Orientador: Ricardo Luiz Dantas Machado / Banca: Gerhard Wunderlich / Banca: Joseli de Oliveira Ferreira / Banca: Carlos Eugênio Cavasini / Banca: Dorotéia Rossi Silva Souza / Resumo: A malária é uma das principais causas de morbidade e mortalidade nas áreas tropicais e subtropicais do mundo. O desenvolvimento de uma resposta imune eficaz é capaz de reduzir a mortalidade e os sintomas clínicos da doença. No entanto, este é um processo complexo, e um dos objetivos dos imunologistas é entender as razões pelas quais os indivíduos diferem em suas respostas imunes contra o parasito. O objetivo do presente estudo foi avaliar a influência de polimorfismos em genes coestimulatórios do sistema imune na resposta imune humoral contra proteínas de estágio sanguíneo do Plasmodium vivax, principal espécie causadora de malária no Brasil. Para tanto, nós genotipamos, pelo método de PCR-RFLP, nove SNPs em sete genes (CD28, CTLA4, ICOS, CD86, CD40, CD40L e BLYS). A amostra foi constituída por 227 indivíduos infectados com P. vivax no município de Goianésia do Pará, no Estado do Pará. As respostas de anticorpos IgG específicos contra as proteínas N- (ICB2-5) e C-terminal (MSP-119) da MSP-1, da DBP e da AMA-1 do P. vivax foram determinadas por ELISA. IgM e as subclasses de IgG contra a ICB2-5 também foram avaliadas. Para estudar os polimorfismos dos genes coestimulatórios, nós primeiramente investigamos o impacto da estratificação da população na distribuição dos polimorfismos com o auxilio de marcadores informativos de ancestralidade e demonstramos que a frequência dos SNPs ICOS +1564T>C, CD40L -726T>C e CD86 +1057G>A varia de acordo com a ancestralidade. Polimorfismos em genes coestimulatórios foram associados com a resposta de anticorpos contra proteínas do estágio sanguíneo do P. vivax, mais especificamente contra a DBP, e as porções N- e C-terminal da MSP-1. Além disso, haplótipos formados pelos genes CD28, CTLA4 e ICOS foram associados com a resposta de anticorpos IgG4 contra a região N-terminal da MSP-1. Este é o primeiro estudo de associação genética envolvendo polimorfismos em genes ... / Abstract: Malaria is one of the main causes of morbidity and mortality in the tropics and subtropics areas of the world. Although the immunity is only partial, it is important in reducing the amount of illness and death caused by malaria. However, the immunity against malaria is complex, and one of the main goals of vaccine developers is to understand why people differ in their immune response to the parasite. The present research aims to investigate the genetic mechanisms related to humoral immune response against P. vivax blood stages antigens, predominant malaria species in Brazil. Nine single nucleotide polymorphisms (SNPs) in 7 genes (CD28, CTLA4, ICOS, CD86, CD40, CD40L e BLYS) were determined by PCR-RFLP. A total of unrelated 227 individuals infected with P. vivax from the Goianésia do Pará, Pará state, participated in this study. Level and prevalence of IgG antibodies against N-terminal (ICB2-5) and C-terminal (MSP-119) regions of MSP-1, DBP and AMA-1 of P. vivax were measured by ELISA. First, we evaluate the influence of genomic ancestry on distributions of co-stimulatory genes polymorphisms in an admixed Brazilian population using ancestry informative markers. ICOS, CD40L and CD86 polymorphisms were associated with genomic ancestry. There were significant association between CD28 -372G>A, ICOS +1564T>C, and CD40L -726T>C SNPs with antibodies anti-DBP prevalence. Moreover, CD40 -1C>T and CD86 +1057G>A SNPs were associated with antibody levels anti-PvMSP-119. The CD28 -372G>A and CD40 -1C>T SNPs were associated with IgM prevalence against ICB2-5. Haplotypes formed by polymorphisms in CD28, CTLA4, and ICOS genes were associated with IgG4 antibodies against ICB2-5. This is the first study to associate polymorphisms in costimulatory genes with humoral immune response against P. vivax. These data may add important information for understanding the immunological aspects involved in vivax malaria / Doutor

A taxonomia dos agentes etiológicos da malária aviária é bastante controversa e a grande maioria dos estudos se baseia apenas na identificação morfológica. Embora estudos recentes utilizando técnicas de biologia molecular tenham gerado sequências no GenBank, muitas delas foram diagnosticadas somente ao nível do gênero. A correta identificação destes parasitas é essencial para melhor entendimento da interação hospedeiro-parasita. Assim, a combinação da microscopia com métodos moleculares, e em alguns casos a realização de infeções experimentais, contribuem para a obtenção de informações sobre as características do parasita bem como permitem analisar coinfecções em aves por diferentes espécies de hemosporídeos. O presente trabalho visou identificar as espécies das linhagens de Plasmodium detectadas em aves amostradas na Fundação Parque Zoológicas de São Paulo (FPZSP) em um estudo anterior, através de um modelo experimental para o desenvolvimento eritrocítico de parasitas da malária. Paralelamente, buscou identificar hemosporídeos (Plasmodium, Haemoproteus e Leucocytozoon) em aves de vida livre da região Neotropical. Para a primeira proposta, 15 pintinhos naives foram inoculados com uma mistura de solução de citrato de sódio e sangue coletado de 8 aves da FPZSP. A cada 4 dias durante 35 dias, as aves inoculadas foram testadas para verificar a parasitemia através de esfregaços sanguíneos, onde constatou-se a presença de trofozoítos no 4° dia pós inoculação (dpi) nas aves inoculadas com sangue de Pavo muticus (pavão-verde). Porém, ao longo do período do experimento a parasitemia não aumentou. Não foram verificadas formas evolutivas dos parasitas e as poucas formas que existiam desapareceram. Ao fim de 35 dpi foram efetuados testes moleculares, porém as aves inicialmente positivas apresentaram resultados negativos, o que se acredita tratar de uma infecção abortiva. Em relação às aves de vida livre, foram testadas 531 amostras de sangue para a identificação de hemosporídeos em comunidades de aves da região Neotropical. Dessas, 72 foram positivas para hemosporídeos. As amostras positivas foram sequenciadas tendo-se obtido 42 diferentes linhagens de cytb, sendo 12 Haemoproteus, 25 Plasmodium e 5 Leucocytozoon. Algumas das linhagens encontradas no presente trabalho já foram descritas no Brasil e em outros países, mas 18 linhagens são novas descrições. Entretanto, as baixas parasitemias encontradas nas lâminas positivas impossibilitaram a descrição de novas espécies. Os resultados obtidos no presente estudo reforçam a necessidade do estabelecimento de um modelo para identificação de espécies de linhagens, assim como a importância da combinação microscopia/PCR/sequenciamento para a correta identificação de parasitas. Essas abordagens são essenciais para o conhecimento da biodiversidade e história evolutiva dos hemosporídeos, principalmente na região Neotropical. / The taxonomy of avian malaria etiological agents is quite controversial, and most studies are based only on morphological identification. Although recent studies using molecular biology techniques have generated sequences in GenBank, many of them have been diagnosed only at the genus level. Correct identification of these parasites is essential for a better understanding of host-parasite interaction. Thus, the combination of microscopy with molecular methods, and in some cases the realization of experimental infections, contribute to obtain information on the parasite characteristics as well as to analyze different species of hemosporidian parasites in coinfections. The present work aimed to identify the species of Plasmodium lineages widely detected in birds sampled at the São Paulo Zoological Park Foundation (FPZSP) in a previous study, through an experimental model for the erythrocytic development of malaria parasites. At the same time, it sought to identify hemosporidian parasites (Plasmodium, Haemoproteus and Leucocytozoon) in free-living birds of the Neotropical region. For the first proposal, 15 naive chicks were inoculated with a mixture of sodium citrate solution and blood collected from 8 FPZSP birds. Every 4 days for 35 days, the inoculated birds were tested for parasitemia by thin blood smears, where trophozoites were found on the 4th post-inoculation day (dpi) in birds inoculated with Pavo muticus (green peafowl) blood. However, over the period of the experiment, parasitemia did not increase. No evolutionary forms of the parasites were verified and the few forms that existed disappeared. After 35 dpi, molecular tests were performed, but initially positive birds showed negative results, which is believed to be an abortive infection. Regarding free-living birds, 531 blood samples were tested for identification of hemosporidian parasites in Neotropical bird communities. Of these, 72 were positive and 42 different lineages of cytb were obtained: 12 Haemoproteus, 25 Plasmodium and 5 Leucocytozoon. Some of the lineages have already been described in Brazil and other countries, but 18 are new descriptions. However, the low parasitemias found in the positive slides made it impossible to describe new species. The results obtained in the present study reinforce the need to establish a model for the identification species, as well as the importance of the microscopy/PCR/sequencing combination for the correct identification of parasites. These approaches are essential for knowledge of the biodiversity and evolutionary history of hemosporidian parasites, especially in the Neotropical region.

Orientador: Ricardo Luiz Dantas Machado / Coorientador: Cláudia R. Bonini-Domingos / Banca: Carlos Eugênio Cavasini / Banca: Maria Tercilia Vilela / Banca: Érika Cristina Pavarino / Banca: Lilian Madi Ravazzi / Resumo: No Brasil o Plasmodium vivax é a espécie mais prevalente, responsável por aproximadamente 85% dos casos de malária. Ademais as variantes da proteína circumesporozoíta (CSP - VK210, VK247 e P. vivax-like) já foram identificadas em várias áreas endêmicas no país. Diversos estudos analisando a influência da variabilidade genética de receptores celulares e moléculas envolvidas na resposta imune, com diferentes peptídeos do Plasmodium, têm obtido resultados variáveis de acordo com o antígeno utilizado e a população analisada. Este trabalho apresenta resultados sobre o estudo de polimorfismos genéticos no TCR (T cell Receptor) e nas Interleucinas 1 e 2 em pacientes infectados por P. vivax provenientes do município de Goianésia do Pará, no Estado do Pará. Avaliou-se estes polimorfismos com a parasitemia do indivíduo, com os genótipos da CSP e com a resposta sorológica contra os peptídeos da CSP. Foram relacionados também estes polimorfismos com os níveis de citocinas. Os polimorfismos foram analisados por técnicas de PCR-RFLP e PCR alelo específico. As análises sorológicas da CSP foram realizadas por ELISA. Foram comparadas as frequências genotípicas observadas segundo o teorema de Hardy-Weinberg (HW). Os níveis de IL1 e IL2 foram avaliados por citometria de fluxo, seguindo protocolo descrito pelo fabricante. Associação dos polimorfismos com os níveis de interleucinas foi avaliada por Análise de variância. As frequências genotípicas e alélicas foram obtidas no programa R v 2.11.1.... / Abstract: In Brazil, Plasmodium vivax is the most prevalent species responsible for approximately 85% of malaria cases. In addition, variants of the circosporozoite protein (CSP - VK210, VK247 and P. vivax - like) have already been identified in several endemic areas in the country. Several studies analyzing the influence of the genetic variability of cellular receptors and molecules involved in the immune response with different Plasmodium peptides have obtained variable results according to the antigen used and the analyzed population. This work presents results on the study of genetic polymorphisms in TCR (T cell Receptor) and in Interleukins 1 and 2 in patients infected by P. vivax from the city of Goianésia do Pará, in the State of Pará. These polymorphisms were evaluated with Parasitemia, CSP genotypes and serological response to CSP peptides. These polymorphisms were also related to cytokine levels. Polymorphisms were analyzed by PCR-RFLP and allele-specific PCR techniques. Serological tests of CSP were performed by ELISA. The genotypic frequencies observed according to the Hardy-Weinberg (HW) theorem were compared. Levels of IL1 and IL2 were evaluated by flow cytometry following the protocol described by the manufacturer. Association of polymorphisms with interleukin levels was evaluated by analysis of variance. The genotypic and allelic frequencies were obtained in program R v 2.11.1. The parasitemia ranged from 15 to 70,000, with a median of 1,500 parasites / mm3. The SNPS investigated showed varied frequencies in the sample studied. All polymorphism evaluated is in Hard Wenberg Equilibrium. There was no significant difference in parasitemia in relation to the investigated SNPs. Infections containing only the VK247 variant were the most common and also no significant difference in antibody response was observed according to the CSP variant present at the time of infection ... / Doutor

Nanoemulsões catiônicas têm sido consideradas como potenciais sistemas carreadores para oligonucleotídeos (ON) antisenso. O objetivo do presente trabalho foi desenvolver nanoemulsões catiônicas como um sistema de liberação para ON anti-topoisomerase II de Plasmodium falciparum. Primeiramente, nanoemulsões constituídas de triglicerídeos de cadeia média, lecitina de gema de ovo, glicerol e água contendo os lipídeos catiônicos oleilamina ou DOTAP (2 mM) foram obtidas através do procedimento de emulsificação espontânea. Este procedimento resultou em formulações monodispersas com diâmetro de gotícula de 200-260 nm e potencial zeta de +50 e +55 mV. Após, um método espectrofotométrico no UV para quantificação dos ON em série fosfodiéster (PO) ou fosforotioato (PS) foi validado. O método mostrou-se linear, específico, preciso e exato para a determinação de PO e PS, sem diferenças significativas entre os ON. Nas condições validadas, as isotermas de adsorção dos ON às nanoemulsões foram obtidas através da determinação dos ON na fase aquosa externa das nanoemulsões, após ultrafiltração/centrifugação dos complexos. A taxa de recuperação através das membranas de ultrafiltração de celulose regenerada (30 kDa) foi superior a 92%. Os resultados indicam a adsorção progressiva dos ON com as nanoemulsões, até cerca de 60 mg/g de fase interna para o complexo DOTAP-PS. Finalmente, evidências adicionais da adsorção de PO e PS às nanoemulsões foram detectadas pelo aumento do diâmetro de gotícula, inversão do potencial zeta e morfologia das gotículas avaliada por microscopia eletrônica de transmissão. O conjunto dos resultados obtidos demonstra que ON de série PO e PS anti-topoisomerase II de P. falciparum podem ser adsorvidos eficientemente às nanoemulsões catiônicas. / Cationic nanoemulsions have been recently considered as a potential delivery system for antisense oligonucleotides (ON). The aim of the present work was to evaluate cationic nanoemulsions as a delivery system for ON against the Plasmodium falciparum topoisomerase II gene. Firstly, nanoemulsions composed of medium chain triglycerides, egg yolk lecithin, glycerol and water, containing the cationic lipids oleylamine or DOTAP (2 mM) were obtained through spontaneous emulsification process. This procedure resulted in monodisperse formulations with droplet size of 200-260 nm and zeta potential of +50 and +55mV. After that, an UV spectrophotometric method for the quantification of either phosphodiester (PO) or phosphorothioate (PS) ON was validated. The method was linear, specific, precise, and accurate for the determination of PO and PS, without significant differences between both ON. In the validated conditions, ON adsorption isotherms with nanoemulsions were obtained through the ON determination in the external phase of nanoemulsions, after ultrafiltration/centrifugation of complexes. The recovery through regenerated cellulose membranes (30kDa) was higher than 92%. The results showed a progressive ON adsorption to the nanoemulsions up to approximately 60mg/g of internal phase for DOTAP-PS complexes. Finally, additional evidences of PO and PS adsorption to nanoemulsions could also be detected by the increase of the mean droplet size, the inversion of the zeta potential and the morphology of the oil droplets obtained by transmission electron microscopy. The overall results showed that PO and PS ON against P. falciparum anti-topoisomerase II gene can be efficiently adsorbed to the cationic nanoemulsions.

Submitted by Simone Souza (simonecgsouza@hotmail.com) on 2018-08-07T15:56:41Z No. of bitstreams: 1 DISS_2013_ Ligia Maria Senigalia.pdf: 4066586 bytes, checksum: f9a62c5fe3a47ad518e0609f86c73e12 (MD5) / Approved for entry into archive by Jordan (jordanbiblio@gmail.com) on 2018-08-22T16:19:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISS_2013_ Ligia Maria Senigalia.pdf: 4066586 bytes, checksum: f9a62c5fe3a47ad518e0609f86c73e12 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-22T16:19:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISS_2013_ Ligia Maria Senigalia.pdf: 4066586 bytes, checksum: f9a62c5fe3a47ad518e0609f86c73e12 (MD5) Previous issue date: 2013-09-06 / A malária é endêmica em 109 países do mundo, sendo que no Brasil o estado de Mato Grosso corresponde a 0,67% do total de casos da região Amazônica. Para identificar os parasitos realiza-se o exame da gota espessa em que é realizado um controle de qualidade, sendo que as lâminas examinadas em nível primário são reexaminadas pelos supervisores em nível intermediário (Escritórios Regionais de Saúde), e novamente em nível central pela unidade de referência estadual (Lacen/MT Laboratório). Objetivo: Analisar o controle de qualidade, segundo as discordâncias, para o diagnóstico da malária realizados por microscopistas do estado de Mato Grosso, Brasil, entre 2009 e 2011. Material e método: Estudo descritivo de corte transversal que utilizou dados secundários a partir de relatórios sobre diagnóstico laboratorial da malária no Estado de Mato Grosso no período de 2009 a 2011, e sobre aspectos de recursos humanos e estrutura e organização dos laboratórios de base e de revisão dos Escritórios Regionais de Saúde (ERS) que realizam o diagnóstico laboratorial da malária no Estado de Mato Grosso no período de 2009 a 2011. Resultados: No período estudado os microscopistas revisores dos ERS avaliaram 38,72% do total de lâminas produzidas pelos laboratórios de base, encontrando um percentual de divergências de 1,92%. Os microscopistas revisores do Lacen/MT Laboratório avaliaram 82,53% das lâminas revisadas pelos microscopistas dos ERS, encontrando um percentual de divergências de 1,62%. Foram 36,82% as divergências dos laboratórios de base relacionadas à espécie parasitária ou gametócitos presentes, 32,34% falso positivas e 30,85% falso negativas. Nos laboratórios de revisão dos ERS, 55,38% das divergências foram relacionadas à espécie parasitária ou gametócitos presentes, 19,23% falso positivas e 25,38% falso negativas. Em relação à formação dos microscopistas de base, as discordâncias foram proporcionalmente recorrentes nos de nível superior. À formação dos microscopistas revisores dos ERS, as discordâncias tiveram maior proporção nos de nível médio. A estrutura física e organização interna e higiene dos laboratórios de base e de revisão, foram consideradas de regular para bom. 2 Conclusão: As discordâncias em relação à formação dos microscopistas de base foram mais recorrentes nos de nível superior, aos revisores dos ERS as discordantes tiveram maior proporção nos de nível médio. Às características de estrutura física, organização do serviço e manutenção dos equipamentos dos laboratórios de base e de revisão foram consideradas de regular para bom. Os números encontrados no presente estudo podem ser representativos da situação da qualidade da microscopia da malária no estado de Mato Grosso, oportunizando às Secretarias de Saúde do estado e dos municípios a buscar melhorias na qualidade do serviço. / There is a malaria endemic in 109 countries around the world, and in Brazil the state of Mato Grosso corresponds to 0.67% of the total cases in the Amazon region. In order to identify the parasites, the examination of thick blood smear is done and it passes through quality control. First, they are examined at primary level laboratories, then they are reviewed by supervisors at intermediate level called Regional Health Services (RHS), and then they are reviewed again in central level at the reference state (Lacen/MT Laboratorio). Objective: To analyze the quality control, according to the disagreements, for the diagnosis of malaria microscopists performed in the state of Mato Grosso, Brazil, between 2009 and 2011. Methods: A descriptive cross-sectional study that used secondary data from reports of the laboratory diagnosis of malaria in the state of Mato Grosso between 2009-2011, and about aspects of human resources and structure and organization of review laboratories of Regional Health Services (RHS) that performs laboratory diagnosis of malaria in the state of Mato Grosso in the period 2009-2011. Results: In this period the regional microscopists of the RHS revised 38.72% of smears produced at primary level, finding a percentage of 1.92% of difference. The laboratory central supervisor from Lacen/MT Laboratory revised 82.53% of the slides reviewed by regional microscopists of RHS, finding a percentage difference of 1.62%. Differences of the laboratories base were related 36.82% to parasite species present or gametocytes, 32.34% to false positive and 30,85% to false negative. In the revision laboratories of RHS 55.38% of blood smears reviewed differences were related to the parasite species present or gametocytes, 19.23% were false positive and 25.38% were false negative. About the education, the regional microscopists of the RHS had highest proportion of disagreements in those who had high school. About the physical structure, internal organization and basic hygiene for primary level and to review laboratories, were considered from regular to good. Conclusion: Disagreements related to primary level microscopists were more often in those who had college degree, to regional microscopists of RHS the disagreements were greater in those who had lower education. The characteristics of the physical 4 structure, service organization and maintenance of laboratory equipment to the primary level laboratories were considered from regular to good. This study may be representative of the situation of malaria quality microscopy in the state of Mato Grosso, giving the opportunity to the Health Departments of the state and to the cities to look for improvements in this quality service.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-06-14T13:04:04Z No. of bitstreams: 1 dissertação_final_Fernanda Rezende1.pdf: 11790769 bytes, checksum: c513dea1d65a522e22458b1ce1b6e3e5 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-14T13:04:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertação_final_Fernanda Rezende1.pdf: 11790769 bytes, checksum: c513dea1d65a522e22458b1ce1b6e3e5 (MD5) Previous issue date: 2013 / Os mosquitos da espécie Anopheles (Nyssorhynchus) aquasalis, Curry 1932 são vetores da malária humana nas Américas. Desde o ano de 2004, esse vetor tem sido mantido em colônia no Laboratório de Malária do Centro de Pesquisas René Rachou (Lamal), Fiocruz-MG, onde tem sido utilizado para estudos de interação parasito-vetor. Na natureza, as larvas desses insetos desenvolvem-se em água salobra e, no insetário de criação do Lamal utiliza-se água do mar na proporção de 1:10 em água da torneira. No ano de 2008, observou-se uma queda significativa na produção de mosquitos da colônia, devido, principalmente, à mortalidade excessiva de larvas. As larvas, de 3º e 4º estádios, apresentavam características morfológicas semelhantes àquelas relacionadas com contaminação por bacilos entomopatogênicos. Como algumas bactérias do gênero Bacillussão patogênicas às larvas de mosquitos, o objetivo do presente trabalho foi identificar a (as) espécie (es) responsável (is) pela mortalidade das larvas de Anopheles aquasalis, bem como identificar as toxinas envolvidas nessa mortalidade. Através da caracterização morfológica e molecular foi possível identificar o Bacillus sphaericuscomo contaminante na colônia de criação de Anopheles aquasalis. Visando uma comparação inter-insetários, analisou-se ainda amostras de três insetários distintos, sendo a presença dos bacilos identificadas em dois desses. Pela técnica de PCR buscou-se amplificar as 5 toxinas mais frequentes das estirpes de B. sphaericus(BinA, BinB, Mtx1, Mtx2 e Mtx3 ), sendo que apenas 3 (família das MTxs) foram detectadas nas amostras estudadas. Os resultados dos ensaios biológicos confirmaram a toxidade destas toxinas para as larvas de 3º e 4º estádios. Os ensaios biológicos realizados identificaram as estirpes isoladas do Laboratório de Malária como de alta toxicidade para o Anopheles aquasalis. Em resumo, este trabalho foi o primeiro a demonstrar a ocorrência de contaminação natural por bacilos entomopatogênicos em colônias de mosquitos mantidas em insetário e a caracterizar as toxinas envolvidas nesta contaminação. Espera-se que estes resultados possam contribuir para traçar estratégias de monitoramento e controle de contaminação em insetários de experimentação. / Mosquitoes of the species Anopheles (Nyssorhynchus) aquasalis, Curry 1932 are vectors of human malaria in the American continent. Since 2004, this vector has been kept in colony at the Malaria Laboratory in René Rachou Research Center (Lamal), Fiocruz-Minas, where it has been used for studies on vector-parasite interaction. In nature, these insects' larvae grow in brackish water and, in the creation insectarium of Lamal sea water is used in the proportion 1:10 in tap water. In 2008, a significant decrease was observed in the production of mosquitoes of the colony, mostly due to the excessive mortality of larvae. These larvae, from 3rd and 4 th stage, showed morphologic characteristics similar to those related to contamination by entomopathogenic bacillus. As somebacteria from genus Bacillusare pathogenic to mosquitoes' larvae, the purpose of the present work was to identify the species responsible for the mortality of Anopheles aquasalislarvae, as well as identify the toxins included in this mortality. Through morphologic andmolecular characterization, it was possible to identify Bacillus sphaericusas contaminant in the creation colony of Anopheles aquasalis. Seeking an inter-insectariums comparison, samplesof three distinct insectariums were still analyzed, and the presence of Bacillus sphaericuswas identified in two of them. Using the technique of PCR, an amplification of the5 most frequent in the lineage of B. sphaericus(BinA, BinB, Mtx1, Mtx2 e Mtx3) was tried, with only 3 (MTxs families) being identified in the studied samples. The results of biologic trials confirmed the toxicity of these toxins for larvae in 3rd and 4th stage. In addition, the biologic trials identified the isolated lineages of the Malaria Laboratory as of high toxicity for Anopheles aquasalis. In short, this is a pioneer work, since it was the first to show the occurrence of natural contamination by entomopathogenic bacillus in colonies of mosquitoes maintained in insectariums and to characterize the toxins involved in this contamination. It is expected that these results might contribute to trace strategies in order to monitor and control contamination in experimentation insectariums.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-08-06T16:17:48Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_LeticiadeMenezesTorres.pdf: 1716063 bytes, checksum: b461cbc16a0524f9bee8e02c67961aaf (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-06T16:17:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_LeticiadeMenezesTorres.pdf: 1716063 bytes, checksum: b461cbc16a0524f9bee8e02c67961aaf (MD5) Previous issue date: 2013 / A Duffy binding proteindo Plasmodium vivax (PvDBP) e seu receptor na superfície dos eritrócitos, o antígeno Duffy/receptor para quimiocinas (DARC), estão envolvidos na principal via de invasão utilizada pelo P. vivax. No presente trabalho, realizou-se por um estudo do tipo coorte aberta, em área de assentamento agrícola da Amazônia brasileira, para avaliar a influência do receptor DARCna infecção e resposta imune ao P. vivax. Para isso, foi realizada a genotipagem do antígeno DARC através da técnica de PCR em tempo real. A pesquisa de anticorpos específicos foi realizada pela sorologia convencional (ELISA) e, por um ensaio funcional que avalia anticopos inibitórios da interação ligante-receptor. Entre os 690 indivíduos estudados, o genótipo FY*A/FY*Bfoi o mais frequente, consistente com a heterogeneidade étnica das populações que vivem na Amazônia brasileira. Na área estudada, não foi possível identificar associação entre a expressão DARCe a susceptibilidade a infecção pelo P. vivax. Em relação à resposta de anticorpos, nenhuma associação foi encontrada entre os genótipos de DARC e anticorpos IgG anti-PvDBP e nti-MSP119(outra proteína do P. vivax), ambos detectados pela sorologia convencional (ELISA). Contudo, a resposta de anticorpos inibitórios foi significativamente mais frequente em indivíduos heterozigotos carreadores de um alelo DARC-negativo (genótipos FY*A/FY*B ES e FY*B/FY*BES). Por último, a resposta de anticorpos inibitórios se manteve estável durante todo o período estudado (12 meses). Em conjunto, estes resultados demonstraram, pela primeira vez, que a expressão do receptor DARC pode influenciar na resposta imune inibitória contra a PvDBP . / The P. vivaxDuffy binding protein (PvDBP) and its erythrocytic receptor, the Duffy antigen receptor for chemokines (DARC), are involved in the major P. vivax erythrocyte invasion pathway. Here, in an agricultural settlement of the Brazilian Amazon area, we carried-out an open cohort study to analyzed DARC genotypes and its relationship to vivax susceptibility and the PvDBP immune response. To answer this question, DARC genotypes were determined by real-time PCR. Antibodies responses were analyzed by conventional serology (ELISA) using recombinant proteins, and byan in vitro functional assay that detect binding inhibitory antibodies (BIAbs) targeting PvDBP . Among 690 individuals enrolled in the study, the distribution of DARC genotypes was consistent with the heterogeneous ethnic origin of the Amazon population, with a predominance of genotype FY*A/FY*B.In the study area, DARC genotypes were not associated with P. vivax susceptibility. Also, there was no association between DARC and anti-PvDBP IgG, as detected by ELISA. However, the follow-up study demonstrated that BIAbs towards to be more frequent in heterozygous carrying a DARC-silent allele (genotypes FY*A/FY*BES and FY*B/FY*BES). In addition, antibodies to PvMSP119, another P. vivaxprotein,were not associated with DARC expression. Moreover, the BIAbs response remained constant during the 12 monthsof the follow up. Together, these results provide the first evidence that DARCexpression may influence the anti-PvDBP inhibitory immune response.

Advance knowledge of weather conditions can be very useful for helping society to avoid waste and loss of human and material resources. From a statistical analysis, we tried to find an association malaria and climatic variables in Amazonia. For this it is necessary to check whether there is a relationship, will be used monthly data of reported malaria and meteorological data for the period 2000 to 2009 thirteen municipalities of the Amazon. Malaria is one of the oldest human diseases most prevalent in the world, none can match her in the geographical distribution and the health of populations. For this reason, it is necessary to investigate the cycle of malaria with climate variability in the Amazon, since this region has the highest incidence of the disease in Brazil. The results showed different situations for the ideal situation of contagion, when analyzed together with the variables in different locations, showed a clear association between them. This study could be used to predict the situation of this disease, contributing to public policy avoiding economic and human waste. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O conhecimento antecipado das condições do tempo pode ser de grande utilidade para ajudar a sociedade a evitar desperdícios e prejuízos de recursos humanos e materiais. A partir de uma análise estatística descritiva, procurou-se encontrar associação entre a malária e as variáveis climatológicas na Amazônia legal, a partir das condições do tempo e no período de 2000 a 2009. Para isso se faz necessária a verificação de existência ou não de uma relação; irão ser utilizados dados mensais de notificações de malária e dados meteorológicos de treze municípios da Amazônia Legal. A malária é uma das doenças humanas mais antigas e de maior prevalência no mundo, nenhuma se compara a ela na distribuição geográfica e no comprometimento da saúde das populações. Por este motivo, torna-se necessário investigar o ciclo da malária juntamente com a variabilidade climática na Amazônia Legal, já que esta região é a de maior incidência da doença no Brasil. Os resultados apresentaram diferentes situações para a situação ideal de contágio, quando analisados junto com as variáveis nas distintas localidades, porém evidenciam clara associação entre ambas. Este estudo poderá ser usado na previsão da situação desta doença, contribuindo para políticas públicas evitando assim desperdícios econômicos e humanos.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-01-12T15:42:33Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 897031 bytes, checksum: 0ce7b977e0fd78e93525a626ede6769f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-12T15:42:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 897031 bytes, checksum: 0ce7b977e0fd78e93525a626ede6769f (MD5) Previous issue date: 2015-10-07 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Ao se analisar os dados de área, um dos principais interesses é entender sua estrutura ou distribuição no espaço e, se existe alguma dependência ou estrutura bem definida entre as diversas áreas na região em estudo. Para mensurar essa dependência fez-se uma análise de padrões utilizando a autocorrelação espacial. O principal objetivo do trabalho foi abordar no enfoque matemático, as técnicas e procedimentos estatísticos na análise espacial de dados de área utilizando o método tradicional para o cálculo do índice de Moran e o método de três passos. Buscou-se também verificar e analisar a existência de algum padrão espacial definido em Moçambique associado a variável malária. A malária tem sido uma das principais causas de internamento nos hospitais e centros de saúde nos últimos anos, igualmente, das mortes da população. Analisar sua distribuição e relacionamento entre diferentes distritos do país poderá contribuir para minimizar os efeitos dessa doença. Os dados foram obtidos do Inquérito Demográfico e de Saúde de Moçambique (IDS) realizado em 2011. Na análise estatística foi possível identificar regiões cujos distritos se assemelhavam por possuírem taxas médias baixas de malária, formando agrupamentos, a saber, nas regiões sul, extremo sul, e norte de Moçambique. Para os demais distritos, verificou-se uma distribuição aleatória de casos da malária. No entanto, foi possível identificar distritos representados pelas cidades de Maputo, Matola e Beira com maior taxa de malária em relação aos demais. / In the area of data analysis, the main interest is to understand how these data are distributed in space and if there is any relationship or dependency between the various areas in the study area for a given phenomenon. To measure this dependence became a pattern analysis using the spatial autocorrelation. The main objective was to address the mathematical approach of the technical and statistical procedures in the area spatial analysis of data using the traditional method for calculating the Moran index and the three-step method. It sought to verify and analyze the existence of a spatial pattern set in Mozambique variable associated with malaria. Malaria has been a major cause of hospitalization in hospitals and health centers in recent years, also the deaths of the population. Analyze their distribution and relationship between different districts of the country could help to minimize the effects of this disease. Data were obtained from the Demographic and Health of Mozambique (DHS) conducted in 2011. Statistical analysis was possible to identify regions whose districts were similar because they have average rates of malaria low, forming groupings, namely, in the south, far south and northern Mozambique. For other districts, there is a random distribution of cases of malaria. However, it was possible to identify districts represented by the cities of Maputo, Matola and Beira with the highest malaria rates in relation to the other.

Nanoemulsões catiônicas têm sido consideradas como potenciais sistemas carreadores para oligonucleotídeos (ON) antisenso. O objetivo do presente trabalho foi desenvolver nanoemulsões catiônicas como um sistema de liberação para ON anti-topoisomerase II de Plasmodium falciparum. Primeiramente, nanoemulsões constituídas de triglicerídeos de cadeia média, lecitina de gema de ovo, glicerol e água contendo os lipídeos catiônicos oleilamina ou DOTAP (2 mM) foram obtidas através do procedimento de emulsificação espontânea. Este procedimento resultou em formulações monodispersas com diâmetro de gotícula de 200-260 nm e potencial zeta de +50 e +55 mV. Após, um método espectrofotométrico no UV para quantificação dos ON em série fosfodiéster (PO) ou fosforotioato (PS) foi validado. O método mostrou-se linear, específico, preciso e exato para a determinação de PO e PS, sem diferenças significativas entre os ON. Nas condições validadas, as isotermas de adsorção dos ON às nanoemulsões foram obtidas através da determinação dos ON na fase aquosa externa das nanoemulsões, após ultrafiltração/centrifugação dos complexos. A taxa de recuperação através das membranas de ultrafiltração de celulose regenerada (30 kDa) foi superior a 92%. Os resultados indicam a adsorção progressiva dos ON com as nanoemulsões, até cerca de 60 mg/g de fase interna para o complexo DOTAP-PS. Finalmente, evidências adicionais da adsorção de PO e PS às nanoemulsões foram detectadas pelo aumento do diâmetro de gotícula, inversão do potencial zeta e morfologia das gotículas avaliada por microscopia eletrônica de transmissão. O conjunto dos resultados obtidos demonstra que ON de série PO e PS anti-topoisomerase II de P. falciparum podem ser adsorvidos eficientemente às nanoemulsões catiônicas. / Cationic nanoemulsions have been recently considered as a potential delivery system for antisense oligonucleotides (ON). The aim of the present work was to evaluate cationic nanoemulsions as a delivery system for ON against the Plasmodium falciparum topoisomerase II gene. Firstly, nanoemulsions composed of medium chain triglycerides, egg yolk lecithin, glycerol and water, containing the cationic lipids oleylamine or DOTAP (2 mM) were obtained through spontaneous emulsification process. This procedure resulted in monodisperse formulations with droplet size of 200-260 nm and zeta potential of +50 and +55mV. After that, an UV spectrophotometric method for the quantification of either phosphodiester (PO) or phosphorothioate (PS) ON was validated. The method was linear, specific, precise, and accurate for the determination of PO and PS, without significant differences between both ON. In the validated conditions, ON adsorption isotherms with nanoemulsions were obtained through the ON determination in the external phase of nanoemulsions, after ultrafiltration/centrifugation of complexes. The recovery through regenerated cellulose membranes (30kDa) was higher than 92%. The results showed a progressive ON adsorption to the nanoemulsions up to approximately 60mg/g of internal phase for DOTAP-PS complexes. Finally, additional evidences of PO and PS adsorption to nanoemulsions could also be detected by the increase of the mean droplet size, the inversion of the zeta potential and the morphology of the oil droplets obtained by transmission electron microscopy. The overall results showed that PO and PS ON against P. falciparum anti-topoisomerase II gene can be efficiently adsorbed to the cationic nanoemulsions.