Made available in DSpace on 2013-08-07T19:04:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000434470-Texto+Completo-0.pdf: 6587349 bytes, checksum: 405b1e4ec3fc9ec1beb9e4856acacdf7 (MD5) Previous issue date: 2011 / Approximately one-third of the world’s population is infected with Mycobacterium tuberculosis, the aetiological agent of human tuberculosis (TB). As global incidence of drug-resistance constantly increases, the urgent need for developing new anti-TB drugs and vaccines becomes more evident. Component enzymes of fundamental metabolic pathways seem to be attractive as define molecular targets. Guanosine monophosphate synthase (GMPS), a G-type amidotransferase, catalyzes the amination of xanthosine monophosphate (XMP) to guanosine monophosphate (GMP) in a reaction that occurs in two domains, the glutamine amidotransferase and the ATP pyrophosphatase, where it attacks a highly reactive adenyl-XMP intermediate, leading to GMP formation. The guaA (Rv3396c) gene, which codes for GMPS, was identified by sequence homology in the M. tuberculosis H37Rv genome. We evidenced that adenyl-XMP formation causes enzyme inhibition by increase of ATP and XMP levels. In addition, M. tuberculosis GMPS (MtGMPS) displays an allosteric behavior to XMP variation, demonstrating positive cooperativity and different kinetic aspects from that reported for human and Escherichia coli enzymes. The proposed ordered mechanism of substrates binding, which results in the release of pyrophosphate before binding ammonia showed to be the same to other GMPSs. Our results on MtGMPS might be useful to reveal its role in M. tuberculosis purine metabolism, providing knowledge for the development of new drugs and vaccines to treat and prevent TB, respectively. / Aproximadamente 1/3 da população mundial está infectada com o Mycobacterium tuberculosis, agente etiológico da tuberculose humana (TB). A incidência global e o constante aumento da resistência às drogas tornam evidente a urgente necessidade do desenvolvimento de novas drogas, para o tratamento, e vacinas, para a prevenção desta doença. As enzimas das vias metabólicas fundamentais são vistas como atrativos alvos moleculares definidos. A enzima guanosina monofosfato sintase (GMPS), uma amidotransferase do tipo G, catalisa a aminação da xantosina monofosfato (XMP) à guanosina monofosfato (GMP), em uma reação que ocorre em dois domínios, o glutamina amidotrasferase e o adenosina trifosfato (ATP) pirofosfatase, onde ocorre o ataque do intermediário altamente reativo adenil-XMP, levando a formação de GMP. O gene guaA (Rv3396c), o qual codifica a enzima GMPS, foi identificado por homologia de sequência no genoma de M. tuberculosis H37Rv. Nós evidenciamos que a formação do adenil-XMP causa uma inibição da enzima pelo aumento dos níveis de ATP e XMP. Além disso, a GMPS de M. tuberculosis (MtGMPS), apresentou um comportamento alostérico na variação dos níveis de XMP, demonstrando cooperatividade positiva e diferentes aspectos cinéticos dos já reportados para as enzimas de humanos e Escherichia coli. O mecanismo ping-pong foi proposto com base nos resultados evidenciados pela liberação de pirofosfato (PPi) depois da ligação da amônia, corroborando com os dados previamente publicados para outras GMPSs. Nossos resultados podem ser úteis por revelar o papel desta enzima no metabolismo de purinas do M. tuberculosis, fornecendo conhecimento para o desenvolvimento de novas drogas e vacinas para o tratamento e prevenção, respectivamente.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:04:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000449054-Texto+Completo-0.pdf: 8006379 bytes, checksum: c3053d3057f799b289c2e245d372e446 (MD5) Previous issue date: 2012 / Renal transplantation has been deemed the best treatment for patients with end stage renal disease. Mycophenolic acid is an immunosuppressant widely used in transplantation, acting as a potent, selective, non-competitive and reversible inhibitor of inosine monophosphate-dehydrogenase enzyme. Currently, two compounds are available: mycophenolate mofetil and mycophenolate sodium, both presenting with high rate of gastrointestinal complications. In clinical practice, patients are routinely prescribed with fixed doses, which can lead to drug exposure differences as great as 10 times. Therapeutic monitoring of Mycophenolic acid appears as a helping tool, useful for adjusting doses, individualizing therapy and promoting better understanding of drug interactions on the pharmacokinetics of Mycophenolic acid. Omeprazole is a widely prescribed drugs for transplanted patient, either as prophylaxis of gastric disorders or peptic ulcers therapy. However, literature data have hinted at a possible omeprazole interaction on Mycophenolic acid pharmacokinetics, by raising gastric pH and reducing its gastric absorption. The aim of the current study was to evaluate Mycophenolic acid levels in patients using mycophenolate mofetil or mycophenolate sodium with and without co-administration of omeprazole. The method for therapeutic drug monitoring of Mycophenolic acid seemed consistent with previously established validation parameters. There was no statistical difference in Mycophenolic acid levels of patients using either mycophenolate mofetil or mycophenolate sodium, with or without concomitant omeprazole; yet Mycophenolic acid plasma levels presented lower variance when omeprazole was concomitantly used, in both groups. / O transplante renal constitui-se no tratamento de escolha para pacientes com insuficiência renal crônica terminal. O ácido micofenólico é um imunossupressor muito empregado no transplante, que age como um potente, seletivo, não competitivo e reversível inibidor da enzima inosina-monofosfato desidrogenase. Atualmente, dois compostos estão disponíveis: o micofenolato de mofetila e o micofenolato sódico, ambos apresentando elevado índice de complicações gastrointestinais. Na prática clínica, os pacientes são rotineiramente prescritos com doses fixas padrão, o que pode levar a uma diferença de pelo menos 10 vezes na exposição à droga.O monitoramento terapêutico do ácido micofenólico surge como uma ferramenta de apoio clínico, auxiliando no ajuste de doses, na individualização da terapia, e promovendo maior entendimento quanto a interações medicamentosas na farmacocinética do ácido micofenólico. O omeprazol é um dos fármacos muito prescritos para pacientes transplantados, seja na profilaxia de distúrbios gástricos, seja no tratamento de úlceras pépticas. Entretanto, dados da literatura vêem apontando uma possível interação do omeprazol na farmacocinética do ácido micofenólico, por elevar o pH gástrico e diminuir sua absorção. Assim, o objetivo desse trabalho foi realizar a validação de método para monitoramento terapêutico do ácido micofenólico e realizar uma análise dos efeitos da coadministração de omeprazol nos níveis plasmáticos do ácido micofenólico em grupos de pacientes em uso de micofenolato mofetila ou micofenolato sódico. O método laboratorial desenvolvido e validado para monitoramento terapêutico do ácido micofenólico apresentou-se condizente com os parâmetros de validação descritos na literatura. A análise dos níveis de ácido micofenólico, quando co-administrado ou não omeprazol em pacientes em uso de micofenolato mofetila ou micofenolato sódico, não demonstrou diferença estatística, mas se observou que tanto o grupo micofenolato mofetila quanto o micofenolato sódico, em co-administração com omeprazol, apresentavam menor variância dos níveis plasmáticos de ácido micofenólico.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:05:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000433744-Texto+Completo-0.pdf: 2709153 bytes, checksum: ff7318acee1d49accb9162ce058c629e (MD5) Previous issue date: 2011 / Sodium bromide, first-generation antiepileptic drug, is still used to treat refractory epilepsy in children. Its mechanism is not fully elucidated. In this work, i-investigate its actions on the epileptiform activity (EA's) of non-synaptic region of the dentate gyrus in vitro, ii-compare his action with a solution containing high concentration of sodium chloride; blocker of chloride channels voltage dependent (SITS, DIDS), iii-investigate the possible involvement of gap junctions at the time of action of the drug. The study involved experimental measurements such as extracellular field records and computer simulations. AE'S returned inhibition induced model of zero calcium and high potassium with 9 mM NaBr (n=6). With the perfusion of calcium solution zero high concentration of NaCl in the records (n=6) obtained a field transient blockage. We compared the effect of NaBr with chloride channel blockers of voltage-dependent (DIDS 250 μM, n=8 and SITS 1 mM, n=3), we obtained a similarity in the records of extracellular field potential, suggesting a possible involvement of chloride channels voltage dependent. The blocker of gap junctions (N-octanol) at concentrations of 0,07 mM was used with 5 mM bromide. This reduced the high frequency elucidated in the transient period during drug application. The effect of Br- isn´t just in membrane potential, through its greater permeability compared to the Cl- inducing hyperpolarization, but also show a higher permeability to the chloride channels voltage-dependent. The increased frequency of discharges can be due to the competitive effect of Br- on chloride channels, reducing the permeability to Cl-. The NaBr has a little affinity for the cotransporter NKCC1 and partially replacing Cl- in cotransporter KCC2. The origin of high frequency in records with bromide, is probably related with the gaps junctions. / O brometo de sódio, fármaco antiepiléptico de primeira geração, ainda é utilizado para tratar epilepsia refratária em crianças. Seu mecanismo de ação não está totalmente elucidado. Neste trabalho propomos, i- investigar sua ação nas atividades epileptiformes (AE‟S) de natureza não-sináptica na região do giro dentado in vitro; ii- comparar sua ação com solução contendo alta concentração de cloreto de sódio; com bloqueadores de canais de cloreto dependente de voltagem (SITS, DIDS); iii-investigar o possível envolvimento das gap junctions no momento da atuação do fármaco. O estudo envolveu medidas experimentais tais como registros extracelulares de campo e medidas do sinal óptico intrínseco. Obtivemos inibição das AE‟S induzidas pelo modelo do zero cálcio e alto potássio com 9 mM de NaBr (n=6). Com a perfusão da solução de zero Ca++ + alta concentração de NaCl nos registros (n=7) de campo, obtivemos um bloqueio transitório. Comparou-se o efeito do NaBr com os bloqueadores de canais de cloreto dependente de voltagem o SITS 1mM (n=3) e DIDS 250 μM (n=8), obteve-se uma semelhança nos registros de potencial elétrico extracelular, mostrando possível envolvimento dos canais de cloreto dependente de voltagem. O bloqueador de gap junctions (N-octanol) em concentrações de 0,07mM foi utilizado juntamente com o brometo 5mM. Este reduziu à alta freqüência elucidada no período transiente durante a aplicação da droga.O efeito do Br- não é apenas no potencial de membrana, por meio de sua maior permeabilidade em relação ao Cl- induzindo hiperpolarização, mas apresenta também uma maior permeabilidade aos canais de cloreto dependente de voltagem. O aumento da frequência das descargas pode ser devido ao efeito competitivo do Br- sobre os canais de cloreto, reduzindo a permeabilidade ao Cl-. O NaBr tem pouca afinidade pelos cotransportadores NKCC1 e substitui parcialmente Cl- nos cotransportadores KCC2. A origem da alta freqüência nos registros com o brometo, provavelmente está relacionada com as gaps junctions.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / In this study a method for As, Cd, Cr, Cu, Mn, Mo, Ni, Pb, Pd, Pt, Rh, Ru and V determination in pharmaceuticals products by electrothermal vaporization inductively coupled plasma optical emission spectrometry (ETV-ICP OES) was developed. The Brazilian Pharmacopoeia (FB) recommends acid digestion of the sample before element determination by atomic spectrometry. However, some pharmaceuticals, such as tricyclic compounds, are difficult to be decomposed by conventional acid digestion. In order to avoid the step of sample digestion, direct solid sample analysis by ETV-ICP OES is proposed. Electrothermal vaporization consists in vaporizing the sample to be introduced in the plasma. The influence of CCl2F2 as chemical modifier was investigated and 3.0 mL min-1 was considered the ideal flow rate. Modifier and carrier effect of ascorbic acid, citric acid, oxalic acid, ethylenediaminetetraacetic acid and sodium cloride was also evaluated. Vaporization and pyrolysis temperatures were adjusted in order to obtain a single temperature program for multielement determination by ETV-ICP OES. Hence, temperatures of 350 °C and 1600 °C were considered suitable for pyrolysis and vaporization, respectively. Sample mass was also evaluated and 2.5 mg was considered appropriate. By the proposed ETV-ICP OES method only Cr (5.5 μg g-1) was detected in cyclobenzaprine hydrochloride. Since there are not certified reference materials with similar matrix to the samples, accuracy was checked by comparison of results obtained by inductively coupled plasma mass spectrometry after microwave induced combustion. Agreement of 87% (by comparison with ICP-MS) and 91% (by analyte recovery) was obtained for Cr. The limit of quantification (10 σ, n = 10) of the proposed method was in the range of 0.08 μg g-1 for Mn and 356 μg g-1 for As, while the relative standard deviation (n = 3) was lower than 10%. The frequency of determination was 20 h-1. Considering the analytical characteristics the proposed method can be considered suitable for element determination in tricyclic pharmaceuticals. / Neste trabalho foi estudada metodologia para a determinação de As, Cd, Cr, Cu, Mn, Mo, Ni, Pb, Pd, Pt, Rh, Ru e V em produtos farmacêuticos, empregando a técnica de vaporização eletrotérmica acoplada à espectrometria de emissão óptica com plasma indutivamente acoplado (ETV-ICP OES). O método oficial preconizado pela Farmacopeia Brasileira, que emprega a espectrometria atômica para a determinação dos elementos supracitados, recomenda técnicas de decomposição de amostras a fim de obter a amostra sob a forma de solução para posterior análise. Entretanto, alguns produtos farmacêuticos, como os fármacos tricíclicos, são difíceis de serem decompostos por métodos convencionais de preparo de amostras, como a via úmida. No sentido de evitar esta etapa de preparo de amostra e os erros a ela agregados, a análise direta da amostra sólida foi proposta neste trabalho. O sistema de vaporização eletrotérmica consiste em vaporizar a amostra para introduzi-la no plasma, empregando, preferencialmente, um programa de aquecimento de forma a evitar a volatilização concomitante da matriz e analitos. A influência do modificador CCl2F2, como reagente auxiliar de vaporização de elementos, principalmente refratários e formadores de carbetos, foi avaliada, com vazão ideal de 3,0 mL min-1. O efeito carreador e modificador do ácido ascórbico, ácido cítrico, ácido etilenodiaminotetracético, ácido oxálico e cloreto de sódio também foram avaliados. Parâmetros como as temperaturas de pirólise e de vaporização foram ajustados a fim de obter um único programa de temperatura para a determinação multielementar no ICP OES. Temperaturas de 350 °C e 1600 °C foram consideradas adequadas para pirólise e vaporização, respectivamente. A massa de amostra também foi avaliada, sendo apropriado 2,5 mg para todos os produtos farmacêuticos. Na determinação de metais e não metais pelo método proposto foi encontrado 5,5 μg g-1 de Cr na amostra de cloridrato de ciclobenzaprina, enquanto para os demais elementos e amostras, as concentrações ficaram abaixo do limite de quantificação (LOQ). A exatidão foi avaliada empregando-se a combustão iniciada por micro-ondas (MIC) seguida de determinação por espectrometria de massa com plasma indutivamente acoplado. O valor obtido para Cr na amostra cloridrato de ciclobenzaprina foi 6,3 μg g-1, o que representa uma concordância de 87%. A fim de verificar o desempenho do método proposto, foram feitos testes de recuperação,através da adição de 16 ng de Cr (quantidade equivalente à encontrada em 2,5 mg de cloridrato de ciclobenzaprina), obtendo-se 91% de recuperação. O LOQ (10σ, n = 10) do método proposto variou entre 0,12 μg g-1 (para Mn) e 356 μg g-1 (para As), enquanto que o desvio padrão relativo (n = 3) foi menor do que 10%. A frequência de determinação foi de 20 amostras h-1. Considerando-se a dificuldade de decomposição dos fármacos tricíclicos e os LOQs obtidos, o método proposto pode ser considerado adequado para a determinação de Cr, Cu, Mn, Ni, Pd, Rh, Ru e V.

A partial least-squares calibration (PLS) procedure in combination with infrared spectroscopy has been developed for simultaneous determination of sulphamethoxazole (SMZ) and trimethoprim (TMP) in raw material powder mixtures used in commercial pharmaceutical products. Multivariate calibration modeling procedures, interval partial least squares (iPLS) and synergy partial least squares (siPLS), were applied to select a spectral range that provided the lowest prediction error in comparison to the full-spectrum model. The experimental matrix was constructed using 49 synthetic samples and 15 commercial samples. The considered concentration ranges were 400 to 900 mg g-1 SMZ and 80 to 240 mg g-1 TMP. Spectral data were recorded between 650 and 4000 cm-1 with a 2 cm-1 resolution by Fourier transform infrared spectroscopy coupled with attenuated total reflectance (ATR-FTIR) and 600 and 4000 cm-1 with a 4 cm-1 resolution by diffuse reflectance infrared Fourier transform spectroscopy (DRIFTS). The proposed procedures were compared with conventional procedure by high performance liquid chromatography (HPLC). A root mean square error of prediction (RMSEP) of 13.18 mg g-1 for SMZ and 6.03 mg g-1 for TMP was obtained after selection of better intervals by siPLS for ATR-FTIR and 13.03 mg g-1 for SMZ and 4.88 mg g-1 for TMP after selection of better intervals by siPLS for DRIFTS. Results showed that PLS regression model (associated with iPLS and siPLS regression models) combined to ATR-FTIR or DRIFTS are relatively simple, rapid and accurate procedures. These procedures could be applied to the simultaneous determination of SMZ and TMP in routine quality control of powder mixtures. / Neste trabalho foram desenvolvidos modelos de calibração por mínimos quadrados parciais (PLS) para a determinação simultânea de sulfametoxazol (SMZ) e trimetoprima (TMP) em medicamentos. Métodos de seleção de variáveis, como o método por mínimos quadrados parciais por intervalo (iPLS) e o método dos mínimos quadrados parciais por sinergismo de intervalos (siPLS) foram aplicados para selecionar região(ões) do espectro no infravermelho que apresente(m) melhor correlação com cada uma das substâncias ativas estudados. Um total de 49 amostras sintéticas e 15 amostras comerciais foi empregado para compor os conjuntos de calibração e de previsão, sendo consideradas as faixas de concentração de 400 a 900 mg g-1 para o sulfametoxazol e de 80 a 240 mg g-1 para a trimetoprima. Os dados espectrais foram adquiridos na faixa de 650 a 4000 cm-1 com resolução de 2 cm-1 por espectroscopia no infravermelho com transformada de Fourier empregando-se um acessório de reflectância total atenuada (ATR-FTIR) e 600 a 4000 cm-1 com resolução de 4 cm-1 por espectroscopia no infravermelho por reflexão difusa (DRIFTS). Os dados obtidos foram comparados com o método oficial por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC). Um erro de previsão (RMSEP) de 13,18 mg g-1 para SMZ e 6,03 mg g-1 para TMP foi obtido após seleção dos melhores intervalos por siPLS para dados obtidos por ATR-FTIR. Um RMSEP de 13,03 mg g-1 para SMZ e 4,88 mg g-1 para TMP foi obtido após seleção dos melhores intervalos por siPLS para dados obtidos por DRIFTS. Os resultados mostraram que modelos de regressão PLS (associados a métodos de seleção de variáveis, como iPLS e siPLS) combinados com ATR-FTIR ou DRIFTS são promissores no desenvolvimento de metodologias mais simples, rápidas e não destrutivas. Estes modelos podem ser aplicados para a determinação simultânea de SMZ e TMP em formulações farmacêuticas.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-12-06Bitstream added on 2014-06-13T20:40:26Z : No. of bitstreams: 1 moreno_ah_dr_arafcf.pdf: 734221 bytes, checksum: 23d30186e23eb1eee2cdbb3e636c93ab (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A ceftazidima é uma cefalosporina semi-sintética de terceira geração com grande atividade antibacteriana, muito usada no tratamento de infecções bacterianas freqüentes, incluindo espécies de Proteus e Pseudomonas aeruginosa e foi considerada fármaco de escolha para infecções graves causadas por espécies de Klebsiella, Enterobacter, Proteus, Providencia, Serratia e Haemophylus. Entre elas, infecções biliares, ósseas e nas articulações, fibrose cística (infecções do trato respiratório), endoftalmites, infecções em pacientes imunodeprimidos (neutropênicos), meningite, peritonite, pneumonia, septicemia, infecções da pele (queimaduras e ulcerações) e infecções do trato urinário. As propriedades favoráveis da ceftazidima são penetração eficiente na parede celular bacteriana, resistência à degradação enzimática pelas bactérias, amplo espectro de atividade, toxicidade muito baixa, extensa penetração nos tecidos, estabilidade metabólica e baixa taxa de ligação a proteínas plasmáticas. A ceftazidima é de administração injetável como sal sódico ou em solução com arginina, sendo amplamente distribuída nos tecidos e fluidos; ela atravessa a placenta e é distribuída no leite materno. A penetração no humor aquoso do olho é relativamente boa após administração sistêmcia de ceftazidima. Há algumas evidências de que concentrações suficientes para terapia de infecções oculares causadas por microrganismos gram-positivos ou gram-negativos podem ser obtidas após administração sistêmica. Apesar de a ceftazidima ser bem estudada no que se refere à atividade terapêutica e comercialização, há somente um método oficial farmacopéico para sua quantificação por cromatografia líquida de lata eficiência. / Ceftazidime is a semisynthetic cephalosporin of the third generation with high antibacterial activity, widely used in the treatment of commonly-occurring bacterial infections, including indole-positive Proteus species and Pseudomonas aeruginosa and have been considered to be the drugs of choice for serious infections caused by Klebsiella, Enterobacter, Proteus, Providencia, Serratia and Haemophylus species. They include biliarytract infections, bone and joint infections, cystic fibrosis (respiratory-tract infections), endophthalmitis, infections in immunocompromised patients (neutropenic patients), meningitis, peritonitis, pneumonia, septicaemia, skin infections (including burns, ulceration) and urinary-tract infections. The favorable properties of ceftazidime include efficient penetration of the bacterial cell wall, resistance to bacterial enzyme degradation, a broad spectrum of activity, very low toxicity, extensive tissue penetration, metabolic stability, and a low degree of serum protein binding. Ceftazidime is administrated by injection as the sodium salt or in solution with arginine and is widely distributed in body tissues and fluids; it crosses the placenta and is distributed into breast milk. Penetration into the aqueous humor of the eye is relatively good after systemic administration of ceftazidime. There is some evidence that concentrations sufficient for therapy of ocular infections due to gram-positive and certain gram-negative microorganisms can be achieved after systemic administration. Although ceftazidime has been studied in terms of therapeutic activity and commercialized, there is only one official pharmacopoeial monograph on its quantification by high performance liquid chromatography.

Orientador: André Sampaio Pupo / Banca: Claudio Miguel da Costa Neto / Banca: Rosely Oliveira Godinho / Banca: Carlos Renato Tirapelli / Banca: Carlos Alan Candido Dias Junior / Resumo: Agonistas induzem ou estabilizam diferentes conformações de receptores com 7 domínios transmembrana (7TMRs) levando à modulação diferencial das atividades desses receptor. Este fenômeno é conhecido como eficácia colateral ou pluridimensional, seletividade funcional ou agonismo tendencioso. Este trabalho investigou se drogas comumente utilizadas como agonistas de 1-adrenoceptores (as feniletilaminas noradrenalina, dopamina, fenilefrina e metoxamina; e as imidazolinas A61603, oximetazolina e nafazolina) apresentam agonismo tendencioso para a via proteína Gq-mobilização de Ca2+ intracelular ([Ca2+]i) ou para a internalização dependente de -arrestina em 1A- ou 1B-adrenoceptores humanos em células HEK293. O agonismo tendencioso foi determinado pela comparação equimolar e quantificado pela comparação das "razões de transdução" /KA ou razões das "eficiências de acoplamento" . Os métodos quantitativos de análise do agonismo tendencioso apontaram perfis semelhantes de seletividade funcional em 1A- e 1B-adrenoceptores. Em 1A-adrenoceptores, a dopamina apresentou agonismo tendencioso para a internalização, enquanto que a fenilefrina e o A61603 foram tendenciosos para a mobilização de [Ca2+]i. Todas as imidazolinas investigadas foram agonistas tendenciosos na internalização de 1B-adrenoceptores. Houve repercussões funcionais do agonismo tendencioso observado, uma vez que a oximetazolina promoveu taquifilaxia tanto em respostas mediadas por 1B-adrenoceptores nativos do baço do rato quanto em 1B-adrenoceptores recombinantes humanos indicando que a sua capacidade de induzir internalização de receptores não é restrita a receptores recombinantes. Além disso, houve forte correlação entre os log(/KA) de agonistas de 1-adrenoceptores em receptores nativos do rato e humanos recombinantes / Abstract: Agonists induce or stabilize different conformations of 7 transmembrane domain receptors leading to differential modulation of receptor activities, a phenomenon known as collateral or pluridimentional efficacy, functional selectivity or biased agonism. This study investigates if some ligands commonly used as 1-adrenoceptors agonists (the phenylethylamines: noradrenaline, dopamine, phenylephrine and methoxamine; and the imidazolines: A61603, oxymetazoline and naphazoline) present biased signaling for Gq protein mediated intracellular calcium mobilization or -arrestin dependent receptor internalization in human recombinant 1A- and 1B-adrenoceptores expressed in HEK293 cells. The biased agonism was determined by equimolar comparison and quantified by transduction ratios (/KA) and coupling efficiency ratios (). Both methods for quantification of biased agonism discriminated similar profiles of functional selectivity in 1A- and 1B-adrenoceptores. In 1A-adrenoceptors, dopamine is biased for internalization, but phenylephrine and A61603 were biased for [Ca2+]i mobilization. On the other hand, all imidazolines were biased agonists for internalization of 1B-adrenoceptors. There are functional repercussions of the biased agonism presented by oxymetazoline, as this agonist induced tachyphylaxis in responses mediated by native 1B-adirenoceptors of the rat spleen and human recombinant 1B-adrenoceptors expressed in HEK293 cells, indicating that its ability to induce internalization is not restricted to recombinant receptors. In addition, there was a strong correlation between log(/KA) of 1-adrenoceptor agonists in rat native and human recombinant 1-adrenoceptors / Doutor

Orientador: Sérgio Luís de Carvalho / Banca: Alessandro Minillo / Banca: Cristiano Poleto / Resumo: A contaminação dos ecossistemas aquáticos por compostos farmacológicos intensificou-se nos últimos anos devido ao aumento da produção e ao consumo desenfreado destas substâncias pela população. Estes compostos são encontrados em águas naturais e em efluentes de Estações de Tratamento de Esgoto (ETE), comprovando que sua presença em águas naturais é um indicativo de contaminação por águas residuárias de ETE. A presente pesquisa avaliou a ocorrência de compostos farmacológicos no Córrego da Onça, município de Três Lagoas (MS), bem como as relações específicas entre os pontos de monitoramento do corpo d'água. Assim, foram coletadas mensalmente, em um período de 12 meses amostras de água (1L) em seis pontos distintos representando diferentes seções do córrego. As amostras foram submetidas ao processo de extração em fase sólida e analisadas por cromatografia líquida de alta eficiência. Fármacos como atenolol, diclofenaco, ibuprofeno, naproxeno, paracetamol e piroxicam foram detectados nos pontos de coleta do corpo d'água. Com auxílio de uma ferramenta estatística, os pontos amostrais foram reunidos em duas classes, observando-se maior similaridade entre P1(Lagoa do Meio) e P2 (Lagoa Maior), e entre P4 (Jusante da ETE) e P5 (Novas Nascentes). Os resultados evidenciam a contaminação no córrego por compostos farmacológicos, possivelmente devido aos indícios de ligações clandestinas de esgoto sanitário e/ou não eficiência do sistema utilizado pela ETE do município de Três Lagoas. / Abstract: The contamination of aquatic ecosystems by pharmacological compounds has intensified in recent years due to increased production and consumption of these substances by population. These compounds are found in natural waters and effluents from sewage treatment plants (WTP), confirming that their presence in natural waters is indicative of contamination by wastewater from WTP. This study investigated the occurrence of pharmacological compounds in the Stream of Onça at TrêsLagoas (MS), and the specific relationships between the monitoring points of the waterbody. Water samples were collected monthly, over a period of 12 months (water samples 1L) at six different points representing different sections of the stream. The samples were subjected to the process of solid phase extraction and analyzed by high performance liquid chromatography. Drugs such as atenolol, diclofenac, ibuprofen, naproxen, paracetamol and piroxicam were detected in the sampling points of the waterbody. A statistical tool aided to divide the sites into two classes, with a greater similarity between P1 (Middle Pond) and P2 (Major Pond), and between P4 (Downstream of WTP) and P5 (New springs). The results show that the stream contamination by pharmacological compoundsis an indication of illegal connections of sanitary sewer and/or inefficiency of the system used by WTP of Três Lagoas (MS). / Mestre

Orientador: Carlos Magno Castelo Branco Fortaleza / Banca: Lenice do Rosário de Souza / Banca: Sueli Aparecida Calvi / Banca: Rodrigo Nogueira Angerami / Banca: Mariangela Ribeiro Resende / Resumo: A Leishmaniose Visceral Americana (LVA) é uma doença de letalidade significativa e em disseminação no território brasileiro. É causada pela Leishmania infantum chagasi, parasita transmitido por artrópodes (Lutzomyia longipalpis) e tem como reservatórios cães e animais silvestres. Embora endêmica em zonas rurais das Regiões Nordeste, Norte e Centro-Oeste do País há várias décadas, a LVA tem emergido como doença urbana (muitas vezes epidêmica), em áreas anteriormente não afetadas. Nestas últimas, está o Estado de São Paulo, onde os primeiros casos autóctones foram detectados em 1999. As opções terapêuticas para LVA são escassas, e associadas a frequentes recidivas e eventos adversos. Há grande tradição em seu tratamento com antimoniais pentavalentes (mais especificamente o antimoniato de N-metil glucamina). Mais recentemente, as formulações de anfotericina B (deoxicolato e lipossomal), tem sido indicadas para quadros mais severos. No entanto, faltam ensaios clínicos que embasem essa superioridade no tratamento de LVA, e muitas das indicações são feitas por analogia com pesquisa realizada na Índia, África ou Europa. O estudo foi planejado para preencher esse hiato na pesquisa clínica relativa à LVA. Tratou-se de ensaio clínico aberto, multicêntrico, envolvendo instituições nos Estados do Pará, Maranhão e São Paulo. Foram incluídos pacientes com diagnóstico parasitológico de LVA que manifestaram aceite em participar por meio de Termo de Consentimento Livre e Esclarecido (TCLE) aplicado aos próprios sujeitos ou aos seus representantes legais. Foram excluídos pacientes co-infectados pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV), portadores de neoplasia, usuários de imunossupressores, gestantes e aqueles para os quais os guias terapêuticos do Ministério da Saúde (MS), ou das Secretarias Estaduais da Saúde recomendavam o uso da anfotericina B - definição que abrangia aqueles sujeitos com ... / Abstract: American Visceral Leishmaniasis (AVL) is a disease that causes significant mortality. Since the past two decades it is disseminating widely in Brazil. Its etiologic agent is Leishmania infantum chagasi, a vector-borne parasite. Traditionally, AVL was regarded as an endemic disease in Northern and Northeastern States, but it has emerged in urban areas and in Southeastern States. In São Paulo State, autochtonous cases occur since 1999. Therapeutic options for AVL are scarce, and all leishmanicidal drugs are associated with failures, relapses and serious adverse events. Meglumine antominiate has been the first-line therapy in Brazil for many decades. Lately, amphotericin B deoxycholate or in liposomal formulation have been recommended for more severe cases. However, those data are extrapolated from studies conducted in India, Africa and Europe. The study was designed to fulfill this gap. It was a multicenter, randomized, open-label study that compare the efficacy and safety of three therapeutic options: meglumine antimoniate, amphotericin B deoxycholate and liposomal amphotericin B. Patients with parasitological confirmation of AVL were included. Those that were coinfected with HIV or who had immune-supressing conditions or pregnancy were excluded. We also excluded those for whom governmental guidelines recommended the use of amphotericin B. Patients were followed with physical examination and laboratory tests on days 0, 3 , 14, 30, 90 and 180. We included 59 subjects, 33 of whom completed follow-up (11 in each arm). Clinical response was similar for all groups. However, those receiving amphotericin were more likely to have early recovery of hemoglobin dosage and white cell counts, as well as serum albumin. There was a discrete tendency of better response with liposomal amphotericin. Nephrotoxicity was striking among those receiving amphotericin deoxycholate (42%), an incidence significantly higher than that observed with the other ... / Doutor

Orientador: Maria Palmira Daflon Gremião / Banca: Pedro Canísio Binsfeld / Banca: Marco Vinícius Chaud / Banca: Marlus Chorilli / Banca: Beatriz Stringhetti Ferreira Cury / Resumo: A nanotecnologia tem evoluído rapidamente em diversas áreas, incluindo na área farmacêutica. Para produtos sujeitos à regulação sanitária, em especial medicamentos, esta evolução é um desafio regulatório. Embora já existam medicamentos base nanotecnológica disponíveis no mercado, existem importantes lacunas regulatórias que precisam ser preenchidas. Assim, frente à importância e ao impacto deste tema, foi realizada uma pesquisa científica-regulatória de modo a propor bases para a construção de um arcabouço regulatório, em especial para a regulação de medicamentos de base nanotecnológica. Ficou evidente que não existe, a nível mundial, diretrizes únicas para este tipo de regulação, iniciando pela ausência de consenso no conceito de "nanomaterial". Percebe-se como consenso internacional que a complexidade e diversidade que cerca os nanomateriais exigem abordagens diferenciadas daquelas empregadas em produtos tradicionais, requerendo avaliações caso a caso e abordagens para avaliar os novos riscos introduzidos. Dessa forma, este trabalho avaliou as metodologias Quality by Design (QbD) e Gerenciamento de Riscos como alternativas para a construção do modelo regulatório. QbD e Gerenciamento de Riscos facilitam, compilam, direcionam e sistematizam o conhecimento e assim, por meio do desenvolvimento de produtos robustos, seguindo as etapas previstas no QbD, inclusive com a construção e sedimentação do Perfil de Qualidade Alvo do Produto e de Atributos Críticos a Qualidade, constituem... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Nanotechnology has evolved rapidly in diverse areas, which include the pharmaceutical field. For products subject to sanitary regulation, especially drugs, this evolution is a regulatory challenge. Although there are nanotechnological drugs available in the market, there are important regulatory gaps that must be completed. Thus, in view of the importance and impact of the object, a scientific-regulatory research was carried out in order to propose bases for a regulatory framework, particularly for a regulation of nanotechnological drugs. It became clear that there is no a worldwide guidance for this type of regulation, starting with the lack of consensus for the concept of "nanomaterial". It has been noticed as an international consensus that the complexity and diversity surrounding nanomaterials require different approaches from those used in traditional products, demanding case-by-case evaluation and approaches to assess new introduced risks. Thus, this work evaluated Quality by Design (QbD) and Risk Management methodologies as alternatives for the construction of the regulatory model. QbD and Risk Management facilitate, compile, direct and systematize knowledge and thus, through a robust product development, following as expected by QbD steps - including a construction and sedimentation of the Product Target Quality Profile and Critical Quality Attributes - become important tools for building quality in nanotechnology-based drugs. Risk Management, especially the risk anal... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor