O óxido nítrico (NO) é um mensageiro químico gerado pela atividade da enzima óxido nítrico sintase (NOS) a qual foi detectada em vários órgãos incluído o sistema reprodutor. O sistema NOS/NO parece desempenhar papel importante na maturação oocitária entre outras funções. No entanto, apesar das evidências, há poucos estudos sobre o papel desse sistema em oócitos da espécie bovina. Sabe-se que o NO atua pela via da guanilato ciclase (GC) estimulando a produção do nucleotídeo GMPc, que por sua vez é capaz de influenciar os níveis de outro nucleotídeo, o AMPc, que é um importante elemento da via de sinalização das gonadotrofinas nos oócitos e no controle da maturação oocitária. O objetivo do presente estudo foi de investigar o envolvimento da via do GMPc na ação do sistema NOS/NO na maturação in vitro (MIV) de oócitos bovinos e seu efeito sobre a via do AMPc. Com a maior concentração estudada do doador de NO (10-7M de SNAP), apenas 36% dos oócitos conseguiram alcançar o estágio de RVG (P< 0,05), após 9 horas de maturação. Esse atraso também foi observado com diferentes concentrações do estimulador de GC (5, 10 ou 50&mu;M de Proptoporfirina IX) e pelo análogo de GMPc (1, 2 e 4mM de 8-Br-GMPc ), que apresentaram uma taxa média de RVG de 50% para os tratamentos e 70% para os grupos controles sem as drogas (P<0,05). No início da maturação (0h), os níveis de GMPc foram de 5,29 pmol/oócito sofrendo uma queda logo na primeira hora de cultivo para 2,97 pmol nos oócitos do grupo controle e 1,54 pmol nos cultivados com associação de 10-7M de SNAP (doador de NO) e 100&mu;M de OQD (inibidor de GC (P<0,05). No grupo de oócitos cultivados apenas com SNAP, os níveis de GMPc se mantiveram em 4,51 pmol/oócito, semelhante ao grupo imaturo (0h de cultivo, P>0,05). O doador de NO manteve estável o nível de GMPc somente na primeira hora de maturação. Após 3 e 6 h de MIV, os níveis de GMPc permaneceram baixos e similares (0,07 a 2,46 pmol/oócito, P>0,05) nos grupos controle (sem drogas), tratado com doador de NO (10-7M de SNAP) associado ou não ao inibidor de guanilato ciclase (100&mu;M de OQD). Também foi observada uma queda nos níveis de AMPc em relação ao grupo imaturo (32,42 fmol de AMPc/oócito) para os demais grupos (P<0,05), que apresentaram aproximadamente, 12,0 a 16,0 fmol de AMPc/oócito durante a primeira hora, 3,3 a 8,0 fmol/oócito durante a terceira hora e 7,4 a 18,3 durante a sexta hora de maturação (P>0,05). O NO afetou os níveis de GMPc no início da maturação, mas não os níveis de AMPc. O NO e o GMPc podem atuar no controle da expressão gênica de uma série de proteínas envolvidas no controles dos níveis de AMPc e GMPc ou suas funções. Esse controle pode ser efeito direto do NO (PKG2, PDE3A, PDE4D e PDE8A), do GMPc (ADCY6) ou do NO via GMPc (PKA1) e varia com o compartimento considerado (oócito ou células do cumulus). Esses resultados demonstraram a inter-relação das vias NO/GMPc/AMPc e toda a sua complexidade dependendo do tipo celular e da fase da maturação de oócitos bovinos. / The NOS/NO system seems to play an important role in oocyte maturation besides other functions. However, despite the evidence, there are few studies on the possible role of this system in bovine oocytes. It is known that NO acts via guanylate cyclase (GC) by stimulating the production of the nucleotide cGMP, which in turn can influence the levels of another nucleotide, cAMP, which is an important element of the signaling pathway of gonadotropins in oocytes and in the control of oocyte maturation. The aim of the present study was to investigate the involvement of the cGMP pathway in the action of the NOS/NO system on the in vitro maturation (IVM) of bovine oocytes and its effect on the cAMP pathway. The highest studied concentration of the NO donor (10-7M SNAP), only 36% of oocytes were able to undergo GVBD (P<0.05) after 9 hours of maturation. This delay was also observed with different concentrations of the GC stimulator (5, 10 or 50&mu;M Proptoporfirin IX) and the cGMP analogue (1, 2 and 4 mM 8-Br-cGMP), which had an average of 50% GVBD for treatment groups and 70% for control groups without drugs (P<0.05). At the beginning of maturation (0 h) cGMP levels were 5.29 pmol/oocyte and decreased within the first hour of culture to 2.97 pmol and 1.54 pmol in the control group and in oocytes cultured in 10-7M SNAP (NO donor) associated with 100&mu;M OQD (GC inhibitor; P<0.05). In the group of oocytes cultured only with SNAP, cGMP levels remained at 4.51 pmol/oocyte similar to the immature group (0 h culture, P> 0.05). The increase of NO maintained cGMP levels stable only during the first hours of maturation. After 3 and 6 h IVM, cGMP levels remained low and similar (0.01 to 2.5 pmol/ ocyte, P>0.05) in control (without drugs), treated with NO donor (SNAP 10-7M) with or without the guanylate cyclase inhibitor (100&mu;M OQD). A decrease in cAMP levels was also observed when compared with the immature group (32.42 fmol cAMP/oocyte) for the other groups (P <0.05), which showed 12.0 to 16.0 fmol cAMP/oocyte after the first hour, 3.3 to 8.0 fmol/oocyte after the third hour and 7.4 to 18.3 after the sixth hour of IVM (P>0.05). NO and cGMP may act to control gene expression in a series of proteins involved in control of the levels of cAMP and cGMP or their functions. The control may be a direct effect of NO (PKG2, PDE3, PDE4D and PDE8A), cGMP (ADCY6) or NO via cGMP (PKA1) and varies with the compartment considered (oocyte or cumulus cells). The results showed the interrelationship of the NO/cGMP/cAMP pathway and all its complexity depending on the cell type and the stage of maturation in bovine oocytes.

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da enxertia seriada e micropropagação no rejuvenescimento de matrizes adultas de Tectona grandis. A experimentação foi realizada nas empresas Floresteca S.A e Bioteca Ltda, Mato Grosso, utilizando três materiais genéticos diferente, sendo dois clones, com 35 anos idade e mudas de semente. Como técnica de macropropagação optou-se pela enxertia seriada com delineamento inteiramente aleatorizado com três tratamentos representados pelos materiais genéticos com sete repetições. Para micropropagação, utilizou-se meio MS modificado. O experimento in vitro foi dividido em etapas: resgate do meristema com delineamento inteiramente aleatorizado, com os tratamentos sendo três materiais genéticos com trinta repetições; estabelecimento da cultura com os tratamentos arranjados em fatorial 3x5 sendo três materiais genéticos com cinco concentrações de BAP, totalizando quinze tratamentos com cinco repetições; multiplicação/rejuvenescimento com delineamento inteiramente aleatorizado, com os tratamentos arranjados em fatorial 3x5 sendo três materiais genéticos com cinco subcultivos, totalizando quinze tratamentos com três repetições e enraizamento das microestacas. Para macroprogação, o parâmetro avaliado foi a percentagem de pega dos enxertos. Para micropropagação, na fase de resgate, avaliou-se o número de meristemas viáveis; na fase de estabelecimento da cultura, avaliou-se o tamanho, número de nós e número de folhas dos explantes; e na fase de multiplicação/rejuvenescimento, avaliou-se o desenvolvimento de brotos nos sucessivos subcultivos. Os enxertos das mudas obtidas por semente apresentaram brotação aos sete dias de enxertados comparados aos clones que iniciaram as brotações aos quinze dias de enxertados. A sobrevivência dos meristemas apicais introduzidos que não apresentaram oxidação ou contaminação foi superior a 84%. A concentração de 1,5 mg.L-1 de BAP foi a mais significativa na fase de estabelecimento da cultura. O número de brotação e o rejuvenescimento do material adulto aumentaram à medida que aumentou o número de subcultivos, bem como a percentagem de enraizamento. O estabelecimento de minijardim clonal de Tectona grandis é possível mediante uso de brotações rejuvenescidas in vitro. / The aim of this study was to evaluate the effect of serial grafting and micropropagation in rejuvenation of Tectona grandis. The experiments were carried out in Floresteca SA and Bioteca Ltda. companies, Mato Grosso, using two clones and seedlings. The clones were 35 years old and the seedlings were six months old. Serial grafting was chosen for macropropagation technique on a completely randomized statistical design, with three treatments corresponding to genetic material with seven replications. For micropropagation, solid modified MS medium was used. The in vitro experiment was divided into stages: meristem rescue on a completely randomized design with the treatments corresponding to three genetic material with seven replications; establishment in vitro culture on completely randomized design arranged in 3x5 factorial scheme, corresponding to three genetic material with five concentrations of BAP resulting in fifteen treatments with five replications; multiplication/rejuvenation on completely randomized design arranged in 3x5 factorial scheme, corresponding to three genetic material with five subcultures concentrations of resulting in fifteen treatments with three replications on a completely randomized 3x5 and microcuttings rooting. For macropropagation, the parameter evaluated was the percentage of grafting takes. For micropropagation, in the rescue phase, it was evaluated the number of viable meristems. In the establishment phase of culture, the parameters evaluated were the size, number of nodes and number of leaves of the explants; and in the phase of multiplication/rejuvenation it was evaluated the development of the shoots in successive subcultures. The shoots sprouting from seedlings grafts at seventh day compared with grafted clones that started sprouting on the fifteenth day after grafting. The survival of apical meristems without oxidation or contamination was above 84%. The concentration of BAP (1.5 mg.L-1) that was the most significant in the establishment phase of culture. The number of shoots produced and the rejuvenation process increases with increasing number of subcultures, as well as the percentage of rooting. The establishment of clonal minigarden of Tectona grandis coud be possible through rejuvenation of trees in vitro.

Este estudo demonstrou que oócitos bovinos são capazes de progredir normalmente a maturação nuclear até a fase de M II quando cultivados in vitro na presença ou ausência de células da granulosa, na presença ou ausência de soro de vaca nas diversas fases do ciclo estral e/ou SFB e na presença de BSA. A progesterona promoveu um retardo na retomada da meiose, mas não impediu que os oócitos atingissem M II, exceto na concentração de 2,5 µg/ml. Além de promover um retardo inicial na retomada da meiose, a testosterona também prejudicou a progressão da meiose até M II. O estradiol também promoveu este retardo inicial, mas isto foi revertido no final da cultura, onde se verificou que quanto maior a concentração de estradiol até a dose de 5,0 µg/ml, maior a porcentagem de oócitos que atingiram M II. Porém, não se observou diferença significativa da porcentagem de oócitos que atingiram M II após maturação no grupo controle (TCM199 com BSA) e nos grupos onde se adicionou estradiol ao meio, em concentrações crescentes. Verificou-se que as células da granulosa e/ou células do cumulus foram capazes de secretar progesterona e estradiol no meio de cultura, quando estimuladas pelo soro bovino, que lhes forneceu precursores (testosterona). As células do cumulus dos COCs cultivados foram capazes de secretar progesterona quando estimuladas por BSA, SFB e estradiol e foram capazes de secretar estradiol quando estimuladas por BSA, progesterona e testosterona. O trabalho demonstrou que a MIV de oócitos bovinos ocorre normalmente na ausência de soro bovino e na ausência de células foliculares e demonstrou que a adição de estradiol não afeta a maturação e é desnecessária, uma vez que as células do cumulus o produzem no meio durante as 24 horas de cultura. / This study has demonstrated that culture medium supplementation with cycling cow serum and/or FCS, granulosa cells or BSA did not affect meiosis progression from GV to M II stage of bovine oocytes matured in vitro. Progesterone impaired meiosis resumption, but it was reverted after 24 hours of culture, except in the concentration of 2,5 µg/ml. Testosterone impaired meiosis resumption and meiosis progression to M II. Estradiol impaired meiosis progression, but it was reverted at the end of the culture, when it was observed that the higher the estradiol concentration in the medium, the higher the number of oocytes reaching M II. However, when IVM of bovine oocytes matured in medium supplemented with only BSA was compared to IVM of bovine oocytes matured in medium supplemented with BSA plus estradiol, no statistical difference was found. Data showed that granulosa cells and/or cumulus cells were able to produce progesterone and estradiol in the culture medium, when stimulated by bovine serum. Cumulus cells were able to produce progesterone when stimulated by BSA, FCS and estradiol and were still able to produce estradiol when stimulated by BSA, progesterone and testosterone. This study has demonstrated that IVM of bovine oocytes can proceed normally in the absence of bovine serum and granulosa cells, and has additionally demonstrated that the medium supplementation with estradiol did not affect nuclear maturation and it is still not necessary, once cumulus cells are able to produce it during the 24 hours of culture.

As taxas de produção embrionária tanto da FIV (30-40%) como da TN (23%) ainda estão aquém do esperado. Desta forma, a pré-maturação com inibidores do ciclo celular é uma das alternativas que vem sendo estudada para aumentar a competência dos oócitos utilizados na PIV, na tentativa de otimizar o sucesso das biotécnicas. Sabe-se que neurotrofinas desempenham funções no sistema reprodutor. O BDNF é um exemplo de neurotrofina que parece estar relacionada com a maturação dos oócitos. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi de aperfeiçoar a pré-maturação e a maturação in vitro de oócitos bovinos submetidos posteriormente à ativação partenogenética, visando seu uso na biotécnica de transferência de núcleo. Oócitos bovinos foram submetidos à maturação na presença (MIV/BD) ou ausência (MIV) de BDNF ou pré-maturados com BLI e suplementados (BL/BD) ou não (BL) com a neurotrofina. Posteriormente foram avaliados quanto à taxa de maturação (metáfase II), ativação (formação de prónúcleo) e desenvolvimento embrionário (produção e qualidade dos blastocistos). Não houve diferença (P>0,05) entre taxas de MII após a maturação com ou sem BDNF. Porém, o grupo pré-maturado e suplementado (BL/BD n=73; 91,2%) apresentou maior taxa de MII (P<0,05) em relação ao grupo não suplementado (BL n=66; 76,7%). Oócitos maturados nas mesmas condições foram ativados quimicamente para análise do desenvolvimento embrionário. Os grupos MIV/BD (n=30; 71,4%) e MIV (n=41; 91.1%) apresentaram diferença (P<0,05) em relação à taxa de ativação. Porém, não foi observada diferença quanto aos outros parâmetros do desenvolvimento. Quando os oócitos foram pré-maturados a taxa de clivagem do grupo suplementado (BL/BD: n=227; 65,2%) foi superior (P<0,05) ao grupo não suplementado (BL: n=187; 57,7%), mas não foram observadas diferenças (P>0,05) para os outros parâmetros de desenvolvimento. A qualidade dos embriões ativados também não foi afetada pelos tratamentos. Os grupos submetidos à TN (MIV e BL/BD) apresentaram diferenças (P<0,05) para extrusão do 1°CP (n=639; 63,5% e n=693; 69,5%, respectivamente) e para taxa de fusão (n=345; 72,9% e n=397; 79,2%, respectivamente) não havendo diferença para nenhum outro parâmetro avaliado. A qualidade dos embriões clonados também foi avaliada e não foi observada diferença. Após a transferência dos embriões dos grupos MIV (n=28) e BL/BD (n=26) para as receptoras, os grupos foram capazes de produzir gestação avançadas (10,7 e 11,5%, respectivamente) de forma similar (P>0,05). Com base nestes resultados podemos concluir que a suplementação, tanto da maturação como a pré-maturação não causa prejuízo no posterior desenvolvimento embrionário. Ainda, embriões clonados produzidos a partir de oócitos bloqueados são capazes de estabelecer gestações avançadas em bovinos. / Embryo production rates obtained from both IVF (30-40%) and NT (23%) are still below the expected values. Therefore, oocyte pre-maturation using cell cycle inhibitors is one of the alternatives which has been studied to increase the competence of oocytes used for IVP, as an attempt to optimize the success rates of these biotechniques. Neurotrophins are known to play several roles in the reproductive system. BDNF is an example of a neurotrophin that seems to be related to oocyte maturation. Therefore, the objective of this study was to improve techniques of pre-maturation and maturation of bovine oocytes submitted to parthenogenetic activation, aiming for its use on cloning by nuclear transfer. Bovine oocytes were submitted to maturation either in presence (IVM/BD) or absence (IVM) of BDNF or pre-matured with BLI and supplemented (BL/BD) or not (BL) with the neurotrophin. Groups were evaluated for maturation rates (metaphase II), activation (pro-nucleus formation) and embryo development (blastocyst formation rate and quality). There was no difference (P>0.05) in MII rate after the maturation with or without BDNF. However, pre-maturation in the supplemented group (BL/BD, n=73; 91.2%) resulted in higher MII rate (P<0.05) when compared with the nonsupplemented group (BL, n=66; 76.7%). Oocytes which were matured under the same conditions were also activated chemically for embryonic development analysis. Activation rates were different (P<0.05) from IVM/BD groups (n=30; 71.4%) and IVM (n=41; 91.1%). However, no difference were observed for development parameters. When the oocytes were prematured, cleavage rates in the supplemented group were superior (P<0.05) than non supplemented group (BL/BD: n=227; 65.2%) and (BL: n=187; 57.7%), but no difference was observed for other developmental parameters. Embryo quality was also evaluated and no difference was observed between treatments. Groups submitted to NT (IVM and BL/BD) differed regarding (P<0.05) the 1stPB extrusion (n=639; 63.5% and n=693; 69.5%, respectively) and fusion rate (n=345; 72.9% and n=397; 79.2%, respectively), but did not present differences for other evaluated parameters. Embryo quality was evaluated again and no differences were observed. After the embryos were transferred to recipient cows, groups IVM (n=3; 10.7%) and BL/BD (n=3; 11.5%) were capable of producing advanced gestations at similar rates (P>0.05). Based on these results, it may be concluded that supplementation of both maturation and pre-maturation does not impair embryonic development. Additionally, cloned embryos produced from blocked oocytes are able to establish advanced gestation in cattle.

Apesar dos grandes avanços na produção in vitro (PIV) de embriões bovinos, a produção de blastocistos se mantém ainda aquém do observado in vivo, indicando que melhorais ainda são necessárias no processo de PIV. A competência para o desenvolvimento de oócitos tem sido relacionada, entre outros fatores, à interrupção do período de capacitação. Foi sugerido que o bloqueio meiótico poderia permitir ao oócito um tempo adicional para adquirir a competência. Embora ainda não se tenha melhorado o desenvolvimento embrionário com esse procedimento, o bloqueio meiótico com inibidores de cinases dependentes de ciclinas (CDK), como a butirolactona I (BLI), pode ser uma ferramenta útil na compreensão do desenvolvimento do oócito. O presente trabalho teve por objetivo averiguar o efeito da inibição de CDK com BLI, para bloquear temporariamente a retomada da meiose, sobre fatores que controlam o ciclo celular meiótico de oócitos bovinos. Oócitos bovinos obtidos de abatedouros foram bloqueados em vesícula germinativa (VG) in vitro com 10 µM de BLI por 24 h (BVG - bloqueado imaturo). Parte desses oócitos foi depois maturada in vitro por mais 24 h (BMII - bloqueado maturado). Como controles foram utilizados oócitos recém-aspirados dos folículos (VG - controle imaturo) ou maturados in vitro sem bloqueio meiótico prévio (MII - controle maturado). Os diferentes grupos de oócitos foram avaliados quanto a: 1) expressão de RNAm dos componentes do MPF (p34cdc2 e ciclina B1) e da MAPK; 2) expressão das proteínas do MPF (p34cdc2 e ciclina B1) e MAPK (p44 e p42); 3) atividade das proteínas MPF e MAPK durante a maturação in vitro de oócito submetidos ou não ao bloqueio da meiose pré-maturação e 4) a localização subcelular das proteínas p34cdc2, ciclina B1 e MAPK nos oócitos. Foi observado que: 1) a abundância relativa do RNAm de p34cdc2 e MAPK reduziu-se com a maturação, enquanto a ciclina B1 menteve-se estável; o bloqueio meiótico manteve o mesmo padrão de acordo com o estádio de maturação; 2) as proteínas de p34cdc2 e MAPK mantiveram-se estáveis durante a maturação, enquanto a ciclina B1 não foi detectada em oócitos imaturos e o foi nos maturados; o bloqueio meiótico também manteve a expressão das proteínas de acordo com o estádio de maturação; 3) as atividades de MPF e MAPK foram pouco afetadas pelo bloqueio meiótico; 4) as proteínas foram todas detectadas no citoplasma dos oócitos imaturos (bloqueados ou não) e maturados (bloqueados ou não), sendo apenas a p34cdc2 também localizada no núcleo de oócitos imaturos (bloqueados ou não). Diante dos resultados conclui-se que o bloqueio da meiose mantém o mesmo padrão de expressão, atividade e localização subcelular do MPF e da MAPK em oócitos imaturos e maturados, sugerindo que a tradução das mensagens, a ativação das cinases e a distribuição das proteínas foram controladas de acordo com o estádio da meiose, não sendo afetadas pelo bloqueio. / Although there have been great improvements in in vitro production (IVP) of bovine embryos, blastocyst production is still beyond that observed in vivo, indicating that more improvements are necessary in the IVP system. Developmental competence of oocytes has been related to, among other factors, the interruption in oocyte capacitation. Is has been suggested that meiosis block would allow the oocyte additional time to acquire competence. Although this procedure has not been successful in increasing embryo development, meiosis block with cyclin dependent kinase (CDK) inhibitors, such as butyrolactone I (BLI) can be a useful tool to study oocyte development. The present study aimed to assess the effects CDK inhibition with BLI, to temporarily block meiosis resumption, on factors involved in meiosis cell cycle control in bovine oocytes. Oocytes, obtained form slaughterhouse ovaries, were maintained in germinal vesicle (GV) arrest in vitro with 10 µM BLI for 24 h (BVG - blocked immature). A part of these oocytes was matured in vitro for another 24 h (BMII - blocked and matured). As controls, oocytes were also assessed soon after follicle aspiration (GV -immature control) or matured in vitro for 24 h without prior meiosis block (MII - matured control). The different groups of oocytes were assessed for: 1) mRNA expression for the MPF components (p34cdc2 and cyclin B1) and MAPK; 2) expression of MPF (p34cdc2 and cyclin B1) and MAPK (p44 and p42) proteins; 3) MPF and MAPK activities during maturation of oocytes submitted or not to prematuration meiosis block and 4) p34cdc2, cyclin B1 and MAPK subcellular localization within oocytes. During the study it was observed that: 1) relative abundance of p34cdc2 and MAPK mRNA was reduced after maturation, while cyclin B1 mRNA remained stable; meiosis block maintained the same pattern according to maturation stage; 2) p34cdc2 and MAPK proteins remained stable after maturation while cyclin B1 protein was undetected in immature oocytes and detected in the matured ones; meiosis block also maintained the same protein expression according to maturation stage; 3) MPF and MAPK activities were little affected by meiosis block and 4) all proteins were detected in the cytoplasm of immature (blocked or not) and matured (blocked or not) oocytes, and only showed a specific nuclear localizations in immature oocytes (blocked or not). According to the results it may be concluded that meiosis block maintained the same pattern of MPF and MAPK expression, activity and subcellular localization in immature and matured oocytes, suggesting that mRNA translation, kinase activation and protein distribution were controlled according to the maturation stage and were not affected by meiosis block.

O pH final (pHf) no músculo post mortem é amplamente utilizado como um indicador potencial de maciez e é um fator importante associado à qualidade de carne. O Brasil é líder mundial nas exportações de carne bovina, porém não são conhecidos os valores de pHf do músculo pós-abate e seu impacto na qualidade da carne de animais machos inteiros Bos taurus indicus. Baseado no exposto, objetivou-se com este trabalho identificar o atual \"status\" dos valores de pHf 24 h post mortem apresentados no frigorífico comercial, e a influência do pHf na proteólise muscular e parâmetros de qualidade como perda por gotejamento, cor e maciez de machos inteiros avaliados aos 0, 7, 14, 21 e 28 dias de maturação. Foi realizado um estudo preliminar, com 399 carcaças em abatedouro comercial, para conhecer a ocôrrencia pHf de animais machos inteiros abatidos no Brasil, podendo-se identificar três faixas de pHf: pHf 5,5 até 5,8 (baixo-normal); pHf 5,81 até 6,3 (intermediário); pHf > 6,3. Músculos Longissimus dorsi (n=12) foram porcionados em bifes, embalados a vácuo, classificados nos três diferentes grupos de pHf e maturados a 2°C por 0 (48h), 7, 14, 21 e 28 dias. Foram avaliadas características de perda por gotejamento, cor, força de cisalhamento, índice de fragmentação miofibrilar, colágeno total e solúvel, assim como proteólise miofibrilar. Carnes pertencentes ao grupo de pHf alto, apresentaram maior maciez (P<0,05) desde o início do experimento, quando comparado aos outros grupos do estudo. Bifes de pHf intermediário apresentaram os valores de força de cisalhamento mais elevados (P<0,05), o que indica um processo de maciez mais lento quando comparado com os outros grupos de pHf. Perdas por gotejamento, diminuem com o aumento nos valores de pHf (P< 0,05). Valores de L*, a*, b*, não apresentam diferenças entre os grupos de pH. O índice de fragmentação miofibrilar (MFI) foi maior em carne de pHf alto, seguido pelo grupo de pHf baixo-normal, e os menores valores pertenceram ao grupo de pHf intermediário (P<0,05) através do tempo de maturação. A degradação das proteínas como desmina e troponina-T foi maior e mais visível no pHf alto e baixo-normal desde as 48 h post mortem em comparação com o pHf intermediário, onde foram observadas as bandas de sua degradação quase ao final do período experimental. Proteínas chave como filamina e nebulina apresentaram maior degradação desde as 48 horas post mortem no pHf alto e mais lenta no pHf intermediário. Não foram observadas diferenças (P> 0,05) nos valores de colágeno total e solúvel nos diferentes grupos de pHf e nem através do tempo de maturação. Em geral, o grupo de pHf intermediário (5,8-6,3) apresentou maior inconsistência quanto às características de maciez e fragmentacão miofibrilar, consequência de uma proteólise tardia. / The ultimate pH (pHu) of the postmortem muscle is broadly use as a potential meat tenderness indicator and is an important factor related to meat quality. Brazil is the bovine meat exporter world leader; nevertheless the values of the postmortem pHu of the muscle and its impact on the meat quality of Bos indicus taurus bulls, are unknown. Therefore, the objective of this research was to establish the values of pHu after 48 hours postmortem and its impact over the meat quality through the characterization of the biochemical processes that occurs in the muscle Longissimus dorsi of Bos taurus indicus bulls. In order to know the actual pHu of the Brazilian bulls, a preliminary study were made, using 399 carcasses of a commercial slaughter house and resulting three levels of pHu: pHu 5,5 to 5,8 (low-normal); pHu 5,81 to 6,3 (intermediate); pHu > 6,3 (high). Twelve muscles Longissimus dorsi were cut into steaks, classified into the three groups of pHu, vacuum packed up and matured at 2°C for 0 (48h), 7, 14, 21 and 28 days. Drip loss, color, shear force, myofibril fragmentation index, total and soluble collagen and miofibrillar proteolysis were evaluated. The high pHu meat presented more tenderness from the beginning of the experiment (P<0,05) when compared with the other groups. The medium pHu steaks presented the highest shear force values (P<0,05), indicating a slower tenderization process in relation to the other pHu groups. The drip loss values diminished as the value of pHu rised (P< 0,05). The values of L*, a*, b* did not show significant differences within the groups of pHu. The highest miofibrillar fragmentation index (MFI) through the maturation time, was found in the high pHu meat, followed by the low pHu group and then by the intermediate pHu group (P<0,05). At 48 hours postmortem, degradation of proteins, like desmin and troponin-T, was higher and more evident in the high and low-normal pHu when compared to the intermediate pHu, where the bands and its degradation were only observed by the end of the experiment. Key proteins like filamin and nebulin, showed higher degradation rate from the 48 h postmortem in the high pHu group, and a slower degradation in the intermediate pHu group. No differences were observed through the pHu groups, nor through the maturation time (P<0,05), for total and soluble collagen values. Then, it is possible to say that the meat quality of Bos taurus indicus bulls, especially the tenderness, is related to the pHu, and can be affected by the proteolytic systems activity. In general, the tenderness and the MFI were more inconsistent in the medium pHu group (5,8-6,3) than in the two other pHu groups, as a consequence of a late proteolysis.

O eixo GH/IGF-I é um sistema de mediadores de crescimento, receptores e proteínas de ligação que controlam o crescimento somático e tecidual em muitas espécies e programas de exercícios estão relacionados a esta função anabólica por meio da ação deste eixo. Partindo deste pressuposto, o presente estudo tem como objetivo verificar o comportamento do eixo GH/IGF-I, da proteína de ligação do IGF e sua relação com a maturação ao longo de uma temporada competitiva de jogadores de futebol adolescentes e a sua relação com o desempenho dos atletas. 11 jogadores da categoria sub-15 do Botafogo Futebol Clube foram selecionados para o estudo. As concentrações de GH, IGF-I e IGFBP3 foram mensuradas por ensaios imunocolorimétricos específicos (Immulite) e as coletas ocorreram antes e após uma sessão de treino padrão (STP). A potência aeróbia e anaeróbia, velocidade, força rápida e agilidade foram avaliadas um dia antes da coleta de sangue através dos testes Léger, RAST, Velocidade de 30m, Salto Sêxtuplo e Teste T. A maturação foi controlada pelo Pico de Velocidade do Crescimento (PVC) uma ferramenta que apresenta a distância em anos que o indivíduo está de sua maturação. As coletas e testes ocorreram em 3 momentos (M1, M2 e M3) da competição. As concentrações hormonais foram analisadas pelo teste de Wilcoxon and Friedman e os resultados dos testes motores e PVC foram analisados por meio da ANOVA para medidas repetidas e post hoc de Bonferroni. Os níveis de IGF-I (ng/mL) apresentam uma redução após o STP na fase final da competição (461±95 vs. 429±87; p=0,04). Já a fase anabólica evidencia-se pelo aumento nos níveis de IGF-I após a STP no M2 (460±68 vs. 519±115; p=0,05). A variação nas concentrações de IGF-I após a STP foi significativamente maior no M2 em relação ao M3 (59±95 vs. -32±49 ng/ml; p=0,04). O IGFBP-3 (ng/mL) apresentou concentrações mais elevadas tanto antes quanto após a STP no M2 quando comparado ao M3(4,9±1,0 vs. 4,6±1,0 mg/l; p=0.03) (5,5±1,7 vs. 4,5±0,8 mg/l; p=0.04). O GH (ng/mL) não apresentou variação significante durante toda a competição. Os valores de potência (Watt) foram maiores no M2. O teste post hoc de Bonferroni mostrou que a Pot_Med nos momentos M1 (409,1±87,3) e M2 (458±100) apresentam diferença significante (p=0,007). O mesmo aconteceu para Pot_Pico M1 (507,6±26,7) M2 (562,8±34,7) (p=0,031) e também para Pot_Mín M1 (305,5±28,9) M2 (376,75±25,01) (p=0,007). A velocidade (s) também atingiu seu valor mais alto no M2, o teste post hoc de Bonferroni mostrou que os valores M2 (4,47±0,17) são significativamente maiores do que no M1 (4,29±0,14) (p=0,03). A agilidade acompanhou os demais resultados M2 (8,91 ± 0,33) e M3 (9,25 ± 0,30) (p=0,004). O IGF-I apresentou-se sensível aguda e cronicamente aos efeitos dos estímulos da competição. O IGFBP-3 foi sensível aos efeitos crônicos e os resultados de potência e velocidade acompanharam o comportamento do IGF-I e IGFBP-3. Ambos peptídeos se mostraram sensíveis marcadores de estado de treinamento de jovens futebolistas. A maturação não influenciou no processo visto que os atletas já estavam maturados no M1. / The GH/IGF-I axe is a mediator system of growing, receptors and binding proteins that control somatic and tissue growth in many species and physical exercises programs are related to this anabolic function through this system. From this point to view, the objective of this study is to verify possible changes in the GH/IGFs axe, IGF binding protein during a competion season in young soccer players and the relation of these variables with athletic performance and maturation. 11 male athletes under-15 to Botafogo Futebol Clube was selected for this study. GH, IGF-I, IGFBP3 were measured by specific immunocolorimetric assays (Immulite) and collections occurred before and after a standard training session (STP). The aerobic and anaerobic power, velocity, fast force and agility were evaluated one day before the blood collection through the Léger, RAST, 30m Velocity, Six Jump and T-tests. The maturation was controlled by the Peak of Growth Velocity) a tool that presents the distance in years that the individual is of its maturation. The collections and tests occurred in 3 moments (M1, M2 and M3) of the competition. Hormone concentrations were analyzed by the Wilcoxon and Friedman test and the results of the motor and PVC tests were analyzed by ANOVA for repeated and post hoc Bonferroni measurements. IGF-I levels (ng / mL) showed a reduction after PTS in the final phase of competition (461 ± 95 vs. 429 ± 87; p = 0,04). The anabolic phase is evidenced by the increase in IGF-I levels after PTS in M2 (460 ± 68 vs. 519 ± 115, p = 0,05). The variation in IGF-I concentrations after STP was significantly higher in M2 compared to M3 (59 ± 95 vs. -32 ± 49 ng / ml; p = 0,04). IGFBP-3 (ng / mL) had higher concentrations both before and after PTS in M2 when compared to M3 (4,9 ± 1,0 vs. 4,6 ± 1,0 mg / l; p = 0,03) (5,5 ± 1,7 vs. 4,5 ± 0,8 mg / l, p = 0,04). GH (ng / mL) did not show significant variation during the whole competition. The power values (Watt) were higher in M2. The post hoc Bonferroni test showed that Pot_Med at moments M1 (409,1 ± 87,3) and M2 (458 ± 100) presented a significant difference (p = 0.007). The same occurred for Pot_Pico M1 (507,6 ± 26,7) M2 (562,8 ± 34,7) (p = 0.031) and also for Pot_Mín M1 (305,5 ± 28,9) M2 (376,75 ± 25,01) (p = 0,007). The velocity (s) also reached its highest value in M2, the Bonferroni post hoc test showed that M2 values (4,47 ± 0,17) are significantly higher than in M1 (4,29 ± 0,14) (p = 0,03). Agility followed the other M2 (8,91 ± 0,33) and M3 (9,25 ± 0,30) (p = 0,004) results. IGF-I was acutely and chronically sensitive to the effects of competition stimuli. IGFBP-3 was sensitive to chronic effects and the results of potency and speed followed the behavior of IGF-I and IGFBP-3. Both peptides proved to be sensitive markers of training for young footballers. The maturation did not influence the process since the athletes were already matured in M1.

Orientador: Edvaldo Aparecido Amaral da Silva / Banca: Marcelo de Almeida Silva / Banca: Fernando Augusto Henning / Banca: Maria Laene Moreira de Carvalho / Banca: Rogerio de Andrade Coimbra / Resumo: O vigor de sementes está associado a vários aspectos do desempenho de sementes, como velocidade e uniformidade de germinação e tolerância a condições adversas. Os eventos metabólicos ativados nas primeiras horas da embebição podem fornecer informações importantes para explicar as variações de comportamento entre sementes de diferentes níveis de vigor. O objetivo geral foi estudar o vigor de sementes de soja utilizando diferentes abordagens. As sementes de soja das cultivares BRS 133 e MG/BR 46 Conquista foram produzidas sob condições ideais e déficit hídrico (a partir de R5.5). No capítulo 1, as sementes foram submetidas a avaliação da qualidade fisiológica, análises bioquímicas, atividade biospeckle ao longo da embebição e estudos de expressão de genes relacionados ao vigor avaliados no eixo embrionário em 0, 6 e 10 horas de embebição. O capítulo 2 teve como objetivo estudar dois protocolos de hidrocondicionamento (imersão direta e entre papel) e avaliar os efeitos no desempenho fisiológico e na expressão gênica de sementes das sementes de soja produzidas no capítulo 1. No capítulo 1, o déficit hídrico durante a fase final de desenvolvimento e maturação de sementes não apenas reduz o vigor das sementes de soja produzidas, como também altera os níveis de atividade enzimática, de atividade biospeckle e de expressão gênica ao longo da embebição. Durante as primeiras horas de embebição, notam-se alterações significativas na expressão de genes relacionados a diversos processos, c... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Seed vigor is a multiple and complex trait associated with various aspects of seed performance, such as rate and uniformity of germination and tolerance to adverse conditions. The metabolic events activated in early imbibition may provide important information to explain behavior variations in seeds with different vigor levels. The objective was to study soybean seed vigor using different approaches. For this experiment, soybean seeds of cultivars BRS 133 and MG/BR 46 (Conquista) were produced under ideal conditions and under drought stress (from R5.5). In chapter 1, the seeds were submitted to physiological quality tests, biochemical analyzes, biospeckle activity during imbibition and expression of genes related to vigor evaluated in the embryonic axis at 0, 6 and 10 hours after imbibition. In chapter 2, the objective was to study two hydropriming protocols (soaking in water and between paper) and to evaluate the effects on the physiological performance and gene expression of soybean seeds produced in chapter 1. In chapter 1, the results indicated that the drought stress during seed development and maturation not only reduces the vigor of the soybean seeds produced, but also changes the levels of enzymatic activity, biospeckle activity and gene expression during imbibition. During early imbibition, there are significant changes in the gene expression of genes related to several processes, such as DNA repair, oxidative stress, respiratory activities, cell elongation and cell wall modification. In chapter 2, the hydropriming between paper provided higher percentage and speed of germination, and faster onset of the protrusion, especially in suboptimal temperatures. Gene expression analysis demonstrated that the primed seeds of both cultivars and production conditions showed higher expression of transcripts involved in cellular respiration and reserve mobilization, cell elongation, cell wall loosening ... / Doutor

Made available in DSpace on 2017-07-21T18:53:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Isis Mariane Fornazzari.pdf: 7383007 bytes, checksum: 0f13e5c6291f3a5129eaca712d947b12 (MD5) Previous issue date: 2011-06-10 / The palm tree Euterpe edulis is a kind of middle stratum of the forest Atlantic with high economic value as food. This study aimed to evaluate the ripeness stage the fruits this palm from five properties located in the municipal district of Antonina, in Paraná, Brazil,aiming to improve crops of these fruits. Physical characterizations were performed in whole fruits and physico-chemical pulp dehydrated. The methods used to characterize the phytochemicals compounds were the Folin-Ciocalteau methods for phenolic compounds, the pH differential method and FRAP for anthocyanins and the antioxidant activity in fruit pulp integrals. The characterization results physical diameters and indicated different weights for fruits collected in different clusters of the same plant. The maturation began in February only two of the sampling sites. The cycles ended at the end of May at four places and the fruits of one of the properties had not yet shown signs of ripeness. This diversity of characteristics can be related to the environmental aspects of each the area of collect, which somehow can be influence the biochemical changes in fruits. The antioxidant activity was highly variable over the 135 days of study because it may depend on several intrinsic and extrinsic factors that may be associated with biochemical changes resulting from the ripeness that allows an expense or an accumulation of these compounds in fruits. / A palmeira Euterpe edulis é uma espécie do estrato médio da floresta da Mata Atlântica, de alto valor econômico como alimento. Este trabalho teve por objetivo avaliar os estádios de maturação dos frutos desta palmeira, provenientes de cinco propriedades localizadas no município de Antonina, no litoral do Paraná. Foram realizadas caracterizações físicas nos frutos inteiros e caracterização físico-química na polpa desidratada. As metodologias utilizadas para a caracterização dos compostos fitoquimicos foram os métodos de Folin- Ciocalteau para compostos fenólicos, método diferencial de pH para antocianinas totais e FRAP para a atividade antioxidante, na polpa dos frutos integrais. Os resultados da caracterização física indicaram diâmetros e pesos diferentes para os frutos coletados nos diferentes cachos de uma mesma palmeira. A maturação iniciou no mês de fevereiro somente em dois dos locais de coleta. O ciclo finalizou no final do mês de maio em quatro dos locais sendo que os frutos de uma das propriedades não haviam ainda apresentado sinais de maturação. Esta diversidade nas características pode estar relacionada com os aspectos ambientais de cada local de coleta, que de alguma maneira influenciam nas transformações bioquímicas nos frutos. A capacidade antioxidante foi variável ao longo dos 135 dias do estudo uma vez que depende de vários fatores intrínsecos e extrínsecos, relacionados com as transformações bioquímicas decorrentes do amadurecimento, que permite um gasto ou acúmulo destes compostos nos frutos.

Submitted by Eunice Novais (enovais@uepg.br) on 2018-02-20T17:13:34Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Zielinski, A. A. F..pdf: 1279368 bytes, checksum: 9aeb8abdda7a1295b105c032fb907f32 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-20T17:13:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Zielinski, A. A. F..pdf: 1279368 bytes, checksum: 9aeb8abdda7a1295b105c032fb907f32 (MD5) Previous issue date: 2013-02-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A indústria de processamento de suco de frutas teve um desenvolvimento espantoso ao longo dos últimos 100 anos e invariavelmente enzimas participaram deste fenômeno, podendo ser utilizadas na maceração, na extração e na clarificação. O objetivo deste trabalho foi verificar o impacto da aplicação de preparações enzimáticas (Ultrazym AFP L, Pectinex Ultra Clear, Pectinex SMASH XXL, Panzym YieldMASH) comerciais para auxiliar a etapa de maceração visando aumentar a produção no processamento de suco de maçã sobre as características físico e químicas dos produtos. O suco, obtido por maceração com adição de enzimas na polpa, foi extraído por força centrífuga das cultivares Fuji Suprema e Lis Gala.Esse processamento associado ao uso de técnicas estatísticas multivariadas (PCA e HCA) permitiu verificar a ação das preparações enzimáticas nos parâmetros de físico e químicos avaliados (rendimento, viscosidade, pH, açúcares, ácido D-galacturônico, acidez total, turbidez, cor, perfil de compostos fenólicos, compostos fenólicos totais e capacidade antioxidante). O uso das técnicas estatísticas multivariadas permitiu explorar e classificar de maneira a concluir a semelhança ou a diferença entre os produtos obtidos com ou sem as preparações enzimáticas. As frutas processadas em estádio de pré-maturação da cultivar Lis Gala não apresentaram mudanças nos parâmetros físicos e químicos analisados. O uso da preparação Pectinex® SMASH XXL não ocasionou mudanças na maioria dos sucos em relação aos controles (sem enzimas). As outras preparações testadas (Pectinex Ultra Clear, Ultrazym AFPL, Panzym YieldMASH) causaram alterações nesses parâmetros para todos os estádios de maturação da cultivar Fuji Suprema e para os estádios maduro e senescente da cultivar Lis Gala. O interesse nos compostos fenólicos está vinculado à sua capacidade antioxidante, a qual contribui para a proteção dos efeitos prejudiciais do estresse oxidativo na saúde humana. De acordo com o PCA e HCA, as quatro preparações enzimáticas utilizadas foram efetivas nos estádios verde e maduro da cultivar Lis Gala para aumentar a extração dos compostos fenólicos e a capacidade antioxidante (FRAP). Para a Fuji Suprema todas as enzimas foram efetivas no estádio de pré-maturação, enquanto para o estádio maduro apenas Pectinex Ultra Clear e Panzym YieldMASH foram capazes de aumentar a concentração de fenólicos e atividade antioxidante. No estádio senescente dos frutos não foi observada alteração com a aplicação das preparações enzimáticas, devido ao fato da presença das enzimas endógenas, que podem minimizar ou inibir a ação da preparação adicionada. Com os resultados encontrados destaca-se a importância de se conhecer o estádio de maturação e a cultivar selecionada no processamento de suco para a seleção adequada da preparação enzimática, visando atender a eficiência do processo e as características do produto final. / Industrial processing of fruit juices had an amazing development over the past 100 years and invariably enzymes participated in this phenomenon, they can be used in the maceration, extraction and clarification. The aim of this study was to verify the impact of the application of commercial enzymatic preparations (Ultrazym AFP L, Pectinex Ultra Clear, Pectinex SMASH XXL, Panzym YieldMASH) in the apple juice processing on the physical and chemical characteristics of the products. The juice obtained by enzymatic maceration of the pulp and extracted by centrifuge force associate to the use of multivariate statistical techniques (PCA and HCA) showed the action of the enzymatic preparations in the parameters evaluate (yield, viscosity, pH, sugars, D-galacturonic acid, total acidity, color, individual phenolic compounds, total phenolic compounds and antioxidant capacity). The use of multivariate statistical techniques allowed exploring and classifying of way to conclude that the juices obtained with or without the enzymatic preparations showed similarity or difference between them. The fruits processed in unripe stage of Lis Gala variety did not showed changes in physical and chemicals parameters evaluated. As well as, the use of Pectinex SMASH XXL did not cause changes in most juices in relation to controls (without enzymes). The other tested preparations (Pectinex Ultra Clear, Ultrazym AFPL, Panzym YieldMASH) caused changes in these parameters for all ripening stages of Fuji Suprema variety and ripe and senescent stages of Lis Gala variety. Currently the interest in phenolic compounds is attached in theirs antioxidant capacity, which contributes to the protection from the harmful effects of oxidative stress on human health. According to the PCA and HCA the four enzymatic preparations used were effective in the unripe and ripe stage for Lis Gala variety to increase the phenolic compounds and the antioxidant capacity (FRAP). For Fuji Suprema all enzymes were effective at the unripe stage, while for ripe stage only Pectinex Ultra Clear and Panzym YieldMASH were able to increase the phenolic and antioxidant properties. In senescent stage of fruits were not observed change with the application of the enzymatic preparations, due to the fact of presence of endogenous enzymes that may minimize or inhibit the action of preparation added. Based on the results found, highlights that it is necessary to know the ripening stage and the variety selected in the juice processing to proper selection of the enzymatic preparation to attend the efficiency of process and the characteristics of the final product