O câncer de mama é o tipo de câncer que mais acomete as mulheres e a principal causa de morte na faixa entre 40 e 55 anos. Apesar de apresentar variação internacional, suas taxas seguem aumentando mundialmente, sendo até cinco vezes mais frequente em países desenvolvidos. A industrialização gera aumento da exposição à luz durante a noite, o que causa supressão de melatonina. A melatonina é o principal hormônio secretado pela glândula pineal e possui atividade oncostática e antioxidante, interfere no controle do ciclo celular, função imunológica e nos hormônios esteróides. O objetivo desta dissertação e apresentar o racional e o desenvolvimento do estudo cujo objetivo foi avaliar o efeito da terapia com melatonina sobre o desenvolvimento de tumores mamários em ratas expostas ou não a dessincronização circadiana. A indução da carcinogênese mamária foi através de administração intragástrica de DMBA em 39 ratas Sprague-dawley entre 41 e 46 dias. Os animais foram randomizados em 04 grupos, Sincronizados sem tratamento, Dessincronizados sem tratamento, Sincronizados com melatonina e Dessincronizados com melatonina. Os grupos Sincronizados foram mantidos em ciclo claro/escuro de 12/12 horas e os dessincronizados a ciclo claro/escuro de 11/11 horas, durante 8 semanas. O desenvolvimento tumoral ocorreu em 32 animais (82,05%), totalizando 73 tumores. A melatonina apresentou efeitos benéficos quanto a multiplicidade tumoral, grau histológico, tamanho dos tumores e peso dos animais, enquanto que a dessincronização não interferiu de forma significativa na carcinogênese mamária. / Breast cancer is the type of cancer that most affects women and the leading cause of death in the age between 40 and 55 years. Despite presenting international variation, their rates continue to increase worldwide, with up to five times more common in developed countries. The industrialization generates increased exposure to light at night, which causes suppression of melatonin. Melatonin is the main hormone secreted by the pineal gland and has oncostatic and antioxidant activity, interferes with cell cycle control, immune function and steroid hormones. The aim of this dissertation and present the rationale and development of the study whose objective was to evaluate the effect of melatonin therapy on the development of mammary tumors in rats exposed or not the circadian desynchronization. Induction of mammary carcinogenesis was via intragastric administration of DMBA in 39 Sprague- Dawley rats between 41 and 46 days. The animals were randomized into 04 groups, Synchronized and untreated, desynchronized and untreated, synchronized and with melatonin, desynchronized and with melatonin. Synchronized Groups were kept in a light / dark cycle of 12/12 hours and the desynchronized in a light / dark cycle of 11/11 hours for 8 weeks. The tumor development occurred in 32 animals (82.05%), totaling 73 tumors. Melatonin showed beneficial effects on tumor multiplicity, histological grade, tumor size and weight of the animals, while desynchronization did not interfere significantly in breast carcinogenesis.

Receptores de neuropeptídeos e neurotrofinas constituem importantes alvos moleculares no câncer. Fatores de crescimento como o peptídeo liberador da gastrina (GRP) e fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF) estão envolvidos na proliferação celular e progressão do câncer, influenciando na invasão local, angiogênese, metastatização e apoptose. O receptor de GRP (GRPR) tem sido identificado em muitos tumores humanos, mas até o presente trabalho não havia nenhuma informação na literatura quanto à sua expressão em câncer cervical. Nosso estudo inicial demonstrou pela primeira vez a expressão aberrante em GRPR em displasias e câncer do colo uterino, levantando a hipótese de que este receptor poderia estar implicado no processo carcinogênico destes tumores. Para explorar o papel de GRPR como um biomarcador de lesões de colo uterino, em nosso segundo estudo objetivamos avaliar o potencial diagnóstico da detecção de GRPR por imunocitoquímica, técnica que também não havia sido previamente descrita. Verificamos que este receptor foi fortemente associado com displasia e neoplasia cervical invasora. Além disso, o exame demonstrou elevada acurácia para lesões classificadas como células escamosas atípicas de significado indeterminado (ASCUS). Com base nestes resultados, concluímos que a expressão de GRPR por imunocitoquímica pode ser considerada como um método adicional para a detecção de lesões cervicais. Estudos prévios indicam que o bloqueio de GRPR ou do receptor tropomiosina quinase B (TrkB) pode ter efeito antiproliferativo em células de câncer. Neste trabalho mostramos que a ativação do GRPR pode reduzir, ao passo que o bloqueio pode aumentar a viabilidade de células de câncer de ovário, mama e colo uterino. Além disso, demonstramos que a inibição TrkB reduz a viabilidade destas células, sendo que o tratamento com BDNF aumentou a viabilidade de células de ovário. Os resultados obtidos reforçam o conhecimento de que as sinalizações GRP/GRPR e BDNF/TrkB regulam a viabilidade de células de câncer. Ainda mais importante, fornecem a primeira evidência de que, sob certas condições, a ativação de GRPR pode inibir, em vez de estimular, células neoplásicas de mama, ovário e colo uterino. / Neuropeptide and neurotrophin receptors are increasingly important molecular targets in cancer. Growth factors as the gastrin-releasing peptide (GRP) and brain-derived neurotrophic factor (BDNF) are involved in cell proliferation and cancer progression, enhancing local invasion, angiogenesis, distant metastasis and apoptosis. The GRP receptor has been identified in many human malignancies, but no information regarding its expression in cervical cancer was found in the literature. Considering that cervical cancer is a very important cause of morbidity and mortality worldwide, we aimed to evaluate the GRPR expression profile in preinvasive and invasive cervical lesions. Our initial study demonstrated for the first time the aberrant GRPR expression in human cervical dysplasia and cancer, raising the hypothesis that GRPR could be implicated in the carcinogenic process of cervical tumors. To further exploit GRPR as a biomarker, in our second study we aimed to evaluate the diagnostic potential of GRPR immunocytochemistry in detecting cervical dysplasia and invasive cancer. This was the first immunocytochemical evaluation of GRPR expression in cervical epithelial cells. This receptor was strongly associated with cervical dysplasia and invasive cancers. Additionally, GRPR immunosignaling showed high accuracy in detecting dysplasias in cells classified as atypical squamous cells of undetermined significance (ASCUS). Based on these results, we concluded that immunocytochemistry for GRPR may be regarded as a valuable method for early detection of cervical intraepithelial neoplasia. Previous studies have indicated that compounds that act by blocking gastrin-releasing peptide receptors (GRPR) or tropomyosin receptor kinase B (TrkB) receptors can display antiproliferative activities against cancer cells. Here we show that GRPR activation can reduce, whereas its blockade can increase, the viability of breast, ovarian, and cervical cancer cell lines. In addition, we demonstrate that TrkB inhibition reduces the viability of these cells and BDNF increases the viability of ovarian cells. The results support the view that GRPR and BDNF/TrkB signaling regulate cancer cell viability. Most importantly, the findings provide the first evidence that, under certain conditions, GRPR activation can inhibit, rather than stimulate, breast, ovarian and cervical cancer cells.

Introdução: O câncer de mama é tumor maligno mais incidente nas mulheres brasileiras, sendo considerado um dos maiores problemas de saúde pública do Brasil. Além dos fatores de risco relacionados à idade, a fatores hormonais e a fatores reprodutivos, já bem estabelecidos na literatura, fatores genéticos também estão associados ao maior risco de desenvolvimento do câncer de mama. O profissional enfermeiro tem um papel de educador em saúde e deve estar qualificado para realizar ações preventivas na detecção precoce do câncer de mama, sendo muito importante o domínio do conhecimento sobre o assunto. Objetivos: (a) avaliar o conhecimento dos enfermeiros envolvidos na assistência a pacientes oncológicos acerca dos temas câncer de mama e câncer hereditário da mama, (b) avaliar o conhecimento dos enfermeiros quanto ao processo do aconselhamento genético, (c) identificar se os mesmos desenvolvem ações preventivas nesse âmbito e (d) se o reconhecimento de fatores de riscos genéticos está incluído nestas ações. Metodologia: Foi realizado um estudo descritivo transversal com enfermeiros envolvidos no cuidado de pacientes oncológicos a partir do preenchimento de um questionário auto-respondido com perguntas referentes ao tema. O período da coleta de dados foi de março a setembro de 2013 no Hospital de Clínicas de Porto Alegre. Participaram do estudo 137 enfermeiros atuantes em unidades de internação clínica e cirúrgica, radioterapia, quimioterapia e das unidades do ambulatório, envolvidos no cuidado de pacientes oncológicos adultos. Resultados: A média global de acertos na área do conhecimento em câncer de mama e câncer de mama hereditário foi de 70,03% e 70,64% respectivamente. Enfermeiros com mais anos de formado apresentaram menor conhecimento em relação aos temas abordados. Quanto ao conhecimento em câncer de mama, 65,79% dos entrevistados conhecem aos fatores de risco mas apenas 2,2% estão familiarizados com as diretrizes do Ministério da Saúde em relação à periodicidade e faixa etária do rastreamento mamográfico. A prática de ações educativas neste tema foi relatada por 48,5% dos participantes. Em relação ao conhecimento sobre câncer de mama hereditário, 80,6% referiu abordar na anamnese dados relevantes da história familiar, porém 40,7% não tem conhecimento sobre aconselhamento genético e 78,5% nunca orientou paciente ou familiar para buscar esse tipo de avaliação mais especializada. Conclusão: Os resultados produzidos demonstram a importância de definir estratégias de capacitação dos profissionais enfermeiros frente aos temas abordados para que exerçam seus papéis de educadores e cuidadores em saúde no desenvolvimento de ações pertinentes a prevenção e detecção precoce do câncer de mama em sua prática assistencial. / Introduction: The breast cancer is a malignant tumor that is more incident in Brazilian women, being considered one of the major public health problems in Brazil. Besides the risk factor related to age, there are hormonal factors and reproductive factors that are well established in literature, genetic factors are also associated to a great risk of breast cancer evolution. The Professional nurse has a role as a health educator. Due to that, this professional must be qualified to carry out preventive actions in early detection of breast cancer, so it is important the knowledge about the subject. Purpose: (a) to evaluate the nurse’s knowledge envolving the assistance to oncological pacients about the subjects breast cancer and hereditary breast cancer, (b) to evaluate the nurse’s knowledge about the genetic advice process, (c) to identify if they develop preventive actions in this scope and (d) if the recognition of the genetic risk factors is included in this actions. Methodology: A cross-sectional and descriptive study has been realized with nurses involved in oncological pacients care from the filling of a questionnare with closed questions about the subject. The data collection period was from March to September 2013 at “Hospital de Clínicas de Porto Alegre”. A hundred-thirty-seven nurses active in clinic and surgery admissions unit, radiotherapy, chemotherapy and from ambulatory units, involved in adults oncological pacients care participated in the study. Results: the global average of hits in breast cancer and hereditary breast cancer knowledg area was 70,03% and 70,64% respectively. Nurses with more years of graduation have presented less knowledge in relation to the addressed subjects. As for breast cancer knowledge, 65,79% from the interviewed know the risk factors but only 2,2% are familiar with the guidelines of Ministry of Health in relation to the periodicity and age-group of the mammographic tracking. The practice of educational actions in this subject was reported by 48,5% of the participants. In relation to the knowledge about the hereditary breast cancer, 80,6% referred to approach in the anamenesis relevants data of the familiar history, however 40,7% do not have the knowledge about genetic advice and 78,5% has never oriented pacient or a member of the family to seek this kind of evaluation more specialized. Conclusion: The produced results show the importance of defining empowerment strategy of the professional nurses toward the approached subjects for them to play their roles as health educators and carers in the development of relevant actionsin prevention and early detection of breast cancer in their assistantial practice.

Submitted by Rosina Valeria Lanzellotti Mattiussi Teixeira (rosina.teixeira@unisantos.br) on 2015-11-04T11:20:11Z No. of bitstreams: 1 Adriana Garcia.pdf: 2141774 bytes, checksum: 7f872813d1caf1acbebb0ae80fd0672c (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-04T11:20:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Adriana Garcia.pdf: 2141774 bytes, checksum: 7f872813d1caf1acbebb0ae80fd0672c (MD5) Previous issue date: 2015-05-28 / Breast cancer incidence has been increasing on the last twenty years and it has become the most frequent tumor on female population worldwide. On this same period of time, breast cancer has doubled its incidence and mortality rates in Brazil. Santos metropolitan area has been shown for being among the areas with more breast cancer mortality coefficient on São Paulo State. About the carcinogenesis multifactorial of breast cancer, it is known that individual predisposition, age, gender, reproductive story, hormones factors and life style plays an important role on its definition. Therefore, women exposure to environmental carcinogenesis is, without doubt, a factor that should be under constant investigation. This area cited above always had shown to be inadequate regarding to the management of its industrial waste. The objective of this research was to investigate the risk factors associated with breast cancer from women that are living on Santos city. This is a control-case study that used hospital basic institution for the definition of two samples. The case group are women suffering of breast cancer with a diagnostic represented by C50 of the International Disease Code who were assisted at an oncology center of the town hospital. The control group, selected the same hospital were paired by the same age variable whose women did not have breast cancer. The elective women who took part on this study were chosen through of medical chart and were approached at the waiting room of the oncological clinic. The case group was composed by 43 participants (n=43), while the control group had 46 (n=46). A questionnaire that approached issues related to the risk factor investigated on this study and it was validated in order to guarantee its feasibility. The quantities variables were analyzed in order to obtain the mean values from the central tendencies and from dispersion measures for the research results. It was used analysis for absolute and relative frequencies and logistic regression model in order to identify both possible risk and protection factors associated to breast cancer. All the variable were treated on univariated models and the ones that showed a statistical significance up to twenty percent (20%) were included on multiple models on modules and final model and tha adopted significance level was five percent (5%). Living near to chemical area risk showed as being very significant risk factor for the development of breast cancer (OR 8,14; CI 2.13 ¿ 31,06). Breastfeeding for period of less than twelve months had also shown to be a risk factors (OR 4,16; CI 1,10 ¿ 15,79) while the regular use of calcium and vitamin D supply showed to be a protection (OR 0,23; CI 0,59 ¿ 0,88). This study confirms the hypothesis that the environmental exposure to chemical contaminants found near to the residential location is a risk factor for the development breast cancer and it corroborates with the results found in other studies. Futures studies with the goal of analyzing, in a stratified model, each classified area as a chemical risk on this work would be of great interest, in order to identify their specific environmental contaminants and their relation to breast carcinogens. / A incidência de câncer de mama cresceu nos últimos vinte anos e se tornou o tumor mais frequente na população feminina. No Brasil, nos últimos vinte anos o câncer de mama dobrou suas taxas de incidência e mortalidade. A Região Metropolitana de Santos destaca-se por estar entre as regiões com maiores coeficientes de mortalidade por câncer de mama no estado de São Paulo. Sabe-se que a predisposição individual, idade, sexo, fatores reprodutivos e hormonais e estilo de vida exercem um papel importante na carcinogenese do câncer de mama, porém, a exposição a carcinogênicos ambientais é sem dúvida um fator sob constante investigação. A região Metropolitana de Santos sempre se destacou pela inadequada gestão de seus resíduos industriais. O objetivo desta pesquisa é investigar os fatores de risco associados ao câncer de mama em mulheres moradoras da cidade de Santos. Este é um estudo de caso e controle de base hospitalar. Os casos são mulheres portadoras de neoplasia maligna da mama e atendidas em um centro oncológico da cidade localizado em um hospital. Os controles, selecionados no mesmo hospital e pareados aos casos pela variável idade são mulheres não portadoras desta doença. As mulheres elegíveis a participarem deste estudo foram selecionadas por prontuário médico e abordadas na sala de espera da clínica oncológica. O grupo caso é composto por 43 participantes (n=43), enquanto que o grupo controle por 46 participantes (n=46). O instrumento de abordagem utilizado foi um questionário composto por questões relacionadas aos fatores de risco investigados neste estudo e passou por uma fase de validação a fim de garantir a sua viabilidade. As variáveis quantitativas foram analisadas em função dos valores de medida da tendência central e das medidas de dispersão. Foram realizadas análises em função das frequências absolutas e relativas. Foi utilizado modelo de regressão logística para a identificação de possíveis fatores de risco ou de proteção associados ao câncer de mama. Todas as variáveis foram tratadas em modelos univariados e aquelas que apresentarem significância estatística de até vinte por cento foram incluídas nos modelos múltiplos por módulos e no modelo final. O nível de significância adotado foi de cinco por cento (5%). Morar próximo à área de risco químico mostrou ser um fator de risco para o desenvolvimento do câncer de mama (RC 8,14; IC 2,13 ¿ 31,06). Amamentar por período menor de 12 meses também se mostrou como um fator de risco (RC 4,16; IC 1,10 ¿ 15,79) enquanto que fazer uso regular de suplemento de cálcio e vitamina D mostrou ser um fator de proteção (RC 0,23; IC 0,59 ¿ 0,88). Este estudo confirma a hipótese de que a exposição ambiental a contaminantes químicos encontrados próximos à área de moradia é um fator de risco para o desenvolvimento do câncer de mama e corrobora com resultados encontrados em outros estudos. Estudos futuros com o intuito de analisar de forma estratificada cada área classificada como de risco químico neste trabalho seria de grande interesse, a fim de identificar seus contaminantes ambientais específicos e suas relações com a carcinogênese de mama.

Neste trabalho foram realizadas medidas de espalhamento elástico e inelástico em tecidos mamários normais e neoplásicos (benignos e malignos) usando uma energia de 17,44 keV (radiação K? ¬- Mo) e um ângulo de espalhamento de 90º (x = 0,99Å-1) com o objetivo de determinar as densidades eletrônicas (?e), número atômico efetivo (Zef) e largura a meia altura (LMA) do pico de espalhamento inelástico destes tecidos. Também foram estudadas por meio de simulações computacionais imagens obtidas por técnica de tomografia de espalhamento Compton. As metodologias experimentais foram verificadas através da análise de materiais de referência. Os valores de densidades eletrônicas e números atômicos efetivos obtidos foram comparados com dados experimentais e teóricos previamente publicados, mostrando uma boa concordância com estes (diferenças menores que 5%). Os valores de LMA obtidos indicam a possibilidade de uso deste parâmetro para obter informação sobre composição dos tecidos e se mostraram correlacionados com os valores de Zef. Os resultados também mostram que existem diferenças de ?e, Zef e LMA entre os grupos de tecidos, as quais estão associadas à composição e à histologia dos tecidos investigados. Por fim, os resultados do estudo técnica de imagem por espalhamento Compton permitiu avaliar a influência de diferentes fatores relacionados ao feixe de radiação, à geometria e à amostra, que determinam a qualidade das imagens obtidas. / In this work we have been measured elastic and inelastic scattering from normal and neoplastic (benign and malignant) breast tissues using a photon energy of 17.44 keV (K? radiation ¬- Mo) and a scattering angle of 90º in order to determine the electron densities (?e), effective atomic number (Zef) and full width at half maximum (FWHM) of inelastic peak of these tissues. Compton scattering imaging techniques was also studied using computational simulation. The experimental methods were checked by analyzing of standard reference materials. The values of electron densities and effective atomic numbers obtained were compared with theoretical and experimental data previously published, showing good agreement between them (differences smaller than 5%). The values of FWHM indicate the possibility of using the FWHM for obtain information about the composition of tissues showing correlation with the values of Zef. The results also show that there are differences of ?e, Zef and FWHM between groups of tissues which are associated with the composition and histology of the investigated tissues. Finally, the results of the study of the Compton scattering imaging technique allowed assessing the influence of various factors, related to the radiation beam, geometry sample, which determine the image quality.

A resistência à quimioterapia, a qual se constitui em um dos maiores desafios a serem superados durante o tratamento do cancer de mama, pode ser modulada por várias cascatas de sinalização cellular que levam ao aumento da sobrevivência celular. A via PI3K/Akt/mTOR é uma importante reguladora desse processo, visto que ela pode favorecer o crescimento tumoral após sua ativação por diversos receptores de fatores de crescimento, incluindo os receptores HER-2. Assim, nossa proposta foi investigar se a inibição dessa via poderia aumentar a sensibilidade de linhagens epiteliais mamárias humanas ao agente quimioterápico doxorrubicina. Também decidimos analisar o perfil de expressão gênica gerado por essa abordagem com o objetivo de compreender os mecanismos moleculares associados à resposta biológica. A rapamicina (um inibidor de mTOR) e a doxorrubicina foram utilizadas individualmente ou em combinação no tratamento de três linhagens epiteliais mamárias humanas: HB4a, C5.2 e SKBR3. A linhagem HB4a, uma linhagem derivada de epitélio mamário normal, expressa níveis basais do receptor HER-2. As outras duas linhagens expressam altos níveis desse receptor: a linhagem SKBR3 (derivada de adenocarcinoma mamário), expressa constitutivamente esse receptor e a linhagem C5.2 foi derivada da linhagem HB4a pela transfecção com o cDNA full-lenght do gene HER-2. A células foram tratadas com 20 nM de rapamicina associada ou não a doses de 30 nM a 1000 nM de doxorrubicina por 24, 48 e 72 horas. Após 24 horas, os resultados de citometria de fluxo mostraram que, enquanto as linhagens SKBR3 e C5.2 apresentaram indução de parada na fase G0/G1 do ciclo celular, a linhagem HB4a não demonstrou alterações significativas na distribuição do ciclo celular pelo tratamento com rapamicina. Esses resultados sugeriram que as linhagens SKBR3 e C5.2 foram mais sensíveis à rapamicina quando comparadas à linhagem HB4a. A doxorrubicina, por sua vez, induziu parada na fase S-G2/M do ciclo celular, a qual foi maior na linhagem HB4a comparada com as demais. De forma similar ao tratamento com doxorrubicina sozinha, o tratamento combinado também induziu parada em S-G2/M nas linhagens HB4a e C5.2. Assim, os efeitos da doxorrubicina foram predominantes aos da rapamicina na distribuição do ciclo celular no tratamento combinado nessas linhagens. Por outro lado, a linhagem SKBR3 mostrou um efeito proeminente da rapamicina, visto que sua associação com doxorrubicina induziu parada na fase G0/G1 do ciclo celular após exposição a 30 nM de doxorrubicina. Os ensaios de viabilidade celular mostraram que o tratamento combinado foi 20% mais eficiente na inibição do crescimento celular quando comparado à doxorrubicina sozinha nas três linhagens celulares, o que foi associado a uma redução de 2 vezes no IC50 da doxorrubicina. Para cada linhagem, os dados de microarray foram analisados usando o SAM (FDR 5%) para comparar os tratamento com doxorrubicina, rapamicina e o tratamento combinado aos seus respectivos controles. Considerando apenas as linhagens C5.2 e SKBR3, a anotação funcional dos genes modulados pelo tratamento combinado mostrou que os genes relacionados ao tratamento combinado estavam relacionados ao rearranjo de RNAs (splicing). Além disso, genes exclusivamente modulados pelo tratamento combinado mostrou funções associadas ao transporte intracellular enquanto que a resposta mediada por HER-2 no tratamento combinado incluiu alterçãoes na via do ubiquitina-proteossomo, glicólise e cadeia trasnportadora de elétrons. Em conjunto, nossos resultados pareceram afetar vias moleculares importantes relacionadas à sobrevivência tumoral em linhagens caracterizadas pela superexpressão de HER-2, o que foi associado a uma supressão de 2 vezes no IC50 da doxorrubicina. Esses dados ressaltam a relevância clínica da terapia combinada no contexto do HER-2, visto que essa associação pode ser capaz de reduzir a toxicidade dos pacientes submetidos à quimioterapia / Chemotherapy resistance, which is the major challenge to be overcome during breast cancer treatment, can be modulated by several signaling cascades that lead to increased cell survival. The PI3K/Akt/mTOR pathway is an important regulator of this process, as it can favour the tumor growth after its activation by several growth factor receptors, including HER-2 receptors. Thus, we proposed to investigate whether the inhibition of this pathway could improve the sensitivity of human HER-2-overexpressing breast epithelial cell lines to the chemotherapeutic agent doxorubicin. We also decided to analyze the gene expression profile generated by this approach to better understand the molecular mechanisms associated with the biological response. Rapamycin (a mTOR inhibitor) and doxorubicin were used individually or in combination on three human breast epithelial cell lines: HB4a, C5.2 e SKBR3. The HB4a cell, a normal mammary epithelial cell line, expresses basal levels of HER-2. The two other cell lines express high levels of this receptor: the SKBR3 cell (derived from a mammary adenocarcinoma) expresses constitutively this receptor.and the C5.2 cell was derived from HB4a cells transfected with the cDNA-full length of HER-2. The cells were treated with 20 M of rapamycin with or without 30nM to 1000nM of doxorubicin for 24, 48 and 72 hours. After 24 hours, the flow citometry results showed that while SKBR3 and C5.2 were arrested in G0/G1 phase, HB4a demonstrated no alterations in the cell cycle distribution after rapamycin treatment. These results showed that SKBR3 and C5.2 cells were more sensitive to rapamycin compared to HB4a. Doxorubicin, in turn, led the cells to a S-G2/M arrest which was greater in HB4a cells compared to SKBR3 and C5.2. Similarly to doxorubicin alone, the combined treatment also caused an increase of S-G2/M arrest in HB4a and C5.2 cells. So, doxorubicin effects were predominant to the rapamycin effects on the cell cycle distribution of the combined treatment in these cell lines. Otherwise, SKBR3 showed a predominant effect of rapamycin since its association with doxorubicin caused a G0/G1 arrest after exposure to 30 nM of doxorubicin. The viability assays showed that the combined treatment was 20% more effective in inhibiting cell growth than doxorubicin alone in the three cell lines, which was associated with a reduction in the IC50 of doxorubicin by 2-fold. For each cell line, microarray data were analyzed using SAM (FDR 5%) to compare doxorubicin, rapamycin and the combined treatment to the respective untreated cells. Considering only C5.2 and SKBR3 cells, Gene Ontology (GO) annotations of the genes modulated by the combined treatment showed altered genes related to RNA splicing. Moreover, genes exclusively modulated by the combined treatment showed altered functions related to intracellular trafficking whereas HER-2-mediated response to the combined treatment included changes in the ubiquitin-proteasome pathway, glycolysis and electron transport chain. Altogether, our results seemed to affect important molecular pathways related to tumor survival in HER-2- overexpressing cell lines, which was associated to a 2-fold suppression in the IC50 of doxorubicin. These findings highlight the clinical relevance of the rapamycin/doxorubicin combination therapy in HER-2 context, since this association could be able to decrease toxicity of patients undergoing chemotherapy

Tese de mestrado integrado. Engenharia Electrotécnica e de Computadores. Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto. 2011

Orientador: Lizandra Amoroso / Resumo: A obesidade é o transtorno nutricional mais observado em cães. Em mulheres, esta condição corporal é fator predisponente para tumor de mama e é também responsável por diminuir os níveis séricos de vitamina D. Considerando as ações reguladoras e preventivas da vitamina D em células tumorais, objetivou-se pesquisar a influência da obesidade e os níveis séricos de vitamina D de cadelas com tumores mamários malignos. Para isso, foi realizada a triagem de cães, fêmeas, sem predileção por raça, com e sem tumor de mama, por meio de exames sanguíneos, cardiográficos e ultrassonográficos. Na ausência de alterações sistêmicas, os tutores foram entrevistados e dois grupos experimentais foram estabelecidos, sendo um grupo constituído por 12 cadelas saudáveis (grupo controle) e o grupo com tumor de mama maligno, por 11 cadelas de acordo com o perfil dos animais e com os resultados do Escore de Condição Corporal (ECC). Foram avaliados os níveis séricos de vitamina D, HDL, LDL, colesterol total e triglicérides; e a composição corporal no equipamento de absorciometria de raios-X de dupla energia. Após entrevista com o tutor, verificou-se que a maioria das cadelas com tumor não eram castradas, não praticavam atividade física e 18,3% apresentaram pseudociese. A análise estatística multivariada demonstrou que cadelas idosas com tumor de mama e alta porcentagem de gordura corporal apresentaram menores concentrações de 25(OH)D, quando comparadas ao grupo controle. Quanto à avaliação histopatológi... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Obesity is the most commonly observed nutritional disorder in dogs. In women, this body condition is a predisposing factor for breast tumor and is also responsible for lowering serum vitamin D levels. Considering the regulatory and preventive actions of vitamin D in tumor cells, the objective was to investigate the influence of obesity and the levels D serum levels of female dogs with malignant breast tumors. For this, dogs were screened, female, without race preference, with and without breast tumor, through blood, cardiogram and ultrasound exams. In the absence of systemic alterations, tutors were interviewed and two experimental groups were established: one group consisting of 12 healthy female dogs (control group) and the group with malignant breast tumor, 11 female dogs according to the animal profile and the results of the Body Condition Score (ECC). Serum levels of vitamin D, HDL, LDL, total cholesterol and triglycerides were evaluated; and body composition on dual energy X-ray absorptiometry equipment. After interview with the tutor, it was found that most of the female dogs with tumor were not castrated, did not practice physical activity and 18.3% had pseudocyesis. Multivariate statistical analysis showed that older female dogs with breast tumor and high body fat percentage presented lower concentrations of 25 (OH) D when compared to the control group. Regarding the histopathological evaluation, 63.7% of the tumors were multicenter, with tubular carcinoma being the ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

El objetivo de la investigación fue explorar la relación entre calidad de vida y estrategias de afrontamiento en 130 mujeres, entre 30 y 86 años, con diagnóstico de cáncer de mama y tratamiento quirúrgico de mastectomía radical modificada. Los instrumentos psicológicos empleados fueron: Brief COPE para medir las estrategias de afrontamiento y EORTC QLQ-C30 para calidad de vida. Los resultados principales demostraron que existen relaciones significativas entre algunas de las dimensiones de calidad de vida con ciertas estrategias de afrontamiento y que su influencia es positiva para la calidad de vida y salud, en términos globales. Lamentablemente no se encontraron diferencias importantes entre estas dimensiones de calidad de vida y estrategia de afrontamiento según el tratamiento recibido (mastectomía radical modificada o MRM con un tratamiento adicional) ni la edad; sin embargo, existen antecedentes científicos que lo presentarían como una opción interesante en una muestra más amplia.  En conclusión, la hipótesis planteada ha sido comprobada parcialmente, ya que sólo algunas estrategias de afrontamiento se llegan a correlacionar con ciertas dimensiones de calidad de vida significativamente. / The objective of the research was to explore the relationship between quality of life and coping strategies in 130 women, between 30 and 86 years, with a diagnosis of breast cancer and surgical treatment of modified radical mastectomy. The psychological instruments used were: Brief COPE to measure coping strategies and EORTC QLQ-C30 for quality of life. The main results showed that there are significant relationships between some of the dimensions of quality of life with certain coping strategies and their influence is positive, in global terms, for the quality of life and health. Unfortunately, there were not important differences between these dimensions of quality of life and coping strategy according to the treatment received (modified radical mastectomy or MRM with additional treatment) or age; however, there is a scientific background that would present it as an interesting option in a larger sample. In conclusion, the hypothesis raised has been partially verified, since only some coping strategies can be correlated with certain dimensions of quality of life significantly. / Tesis

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario. Tesis para optar al Grado de Magíster en Ciencias Animales y Veterinarias mención Patología Animal. / Introducción. El cáncer mamario es el tipo de tumor más prevalente en la hembra canina. Información reciente demuestra que simvastatina exhibe un efecto antitumoral in vitro e induce autofagia sobre diversas líneas celulares neoplásicas. Sin embargo, no hay evidencia de que ocurra en células de carcinoma mamario canino. La autofagia es un proceso catabólico que permite a las células sobrevivir bajo condiciones de estrés metabólico, cumpliendo un rol dual en cáncer asociado a supresión y promoción tumoral dependiendo del contexto celular. En ese contexto, la autofagia jugaría un rol en la sobrevida y muerte de células tumorales en respuesta a agentes antitumorales. El objetivo de este estudio fue analizar los efectos de simvastatina sobre la autofagia y la viabilidad de células de carcinoma mamario canino CF41.Mg. Materiales y métodos. Células CF41. Mg fueron cultivadas y tratadas con simvastatina (1 y 5 M) por 24 horas y analizadas mediante citometría de flujo utilizando naranja de acridina. Se analizó la expresión de LC3 y beclina-1 en células tratadas con simvastatina y 3-metiladenina (inhibidor de autofagia) mediante inmunocitoquímica. Adicionalmente, se realizó un ensayo de viabilidad celular mediante el método de exclusión de azul tripan con células tratadas con simvastatina en presencia de Q-VD-OPh (inhibidor de apoptosis) y 3-metiladenina. Resultados Tanto la actividad autofágica como la expresión de LC3 y beclina-1 fueron inducidas por simvastatina (p<0.05). Estos efectos fueron revertidos por 3-metiladenina. Simvastatina inhibió la viabilidad celular en forma significativa, aún en presencia de 3-metiladenina (p<0.05). Q-VD-OPh bloqueó el efecto antiproliferativo desencadenado por simvastatina. Conclusiones El efecto antiproliferativo de simvastatina sobre células de carcinoma mamario canino CF41.Mg no es dependiente de la autofagia inducida por la misma droga. La citotoxicidad de simvastatina se explica casi completamente por la activación de caspasas / Introduction Mammary cancer is the most prevalent type of tumor in the female dogs. Recent data shows that simvastatin exhibit an antitumor effect in vitro and it is able to induce autophagy in some neoplastic cell lines. However, there is still no evidence in canine mammary cancer cells. Autophagy is a mayor catabolic process that allows the cells to survive under metabolic stress, performing a dual role in cancer associated to tumor suppression/progression depending on cellular context. Under this context, the autophagy may play a role in the survival and death of tumoral cell in response to anti-tumoral agents. The object of this study was to analyze the effects of simvastatin over the autophagy and viability of canine mammary carcinoma cells CF41.Mg. Materials and methods CF41.Mg cells were treated with simvastatin (1 y 5 M) for 24 hours and analyzed by flow cytometry using acridine orange dye. The expression of LC3 and beclin-1 in cells treated with simvastatin/3-methyladenine (autophagy inhibitor) by immunocytochemistry was analyzed. Cell proliferation assays with trypan blue dye in presence of simvastatin, Q-VD-OPh hydrate (pancaspase inhibitor) and 3-methyladenine were performed. Results Both autophagy activity and LC3/beclin-1 expression were induced by simvastatin (p<0.05). These effects were reversed by 3-methyladenine. This statin inhibited the cell viability, even in the presence of 3-methyladenine (p<0.05). Q-VD-OPh hydrate blocked the anti-proliferative effect of simvastatin. Conclusions The anti-proliferative effect of simvastatin over canine mammary carcinoma cells CF41.Mg it’s non-depending of the autophagy induced by the drug. The cytotoxicity of simvastatin it’s explained almost completely by the caspases activation / Financiamiento: Proyecto Fondecyt No. 11110148.