Orientador: Kleber Gomes Franchini / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T20:33:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Corat_MarcusAlexandreFinzi_D.pdf: 5959787 bytes, checksum: 480262d3ceea868b88144ebffae91a99 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Miogênese é um processo altamente ordenado que compromete e direciona células indiferenciadas para um programa de células musculares. Este processo envolve a transição de um alto nível de atividade mitótica, motilidade e período de sobrevivência das células para um período que o ciclo celular é interrompido e começa a expressão de genes músculo-específicos, reconhecimento célula-célula, assim como, formação de miotubos multinucleados. Embora estudos prévios tenham definido extensivamente o mecanismo de miogênese no nível transcricional e identificado genes envolvidos neste programa de diferenciação, tais como: MyoD, Myogenin, Myf-5 e MRF4, assim como, genes mais tardios como MHC, MCK, entre outros; o mecanismo intracelular envolvido com o processo inicial da miogênese permanece pouco entendido. Estudos mostram o envolvimento de proteínas da matriz-extracelular acopladas a receptores integrinas na célula, que quando estimulados, desencadeiam um processo de sinalização através do citoplasma em direção ao núcleo celular. Um papel crítico dessas proteínas sinalizadoras, em sua maioria proteínas tirosina-quinase (PTKs), tem sido evidenciado quanto a sua participação na progressão da miogênese, entre elas podemos destacar MAPKs (ERKI e ERK2), PI3K, PKB/AKT, Integrin, FAK e CASo Apesar destas proteínas aparecerem proeminentes no programa de miogênese, quando estas são superexpressadas ou forçadamente ativadas, o programa de miogênese é interrompido. Isto ressalta a importância de atividade regulatória sobre estas proteínas para o desencadeamento normal do programa de miogênese. Estas proteínas sendo tirosinaquinase- dependentes podem vir a ser reguladas por proteínas tirosina-fosfatases (PTPs). O involvimento de PTPs no programa de miogênese é ainda pouco explorado. No presente estudo, através da utilização de dois modelos, nós focamos a atenção na etapa de regulação da sinalização da proteína tirosina-quinase FAK através da interação com a PTP SHP-2 no período inicial do programa de miogênese. Foi proposta a interação FAK/SHP-2 como um fator crucial para a regulação da Y397 da FAK no período inicial da miogênese. Além de ter reforçado a importância da regulação da FAK para o progresso do programa de diferenciação mioblástica / Abstract: Myogenesis is a highly ordered process tOOtcommits and directs undifferentiated cells into a muscle cell program. This process involves the transition of a high level of mitotic activity, motility and survival of the cell to a period when the cell cycle is disrupted and starts the expression of muscle-specific genes, cell-cell recognition as well as multinucleated myotube formation. Although previous studies have defined extensively the mechanisms of myogenesis at the transcription level and identified early- genes involved on this difIerentiation process such as MyoD, Myogenin, Myf5, MRF4 as well as advanced-genes such as MHC, MCK and others, the intracellular mechanisms engaged on the start of myogenesis remain to this day poorly understood. Some reports show the involvement of extracellular-matrix proteins engaged at integrins receptors of the cell. When such are stimulated, they start a signaling process through cytoplasm toward nucleus. A critical role those signaling proteins, which mostly are tyrosine kinases proteins (PTKs), OOvebeen evident to play on the myogenesis progression, among them, we can stand out MAPKs (ERKI and ERK2), PI3K, PKB/AKT, Integrin, FAK, CASo Despite PTKs figuring prominently in myogenesis, when they are overexpressed or pushed up in their activity, the miogenesis program is impaired. This stands up the importance of regulatory role of these proteins to normal miogenesis program. These PTKs may be regulated by proteins tyrosine phosphatase (PTPs). The engagement of PTPs into the myogenesis program has not been highly explored. In this report, by using two approaches, we OOvefocused on the step of signaling regulation of protein tyrosine-kinase FAK by PTP-SHP-2 on the early stage of myogenesis. We propose the FAK/SHP-2 complex as a crucial factor to regulate the FAK Y397 in this period. Indeed, we corroborated the importance of FAK regulation to the myoblastic differentiation progress / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Sergio R. Peres Line / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-21T06:53:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zaia_AlexandreAugusto_D.pdf: 2456850 bytes, checksum: d1b3ef837bc68e43f27ecb9248a2d266 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Atrofia obstrutiva de glândulas salivares é uma alteração comum que pode ser causada pela presença de cálculos, infecções ou processos neoplásicos. No presente estudo utilizamos microscopia eletrônica de transmissão e métodos bioquímicos para estudar alterações que ocorrem na matriz extracelular durante atrofia experimental de glândulas submandibulares de ratos. Estudos imunohistoquímicos da laminina e do colágeno IV mostraram distribuição irregular dessas proteínas ao redor das estruturas ductais e acinares atróficas. Análise em "Western blot" mostrou que glândulas submandibulares de ratos expressam laminina contendo apenas cadeias S, enquanto a cadeia A é presente em pequena quantidade. Isso foi observado tanto em glândulas normais como atróficas. Investigação da expressão da colagenase fibroblástica (MMP-1) por técnica zimográfica mostrou altos níveis desta enzima após 5 dias de atrofia. Com a evolução da atrofia, a atividade gelatinolítica regrediu gradativamente até 30 dias de atrofia. Microscopia eletrônica mostrou extensivas alterações morfológicas nas células glandulares. Células mioepiteliais de glândulas atróficas mostraram áreas com espessamento da membrana basal. A atrofia experimental de glândulas salivares pode ser usada como modelo in vivo para estudar eventos moleculares que ocorrem durante remodelação da matriz extracelular / Abstract: Obstructive atrophy of salivary glands is a common disease. It may occur by ductal obstruction caused by calculus, infection or neoplastic processes. In the present work we have used electron microscopy and biochemical methods to study the changes that occur in the expression laminin, type IV collagen and metaloproteinases during the experimental atrophy of the submandibular gland in rats. Immunohistochemical studies of laminin and type IV collagen showed an irregular distribution of there proteins around atrophies ducts and acini. The composition of laminin chains was not altered during glandular atrophy. Western blot analysis showed that rat submandibular gland laminin contain B chains, while A chain seems to be present only in small amounts. Investigation of the expression of fibroblast collagenase (MMP1), by zimographic analysis showed. high levels of this enzyme after 5, days of ligation. Gelatinolytic activity decrease progressively until 30 days of atrophy. Electron microscopy showed extensive morphologic changes in glandular cells. Myoepithelial cells showed "wrinkling" of outer plasma membrane leading to a thickening of the associated basement membrane. We conclude that the atrophy of salivary gland is an useful in vivo model to study the molecular events that take part in the remodeling of the extracellular matrix / Doutorado / Biologia e Patologia Buco-Dental / Doutor em Odontologia

Orientador: Cecilia Amelia de Carvalho Zavaglia / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia mecanica / Made available in DSpace on 2018-08-04T05:13:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carvalho_ClaudioRobertoCutrim_M.pdf: 4282761 bytes, checksum: ab691d570344037977f1501d694b7a37 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Litografia macia tem sido usado recentemente para criar micro e nano estruturas bi e tridimensionais para cultura de células e engenharia de tecidos usando PDMS (poli dimetil-siloxano). PDMS é um elastômero biocompatíveí, opticamente transparente, não tóxica, e barato que pode ser moldado com alta fidelidade. Fabricou-se um arranjo de estruturas quadradas com espaçamento regular e secção transversal variando 100µmx100 µm, 150µmx 150µm, 200µmx200µm, 50µmx250µm com 50 µm de altura e uma linha separando cada uma dessas estruturas de 30µm. A proposta deste arranjo foi implementar a técnica de litografia macia para construção de dispositivos para aplicação em engenharia de tecidos, tais como: estudar o comportamento celular, adesão e espalhamento celular. Fabricaram-se também membranas porosas com diâmetro de 100 µm com altura de 35µm e espaçamento entre os poros de 35um e alguns canais microfluídicos. Estes arcabouços tridimensionais fornecerão o suporte físico para a fixação celular e reconstrução tecidual / Abstract: Soft lithography and microtransfer techniques have been used to create two and three dimensional micro and nanostructures for cells culture and tissue engineering, using PDMS (polydimethylsiloxane). PDMS is a biocompatible elastomer, optically transparent, non-toxic and inexpensive that can be molded with high fidelity. We fabricated three dimensional PDMS structures with regular spaced square arrays with l00µm, 150µm, 200µm and 250µm a side and 30µm line width and 50µ hight. The purpose of these structures is implematation of lithography soft for biomedical research such: study the behavior, adhesion and spreading of the cells.We also fabricated PDMS porous membrane with diameter of 100µm, 30µm height, spaced by 35µm and some microfluidic channels. These three dimensional scaffolds will provide the physical support to cells attachment and tissue reconstruction / Mestrado / Materiais e Processos de Fabricação / Mestre em Engenharia Mecânica

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2015-12-04T13:03:14Z No. of bitstreams: 1 anacristinamouragualberto.pdf: 3081974 bytes, checksum: e832afd5a1d1f2572f0135827ea9257c (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2015-12-07T03:20:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 anacristinamouragualberto.pdf: 3081974 bytes, checksum: e832afd5a1d1f2572f0135827ea9257c (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-07T03:20:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 anacristinamouragualberto.pdf: 3081974 bytes, checksum: e832afd5a1d1f2572f0135827ea9257c (MD5) Previous issue date: 2015-02-24 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A obesidade afeta mais de 300 milhões de pessoas no mundo e está relacionada com doenças como diabetes tipo 2, doenças cardiovasculares e cânceres. Assim como a obesidade, o câncer é atualmente um problema de saúde pública mundial com um aumento em sua incidência de 20% anualmente. Há uma correlação positiva entre a incidência de tumores com pior prognóstico e a obesidade. No microambiente tumoral a degradação dos elementos de matriz extracelular (MEC) está associada à migração de células tumorais por meio de membranas basais, barreira óssea e estroma intersticial. Moléculas associadas à MEC como metaloproteinase de matriz (MMP-2, 3, 9, 11 e 13) auxiliam a degradação da MEC, permitindo assim maior migração de células tumorais, estão, portanto, associados com as etapas de progressão tumoral assim como seus inibidores (TIMP-1, TIMP-2 e RECK), e outros componentes da MEC como a fibronectina, e colágeno IV. Portanto, a identificação dessas moléculas associadas ao processo metastático em camundongos obesos e a elucidação de seu papel neste processo são importantes para a exploração de novos métodos para o diagnóstico precoce, avaliação prognóstica e padronização de novas estratégias terapêuticas. Assim, o presente estudo teve como objetivo avaliar e comparar marcadores associados a processos metastáticos em animais obesos e controle por meio de imunohistoquímica. Para tal a obesidade foi induzida durante 12 ou 16 semanas por meio de uma dieta hiperlipídica em que 60% das quilocalorias foram advindas de lipídeos. Ao final dessas semanas, o câncer de mama foi induzido pela linhagem celular metastática 4T1 com injeção intradérmica na mama superior de camundongos BALB/c (n=40). Os animais foram eutanasiados após 14 ou 21 dias e os tumores foram coletados. A análise histopatológica dos tumores foi feita por coloração Hematoxilina-Eosina observando um aumento de vacúolos lipídicos, que podem contribuir para o recrutamento de células imunes como fatores de crescimento, em tumores de animais obesos comparados aos animais controles. Em relação a imunohistoquímica em tumores obteve-se uma maior concentração dos marcadores MMP-3, 9, 11, 13 nos animais obesos e uma menor concentração em seu inibidor RECK, demonstrando uma possível progressão tumoral mais invasiva nesses animais. Em relação a fibronectina e colágeno IV foi encontrado uma marcação mais intensa em animais obesos em relação ao controle. Entretanto, TIMP-1 e TIMP-2, demonstraram-se super expressos nos obesos, como encontrado na literatura. Assim, os resultados indicam um tumor uma progressão tumoral com um tumor mais invasivo e por isso um pior prognóstico em animais obesos quando comparados aos controles. / Obesity affects more than 300 million people worldwide and is associated with diseases such as type 2 diabetes, cardiovascular diseases and cancers. As obesity, cancer is currently a global public health problem increasing 20% annually. There is a positive correlation between the incidence of tumors with poor prognosis and obesity. The degradation of extracellular matrix components (ECM) in the tumor microenvironment is associated with tumor cells migration through basement membranes, bone barrier and interstitial stroma. Molecules associated with ECM such as extracellular matrix metalloproteinase (MMP-2, 3, 9, 11 and 13) help the degradation of ECM, and so promote tumor cell migration. Therefore, these molecules are associated with tumor progression stages as well as their inhibitors (TIMP-1, TIMP-2 and RECK), and other ECM components such as fibronectin and collagen IV. Thus, the identification of these molecules associated with the metastatic process in obese mice and the elucidation of their role in this process are important to explore new methods for early diagnosis, prognostic evaluation and standardization of new therapeutic strategies. Thus, this study aimed to evaluate and compare markers associated with metastatic processes in obese and control animals by immunohistochemistry. For that purpose, obesity was induced for 12 or 16 weeks by a high fat diet ( 60% of the kilocalories is from lipids). At the end of those weeks, breast cancer was induced by metastatic cell line 4T1 with intradermal injection in the upper breast BALB / c mice (n = 40). These animals were euthanized after 14 or 21 days and the tumors were collected. Histopathology analysis of the tumors was performed by Hematoxylin-Eosin staining. As result, it was observed an increase in lipid vacuoles, which may contribute to the recruitment of immune cells such as tumor growth factors in obese animals compared to control animals. The immunohistochemistry analysis shows a higher concentration of MMP-3, 9, 11, 13 expressions in obese animals and a lower concentration of their inhibitor RECK, suggesting a more aggressive tumor invasion in those animals. Regarding the fibronectin and collagen type IV were found higher concentrations in obese animals compared to controls. However, TIMP-1 and TIMP-2, showed an upregulation in obese, as found in the literature. Thus, the results indicate more invasive breast cancer progression and so a worse prognosis in obese animals when compare to controls.

Aneurismas e dissecções da aorta ascendente são caracterizados por degradação das fibras elásticas e de colágeno e diminuição de células musculares lisas, predominantemente em áreas mucóides, as quais são relacionadas ao acúmulo de glicosaminoglicanos ou proteoglicanos. Tendo em vistas tais alterações, estudamos a topologia das metaloproteases nestas doenças. Cortes de 5?m de aortas, fixadas em fomol e embebidas em parafina, foram submetidos a reações imuno-histoquímicas para MMP-3 (estromelisina), MMP-7 (matrilisina) e plasminogênio/plasmina na camada média. Em paralelo, cortes de aortas foram submetidos a coloração pela hematoxilina e eosina e azul de Alcian (para material mucóide). Aortas de 8 pacientes com aneurisma de aorta torácica e 10 com dissecções agudas foram analisadas. Adicionalmente, 9 aortas normais foram estudadas como controle. Em todos os casos, MMP-3 e, mais expressivamente, MMP-7 apresentaram marcação dentro dos acúmulos mucóides. Em contrapartida, a marcação para plasmina/plasminogênio situou-se ao redor deles. Fora dessas áreas, a MMP-3 mostrou distribuição intra e extracelular, a MMP-7 apresentou marcação intra e extracelular predominante na segunda metade da túnica média, e plasmina/plasminogênio teve co-localização com células musculares lisas. Considerando que matrilisina e estromelisina atuam sobre os proteoglicanos e sobre outros componentes da matriz extracelular, estas enzimas poderiam estar envolvidas diretamente na gênese dos aneurismas e dissecções da aorta ascendente, com possível modulação por plasminogênio/plasmina / In dissections and non-inflammatory aneurysms of the ascending aorta there is an increase in mucoid (proteoglycan) deposition. We analyzed by immunoperoxidase the distribution of stromelysin (MMP-7), matrilysin (MMP-3) and plasminogen/plasmin, enzymes that act on proteoglycans, in sections of human aortas with these diseases and in controls. In cases with any of these diseases MMP-7 and MMP-3 were accumulated in the areas of mucoid degeneration, and plasmin around them. Such enzymes could thus be involved in these diseases. We also evaluated by morphometry the amount of collagen in the two halves of the aortic media.

El virus de la laringotraqueitis infecciosa (VLTI) es responsable de una importante enfermedad respiratoria en aves. La glicoproteína G (gpG) es un factor de virulencia en el VLTI, identificada como una proteína viral de unión a quimioquinas (CKBP) capaz de unirse a quimioquinas de aves y de otras especies modulando su actividad. Esto hace de la gpG una proteína de interés científico y comercial, requiriéndose, por lo tanto, tener suficiente cantidad de proteína disponible para futuros estudios funcionales y estructurales. Se describe un método para la producción de gpG recombinante del VLTI en un biorreactor de tanque agitado, infectando la línea celular de Spodoptera frugiperda Sf-9 con el baculovirus BV-gpG. Para este fin, fue necesario una caracterización previa del crecimiento de las células Sf-9; a su vez, optimizar la producción de gpG a pequeña escala y finalmente, definir parámetros operacionales en el biorreactor Biostat B plus que aseguren un ambiente hidrodinámico adecuado para el crecimiento e infección de las células. Las células Sf-9 mostraron una velocidad específica máxima de crecimiento (µmax) de 0,026/h, un tiempo de doblaje poblacional (TDP) de 27 horas y una densidad celular máxima de 8,7x106 cel/mL. A pequeña escala, la producción de gpG fue mayor al cosechar las células a las 72 horas post infección (hpi) independientemente de la multiplicidad de infección (MOI) empleada en el rango de 1,2 a 20. Una mayor producción de gpG fue obtenida al infectar las células durante la fase de crecimiento exponencial temprana comparada a la fase de crecimiento exponencial tardía. La densidad óptima de infección varió en dependencia del empleo de medio condicionado (2x106 cel/mL) o de medio fresco (7x106 cel/mL). En el manejo del biorreactor, se observó que el empleo de una velocidad de agitación de 170 rpm, una tasa de aireación de 0.04 vvm y un valor de pO2 de 40%, mostraron que las células Sf-9 no fueron sensibles a un estrés de corte de 0.38 N/m2 a un valor de número de Reynolds alto (20x104) en condiciones de aireación por sparger. Una eficiente producción de gpG en 3,5 L de biorreactor fue lograda infectando el cultivo en fase de crecimiento exponencial, a una densidad de 2x106 cel/mL, un MOI de 2 y cosechado a las 72 hpi. Mediante un ELISA sandwich se logró cuantificar el rendimiento volumétrico de gpG his, el cual fue de 3.66 mg/L, lo que representa un aumento de 2 fold comparado a la producción en el matraz. Los resultados demuestran la factibilidad de producir glicoproteína G en células de insecto infectadas con un baculovirus a escala de biorreactor. / Tesis

Submitted by Ana Lúcia Torres (bfmhuap@gmail.com) on 2017-09-20T15:54:57Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) JORGE HENRIQUETESE COM CORREÇÕES DA BANCA JAN 2017.pdf: 4201838 bytes, checksum: f47ae0fb55a2d648c74ac2facf85217d (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Lúcia Torres (bfmhuap@gmail.com) on 2017-09-20T15:55:06Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) JORGE HENRIQUETESE COM CORREÇÕES DA BANCA JAN 2017.pdf: 4201838 bytes, checksum: f47ae0fb55a2d648c74ac2facf85217d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-20T15:55:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) JORGE HENRIQUETESE COM CORREÇÕES DA BANCA JAN 2017.pdf: 4201838 bytes, checksum: f47ae0fb55a2d648c74ac2facf85217d (MD5) Previous issue date: 2016 / Universidade Federal Fluminense. Centro de Ciências Médicas. Instituto Biomédico. Departamento de Morfologia. Anatomia Humana / A uretra masculina humana possui uma macro estrutura uniforme. Apesar disso apresenta evidências clínicas, morfológicas e moleculares ao longo de seus segmentos, que indicam haver diferenças estruturais e patológicas entre os mesmos. A maioria das alterações da uretra prostática (UP), em homens acima dos 50 anos, são consideradas como sendo secundárias à compressão devido ao crescimento de nódulos fibromatosos hiperplásicos do tecido prostático. Os sinais obstrutivos consequentes a Hiperplasia Prostática Benigna (HPB) incluem hesitação para iniciar a micção, redução da força e calibre do jato urinário, bem como, tardiamente, retenção urinária. Para tentar explicar as alterações que ocorreram na estrutura histológica da UP, no processo da HPB, estudamos as variações qualitativas e quantitativas que ocorreram na densidade volumétrica (Vv) do componente fibroso da matriz extracelular (MEC) e do músculo liso da UP de pacientes com HPB submetidos a tratamento cirúrgico. Foram estudadas amostras obtidas da UP de 10 pacientes com HPB sintomática, submetidos à prostatectomia aberta. Os pacientes não tinham história de tratamento prévio, para HPB. A idade dos pacientes selecionados para o presente estudo variou entre 63 a 79 anos. Para fins de comparação, foram usadas amostras controle obtidas durante a necropsia de 10 indivíduos adultos jovens com idades variando de 18 a 25 anos, vítimas de morte violenta sem comprometimento do sistema urogenital e/ou manipulação uretral. Todas as Próstatas do grupo controle apresentavam peso entre 20-25g, sendo consideradas adultas e dentro dos limites da normalidade. As amostras foram fixadas em solução de formol 10% e processadas para inclusão em parafina. Para análise da Vv, foram usadas as técnicas de coloração de tricrômico de Masson e, de Weigert. Também foram submetidas a análise imunohistoquímica. A Vv do componente fibroso da MEC e do músculo liso foi determinada pela análise de 25 campos aleatórios de cada fragmento de UP usando um sistema teste M-42. Os dados quantitativos foram analisados por meio do teste de Kolmogorov-Smirnov e Mann-Whitney. A Vv (%médio±SD) nos grupos controle e HPB foram respectivamente: 20,3±0,3 e 17,12±1,1 para as fibras do sistema elástico (p <0,007); 29,7 ± 1,9 e 25,1 ± 2,4 para colágeno (p <0,03). A Vv do músculo liso apresentou aumento, não significativo, no grupo HPB, 49,9 ± 0,4 e 52,3 ± 2,3. Por outro lado, 21,9±1,5 e 29,1±1,2 para a fibronectina (P < 0. 0001). / The human male urethra has a uniform structure. Despite this, presents morphological, molecular and clinical evidence throughout their segments that indicates pathological and structural differences between them. Most of changes in prostatic urethra (PU) in men over 50 years, are considered to be secondary to compression due to the growth of fibrous hyperplastic prostate tissue nodules. The signs of obstructive Benign Prostatic Hyperplasia (BPH) reflect the decreased distendibility of the prostatic urethra; that includes hesitation to begin urination, reduced force and caliber of the urinary stream, as well as (late) retention. To explain the histological, structural changes that occurred in the prostatic urethra, studies were made to analyse the changes in quality and quantity that occurred in the volumetric density of the fibrous component of the extracellular matrix (ECM) and smooth muscle of the urethra of patients with BPH submitted to surgical treatment. Samples were obtained from the urethra of 10 patients with symptomatic BPH who had undergone open prostatectomy. No patient had a history of previous treatment for BPH. The age ranged from 63-79 years. To compare we used control samples obtained during autopsy of 10 young adults subjects aged 18-25 that died from violent death without involvement of the urogenital system or uretral manipulation. The samples were fixed in formalin 10% and processed for paraffin embedding. For analysis of Vv, were used staining techniques tricomic Masson and Weigert. Were also submitted to immunohistochemical analysis. The Vv fibrous component of MEC and smooth muscle was determined by the analysis of 25 random fields of each fragment of a test system using M-42. Quantitative data were analyzed using the olmogorov-Smirnov and Mann-Whitney test. The Vv (mean ± SD) in the control and BPH groups respectively were: 20.3±0.3 and 17.12±1.1 in the elastic fiber system (p<0.007); and 29.7±1.9 and 25.1±2.4 in the collagen compartment (p<0.03). Smooth muscle cell volume was increased in BPH cases, 49.9±0.4 and 52.3±2.3 (not statistically significant). On other hand was 21.9±1.5 and 29.1±1.2 in the fibronectin (P < 0. 0001).

Submitted by Ana Lúcia Torres (bfmhuap@gmail.com) on 2017-09-25T19:01:03Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Caracterização histomorfométrica e esteriológica das fibras ... (dissertação - Filipe Moreira de Andrade).pdf: 755223 bytes, checksum: fd1e41efdcbec772c4c1b66378c0acbf (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Lúcia Torres (bfmhuap@gmail.com) on 2017-09-25T19:01:21Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Caracterização histomorfométrica e esteriológica das fibras ... (dissertação - Filipe Moreira de Andrade).pdf: 755223 bytes, checksum: fd1e41efdcbec772c4c1b66378c0acbf (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-25T19:01:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Caracterização histomorfométrica e esteriológica das fibras ... (dissertação - Filipe Moreira de Andrade).pdf: 755223 bytes, checksum: fd1e41efdcbec772c4c1b66378c0acbf (MD5) Previous issue date: 2010 / Universidade Federal de Viçosa. Departamento de Medicina e Enfermagem / A matriz extracelular é elemento essencial à função peniana, podendo ser acometida por doenças locais ou sistêmicas, embora pouco seja conhecido em relação aos seus componentes na glande peniana humana. Nesse trabalho foi realizado um estudo detalhado da organização morfológica e densidade volumétrica (Vv) das fibras do sistema elástico em glandes penianas de homens jovens saudáveis. Foram obtidos fragmentos de glande peniana de 5 (cinco) indivíduos jovens falecidos de causas não relacionadas ao sistema urogenital, com idade entre 18 e 30 anos (média: 24 anos). Os espécimes foram fixados em formalina, embebidos em parafina e processados histologicamente. As fibras do sistema elástico foram avaliadas sob microscopia óptica usando a técnica de coloração da resorcina-fucsina de Weigert após prévia oxidação pela oxona. Estudos morfométricos foram realizados através do método de contagem de pontos. A análise quantitativa foi expressa (% média) como densidade volumétrica (Vv) através da análise em 25 campos aleatórios para cada espécime. Verificou-se que os constituintes do tecido conjuntivo, em especial fibras do sistema elástico, foram abundantes. Uma rede irregular de fibras do sistema elástico é distribuída sob a mucosa da glande peniana. As fibras do sistema elástico apresentaram uma disposição longitudinal no corpo esponjoso e um perfil tortuoso envolvendo sinúsóides da glande. A Vv das fibras do sistema elástico na glande peniana é de 29.4% ±3.1. Os dados devem prover informação a ser avaliada em relação a disfunções eréteis, doenças endócrinas e envelhecimento. Os resultados apresentados fornecem subsídios para posteriores investigações em relação à matriz extracelular por métodos de estereologia / The extracellular matrix is a key element in penile function and pathology, yet little is known of its components in human glans. Herein we carried out a detailed study of all the factors that play a part in the morphological organization and volumetric density (Vv) of elastic fibers in the glans penis of young healthy men. Penile glans were obtained from 5 young men died of causes no related to the urogenital tract, between the age of 18 and 30 (mean = 24). Samples were fixed in formaline, embedded in paraffin, and histologically processed. The elastic system fibers were evaluated at light microscopy by using Weigert’s resorcin-fuchsin technique after previous oxidation with oxone. Morphometric studies were performed by the point-counting method. Quantities were expressed (%mean) as volumetric densities (Vv) and were determined on 25 random fields for each individual. Connective tissue elements, mainly elastic system fibers, were abundant. These fibers often had a tortuous profile and surrounded sinusoids in the glans penis. An irregular elastic fibers network was distributed beneath the glans penis mucosa, on the other hand, underneath the mucosa, the elastic fibers were observed longitudinal at corpus spongiosum. The Vv of the elastic system fibers in the glans penis is 29.4% ±3.1. The data should therefore provide important information for drawing parallels over patients with erectile dysfunction and alterations regarding endocrine diseases and aging. The results reported herein provide the base for continuous investigations on extracellular matrix by stereology

Cepas de Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) estão entre os patógenos mais freqüentemente envolvidos em casos de diarréia. Este patotipo é subdividido em EPEC típicas e atípicas, sendo que as típicas possuem o gene eae (EPEC attaching and effacing) e o plasmídeo EAF (EPEC adherence fator), e as atípicas albergam somente o gene eae. A principal característica de sua patogênese é a formação de uma lesão histopatológica no epitélio intestinal denominada attaching and effacing (A/E), que resulta da adesão íntima da bactéria ao enterócito. A adesão é uma etapa crítica na patogênese bacteriana, sendo o primeiro pré-requisito para que as E. coli colonizem com sucesso a mucosa do hospedeiro. A ligação da bactéria a um ou mais componentes teciduais da matriz extracelular como colágeno I e IV, laminina, fibronectinas celular e plasmática são indícios de que essas moléculas estão sendo usadas como substrato de adesão e colonização do hospedeiro pela bactéria patogênica. Adesinas com capacidade de interagir com componentes da matriz extracelular já foram identificadas em bactérias patogênicas, no entanto, ainda não foi caracterizada nenhuma proteína de EPEC atípica com essa capacidade de adesão. Essa propriedade foi evidenciada em um isolado de EPEC atípica durante pesquisas em nosso laboratório e neste trabalho visamos identificar e caracterizar a(s) proteína(s) envolvida(s) nesta habilidade adesiva. As proteínas possivelmente envolvidas apresentam massas moleculares relativas de 107, 44 e 35 kDa e a pré-incubação do isolado 2103 com componentes de matriz extracelular provoca uma variação no seu padrão de adesão e influencia o número de bactérias aderidas a células epiteliais. No entanto, como esse patotipo é muito heterogêneo essa característica não pode ser extrapolada para todos os isolados dessa categoria. / Atypical Enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) has been a leading cause of childhood diarrhea in developing countries. The main mechanism of atypical EPEC pathogenesis is a lesion called attaching and effacing (A/E), which is characterized by intimate adherence of the bacteria to the intestinal epithelium and destruction of microvillus. Nevertheless, it represents a heterogeneous group and other virulence factors may be involved in atypical EPEC pathogenesis. Previously, we have identified one isolate of atypical EPEC, serotype O26:H11, which secretes proteins that interact with ECM macromolecules. The interactions between pathogenic bacteria and ECM molecules such as fibronectin, laminin and collagen may play an important role in the bacterium adherence to and invasion of host cells. Adhesion is critical for successful E. coli colonization of gastrointestinal tract and is mediated by adhesins. The aim of this study is to identify and characterize putative adhesins that may contribute to the binding of the isolate of atypical EPEC to extracellular matrix components. The supernatant of the atypical EPEC isolate was submitted to a solid phase binding assay with matrigel (a mouse basement membrane composed mainly of laminin, collagen IV and fibronectin), the adhered proteins were stripped from the wells, separated by SDS-PAGE, transferred to nitrocellulose membranes and submitted to immunoblotting assay. Three major proteins of apparent molecular weights of 107, 44 e 35 kDa were recognized by the anti-proteins polyclonal serum (produced in rabbit immunized with the isolate\'s supernatant) through immunoblotting assay. Besides, we observed that in the presence of ECM components the isolate clearly changes its adherence pattern of the isolate to HEp-2 cells, and the number of adhered bacteria to epithelial cells. The atypical EPEC do not share a unique pattern of virulence, suggesting that many virulence factors may contribute to the pathogenesis. The identification of proteins involved in the adhesion with extracellular matrix components in one isolate of this category of diarrheagenic E. coli confirms the heterogeneity among the atypical EPEC.

Cepas de Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) estão entre os patógenos mais freqüentemente envolvidos em casos de diarréia. Este patotipo é subdividido em EPEC típicas e atípicas, sendo que as típicas possuem o gene eae (EPEC attaching and effacing) e o plasmídeo EAF (EPEC adherence fator), e as atípicas albergam somente o gene eae. A principal característica de sua patogênese é a formação de uma lesão histopatológica no epitélio intestinal denominada attaching and effacing (A/E), que resulta da adesão íntima da bactéria ao enterócito. A adesão é uma etapa crítica na patogênese bacteriana, sendo o primeiro pré-requisito para que as E. coli colonizem com sucesso a mucosa do hospedeiro. A ligação da bactéria a um ou mais componentes teciduais da matriz extracelular como colágeno I e IV, laminina, fibronectinas celular e plasmática são indícios de que essas moléculas estão sendo usadas como substrato de adesão e colonização do hospedeiro pela bactéria patogênica. Adesinas com capacidade de interagir com componentes da matriz extracelular já foram identificadas em bactérias patogênicas, no entanto, ainda não foi caracterizada nenhuma proteína de EPEC atípica com essa capacidade de adesão. Essa propriedade foi evidenciada em um isolado de EPEC atípica durante pesquisas em nosso laboratório e neste trabalho visamos identificar e caracterizar a(s) proteína(s) envolvida(s) nesta habilidade adesiva. As proteínas possivelmente envolvidas apresentam massas moleculares relativas de 107, 44 e 35 kDa e a pré-incubação do isolado 2103 com componentes de matriz extracelular provoca uma variação no seu padrão de adesão e influencia o número de bactérias aderidas a células epiteliais. No entanto, como esse patotipo é muito heterogêneo essa característica não pode ser extrapolada para todos os isolados dessa categoria. / Atypical Enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) has been a leading cause of childhood diarrhea in developing countries. The main mechanism of atypical EPEC pathogenesis is a lesion called attaching and effacing (A/E), which is characterized by intimate adherence of the bacteria to the intestinal epithelium and destruction of microvillus. Nevertheless, it represents a heterogeneous group and other virulence factors may be involved in atypical EPEC pathogenesis. Previously, we have identified one isolate of atypical EPEC, serotype O26:H11, which secretes proteins that interact with ECM macromolecules. The interactions between pathogenic bacteria and ECM molecules such as fibronectin, laminin and collagen may play an important role in the bacterium adherence to and invasion of host cells. Adhesion is critical for successful E. coli colonization of gastrointestinal tract and is mediated by adhesins. The aim of this study is to identify and characterize putative adhesins that may contribute to the binding of the isolate of atypical EPEC to extracellular matrix components. The supernatant of the atypical EPEC isolate was submitted to a solid phase binding assay with matrigel (a mouse basement membrane composed mainly of laminin, collagen IV and fibronectin), the adhered proteins were stripped from the wells, separated by SDS-PAGE, transferred to nitrocellulose membranes and submitted to immunoblotting assay. Three major proteins of apparent molecular weights of 107, 44 e 35 kDa were recognized by the anti-proteins polyclonal serum (produced in rabbit immunized with the isolate\'s supernatant) through immunoblotting assay. Besides, we observed that in the presence of ECM components the isolate clearly changes its adherence pattern of the isolate to HEp-2 cells, and the number of adhered bacteria to epithelial cells. The atypical EPEC do not share a unique pattern of virulence, suggesting that many virulence factors may contribute to the pathogenesis. The identification of proteins involved in the adhesion with extracellular matrix components in one isolate of this category of diarrheagenic E. coli confirms the heterogeneity among the atypical EPEC.