As chaperonas moleculares são ativas em muitos processos celulares envolvendo o enovelamento e a homeostase de proteínas. Essas características fazem das chaperonas alvos potenciais para o tratamento de diversas doenças. As Hsp70 e as Hsp90, em especial, são proteínas ubíquas altamente conservadas biologicamente que atuam no enovelamento de proteínas nascentes, prevenção da agregação proteica, recuperação de proteínas de agregados, sinalização e crescimento celular, dentre outros. Contudo, para que essas proteínas cumpram eficientemente suas funções, elas devem ser moduladas por co-chaperonas moleculares. A SGT é uma co-chaperona que pode ser dividida em três regiões: domínio N-terminal, domínio TPR e domínio C-terminal, sendo que a região do domínio TPR é a responsável pela interação com o motivo EEVD no C-terminal das Hsp90 e Hsp70 citoplasmáticas. A SGT é encontrada em vários organismos, dentre eles os protozoários do gênero Leishmania spp.. Estes organismos são responsáveis pela leishmaniose, uma doença negligenciada que afeta milhares de pessoas todos os anos, principalmente em países subdesenvolvidos. Evidências indicam que a SGT em protozoários é essencial para o crescimento e viabilidade da forma promastigota. Diante disso, nesse trabalho foi feito o estudo estrutural e funcional da co-chaperona SGT de Leishmania braziliensis (LbSGT). A LbSGT recombinante foi produzida e purificada. A caracterização estrutural indica que a LbSGT é uma proteína rica em estrutura secundária do tipo hélice α que se comporta como um dímero alongado em solução. Dados de estabilidade térmica e química indicam que a LbSGT é uma proteína formada por domínios com diferentes estabilidades. A LbSGT foi identificada in vivo e o western blotting indicou sua presença cognata nas formas promastigotas do protozoário. Os ensaios de interação indicam que as interações entre a LbSGT e a Hsp90 de L. braziliensis (LbHsp90) e a LbSGT e Hsp70-1A humana (usada como proteína modelo) são diferentes da interação da LbSGT com o peptídeo MEEVD. Sendo assim, esses dados sugerem que a interação da LbSGT com a Hsp70-1A e LbHsp90 envolvem mais regiões das proteínas do que somente o motivo de interação da Hsp70-1A e da LbHsp90 com o domínio TPR da LbSGT. Em conjunto, as propriedades estruturais e funcionais da LbSGT observadas estão de acordo com a possível função da SGT como proteína adaptadora entre os sistemas Hsp70 e Hsp90 no foldossoma. / The molecular chaperones are active in many cellular processes involving protein folding and homeostasis. These characteristics make the chaperones potential targets to the treatment of many diseases. Hsp70 and Hsp90, in special, are highly conserved ubiquitous proteins that act in the folding of nascent proteins, protein aggregation prevention, aggregate recovering, signaling and cellular growth, among others. However, for these proteins to effectively fulfill their function, they must be modulated by molecular co-chaperones. SGT is a co-chaperone that can be divided into three domains: a N-terminal domain, a TPR domain and a C-terminal domain, being the TPR domain responsible for the interaction with the EEVD motif at the C-terminus of cytoplasmic Hsp90 and Hsp70. SGT is found in various organisms; among they are the protozoans of Leishmania spp.. These organisms are responsible for leishmaniasis, a neglected disease that affects thousands people every year, mainly at underdeveloped countries. Evidences indicate that SGT in protozoans are essential to the growth and viability of promastigote form. Therefore, the structural and functional study of the Leishmania braziliensis SGT (LbSGT) is presented. Recombinant LbSGT was produced and purified. The structural characterization points that LbSGT is rich in α-helix secondary structure and behaves as an elongated dimer in solution. Chemical and thermal stability data suggest that LbSGT is formed by domains of different stabilities. LbSGT was identified in vivo and the western blotting indicates its cognate presence in the protozoan promastigote forms. The interaction assays show that the interaction between LbSGT and Hsp90 of L. braziliensis (LbHsp90) or human Hsp70-1A (used as model protein) were different from the interaction between LbSGT with MEEVD peptide. Moreover, these data suggests that the interaction between LbSGT and Hsp70-1A and LbHsp90 involves additional protein regions besides the Hsp70-1A and LbHsp90 interaction motif. Altogether, the observed functional and structural proprieties of LbSGT accord to the SGT possible function as an adapter protein between the Hsp70 and Hsp90 systems in the foldossome.

A leshmaniose tegumentar americana (LTA) é uma doença de ampla distribuição no continente, constituindo importante problema de saúde pública na América Latina. No Brasil, são notificados cerca de 35 mil casos novos a cada ano, com maior distribuição nas regiões Centro-Oeste, Norte e Nordeste. A doença têm uma forte associação com desmatamentos e o estabelecimento de contingentes populacionais em áreas recentemente desbravadas. A região Centro-Oeste do País, notadamente o estado do Mato Grosso, sofreu nas últimas décadas um intenso processo de ocupação desordenada do seu território, passando a mostrar um número progressivamente elevado de casos de LTA. Este trabalho objetivou descrever a evolução da moléstia no Mato Grosso durante o período 1994 a 1999, utilizando dados secundários produzidos na rotina das atividades da Fundação Nacional de Saúde (Funasa) relativos às 4 áreas distritais em que o Estado era dividido: Distritos 1 (Cáceres), 2 (Nortelândia), 3 (Rondonópolis) e 4 (Sinop). Excluindo-se o ano de 1998, em que problemas operacionais relacionados à distribuição de medicamentos reduziram a notificação de casos, os coeficientes de incidência (10 mil) variaram de 16,5 (em 1997) a 20,6 (em 1999). A LTA mostrou-se crescente no Estado, com todos os municípios apresentando casos em 1999. Em todos os distritos e ao longo de todo o período do estudo, as maiores incidências foram observadas em homens acima de 20 anos de idade. Verificou-se uma distribuição diferenciada da LTA segundo as áreas distritais, com Cáceres mostrando os valores mais reduzidos (5,0 a 5,6 por 10 mil), Rondonópolis com valores intermediários (12,7 a 14,5 por 10 mil) e Nortelândia e Sinop com valores elevados (32,6 a 44,5 e 29,2 a 55,2 por 10 mil, respectivamente). Os baixos valores em Cáceres devem-se, provavelmente, ao fato de corresponder a uma população mais estabilizada. Em contrapartida, os distritos de Nortelândia e, especialmente, Sinop, compreendem áreas que sofreram intenso processo de colonização em anos recentes, com desmatamento para expansão da fronteira agrícola, construção de rodovias e grande afluxo populacional, fatores que explicam os elevados coeficientes de incidência. Os resultados do trabalho mostram que a LTA é uma endemia de grande relevância no Mato Grosso, com transmissão ocorrendo em todo o seu território e de maneira ascendente nos últimos anos da série estudada. A evolução progressiva da doença se fez de modo mais intenso na área do Distrito 4 (Sinop), onde, em 1999, 12 municípios apresentavam coeficientes de incidência acima de 100 casos por 10 mil habitantes. / American tegumentary leishmaniasis (ATL) is widely distributed in the continent, being a relevant public health problem in Latin America. In Brazil, it is more present in the Center-West, North and Northeast regions, with about 35 thousand reported cases every year. The disease is strongly associated with the entrance of large amount of people into recently deforested areas. The Center-West region of Brazil, mainly the State of Mato Grosso, experienced a very disorganized process of colonization in the recent decades, showing a marked increase in the number of cases of ATL. This investigation was designed to describe the evolution of the disease in Mato Grosso from 1994 to 1999, using secondary data provided by the routine activities of National Health Foundation (Funasa), corresponding to the 4 districts in which the State was divided: 1 (Cáceres), 2 (Nortelândia), 3 (Rondonópolis) and 4 (Sinop). Excluding the year 1998, in which operational problems related to the distribution of medicines to treat ATL caused reduction in reporting cases of the disease, the incidences rates (per 10000) varied from 16.5 (in 1997) to 20.6 (in 1999). ATL showed increasing rates along the period, with every municipality reporting cases in 1999. Males above 20 years of age showed the highest rates in all districts and during the whole period under study. The disease had a different distribution according to the district: Cáceres had the lowest rates (5.0 to 5.6 per 10000); Rondonópolis, intermediate rates (12.7 to 14.5 per 10000); Nortelândia and Sinop, high rates (32.6 to 44.5 and 29.2 to 55.2, respectively). The low incidence in Cáceres is probably due to the fact that this area has a more stable population. On the other hand, the district of Nortelândia, and, especially Sinop, encompasses areas which experienced an aggressive colonization process in recent years, with intense deforestation intended to expand the agriculture frontier, construction of highways and enormous population movement into the area, which explains the rise of the rates along the period. The results of this investigation show that ATL has a great sanitary relevance in Mato Grosso, with transmission occurring in its whole territory and showing an increasing trend along the last years of the studied period. The progression of the disease is more evident in the area of District 4 (Sinop), where 12 municipalities showed incidence rates above 100 cases per 10000 inhabitants in 1999.

A leishmaniose visceral (LV) é um problema de saúde pública, que tem incidência elevada em crianças. No ano de 2009 a cidade de Araguaína - Tocantins foi a cidade com maior número de casos de LV. Este estudo tem como objetivo identificar a expansão geográfica da LV no município de Araguaína, identificar o perfil epidemiológico dos casos de LV atendidos no Hospital de Doenças Tropicais (HDT) de Araguaína, principalmente de crianças e pessoas maiores de 60 anos, que representam população de risco para a gravidade da doença. A partir do número de casos notificados de 2004 a 2009, foram elaborados mapas sobre a evolução da distribuição geográfica da LV nos bairros de Araguaína, também foi realizado estudo epidemiológico, laboratorial e evolutivo dos casos de LV em crianças e pessoas acima de 60 anos atendidas no HDT. Dentre as crianças, nas menores de um ano, também foi avaliado o quadro clínico. Foram utilizados os dados do Sistema de Informação de Agravos de Notificação (SINAN) dos casos notificados no HDT, nos anos de 2004 a 2009. Foram registrados 983 casos, sendo 391 de crianças (39,8%) de zero a cinco anos e destas 71 notificações de menores de um ano (18%). Neste mesmo período foram notificados 22 casos de LV em maiores de 60 anos (2,2%). A maioria das notificações foi da cidade de Araguaína (62,5%). Os casos de LV ocorreram na maioria dos bairros de Araguaína, iniciaram nos bairros centrais e depois se expandiram para a periferia, onde fizeram o maior número de casos. Com relação ao sexo dos pacientes, houve uma discreta incidência no sexo masculino, principalmente na faixa etária dos maiores de 60 anos. O diagnóstico de LV teve confirmação laboratorial na maioria dos casos, porém o exame utilizado foi na maioria das vezes o exame sorológico, que não é o melhor método diagnóstico. O tratamento inicial da maioria dos pacientes foi com o antimoniato pentavalente. A maioria dos pacientes evoluiu para a cura. Este trabalho demonstra a expansão geográfica da LV no município de Araguaína, atingindo principalmente crianças. / Visceral leishmaniasis is a public health problem, have enlarged incidence in children. In 2009 Araguaína city Tocantins was the city with the biggest cases VL. This study aimed to identify the geographical expansion of the VL in Araguaína, identify the epidemiological profile of cases of VL treated at the Hospital for Tropical Diseases (HDT) in Araguaína, especially in children and people over 60 years old, which represent a risk population for disease severity. From the number of reported cases from 2004 to 2009, maps were drawn about the evolution of geographical distribution of VL in the neighborhoods of Araguaína, was also carried out epidemiological study, laboratory and rolling of VL cases in children and people over 60 years attended in the HDT. Among children, with less than a year,was also evaluated the clinical date. The study used data from the Brazilian Information System for Notifiable Diseases (SINAN) cases reported in HDT, in the years 2004 to 2009. 983cases were notified, of which 391 children (39,8%) from zero to five years and of these 71 reports of children under one years (18%). In the same period were reported 22 cases of VL in adults over 60 years (2.2%). Most reports were from the Araguaína city (62,5%). VL cases occurred in most neighborhoods in Araguaína, started in central districts and then expanded into the suburbs, where they made the largest number of cases. With regard to sex of patients, the was a low incidence in males, mainly aged over 60 years. The diagnosis of VL was confirmed by laboratory tests in the most cases, but was obtained the serological diagnosis, that isnt the best diagnostic method. Initial treatment of most patients was with pentavalent antimoniate. Most of patients progressed to healing. This study demonstrates the geographical spread of VL in Araguaína, affecting mainly children.

As doenças parasitárias continuam sendo um sério desafio de saúde pública, principalmente em países subdesenvolvidos ou em desenvolvimento. Dentre as diversas parasitoses existentes, pode-se destacar a leishmaniose, endêmica em vários países localizados nas regiões tropicais e subtropicais do globo terrestre. Ainda hoje, milhões de pessoas adquirem a infecção e milhares vão a óbito devido às complicações da doença quando não diagnosticada e tratada corretamente. Pesquisas voltadas à busca de tratamentos mais efetivos e seguros de doenças consideradas de países que negligenciam tais são de suma importância, uma vez que a disponibilidade de medicamentos eficazes e seguros ainda é bastante limitada, além do setor da indústria farmacêutica não demonstrar disposição em investimentos. Diante destes fatos, o presente trabalho visou à obtenção de novos candidatos a protótipos de fármacos leishmanicidas, utilizando como modelo estrutural a piperina, uma amida natural com propriedades antileishmania. Assim, foram obtidos oito ésteres (LFQM 138-145), tendo em suas estruturas as subunidades benzodioxola e piperidínica, comuns à piperina (6). Além destes, dois carbamatos (LFQM 146 e LFQM 147) também foram obtidos. Todos os compostos foram elucidados estruturalmente por técnicas de espectrometria (IV, RMN e EM), além de avaliados biologicamente in vitro frente às formas promastigotas de Leishmania amazonensis através do IC50 em μM. As substâncias mais ativas da série dos ésteres foram LFQM 144, LFQM 145 e LFQM 139, com valores de IC50 de 41,06 μM, 42,83 μM e 51,58 μM, respectivamente. Para a série dos carbamatos, o mais ativo foi LFQM 146 com IC50 = 43,16 μM, sendo equipotente aos dois compostos ésteres mais ativos LFQM 144 e LFQM 145. Todos os compostos foram menos ativos que a anfotericina B (IC50 = 5,08 μM), utilizada como medicamento padrão nas análises. Os compostos mostraram baixo perfil de citotoxicidade ao serem avaliados pelo ensaio de MTT com monócitos humanos, sendo o éster LFQM 145 o mais seguro dentre todos os sintetizados, com relação CC50/IC50 = 40,10. Dessa forma, o perfil molecular destes compostos está sendo considerado de grande interesse, podendo levar através de otimizações estruturais futuras à descoberta de compostos mais ativos e seguros / Parasitic diseases remain a serious public health challenge, especially in underdeveloped or developing countries. Among the various existing parasitosis, we can highlight that leishmaniasis is endemic in many countries located in tropical and subtropical regions of the globe. Even today, millions of people become infected and thousands will die as result of complications of the disease if not diagnosed and treated properly. Researches aimed at seeking more effective and safer treatments for diseases considered countries that neglect these are of paramount importance, since the availability of effective and safe medicines is still quite limited and also the pharmaceutical industry sector not demonstrate willingness to investments. Given these facts, the present work aimed at obtaining new candidate prototypes antileishmanial drugs, using as structural model piperine, an amide with natural antileishmanial properties. Thus, we obtained eight piperidine-benzodioxole esters (LFQM 138-145) presenting in their structures the piperidinic and benzodioxolic subunits, common to the compound model, piperine (6). In addition, two carbamates (LFQM 146 and LFQM 147) were also obtained. All compounds had their structures elucidated by spectral techniques IR, NMR and MS. All compounds have been biologically evaluated in vitro against the Leishmania amazonensis promastigotes and values were expressed by IC50 in μM. The most active substances of the ester series were LFQM 144, LFQM 145 and LFQM 139, with IC50 values of 41.06 μM, 42.83 μM and 51.58 μM, respectively. For the carbamate series, the most active was LFQM 146 with IC50 = 43.16 μM, that was equipotent to the evaluated esters LFQM 144 and LFQM 145. All compounds were less active than amphotericin B (IC50 = 5.08 μM) that was used as standard drug in the analysis. The compounds showed low toxicity in the MTT human cell viability assay and LFQM 145 was considered the safer between all the synthetized compounds, with a relation CC50/IC50 = 40,10. Thus, the molecular profile of these compounds is being considered of great interest and may lead future structural optimizations through the discovery of compounds most active and safe / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Leishmaniose é uma doença causada por um protozoário do gênero Leishmania. É considerada uma doença negligenciada, com altos índices em países em desenvolvimento. As opções de quimioterapia são limitadas e entre elas os problemas mais comuns são: a longa duração do tratamento, o alto custo, a resistência do parasito, a eficácia variável entre cepas ou espécies, os vários efeitos colaterais da droga e toxicidade. A necessidade de novos agentes terapêuticos seguros, efetivos e menos tóxicos é urgente. A co-infecção HIV/Leishmania tem aumentado ao redor do mundo, mudando a distribuição geográfica e a incidência da doença. O estudo da atividade de metais de transição tem sido realizado desde a descoberta da atividade antitumoral da platina (Pt) em 1965. Os complexos de paládio (II) têm se destacado especialmente por suas atividades biológicas variadas como antitumoral, atividade antiprotozoária, ação anti-inflamatória e atividade leishmanicida, além de apresentar menor toxicidade que a Pt. Devido à necessidade de novos agentes terapêuticos, doze novos complexos de paládio(II), obtidos a partir de dois ligantes iminicos, foram sintetizados e caracterizados por análise elementar, infravermelho (IR) e espectroscopia 1H RMN. A avaliação in vitro dos ligantes e complexos foi realizada sobre formas promastigotas e amastigotas de Leishmania (Leishmania) amazonensis e sua citotoxicidade determinada em macrófagos murinos, através do teste MTT. A maioria dos complexos exibiram uma atividade leishmanicida que variou de 5,72-53,01 mg /mL para o IC50. A atividade dos ligantes foi melhorada após a coordenação com o paládio e a substituição por alguns radicais aumentaram ainda mais a atividade leishmanicida. Os compostos mais ativos foram o complexo de cloreto (serie A) e os complexos de tiocianato (serie A e B). Os resultados observados indicaram que os novos compostos além de apresentarem uma potencial atividade leishmanicida possuem menor citotoxicidade e maior índice de seletividade que a Pentamidina, droga de referência. Portanto, esses novos compostos são promissores agentes no tratamento contra a leishmaniose porém novas avaliações devem ser realizadas para determinação da toxicidade in vivo e mecanismo de ação. / Leishmaniasis is a disease caused by a protozoan from the genus Leishmania. It is considered a neglected disease with high endemicity in developing countries. The chemotherapy options are limited and the common problems are: long duration of therapy, high cost, parasite resistance, variable efficacy between strains or species, several drug side effects and toxicity. The need for new safe and effective therapeutic agents with less toxicity is urgent. The HIV/Leishmania co-infection has increased around of the world, changing the geographical distribution and the incidence of the disease. The study of transition metals activities has been conducted since the discovery of the antitumor activity of platinum (Pt) in 1965. The complexes of palladium (II) have been noted especially for its various biological activities as anti-tumor activity, anti-protozoal, anti-inflammatory action and leishmanicidal activity, and to be less toxic than the Pt. Due to necessity of new therapeutic agents, twelve new palladium (II) complexes obtained from two imine ligands were synthesized and characterized by elemental analyses, Infrared (IR) and 1H NMR spectroscopies. The in vitro evaluation of ligands and complexes has been tested on promastigotes and amastigotes form of Leishmania (Leishmania) amazonensis and its cytotoxicity determinate on murine macrophages, by MTT test. Most complexes exhibited a leishmanicidal activity which ranged from 5,72-53,01 µg/mL for IC50.The activity of ligands were improved after coordination with palladium and the replacement by some substituents had increased even more the leishmanicidal activity. The most active compounds were chloride (serie A) and thiocyanate complexes (both series). Besides the results indicated a potential leishmanicidal activity, the new compounds have lower cytotoxicity and higher selectivity index that Pentamidine, a drug reference. Therefore, these new compounds are promising agents in the treatment against leishmaniasis but further evaluation should be conducted to determine in vivo toxicity and mechanism of action. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

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INTRODUÇÃO: A leishmaniose visceral é uma doença que acomete cerca de 500 mil pessoas por ano no mundo e se caracteriza principalmente por um quadro de febre, hepatoesplenomegalia e pancitopenia. Há uma imunossupressão específica frente a Leishmania chagasi. Classicamente esta resposta é modulada pelas células dendríticas, que são as primeiras células que entram em contato com o parasita. Estas células, a partir de vários determinantes, elaboram uma resposta do tipo Th1, com a produção de citocinas capazes de ativar os macrófagos a eliminar o parasita ou uma resposta do tipo Th2, que se caracteriza por uma produção de citocinas que são incapazes de ativar o macrófago parasitado. Com o objetivo de se estudar a resposta imune tecidual, esta investigação avaliou a resposta imune na mucosa duodenal de crianças portadoras da leishmaniose visceral plenamente manifesta. MÉTODOS: Um grupo de 13 crianças com calazar foi submetido à biópsia perioral de duodeno, com cápsula de Watson. Nove crianças assintomáticas foram utilizadas como controles e foram submetidas à biópsia duodenal endoscópica. Ambos os grupos foram submetidos a pesquisa do parasita, a análise morfométrica e a análise semiquantitativa da produção local de TNF-α, δ-interferon, IL-4 e IL-10 e fenotípica das seguintes células imunes: CD4, CD8, CD68. RESULTADOS: A análise morfomérica revelou que nos casos havia um infiltrado linfoplasmocitário com discreta atrofia vilositária. Não se verificou a presença de eosinófilos ou neutrófilos. A presença de leishmania foi verificada em todos os casos e esteve ausente nos controles. A análise da produção de citocinas revelou que tanto nos casos como nos controles havia uma média de produção de IL-10 semelhante, com p=0,8968 (teste T de Student); que não se detectou IL-4 nos casos e nos controles; que a freqüência da produção de δ-interferon nos controles foi maior que nos casos, com p=0,046 (teste de Fischer); que a freqüência da produção de TNF-α foi semelhante nos casos e controles (teste de Fischer) com p=0,41; havia um infiltrado macrofágico significativamente superior nos casos com p=0,005757 (teste T de Student); a média de contagem de CD4 nos casos foi significativamente maior que nos controles, utilizando-se o teste de Mann-Withney com p=0,040, teste da mediana p=0,019; e que a média da contagem de CD8 foi semelhante nos casos e controles com p=0,396 (teste T de Student). CONCLUSÕES: A mucosa duodenal por ser um ambiente imunotolerante, pela produção natural de IL-10, permitiria a presença e multiplicação da leishmania. Que o infiltrado linfoplasmocitário composto por células CD4, CD8 e CD68 foi incapaz de montar uma resposta imune eficaz contra o parasita, principalmente pela baixa produção local do δ-interferon. / INTRODUCTION: Visceral leishmaniasis is a disease that strikes around 500 thousand people in the world per year and its major characteristics are fever hepatoesplenomegaly and pancytopenia. There is a specific imunnosupression in face of the Leishmania chagasi. Classically this response is modulated by the dendritic cells that are the first cells to get in contact with the parasite. These cells, from various determinants, elaborate a Th1 type response, with the production of cytokines capable of activating the macrophages and eliminate the parasite or a Th2 type response, that is characterized by cytokines production that are incapable of activating the macrophages under the parasite action. With the purpose of studying the tissue immune response this investigation evaluated the immune response on the duodenal mucosa of children carrying fully manifested visceral leishmaniasis. METHODS: A group of 13 children carrying kalazar was submitted to a duodenal perioral biopsy, with Watson\'s capsule. Nine assymptomatic children was used as control group and submitted to an endoscopic duodenal biopsy. Both groups were submitted to the parasite research, the morphometric analysis and the semi quantitative analysis of the local production of TNF-α, δ-interferon, IL-4 e IL-10 and phenotypic analysis of the following immune cells: CD4, CD8, CD68. RESULTS: The morphometric analysis revealed that there was a limphoplasmocitary infiltrate with discrete vilositary atrophy in the cases. The presence of eosinophilus and neutrophils were not verified. The presence of leishmania was verified in all cases and was absent in the controls. The cytokine production analysis showed that both in the cases and in the controls there was a similar mean IL-10 production, with p=0.8968 (T Student test); that the IL-4 was not detected in the cases nor in the controls; that the δ-interferon production frequency in the controls was higher with p=0.046 (Fischer test); that the TNF-α production frequency was similar in the cases and in the controls with p=0.41 (Fischer test); that there was a macrophagic infiltrate significantly higher in the cases with p=0.005757 (T Student test), that the mean CD4 in the cases was higher than in controls, Mann-Withney test with p=0,040, mediana test, p=0,019, and CD8 infiltrate was similar in the cases and in the controls with p= 0,396 respectively (T Student test). CONCLUSIONS: The duodena mucosa, being a immunetolerant environment due to the natural IL-10 production, would allow the presence and the multiplication of leishmania. That the limphoplasmocitary infiltrate composed of CD4, CD8 and CD68 cells was incapable of providing an effective immune response against the parasite, mostly because of the low δ-interferon local production.

Orientador: Mary Marcondes / Banca: Marcia Marinho / Banca: Marcia Dalastra Laurenti / Os anexos referem-se a resultados individuais da pesquisa / Resumo: Leishmaniose felina foi descrita pela primeira vez por Sergent e colaboradores em 1912 e, desde então, vários relatos de casos clínicos encontramse dispostos na bibliografia mundial. O objetivo do presente estudo foi pesquisar a infecção por Leishmania chagasi em 55 gatos com dermatopatias provenientes do município de Araçatuba, São Paulo, Brasil, área endêmica para leishmaniose visceral. A avaliação desses animais foi realizada por meio de exame parasitológico direto de órgãos linfóides; exame histopatológico e reação de imunoistoquímica para pesquisa de formas amastigotas do parasito em pele hígida e lesionada; ensaio imunoenzimático (ELISA) indireto e a reação de imunofluorescência indireta para pesquisa de anticorpos antiLeishmania chagasi; além da pesquisa de coinfecções por vírus da imunodeficiência felina e vírus da leucemia felina e ainda, nas lesões cutâneas, a pesquisa de ácaros, fungos e bactérias coexistentes. Dos 55 gatos avaliados, foram identificados 27 animais com leishmaniose visceral. Destes, 12 (44,4%) foram positivos nos exames parasitológicos de órgãos linfóides e da pele, 11 (40,7%) por sorologia e quatro (14,8%) por ambos os métodos. O exame histopatológico evidenciou a presença de formas amastigotas de Leishmania chagasi no interior de macrófagos da derme em apenas um dos gatos e, a reação de imunoistoquímica identificou o parasito em nove animais, incluindo aquele positivo na histopatologia de pele. Do total de animais positivos para leishmaniose visceral foi possível identificar a presença de anticorpos antivírus da imunodeficiência felina em cinco (18,5%). Ainda nesses animais, observouse o crescimento de colônias de Trichophytom spp., Microsporum spp., Aspergillus spp., Candida spp., Staphylococcus spp., Streptococcus spp. e Pseudomonas spp. Levandose em consideração a elevada ocorrência de Leishmania chagasi em gatos com lesões cutaneas / Abstract: Feline leishmaniasis was first described by Sergent et al. in 1912 and since then several reports of clinical cases were reported worldwide . The aim of this study was to investigate the infection by Leishmania chagasi in 55 cats with skin diseases from the municipality of Araçatuba, São Paulo, Brazil, an endemic area for visceral leishmaniasis. The evaluation of these animals consisted in direct parasitological examination of lymphoid organs, histopathological and immunohistochemical reaction for detection of amastigotes in healthy and lesioned skin and serology for visceral leishmaniasis by immunosorbent assay (ELISA) and indirect immunofluorescence. We also searched for possible coinfections with feline immunodeficiency virus (FIV) and feline leukemia virus (FeLV), and for the presence of mites, fungi or bacteria in skin lesions. From the 55 cats studied, we identified 27 animals with visceral leishmaniasis. Of these, 12 (44.4%) were positive in parasitological evaluation of lymphoid organs and skin, 11 (40.7%) by serology and four (14.8%) by both methods. Amastigote forms of Leishmania chagasi were evidenced, by histopathology, within macrophages in the dermis of only one cat. Immunohistochemical reaction identified the parasite in nine animals, including the one positive by histopathological examination. In five cats infected by Leishmania chagasi we identified the presence of antibodies against feline immunodeficiency virus (FIV). We also observed Trichophytom spp., Microsporum spp., Aspergillus spp., Candida spp., Staphylococcus spp., Streptococcus spp. and Pseudomonas spp. in one animal. Based on the evidence of the high occurrence of Leishmania chagasi infection in cats with skin lesions of this study, one must include visceral leishmaniasis in the differential diagnosis of skin diseases in cats from endemic areas / Mestre

Orientador: Mary Marcondes / Banca: Wagner Luis Ferreira / Banca: Marcia Dalastra Laurenti / Resumo: O presente estudo teve por objetivo correlacionar as alterações laboratoriais, histopatológicas e a presença de linfócitos T CD3+ e linfócitos B CD79+, com a presença de Leishmania sp no tecido renal de cães naturalmente acometidos por leishmaniose visceral. Para tanto foi utilizado um grupo (G1) constituído por 24 animais com formas amastigotas de Leishmania sp. no tecido renal, e outro (G2) composto por 43 cães sem evidências imuno-histoquímicas da presença do parasito nos rins. A prevalência de doença renal na população estudada foi de 100% nos animais de G1 e 56,09% de G2. Todos os cães de G1 e 53,6% dos cães de G2 possuíam relação proteína/creatinina urinária (P/C U) maior que 0,5, evidenciando-se uma correlação positiva entre a ocorrência de proteinúria intensa e a presença de Leishmania sp. no tecido renal (p<0,001). Todos os cães de G1 e 88,4% dos cães de G2 apresentavam alterações glomerulares, sendo que a presença do parasito nos rins esteve correlacionada com uma maior prevalência e intensidade das lesões (p<0,001). Imunomarcações para linfócitos T CD3+ foram observadas em 100% dos cães do grupo 1 e 97,7% do grupo 2, havendo uma correlação entre a presença de formas amastigotas no tecido renal e a intensidade do infiltrado inflamatório (p<0,0005). Imunomarcações para linfócitos B CD79+ foram observadas em todos os cães do grupo 1 e em 55,8% do grupo 2 (p < 0,0001). Nos cães com parasitos no tecido renal observou-se uma maior intensidade do infiltrado de linfócitos B (p<0,0001). A presença de Leishmania sp, linfócitos T CD3+ e de linfócitos B CD79+ nos rins de cães naturalmente acometidos por leishmaniose visceral confirmam a participação do parasita, da imunidade celular e da imunidade humoral na patogênese da lesão renal / Abstract: The aim of this study was to correlate the laboratory and histopathological changes and the presence of CD3+T and CD79+ B cells with the presence of Leishmania sp in the renal tissue of dogs naturally affected by visceral leishmaniasis. For this purpose two groups were used: G1 with 24 dogs with amastigotes of Leishmania sp. in the renal tissue, and G2 consisting of 43 dogs with no immunohistochemical evidence of the presence of the parasite in the kidneys. The prevalence of renal disease in the population studied was 100% in G1 and 56.1% in G2. All dogs from G1 and 53.6% of the dogs from G2 had urine protein/creatinine ratio (U/PC) > 0.5, demonstrating a positive correlation between the occurrence of severe proteinuria and the presence of Leishmania sp. in renal tissue (p <0.001). All dogs from G1 and 88.4% of the dogs from G2 had glomerular lesions, and the presence of the parasite in the kidney was correlated with a higher prevalence and intensity of the lesions (p <0.001). Immunostaining for CD3+ T cells were observed in 100% of the dogs from G1 and in 97.7% of G2. There was a correlation between the presence of amastigotes in renal tissue and the intensity of the inflammatory infiltrate (p <0.0005). Immunostaining for CD79+ B cells were observed in all dogs from G1 and in 55.8% of the dogs from G2 (p <0.0001). Dogs with parasites in the renal tissue presented a greater intensity of B cells infiltrate (p <0.0001). The presence of Leishmania sp, CD3+ T cells and CD79+ B cells in the kidney of dogs naturally affected by visceral leishmaniasis confirmed the participation of the parasite, cellular immunity and humoral immunity in the pathogenesis of renal injury / Mestre

Orientador: Mirela Tinucci Costa / Banca: Aleksandro Schafer da Silva / Banca: Leucio Câmara Alves / Banca: Aureo Evangelista Santana / Banca: Annelise Carla Camplesi / Resumo: O tratamento de cães com leishmaniose visceral no Brasil tem gerado polêmicas discussões entre os diversos segmentos de profissionais da saúde. De um lado os Médicos Veterinários pressionados pelos proprietários dos cães que querem ter o direito de decidir por um tratamento ou pela eutanásia de seus animais; de outro os Ministérios da Saúde e da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) que se mostram contrários a qualquer tratamento, motivados pelo risco de se criar cepas do parasita resistentes aos fármacos, os quais também podem ser empregados em pacientes humanos. Argumentos científicos que possam embasar essa polêmica devem ser explorados. Uma das possibilidades de se avaliar o desenvolvimento de resistência a fármacos pode ser conseguida por meio da pesquisa da expressão da glicoproteína-P (gp-P) e proteína de resistência a múltiplas drogas (MRP1), que atuam como bombas de efluxo expulsando xenobióticos de células, responsáveis pelo fenótipo MDR (resistência a múltiplas drogas). Avaliamos, pela técnica de imuno-histoquímica, a reatividade da gp-P e MRP1, clone C494 e ABCC1, respectivamente, na pele de 11 cães naturalmente infectados por Leishmania (L.) infantum chagasi antes e após serem submetidos a dois protocolos de tratamento: Alopurinol e vacina inativada (n=4) e Alopurinol, vacina inativada e domperidona (n=7) e quantificamos formas amastigotas na pele pela mesma técnica. Todos os animais após 3 e 6 meses de tratamento tiveram melhora clínica evidente e tiveram contagem negativa de formas amastigotas do parasita. Pele de cães com LV expressaram gp-P e MRP1, antes e após o tratamento, no entanto, este experimento permitiu concluir que a gp-P e MRP1 não foram bons marcadores para avaliar a eficácia terapêutica da LVC e para prever possíveis estados de resistência a fármacos. Todavia, o entendimento sobre a participação de marcadores de resistência a múltiplas drogas na pele de ... / Abstract: The treatment of dogs with visceral leishmaniasis in Brazil has generated controversial debate among various segments of health professionals. On one side, veterinarians pressured by dog owners want to have the right to decide between treatment and euthanasia of their animals. On the other hand, the Ministry of Health and the Ministry of Agriculture, Livestock, and Supply (MAPA) are opposed to treatment because of the risk of creating strains of the parasite resistant to drugs that are also used for human patients. Scientific arguments that can support this controversy should be explored. One possibility for assessing the development of drug resistance can be achieved through research of the expression of Pglycoprotein (P-gp) and multidrug resistance-associated protein (MRP1). These proteins, which are responsible for the MDR phenotype (multiple drug resistance), act as efflux pumps which expel xenobiotics from cells. Using immunohistochemistry, the reactivity of P-gp (clone C494) and MRP1 (clone ABCC1) in the skin of 11 dogs naturally infected by Leishmania (L.) infantum chagasi was analyzed before and after undergoing two treatment protocols: Allopurinol and inactivated vaccine (n=4) and Allopurinol, inactivated vaccine, and domperidone (n=7). Quantification of Leishmania amastigotes in the skin was also achieved via immunohistochemistry. All of the animals after 3 and 6 months of treatment had clinical improvement and tested negative for amastigote forms of the parasite. Yet, the skin of dogs positive for CVL (canine visceral leishmaniasis) expressed P-gp and MRP1 before and after treatment, illustrating that P-gp and MRP1 were neither good markers for evaluating the therapeutic efficacy of CVL nor for predicting the possible states of drug resistance. However, an understanding of the participation of markers for multiple drug resistance in the skin of dogs under treatment for CVL can be of great importance for the development of an ... / Doutor