ClaveLL são ativas contra diferentes espécies de Fusarium (F. solani, F. lateritium, F. fusarioides, F. moniliforme e F. verticiloides com BmoLL; e Fusarium verticiloides, F. descemcellulare, F. fusarioides, F. oxysporum e F. moniliforme com ClaveLL) e são hábeis em aglutinar, como também inibir a proliferação de bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. BmoLL e ClaveLL possuem ação não repelente e inseticida contra N. corniger. Em histoquímica de hipocampo, BmoLL (galactose-específica) reconhece o citoplasma neuronal e marca intensamente corpos amiláceos que ocorrem em abundância; ClaveLL (com elevada afinidade por N-acetil-D-glicosamina e glicoproteínas) reconhece intensamente células neuronais e corpos amiláceos e, mais importante, marca neurônios lesionados com emaranhados neurofibrilares ou com degeneração grânulovacuolar, degenerações que são típicas da doença de Alzheimer

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:52:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo5001_1.pdf: 34036 bytes, checksum: 3fc4da888e5a35c2dd64d8f0c0367a6a (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2002 / A lectina de sementes de Cratylia mollis (Cra) reconhece glicose/manose e apresenta propriedades similares a concanavalina A, Con A, uma lectina já bastante caracterizada de sementes de Canavalia ensiformes. A lectina de folha de Bauhinia monandra (BmoLL), específica para galactose, tem sido purificada através de fracionamento com sulfato de amônia e cromatografia de afinidade em gel de guar. O potencial eletroquímico para Cra, Con A e BmoLL foi obtido através de técnicas potenciostáticas usando uma solução salina como suporte para controle da distribuição de cargas entre o eletrodo de calomelano saturado e o eletrodo de platina como eletrodo de trabalho, em um meio aerado. O potencial eletroquímico positivo determinado para Cra (+94 mV) e Con A (+88 mV) indicou uma alta sensibilidade dos eletrodos utilizados. O potencial eletroquímico de interação foi investigado com a Cra imobilizada sobre contas de vidro ativadas com 3-aminopropiltrietoxisilano (APTES). Este potencial descreveu um comportamento linear em relação ao aumento da concentração com um alto coeficiente de correlação (r = 0,9969). BmoLL imobilizada apresentou um potencial eletroquímico positivo deinteração com diferentes concentrações de galactose (0, 50, 100, 150 e 200 mM). Um sistema amperométrico foi desenvolvido para caracterizar a especificidade de ligação a carboidratos da Cra. Medidas foram realizadas na faixa de concentração de 0 550 mM de glicose, frutose ou sacarose. Os resultados observados sugeriram que uma maior área de superfície do eletrodo aumenta a estabilização na interface da dupla camada elétrica interface. O sistema eletroquímico foi desenvolvido para avaliar as trocas de cargas nas superfícies de Cra e BmoLL livres ou imobilizadas quando estas lectinas interagem com carboidratos

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O resveratrol à um polifenol antioxidante natural encontrado especialmente na epicarpo da uva, em nozes e na romà o qual pode inibir a ativaÃÃo de mediadores prÃ-inflamatÃrio e citocinas na fase precoce de expressÃo do gene. Jà à bem conhecido que as lectinas sÃo proteÃnas de ligaÃÃo de aÃÃcares que atuam tanto como molÃculas prÃ- e anti-inflamatÃrias. Assim, o objetivo do presente trabalho foi o de verificar a ligaÃÃo de um composto de polifenol com uma lectina de Canavalia maritima (ConM) com base na sua capacidade para inibir processos prÃ-inflamatÃrios. Para alcanÃar este objetivo, a ConM foi purificada e cristalizada, uma soluÃÃo de 5 mM de resveratrol 5 mM foi utilizada para soaking durante 2 horas de incubaÃÃo. Os cristais obtidos pertencem ao grupo espacial monoclÃnico C2, o refinamento final resultou em um Rfactor de 16,0% e uma Rfree de 25,5%. Resveratrol se liga na rÃgida atravÃs de pontes de hidrogÃnio e interaÃÃo hidrofÃbica com aminoÃcidos que compÃem a quinta e sexta fita-β da folha-β rÃgida da ConM. A ConM complexada com o resveratrol inibiu a oxidaÃÃo do DPPH, mostrando atividade sinÃrgica entre a proteÃna e o ligante com a relaÃÃo mais eficaz de 2:3. Foi verificado ainda que o sÃtio de ligaÃÃo a carboidratos nÃo està diretamente relacionado à atividade antioxidante. à a interaÃÃo entre ConM e resveratrol, que indica o sinergismo destas duas molÃculas em agir como agentes sequestrantes de radicais livres que podem estarem relacionados a capacidade de reduÃÃo do processo inflamatÃrio atravÃs da inibiÃÃo de muitos mediadores prÃ-inflamatÃrios por lecitinas. / Resveratrol is a natural antioxidant polyphenol found especially in grape epicarp, walnuts, and pomegranates, which can inhibit the activation of proinflammatory mediators and cytokines at the early gene expression stage. It is well known that lectins are sugar-binding proteins that act as both pro- and anti-inflammatory molecules. Thus, the objective of this work was to verify the binding of a polyphenol compound with a lectin of Canavalia maritima (ConM) based on their ability to inhibit pro-inflammatory processes. To accomplish this, ConM was purified and crystallized, and resveratrol was soaked at 5 mM for 2 hours of incubation. The crystal belongs to the monoclinic space group C2, the final refinement resulted in an Rfactor of 16.0% and an Rfree of 25.5%. Resveratrol binds in the rigid β-sheet through H-bonds and hydrophobic interaction with amino acids that compose the fifth and sixth β-strands of the rigid β-sheet of ConM. The ConM and resveratrol inhibited DPPH oxidation, showing synergic activity with the most effective ratio of 2:3 and carbohydrate binding site is not directly related to antioxidant activity. It is the interaction between ConM and resveratrol that indicates the synergism of these two molecules in acting as free radicals scavengers and in reducing the inflammatory process through the inhibition of many pro-inflammatory events.

O Lúpus Eritematoso Sistêmico (LES) é uma doença inflamatória sistêmica autoimune caracterizada pela produção e deposição de imunocomplexos. Sua etiologia é pouco conhecida, mas há evidências da participação de fatores genéticos. Vários genes responsáveis pela síntese de proteínas do Sistema Complemento (SC) têm sido relacionados com LES. O gene MBL-2 responsável pela síntese da lectina ligadora da manose (MBL - mannose-binding lectin), uma proteína envolvida na ativação do SC, apresenta vários polimorfismos que se relacionam com a deficiência desta proteína e, conseqüentemente, estão associados com desenvolvimento de LES. Para verificar a possibilidade de alguns polimorfismos da MBL configurarem risco aumentado para LES e se há alguma interferência destes com as manifestações clínicas e laboratoriais da doença, foi conduzido um estudo de caso-controle, com 327 pacientes lúpicos e 165 controles saudáveis da mesma área geográfica, sendo avaliados os polimorfismos G57E (alelo C), G54D (alelo B), IVSnt5, R52C (alelo D) e R52H do gene MBL-2. A genotipagem foi realizada por Restriction Fragment Length Polymorphism-Polimerase Chain Reaction (RFLP-PCR) usando primers e enzimas de restrição específicas para cada polimorfismo. Os dados clínicos e laboratoriais foram coletados dos prontuários. Os resultados evidenciaram uma diferença estatisticamente significativa na freqüência do alelo D nos pacientes euro-descendentes quando comparados com os controles (9,6% versus 3,3%, P=0,001, odds ratio de 3,01, intervalo de confiança de 95%: 1,58- 6,06, P<0,05). As frequências dos alelos B e C não foram diferentes nos pacientes euro-descendentes e controles (alelo B: 15,9% versus 18,8%, P=0,317 e alelo C: 3,6% versus 3,0%, P=0,796). Os alelos IVSnt5 e R52H não foram encontrados nesta população. Achados clínicos e laboratoriais não tiveram diferença estatisticamente significativa em relação à presença ou ausência dos alelos mutantes. Os resultados apresentados apontam um aumento de cerca de três vezes no odds ratio para o desenvolvimento de LES em pessoas com a presença do alelo D. Nesta população estudada, não foi encontrada associação entre os alelos mutantes e a expressão fenotípica da doença.

CORREIA, Jorge Luis Almeida. Purificação, caracterização parcial e potencialidade biotecnológica de três lectinas de sementes de espécies de Leguminosae da subtribo Diocleinae. 2015. 101 f. Tese (Doutorado em biotecnologia)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2015. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-07-20T15:30:18Z No. of bitstreams: 1 2015_tese_jlacorreia.pdf: 12368047 bytes, checksum: 7bb605fd3353cb78f27981c1dea5ae71 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-08-02T19:07:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_tese_jlacorreia.pdf: 12368047 bytes, checksum: 7bb605fd3353cb78f27981c1dea5ae71 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-02T19:07:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_tese_jlacorreia.pdf: 12368047 bytes, checksum: 7bb605fd3353cb78f27981c1dea5ae71 (MD5) Previous issue date: 2015 / Leguminosae is recognized by the large amount of isolated and characterized lectins, especially seeds. In this group stand out proteins extracted from species belonging to subtribe Diocleinae, the number of studies in different areas of knowledge. Lectins can be defined as proteins or glycoproteins which are not originated from a body's immune response and have the ability to recognize and bind reversibly to mono or oligosaccharides particular without, however, altering their chemical structures. Different works in our group are structurally haracterizing these proteins as well as elucidating some possible biotechnological applications for these molecules. In this sense, the objective of this study was to isolate and characterize lectins of different species of Leguminosae of Diocleinae subtribe and test them for toxicity to Artemia sp. naupilos, The effect on the smooth muscle of blood vessels and the detention lectin matrix agarose previously activated with cyanogenic bromide (CNBr). Were isolated and characterized the lectin Dioclea sclerocarpa, Dioclea lasiocarpa and Dioclea lasiophylla. Were also made circular dichroism studies on lectin Dioclea sclerocarpa and Dioclea lasiocarpa. The lectin Dioclea lasiophylla was tested against Artemia sp. order to assess their toxicity and was also immobilized on agarose matrix. We evaluated the effect of lectin Dioclea lasiocarpa in the smooth muscle of blood vessels. The knowledge gained from the three scientific articles published in this thesis is a major breakthrough in this promising field of study that has been continuously growing for biotechnological applications. / A família Leguminosae é reconhecida pela grande quantidade de lectinas isoladas e caracterizadas, especialmente de sementes. Neste grupo se destacam as proteínas extraídas de espécies pertencentes a subtribo Diocleinae, pela quantidade de estudos em diferentes áreas do conhecimento. Lectinas podem ser definidas como proteínas ou glicoproteínas que não são originadas a partir de uma resposta imunológica do organismo e possuem a capacidade de reconhecer e se ligar reversivelmente a mono ou oligossacarídeos específicos sem, no entanto, alterar suas estruturas químicas. Diferentes trabalhos no nosso grupo vêm caracterizando estruturalmente essas proteínas, bem como elucidando algumas possíveis aplicações biotecnológicas para essas moléculas. Neste sentido, o objetivo deste trabalho foi isolar e caracterizar lectinas de diferentes espécies de Leguminosae da subtribo Diocleinae e testa-las com relação à toxicidade para naupilos de Artemia sp., o efeito na musculatura lisa de vasos sanguíneos e a imobilização de lectina em matriz de agarose previamente ativada com brometo cianogênico (CNBr). Foram isoladas e caracterizadas as lectinas de Dioclea sclerocarpa, Dioclea lasiocarpa e Dioclea lasiophylla. Também foram feitos estudos de dicroísmo circular na lectina de Dioclea sclerocarpa e Dioclea lasiocarpa. A lectina de Dioclea lasiophylla foi testada contra Artemia sp.de forma a avaliar sua toxicidade e também foi imobilizada em matriz de agarose. Foi avaliado o efeito da lectina de Dioclea lasiocarpa na musculatura lisa de vasos sanguineos. O conhecimento acumulado a partir dos três artigos científicos publicados nesta tese constitui um grande avanço no neste campo promissor de estudo que vem em contínuo crescimento para aplicação biotecnológica.

FELIX, Wagner Pereira. Produção heteróloga de frutalina em Pichia pastoris. 2008. 113 f. Tese (Doutorado em bioquímica)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2008. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-07-28T15:13:10Z No. of bitstreams: 1 2008_tese_wpfelix.pdf: 3013919 bytes, checksum: 5ad2f9b358ba8740f49b54a25064ab73 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-08-02T14:44:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_tese_wpfelix.pdf: 3013919 bytes, checksum: 5ad2f9b358ba8740f49b54a25064ab73 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-02T14:44:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_tese_wpfelix.pdf: 3013919 bytes, checksum: 5ad2f9b358ba8740f49b54a25064ab73 (MD5) Previous issue date: 2008 / Frutalin, the Artocarpus incise alfa-D-galactose binding seed lectin was expressed and processed in a heterologous system for protein expression, using the metilotrophic yeast Pichia pastoris. In order to obtain the proposed objectives, three strategies were followed: identify the frutalin gene from the genomic DNA, obtained from the leaves; obtain, from the GenScript Corporation, the synthetic frutalin polypeptide chains gene, optimized for expression in Pichia system; and isolate frutalin gene, from mRNA present in fresh seeds in order to obtain the cDNA, using the RT-PCR technique. The obtained genes were inserted in the Pichia genome, in order to evaluate the lectin expression. While in the first strategy only the beta chain gene was obtained, in the other two the complete frutalin gene was obtained. The best results were obtained from the third strategy. The expression process was temperature dependent, with the optimum at 18 οC and the recombinant frutalin showed an apparent molecular mass of 17 kDa, which suggest the presence of both the linker peptide and the histidine tag. / A frutalina, lectina α-D-galactose ligante, foi expressa e processada num sistema heterólogo para expressão de proteínas utilizando a levedura metilotrófica Pichia pastoris. Para atingir os objetivos esperados foram desenvolvidas três estratégias: identificar o gene que codifica para a frutalina a partir do DNA genômico obtido de folhas de A. incisa; sintetizar, por uma empresa especializada, o gene que codifica para as cadeias polipeptídicas da frutalina, otimizando-o para a expressão em P. pastoris e isolar o gene que codifica para a frutalina, a partir do mRNA presente em sementes maduras e frescas, para obtenção do cDNA utilizando a técnica da RT-PCR. Enquanto na primeira estratégia, foi obtido apenas o gen da cadeia beta, nas duas outras estratégias o gen completo foi obtido. No entretanto, a estratégia que mostrou melhor expressão da frutalina recombinante em P. pastoris foi a da obtenção do gene que codifica para a frutalina, a partir do mRNA. A expresão foi tempertura dependente e a frutalina recombinante apresentou uma massa molecular aparente de 17 kDa, sugerindo a presença do peptídeo de ligação e da cauda de histidina.

CARNEIRO, Victor Alves. Efeito do metabólito bioativo e de lectinas vegetais sobre o crescimento de micro-organismos patogênicos. 2011. 144 f. Tese (Doutorado em bioquímica)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2011. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-07-28T14:20:26Z No. of bitstreams: 1 2011_tese_vacarneiro.pdf: 5022871 bytes, checksum: 86384f0abc8798b9c8b5ca8856ae2d84 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-08-02T14:44:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_tese_vacarneiro.pdf: 5022871 bytes, checksum: 86384f0abc8798b9c8b5ca8856ae2d84 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-02T14:44:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_tese_vacarneiro.pdf: 5022871 bytes, checksum: 86384f0abc8798b9c8b5ca8856ae2d84 (MD5) Previous issue date: 2011 / Biofilms are communities of microbial cells embedded in a matrix of polymeric material consists mainly of polysaccharides that form on biotic or abiotic surface. The search for phytochemicals agents with potential anti-biofilm became an active area in scientific research. Lectins are proteins that bind carbohydrates of form specifically and reversibly, being able to agglutinate and precipitate cells and/or glycoconjugates. Due to their capacity to bind and recognize specific carbohydrates, lectins can be a potent toolin biofilm studies. These proteins can bind to the bacteria or prevent the interaction with the surface and consequently decrease biofilm formation. Other classes of biomolecules with applicability in this type of bacterial communities are the secondary metabolites isolated from plant tissues. The class of diterpenes, substances very common in plants, corresponds to a class of natural molecules with antimicrobial properties well established. T hus, the present study was to evaluate the antibacterial activity "in vitro" of plant lectins and diterpene casbano(CD), a secondary metabolite isolated from Croton nepetaefolius, aplant native to northeastern Brazil, against different pathogens microorganisms. The minimum inhibitory concentration, MIC, of planktonic growth was made by the standard techinique of microdilution determined by optical density at 640nm. Analisys of initial adhesion and biofilm formation were performed using polystyrene microtiter plates with quantification of biomass by the method of staining with crystal violet. The tests were performed with different concentrations of the products tested. The results showed that the lectin from Canavalia ensiformis had an antibacterial effect, inhibiting the planktonic growth of gram-positive bacteria. Other lectins showed an inhibition of initial adhesion and an inhibition of biofilm formation of some microorganisms. The CD had a biocidal activity and biostatic for most species tested, being able to affect also the formation of biofilm. In conclusion, these results showed that the lectins and casbane diterpene have a promising antibacterial activity, suggesting a possible application therapeutic for pharmacological treatment of infections associated with different infectious agents. / Biofilmes são comunidades de células microbianas incluídas em uma matriz de material polimérico constituído principalmente por polissacarídeos que se formam sobre uma superfície biótica ou abiótica. A busca de agentes fitoquímicos com potencial anti-biofilme tornou-se uma área ativa na pesquisa cientifica. Lectinas são proteínas que se ligam a carboidratos de forma específica e reversível, sendo capazes de aglutinar células e/ou precipitar glicoconjugados. Devido à sua capacidade de ligar e reconhecer carboidratos específicos, as lectinas podem ser uma potente ferramenta para estudos de biofilmes. Estas proteínas podem se ligar às bactérias ou impedir a interação com a superfície e, conseqüentemente, diminuir a formação de biofilme. Outras classes de biomoléculas com grande aplicabilidade nesse tipo de comunidades bacterianas são os metabólitos secundários isolados de tecidos vegetais. A classe dos diterpenos, substancias bastante comuns em plantas, corresponde a uma classe de moléculas naturais com propriedades antimicrobianas bem estabelecidas. Com isso, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a atividade antibacteriana “in vitro” de lectinas vegetais e do diterpeno casbano (DC), um metabólito secundário isolado de Croton nepetaefolius, uma planta nativa do Nordeste brasileiro, contra diferentes microrganismos patogênicos. A concentração mínima inibitória do crescimento planctônico foi realizado pela técnica padrão de microdiluição determinada através da densidade óptica a 640nm. Os ensaios de adesão inicial e formação de biofilme foram realizados utilizando placas de microtitulação de poliestireno com quantificação da biomassa pelo método de coloração com cristal de violeta. Os ensaios foram realizados com diferentes concentrações dos produtos testados. Os resultados demonstraram que a lectina de Canavalia ensiformis apresentou um efeito antibacteriano, inibindo o crescimento planctônico de bactérias Gram- positivas. Outras lectinas apresentaram uma inibição da adesão inicial, assim como na inibição da formação do biofilme de alguns microrganismos. O DC teve uma atividade biocida e bioestática para a maioria das espécies testadas, sendo capaz de prejudicar também a formação do biofilme. Em conclusão, estes resultados mostraram que as lectinas e diterpeno casbano, importantes classes de produtos naturais, podem desempenhar atividade antibacteriana promissora, sugerindo um possível potencial terapêutico para o tratamento farmacológico de infecções associadas a diferentes agentes infecciosos.