O interesse em compreender a epidemiologia da malária no Brasil, fornecendo subsídios para seu controle, decorre principalmente de sua elevada morbidade em populações expostas continuamente ao risco de infecção. Entre março de 2010 e abril de 2011, foram realizados quatro cortes transversais em um assentamento agrícola localizado no estado do Amazonas, com o recrutamento de 395 indivíduos de idades entre dois meses e 66 anos. Considerando os resultados moleculares obtidos por PCR em tempo real em 731 amostras sanguíneas, obteve-se uma taxa de positividade de 17,8%, aproximadamente três vezes maior do que a detectada pelo exame microscópico, com a detecção de infecções mistas apenas pela técnica molecular. Cerca de dois terços das infecções diagnosticadas eram assintomáticas. Os resultados enfatizam a importância de infecções assintomáticas infecções, muitas vezes submicroscópicas, na manutenção da transmissão de plasmódios e caracterizam o papel de aspectos comportamentais ligados à idade e à exposição cumulativa à malária. / Understanding the epidemiology of malaria in Brazil, to support malarias control, has attracted interest mainly due to its high morbidity in populations continuously exposed to the risk of infection. Between March 2010 and April 2011, four cross-sectional were performed in a farming settlement located in the state of Amazonas, with the recruitment of 395 patients aged between two months and 66 years. Considering the molecular results obtained by real time PCR in 731 blood samples, we obtained a positivity rate of 17.8%, nearly three times greater than that detected by microscopic examination, with the detection of mixed infections only by molecular technique. About two-thirds of diagnosed infections were asymptomatic. The results emphasize the importance of asymptomatic infections, often submicroscopic, to the maintenance of the transmission of parasites and characterize the role of behavioral issues related to the age and cumulative exposure to malaria.

A malária é uma das prioridades da pesquisa mundial na área de desenvolvimento de vacinas. Apesar da contínua e crescente atividade de pesquisa nessa área, ainda não existe uma vacina capaz de impedir a infecção pelo Plasmodium spp. Devido ao complexo ciclo de vida deste agente, uma formulação vacinal eficaz para a indução de uma resposta imune protetora deverá conter uma combinação de regiões imunodominantes de antígenos do parasita. Portanto, este trabalho visou caracterizar a resposta imune humoral induzida pela imunização experimental de camundongos com o Antígeno 1 de Membrana Apical (AMA-1), região C-terminal da Proteína 1 da Superfície do Merozoíto e a Proteína 3β da Superfície do Merozoíto de P. vivax, administradas isoladamente ou em combinação. As proteínas recombinantes foram purificadas por cromatografia de afinidade e por cromatografia de troca iônica, posteriormente foram analisadas por RP-HPLC confirmando o elevado nível de pureza das amostras. A imunogenicidade dessas formulações foi avaliada em duas linhagens de camundongos BALB/c e C57BL/6, e na presença de dois adjuvantes Quil A e Poly I:C. Os títulos de anticorpos IgG foram determinados por ELISA. Os camundongos C57BL/6 imunizados com a combinação dos antígenos, emulsificados em Quil A ou Poly I:C apresentaram altos títulos de anticorpos (log10>4), assim como os camundongos imunizados com os antígenos administrados individualmente. Em contraste, os camundongos BALB/c imunizados com a combinação dos antígenos apresentaram títulos de anticorpos mais baixos contra a proteína MSP119 ou contra as proteínas MSP119 e AMA-1 quando administradas na presença dos adjuvantes Quil A e Poly I:C, respectivamente. Interessantemente, observamos um aumento significativo nos títulos de anticorpos dos camundongos C57BL/6 imunizados com a combinação dos antígenos emulsificados em Poly I:C contra a proteína MSP3β. A razão entre as subclasses de IgG mostraram um perfil de reposta mista Th1/Th2, em todos os grupos testados. Os anticorpos específicos mantiveram-se elevados por 6 meses após a última imunização, mostrando que a resposta imune induzida pelas imunizações experimentais foi duradoura. Nossos dados, em conjunto, demonstram que a combinação de antígenos pode ser uma estratégia promissora de vacinação contra a malária. / Malaria is one of the priorities of global research in the area of vaccine development. In spite of the continuing and growing research activity in this area, there is still no vaccine to prevent infection by Plasmodium spp. Due to the complex life cycle of this agent, an effective vaccine formulation to elicit protective immune responses should contain a combination of immunodominant regions of parasite antigens. Therefore, this study aimed at characterizing the humoral immune response induced by experimental immunization of mice with Apical Membrane Antigen 1 (AMA-1), C-terminal region of the Merozoite Surface Protein 1 and Merozoite Surface Protein 3β of P. vivax, provided either alone or as a combination. The recombinant proteins were purified by affinity and ion exchange chromatography, subsequently were analyzed by RP-HPLC to confirm the high purity of the samples. The immunogenicity of these formulations was evaluated in BALB/c and C57BL/6 mice, administered in the presence of two different adjuvants, Quil A or Poly I:C. The humoral immune response was measured by IgG antibody titers using ELISA. C57BL/6 mice immunized with the recombinant antigen combination in the presence of Quil A or Poly I:C adjuvants showed high antibody titers (log10>4) similar to mice inject with a single antigen alone. In contrast, BALB/c mice immunized with the recombinant antigen combination had lower antibody titers to MSP119 or to MSP119 and AMA-1 when administered in the presence of Quil A or Poly I:C adjuvants, respectively. Interestingly, we observed a significant increased in the antibody titers of the C57BL/6 mice receiving the combination of antigens against MSP3β protein in Poly I:C. The ratio between the IgG subclasses profile showed a mixed Th1/Th2 response in all groups tested. Specific antibodies were still high six months after the last immunizing dose indicating a long lived immune response. Together, our data show that the combination of antigens may be an effective strategy for immunization against malaria.

O diagnóstico da malária tem como teste de referência a gota espessa, porém é consenso que é preciso adotar alternativas em situações específicas, com técnicas mais sensíveis e que possam ser aplicadas no processamento de grande número de amostras, como estudos clínicos, epidemiológicos ou triagem de doadores em bancos de sangue. Com a finalidade de formar uma plataforma de diagnóstico para malária em amostras agrupadas em pools, foi realizada análise comparativa da PCR em tempo real, a nested PCR e um teste rápido específico para detecção de anticorpos contra P.falciparum e P. vivax, com intuito de reduzir o número de ensaios, com custo relativamente baixo. Foram utilizadas 50 amostras de sangue positivas para Plasmodium, de acordo com a prevalência das espécies no Brasil (P. vivax 75%, P. falciparum 22% e P. malariae 3%), com diagnóstico realizado pelo método padrão ouro. Adicionalmente, 48 amostras de sangue negativas para Plasmodium foram selecionadas para controle negativo e confecção de 15 pools, contendo amostras positivas e negativas. Quatro das amostras negativas para malária eram positivas para outras doenças. Tanto as amostras positivas como as negativas foram submetidas individualmente aos ensaios de PCR em tempo real, nested PCR e teste imunocromatográfico SD Bioline Pf/Pv para detecção de malária. Um teste de PCR convencional foi incluído a fim de testar a qualidade do DNA, mediante amplificação de uma sequência do gene humano da -globina como controle interno. Posteriormente as amostras foram analisadas em pools pelos ensaios moleculares e sorológicos. Nos testes individuais, 45/49 amostras foram positivas para Plasmodium pela PCR em tempo real, com Sensibilidade de 91,84%, e Especificidade (48/48) de 100,00%; 46/49 amostras detectaram Plasmodium pela nested PCR, com Sensibilidade de 93,88%, e Especificidade (12/12) de 100,00%; 32/46 amostras foram reagentes no teste sorológico SD Bioline Pf/Pv, com Sensibilidade de 69,56%, e Especificidade (10/10) de 100,00%. Nos ensaios com amostras agrupadas, 13 pools (86,66%) foram positivos pela PCR em tempo real; a nested PCR também obteve positividade nos mesmos 13 pools (86,66%). O teste imunocromatográfico SD Bioline apresentou Sensibilidade de 73,33% considerando o diagnóstico pela gota espessa. Tanto a PCR em tempo real como a nested PCR apresentaram boa sensibilidade e especificidade, seja nas amostras clínicas analisadas individualmente ou em pools, diferentemente do teste sorológico SD Bioline. Ambas as metodologias moleculares apresentaram desempenho semelhante, com bons resultados de acurácia e indicadores de validade, como Sensibilidade, Especificidade, Valor Preditivo Positivo e Negativo. Considerando-se as vantagens inerentes à PCR em tempo real, como rapidez, processamento em sistemas fechados e dispensa de eletroforese após amplificação, este método deve ser indicado como primeira escolha para diagnóstico de malária em grande número de amostras, seguido da nested PCR para diferenciação de espécies de Plasmodium. O teste sorológico, que é específico para detecção de anticorpos contra P. vivax e P. falciparum, pode ser indicado apenas como método complementar no diagnóstico de malária / The diagnosis of malaria is based on the thick blood film as reference test, but the consensus is that it is necessary to adopt alternatives in specific situations, with more sensitive techniques that could be applied in the processing of large numbers of samples in clinical and epidemiological studies or in the screening of donors at blood banks. The purpose of this study was to analyze and compare the real-time PCR, the nested PCR and a rapid test for detection of specific antibodies against Plasmodium falciparum and P. vivax, to build a platform for malaria diagnosis in pooled samples, reducing the number of tests and providing relatively low cost. For the tests analysis, we used 50 blood samples positive for Plasmodium, according to the prevalence of the species in Brazil (75% P. vivax, 22% P. falciparum and 3% P. malariae), with diagnosis performed by the gold standard method. In addition, 48 blood samples negative for Plasmodium were selected for negative control and production of 15 pools containing positive and negative samples. Four of the malaria negative samples were positive for other diseases. Both the positive and negative samples were submitted to individual testing of real-time PCR, nested PCR and immunochromatographic test SD Bioline Pf/Pv for the detection of malaria. To check the quality of DNA, a conventional PCR was included, with amplification of a sequence of the -globin human gene as internal control. Subsequently the samples were analyzed in pools by molecular and serological tests. In individual tests, 45/49 samples were positive for Plasmodium by real time PCR, with sensitivity of 91.84% and (48/48) 100.00% specificity, 46/49 samples detected Plasmodium by nested PCR, with sensitivity of 93.88% and (12/12) specificity 100.00%; 32/46 samples were positive on serological test SD Bioline, with sensitivity of 69.56% and (10/10) 100.00% specificity. In tests with pooled samples, 13 pools (86.66%) were positive by real time PCR; the nested PCR also had positive results in the same 13 pools (86.66%). Immunochromatographic test SD Bioline Pf/Pv showed sensitivity of 73.33% compared with blood smear. Both real-time PCR and the nested PCR showed good sensitivity and specificity in samples analyzed individually and in pools, unlike the SD Bioline test. Both molecular methods showed similar performance, with good results in accuracy and validity indicators, such as sensitivity, specificity, positive and negative predictive values. Considering the advantages inherent in real-time PCR, a fast test that is processed in closed systems without post-amplification handling, this method should be indicated as first choice for diagnosis of malaria in large numbers of samples, followed by nested PCR for species determination. Serological test, that is specific for antibodies against P. vivax and P. falciparum, could be used as a supplementary method for diagnosis of malaria

Infecções por Plasmodium spp. podem acarretar em complicações pulmonares (1 a 40% dos casos), que podem resultar no desenvolvimento da síndrome do desconforto respiratório agudo (SDRA). Esta síndrome é caracterizada por inflamação aguda, lesão do endotélio alveolar e do parênquima pulmonar, disfunção e aumento da permeabilidade da barreira alvéolo-capilar pulmonar e, consequente, formação de efusão pleural. Neste sentido, os mecanismos de regulação da permeabilidade das células endoteliais e as junções interendoteliais têm papel crítico na manutenção do endotélio pulmonar. O objetivo do estudo foi determinar precocemente o desenvolvimento da SDRA associada à malária por tomografia computadorizada por emissão de fóton único (SPECT/CT), além de identificar alterações nas junções interendoteliais das células endoteliais pulmonares primárias de camundongos DBA/2 (CEPP-DBA/2), após contato com os eritrócitos parasitados de Plasmodium berghei ANKA (EP-PbA). Os nossos resultados demonstraram que é possível identificar alterações na aeração pulmonar no 5° e 7° dia após a infecção e, consequentemente, diferenciar os animais que desenvolveriam SDRA daqueles que evoluiriam para hiperparasitemia (HP). Além disso, observamos em CEPP-DBA/2 que o contato direto com EP-PbA aumenta da abertura das junções interendoteliais e da permeabilidade vascular. Assim, avaliamos a diminuição da expressão das proteínas das junções interendoteliais que contribuem para o aumento da permeabilidade vascular, por imunofluorescência e Western Blot. Apesar da SDRA ter sido identificada há mais de 50 anos, ainda não se conhece formas de diagnóstico precoce e os mecanimos efetivos de desenvolvimento desta enfermidade, que permitam um tratamento efetivo e que evite a morte do paciente. Portanto, sugere-se que a técnica de SPECT/CT seja uma importante ferramenta de diagnóstico para identificação precoce de SDRA associado a malária. / Infections by Plasmodium spp. can lead to pulmonary complications (1 to 40% of the cases), that can result in the development of acute respiratory distress syndrome (ARDS). This syndrome is characterized by the acute inflammation, injury of the alveolar endothelium and pulmonary parenchyma, dysfunction and increased permeability of the pulmonary alveolar-capillary barrier and, consequently, formation of pleural effusion. In this aspect, mechanisms of regulation of endothelial cell permeability and interendothelial junctions play a critical role in the maintenance of the pulmonary endothelium. The present study aimed to determine the early development of single-photon emission computed tomography (SPECT/CT) associated malaria ARDS in addition to identifying changes in the interendothelial junctions of the primary pulmonary endothelial cells of DBA/2 mice (CEPP-DBA/2) after contact with erythrocytes infected with Plasmodium berghei ANKA (EP-PbA). Our results demonstrated that is possible to identify changes in lung aeration on the 5th and 7th day after infection and, consequently, differentiate the animals that should develop ARDS from those that would evolve to hyperparasitemia (HP). In addition, we observed in CEPP-DBA/2 that direct contact with EP-PbA increases the opening of the interendothelial junctions and vascular permeability. Thus, we evaluated that decrease the expression of interendothelial junction proteins contribute to the increase of vascular permeability, by immunofluorescence and Western Blot. Although ARDS was identified more than 50 years ago, it is not yet known what forms of early diagnosis, and the effective mechanisms of development of this disease, that allow an effective treatment and that prevent the death of the patient. Therefore, it is suggested that the SPECT/CT technique is a valuable tool to promote the early identification of ARDS associated with malaria.

Este trabalho teve como objetivo caracterizar e padronizar métodos para a tipagem molecular de marcadores genéticos, para futuro uso em estudos de genética populacional de Plasmodium vivax na Amazônia brasileira. As amostras sanguíneas utilizadas neste estudo foram colhidas no Brasil, Camboja, Sri Lanka e Estados Unidos. Foram selecionados polimorfismos de única base (SNPs) distribuídos ao longo de cromossomos distintos de P. vivax; para estes polimorfismos, sete ensaios de tipagem de SNPs foram padronizados com sucesso. Com a tipagem molecular, foi possível definir haplótipos que caracterizam cada amostra, assim como identificar infecções geneticamente mistas (co-ocorrência de clones distintos na mesma amostra). No entanto, com este conjunto de marcadores não foi possível agrupar amostras de acordo com sua localização geográfica, por estes marcadores não serem suficientemente informativos do ponto de vista genético. Os sete SNPs avaliados, quando comparados a 13 marcadores de DNA microssatélite, revelaram menor proporção de infecções geneticamente mistas e menor diversidade genética. / This study aimed to characterize and standardize methods for molecular typing of genetic markers to be used in the future in studies of population genetics of Plasmodium vivax population in the Brazilian Amazon. Blood samples used in this study were collected in Brazil, Cambodia, Sri Lanka and United States. Single nucleotide polymorphisms (SNPs), distributed over different P. vivax chromosomes were chosen and seven typing assays were sucessfully standardized. Molecular typing of polymorphisms allowed to define haplotypes that characterize each sample, as well as to identify genetically mixed infections (co-occurrence of different clones in the same sample). However, with this markers set, it was not possible to group samples according to their geographical location, because probably they are not sufficiently genetically informative. Compared to 13 microsatellite markers, these seven SNPs revealed a lower proportion of mixed-clone infections and lower genetic diversity.

A malária é a mais importante doença tropical do mundo. Em muitos países, especialmente no continente africano, causa grandes prejuízos com custos médicos e dias de trabalho perdidos. O risco de contrair malária está relacionado a alterações ambientais causadas por atividades como construções de estradas, projetos de mineração, agricultura e irrigação, particularmente em áreas da região amazônica e sudeste asiático. Entre outras causas da expansão desta endemia no mundo, pode-se incluir as mudanças climáticas, desintegração dos serviços de saúde e movimentos migratórios. Em áreas onde a malária é endêmica, o monitoramento das larvas e de populações de mosquitos adultos é de grande importância para o controle da doença. Novas ferramentas são necessárias para este processo, dentre os quais, as técnicas de sensoriamento remoto e os sistemas de informação geográfica (SIG). Essas técnicas têm reduzido custos e tempo nas pesquisas epidemiológicas, pois são usadas em escala regional para identificar tipos de vegetação, alterações ambientais que podem favorecer a proliferação de vetores da doença. Dada à gravidade da malária na região amazônica, este trabalho tem por objetivo entender como os padrões de distribuição espacial dos casos de malária na região da Usina Hidrelétrica de Tucuruí-PA se relacionam com os padrões de ocupação da terra, induzidos por sua implantação. Foi utilizado um conjunto de dados que incluem imagens TM-LANDSAT5 e SAR-RADARSAT para o levantamento de uso da terra os municípios de Tucuruí, Novo Repartimento e Jacundá e também para monitorar a variação sazonal do reservatório da UHE de Tucurui, além de uma série histórica de dados de malária do período compreendido entre 1992 a 2001. Esses dados foram integrados e analisados por meio do software SPRING 3.6. Foi constatado que os municípios de Novo Repartimento e Tucuruí, por possuírem grandes áreas de contato com o reservatório, apresentaram maiores problemas com a malária e que a variação temporal da doença, nesta região, está relacionada com o ciclo do reservatório, com a precipitação e com a dinâmica da população. / Malaria is the most important tropical disease in the world. In many countries, specially in the African continent, malaria is responsible for huge economical losses with medical bills and absenteeism. Malaria risk relates to environmental change derived from road construction, mining activities, agriculture and irrigation mainly in forested areas such as Amazon region and southern Asia. Among the causes explaining the spread of this endemic disease in the world, one can include climatic changes, healthy service breakdown and migration. At malaria endemic areas, larva and mosquito monitoring is highly important for disease control. New tools however are needed such as remote sensing and geographical information system in epidemic areas. These techniques have been responsible for reducing the time and cost of epidemiological researches, since they are used in a regional scale for assessing environmental disturbance apt to spreading of malaria vectors. Due to the threat of malaria in the Amazon region, this research aims to understand the relationship between land use changes induced by UHE-Tucuruí construction and the spatial distribution of malaria incidence in the region. LANDSAT5-TM and RADARSAT-SAR images were used respectively for land use mapping at Tucuruí, Novo Repartimento and Jacundá municipality and for monitoring the seasonal variation of UHE Tucuruí reservoir flooded area. A historic series of malaria data acquired for the National Health Foundation between 1992 and 2001 was also used. These data were integrated and analyzed with the aid of the SPRING 3.6 software. It was determined that Novo Repartimento and Tucuruí with large areas bounded by the reservoir are more prone to malaria incidence and that the time change in the disease in this region is related to the hydrology and reservoir operation, as well as with the precipitation and population dynamic.

Introdução: A malária humana apresenta sintomas inespecíficos e exige diagnóstico laboratorial e identificação da espécie para o seu manejo. O diagnóstico baseia-se na microscopia, exame barato, que exige profissionais experientes. Nos últimos anos surgiram testes imunocromatográficos de execução rápida e custo mais elevado em comparação à microscopia. Estudos de validação demonstraram sensibilidade e especificidade comparáveis à microscopia, podendo ser alternativa confiável em áreas sem laboratório. Objetivo: Realizar análise de custo-efetividade do uso do OptiMAL® - teste rápido (TR) registrado no Brasil e validado em áreas endêmicas - comparado à microscopia. Métodos: A perspectiva da análise foi a do sistema público de saúde brasileiro SUS, o horizonte analítico de seis meses e o ano de 2006, a referência temporal. Doze municípios do Estado do Pará constituíram a área de estudo. Foi construído modelo de decisão considerando dois desfechos: casos diagnosticados adequadamente e casos conduzidos adequadamente em três cenários: o cenário 1 corresponde a 100% dos exames realizados, o cenário 2 considera somente os exames feitos nas áreas com laboratório e o cenário 3 corresponde a 30% dos exames, realizados em áreas isoladas. Os parâmetros epidemiológicos principais foram prevalência da malária entre indivíduos sintomáticos e acurácia - sensibilidade e especificidade - dos métodos diagnósticos, cujas estimativas foram obtidas a partir do Sistema de Informação de Vigilância Epidemiológica da Malária e literatura científica. Foram estimados custos diretos médicos e não-médicos, considerando diretrizes nacionais e dados municipais. Fontes de dados de custos incluíram o Sistema de Informação de Insumos Estratégicos, a Tabela de Procedimentos do SUS e o Sistema de Informação Hospitalar do SUS. Foram estimadas as razões média e adicional de custo-efetividade (RCEA) e realizada análise de sensibilidade. O software utilizado foi o TreeAge Pro 2005. Resultados: O TR foi dominado pela microscopia nos cenários 1 e 2. Em áreas isoladas a estratégia microscopia apresentou RCEA de R$1.193,00 por caso diagnosticado adequadamente e de R$1.016,67 por caso conduzido adequadamente quando comparada com o OptiMAL®. O TR tornou-se mais custo-efetivo nos dois desfechos dos três cenários com a redução da acurácia da gota espessa, na análise de sensibilidade. Conclusões: o TR foi menos custo-efetivo em todos os cenários, quando a acurácia da microscopia manteve-se elevada. / Introduction: Diagnosis of malaria is based on blood microscopy, a lowcost procedure that requires experienced technicians. Rapid immunochromatography tests (RDT) were developed with the advantage of being easy-to-use tools but with higher costs. RDT validation showed similar accuracy compared to microscopy suggesting that the RDT could be a reliable alternative in areas without lab facilities. Objective: To perform costeffectiveness analysis for the use of OptiMAL® in comparison with the thick blood smear microscopy. Methods: The study was conducted from the perspective of the Brazilian Public Health System, the analytic horizon was of six months, and the time frame was 2006. The analysis was performed through a decision tree with two outcomes: properly diagnosed cases and properly conducted cases. There were defined three scenarios in 12 municipalities of the State of Pará: the scenario 1 considered the whole malaria tests performed in 2006; the scenario 2 considered the malaria tests performed in the endemic areas with access to lab facilities; and the scenario 3 considered the 30% malaria tests performed in areas without lab facilities. The main epidemiological measures were the prevalence of malaria and the accuracy of the diagnostic methods. Epidemiological estimates were obtained from the Brazilian Malaria Surveillance Information System and the scientific literature. Direct medical and non-medical costs were estimated taking into consideration the national guidelines and the data obtained from the municipalities. Cost data sources were the Information System for Strategic Resources from the Health Surveillance Secretariat, the Reimbursement Values Table and the Hospital Information System of the Brazilian Public Health System. The average and the incremental costeffectiveness ratio (ICER) were estimated and it was conducted a sensitivity analysis. Data were analyzed with the TreeAge Pro 2005 software. Results: RDT strategy was dominated by the microscopy strategy in the scenarios 1 and 2. The ICER for the microscopy strategy in the scenario 3 was R$1,193.00 per properly diagnosed case and it was R$1,016.67 per properly conducted case compared with the OptiMAL® strategy. The sensitivity analysis showed that the RDT was cost-effective for both outcomes in all the scenarios when the thick blood smear accuracy was reduced. Conclusions: The RDT is the least cost effective strategy, providing that microscopy accuracy is high.

No presente estudo, avaliamos a resposta de anticorpos, por ELISA, contra um recombinante bacteriano baseado no domínio 11 da Proteína Ligação ao Duffy (DBP-RII) em indivíduos naturalmente expostos Plasmodium vivax. Amostras de soro de 160 pacientes com malária vivax, procedentes de duas áreas endêmicas do Estado do Pará (Belém e São Jorge), foram utilizadas neste estudo. Estes soros foram também testados contra outras duas proteínas recombinantes derivadas de merozoítas de P. vívax, para efeito de comparação da resposta de anticorpos: AMA-1 (Antígeno 1 Membrana Apical) e MSP119 (região C-terminal de 19 kDa da Proteína 1 Superfície do Merozoíta). A freqüência de indivíduos que apresentaram anticorpos IgG específicos contra as proteínas recombinantes DBP-RII, AMA-1 e MSP119 foi de 15,6% 50% e 93,1%, respectivamente. Observamos que a proporção de indivíduos que apresentaram anticorpos contra DBP-RII e AMA-1 aumentou de acordo com o maior número de exposições prévias ao P. vivax, enquanto que resposta de anticorpos contra a MSP119 desenvolveu-se rapidamente após uma única exposição ao parasita. A persistência da resposta de anticorpos contra DBP-RII, AMA-1 MSP119 foi avaliada em amostras de soro coletadas durante a infecção patente e dois ou nove meses após o tratamento. Observamos que, durante este período, não houve uma diminuição significativa das freqüências respondedores contra DBP-RII e AMA-1. Por outro lado, a freqüência respondedores contra a MSP119, diminuiu significativamente nove meses após o tratamento. Não observamos diferença significativa entre os títulos anticorpos obtidos contra DBP-RII e AMA-1, durante a infecção e dois ou nove meses após o tratamento, indicando que a resposta de anticorpos se manteve. Por outro lado, os títulos de anticorpos para MSP119 foram significativamente maiores durante a infecção patente do que nove meses após o tratamento. / In the present study, we evaluated by ELISA the antibody immune response to a recombinant protein based on the domain II of the Duffy Binding Protein (DBP-RII) in individuals naturally exposed to Plasmodium vivax. Serum samples from 160 patients with vivax malaria were collected in two endemic areas of State of Pará (Belém and São Jorge). For purposes of comparison, ELISA were also performed using two other recombinant proteins representing antigens derived from P. vivax merozoites: AMA-1 (Apical Membrane Antigen-1) and MSP119 (19kDa C-terminal region of Merozoite Surface Protein-1). The frequency of individuals who presented IgG antibodies specific to the recombinant proteins DBP-RII, AMA-1 or MSP119 were 15.6%, 50% or 93.1 respectively. We observed that the proportions of individuals who presented antibodies against DBP-RII or AMA-1 increased according to the number malaria episodes, while the antibodies response to MSP1 19 developed quickly after a single contact with the parasite. The persistence of antibodies response to DBP-RII, AMA-1 or MSP119 was compared in serum samples during patent infection or two and nine months following treatment. We observed that during this period the frequency responders to DBP-RII and AMA-1 remained similar. In contrast, the frequency of responders to MSP119 dropped significantly nine months after treatment. No difference was observed when we compared the antibody titers obtained DBP-RII or AMA-1 during the infection or after treatment. These results established that the antibodies response to DBP-RII or AMA-1 remained similar two or nine months after treatment. In contrast, the antibody titers to MSP119 were significantly lower nine months after treatment when compared to patent infection.

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A malária ainda constitui grave problema de saúde pública, estando presente principalmente em países em desenvolvimento. Acredita-se que 40% da população mundial vivam em áreas endêmicas para esta parasitose. No Brasil, cerca de 600 mil novos casos aparecem a cada ano, merecendo realce a Amazônia, que corresponde a 99% dos casos brasileiros. Dentre os agentes etiológicos, o Plasmodium falciparum suscita atenção especial, pois é o responsável pela malária grave. A artemisinina é agente antimalárico cujo emprego encontra-se principalmente para cepas resistentes. Embora este fármaco seja o único antimalárico cuja resistência dos plasmódios não possui relevância clínica, problemas de solubilidade comprometem sua eficácia clínica e fazem com que seja utilizado sempre em associação a antimaláricos com maior meia-vida plasmática. Com o objetivo de aumentar a biodisponibilidade do antimalárico, conferindo-lhe maior hidrossolubilidade e ante ao emprego de quitosana como transportador com vistas, entre outros, a esse objetivo, planejaram-se pró-fármacos de quitosanas modificadas e artemisinina. Inicialmente, obtiveram-se quatro derivados hidrofílicos da quitosana: N-carboxibutilquitosana, N-carboximetilquitosana, N,O-carboximetilquitosana e N-succinilquitosana. A artemisinina foi empregada na forma reduzida, a diidroartemisinina, sintetizada a partir do fármaco na presença de boroidreto de sódio em várias proporções relativas ao fármaco. Procedeu-se, então, à condensação entre a diidroartemisinina e os derivados hidrofílicos obtidos por meio de quatro métodos distintos. Prepararam-se, também, microesferas para incorporar e ligar covalentemente a diidroartemisinina à quitosana. O fármaco flurbiprofeno foi utilizado como fármaco lipofílico modelo de reação. Os resultados obtidos indicam a formação de microesferas de pró-fármaco de quitosana com artemisinina, utilizando genipina como reticulante, empregando-se emulsão múltipla O/A/O juntamente com as microesferas. Os derivados obtidos, uma vez confirmada inequivocamente a estrutura, serão submetidos a ensaios de dissolução intrínseca e de atividade em malária experimental por P. berghei, em animais. / Malaria is still a serious problem of public health, mostly in developing countries. About 40% of the world population live in malaria endemic areas. In Brazil, about 600 thousands new cases appear every year, mainly in Amazonia, in which 99% of the cases have been registered. Among the etiologic agents, Plasmodium falciparum deserves special attention, as it is responsible for the severe malaria. Artemisinin is an antimalarial agent mostly used for resistant strains. Although this drug is the only antimalarial whose resistance of plasmodio has not clinical relevance, solubility problems compromise its clinical effectiveness. This is the reason why it has been used mainly in combination with other antimalarial drugs with higher t1/2.. With the goal of increasing the drug biovailability, rendering it with higher hydrosolubility, and since modified chitosans have been used as carriers to impart this characteristic, among others, to the drugs, artemisinin prodrugs with chitosan were designed. Initially, four hydrophilic derivatives were obtained: N-carboxybutylchitosan, N-carboxymetylchitosan, N,O-carboxymetylchitosan and N-succinylchitosan. Artemisinin was utilized in its reduced form, dihydroartemisinin, synthesized from the drug in the presence of sodium borohydride in several equivalents related to the drug. The condensation between dihydroartemisinin and hydrophilic chitosan derivatives was carried out by four distinct methods. In addition, microspheres to incorporate artemisinin and to attach dihydroartemisinin to the chitosan were prepared. Flurbiprofen was used as lipophilic drug reaction model. The results indicated the dihydroartemisinin prodrug microspheres, using genipin as crosslinking agent by multiple emulsion method O/A/O, were obtained. Once unequivocally confirmed their structure, these derivatives will be submitted to intrinsic dissolution test and to biological activity determination in experimental malaria with Plasmodium berghei.