Submitted by Angela Maria de Oliveira (amolivei@uepg.br) on 2019-03-13T20:32:40Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Leticia Reis.pdf: 1857887 bytes, checksum: c5958c1e2ba4b807200b9f42a266b1d9 (MD5) / Made available in DSpace on 2019-03-13T20:32:40Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Leticia Reis.pdf: 1857887 bytes, checksum: c5958c1e2ba4b807200b9f42a266b1d9 (MD5) Previous issue date: 2018-10-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Em virtude da respiração e, produção e resposta ao etileno, os frutos carnosos foram classificados em climatéricos e não-climatéricos. De maneira genérica, os frutos climatéricos são aqueles cujo amadurecimento ocorre concomitantemente a um pico na respiração e aumento na produção de etileno; são extremamente responsivos ao etileno exógeno; e são conhecidos por serem capazes de completar a maturação mesmo destacados da planta mãe, já que o ponto de maturação fisiológica antecede o ponto de colheita. Já os frutos não-climatéricos, não apresentam pico respiratório e de produção de etileno durante a maturação; não respondem ao etileno exógeno na maioria dos casos; e não são capazes de amadurecer destacados da planta mãe, já que o ponto de maturação fisiológica coincide com o ponto de colheita. Estudos realizados principalmente em tomate, modelo climatério de fruto de polpa, geraram informações importantes sobre a produção, percepção e transdução de sinal do etileno, bem como, sua influência na mudança de cor, sabor, textura e aroma dos frutos, o que possibilitou o desenvolvimento de tecnologias de produção, colheita e pós-colheita mais eficientes. Todavia, no amadurecimento de frutos não-climatéricos, embora muitos trabalhos estejam sendo realizados, ainda existem muitas questões a serem elucidadas. Dentre os frutos nãoclimatéricos, o morango (Fragaria ananassa L Dutch) é o sistema mais estudado para o entendimento do papel do etileno na regulação da maturação, incluindo vários genes relacionados com a maturação já caracterizados. Recentemente, o melão (Cucumis melo L.), vem surgindo como uma nova proposta de modelo de estudos devido a presença de variedades climatéricas e não-climatéricas, possibilitando a comparação entre frutos modelo da mesma espécie. Assim, no presente estudo, frutos de morango var ‘Albion’ ligado à planta mãe em quatro estágios de desenvolvimento (verde, branco, rosa e vermelho) foram imersos em três diferentes tratamentos (Ethephon - composto gerador de etileno, 1-MCP - inibidor de percepção de etileno, ou água - contendo solventes e diluentes), mais um controle absoluto que não recebeu tratamento. Na maturação, todos os frutos foram colhidos e avaliados para mostrar o efeito do etileno em importantes atributos físico-químicos e compostos de qualidade não voláteis. Observou-se que o tratamento com ethefon afetou a dimensão dos frutos, a firmeza, o teor de antocianinas e o teor de alguns aminoácidos. O tratamento com 1-MCP em qualquer fase de desenvolvimento não teve efeito em nenhuma das variáveis medidas. Um segundo estudo foi conduzido com melão não-climatérico (Cucumis melo var. Amarelo) para caracterizar a expressão de importantes genes do metabolismo do açúcar durante quatro estágios de desenvolvimento do fruto (verde pequeno, verde grande, mudança de cor e totalmente maduro), pois pouco se sabe sobre o metabolismo do açúcar do melão não-climatérico e também devido à suposta ligação entre o metabolismo do açúcar e a vida de prateleira desses frutos. Os genes-alvo foram escolhidos usando informações prévias de um sequenciamento RNAseq do melão Amarelo. Os genes que codificam enzimas que consomem açúcar para fornecimento de energia foram mais expressos no início do desenvolvimento, principalmente no estágio de desenvolvimento verde grande, enquanto os genes que codificam enzimas que sintetizam açúcar e / ou direcionam esse açúcar para armazenamento foram mais expressos geralmente no estágio de mudança de cor e mantendo alta expressão em frutos maduros. Ambos estudos fornecem informações importantes sobre o amadurecimento de frutos não climatéricos que podem ser usados para melhorar as tecnologias de manejo, colheita e pós-colheita no futuro. / Based on respiration, ethylene production and ethylene response, fleshy fruit are classified as climacteric or non-climacteric. Generically, climacteric fruit are those whose maturation occurs concomitantly to a peak in respiration and increase in ethylene production; are extremely responsive to exogenous ethylene; and are able to complete ripening detached from the mother plant if physiological maturation occurs prior to harvest. On the other hand, non-climacteric fruit are classified as having no respiratory peak nor rise in ethylene production during maturation; do not respond to exogenous ethylene in most cases; and are unable to ripen detached from the mother plant, since physiological ripeness must coincide with the time of harvest. Studies conducted mainly on tomatoes, a model climacteric fruit, generated important information on ethylene production, perception, and signal transduction, as well as their influence on change of color, flavor, texture and aroma, which allowed the development of more efficient production, harvesting and post-harvest technologies. However, in the maturation of non-climacteric fruits, although much research has been conducted, there are still many questions to be elucidated. Among the non-climacteric fruits, strawberry (Fragaria ananassa L. Dutch) is the most studied system for understanding the role of ethylene in ripening regulation with several genes related to ripening already characterized. Recently, the melon fruit (Cucumis melo L.), is emerging as a new model to study fruit ripening due to the presence of climatic and non-climatic cultivars, allowing the comparison of results among model fruit of the same species. Therefore, in the present study ‘Albion’ strawberry fruit on the plant at four developmental stages (Green, White, Pink and Red) were immersed in three different treatments (Ethephon – an ethylene-generating compound, 1-MCP - an ethylene perception inhibitor, or Water - containing solvents and diluents), plus one absolute control that received no treatment. At ripeness all fruit were harvested and evaluated to show the effect of ethylene on important physical-chemical attributes and non-volatile quality compounds. Ethephon treatment was observed to affect fruit dimension, firmness, anthocyanins and amino acid content. Treatment with 1-MCP at any developmental stage had no effect on any of the variables measured. A second study was conducted with a non-climacteric melon fruit (Cucumis melo cv. ‘Yellow’) to characterize the expression of important sugar metabolism genes during four fruit development stages (small green, large green, color change and full ripe) to relate sugar metabolism of non-climacteric melon with possible linkage to sugar metabolism and shelf life of these fruits. The target genes were choosen using previous information from a RNAseq sequencing of ‘Yellow’ melon. Genes encoding enzymes that metabolise sugar for energy were observed to be more expressed early in development at the large green development stage, while genes encoding enzymes that synthesize sugar and/or direct this sugar to storage were observed to be expressed later in development, at the color change and full ripe stages. Both studies provided important information about non-climacteric fruit ripening that can be used to improve management, harvest and post-harvest technologies in the future.

Introdução - A avaliação do estado nutricional de adolescentes é usualmente realizada com base no índice de massa corporal (IMC) sem levar em consideração a maturação sexual. As alterações da composição corporal se expressam via modificações das características antropométricas, frações corporais e bioquímicas com impactos relevantes na análise do estado nutricional.A elevada variabilidade dessas características leva alguns autores a fundamentar de modo diverso a necessidade de ajuste prévio da maturação sexual para avaliação nutricional de adolescentes. Objetivo - Analisar os efeitos das relações entre maturação sexual e variáveis antropométricas, da composição corporal e dos parâmetros bioquímicos sobre o estado nutricional de adolescentes na faixa de 10 a 15 anos. Métodos- A amostra foi composta por 833 adolescentes escolares de 10 a 15 anos selecionados por amostragem complexa, residentes em Piracicaba (SP), 2012. Os fenótipos corporais foram inicialmente definidos por análise de componentes principais (ACP) a partir de dados antropométricos (massa corporal, altura, dobras cutâneas e circunferência da cintura), composição corporal (ângulo de fase), bioquímicos (triglicerídeos, glicose, razão colesterol total/LDL e hemoglobina), maturação sexual (auto-classificação segundo critério proposto por Tanner) e demográficos (sexo e idade). Esta primeira ACP apresentou caráter descritivo, para reconhecer a formação dos fenótipos corporais. Posteriormente, as variáveis de maturação sexual foram retiradas da ACP e aplicou-se novamente a ACP com as demais variáveis, os componentes gerados na ACP foram considerados desfechos na análise dos efeitos mistos para dimensionar o efeito da interferência da maturação sexual sobre os fenótipos corporais. No primeiro nível da análise utilizou-se sexo como ajuste. No segundo nível do modelo utilizou-se as variáveis de maturação sexual, e como ajuste idade, sexo e escore socioeconômico. Resultados Na primeira ACP foram definidos 4 fenótipos corporais: FC1 composto por dobras cutâneas, massa corporal e circunferência da cintura (expressão de gordura e volume corporal); FC2 composto por maturação sexual (pelos pubianos, mama e gônada), altura e idade (expressão do eixo cronológico); FC3 composto por colesterol e triglicerídeos (expressão de marcadores metabólicos associados à gordura corporal) e FC4 composto por ângulo de fase, hemoglobina e glicose (carga fatorial negativa) (expressão de marcadores metabólicos associados à massa magra). Na segunda ACP manteve-se a formação de 4 fenótipos corporais: FC1 apresentou a mesma formação, com a inclusão da hemoglobina com carga negativa; FC2 inclusão da massa corporal, ângulo de fase e hemoglobina; FC3 triglicerídeo, colesterol, hemoglobina e ângulo de fase e FC4 triglicerídeo, glicose e carga negativa para hemoglobina. O único fenótipo corporal que se associou à maturação sexual foi o FC2, também associado à altura e idade. Esse fenótipo expressa o crescimento físico e composição corporal típicos da puberdade. Com a análise dos efeitos mistos mostramos que a maturação sexual explica 78 por cento do FC2, enquanto para FC1 31 por cento FC3 0,59 por cento e FC4 1,06 por cento para pelos pubianos, para gônada e mama a maturação sexual explica 73 por cento do FC2, enquanto para FC1 2,45 por cento FC3 0,25 por cento e FC4 6,9 por cento . Conclusões - O uso dos fenótipos corporais indica a independência da avaliação nutricional na adolescência com relação à maturação sexual / Introduction - Analysis of nutritional status of adolescents is usually based on body mass index (BMI) without taking to account sexual maturation. Changes in body composition are expressed via modifications of anthropometric characteristics, body and biochemical fractions with relevant impact on the analysis of the nutritional status. The high variability of these features takes some authors to substantiate otherwise the need for prior adjustment of sexual maturation for nutritional assessment of adolescent. Objective - To analyze the effects of the relationships between sexual maturation and anthropometric variables, body composition and biochemical parameters about the nutritional status of adolescents from 10 to 15 years. Methods - The sample was composed by 833 school teenagers of 10 to 15 years selected by complex sampling, living in Piracicaba (SP), 2012. The body phenotypes were defined by principal component analysis (PCA) from anthropometric data (body mass, height, skinfolds and waist circumference), body composition (phase angle), biochemical (triglycerides, glucose, total cholesterol/LDL and hemoglobin), sexualmaturation (self-assessment criterion proposed by Tanner) and demographic (sex and age). This first ACP presented descriptive character, to recognize the formation of the corporal phenotypes. Subsequently, the sexual maturation variables were withdrawn from the ACP and re-applied to the ACP with the other variables, the components generated in the ACP were considered outcomes in the analysis of the mixed effects to measure the effect of the sexual maturation interference on the body phenotypes.In the first level of analysis we used the body phenotypes as outcome and sex as. In the second level of the model using the sexual maturation, and variables as age, sex and socioeconomic score. Results The first 4 body phenotypes were defined: FC1 composed by skinfolds, body weight and waist circumference (FAT expression and body volume); FC2 composed by sexual maturation (pubic hair, breast and gonad), height, and age (chronological axis expression); FC3 composed by cholesterol and triglycerides (expression of metabolic markers associated with body fat) and FC4 composed by phase angle, hemoglobin and glucose (factorial a negative load) (expression of metabolic markers associated with lean body mass). In the second PCA, the FC showed the same composition: FC1 presented the same formation, with the inclusion of hemoglobin with negative loading; FC2 inclusion of body mass, phase angle and hemoglobin; FC3 triglyceride, cholesterol, hemoglobin and phase angle and FC4 triglyceride, glucose and negative loading to hemoglobin. The only body which phenotype was associated to sexual maturation was the FC2, also associated with height and age. This phenotype is the physical growth and body composition typical of puberty. With the analysis of the mixed effects we show that sexual maturation explains 78 per cent of FC2, while for FC1 31 per cent 0.59 per cent FC3 and FC4 1.06 per cent to pubic hair, for gonad and sexual maturation breast explains 73 per cent of FC2, while for FC1 2.45 per cent 0.25 per cent and FC3 FC4 6.9 per cent . Conclusions The use of body phenotypes indicates the independence of nutritional assessment in adolescence in relation to sexual maturation

Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Resumo: As biotecnologias mais avançadas utilizam a produção in vitro (PIV) de embriões como suporte, a qual é dividida em três etapas igualmente importantes: maturação (MIV), fecundação (FIV) e cultivo in vitro (CIV). O objetivo deste trabalho foi avaliar a MIV de oócitos bovinos na presença de estimuladores da síntese de glutationa (GSH) e sua influência no número e na qualidade dos embriões CIV em dois sistemas de cultivo. O meio TCM-199 adicionado de bicarbonato de sódio (26mM), piruvato (0,25mM), sulfato de amicacina (75mg/mL), FSH (0,5mg/mL), hCG (100UI/mL) e estradiol 17b (1mg/ml) foi utilizado como meio base (TCM-199b) para os seis meios de maturação avaliados (Experimento I): controle do laboratório (S) (TCM-199b+10% SFB), controle BSA (B) (TCM-199b+0,5% BSA) e aditivos, cisteína (BC) (meio B+825mM de L-cisteína), cisteína-cisteamina (BCC) (meio BC+100mM de cisteamina), cisteína-cisteamina- mistura de insulina, transferrina e selênio (BCCI) (meio BCC+ITS 8:8:8) e cisteína-ITS (BCI) (meio BC+ITS). Para se verificar a maturação nuclear, pelo estádio da meiose, e a citoplasmática, pelos parâmetros da migração dos grânulos corticais (GCs) para a periferia da membrana citoplasmática (n=1084) e da concentração intracelular de GSH ([GSHi]) (n=1020) foram utilizados oócitos (n=2104) de abatedouro MIV por 24h em estufa úmida a 38,5oC e 5% de CO2 em ar. Após esta avaliação, oócitos (n=3403) foram maturados no meio S, BC ou BCC, FIV em meio TALP-FIV e CIV, por sete dias, em dois sistemas (SOFaa+2,5% de SFB+0,5% de BSA e atmosfera com 5% de CO2 em ar, aproximadamente 20% de O2, ou SOFaa+0,5% de BSA e atmosfera com 5% de CO2 e 5% de O2) para a avaliação das taxas de clivagem e produção de blastocisto (Bl) e, da qualidade proporcional do número de células da massa celular interna e do trofoblasto (MCI:TF), pela coloração diferencial, e do número de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Abstract: Advanced biotechnology uses in vitro production (IVP) embryos as support, that is performed in three stages of similar importance: in vitro maturation (IVM), fertilization (IVF) and culture (IVC). The main goal of this experiment was to assess the IVM of bovine oocytes in presence of glutathione (GSH) synthesis stimulates and its influence on quantify and quality of IVC embryos in two culture systems. TCM-199 medium plus sodium bicarbonate (26mM), piruvate (0.25mM), amicacine sulphate (75mg/mL), FSH (0.5mg/mL), hCG (100UI/mL) and estradiol 17b (1mg/ml) was used as basis medium (TCM-199b) to evaluate six maturation media (Experiment I): laboratory control (S) (TCM-199b+10% SFB), BSA control (B) (TCM-199b+0.5% BSA) and supplementation with cysteine (BC) (B medium+825mM of Lcysteine), cysteine-cysteamine (BCC) (BC medium+100mM of cysteamine), cysteinecysteamine- insuline, transferrin and selenium mix (BCCI) (BCC medium+ITS 8:8:8) and cysteine-ITS (BCI) (BC medium+ITS). Bovine oocytes (n=2104) obtained from slaughterhouse ovaries were used to verify nuclear maturation, by meiosis stage, and cytoplasmatic maturation, by migration of cortical granules (CG) to cytoplasmatic membrane periphery (n=1084) and by GSH intracellular concentration ([GSHi]) (n=1020), the IVM was during 24h in a humid incubator at 38.5°C and under 5% CO2 atmosphere. Next, oocytes (n=3404) were maturated in S, BC or BCC medium, IVF was in TALP-IVF medium and IVC was in two different systems (SOFaa+2.5% SFB+0.5% BSA and under 5% CO2 atmosphere, and approximate 20% O2, or SOFaa+0.5% BSA and under 5% CO2 and 5% O2 atmosphere) for a seven day period to evaluate cleavage and blastocyst (Bl) rates, inner cell mass and trophoblast ratio quality (ICM:TE), by differential staining, and apoptotic cell quantify, by TUNEL technique... (Complete abstract, click electronic address below). / Mestre

Resumo:O processo de desenvolvimento embrionário e placentário está sob controle epigenético intenso, com os diversos processos epigenéticos regulando a diferenciação de células pluripotentes em células especializadas. Um desenvolvimento placentário anormal é observado com frequência em gestações de clones, e está associado a uma alteração na reprogramação epigenética da célula doadora e do embrião formado. O objetivo deste trabalho foi avaliar a expressão dos genes "imprinted" TSSC4 e PHLDA2 em tecido cotiledonário e intercotiledonário, aos 60 dias de gestação, de placentas produzidas por Transferência Embrionária (TE), Fecundação In Vitro (FIV) e Transferência Nuclear (TN) em bovinos, e também investigar o controle epigenético desses genes na placenta bovina, avaliando o perfil epigenético dos mesmos em tecidos cotiledonários dos grupos experimentais (TE, FIV e TN). A expressão do gene TSSC4 foi reduzida em 30% na região cotiledonária do grupo produzido por TN, no entanto a expressão do gene PHLDA2 aumentou em aproximadamente onze vezes nos grupos TN e FIV, quando comparados ao grupo TE. Análises de ChIP para a histona H3 na região promotora proximal dos genes TSSC4 e PHLDA2 mostraram um aumento para a marcação permissiva H3K4me2 e uma redução para a inibitória H3K9me2 em cotilédones de placentas clonadas em relação às placentas produzidas por TE. Interessantemente, ambas as marcações de histonas para o gene TSSC4 também estavam significativamente alteradas também em placentas produzidas por FIV, quando comparadas ao grupo TE. Esses resultados mostram que a expressão dos genes "imprinted" TSSC4 e PHLDA2 está alterada em placentas de gestações produzidas por transferência nuclear. Ainda, alterações na expressão do gene PHLDA2 e das modificações de histona no gene TSSC4, nos cotilédones produzidos por FIV, indicam que o cultivoo...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract:The process of embryonic and placental development is under high epigenetic control, with different epigenetic processes regulating the differentiation of pluripotent cells into specialized cells. An abnormal placental development is observed frequently in pregnancies produced by nuclear transfer, and is associated with incomplete epigenetic reprogramming of the donor cell and formed embryo. The objective of this study was to evaluate the expression of the imprinted genes TSSC4 e PHLDA2 in cotiledonary and intercotiledonary tissues, after 60 days of pregnancy, in placentas produced by Embryo Transfer (ET) In Vitro Fertilization (IVF) and Nuclear Transfer (NT) in cattle, and also to investigate the epigenetic control of this gene in the bovine placenta evaluating the epigenetic profile of cotiledonary tissues of the experimental groups (ET, IVF and NT). The TSSC4 gene expression was reduced by 30% in the cotyledons in the NT group, however PHLDA2 expression of the gene was elevated by 11-fold in NT compared to ET. ChIP analysis for histone H3 at the proximal promoter region of TSSC4 and PHLDA2 genes showed an increase to the permissive mark H3K4me2 and a reduction for the inhibitory mark H3K9me2 in the cotyledons of cloned placentae, in relation to placentae produced by ET, for both genes. Interestingly, the inhibitory mark H3K9me2 for TSSC4 gene was also significantly reduced in placentae produced by IVF, compared to ET control group. These results show that expression of the "imprinted" genes TSSC4 and PHLDA2 is affected in placenta of pregnancies produced by nuclear transfer. Further, changes in expression of gene PHLDA2 and histone modifications in TSSC4 gene cotyledons produced by IVF indicate that the in vitro culture can contribute to the observed changes in NT group. / Orientador:Flavia Lombardi Lopes / Banca:Calie Castilho / Banca:Gisele Zoccal Mingoti / Mestre

Orientador: Marcelo Fabio Gouveia Nogueira / Resumo: Além de permitir a produção em larga escala de embriões, a maturação in vitro (MIV) não utiliza hormônios superestimulatórios, evitando prejuízos econômicos e efeitos iatrogênicos da superestimulação. Entretanto, a MIV ainda está aquém das expectativas devido à incapacidade em simular eventos fisiológicos que ocorrem in vivo. Um artefato da MIV consiste na retomada espontânea da meiose após a remoção do oócito do ambiente folicular. Sem o aparato molecular que retém a meiose, a maturação nuclear ocorre sem o estímulo hormonal fisiológico, impedindo a reorganização adequada das organelas durante a maturação citoplasmática, o que pode comprometer a competência oocitária in vitro. A temática primordial desta tese foi testar um sistema de pré-maturação oocitária (Pré-MIV), no qual dois fármacos (forskolin e 3-isobutil- metilxantina) são utilizados antes da MIV para retardar a meiose. O desempenho da Pré-MIV foi comparado à MIV convencional, em contexto comercial e de pesquisa. Em um primeiro momento, comparamos os sistemas convencional e Pré-MIV de forma holística, ou seja, testamos os sistemas comerciais completos. Aqui, o critério avaliativo foi a análise ultraestrutural de oócitos e blastocistos, e a análise da expressão de 96 genes relacionados à qualidade embrionária. Na segunda abordagem, adaptamos os fármacos da Pré- MIV em nossa MIV rotineira. Por estes fármacos afetarem o metabolismo lipídico, e, frente a importância deste no metabolismo energético celular, a segunda inv... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Grandes esforços dos programas de melhoramento genético da cana-de-açúcar são dedicados ao desenvolvimento de novas variedades com maior rendimento e conteúdo de sacarose. As etapas do metabolismo da sacarose têm sido foco de pesquisas há muito tempo, porém apenas recentemente têm-se buscado compreender os processos de transporte e acúmulo da sacarose no colmo da cana-de-açúcar. O objetivo deste trabalho é a caracterização do proteoma de entrenós maduros (entrenó 9) e imaturos (entrenó 5) de dois genótipos de cana-de-açúcar (Co 740 e SP 80-3280), ambos com 12 meses de idade, visando à identificação de proteínas relacionadas aos processos de transporte e acúmulo de sacarose. A altura, diâmetro do colmo, área foliar, umidade dos entrenós, trocas gasosas, potencial hídrico da planta e índice de maturação foram obtidos no momento da coleta do material vegetal. A quantificação dos açúcares glicose, frutose e sacarose foi realizada por cromatografia líquida e não mostrou a existência de diferenças no acúmulo desses carboidratos entre as duas variedades. Porém observamos diferenças entre os entrenós maduros e imaturos, indicando que o entrenó considerado imaturo encontra-se em estádio de pleno acúmulo de sacarose. O perfil de expressão proteica, gerado por 2D-PAGE, mostrou 87 e 85 proteínas diferencialmente expressas nos entrenós 5 e 9, respectivamente. Nos entrenós imaturos 12 proteínas foram identificadas como preferencialmente expressas em cada variedade e nos entrenós maduros 11 e 16 proteínas foram identificadas como preferencialmente expressas em Co 740 e SP 80-3280, respectivamente. As proteínas totais dos dois entrenós das duas variedades foram separadas e identificadas via UPLC acoplado a espectrômetro de massas LC-MS/MS com auxílio da base de dados do SUCEST. A caracterização do proteoma dos entrenós foi complementada pela avaliação da localização celular, função molecular e processo biológico a que pertencem todas as proteínas identificadas. Ao todo, foram identificadas 1.493 proteínas localizadas em 19 componentes celulares, com 20 funções metabólicas diferentes, atuantes em 24 processos biológicos e integrantes de 84 vias metabólicas. Deste total, 71 foram classificadas como participantes do metabolismo de carboidratos e encontram-se distribuídas em 21 vias metabólicas, segundo a base de dados KEGG. / Great efforts have been put into sugarcane breeding programs in order to develop new varieties with increased sucrose yield and content. The steps of sucrose metabolism have been focus of research for a long time, but only recently have researchers sought to understand the processes of transport and accumulation of sucrose in sugarcane stem. The objective of this study is characterize the proteome of mature (internode 9) and immature (internode 5) internodes in two genotypes of sugarcane (Co 740 and SP 80-3280), both 12 months old, focusing on the identification of proteins related to the processes of transport and accumulation of sucrose. The height, stem diameter, leaf area, internode moisture, gas exchange, plant water potential and maturation index were all recorded at the time the plant material was collected. The quantification of sugars glucose, fructose and sucrose was performed by liquid chromatography and showed no difference in carbohydrates accumulation between the two varieties. Nevertheless, we observed differences between the mature and immature internodes, indicating that the internode considered immature was actively accumulating sucrose. The protein profile, produced by 2D-PAGE, showed 87 and 85 differentially expressed proteins in internodes 5 and 9, respectively. In immature internodes 12 proteins were identified as being preferentially expressed in each of the varieties and in the mature internodes 11 and 16 proteins were identified as preferentially expressed in Co 740 and SP 80- 3280, respectively. Total proteins of the two internodes of two varieties were separated and identified by UPLC coupled to a mass spectrometer LC-MS/MS using the SUCEST database. The characterization of the internodes proteome was further complemented by evaluating cellular localization, function and molecular biological processes to which all identified proteins belong. Altogether, 1,493 proteins were identified, located in 19 cellular components, with 20 different metabolic functions, operating in 24 biological processes and involving 84 metabolic pathways. Of this total, 71 have been classified as being involved in carbohydrate metabolism and are distributed in 21 metabolic pathways, according to the KEGG database.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2016. / A criopreservação do ovócito bovino ainda é um desafio. O tamanho celular, a quantidade de água no citoplasma, a reserva de ácidos graxos, a composição da membrana plasmática, são alguns dos fatores responsáveis pela baixa eficiência da técnica. Entre as metodologias utilizadas para a criopreservação de ovócitos, a vitrificação ainda é considerado o método mais eficaz. O objetivo principal deste trabalho foi avaliar diferentes alternativas para minimizar os efeitos deletérios da vitrificação em ovócitos bovinos imaturos ou maturados. Entre as abordagens utilizadas estão (1) o uso de beta- metil- ciclodextrina (MβCD), como substância para alterar a membrana plasmática e aumentar a fluidez da mesma; (2) a associação de L-Carnitina e Resveratrol durante a maturação in vitro (MIV), para diminuir a reserva de gotículas lipídicas, aumentar a produção de ATP e proteger o ovócito contra o acúmulo de espécies reativas de oxigênio (EROs); (3) o uso da maturação in vivo para melhorar a qualidade do ovócito e, (4) o uso da transferência intrafolicular de ovócito imaturo, para proporcionar aos ovócitos vitrificados uma ambiente in vivo durante todos os passos da produção de embriões. Em cada experimento, diferentes avaliações foram utilizadas para identificar o sucesso ou insucesso das alternativas propostas. Apesar de alguns procedimentos como o uso de MβCD, terem melhorado a maturação nuclear, nenhum dos procedimentos utilizados aumentou a produção de blastocistos a partir de ovócito vitrificados. Os resultados obtidos mostraram que as lesões sofridas pelo ovócito bovino durante a vitrificação e aquecimento, o comprometem de forma muito severa e irreversível. / Cryopreservation of bovine oocyte is still a challenge. The cell size, the amount of water in the cytoplasm, the reservation of fatty acids, plasma membrane composition , are some of factors responsible for low efficiency of technique for bovine oocytes. Among the methodologies used for cryopreservation of oocytes, vitrification is the one that can minimize the effects of water flow. The main objective of present thesis was to prove different methodologies for vitrification of immature or matured bovine oocytes. For different alternatives were proved: (1) MβCD, a substance to alter the plasma membrane and increase membrane fluidity. (2) the combination of L-carnitine and resveratrol during IVM, to reduce reserves of lipid droplets, increase ATP production and protect against ROS aa. (3) in vivo maturation system where, after hormonal stimulation on bovine heifers, in vivo and theatrically better oocyte were produced. (4) intrafollicular transfer of immature oocyte, we adapted a methodology for immature oocytes could be injected into pre-ovulatory follicles, resulting in a in vivo system. For each experiment, different assessments were used to identify the successes or failures of our hypothesis. A common evaluation used for all experiments was the use of immature or for some experiments matured oocytes, destined for blastocyst development, after IVF. In none of proposed experiments, we have succeeded in increasing the production of blastocysts from vitrified oocytes. Likewise, the results, indicated that the injuries suffered by bovine oocyte during vitrification and thawing, compromise the oocyte at very severe intensity.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-10-08Bitstream added on 2014-06-13T20:28:26Z : No. of bitstreams: 1 silva_dp_me_botfca.pdf: 526650 bytes, checksum: 7ae6945ff6c8dc75dad6ed02f3f46b19 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O trabalho de pesquisa teve por objetivo avaliar a eficácia da aplicação de thiametoxam na soqueira da cana-de-açúcar, em áreas tratadas com os maturadores glifosato, trinexapaqueetílico e sulfameturon-metyl, sobre a qualidade da matéria prima e o desenvolvimento e a produtividade de colmos.Foram realizados dezoito experimentos, sendo 12 em início de safra e 6 em final de safra, iniciados e realizado durante os anos de 2008, 2009, 2010 e 2011. Esses experimentos foram instalados e conduzidos no município de Olímpia (SP), no município Igaraçu do Tietê (SP) e no município de Macatuba (SP). O delineamento experimental foi em blocos casualizados com cinco repetições. Os experimentos foram constituídos dos seguintes tratamentos: controle (sem aplicação de maturador ou thiametoxam), thiametoxam, glifosato e glifosato + thiametoxam. Com trinexapaque-etílico, os tratamentos foram os seguintes: controle, thiametoxam, trinexapaque-etílico e trinexapaque-etílico + thiametoxam. Com sulfometuron-methyl, os tratamentos foram: controle, thiametoxam, sulfometuron-methyl e sulfometuron-methyl + thiametoxam. As doses empregadas foram respectivamente: thiametoxam 100 g i.a. ha-1 (0,4 kg p.c. ha-1), glifosato 192 g i.a. ha-1 (0,4 L p.c. ha-1), trinexapaque-etílico 200 g i.a. ha-1 (0,8 L p.c. ha-1) e sulfometuron-methyl 15 g i.a. ha-1 (20 g p.c. ha-1), doses dos ingredientes ativos (comercial). Para os experimentos de inicio de safra foi utilizada a variedade de cana-de-açúcar RB855453 (maturação precoce); para os experimentos de final de safra foi utilizada a variedade SP 80-3280, caracterizada por ter maturação tardia; para a aplicação dos produtos, utilizou-se equipamento costal pressurizado (CO2) e para a aplicação de thiametoxam houve a aplicação por jato dirigido na linha da soqueira. O bioativador... / This Project had, as its aim, evaluate the effectiveness of the application of thiametoxam in the sugarcane ratoon over the quality of the raw material and the development and productivity of thatches in fields treated with the ripeners glyphosate, ethyl-trinexapac and the sulfometuron-methyl. Eighteen experiments were carried out, started and conducted in 2008, 2009, 2010 e 2011, twelve in the beginning of crops and six in the end of crops These experiments were set up and carried out in the city of Olímpia, (SP), in a field that belongs to TEREOS GROUP (Guarani Plant – Cruz Alta Unit), in the city of Igaraçu do Tietê (SP) and in the city of Macatuba (SP), in fields that belong to the RAÍZEN GROUP (BarraP lant). The experimental delineation was done in blocks casualized with five repetitions. The experiments with glyphosate were constituted of the following treatments: thiametoxam control, glyphosate and glyphosate + thiametoxam. With trinexapaque-etílico, the treatments were: control, thiametoxam, trinexapaque-etílico e trinexapaque-etílico + thiametoxam. With sulfometuron-methyl, the treatments were: control, thiametoxam, sulfometuron-methyl and sulfometuron-methyl + thiametoxam. The used doses were, respectively: thiametoxam 100 g i.a. ha-1 (0,4 kg p.c. ha-1), glyphosate 192 g i.a. ha-1 (0,4 L p.c. ha-1), trinexapaque-etílico 200 g i.a. ha-1 (0,8 L p.c. ha-1) and sulfometuron-methyl 15 g i.a. ha-1 (20 g p.c. ha-1), active ingredients doses (comercial). For the experiments carried out in the beginnig of crops we used the sugarcane variety RB855453 (early ripeness); for the experiments carried out in the end of crops we used the variety SP 80-3280, which is characterized for having late ripeness; for the products application, we used the pressurized coastal equipment (CO2) and for the application of thiametoxam there was an... (Complete abstract click electronic access below)

Os modelos de simulação devem ser ajustados para que os valores dos parâmetros e variáveis de entrada forneçam resultados que melhor representem os valores observados. Assim, face às imprecisões a que estão sujeitos os resultados obtidos a partir do ajuste, há a necessidade de implementar métodos que permitam a avaliação das incertezas, quer seja nos parâmetros de cultura ou nas variáveis de entrada do modelo. Tem-se, para a cana-de-açúcar, que a máxima produtividade de açúcar ocorre no momento em que a Pol e a biomassa de colmos (TCH) são potencializados. Sendo assim, este trabalho objetivou: (i) testar a aderência de três distribuições de probabilidade (normal, gama e Weibull) aos dados diários de temperaturas média do ar e radiação solar global, em Piracicaba, SP; (ii) simular as variáveis temperatura do ar e radiação solar global por intermédio das distribuições normal bivariada, gama e Weibull, e a precipitação por intermédio da distribuição gama; (iii) propor um modelo, utilizando abordagem determinística para a variedade de interesse, para caracterizar a variação temporal do crescimento de biomassa seca de cana-de-açúcar e estimar a ordem de magnitude do período útil de industrialização (PUI), do dia de ocorrência do valor máximo da produtividade de sacarose (expressa em TPH) e das produtividades potencial e deplecionada de cana-de-açúcar, em dois ambientes de produção; (iv) estimar as variações das produtividades potencial, deplecionada por água e TPH (ciclo cana planta) por intermédio de procedimento estocástico para os elementos do clima (temperatura, radiação fotossinteticamente ativa e precipitação). As simulações utilizando as distribuições normal bivariada e gama são apropriadas por representarem melhor os elementos do clima; o modelo para a estimação das produtividades potencial, deplecionada e de sacarose apresentou resultados satisfatórios quanto aos objetivos propostos (abordagem determinística); o desempenho das variações das produtividades ocorreu de forma semelhante, no que se refere a magnitude de valores, para as simulações utilizando as distribuições normal bivariada e gama, e apresentou tendência de superestimar os valores das produtividades, para a simulação utilizando a distribuição Weibull (abordagem estocástica dos elementos do clima). / Simulation models should be adjusted by values of parameters and input variables in order to provide results that best represent the observed values. Thus, due to inaccuracies that are subject the adjustment´s results, it is necessary to implement methods for uncertainties evaluation for either, the parameters of the culture or input variables of the model. For the sugarcane, the maximum productivity of sugar occurs when both, Pol and biomass of stems (TCH) are the maximum. The aims of this study were: (i) to verify the adherence of three probability distributions (normal, gama and Weibull) to the daily data of average air temperature and solar radiation, in Piracicaba, SP; (ii) to simulate the variables air temperature and solar radiation through the bivariate normal, gama and Weibull distributions, and precipitation through the gama distribution; (iii) to propose a model, by using deterministic approach to the genotype of interest, to characterize the temporal variation in dry matter growth of sugarcane estimating the magnitude order of the useful period of industrialization, the date of occurrence in maximum sucrose yield (expressed by TPH) and the sugarcane potential and depleted productivity, in two production environments; (iv) to estimate the variability of potential, depleted by water and TPH (sugarcane plant cycle) through a stochastic procedure for the climate elements (temperature, photosynthetically active radiation and precipitation). The simulations by using bivariate normal and gama distributions are appropriate to better represent the climate elements; the model to estimate potential, depleted and sucrose productivity showed satisfactory results for the proposed objectives (deterministic approach); yield variability was similar, as regard the magnitude of values, for the simulations by using bivariate normal and gama distributions and it presented a tendency to overestimate the productivity for simulations by using Weibull distribution (stochastic approach of climate elements).

Submitted by Maria Beatriz Vieira (mbeatriz.vieira@gmail.com) on 2017-10-16T11:45:41Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) dissertacao_barbara_da_silva_alves.pdf: 489976 bytes, checksum: 4eeba836c9990bc82824db3437f40cd3 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-10-17T11:39:45Z (GMT) No. of bitstreams: 2 dissertacao_barbara_da_silva_alves.pdf: 489976 bytes, checksum: 4eeba836c9990bc82824db3437f40cd3 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-10-17T11:42:21Z (GMT) No. of bitstreams: 2 dissertacao_barbara_da_silva_alves.pdf: 489976 bytes, checksum: 4eeba836c9990bc82824db3437f40cd3 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-17T11:42:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 dissertacao_barbara_da_silva_alves.pdf: 489976 bytes, checksum: 4eeba836c9990bc82824db3437f40cd3 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-02-25 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio Grande do Sul - FAPERGS / A produção in vitro de embriões é uma das principais técnicas aplicadas a reprodução animal. A suplementação com ácidos graxos poli-insaturados de cadeia longa (PUFA) da série ômega-3 nos meios de maturação in vitro (MIV) pode ser relevante para a diminuição de gotículas lipídicas que prejudicam a eficiência da produção in vitro e criopreservação de embriões suínos. O presente trabalho avaliou o efeito da suplementação do meio de MIV com dois PUFA, o eicosapentaenoico (EPA) e o docosahexaenóico (DHA), sobre a maturação nuclear de oócitos suínos. Folículos com 3 a 6 mm de diâmetro foram aspirados de ovários de fêmeas suínas pré-púberes coletados em frigoríficos. O meio de maturação foi constituído de TCM-199 suplementado com 0,57 mM de cisteína, 0,91 mM de piruvato de sódio, 10 ng/mL de EGF, 0,5μg/mL de LH, 0,5μg/mL de FSH e 0,1% de PVA. A MIV foi avaliada para grupos com aproximadamente 30 complexos cumulus-oócitos, compondo quatro tratamentos, em meios suplementados com: 10% de fluído folicular suíno (FFS), considerado como controle; 50; 100 e 150μM de cada PUFA. Foi também realizada a suplementação com FFS e AMPc para avaliar a possível toxicidade desses ácidos graxo. Após as 44 h de MIV, os oócitos foram corados com Hoechst 33342. Houve diferença entre as taxas de MIV obtidas nos meios suplementados com diferentes níveis de EPA a partir de 100 μM, em comparação ao controle (P > 0,05). As taxas de MIV observadas nos meios suplementados com DHA em concentrações a partir de 100 μM foram inferiores às observadas para o controle (P < 0,05). Quando comparadas com meios suplementados FFS e AMPc, as taxas de MIV observas com 50 μM de EPA e DHA não diferiram (P > 0,05). Estes resultados indicam que a suplementação de meios para MIV com EPA e DHA influenciam de forma negativa as taxas de maturação in vitro nuclear, sugerindo um efeito tóxico para os oócitos suínos. / The production of embryos in vitro (IVP) is one of the main techniques applied to animal reproduction. Supplementation of in vitro maturation (IVM) media with long-chain polyunsaturated fatty acids (PUFA) of the omega-3 series may be relevant to the decrease of lipid droplets which hinder efficient IVP and cryopreservation of porcine embryos. This study evaluated the effects of supplementation of IVM media with two PUFA, the eicosapentaenoic (EPA) and the docosahexaenoic (DHA) on the nuclear maturation of pig oocytes. Follicles with 3-6 mm diameter were aspirated from ovaries collected at abattoirs from prepubertal gilts. The IVM medium was TCM-199 supplemented with 0.57 mM cysteine, 0.91 mM sodium pyruvate, 10 ng/mL EGF, 0.5 μg/mL LH, 0.5 μg/mL FSH and 0.1% PVA. The IVM rates were evaluated for groups having nearly 30 cumulus-oocyte complexes in four treatments, including media supplemented with: 10% porcine folicular fluido (PFF), as a control; 50; 100 and 150μM of each PUFA. FOS supplementation and cAMP was also performed to evaluate the possible toxicity of these fatty acids. After 44 h of IVM, oocytes were stained with Hoechst 33342. Differences were observed between IVM rates obtained in media supplemented with different levels of EPA from 100 uM, compared to the control (P> 0.05). The IVM rates observed in media supplemented with DHA at concentrations from 100 uM were lower than those in the control (P <0.05). When compared with supplemented FFS and cAMP means IVM rates swarming with 50 mM of EPA and DHA did not differ (P> 0.05). These results indicate that supplementation of IVM medium with EPA and DHA influenced negatively the rate of nuclear maturation, suggesting a toxic effect for swine oocytes.