Made available in DSpace on 2016-08-10T10:55:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ANNELISE CARRILHO CORREA DE CASTRO.pdf: 753705 bytes, checksum: 5d1101ab7100c09cec08b3f615f42a08 (MD5) Previous issue date: 2007-11-21 / Nifedipine is a diidropirine widely used for the control of arterial hypertension, wich because of its vessel dilating, in particular for the blockade by the entry of calcium. However, the chronic use of this calcium channel blocker is associated with the gingival overgrowth, resulting in the esthetic, phonetic and mastication problems. Data from the literature aren t unanimous in suggesting that cells density alterations of gingival tissues might be caused by nifedipine. The aim of this study was to analyze the variations in mast cells densities and associated with collagen and vasculature degrees of the gingival tissues by effect of nifedipine. In order to do so, fourteen samples of gingival tissue of patients undergoing chronic treatment with nifedipine were obtained. For comparative purposes, fifteen samples of gingival tissues of healthy patients who did not use drugs associated with gingival overgrowth were used. The samples were analysed in the department of oral pathology, Federal University of Goiás. The histochemical analysis of the collagen degree was made using picrosirius staining. To evaluate mast cells and blood vessels density, the samples were processed by standard immunoperoxidase immunohistochemical technique using mast cell tryptase and CD31 antibodies. The results showed that the number of tryptase-positive mast cells in nifedipine group was significantly higher than the number of tryptasepositive mast cells in the control group (Mann-Whitney test, P=0,02). However, there wasn t relationship between mast cells density and the degree of angiogenesis (Pearson test, P=0,3). The number of tryptase-positive mast cells was not correlated with collagen degree (Spearman test, P=0,6). Also there wasn t relationship between mast cells density and dose or duration of the nifedipine therapy (Pearson test, P=0,2 and P=0,7). Microscopic alterations observed in the connective tissue of nifedipine users suggest that this drug might be associated to alterations observed in tryptase-positive mast cells density. / A nifedipina é uma diidropiridina amplamente utilizada no tratamento antihipertensivo devido à sua ação vasodilatadora, especialmente, por bloquear o influxo de cálcio. Entretanto, o uso crônico deste bloqueador dos canais de cálcio está associado ao aumento da mucosa gengival, gerando problemas estéticos, fonéticos e mastigatórios. Os dados da literatura não são unânimes em sugerir que a nifedipina possa resultar na alteração da densidade celular do tecido gengival. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a densidade de mastócitos e sua relação com os processos de colagenização e vascularização no tecido gengival sob efeito da nifedipina. Para este fim, foram utilizadas 14 amostras de tecido gengival de pacientes usuários de nifedipina. Para fins comparativos, foram utilizadas 15 amostras de tecido gengival de indivíduos saudáveis. As amostras foram avaliadas no departamento de Patologia Bucal da Universidade Federal de Goiás. A análise histoquímica do grau de colagenização foi realizada por meio da coloração de picrosirius. Para a avaliação da densidade de mastócitos, foi realizado um estudo quantitativo destas células a partir da técnica imunoistoquímica com marcação pelo anticorpo anti-triptase. A mensuração da densidade de vasos sangüíneos foi avaliada através de técnica imunoistoquímica com marcação pelo anticorpo anti-CD 31. Os resultados revelaram que os pacientes usuários de nifedipina apresentavam um aumento estatisticamente significante do número de MCs-triptase+, quando comparados ao grupo controle (Mann-Whitney, P=0,02). No entanto, não houve correlação entre a densidade de vasos e a densidade de mastócitos (Teste de Pearson, P=0,3), assim como não houve correlação entre o grau de colagenização e a densidade de mastócitos (Teste de Spearman, P=0,6). Também não foi observada correlação entre a densidade de MCs e a dose e/ou duração da terapia com nifedipina (Teste de Pearson, P=0,2 e P=0,7, respectivamente). As alterações microscópicas observadas no tecido conjuntivo de pacientes usuários de nifedipina sugerem que esta medicação está relacionada às alterações na densidade dos MCs-triptase+.

Foram estudadas as áreas do sistema nervoso central de camundongos ativadas pela exposição de animais alérgicos ao antígeno (ovalbumina ? OVA) bem como uma resposta adaptativa desencadeada a partir da nebulização de OVA em uma caixa de esquiva adaptada. Animais imunizados apresentam aumento de atividade do núcleo paraventricular do hipotálamo e do núcleo central da amígdala após um único desafio intranasal com OVA e evitam entrar no compartimento previamente associado a nebulização com OVA. A ativação das áreas descritas acima é compatível com a elaboração de uma resposta adaptativa (evitar o contato com o antígeno). Animais tornados tolerantes à OVA no dia da imunização primária não apresentam atividade dos núcleos citados nem desenvolvem aversão ao local do desafio, demonstrando que essas alterações são dependentes de anticorpos IgE anti-OVA. Camundongos da linhagem C3H/HeJ, que não desenvolvem inflamação alérgica pulmonar, apresentam as mesmas respostas observadas em camundongos BALB/c, sugerindo que o processo inflamatório não é relevante nesse modelo. O tratamento prévio com cromoglicato dissódico suprime a ativação no SNC e a indução de aversão associada ao desafio com OVA. Esses fatos sugerem em conjunto que a desgranulação de mastócitos mediada por IgE em vias aéreas ative o SNC e desencadeie as alterações comportamentais descritas. / Activation of the central nervous system (CNS) was evaluated following ovalbumin (OVA) challenge in a murine model of asthma, as well as an adaptive response triggered by OVA nebulization during an avoidance test. Immunized animals showed increased activity in the paraventricular nucleous of the hypothalamus and central nucleous of the amygdala after a single intranasal OVA challenge. Furthermore, they avoid a compartment previously associated with the antigen. Activation of these brain areas is compatible with the display of adaptive responses (avoiding contact with the antigen). Induction of immunological tolerance along with primary immunization precludes both CNS activation and avoidance behavior, showing that these responses are IgE-mediated. Mice from the C3H/HeJ strain do not develop lung allergic inflammation but show a similar pattern of brain activity after OVA challenge and mount the same avoidance reaction seen in BALB/c mice, suggesting that an inflammatory infiltrate in the lung is not required in these responses. Prior treatment with dissodium cromoglycate inhibits CNS activation and avoidance behavior. Collectively, these findings demonstrate a role of IgE-mediated mast cell degranulation in signaling an allergic response initiated in the airways to the mouse brain.

Os problemas decorrentes de doenças alérgicas é tema em destaque atualmente devido ao aumento de pessoas que vêm apresentando sintomas e sofrendo as consequências de mudanças aceleradas nos costumes da nossa sociedade. Apesar das diversas terapias oferecidas, pacientes alérgicos ainda sofrem com efeitos colaterais decorrentes do uso de medicamentos anti-alérgicos. Assim, a busca por novas alternativas que possam amenizar os sintomas alérgicos torna-se relevante. As substâncias naturais tem sido alvo de intensa investigação devido às propriedades farmacológicas no tratamento de diversas doenças incluindo as alérgicas. Neste contexto, este trabalho foi focado no extrato Vimang e seu componente majoritário, a mangiferina (Mgf), que tem apresentado atividades biológicas diversas. Sabendo-se que a atividade biológica de um extrato pode ser potencializada pelo sinergismo entre seus componentes, foi avaliado o efeito sinérgico de substâncias isoladas do Vimang, tais como mangiferina, quercetina, catequina, ácido gálico e benzóico. Esses componentes foram combinados e as misturas avaliadas quanto à capacidade em inibir a desgranulação mastocitária. O Vimang, a quercetina e mangiferina inibem a desgranulação mastócitária enquanto catequina, ácido gálico e benzóico não são ativos; e porisso, não foram incluídos na determinação do isobolograma de aditividade, adotado no estudo de sinergismo. O isobolograma de aditividade mostra sinergismo para as concentrações de mangiferina iguais a 5, 10, 20 e 40 ?M e quercetina iguais a 0,2, 1 e 1,6 ?M; e mostra antagonismo para mangiferina 80 ?M e quercetina 0,4 e 0,8 ?M. Tais resultados sugerem que altas concentrações de mangiferina atrapalham a interação sinérgica entre estas substâncias e altas concentrações de quercetina exercem um efeito contrário, ou seja, favorecem o sinergismo entre quercetina e mangiferina. A baixa solubilidade de flavonóides em meio fisiológico levou ao estudo da interação da Mgf com lipossomos de Dimiristoil-L-?-Fosfatidilcolina (DMPC) para aplicação nos ensaios biológicos. A Interação da Mgf com lipossomos de DMPC, bem como a estabilidade lipossomal, foram avaliadas quanto aos efeitos de pH, força iônica e presença de colesterol. O pH influencia a eficiência de incorporação (EI) da Mgf que é maior em pHs ácidos. Em soluções de pH ácido ou fisiológico há aumento de tamanho do lipossomo na presença de Mgf, o que reforça a hipótese de interação desta com a bicamada lipídica. O aumento da força iônica, na ausência de Mgf, diminui a estabilidade do lipossomo. Na ausência de sal, a Mgf favorece a formação de agregados e diminui a estabilidade dos lipossomos e na presença de sal, a Mgf previne a agregação e estabiliza os agregados lipossomais. A EI da Mgf nos lipossomos de DMPC preparados pelo método da injeção etanólica, em pH fisiológico, foram ao redor de 13%. A tentativa de otimizar a EI foi realizada pela adição de colesterol em diferentes proporções lipídio:colesterol. Um aumento de 13% para 17% foi observado para a proporção DMPC:colesterol (9:1). A Mgf livre inibe a desgranulação dos mastócitos de forma concentração-dependente; mas a presença de lipossomos, preparados pelo método da injeção etanólica não altera significativamente esse perfil. A EI da mangiferina em lipossomos de DMPC:colesterol (9:1), preparados pelo método do filme lipídico, foi igual a 45%. Os resultados de potencial antialérgico, para este caso, mostraram que os lipossomos de DMPC favorecem o potencial antialérgico da Mgf em concentrações acima de 25 ?M. Esses resultados abrem perspectivas na busca de sistemas lipossomais mais estáveis e que possam ser aplicados em ensaios biológicos in vitro e in vivo. / The problems due to allergic diseases are currently a highlighted topic due to the increase of people who are showing symptoms and suffering the consequences of rapid changes in the habits of our society. Despite various therapies offered, allergic patients still suffer side effects from the use of anti-allergic drugs. Thus, the search for new alternatives that can alleviate the allergic symptoms becomes relevant. Natural substances have been the subject of intense research due to the pharmacological properties in the treatment of several diseases, including allergic ones. In this context, this work was focused on Vimang extract and its major component, the mangiferin (Mgf), which has shown several biological activities. Given that the biological activity of an extract can be enhanced by the synergism between its components, the synergistic effect of compounds isolated from Vimang such as mangiferin, quercetin, catechin, gallic acid and benzoic acid was evaluated. These components were combined and the mixtures tested for their ability to inhibit mast cell degranulation. The Vimang, quercetin and mangiferin inhibit mast cell degranulation while catechin, gallic acid and benzoic acid are not active and for that reason they were not included in the determination of the isobologram adopted in the synergism study. The isobologram of additivity shows synergism for the concentration of mangiferin equal to 5, 10, 20 and 40 ?M and quercetin equal 0.2, 1 and 1.6 ?M, and shows antagonism for mangiferin 80 ?M and quercetin 0.4 and 0.8 ?M. The low solubility of flavonoids in physiological medium led to the study of the interaction of Mgf with liposomes of L-?-dimyristoyl-phosphatidylcholine (DMPC) for application in biological assays. The interaction of Mgf with DMPC liposomes as well as the liposomal stability was evaluated considering the effects of pH, ionic strength and cholesterol presence. The pH influences the incorporation efficiency (IE) of mangiferin, which is higher in acidic pHs. In solutions of acidic or physiological pH, the liposome size increases in the presence of Mgf, which reinforces the hypothesis of interaction of Mgf with the lipid bilayer. The increased ionic strength in the absence of Mgf decreases the stability of the liposome. In the absence of salt, Mgf favors the formation of aggregates and decreases the stability of the liposomes. When in presence of salt, Mgf prevents the aggregation and stabilizes the liposomal aggregates. The IE of mangiferin in DMPC prepared by the ethanol injection method, at physiological pH, were around 13%. The attempt to optimize the IE was performed by the addition of cholesterol in different proportions lipid:cholesterol. An increase from 13% to 17% was observed for the proportion of DMPC:cholesterol (9:1). Free mangiferin inhibits mast cells degranulation in a dose-dependent manner, but the presence of liposomes prepared by the ethanol injection method does not significantly change this profile. The IE of mangiferin in liposomes of DMPC:cholesterol (9:1), prepared by the method of lipidic film was equal to 45%.The results of antiallergic potential in this case show that DMPC liposomes favor the mangiferin antiallergic potential at concentrations above 25 mM. These results open perspectives in the search for more stable liposomal systems and can be applied to biological assays in vitro and in vivo.

Os mastócitos (MC) são células teciduais, ricas em mediadoras inflamatórias, envolvidos na resposta alérgica, com papel imunomodulador cada vez mais reconhecido. Células Dendríticas (DCs), por sua vez, são sabidamente necessárias para a resposta imune, sendo as células apresentadoras de antígenos mais eficientes, capazes de responder prontamente frente à sinais de perigo. Neste trabalho, demonstramos que o contanto celular de DCs com MCs (iDC-MC) induz a geração de DCs com imunofenotipo tolerogênico. As iDC-MC exibiram menor expressão de HLA-DR e maior expressão de PD-L1, assim, não foram capazes de manter uma proliferação alogeneica. Ainda, os linfócitos expostos as iDC-MC induziram maior expressão de FoxP3+, IL-10 e TGF-β, capazes de suprimir a proliferação de linfócitos T naïve estimulados com mitógeno. Além disso, o contato resultou na maior produção de IDO, fenômeno este, bloqueado quando MCs foram tratados com anti-PD-1 ou iDCs tratadas com PD-L1 ou PD-L2, mas a produção se manteve inalterada após o tratamento das iDCs com anti-histamínicos. / Mast cells (MC) are tissue resident cells, rich in inflammatory mediators, involved in allergic reactions, and with an increasingly recognized role in immunomodulation. Dendritic cells (DCs), on the other hand, are central to the determination of immune response patterns, being highly efficient antigen-presenting cells that respond promptly to changes in their microenvironment. Here, we show that direct cell contact between iDCs and MC bends DCs towards tolerance induction. These MC-exposed DCs decreased HLA-DR but increased PD-L1 expression and stimulated T lymphocytes to express FoxP3+, to secrete TGF-β and IL-10, and to suppress the proliferation of mitogen-stimulated naïve T lymphocytes. Furthermore, contact with MC induced DCs to express higher levels of indoleamine-2,3-deoxigenase (IDO), a phenomenon that was blocked by treatment of MC with anti-PD-1 or by the treatment of DCs with anti-PD-L1 or PD-L2, but not by blocking of H1 and H2 histamine receptors on DCs.

Introdução: o estresse psicológico aumenta a permeabilidade intestinal em roedores e humanos, potencialmente levando a inflamação de baixo grau e aos sintomas em distúrbios gastrintestinais funcionais. No entanto, o efeito do estresse agudo combinado ao estresse da vida crônica, que mimetiza potencialmente melhor a situação humana, é desconhecido. Além disso, há poucos dados disponíveis sobre os efeitos do estresse em intestino delgado versus cólon. Métodos: ratos Wistar foram alocados em quatro protocolos de estresse: 1/ controles; 2/ estresse agudo (isolamento e movimentos limitados); 3/ Crowding stress:crônico e 4/ estresse agudo + estresse crônico. Amostras de jejuno e cólon foram colhidas para estudar a permeabilidade em câmaras deUssing, a expressão gênica de moléculas de junção firmes e a densidade de mastócitos. Níveis de corticosterona no plasma foram medidos. Principais resultados:corticosterona plasmática foi avaliada nas três condições de estresse, teve níveis mais altos na condição de estresse combinado. Permeabilidade do jejuno foi aumentada em todas as condições de estresse e correlacionada com os níveis de corticosterona. O aumento da expressão das claudinas 1, 5 e 8, daocludina e da ZO-1 foi detectado no estado de estresse agudo no jejuno. Em contraste, a permeabilidade do cólon foi aumentada no protocolo de estresse combinado, e a expressão de moléculas das junção firmes permaneceu inalterada. O aumento da densidade de mastócitos foi observado no cólon nos ratos submetidos aos estresses crônico e combinado. Conclusão e inferências:os estresses agudo, crônico e combinado influenciam diferentemente a permeabilidade intestinal, a expressão de moléculas de junção firmes e a atividade dos mastócitos, no jejuno e no cólon. Estes resultados fornecem uma visão mais aprofundada dos mecanismos de hiperpermeabilidade intestinal relacionadas ao estresse. / Background: Psychological stress increases intestinal permeability in rodents and humans, potentially leading to low-grade inflammation and symptoms in functional gastrointestinal disorders through disturbances in brain-gut axis. However, the effect of acute stress on the background of Crhonic life stress, potentially better approaching the human situation, is unknown. Moreover, only limited information is available on the effects in small intestine versus colon in animal model. Methods: Wistar rats were allocated to 4 stress protocols: 1/ sham; 2/ acute stress (isolation and limited movement); 3/ Crhonic crowding stress and 4/ acute + Crhonic stress (n = 8 per group). Jejunum and colon were harvested to study permeability in Ussing chambers, gene expression of tight junction molecules and mast cell density. Plasma corticosterone levels were measured. Key Results: Plasma corticosterone was elevated in all three stress conditions, with the highest levels in the combined stress condition. Permeability of the jejunum was increased in all stress conditions and correlated with corticosterone levels. Increased expression of claudin 1, 5 and 8, occludin and ZO-1 was detected in the acute stress condition in the jejunum. In contrast, colonic permeability was increased in the acute on Crhonic stress protocol only and the expression of tight junction molecules was unaltered. Increased mast cell density was observed in the Crhonic and acute on Crhonic stress condition in the colon only. Conclusion and Inferences: Acute, Crhonic and combined stress differentially affect intestinal permeability, expression of tight junction molecules and mast cells in the jejunum and the colon. These findings provide further insight in the mechanisms of stress-related intestinal hyperpermeability and barrier.

Mastocitomas são neoplasias muito prevalentes em cães, e podem ser classificados em graus 1, 2 ou 3 de acordo com características morfológicas. O objetivo deste projeto foi investigar a presença de metástases de mastocitomas caninos de graus 1, 2 ou 3 em linfonodos regionais, procurando correlaciona-las ao intervalo livre de doença e à sobrevida dos animais. Para isto, avaliamos os parâmetros clínicos dos animais e das neoplasias em 57 cães portadores de mastocitoma cutâneo, registrando-se a porcentagem dos casos que apresentaram metástases, o grau histológico da neoplasia e a sobrevida dos animais. Realizou-se análise citológica dos linfonodos regionais previamente ao procedimento cirúrgico e posteriormente estes linfonodos foram excisados junto com a neoplasia primária, independentemente do resultado da citologia. Os tumores foram graduados por histopatologia e submetidos à análise imunoistoquímica com c-kit e Ki-67. Os linfonodos foram avaliados por histopatologia, por análise histoquímica e por imunoistoquímica com c-kit. Foi realizada comparação entre o diagnóstico citológico e histopatológico dos linfonodos quanto à presença de metástases e entre fatores prognósticos associados à neoplasia e a presença de metástase em linfonodo. A citologia demonstrou ser um bom exame na detecção de metástase em linfonodo de cães portadores de mastocitoma cutâneo, e foram observadas células metastáticas em 36 casos (36/46). Na análise histológica dos linfonodos, observamos um maior índice de metástase nos animais diagnosticados com mastocitomas de grau 3, segundo a graduação de Patnaik, e com mastocitomas de alto grau, segundo a graduação de Kiupel. No entanto, não encontramos uma associação significativa entre a presença de metástase em linfonodo e o grau histológico da neoplasia. O grau histológico associou-se à sobrevida independentemente da presença de metástase em linfonodo. Não houve associação entre o padrão de expressão da proteína KIT na neoplasia com a presença de metástase em linfonodo, nem a sobrevida. A utilização da imunoistoquímica em linfonodos metastáticos com c-kit foi um método eficaz, com predomínio do mesmo padrão de marcação da proteína KIT na neoplasia primária e no linfonodo. A expressão de Ki-67 na neoplasia correlacionou-se à presença de metástase em linfonodo e à uma menor sobrevida e intervalo livre de doença nos animais que apresentavam mastocitomas com índice de Ki-67 acima de 23. Na análise da sobrevida, não observamos diferença na sobrevida, nem no intervalo livre de doença, comparando-se os animais que apresentavam metástase em linfonodo e aqueles que não apresentavam, entretanto o índice de óbito e de progressão da doença neste estudo foram baixos. O intervalo livre de doença e sobrevida média não foram alcançados ao final do estudo. Os resultados sugerem que a presença de metástase em linfonodo não deve ser considerada como um fator prognóstico independente em cães diagnosticados com mastocitoma cutâneo, uma vez que outros fatores prognósticos, bem como a utilização de tratamentos adjuvantes, podem interferir de forma significativa na evolução destes pacientes. / Mast cell tumors are very prevalent in dogs, and can be classified in grades 1, 2 or 3 according to morphological characteristics.The aim of this study was to investigate the presence of metastases in regional lymph nodes of grade 1, 2 or 3 canine mast cell tumors, and correlate its presence to the disease-free interval and survival of the animals. For this, we evaluated the clinical parameters of animals and tumors in 57 dogs with cutaneous mast cell tumor, registering the percentage of cases with metastasis, histological grade of the tumor and survival of the animals. Cytological analysis of regional lymph nodes were performed prior to surgery and then these lymph nodes were excised along with the primary tumor, regardless of the result of cytology. The tumors were graded by histopathology and submitted to immunohistochemical analysis with c-kit and Ki-67. The lymph nodes were evaluated by histopathology, histochemistry and immunohistochemistry with c-kit. We compared the cytological and histopathological diagnosis of lymph nodes for the presence of metastases and compared prognostic factors associated with the primary tumor and the presence of metastasis in lymph node. Cytology proved to be a good method in detecting lymph node metastasis in dogs with cutaneous mast cell tumors and metastatic cells were observed in 36 cases (36/46). In the histological analysis of the lymph nodes, we observed a higher rate of metastasis in animals diagnosed with grade 3 mast cell tumors, according to the Patnaik grading system, and with high-grade mast cell tumors, according to the Kiupel grading system. However, we have not found a significant association between the presence of metastasis in lymph nodes and the histological grade of the tumors. Histological grade associated with survival independent of the presence of lymph node metastasis. In addition, there was no association between the pattern of KIT protein expression in the primary tumor and lymph node metastasies or survival. The use of immunohistochemistry in metastatic lymph nodes with c-kit is an effective method, with prevalence of the same KIT pattern in primary tumor and lymph node. The expression of Ki-67 in the primary tumor correlated with lymph node metastasis, survival and disease-free-time, and it was observed in animals in which mast cell tumors had a Ki-67 index higher than 23. In survival analysis, we observed no difference in survival or in disease-free interval, comparing the animals with lymph node metastasis and those who did not had, though the death rate and disease progression in this study were low. The disease-free interval and median survival were not reached at the end of the study. The results suggest that the presence of lymph node metastasis should not be considered as an independent prognostic factor in dogs diagnosed with cutaneous mast cell tumors, since other prognostic factors, as well as the establishment of adjuvant treatment, can interfere significantly with the progression of these patients.

As doenças alérgicas alcançaram proporções mundialmente epidêmicas. A ativação de receptores para IgE, Fc RI, em mastócitos, é o mecanismo chave para a iniciação e propagação das respostas patofisiológicas dos processos alérgicos. Após a interação destas células com um alérgeno, há a ativação de uma cascata de eventos de sinalização, a qual resulta na secreção de mediadores alérgicos pré-formados, através de um processo regulado de exocitose, além da síntese e secreção de mediadores lipídicos e citocinas. Desta forma, a inibição da responsividade dos mastócitos, quando ativados por um alérgeno, representa uma via importante para o desenvolvimento de novos candidatos a fármacos com indicação antialérgica. Neste sentido, este trabalho buscou, num primeiro momento, contribuir com a compreensão dos papéis desempenhados por um glicerofosfolipídeo de membrana, fosfatidilinositol 4,5-bifosfato (PtdIns(4,5)P2), em eventos de sinalização em mastócitos, mediados por IgE. Este trabalho permitiu destacar a importância de PtdIns(4,5)P2 como um regulador chave das respostas de Ca2+ e das alterações de morfologia de mastócitos estimulados por um alérgeno. Foi observado ainda que níveis reduzidos de PtdIns(4,5)P2 determinaram a inibição do processo de endocitose de receptores Fc RI ativados, um evento crucial para a redução da transdução de sinais. Estes resultados não somente trazem um ganho de conhecimento acerca dos detalhes que orquestram os eventos de sinalização em mastócitos estimulados por um alérgeno, como também apontam que a regulação dos níveis de PtdIns(4,5)P2 pode certamente ser apontada como alvo para o desenvolvimento de novas moléculas inibidoras da ativação mastocitária. A segunda etapa deste trabalho teve como objetivo avaliar o potencial inibitório de alguns compostos de origem natural e sintética sobre a degranulação de mastócitos, evento em que mediadores alérgicos, como a histamina, são secretados, em resposta ao estímulo celular. Inicialmente, avaliou-se o efeito inibitório de um conjunto de arilcumarinas sintéticas, estruturalmente relacionadas, sobre a degranulação. Um número significativo de moléculas foram ativas e, dentre elas, algumas substituições junto à estrutura do anel 3-fenilcumarínico, como as hidroxilações das posições 6, 2\'e 5\', puderam ser identificadas como importantes para o potencial bioativo. Finalmente, o trabalho apresentou uma molécula de origem natural, como um potente inibidor da degranulação de mastócitos e da secreção de citocinas. Trata-se da piridovericina, um metabólito secundário, isolado do fungo entomopatogênico Beauveria bassiana. Dessa forma, tanto as cumarinas, como a piridovericina podem ser apontadas como compostos de partida de grande potencial para o desenvolvimento de novos fármacos anti-alérgicos. / Allergic diseases have approached epidemic proportions worldwide. The activation of IgE receptors, Fc RI, from mast cells, is the key event for the initiation and propagation of pathophysiological responses involved in the allergic processes. The interaction between mast cells and allergens triggers a signaling cascade, which results in secretion of pre-formed allergic mediators, through regulated exocytosis, in addition to the synthesis and secretion of lipid mediators and cytokines. In this way, the inhibition of mast cell responsiveness, upon allergen stimulation, represents an important pathway for the development of new antiallergic drug candidates. Thus, the present work tried, firstly, to gain better insight of the roles played by phosphatidylinositol 4,5-biphosphate (PtdIns(4,5)P2) during IgE-mediated mast cell signaling. This work highlighted the importance of PtdIns(4,5)P2 as a key regulator of Ca2+ responses and mast cell morphological alteration, when activated by an allergen. It was observed that reduced levels of PtdIns(4,5)P2 determined the inhibition of activated Fc RI endocytosis, a crucial event for signal transduction termination. Those results not only improve the actual knowledge in mast cell signaling but also point out the regulation of PtsIns(4,5)P2 levels as a target to be pursued during the development of new inhibitors of mast cell activation. The second part of this work aimed to evaluate the capacity of both synthetic and natural compounds to inhibit mast cell degranulation, characterized by the release of granule-contained allergic mediators, such as histamine, upon cell stimulation. Initially, the inhibitory effect of a set of structurally related synthetic arylcoumarins was evaluated. A significant number of molecules were active, and a few substitutions within such molecules could be pointed as important for the biological activity, such as the hydroxylation of carbons 6, 2\' e 5\' of the 3-phenylcoumarin ring. Lastly, this work presents a natural compound as a potent inhibitor of mast cell degranulation and cytokine secretion. The refered compound is pyridovericin, a secondary metabolite isolated from the entomophatogenic fungus Beauveria bassiana. Therefore, both the coumarin derivatives and pyridovericin can be regarded as lead compounds for the development of new anti-allergic drugs.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-02-09T14:23:37Z No. of bitstreams: 1 Jomel Francisco dos Santos.pdf: 1033055 bytes, checksum: 0882131c9f37caac6cc396d21eb8c175 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-09T14:23:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jomel Francisco dos Santos.pdf: 1033055 bytes, checksum: 0882131c9f37caac6cc396d21eb8c175 (MD5) Previous issue date: 2013-06-03 / Joint contractures are a severe complication of joint injuries that can permanently limit the extremity function. Current treatments for contractures in humans have little effect and there is an obvious need for clarification of the pathophysiology of this chronic and disabling dysfunction. Sheep joint is a promising model for the investigation of normal and pathologic states by the similarity with the biomechanics of certain human joints. The aim of this study was to investigate by the techniques of immunohistochemistry and cytochemistry the presence of key components for the development of joint contractures in sheep and to evaluate the potential of this species as an experimental model to study this disease. Therefore, we used 15 knee joint capsules of healthy Santa Inês ewes to identify myofibroblasts and mast cells. For investigation of myofibroblasts was performed immunohistochemical technique. Following histologic routine preparation, the antigen retrieval was performed by heating in citrate, followed by peroxidases blockage, blocking nonspecific protein and then primary antibody was incubated. After the secondary antibody was added to the cuts, and DAB chromogen was added. Slides were counterstained with Harris Hematoxylin and mounted. In cytochemical technique was applied the stain Toluidine Blue to disclosure mast cells. Analysis of the cuts was made under a light microscope. Positive controls of myofibroblasts (ovine cervix) and mast cells (umbilical cord) were stained satisfactorily by the standard techniques. In joint capsules, α-SMA protein was observed in the wall of arteries and rare myofibroblasts were observed in each section, as well as few mast cells were scored. Other studies about ovine joint capsule injuries must be conducted to confirm the presence of myofibroblasts and the development of joint contracture. / As contraturas articulares são complicações severas de doenças articulares que podem limitar permanentemente a função de extremidades. Os tratamentos atuais para contratura em seres humanos têm pouca eficácia e há uma evidente necessidade de esclarecimento sobre a patofisiologia dessa disfunção crônica e incapacitante. A articulação do ovino é um modelo promissor para a investigação dos estados normais e patológicos, pela semelhança com a biomecânica de determinadas articulações humanas. O objetivo deste trabalho foi investigar por meio das técnicas de imuno-histoquímica e citoquímica a presença de componentes-chave para o desenvolvimento da contratura articular na espécie ovina e avaliar a potencialidade desta espécie como modelo experimental para estudo desta patologia. Para tanto, foram utilizadas 15 cápsulas articulares de joelhos de ovelhas Santa Inês sadias para localização de miofibroblastos e mastócitos. Para investigação de miofibroblastos foi realizada a técnica de imuno-histoquímica. Após a preparação para rotina histológica, a recuperação antigênica foi realizada por aquecimento em citrato, seguida pelo bloqueio das peroxidades, bloqueio de proteínas inespecíficas e então, o anticorpo primário foi incubado. Após, o anticorpo secundário foi acrescentado aos cortes, e o cromógeno DAB foi adicionado. As lâminas foram contracoradas com Hematoxilina de Harris e montadas. Na técnica citoquímica, foi aplicada a coloração de Azul de Toluidina para evidenciação dos mastócitos. As análises dos cortes foram feitas em microscópio de luz. Os controles positivos da pesquisa de α-SMA (cérvix ovina) e de mastócitos (cordão umbilical) foram marcados ou corados satisfatoriamente pelas respectivas técnicas. Nas cápsulas articulares, a proteína foi observada na parede de artérias e raros miofibroblastos foram observados em cada corte, assim como poucos mastócitos foram corados. Outros estudos sobre lesões de cápsula articular de ovinos devem ser conduzidos para confirmar a presença de miofibroblastos e o desenvolvimento da contratura articular.

Orientador: Sandra Helena Penha de Oliveira / Banca: João Eduardo Gomes Filho / Banca: Ana Paula Campanelli / Resumo: O objetivo do presente estudo foi investigar o papel dos Mastócitos (MAST) na resposta tecidual de camundongos com Diabetes Mellitus (DM) submetidos a Doença Periodontal (DP). Os camundongos foram pré-tratados com uma dose única de estreptozotocina (STZ) para indução do DM. Para avaliar o papel dos MAST no controle da DP, os camundongos foram depletados de MAST pelo tratamento com composto 48/80. Subsequentemente foi realizada a indução da DP nos camundongos com DM e controles pela ligadura dos primeiros molares homólogos. Após um período de 7 e 14 dias os animais foram sacrificados para coleta das amostras para ensaios subseqüentes. Os níveis de reabsorção óssea dos camundongos diabéticos e normais foram avaliados radiograficamente para confirmação da presença da DP. O recrutamento de Neutrófilos (NE) foi avaliado pela produção da enzima Mieloperoxidase (MPO) no tecido gengival. Os níveis de IFN-g, IL-4, RANTES/CCL5, KC/CXCL1 e Linfotactina/ XCL1 nos tecidos gengivais e IFN-g e IL-4 no plasma foram avaliados pelo método imunoenzimático (ELISA). Os resultados mostram que animais diabéticos com DP apresentaram após 14 dias da indução da DP uma perda óssea significativa quando comparado ao grupo controle, diferentemente do grupo de 7 dias. Esta perda foi potenciada nos animais diabéticos com DP depletados de MAST. Verificou-se elevados níveis de MPO nos animais normais e com DM após 14 dias da indução da DP. Nos animais com DM e com DP tratados com 48/80 foi observada uma redução parcial dos níveis de MPO. A produção de IFN-g, IL-4, RANTES/CCL5, KC/CXCL1 e Lin-fotactina/XCL1 foi observada nos animais diabéticos independente da indução da DP após o período 7 e 14 dias. Conclui-se então que o DM favoreceu o aumento da perda óssea e o recrutamento de neutrófilos na DP. Como também induziu a produção de altos níveis dos mediadores... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to investigate the role of Mast cells (MAST) on the tissue response in mice with Diabetes Mellitus (DM) submitted to Periodontal Disease (PD). The mice were pretreated with a single dose of streptozotocin (STZ) for the induction of DM. To evaluate the role of MAST in the PD, the mice were depleted of MAST by a pretreatment with compound 48/80. Subsequently, PD was induced in diabetic and normoglycemics mice by using a ligature around the first molars homologous. Seven and fourteen days after the surgery, the animals were sacrificed and the samples were collected for the subsequent experiments. The levels of bone resorption in diabetic and normoglycemic mice with PD were radiographically evaluated to confirm the presence of the PD. Neutrophil migration (NE) was quantified by the presence of the MPO enzyme in the gingival tissue. The levels of IFN-g, IL-4, RANTES/CCL5, KC/CXCL1 and Lymphotactin/XCL1 from gingival tissues and plasma were evaluated by Enzyme- Linked Immunosorbent Assay (ELISA). The results showed that diabetic mice had a significant bone resorption 14 days after the induction of PD when compared to normoglycemics mice. This bone resorption was higher in the diabetic MAST-cell depleted mice with PD. The level of MPO was higher in diabetic and normoglycemic mice 14 days after the induction of PD. Furthermore, it was observed a partial reduction of MPO levels in diabetic mice with PD treated with compound 48/80. The level of IFN-g, IL-4, RANTES/CCL5, KC/CXCL1 and Lymphofotactin/XCL was observed in diabetic mice independently of the induction of PD after 7 or 14 days. In conclusion, DM increased bone resorption and neutrophil recruitment in the PD mice, as well as it induced the production of high levels of IFN-g, IL -4, RANTES/CCL5, KC/CXCL1 and Lymphofotactin/XCL1. The MAST depletion increased bone resorption and reduced NE recruitment... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Foram estudadas as áreas do sistema nervoso central de camundongos ativadas pela exposição de animais alérgicos ao antígeno (ovalbumina ? OVA) bem como uma resposta adaptativa desencadeada a partir da nebulização de OVA em uma caixa de esquiva adaptada. Animais imunizados apresentam aumento de atividade do núcleo paraventricular do hipotálamo e do núcleo central da amígdala após um único desafio intranasal com OVA e evitam entrar no compartimento previamente associado a nebulização com OVA. A ativação das áreas descritas acima é compatível com a elaboração de uma resposta adaptativa (evitar o contato com o antígeno). Animais tornados tolerantes à OVA no dia da imunização primária não apresentam atividade dos núcleos citados nem desenvolvem aversão ao local do desafio, demonstrando que essas alterações são dependentes de anticorpos IgE anti-OVA. Camundongos da linhagem C3H/HeJ, que não desenvolvem inflamação alérgica pulmonar, apresentam as mesmas respostas observadas em camundongos BALB/c, sugerindo que o processo inflamatório não é relevante nesse modelo. O tratamento prévio com cromoglicato dissódico suprime a ativação no SNC e a indução de aversão associada ao desafio com OVA. Esses fatos sugerem em conjunto que a desgranulação de mastócitos mediada por IgE em vias aéreas ative o SNC e desencadeie as alterações comportamentais descritas. / Activation of the central nervous system (CNS) was evaluated following ovalbumin (OVA) challenge in a murine model of asthma, as well as an adaptive response triggered by OVA nebulization during an avoidance test. Immunized animals showed increased activity in the paraventricular nucleous of the hypothalamus and central nucleous of the amygdala after a single intranasal OVA challenge. Furthermore, they avoid a compartment previously associated with the antigen. Activation of these brain areas is compatible with the display of adaptive responses (avoiding contact with the antigen). Induction of immunological tolerance along with primary immunization precludes both CNS activation and avoidance behavior, showing that these responses are IgE-mediated. Mice from the C3H/HeJ strain do not develop lung allergic inflammation but show a similar pattern of brain activity after OVA challenge and mount the same avoidance reaction seen in BALB/c mice, suggesting that an inflammatory infiltrate in the lung is not required in these responses. Prior treatment with dissodium cromoglycate inhibits CNS activation and avoidance behavior. Collectively, these findings demonstrate a role of IgE-mediated mast cell degranulation in signaling an allergic response initiated in the airways to the mouse brain.