Orientador : Prof. Dr. Valderílio Feijó Azevedo / Coorientador : Prof. Dr. Alexandre Wagner Silva de Souza / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Medicina Interna. Defesa : Curitiba, 07/08/2017 / Inclui referências : f. 45-49 / Resumo: Introdução: A Arterite de Takayasu é uma vasculite sistêmica que ocasiona inflamação parietal de grandes artérias. Em 2010, surgiu um questionário clínico com objetivo de melhorar a avaliação clínica e definições terapêuticas, o ITAS2010 - Indian Takayasu's Arteritis Activity Score. Objetivos: Traduzir o ITAS2010 para língua portuguesa e validar esta versão para seu uso no Brasil. Métodos: Realizou-se estudo observacional transversal e prospectivo de pacientes portadores de Arterite de Takayasu, por meio do questionário ITAS2010 traduzido para língua portuguesa pelo método de Beaton et al. O questionário foi aplicado a vinte e sete pacientes. Cada paciente foi submetido a três avaliações por dois reumatologistas independentes. Para se avaliar a reprodutibilidade interobservador, as avaliações foram realizadas no mesmo dia, com intervalo de aproximadamente uma hora. Um dos reumatologistas realizou uma segunda avaliação de cada paciente, com intervalo de 7 a 14 dias, para se avaliar a reprodutibilidade intraobservador. Resultados: Houve alta correlação interobservador (entre X1 e R) tanto pelo coeficiente de Pearson (r=0,916) quanto pelo coeficiente de correlação intraclasse (CCIC=0,918), com alto grau de confiabilidade (demonstrado pelo estreito intervalo de confiança - IC= 0,828-0,962). A correlação intraobservador (entre X1 e X2) foi apenas moderada: coeficiente de Pearson de 0,633 e CCIC de 0,594, IC 0,292-0,790. Apenas dois pacientes foram classificados como ativos pelos critérios do NIH para vasculite de grandes vasos. Quanto à avaliação global do médico (PGA), não houve diferença de ITAS2010 entre os três grupos (ativo, baixa atividade ou inativo). Discussão: A correlação entre as avaliações de dois observadores foi alta, compatível com o esperado, demonstrando a reprodutibilidade do ITAS2010. A correlação entre as avaliações do mesmo observador em ocasiões diferentes foi moderada, pelos possíveis vieses de memória dos pacientes e diferença na aferição dos dados por parte do pesquisador. O número reduzido de pacientes pode ter contribuído para este resultado. Conclusão: Esta versão traduzida do ITAS2010 para língua portuguesa é válida e reprodutível. Deve ser incluído na avaliação rotineira de pacientes com Takayasu, pois pode facilitar decisões terapêuticas. Palavras-chave: Arterite de Takayasu. Atividade de doença. ITAS2010. / Abstract:Introduction: Takayasu's Arteritis is a systemic vasculitis that causes parietal inflammation of large arteries. In 2010, a clinical questionnaire was developed to improve clinical assessment and therapeutic settings, the ITAS2010 - Indian Takayasu's Arteritis Activity Score. Objective: Translate ITAS2010 into brazillian portuguese and its validation in a subset of brazillian patients. Methods: A cross-sectional and prospective observational study of Takayasu's Arteritis patients was performed using a portuguese ITAS2010 version. This version was created through the method of Beaton et al. The questionnaire was applied to twenty-seven patients. Each patient was submitted to three evaluations by two independent rheumatologists. To assess inter-observer reproducibility, the evaluations were performed on the same day, with an interval of approximately one hour (X1 and R). One of the rheumatologists performed a second evaluation of each patient (X2), ranging from 7 to 14 days, to evaluate the intra-observer reproducibility. Results: There was high inter-observer ITAS2010 correlation (between X1 and R) obtained by Pearson coefficient (r= 0.916) and intra-class correlation coefficient (ICC= 0.918), with a high reliability coefficient, given by the narrow confidence interval (CI= 0.828-0.962). Intra-observer ITAS2010 correlation (between X1 and X2) was moderate, given by Pearson coefficient of 0.633 and ICC of 0.594, (CI= 0.292-0.790). Only two patients were classified active by the NIH criteria for large vessel vasculitis. Regarding physician's global assessment (PGA), there was no ITAS2010 difference between the three groups (active, grumbling disease or inactive). Discussion: Inter-observer correlation was high, as expected, which demonstrates ITAS2010 reprodutibility. The intra-observer correlation was only moderate, which can be explained by memory bias of patients in different days and by differences in measurement of clinical data by the researcher. The reduced number of patients may have contributed to this result. Conclusion: The brazillian portuguese version of ITAS2010 is valid and reproducible between different clinicians. It should be included in routine assessment of Takayasu patients, as it may facilitate therapeutic decisions. Keywords: Takayasu's Arteritis. Disease activity. ITAS2010

L\'assenza di sistematizzazione giuridica nel trattamento di inabilità temporanea a causa di malattia nel contratto di lavoro fornisce soluzioni giuridiche individuali, a volte antagoniste, la legge sul lavoro dell\'operatore. Lo scopo di questo studio, da queste premesse, era di trovare punti in comune per proporre tale sistematizzazione. E \'iniziato con l\'approccio storico di disabilità di lavoro, le sue origini, le norme del diritto internazionale e il sistema giuridico brasiliano applicabili al soggetto. In seguito, ha studiato la definizione e la misura della disabilità da malattia e il suo contesto nei luoghi di lavoro. Da questo, possibile controllare il suo riconoscimento effettivo nel contratto di lavoro, mediante la misurazione dei suoi elementi caratteristici. NON abbiamo dimenticato l\'approccio alle questioni controverse come l\'ordine preferito dei certificati medici, il termine per la consegna di questi documenti al datore di lavoro, il rinvio lavoratore alla sicurezza sociale, nonché la particolare situazione dei lavoratori non ha diritto a ricezione delle prestazioni di malattia, di sicurezza sociale. Infine, gli effetti della disabilità nel contratto di lavoro è stato analizzato, con particolare riferimento alla sospensione dell\'obbligo di fornire un servizio coerente dal dipendente a seguito di casuale, non esclude la presenza di tutte le altre clausole del contratto di lavoro, che vengono rimossi solo quando inerenti o connessi alla fornitura di servizi efficaci. Questa comprensione ha guidato l\'analisi degli istituti di lavoro, fatte salve la nomina di altre intese di maggioranza. Si sostanzia lo studio con la giurisprudenza aggiornato e nella rara letteratura specializzata esistente sul tema. / A ausência de sistematização jurídica no tratamento da incapacidade temporária por doença no contrato de trabalho propicia soluções jurídicas particularizadas, às vezes antagônicas, pelo operador do Direito do Trabalho. O objetivo do presente trabalho, a partir dessas premissas, foi encontrar aspectos comuns para se propor essa sistematização. Iniciou-se com a abordagem histórica da incapacidade laborativa, suas origens, as normas de direito internacional e no ordenamento jurídico brasileiro aplicáveis ao tema. Posteriormente, estudaram-se a definição e a amplitude da incapacidade por doença, bem como sua contextualização no ambiente de trabalho. A partir disso, possibilitou-se a verificação de seu reconhecimento concreto no contrato de trabalho, por meio da aferição de seus elementos caracterizadores. Não se olvidou a abordagem de questões polêmicas como a ordem preferencial de atestados médicos, o prazo para entrega desses documentos ao empregador, o encaminhamento do empregado à previdência social, bem como as situações especiais de empregados que não recebem o auxílio-doença pela previdência social. Por fim, analisaram-se os efeitos da incapacidade no contrato de trabalho, com especial referência à suspensão da obrigação de fazer consistente em prestar serviços pelo empregado em razão de fortuito, que não impede a vigência de todas as demais cláusulas do contrato de trabalho, que somente são afastadas quando inerentes ou relacionadas à efetiva prestação de serviço. Esse entendimento pautou a análise dos institutos trabalhistas, sem prejuízo no apontamento de outros entendimentos majoritários. Substanciou-se o estudo com jurisprudência atualizada e na rara doutrina especializada existente sobre o tema.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O ponto de partida deste trabalho é a tentativa de examinar a prática e o saber médico nas suas articulações internas, em contraste com as análises críticas da Medicina que usualmente partem de um ponto de vista externo, seja com uma abordagem sociológica quer econômica. A partir deste referencial, constata-se que a suposta cientificidade da Medicina não se sustenta ao analisar-se seus referenciais teóricos, em especial no que diz respeito a epidemiologia, disciplina fundamental na constituição dos objetos da prática médica - as doenças - desconhecida pela maioria dos médicos. Mais ainda, categorias fundamentais do raciocínio clínico, como saúde, doença, cura e mesmo homem não são nunca definidas, como se fossem objetos naturais, dados, o que faz a razão principal da busca por atenção médica, o sofrimento, seja marginalizado dentro do pensamento médico, e que o paciente seja apagado para que surja a doença. Por fim, a partir da constatação do caráter eminentemente individualizado do exercício da Medicina, o que por si só a afasta do paradigma das ciências naturais, defende-se a adoção de uma atitude científica que permita ao médico questionar as bases de sua prática e recuperar o papel do sofrimento coma eixo principal do pensamento médico.

A deficiência hereditária da enzima lisossômica G-galactosidase, codificada pelo gene GLB1, causa duas doenças humanas clinicamente distintas, a Gangliosidose GM1 e Morquio B. Clinicamente, pacientes com Gangliosidose GM1 mostram graus variados de neurodegeneração e anormalidades esqueléticas, enquanto que os com Mórquio B apresentam displasia esquelética e opacidade de córnea, sem envolvimento do sistema nervoso central. Neste trabalho foi realizada a análise da freqüência populacional das mutações mais comuns no Brasil para Gangliosidose GM1, e a tentativa de comprovação da hipótese de efeito fundador destas mutações. Também foi realizada a pesquisa clínica e molecular de pacientes com Gangliosidose GM1 na tentativa de caracterizar os pacientes brasileiros, identificando novas mutações e traçando um panorama clínico e genético dessa população. Com a intenção de compreender os efeitos das novas mutações encontradas entre os pacientes brasileiros sobre a estrutura da proteína codificada por GLB1, modelos tridimensionais foram gerados através de ferramentas de bioinformática. Neste estudo foi possível predizer as conseqüências biológicas destas mutações, correlacionando às mesmas com os achados fenotípicos dos pacientes. Um esforço na busca de novas terapias para a doença também foi realizado, visto que não existe tratamento eficaz contra a Gangliosidose GM1. Para tanto, três terapias foram testadas em fibroblastos de paciente com a mutação mais comum encontrada na população brasileira: a terapia de tradução alternativa com o uso de geneticina e cloranfenicol, e a terapia de chaperonas farmacológicas, através do uso de galactose. Nenhuma das terapias foi eficaz no aumento da atividade enzimática da G-galactosidase, mas um aumento da expressão gênica pode ser observado para o gene GLB1. / The inherited deficiency of the lysosomal enzyme G-galactosidase, encoded by the gene GLB1, causes two clinically distinct human diseases: GM1Gangliosidosis and Morquio B. Clinically, patients with GM1 Gangliosidosis show varying degrees of neurodegeneration and skeletal abnormalities, while Morquio B shows skeletal dysplasia and corneal opacity, without involving the central nervous system. This work was performed to analyze the population frequency of the most common mutations in Brazil for Gangliosidosis GM1, and the attempt to prove the hypothesis of a founder effect for these mutations. A clinical and molecular research in patients with Gangliosidosis GM1 was also performed, in an attempt to characterize Brazilian patients, identifying new mutations and drawing a picture of the clinical and genetic aspects of this population. Trying to understand the effects of new mutations found among Brazilian patients on the structure of the protein encoded by GLB1, threedimensional models were generated using bioinformatics tools. In this study it was possible to predict the biological consequences of these mutations, correlating them with the phenotypic findings of the patients. An effort in finding new therapies for the disease was also performed, since there is no effective treatment for GM1 Gangliosidosis. Therefore, three treatments were tested in fibroblasts from patients with the most common mutation found in Brazil: the alternative translation therapy using geneticin and chloramphenicol, and the pharmacological chaperone therapy, using galactose. None of these therapies was effective in increasing the enzyme activity of G-galactosidase, but an increase in gene expression could be observed in the GLB1 gene.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2012. / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2012-10-10T19:10:05Z No. of bitstreams: 1 2012_NatáliaCardosoSantos_Parcial.pdf: 1526097 bytes, checksum: bd91401ac9dec563b91f1727d8fde222 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-10-11T13:54:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_NatáliaCardosoSantos_Parcial.pdf: 1526097 bytes, checksum: bd91401ac9dec563b91f1727d8fde222 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-10-11T13:54:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_NatáliaCardosoSantos_Parcial.pdf: 1526097 bytes, checksum: bd91401ac9dec563b91f1727d8fde222 (MD5) / Receptores nucleares, tais como PPAR, GR, TR, ER e PXR, estão relacionados a diversos processos biológicos. Diversos ligantes sintéticos e naturais possuem a capacidade de ativá-los ou reprimi-los influenciando diretamente sua maquinaria transcricional. O receptor de pregnanos X (PXR), em especial, exerce função crucial na homeostase de metabolização e eliminação de endobióticos e xenobióticos por meio da regulação de enzimas do citocromo P450, especialmente a CYP3A4. A utilização concomitante de fármacos, ou desses, com determinados tipos de alimentos ou fitoterápicos que apresentem agonismo ou antagonismo com receptores nucleares, pode interferir na terapêutica. No Brasil, desde 2006, a prática da Fitoterapia no Sistema Único de Saúde (SUS) tem sido incentivada com a inserção de fitoterápicos na Relação de Medicamentos Essenciais e com a publicação de diversas normas sanitárias, regulando o setor. Uma dessas normas, publicada em 2010, refere-se a drogas vegetais e em seu anexo há uma lista de 66 espécies vegetais com a respectiva indicação terapêutica e posologia. A presente dissertação teve por objetivo avaliar os efeitos agonistas no receptor de pregnanos X (PXR) de nove espécies contidas na RDC 10/10 da Anvisa. Das espécies vegetais foram obtidos extratos os quais foram avaliados quanto a suas toxicidades pelo método do MTT e em seguida submetidos a ensaios de gene repórter a fim de avaliar seus efeitos na maquinaria transcricional do PXR. Os resultados do ensaio de gene repórter com o extrato de Achyrocline satureioides (macela) sugerem uma ação agonista dose-dependente no PXR, o que não aconteceu com as outras drogas vegetais estudadas. Não houve efeito agonista do extrato de A. satureioides nos receptores TRbeta e PPAR gama. Este trabalho constitui-se como base prospectiva para o aprofundamento do estudo da própria A. satureioides, no possível isolamento e identificação de seus compostos ativos, seus efeitos sobre enzimas que metabolizam xenobióticos, especialmente CYP3A4, bem como, para estudos de outras drogas vegetais constantes na RDC 10/10, visando assegurar o uso seguro e eficaz dessas espécies pela população. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Nuclear receptors such as PPAR, GR, TR, ER and PXR, are related to diverse biological processes. Several natural and synthetic ligands have the ability to activate or repress them directly influencing their transcriptional machinery. The pregnanes X receptor (PXR), in particular, plays critical role in homeostasis, metabolism and excretion of xenobiotics and endobiotics through the regulation of P450 enzymes, especially CYP3A4.The concomitant use of drugs, or those, with certain types of food or herbal remedies that have agonism or antagonism with nuclear receptors, may interfere with therapy. In Brazil, since 2006, the practice of Herbal Medicine in Unified Health System (SUS) has been encouraged with the inclusion of herbal medicines in the List of Essential Medicines and the publication of several health conditions, regulating the industry. One of these standards, published in 2010, refers to herbal drugs and its attachment 66 is a list of plant species with the therapeutic indication and its dosage. The aim of this study was to evaluate the effects of receptor agonists in PXR from nine species contained in the RDC 10/10 of The National Health Surveillance Agency (Anvisa). From the plant species were obtained extracts which were evaluated for their toxicity by the MTT method and then tested for reporter gene to assess its effects on the transcriptional machinery of the PXR. The results of the reporter gene assay with the extract of Achyrocline satureioides (macela) suggest a dose-dependent agonist in PXR, which did not happen with other herbal drugs studied. There was no agonist effect of the extract of A. satureioides TR beta receptors and PPAR gamma. This work constitutes itself as a prospective basis for further studies on A. satureioides, possible isolation and identification of its active compounds, their effects on xenobiotic metabolizing enzymes, particularly CYP3A4, as well as, for studies of other drug plants listed in the RDC 10/10, to ensure the safe and effective use of these species by the population.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Laboratório da Interação Parasito-Hospedeiro, 2008. / Submitted by wiliam de oliveira aguiar (wiliam@bce.unb.br) on 2011-06-30T18:33:48Z No. of bitstreams: 1 2008_MeireMariadeLima.pdf: 2224259 bytes, checksum: 392adeabf9cda08bfe409fb7327df412 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(tempestade_b@hotmail.com) on 2011-07-03T21:32:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_MeireMariadeLima.pdf: 2224259 bytes, checksum: 392adeabf9cda08bfe409fb7327df412 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-07-03T21:32:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_MeireMariadeLima.pdf: 2224259 bytes, checksum: 392adeabf9cda08bfe409fb7327df412 (MD5) / Trypanosoma brucei secreta uma prolil oligopeptidase (POPTb) que parece estar envolvida na patogênese da doença do sono. Essa enzima é capaz de hidrolizar hormônios peptídicos contendo resíduos de prolina e considerada um potencial alvo para o desenvolvimento de drogas contra a patologia. Como a estrutura tridimensional da POPTb ainda não foi resolvida, dicroísmo circular e espectroscopia de fluorescência foram utilizados para estudo da estrutura e estabilidade da enzima bem como para a identificação de aditivos que possam ser utilizados nos experimentos de cristalização e na estocagem da proteína. Parâmetros termodinâmicos e estruturais foram calculados a partir de experimentos de desnaturação térmica e química e de estudos de atenuação da fluorescência. Cloreto de guanidina (GuHCl) promoveu a desnaturação da proteína em concentrações quase 30% menores que uréia. Divergência encontrada nos valores de ΔG determinados a partir de experimentos de desnaturação química e térmica sugere a presença de intermediários no processo de desdobramento da proteína. Sugere, também, maior estabilidade estrutural. Sorbitol se mostrou capaz de estabilizar a POPTb enquanto brometo de hexadecil-trimetilamônia (CTAB), na concentração de 0,1 mM, provocou o efeito oposto levando à quase total inatividade da enzima. A ação do ditiotreitol (DTT) é pH-dependente, reduzindo a estabilidade da enzima em pH neutro e aumentando-a em pH alkalino. Experimetos de atenuação da fluorescência mostraram dependência do pH e heterogeneidade no ambiente dos triptofanos com pelo menos um resíduo desse aminoácido próximo ao sítio ativo. A enzima parece estar menos sujeita a alterações conformacionais em pH 7.5. A elevação da temperatura resultou na redução da concentração micelar crítica (cmc) do CTAB. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Trypanosoma brucei secrets a prolyl oligopeptidase (POPTb) which is possibly involved in the pathogenesis of sleeping sickness. It is able to hydrolyze prolinecontaining peptide hormones and is therefore considered a good target for the development of drugs to treat the disease. As the crystal structure of POPTb has not been solved yet, we used circular dichroism and fluorescence spectroscopy to gain some knowledge on the enzyme structure, stability and on additive effects for both crystallization assays and storage. Thermodynamic and structural parameters were calculated from thermal and chemical denaturation studies as well as from fluorescence quenching experiments, respectively. The concentration of guanidine hydrochloride (GuHCl) that led to protein denaturation was nearly 30% that of urea needed to reach the same effect. Divergence in the ΔG values derived from chemical and thermal unfolding assays suggests the presence of intermediate states in the process. It also suggests higher structural stability. Sorbitol increases enzyme stability and 0.1 mM cetyl trimethyl ammonium bromide (CTAB) decreases it almost halting enzyme activity. Ditiotreitol (DTT), however, has the former effect in alkaline pH and the latter effect in neutral pH. Fluorescence quenching experiments show dependence on pH and indicate heterogeneity in the environment of the surface-accessible tryptophan residues with at least one such residue near the enzyme active site. POPTb molecule seems to be less subjected to conformational changes at pH 7.5. The increase in temperature lowers CTAB critical micelle concentration (cmc).

A deficiência hereditária da enzima lisossômica G-galactosidase, codificada pelo gene GLB1, causa duas doenças humanas clinicamente distintas, a Gangliosidose GM1 e Morquio B. Clinicamente, pacientes com Gangliosidose GM1 mostram graus variados de neurodegeneração e anormalidades esqueléticas, enquanto que os com Mórquio B apresentam displasia esquelética e opacidade de córnea, sem envolvimento do sistema nervoso central. Neste trabalho foi realizada a análise da freqüência populacional das mutações mais comuns no Brasil para Gangliosidose GM1, e a tentativa de comprovação da hipótese de efeito fundador destas mutações. Também foi realizada a pesquisa clínica e molecular de pacientes com Gangliosidose GM1 na tentativa de caracterizar os pacientes brasileiros, identificando novas mutações e traçando um panorama clínico e genético dessa população. Com a intenção de compreender os efeitos das novas mutações encontradas entre os pacientes brasileiros sobre a estrutura da proteína codificada por GLB1, modelos tridimensionais foram gerados através de ferramentas de bioinformática. Neste estudo foi possível predizer as conseqüências biológicas destas mutações, correlacionando às mesmas com os achados fenotípicos dos pacientes. Um esforço na busca de novas terapias para a doença também foi realizado, visto que não existe tratamento eficaz contra a Gangliosidose GM1. Para tanto, três terapias foram testadas em fibroblastos de paciente com a mutação mais comum encontrada na população brasileira: a terapia de tradução alternativa com o uso de geneticina e cloranfenicol, e a terapia de chaperonas farmacológicas, através do uso de galactose. Nenhuma das terapias foi eficaz no aumento da atividade enzimática da G-galactosidase, mas um aumento da expressão gênica pode ser observado para o gene GLB1. / The inherited deficiency of the lysosomal enzyme G-galactosidase, encoded by the gene GLB1, causes two clinically distinct human diseases: GM1Gangliosidosis and Morquio B. Clinically, patients with GM1 Gangliosidosis show varying degrees of neurodegeneration and skeletal abnormalities, while Morquio B shows skeletal dysplasia and corneal opacity, without involving the central nervous system. This work was performed to analyze the population frequency of the most common mutations in Brazil for Gangliosidosis GM1, and the attempt to prove the hypothesis of a founder effect for these mutations. A clinical and molecular research in patients with Gangliosidosis GM1 was also performed, in an attempt to characterize Brazilian patients, identifying new mutations and drawing a picture of the clinical and genetic aspects of this population. Trying to understand the effects of new mutations found among Brazilian patients on the structure of the protein encoded by GLB1, threedimensional models were generated using bioinformatics tools. In this study it was possible to predict the biological consequences of these mutations, correlating them with the phenotypic findings of the patients. An effort in finding new therapies for the disease was also performed, since there is no effective treatment for GM1 Gangliosidosis. Therefore, three treatments were tested in fibroblasts from patients with the most common mutation found in Brazil: the alternative translation therapy using geneticin and chloramphenicol, and the pharmacological chaperone therapy, using galactose. None of these therapies was effective in increasing the enzyme activity of G-galactosidase, but an increase in gene expression could be observed in the GLB1 gene.

Submitted by Rafael Santana (rafael.silvasantana@ufpe.br) on 2018-01-30T17:59:42Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Versão Final-TESE-EICB-10-02-2017.pdf: 2121418 bytes, checksum: ad23456aec856da13a2581e107c840e7 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-30T17:59:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Versão Final-TESE-EICB-10-02-2017.pdf: 2121418 bytes, checksum: ad23456aec856da13a2581e107c840e7 (MD5) Previous issue date: 2016-03-30 / REUNI / O câncer de mama é o segundo tipo de câncer mais frequente no mundo e o mais comum entre as mulheres, correspondendo a 25% de todos os cânceres do sexo feminino. No Brasil, representa a primeira incidência de neoplasia na mulher. O gene c-myc codifica fatores de transcrição que participam, direta e indiretamente, da regulação do ciclo celular, diferenciação, metabolismo, crescimento, apoptose, instabilidade genômica, angiogênese e imortalização celulares. O c-myc tem sido apontado como peça central no processo tumorigênico e sua amplificação está relacionada com carcinomas invasivos que apresentam comportamento clínico mais agressivo e prognóstico reservado. Diante disto, o presente estudo objetivou investigar a relação da amplificação do gene c-myc com fatores prognósticos entre os subtipos moleculares de câncer de mama diagnosticado com carcinoma ductal invasivo (CDI). As amostras de CDI (n=60), fixadas em formalina e embebidas em parafina, foram obtidas no Arquivo de Biópsias do Serviço de Anatomia Patológica do Hospital das Clínicas (HC) da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE). A caracterização dos tumores em subtipos moleculares foi realizada utilizando imunohistoquímica para receptor de fator de crescimento epidérmico do tipo 2 (HER-2), receptores de estrógeno (RE) e progesterona (RP) e o fator de proliferação celular (Ki-67). A detecção da amplificação do gene c-myc foi realizada através de Hibridização in situ cromógena (CISH). Os resultados mostraram maiores frequências para os subtipos Luminal A (37,7%) e Triplo-Negativo (40%). Neste estudo tumores Luminais, notadamente Luminal A, apresentaram correlação estatistica quanto ao nível de diferenciação (p=0,0135), tamanho menor (p=0.5715), em estádio inicial no momento do diagnóstico; e com baixo a médio grau histológico e nuclear ao diagnóstico, respectivamente. Tumores dos subtipos superexpressão de HER-2 e Triplo-Negativo se relacionaram com caraterísticas prognósticas desfavoráveis, apresentando maiores taxas de invasão linfonodal, maiores chances de tumores indiferenciados e predomínio de diagnóstico entre as pacientes mais jovens, respectivamente. A maior frequência de amplificação do c-myc foi observada em 21 tumores (35%) no subtipo Triplo-Negativo, indicando que a amplificação pode estar associada a tumores mais agressivos e por isso um prognóstico reservado. / Breast cancer is the second most common cancer type worldwide and the most common among women, accounting for 25% of all female cancers. In Brazil, it represents the most incident cancer type in women. C-myc gene encodes transcription factors which are, directly and indirectly, involved in cell cycle regulation, differentiation, metabolism, growth, apoptosis, genomic instability, angiogenesis and cell immortalization. It has been considered as playing a role in tumorigenesis and its amplification is associated with more aggressive clinical behavior and poor prognosis in invasive carcinomas. This study aimed to investigate the relationship of c-myc amplification and clinicopathologic features amog the subtypes of invasive ductal carcinomas (IDC) of breast. Formalin-fixed and paraffin-embeded tissues samples (n=60) were retrieved from the Biopsies Archives of Anatomy and Pathology Sector of University Hospital at Federal University of Pernambuco. Tumors subtyping was developed using immunohistochemistry against epidermal growth factor receptor type 2 (HER-2), estrogen and progesterone receptors (ER and PR) and cell proliferating factor Ki-67. c-myc amplification was evaluated via chromogenic in situ hybridization (CISH). Results showed that the most frequent breast carcinomas subtypes were Luminal A (37.7%) and Triple-Negative (40%). Luminal tumors, mainly subtype A, showed to be well differentiated tumours regarding histological grade (p=0.0135), of small size (p=0.5715) at an early stage and presented a low and medium histologic and nuclear grade, respectively, at the time of diagnosis. Triple-Negative and HER-2 superexpression carcinomas were larger tumours, poorly differentiated (p= 0.0570), presenting higher rates of ganglionar involvement, advanced stages tumors and younger patients at the time of diagnosis, presenting the worst prognosis. We observed c-myc amplification in 21 tumours (35%) but no statistical difference was found between amplified and nonamplified and molecular subtypes of breast cancer.

ROBERTO, Ana Emília de Medeiros, também é conhecida em citações bibliográficas por: MEDEIROS, A. E. R. / Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-07-11T20:48:52Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Ana Emília de Medeiros Roberto.pdf: 2427887 bytes, checksum: 98fa3502db60df7b1feef1a3e2887aa1 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-07-13T22:51:41Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Ana Emília de Medeiros Roberto.pdf: 2427887 bytes, checksum: 98fa3502db60df7b1feef1a3e2887aa1 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-13T22:51:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Ana Emília de Medeiros Roberto.pdf: 2427887 bytes, checksum: 98fa3502db60df7b1feef1a3e2887aa1 (MD5) Previous issue date: 2016-03-01 / CAPES / Observa-se um contínuo aumento na resistência de espécies de Candida aos antifúngicos disponíveis. Faz-se necessário que o diagnóstico seja oportuno e verossímil, associado à indicação terapêutica que é corretamente direcionada a partir de testes de sensibilidade antifúngica in vitro. A utilização da espectrometria de massas através da técnica de Matrix Assisted Laser Desorption/Ionisation Time-Of-Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS) que reduz o tempo de diagnóstico em comparação com métodos de rotina já é uma realidade, contudo estudos apontam a capacidade dessa metodologia em identificar cepas resistentes pela detecção de mudanças mínimas no perfil proteíco da cepa após exposição ao fármaco. Assim, objetivou-se diagnosticar, em pacientes internados em UTI, isolados clínicos do complexo Candida parapsilosis lato sensu (Candida parapsilosis stricto sensu, Candida orthopsilosis e Candida metapsilosis) através da técnica proteômica Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS) e correlacionar sua sensibilidade/resistência às equinocandinas com mudanças no espectro protéico. Trata-se de uma pesquisa experimental analítica com abordagem qualitativa. Amostras sanguíneas venosas foram coletadas entre agosto de 2014 e julho de 2015, a partir de pacientes internados em UTI, foram observadas ao exame direto e colhidas em frascos de hemocultura. As leveduras isoladas foram identificadas por MALDI-TOF MS e testes de sensibilidade antifúngica foram realizados através do CLSI frente a anidulafungina, caspofungina e micafungina. A detecção na resistência através da mudança mínima do plano espectral protéico obtida no MALDI-TOF MS, foi possível após o cruzamento de cada concentração do espectro com uma das duas concentrações extremas, máxima ou nula, onde formou-se uma matriz a partir do Índice de Correlação do Composto (ICC) utilizado para gerar mapas de calor. Foram diagnosticados 44 casos de candidemia, sendo 26 por Candida parapsilosis, dez C. albicans, dois casos por C. metapsilosis, dois C. orthopsilosis, dois por C. tropicalis, um C. haemulonii e um Candida sp. Vinte e oito (93,2%) isolados do complexo Candida parapsilosis foram sensíveis as equinocandinas de acordo com CLSI e 24 (79,9%) foram sensíveis de acordo com MALDI-TOF. A Concentração Inibitória Mínima e a Mudança Mínima no Perfil Protéico obtidos através do CLSI e MALDI-TOF, apresentaram concordância de 91,6%, 96,6% e 98,3% para anidulafungina, caspofungina e micafungina, respectivamente, frente os isolados de Candida parapsilosis. MALDI-TOF MS é capaz de determinar o breakpoint de uma levedura clínica após 15 horas de exposição ao antifúngico e permite predizer a melhor escolha antifúngica para pacientes críticos com candidemia. / Recently, there is an increase in resistance of Candida species to antifungal drugs available. It is necessary that the diagnosis is timely and credible associated with therapeutic indication that is directed from in vitro antifungal susceptibility testing. The use of mass spectrometry through the technique of Matrix Assisted Laser Desorption / Ionisation Time-Of-Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS), which reduces the time of diagnosis as compared to routine methods is already a reality, however pointed studies this methodology can identify resistant strains by detecting minimal changes in protein profile of strain after exposure. Thus, the objective was to diagnose in ICU patients, clinical isolates of complex Candida parapsilosis lato sensu (Candida parapsilosis stricto sensu, Candida orthopsilosis and Candida metapsilosis) through proteomic technique Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS) and correlate their sensitivity/resistance to echinocandins with changes in the protein spectrum. It is an analytical experimental research with qualitative approach. Venous blood samples were collected between August 2014 and July 2015, from ICU patients were observed in the direct examination and harvested in blood culture bottles. The yeasts were identified by MALDI-TOF MS and sensitivity tests were performed using CLSI antifungal and MALDI-TOF MS, compared to anidulafungin, caspofungin and micafungin. After crossing every spectrum concentration with one of the two extreme concentrations, maximum or zero, formed the matrix of Compound Correlation Index (ICC) used to generate heat maps. 44 cases of candidemia were diagnosed, 26 by Candida parapsilosis ten C. albicans, two cases of C. metapsilosis two C. orthopsilosis two by C. tropicalis, a C. haemulonii and one case of Candida sp. Twenty-eight (93.2%) isolates of Candida parapsilosis complex echinocandins according to CLSI and 24 were sensitive (79.9%) were sensitive according to MALDI-TOF. The Minimum Inhibitory Concentration and Minimum Change in Protein Profile obtained by CLSI and MALDI-TOF showed concordance of 91.6%, 96.6% and 98.3% for anidulafungin, caspofungin and micafungin, respectively, compared isolates Candida parapsilosis. MALDI-TOF MS is able to determine the breakpoint of a clinical yeast after 15 hours of exposure to antifungal and allows predicting the best antifungal choice for critically ill patients with candidemia

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-08-28T20:26:22Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Pamella de Brito Ximenes.pdf: 725670 bytes, checksum: 773fe191224a95dcbb799276505c593c (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-09-05T22:05:25Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Pamella de Brito Ximenes.pdf: 725670 bytes, checksum: 773fe191224a95dcbb799276505c593c (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-05T22:05:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Pamella de Brito Ximenes.pdf: 725670 bytes, checksum: 773fe191224a95dcbb799276505c593c (MD5) Previous issue date: 2014-02-26 / CAPES / O Cryptococcus neoformans, levedura capsulada, acomete geralmente de forma disseminada imunossuprimidos, com predileção pelo sistema nervoso central. Os glicoconjugados da cápsula podem ser evidenciados por marcação com lectinas, que possuem especificidade a diversos carboidratos distintos. As lectinas desempenham atividades biológicas, e desta forma podem reconhecer padrões de expressão de glicoproteínas relacionadas a processos patológicos e maturação celular. Ainda nos processos patológicos, a capacidade desta levedura na formação do biofilme indica maior possibilidade de dano ao hospedeiro. Assim, essa pesquisa objetivou definir o perfil de virulência de C. neoformans quanto aos carboidratos da parede celular, capacidade de formação de biofilme e avaliação do tratamento da criptococose experimental. Foram avaliados 30 isolados utilizando as lectinas ConA, WGA, UEA-I e PNA conjugadas a flurosceína. Para formação do biofilme foi utilizado meio mínimo para o crescimento do fungo e os resultados foram avaliados visualmente. A criptococose experimental foi reproduzida com uma cepa capaz de produzir biofilme, segundo perfil in vitro, sendo tratado com anfotericina B. A lectina wheat germ agglutinin (WGA) foi aquela mais reconhecida pelos carboidratos. Todos os isolados formaram biofilme sem variação de intensidade. Após o tratamento, foi demonstrada a resistência a terapêutica antifúngica. Portanto, verifica-se que a composição da superfície com maior expressão de N-acetil-glicosamina em Cryptococcus contribui para formação do biofilme, proporcionando maior resistência à anfotericina B no tratamento experimental. / Cryptococcus neoformans encapsulated yeast, usually affects immunosuppressed disseminated form, with a predilection for the central nervous system. The glycoconjugates of the capsule may be evidenced by staining with lectins that have specificity to several different carbohydrates. The lectins play biological activities, and therefore can recognize the expression patterns of pathological processes related to the glycoproteins and cell maturation. Even in pathological processes, the ability of this strain in biofilm formation indicates a higher possibility of damage to the host. Thus, this research aimed to establish the profile of virulence of C. neoformans as the cell wall carbohydrates, the ability of biofilm formation and evaluation of the treatment of experimental cryptococcosis. 30 isolates were evaluated using ConA, WGA, UEA - I and PNA lectins conjugated to fluorescein. For biofilm formation was minimal medium used for growth of the fungus and the results were evaluated visually. The experimental cryptococcosis was reproduced with a strain able to produce biofilm, second profile in vitro, and treatment with amphotericin B. The lectin wheat germ agglutinin (WGA) was the most recognized by carbohydrates. All isolates formed biofilm with no intensity variation. After treatment was demonstrated resistance to antifungal therapy. Therefore, it is seen that the surface composition with increased expression of N-acetyl-glucosamine on Cryptococcus contributes to biofilm formation, providing greater resistance to amphotericin B in the experimental treatment.