A obesidade é considerada uma doença multifatorial e pode envolver, em sua gênese, aspectos genéticos, metabólicos, ambientais, psicológicos e socioeconômicos. O crescimento expressivo da incidência mundial da obesidade desencadeia o surgimento contínuo de novas pesquisas em relação a esse tema e, nesse contexto, estudos recentes sugerem que a microbiota intestinal é um fator que pode contribuir com o desenvolvimento desta doença. Assim, existe a premissa que a alteração da composição da microbiota intestinal pode ser influenciada pelo estado nutricional (obesidade x eutrofia) e pela qualidade da alimentação. O presente estudo teve como objetivos: i. comparar a proporção dos filos predominantes da microbiota intestinal Firmicutes, Bacteroidetes, Actinobacteria, Proteobacteria, Verrucomicrobia e a razão Firmicutes/Bacteroidetes entre mulheres com obesidade grau III e mulheres eutróficas, e ii. investigar o impacto de uma dieta hipocalórica para perda de peso na composição da microbiota intestinal. Estudo prospectivo longitudinal, no qual foram selecionadas 20 mulheres com média de idade 33±3,1 anos, as quais foram divididas em dois grupos: Grupo Intervenção (GI): 10 mulheres com obesidade grau III (Índice de Massa Corporal (IMC) >40 kg/m2) que foram submetidas à intervenção nutricional (dieta hipocalórica) durante 8 semanas e Grupo Controle (GC):10 mulheres eutróficas (IMC entre 18,5 a 24,9 kg/m2). No GI, as coletas foram realizadas antes e após oito semanas da intervenção (GI) e, no GC em um único momento. Em cada momento, foram aferidos o peso e estatura; realizado o cálculo do IMC, análise composição corporal, taxa metabólica de repouso, consumo alimentar, glicemia e lipidograma, e coleta de amostra fecal. A análise da composição da microbiota intestinal em relação à abundância relativa dos Filos foi realizada por reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR). Após oito semanas de dieta hipocalórica, houve redução do peso (119,5±10,3 para 114,9±10,2 kg), IMC (43,6±2,4 para 41,9±2,6 kg/m2), massa corporal gorda (MG) (62,4±7,5 para 58,9±7,7 kg), triglicérides (TG) (143,2±60,9 para 117,94±48,3 mg/dL). Evidenciou-se que mulheres com obesidade apresentam menor abundância dos filos pesquisados em relação às eutróficas. Ainda, a dieta hipocalórica promoveu diminuição da abundância relativa do filo Proteobacteria, o qual apresentou correlações positivas com a ingestão de lipídio total (%), ômega 6 (g). Conclui-se que a intervenção com dieta hipocalórica foi eficaz na redução de peso, IMC, MG e TG e na modulação da microbiota intestinal, com a diminuição do filo Proteobacteria / Obesity is considered a multifactorial disease and it may involve, in its genesis, genetic, metabolic, environmental, psychological and socioeconomic aspects. The expressive growth of a worldwide incidence of obesity triggers the continual emergence of new researches on this subject and, in this context, recent studies have suggested that the intestinal microbiota is a factor that may contribute to the development of this disease. Thus, there is the premise that the changes in the composition of the intestinal microbiota can be influenced by the nutritional status (obesity x eutrophy) and by the diet quality.The present study aimed at: i. comparing the proportion of the predominant phyla of the intestinal microbiota Firmicutes, Bacteroidetes, Actinobacteria, Proteobacteria, Verrucomicrobia and ratio Firmicutes/Bacteroidetes among degree III obese women and eutrophic women, and ii. investigating the impact of a low-calorie diet for weight loss on the intestinal microbiota composition. This was a longitudinal prospective study in which 20 women at the average age of 33 ± 3.1 years old were selected and divided into two groups: Intervention Group (IG): 10 women with grade III obesity (Body Mass Index (BMI) > 40 kg / m2) who were submitted to a nutritional intervention (a low-calorie diet) for 8 weeks, and the Control Group (CG): 10 eutrophic women (BMI from 18.5 to 24.9 kg / m2) who were not submitted to any intervention. In the IG, sampling was carried out before and after the eight-week intervention (IG) and in the CG it was carried out only in a single moment. At each sampling, weight and height were checked; BMI was calculated, body composition was analyzed, resting metabolic rate, food intake, fasting blood glucose, and lipidogram tests were performed, and fecal sample collected. The analysis of the intestinal microbiota composition in relation to a relative abundance of every phila was performed by real-time polymerase chain reaction (qPCR). After eight weeks of a low-calorie diet, some of the observed results were weight reduction (119.5 ± 10.3 to 114.9 ± 10.2 kg), BMI (43.6 ± 2.4 to 41.9 ± 2.6 kg / m2), fat body mass (FM) (62.4 ± 7.5 to 58.9 ± 7.7 kg), triglycerides (TG) (143.2 ± 60.9 to 117.94 ± 48.3 mg / dL). It was evidenced that obese women present a lower abundance of the studied phyla in relation to the eutrophic ones. Moreover, the lowcalorie diet promoted a decrease in the relative abundance of Proteobacteria phylum, which presented positive correlations with the intake of total lipid (%) and omega 6 (g). It was concluded that the intervention with a low-calorie diet was effective in reducing BMI, FM and TG and in modulating the intestinal microbiota, by reducing Proteobacteria phylum

The present study aimed to develop a fermented soy beverage containing fruit by-products and probiotics and to evaluate the impact of this product on the composition and metabolic activity of the human intestinal microbiota using an in vitro simulation model of the intestinal conditions (TIM-2). Therefore, the present study was divided into three stages. Stage I was based on obtaining, processing and physical-chemical, microbiological and functional characterization of fruit by-products (acerola, orange, mango, and passion fruit) and soybean (okara), as well as amaranth flour. Additionally, the ability to use these vegetable by-products and amaranth flour by probiotic and non-probiotic strains was evaluated. The results showed that the acerola byproduct presented the highest dietary fibre content (48.46 g/100 g) among the by-products tested, as well as amaranth flour. Orange and passion fruit by-products were the substrates that most promoted the growth of bacterial populations, including strains of Escherichia coli and Clostridium perfringens. On the other hand, the acerola by-product was the substrate that showed the highest selectivity for beneficial bacteria. Also, in this stage, ten probiotic strains (seven lactobacilli and three bifidobacteria) and three starter strains (Streptococcus thermophilus) were tested for their ability to deconjugate bile salts and for proteolytic activity against milk and soy proteins. The results showed that none of the tested strain showed proteolytic ability against milk and soybean proteins. In addition, the probiotic strains Lactobacillus acidophilus LA-5 and Bifidobacterium longum BB-46 deconjugated more types of bile acids tested, and the strains of S. thermophilus tested showed no ability to deconjugate bile salts. Next, the acerola by-product (ABP) and the probiotic strains LA-5 and BB-46 were selected to continue stage II of the study (development of a fermented soy beverage). For this purpose, a 23 factorial design was used, in a total of 8 trials with three replicates of each one, and the effects of the probiotic strains and the acerola by-product on the physical-chemical, microbiological, and sensory characteristics of these fermented soy beverages were evaluated. At the same time, probiotic viability and survival under in vitro gastrointestinal (GI) simulated conditions were evaluated in fermented soy beverage (FSB). The results showed that the presence of BB-46 and ABP affected the sensory acceptability of FSB negatively. ABP also led to significant differences in the texture profile of the FSB (P<0.05). Populations of probiotic strains ranged from 7.0 to 8.2 log CFU equivalent/mL during 28 days of refrigerated storage (4° C) of FBS, and the co-culture (LA-5+BB-46) and the ABP did not affect the viability of both microorganisms significantly (P> 0.05). However, ABP increased the survival of BB-46 under in vitro simulated GI conditions significantly. For stage III, a 22 experimental design was performed. To evaluate the impact of these FBS on the composition and metabolic activity of the intestinal microbiota of lean and obese humans, a validated in vitro model called TIM-2 was used, available at the Maastricht University (Venlo, The Netherlands), which simulates normal conditions of the lumen of the proximal colon, with all parameters controlled by a computer. Samples were collected from TIM-2 to quantify probiotic microorganisms (LA-5 and BB-46), Lactobacillus spp., Bifidobacterium spp., and total bacteria, using the quantitative PCR method (qPCR) and the intestinal microbiota profile was determined using an Illumina Mysec Next Generation Sequencing (NGS) method. Concentrations of shortchain fatty acids and branched-chain fatty acids and lactate produced by the different microbiotas during fermentation in TIM-2 were also determined. The results showed that the lean microbiota presented the high production of acetate and lactate than the microbiota of obese individuals. Significant reductions in Bifidobacterium populations in the lean microbiota were observed at 0 and 48 h of an assay for all experimental meals, except for the meal that had the probiotic combination (LA-5 and BB-46) and the ABP supplementation, which showed an increased total Bifidobacterium and Lactobacillus populations throughout the experimental period for both microbiotas tested. The FSB supplemented with ABP presented the best characteristics regarding the modulation of the obese microbiota, with an increase in Bifidobacterium spp. and Lactobacillus spp. Additionally, after 48 hours of intervention in TIM-2, the obese microbiota was apparently similar to the lean microbiota, showing a beneficial modulation of this microbiota. The results suggest that the fermented soy beverage supplemented with the acerola by-product and the probiotic strains may present beneficial health effects. However, clinical studies are required to complement and confirm the results observed in the in vitro assays. / O presente trabalho visou desenvolver uma bebida fermentada de soja adicionada de resíduos de frutas e suplementada com cepas probióticas e avaliar o impacto desse produto sobre a composição e a atividade metabólica da microbiota intestinal humana, utilizando um modelo de simulação in vitro das condições intestinais (TIM-2). Para tanto, o presente trabalho foi dividido em três etapas. A etapa I foi baseada na obtenção, processamento e caracterização físico-química, microbiológica e funcional de subprodutos de frutas (acerola, laranja, manga e maracujá) e soja (okara), bem como da farinha de amaranto. Adicionalmente, a capacidade de utilização desses subprodutos vegetais e da farinha de amaranto por cepas probióticas e não probióticas foi avaliada. Os resultados mostraram que o subproduto de acerola apresentou o maior conteúdo de fibras alimentares totais (48,46 g/100 g) dentre os subprodutos testados, bem como a farinha de amaranto. Os subprodutos de laranja e maracujá foram os substratos que mais promoveram a multiplicação das populações bacterianas, incluindo das cepas de Escherichia coli e Clostridium perfringens. Por outro lado, o subproduto de acerola foi o substrato que apresentou a maior seletividade para bactérias benéficas. Ainda nessa etapa, dez cepas probióticas (sete lactobacilos e três bifidobacterias) e três cepas starter (Streptococcus thermophilus) foram testadas quanto à sua capacidade de desconjugação de sais biliares e atividade proteolítica frente às proteínas do leite e da soja. Os resultados revelaram que nenhuma cepa testada apresentou capacidade de proteólise das proteínas do leite e da soja. Adicionalmente, as cepas probióticas Lactobacillus acidophilus LA-5 e Bifidobacterium longum BB-46 desconjugaram a maior quantidade de ácidos biliares testados e as cepas de S. thermophilus testadas não apresentaram capacidade de desconjugação de sais biliares. Após a análise dos resultados da etapa I, o resíduo de acerola (ABP) e as cepas probióticas LA-5 e BB-46 foram selecionadas para dar continuidade à etapa II do estudo(desenvolvimento de uma bebida fermentada a base de soja). Para esse fim, foi utilizado um delineamento experimental do tipo fatorial 23, totalizando 8 ensaios com três repetições de cada, e foram avaliados os efeitos das cepas probióticas e do subproduto de acerola sobre as características físico-químicas, microbiológicas e sensoriais dessas bebidas fermentadas de soja. Paralelamente, foram realizadas análises da sobrevivência das cepas probióticas frente às condições gastrintestinais simuladas in vitro nas bebidas fermentadas de soja (FSB). Os resultados mostraram que a presença de BB-46 e ABP afetaram negativamente a aceitabilidade sensorial das FSB. O ABP também levou a diferenças significativas no perfil de textura das FSB (P<0,05). As populações das cepas probióticas nas diferentes formulações de FSB variaram de 7,0 a 8,2 log de UFC equivalente/mL durante os 28 dias de armazenamento (4 ºC) e a co-cultura (LA-5+BB-46) e o ABP não afetaram (P>0,05) a viabilidade de ambos os microrganismos. No entanto, ABP aumentou significativamente a sobrevivência de BB-46 frente às condições gastrintestinais sumuladas in vitro. Para a etapa III do presente estudo, um delineamento experimental fatorial 22 foi realizado. Para a avaliação do impacto dessas FSB sobre a composição e atividade metabólica da microbiota intestinal de humanos eutróficos e obesos, foi utilizado um modelo in vitro TIM-2 na Maastricht University (Venlo, Holanda), que simula as condições normais do lúmen do cólon proximal, com todos os parâmetros controlados por um computador. Amostras foram coletadas do TIM-2 para a quantificação dos microrganismos probióticos (LA-5 e BB-46), Lactobacillus spp., Bifidobacterium spp. e bactérias totais, utilizando o método de PCR quantitativo (qPCR), e o perfil da microbiota intestinal foi determinado utilizando Next-Generation Sequencing (NGS) Illumina Mysec. A concentração de ácidos graxos de cadeia curta e de cadeia ramificada e lactato produzidos pelas diferentes microbiotas durante a fermentação no TIM-2 também foi determinada. Os resultados mostraram que a microbiota de humanos eutróficos apresentou uma alta produção de acetato e lactato em comparação com a microbiota de obesos. Reduções significativas das populações de Bifidobacterium na microbiota de eutróficos foram observadas entre 0 e 48 h de ensaio para todas as refeições experimentais, exceto para a refeição que apresentou a combinação probiótica (LA-5 e BB-46) e a suplementação com ABP, que apresentou aumento de Bifidobacterium e Lactobacillus totais durante todo o período de análise para ambas as microbiotas testadas. As FSB suplementadas com ABP apresentaram os melhores resultados em relação à modulação da microbiota de humanos obesos, com o aumento Bifidobacterium spp. e Lactobacillus spp. Adicionalmente, após 48 horas de intervenção no TIM-2, a microbiota de obesos foi aparentemente similar à microbiota de eutróficos, mostrando uma modulação benéfica dessa microbiota. Os resultados sugerem que as bebidas fermentadas de soja suplementadas com o subproduto de acerola e cepas probióticas podem apresentar efeitos benéficos à saúde. No entanto, estudos clínicos são necessários para complementar e confirmar os resultados observados nos ensaios in vitro.

Foram utilizados 160 leitões recém-desmamados, com peso médio inicial de 6,43 ± 0,71 kg, com o objetivo de avaliar os efeitos dos nucleotídeos sobre o desempenho, a frequência de diarreia, a morfometria de órgãos, a histologia do epitélio intestinal e a microbiota intestinal. Foram testados cinco tratamentos em um experimento em blocos casualizados, com oito repetições (blocos) por tratamento e quatro animais por unidade experimental (dois machos castrados e duas fêmeas). Os tratamentos foram: dieta basal à base de milho, farelo de soja, derivados lácteos e plasma com inclusão de 120 ppm de clorohidroxiquinolina (antimicrobiano) e dieta basal contendo 0, 100, 150 e 200 ppm de nucleotídeos. Para a determinação das variáveis de desempenho, os animais foram pesados ao 1º, 14º e 34º dia de experimentação e foram quantificadas as rações fornecidas e desperdiçadas. Para avaliar a frequência de diarreia, foram observadas presença e ausência de diarreia na baia, diariamente, no período da manhã. Ao final do experimento, um animal de cada baia (unidade experimental) foi abatido para avaliação da morfometria de órgãos (estômago vazio, intestino delgado vazio, pâncreas, fígado e baço) e da histologia do epitélio intestinal (altura e largura de vilosidade, profundidade de cripta, relação altura de vilosidade: profundidade de cripta), além da coleta de amostras do conteúdo do duodeno e do jejuno para avaliação da microbiota intestinal dos leitões (mesófilos, Gram positivos totais, Gram negativos totais, Lactobacillus spp., Escherichia coli, Salmonella spp., Staphylococcus aureus e Clostridium perfringens). No período de 1 a 14 dias de experimentação, as variáveis de desempenho não foram influenciadas (P>0,05) pelos tratamentos. Para o período total (1 a 34 dias), houve efeito linear benéfico da inclusão dos nucleotídeos no peso final (P=0,005; P34 = 0,0033X + 23,657, R2 = 0,87) e no ganho diário de peso (P=0,008; GDP = 0,0002X + 0,4955, R2 = 0,83) dos animais. Os leitões alimentados com o antibiótico tiveram menor (P=0,049) frequência de diarreia comparados aos animais alimentados com nucleotídeos no período de 1 a 14 dias de experimentação. Por outro lado, no período de 1 a 34 dias de experimentação, os tratamentos não afetaram (P>0,05) a frequência de diarreia, a morfometria de órgãos, a histologia do epitélio intestinal e a microbiota intestinal. Assim, de maneira geral, a inclusão de até 200 ppm de nucleotídeos em dietas complexas para leitões recém-desmamados melhora o desempenho dos animais, sem afetar a frequência de diarreia, a morfometria de órgãos, a histologia do epitélio intestinal e a microbiota intestinal de leitões na fase de creche. / The purpose of this study was to evaluate the effects of dietary nucleotide levels on performance, occurrence of diarrhea, organ morphometry, intestinal histology and intestinal microbiota of weanling pigs fed complex diets containing corn, soybean meal, milk products, and spray-dried plasma. One hundred and sixty 21d-weaned pigs, averaging 6.43 ± 0.71 kg BW, were used in a randomized complete block design experiment with 5 treatments, 8 replications (blocks) per treatment and 4 animals per experimental unit (pen). The treatments were: basal diet with 120 ppm of chloro-hydroxyquinoline (antimicrobial treatment), and basal diet with 0, 100, 150, and 200 ppm of nucleotides. The ADG, ADFI, G:F and occurrence of diarrhea were calculated during 1 to 14 and 1 to 34 d of experimental period. A day after the end of the experimental period, an animal from each pen was slaughtered to evaluate of organ morphometry (empty stomach, empty small intestine, pancreas, liver and spleen), intestinal histology (villus height, villus width, crypt depth and villus height-to-crypt depth ratio), and intestinal microbiota (mesophiles, Gram-positive bacteria, Gram-negative bacteria, Lactobacillus spp., Escherichia coli, Salmonella spp., Staphylococcus spp., and Clostridium perfringens). During 1-14 d of experimental period, performance was not affected (P>0.05) by treatments. For the total experimental period (1-34 d), beneficial linear effects of dietary levels of nucleotides on final BW (P=0.005; BW = 0.0033X + 23.657, R2 = 0.87) and ADG (P = 0.008; ADG = 0.0002X + 0.4955, R2 = 0.83) were observed, but not (P>0.05) on ADFI and G:F. Pigs fed antimicrobial treatment had lower (P=0.049) occurrence of diarrhea from d 1 to 14 than those fed nucleotide treatments. However, for the total experimental period (1-34 d), treatments did not affect (P>0.05) occurrence of diarrhea, organ morphometry, intestinal histology and intestinal microbiota. Therefore, adding up to 200 ppm of dietary nucleotides to complex diets for weanling pigs showed beneficial effect on growth performance, without affecting organ morphometry, intestinal histology, intestinal microbiota and occurrence of diarrhea of nursery pigs.

O trato gastrointestinal é um sítio de alta exposição antigênica, por isso requer a presença de mecanismos de regulação imunológica mediada por linfócitos T reguladores e T auxiliares produtores de IL-17 (Th17) na mucosa intestinal. Se houvera falha na indução desses mecanismos, pode ocorrer o desequilíbrio das populações de bactérias comensais da microbiota intestinal, denominado de disbiose, geralmente associado à ruptura da barreira intestinal e translocação de bactérias ou LPS para o sangue. Neste sentido, alguns estudos têm evidenciado a importância dos linfócitos Th17 no intestino, já que estas células tem a capacidade de manter a integridade da barreira intestinal e, como conseqüência controlar a colonização e translocação bacteriana. Em adição, em pacientes e animais diabéticos têm sido observada a correlação de altos níveis de LPS circulantes e resistência à insulina. Baseado nessas evidências, nosso objetivo foi avaliar o papel da citocina IL-17 no controle das alterações inflamatórias e metabólicas no modelo de diabetes do tipo 2 (DM2). Para isso, foram utilizados camundongos C57BL/6 selvagens (WT) ou deficientes do receptor da citocina IL-17 (IL-17R-/-) submetidos à dieta controle (DN), composta por 10% de gorduras, 70% de carboidratos e 20% de proteínas ou à dieta hiperlipídica (DH), composta por 60% de gorduras, 20% de carboidratos e 20% de proteínas. Nossos dados demonstraram que a deficiência do receptor de IL-17 protegeu os animais contra a obesidade, mas os mesmos desenvolveram maior hiperglicemia e hiperinsulinemia decorrente da resistência à insulina. Além disso, foi verificada a hiperplasia das ilhotas pancreáticas, anormalidades na arquitetura e intenso infiltrado inflamatório no intestino (íleo) dos animais IL-17R-/- comparados aos WT após DH. Esse fato parece estar correlacionado a um defeito da migração de neutrófilos para a mucosa intestinal, uma vez que foi detectada reduzida expressão gênica da quimiocina CXCL-1 e do receptor CXCR-2 no íleo desses animais. De maneira interessante, as populações de neutrófilos (CD11b+Ly6G+) e de macrófagos anti-inflamatórios (CD11b+CX3CR1+) mostraram-se aumentadas nos linfonodos mesentéricos dos animais IL-17R-/- após DH. Em seguida, foi constatada maior translocação bacteriana no sangue tanto de animais IL-17R-/- submetidos à DN como DH. Entretanto, a análise metagenômica do gene 16S revelou a prevalência de bactérias Bacteroidetes e Proteobacterias, principais representantes de bactérias gram-negativas, somente nas fezes dos animais IL-17R-/- submetidos à DH. Em conjunto, estes dados indicam que o eixo IL-17/IL-17R é importante na manutenção da homeostase intestinal e na regulação das alterações inflamatórias e metabólicas associadas ao DM2 / The gastrointestinal tract is a high antigenic exposure site, so it requires the presence of immune regulation mechanisms mediated by regulatory T lymphocytes and IL-17- producing T helper lymphocytes (Th17) in the intestinal mucosa. If there is a failure in the induction of these mechanisms, may occur the imbalance in the populations of commensal bacteria of the intestinal microbiota, called dysbiosis, generally associated with the break of the intestinal barrier and translocation of bacteria or their products like LPS into the blood. In this regard, some studies have evidenced the importance of Th17 lymphocytes in the intestine, since these cells have the ability to maintain the integrity of the intestinal barrier, and consequently controlling the colonization and bacterial translocation. In addition, in patients and diabetic animals have been observed correlation between high circulating levels of LPS and insulin resistance. Based on this evidence, our objective was to evaluate the role of IL-17 cytokine in the control of inflammatory and metabolic changes in the type 2 diabetes (T2DM). For this reason, were used C57BL/6 wild-type mice (WT) or lacking of IL-17 cytokine receptor (IL-17R-/-) mice undergoing to the control diet (ND) comprising 10% fat, 70% carbohydrate and 20% protein or high fat diet (DH), comprising 60% fat, 20% carbohydrates and 20% protein. These data demonstrate that IL-17 receptor deficiency protected the animals against obesity, but these mice developed hyperglycemia and hyperinsulinemia due to insulin resistance. Furthermore, we verified a hyperplasia of the pancreatic islets, abnormalities in architecture and intense inflammation in the intestine (ileum) of IL-17R-/- animals undergoing DH compared to WT. This appears to be correlated to a defect in the neutrophil migration to the intestinal mucosa, since was detected reduced gene expression of the CXCL-1 chemokine and CXCR-2 receptor in the ileum of these animals. Interestingly, the populations of neutrophils (CD11b+Ly6G+) and antiinflammatory macrophages (CD11b+CX3CR1+) were shown to be increased in the mesenteric lymph nodes of IL-17R-/- animals after DH. Later, it was found more bacterial translocation in blood, both in IL-17R-/- mice with ND or DH. However, the metagenomic analyzes of the 16S gene revealed increased of Proteobacteria and Bacteroidetes phyla, the main representatives of gram-negative bacteria, only in the faeces of IL-17R-/- mice underwent DH. Together, these data indicate that IL-17/IL-17R axis is important in maintaining intestinal homeostasis and the regulation of inflammatory and metabolic alterations associated to T2DM

De todas as influências exógenas que possam alterar a microbiota intestinal, os antimicrobianos são capazes de causar as mais rápidas e drásticas mudanças. O impacto da exposição aos antimicrobianos na microbiota intestinal causa diminuição no número de microrganismos ou mesmo supressão, dependendo do antimicrobiano utilizado, da dose e do tempo de exposição. Assim, o objetivo deste estudo foi analisar de forma comparativa alguns microrganismos que compõem a microbiota fecal de crianças com e sem antibioticoterapia em idade escolar; bem como avaliar a susceptibilidade aos antimicrobianos e os genes de resistência envolvidos. Foram coletadas amostras fecais não diarreicas de 30 crianças sem antibiótico (controle) e 31 de crianças com antibioticoterapia. Na análise quantitativa foi observada redução no número de cópias por g/fezes de: Bifidobacterium spp., B. fragilis, C. perfringens, E. coli, M. smithii e do filo Firmicutes nas amostras das crianças com antibióticos em relação ao grupo controle, exceto para Lactobacillus spp. e P. distasonis que apresentaram quantificação maior no grupo antibióticos quando comparados com o controle. E. coli foi isolada em 26 (86,7%) crianças controles e em 23 (74,2%) tratadas com antibióticos. A resistência foi verificada para diversas drogas no grupo controle exceto para ciprofloxacina, meropenem e tigeciclina; entretanto o grupo com antibioticoterapia apresentou elevada resistência para todas as drogas avaliadas, caracterizando os isolados desse estudo como MDR. Todos os isolados do grupo controle e antibióticos albergaram diversos genes de resistência, entretanto o gene blaKPC foi o único não detectado nos isolados do grupo controle. Desta forma, nossos dados demonstram que a antibioticoteria causa alterações qualitativas e quantitativas na microbiota intestinal; além disso, a elevada resistência as diversas classes de antimicrobianos das cepas de E. coli, bem como a presença de diversos genes de resistência ressalta a importância de cepas comensais serem MDR e albergarem esses genes. / Of all the exogenous influences that may alter the intestinal microbiota, antimicrobial agents are able to cause the more rapid and dramatic changes. The impact of exposure to antimicrobial agents on intestinal microbiota causes a decrease in the number of certain genera and species, depending on the antimicrobial agent used, dose and duration of exposure. Thus, the aim of this study was to analyze comparatively some microorganisms that composing the fecal microbiota of children with and without antibiotic therapy in school age; and evaluates the antimicrobial susceptibility and resistance genes involved. Stool samples (not diarrhea) were collected of 30 children without antibiotic (control) and 31 children with antibiotic therapy. In quantitative analysis was observed decrease in the number of copies per g/feces: Bifidobacterium spp., B. fragilis, C. perfringens, E. coli, M. smithii and the phylum Firmicutes in samples of children with antibiotic therapy in relation to control group, except Lactobacillus spp. and P. distasonis that showed a higher quantification in the antibiotics group when compared with control group. E. coli was isolated in 26 (86.7 %) children controls and in 23 (74.2 %) children treated with antibiotics. The resistance was verified for several drugs in the control group except for ciprofloxacin, meropenem and tigecycline; however the group with antibiotic therapy showed high resistance to all drugs evaluated, characterizing isolates of this study as MDR. All isolates from control group and antibiotics harbored several resistance genes, however blaKPC gene was the only one not detected in isolates from the control group. Thus, our data demonstrate that the antibiotic therapy cause qualitative or quantitative changes in intestinal microbiota leading to a decrease in the diversity and the elimination of microorganisms; in addition, the high resistance the various classes of antimicrobial of the strains of E. coli, as well as the presence of several genes of resistance highlights the importance of commensal strains are MDR and harboring these genes.

A necessidade de economias sustentáveis tem aumentado o interesse no desenvolvimento de plataformas microbianas para novos processos, tanto para a produção de biocombustíveis quanto para a síntese de compostos que demandam alta capacidade energética e processamento químico em sua produção. O isolamento de microrganismos, capazes de degradação materiais lignocelulósicos, resistentes a diferentes inibidores e com rendimento elevado na biossíntese de moléculas específicas faz-se necessário para atender tais propósitos. Neste trabalho, microrganismos cultiváveis isolados do trato digestivo de larvas dos insetos pragas de cana-de-açúcar, besouro da raiz, Migdolus fryanus, bicudo da cana, Sphenophorus levis, broca-gigante da cana, Telchin licus licus e de broca-da-cana, Diatraea saccharalis, foram caracterizados quanto a atividade enzimática em fontes de carbono e identificados por técnicas moleculares. Larvas no terceiro ínstar de M. fryanus e S. levis e quinto ínstar de T. licus licus e D. saccharalis foram coletadas em plantios de cana-de-açúcar no interior de São Paulo. Um total de 341 microrganismos cultiváveis foram avaliados quanto a capacidade de degradação de substratos lignocelulósicos, como única fonte de carbono em meio sólido usando o índice de atividade enzimática (I.E.). Os isolados foram identificados por sequênciamento das regiões do 16S rRNA para bactérias, ITS rDNA para fungos e 26S rDNA para leveduras. Bactérias com atividade enzimática foram relacionadas aos gêneros do filo Firmicutes Bacillus, Enterobacter Serratia e Citrobacter. Os isolados relacionados à B. amyloliquefaciens destacaram-se na degradação da celulose. Entre fungos filamentosos, leveduras e leveduriformes, a atividade enzimática foi destacada para a degradação da hemicelulose. Fungos filamentosos e leveduras pertencem ao filo Ascomycota e os leveduriformes ao filo Chlorophyta. Fungos que apresentaram hidrólise de xilano foram relacionados aos gêneros Pyrenophora, Aspergillus e Penicillium. As leveduras relacionam-se a nove gêneros, majoitariamente aos gêneros Meryerozyma e Candida. Leveduras com capacidade hidrolítica destacada foram relacionadas à Meyerozyma guilliermondii, Cryptococcus laurentti, Candida pseudointermedia, C. parapsilosis, C. solani e Aureobasidium pullulans. Entre as leveduras, 40 isolados apresentam sequências que diferem em mais de 1% das sequências referência, podendo-se inferir a respeito de possíveis novas espécies. No ensaio cinético, realizado para a triagem de leveduras com capacidade de bioconversão da D-xilose em xilitol e etanol, o maior rendimento em xilitol foi demonstrado pelo microrganismo relacionado à Prototheca zopfi var. hydrocarbonea. A capacidade desse organismo de produzir xilitol não havia sido descrita. Os resultados obtidos nesse trabalho, revelaram que o trato digestivo das pragas de cana-de-açúcar como uma fonte de microrganismos que apresentam capacidade de degradação enzimática para celulose e xilano cujo potencial para utilização na biotecnologia industrial ainda precisa ser revelado / The pursuit for sustainable economies has increased the interest in development of microbial-based platforms for new processes, both for biofuel production and for the synthesis of compounds, which demands high energetic capacity and chemical processing in its production. The isolation of microorganisms capable of degradation of lignocellosic materials, resistant to different inhibitors and highly efficient in the biosynthesis of specific molecules is necessary to achieve such purposes. In this research, cultivable microorganisms isolated from the larval gut of sugarcane pests: sugarcane borer root Migdolus fryanus, sugarcane weevil Sphenophorous levis, giant sugarcane borer Telchin licus licus and sugarcane borer Diathrea saccharalis, were characterized according to their extracellular enzymatic activity in carbon sources and molecularly identified. Third-instar larvae of Migdolus fryanus and S. levis and fifth-instar larvae of T. licus licus and D. saccharalis were collected in sugarcane fields in São Paulo, Brazil. A total number of 341 strains were evaluated for their capacity of degradation of lignocelulitic substrates, as single carbon sources in solid medium. The enzymatic activities of the strains were estimated by Enzymatic Activity Index (EAI); further, the strains were molecularly identified by sequencing of the 16S rRNA region for bacterias; ITS rDNA region for filamentous fungi and 26S rDNA region for yeasts. Bacteria strains which presented enzymatic activity were related to Firmiculites genera Bacillus, Enterobacter, Serratia and Citrobacter. Strains related to B. amyloliquefaciens have demonstrated higher levels of cellulosic degradation. Among filamentous fungi, yeasts and yeast-like organisms higher activity was showed to degradation of hemicelluloses. Filamentous fungi and yeasts belong to phylum Ascomycota, and the yeast-like organisms to phylum Chlorophyta. Six filamentous fungi which presented higher hidrolisys of xylan were related to Pyrenophora, Aspergillus and Penicillium genera. Yeasts were related mostly to the Meryerozyma and Candida genera. Yeasts with higher hydrolysis cababilities were reated to Meyerozyma guilliermondii, Cryptococcus laurentti, Candida pseudointermedia, C. parapsilosis, C. solani e Aureobasidium pullulans. Among the yeasts, 40 strains showed sequences that differ by more than 1% from reference sequences, which allows infering about possible new species. In the kinetic assay carried out for screening for yeasts capable of bioconverting D-xylose into xylitol and ethanol, higher yields of xylitol were obtained for the yeast-like organism related to Prototheca zopfi var. hydrocarbonea. This microorganism\'s ability to produce xylitol had not been reported yet. The results obtained in this work have demonstrated the gut of sugarcane pests as source of microorganisms capable of enzymatic degradation of cellulose and xylan, whose potential for use in the industrial biotechnology has yet to be revealed.

O ácido retinoico (RA), metabolito ativo da vitamina A, exerce ampla atividade biológica sobretudo na modulação da resposta imunológica. A interação do RA com os seus receptores nucleares induz a transcrição de genes que atuam na homeostase de sítios imunológicos, principalmente no tecido linfóide associado à mucosa intestinal (GALT). O RA promove a diferenciação de células T reguladoras CD4&#43CD25&#43Foxp3&#43, a migração de células efetoras para a mucosa intestinal induzindo a expressão de CCR9 e 4&#9467, além de inibir a diferenciação de linfócitos T helper (Th) 17 no intestino, garantindo a homeostase intestinal. Entretanto, eventos mediados pelo RA durante o desenvolvimento do sistema imunológico neonatal ainda não são totalmente conhecidos, principalmente no contexto materno-fetal. Desta forma, o objetivo do trabalho foi avaliar o efeito da suplementação materna com RA, durante a amamentação, no sitema imunológico da prole. Para tanto, camundongos fêmeas C57BL6 Foxp3-GFP receberam 6 doses de RA (1mg/gavagem), durante o período de amamentação, e o grupo controle recebeu apenas óleo vegetal. Os resultados mostram que a suplementação materna com RA foi capaz modular o sistema imunológico da prole aumentando o percentual de linfócitos T reguladores (Treg) esplênicos nas proles com 6 semanas de idade. Além disso, houve aumento percentual de linfócitos Treg, TCD4&#43 e TCD8&#43 que expressam CCR9, tanto no baço quanto nos linfonodos mesentéricos da mães e de suas prole, o que pode proporcionar a migração de células para o intestino. Este efeito foi duradouro nas proles até 6 semanas de idade. A suplementação materna com RA elevou o percentual de linfócitos Treg e linfócitos B IgA&#43 no intestino das proles, e a concentração de imunoglobulina (Ig) A fecal, mas não alterou a composição da microbiota intestinal. Nas mães suplementadas houve redução das concentrações séricas de IgA e IgG. Em contraste com o efeito tolerogênico do RA na lâmina própria do intestino, observamos o aumento sérico de interferon (IFN)- nas proles de mães suplementadas e aumento na secreção de IFN- por esplenócitos induzida por CL097 (agonista de Toll-like receptor 7/8), sugerindo que o RA pode ter um impacto importante na deficiente resposta de perfil Th1 nos neonatos. Para averiguar o efeito modulatório in vivo da suplementação materna de RA, foi avaliada a indução de colite por sulfato de sódio dextrano (DSS) nas proles. Não houve perda de peso acentuado nas proles de mães suplementadas com RA quando comprado às proles de mães controles, além de apresentarem a permeabilidade intestinal conservada e aumento do fator de transformação do crescimento (TGF)- &#946 no homogenato intestinal, indicando menor dano no tecido epitelial do intestino. Apesar disto, o RA não foi capaz de inibir totalmente o processo inflamatório na colite. No conjunto, os achados evidenciam que a suplementação materna com RA foi importante no desenvolvimento da imunidade de mucosa e na manutenção da homeostase intestinal, sendo um importante metabólito para atenuar respostas inflamatórias. A indução sérica de IFN- e após estímulo com CL097 pode indicar o uso de RA como estratégia para potencializar respostas Th1, crucial contra infecções virais e bacterianas no período neonatal. / Retinoic acid (RA), the active metabolite of vitamin A, exerts extensive biological activity mainly in the modulation of the immune response. The interaction of RA with its nuclear receptors induces the transcription of genes that acts on the homeostasis of immunological sites, especially in gut associated lymphoid tissue (GALT). RA promotes the differentiation of CD4&#43CD25&#43Foxp3&#43 regulatory T cells, migration of effector cells to the intestinal mucosa through gut-homing receptors CCR9 and 4&#9467, besides inhibiting the differentiation of T helper (Th) 17 cells in the gut, guaranteeing intestinal homeostasis. However, events mediated by RA during the development of the neonatal immune system are not totally known, especially in the maternal-fetal context. Thus, the aim of the study was to evaluate the effect of maternal RA supplementation during breastfeeding on the immune system of offspring. For this, C57BL/6 Foxp3-GFP female mice with 8-10 weeks-old received 6 doses of RA (1mg / gavage) during the breastfeeding period, and the control group received only vegetable oil. The results show that maternal RA supplementation was able to modulate the offspring immune system by increasing the percentage of splenic regulatory T (Treg) cells in offspring at 6 weeks of age. In addition, there was an enhancement in the CCR9 expression on regulatory T cells and CD4&#43 and CD8&#43 T cells, in the spleen and in the mesenteric lymph nodes of mothers and their offspring, which can provide migration of cells into the gut. This effect was long-term in offspring up to 6 weeks of age. Maternal RA supplementation also increasing the percentage of regulatory T cells and B IgA&#43 cells in the offspring´s gut, beside increasing the fecal immunoglobulin (Ig) A concentration, but did not alter the composition of the intestinal microbiota. In the supplemented mothers, serum concentrations of IgA and IgG were reduced. In contrast to the tolerogenic effect of RA on intestinal lamina propria, we observed a serum increase of interferon (IFN)- in offspring and increasing in CL097(Toll-like receptor 7/8 agonist)-induced IFN- secretion by splenocytes, suggesting that RA may have a significant impact on the deficient Th1 profile response in neonates. To investigate the modulatory effect in of RA maternal supplementation, was evaluated the induction of colitis by dextran sodium sulfate (DSS) in the offspring. There was no significant weight loss in the offspring from mothers supplemented with RA in comparison with the offspring from control mothers, as well as having preserved intestinal permeability and increased transforming growth factor (TGF)- &#946 in the intestinal homogenate, indicating less damage to intestinal epithelial tissue. Despite this, RA was not able to totally inhibit the inflammatory process in colitis. Taken together, the findings show that maternal RA supplementation was important in the development of mucosal immunity and maintenance of intestinal homeostasis, being an important metabolite to attenuate inflammatory responses. Induction of serum IFN- after TLR7/8 (CL097) stimulation may indicate the use of RA as a strategy to potentiate Th1 responses, crucial against viral and bacterial infections in the neonatal period.

Foram utilizados 160 leitões recém-desmamados, com peso médio inicial de 6,43 ± 0,71 kg, com o objetivo de avaliar os efeitos dos nucleotídeos sobre o desempenho, a frequência de diarreia, a morfometria de órgãos, a histologia do epitélio intestinal e a microbiota intestinal. Foram testados cinco tratamentos em um experimento em blocos casualizados, com oito repetições (blocos) por tratamento e quatro animais por unidade experimental (dois machos castrados e duas fêmeas). Os tratamentos foram: dieta basal à base de milho, farelo de soja, derivados lácteos e plasma com inclusão de 120 ppm de clorohidroxiquinolina (antimicrobiano) e dieta basal contendo 0, 100, 150 e 200 ppm de nucleotídeos. Para a determinação das variáveis de desempenho, os animais foram pesados ao 1º, 14º e 34º dia de experimentação e foram quantificadas as rações fornecidas e desperdiçadas. Para avaliar a frequência de diarreia, foram observadas presença e ausência de diarreia na baia, diariamente, no período da manhã. Ao final do experimento, um animal de cada baia (unidade experimental) foi abatido para avaliação da morfometria de órgãos (estômago vazio, intestino delgado vazio, pâncreas, fígado e baço) e da histologia do epitélio intestinal (altura e largura de vilosidade, profundidade de cripta, relação altura de vilosidade: profundidade de cripta), além da coleta de amostras do conteúdo do duodeno e do jejuno para avaliação da microbiota intestinal dos leitões (mesófilos, Gram positivos totais, Gram negativos totais, Lactobacillus spp., Escherichia coli, Salmonella spp., Staphylococcus aureus e Clostridium perfringens). No período de 1 a 14 dias de experimentação, as variáveis de desempenho não foram influenciadas (P>0,05) pelos tratamentos. Para o período total (1 a 34 dias), houve efeito linear benéfico da inclusão dos nucleotídeos no peso final (P=0,005; P34 = 0,0033X + 23,657, R2 = 0,87) e no ganho diário de peso (P=0,008; GDP = 0,0002X + 0,4955, R2 = 0,83) dos animais. Os leitões alimentados com o antibiótico tiveram menor (P=0,049) frequência de diarreia comparados aos animais alimentados com nucleotídeos no período de 1 a 14 dias de experimentação. Por outro lado, no período de 1 a 34 dias de experimentação, os tratamentos não afetaram (P>0,05) a frequência de diarreia, a morfometria de órgãos, a histologia do epitélio intestinal e a microbiota intestinal. Assim, de maneira geral, a inclusão de até 200 ppm de nucleotídeos em dietas complexas para leitões recém-desmamados melhora o desempenho dos animais, sem afetar a frequência de diarreia, a morfometria de órgãos, a histologia do epitélio intestinal e a microbiota intestinal de leitões na fase de creche. / The purpose of this study was to evaluate the effects of dietary nucleotide levels on performance, occurrence of diarrhea, organ morphometry, intestinal histology and intestinal microbiota of weanling pigs fed complex diets containing corn, soybean meal, milk products, and spray-dried plasma. One hundred and sixty 21d-weaned pigs, averaging 6.43 ± 0.71 kg BW, were used in a randomized complete block design experiment with 5 treatments, 8 replications (blocks) per treatment and 4 animals per experimental unit (pen). The treatments were: basal diet with 120 ppm of chloro-hydroxyquinoline (antimicrobial treatment), and basal diet with 0, 100, 150, and 200 ppm of nucleotides. The ADG, ADFI, G:F and occurrence of diarrhea were calculated during 1 to 14 and 1 to 34 d of experimental period. A day after the end of the experimental period, an animal from each pen was slaughtered to evaluate of organ morphometry (empty stomach, empty small intestine, pancreas, liver and spleen), intestinal histology (villus height, villus width, crypt depth and villus height-to-crypt depth ratio), and intestinal microbiota (mesophiles, Gram-positive bacteria, Gram-negative bacteria, Lactobacillus spp., Escherichia coli, Salmonella spp., Staphylococcus spp., and Clostridium perfringens). During 1-14 d of experimental period, performance was not affected (P>0.05) by treatments. For the total experimental period (1-34 d), beneficial linear effects of dietary levels of nucleotides on final BW (P=0.005; BW = 0.0033X + 23.657, R2 = 0.87) and ADG (P = 0.008; ADG = 0.0002X + 0.4955, R2 = 0.83) were observed, but not (P>0.05) on ADFI and G:F. Pigs fed antimicrobial treatment had lower (P=0.049) occurrence of diarrhea from d 1 to 14 than those fed nucleotide treatments. However, for the total experimental period (1-34 d), treatments did not affect (P>0.05) occurrence of diarrhea, organ morphometry, intestinal histology and intestinal microbiota. Therefore, adding up to 200 ppm of dietary nucleotides to complex diets for weanling pigs showed beneficial effect on growth performance, without affecting organ morphometry, intestinal histology, intestinal microbiota and occurrence of diarrhea of nursery pigs.

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Hospital Universitário Antonio Pedro / O uso de probióticos tem sido apontado como estratégia terapêutica promissora na disbiose intestinal presente nos pacientes com doença renal crônica (DRC). Os probióticos emergiram em um contexto no qual a microbiota intestinal se tornou fator importante envolvido na progressão e nas complicações da DRC. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da suplementação com probióticos sobre o perfil da microbiota intestinal e inflamação em pacientes renais crônicos em hemodiálise (HD). Neste estudo radomizado, duplo cego, placebo controlado, 46 pacientes foram recrutados na clínica Renal Vida/RJ para receberem probiótico (n=23; Streptococcus thermophilus, Lactobacillus acidophilus e Bifidobacteria longum - 90 bilhões de Unidades Formadoras de Colônias (UFC) por dia, ou placebo (n=23). Amostras de sangue e fezes foram coletadas no momento inicial e após 3 meses de intervenção. Marcadores inflamatórios plasmáticos como Proteína C-Reativa (PCR) e Interleucina-6 (IL-6),bem como os níveis plasmáticos de lipopolissacarídeos (LPS) foram analisados por ensaio imunoenzimático (ELISA). Os níveis plasmáticos das toxinas urêmicas indoxil sulfato (IS), p-cresil sulfato (p-CS), ácido indol-3-acético (AIA) e trimetilamina n-oxidase (TMAO), além dos compostos colina e betaína, foram obtidos por Cromatografia Líquida de Fase Reversa (RP-HPLC) e o perfil da comunidade microbiana das amostras fecais foi determinado através da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e Eletroforese em Gel com Gradiente Desnaturante (DGGE). Foi realizada avaliação antropométrica e análise da ingestão alimentar através do recordatório de 24h de 3 dias. A análise estatística foi realizada através do programa SPSS 19.0. Permaneceram no estudo até o momento final da intervenção, 16 pacientes do grupo probiótico [11 homens, 53,6 ±11,0 anos, 25,3± 4,6 kg/m2, tempo em HD de 75,1± 53,9 meses] e 17 do grupo placebo [10 homens, 50,3 ±8,5 anos, 25,2 ±5,7 kg/m2, tempo em HD de 52,0 ± 44,7 meses]. Após a intervenção, o número médio de bandas avaliado pelo DGGE não se modificou (de 21,2 ± 4,9 para 22,4 ± 6,7, p=0,62). Observou-se aumento significativo, após suplementação com probiótico, nos níveis plasmáticos de ureia pré-diálise [de 149,6 ±34,2 mg/dL para 172,6 ±45,0 mg/dL (p=0,02)], potássio [de 4,4 ± 0,41 mg/dL para 4,8 ± 0,47 mg/dL (p=0,02)] e IS [de 31,2 ± 15,9mg/dL para 36,5 ± 15,0mg/dL (p=0,02)] e redução significativa do pH fecal [de 7,2 ± 0,8 para 6,5 ± 0,5 (p=0,01)]. Não houve alteração significativa dos níveis de PCR e IL-6.O número médio de bandas apresentou associação negativa com o pH fecal (r= -0,504; p= 0,02). Os níveis de ureia foram preditores independente do número médio de bandas (β= -0,25; p= 0,02). A toxina AIA correlacionou-se negativamente com hematócrito (r= - 0,416; p= 0,043) e foi preditora independente para os níveis de hemoglobina (β= -0,49; p= 0,05). Em conclusão, não se observou mudança no perfil micobiano intestinal e nos níveis de marcadores inflamatórios tradicionais com o uso de probióticos, no entanto, alterações observadas em parâmetros bioquímicos como ureia e IS sugerem que essa terapia pode ser contra-indicada em pacientes com DRC em HD. Além disso, as correlações encontradas reforçam o link entre microbiota intestinal e DRC / Probiotics have been suggested as a promising alternativetherapeutic in treatment of Chronic Kidney Disease (CKD) due to their various health-promoting effects. They emerged in a context in which the intestinal microbiota has become an important factor involved in the progression and complications of CKD. Thus, the aim of this study was to evaluate the effects of oral probiotic supplementation onintestinal microbiota profile and inflammation in CKD patients on hemodialysis (HD). In this randomized, double-blind, placebo-controlled study, 46 patients were recruited from Renal Vida/RJ clinic, to receive probiotic (n= 23; Streptococcus thermophilus, Lactobacillus acidophilus e Bifidobacteria longum- 90 billion CFU per day or placebo (n = 23). Blood and feces were collected at baseline and after 3 months. The inflammatory markers C - reactive protein (CRP)and interleukin-6 (IL-6), and plasma levels of lipopolysaccharides (LPS) were analyzed by Immunoenzymatic Assay (ELISA). Plasma levels of uremic toxins indoxyl sulfate (IS), p-cresil sulfate (p-CS), indole-3-acetic acid (IAA) and trimethylamine n-oxidase (TMAO), and choline and betaine compounds, were obtained by Reverse Phase High Performance Liquid Chromatography (RP-HPLC) and, the profile of the microbial community of fecal samples was determined by Polymerase Chain Reaction (PCR) and Denaturing Gradient Gel Electrophoresis (DGGE). The feces pH was measured by colorimetric method. Anthropometric assessment was carried out, analysis of food intake was assessment by 24-hour recall for 3 days. Statistical analysis was performed using the SPSS 19.0 program.Until the end of the intervention, 16 patients remained in probiotic group [11 men, 53.6 ± 11.0 years, 25.3 ± 4.6 kg/m2, HD times of 75.1± 53.9 months] and 17 in placebo group [10 men, 50.3 ± 8.5 years, 25.2 ± 5.7 kg/m2, HD time of 52.0 ± 44.7 months]. The number of bands was not different after intervention (21.2 ± 4.9 to 22.4 ± 6.7, p=0.62).After probiotic supplementation there was a significant increase on urea plasma levels (from 149.6 ± 34.2 mg/dL to 172.6 ± 45.0 mg/dL, p = 0.02), potassium (from 4.4 ± 0.41 mg/dL to 4.8 ± 0.47 mg/dL, p = 0.02) and IS (from 31.2 ± 15.9 to 36.5 ± 15.0 mg/dL, p = 0.02). Thefecal pH was reduced from 7.2 ± 0.8 to 6.5 ± 0.5 (p = 0.01).There was no significant change in CRP and IL-6 levels. Predialysis urea was an independent predictor of the average number of bands (β = -0.25; p = 0.02). The average number of bands was negatively associated with fecal pH (r = -0.504; p = 0.02). IAA levels were negatively correlated with hematocrit (r = - 0.416, p = 0.043) and were an independent predictor for hemoglobin (β = -0.49; p = 0.05). In conclusion, there was no observed change the intestinal microbial profile and levels of traditional inflammatory markers after probiotics supplementation, however, changes were observed in biochemical parameters and IS plasma lvels, suggesting that this therapy may be contraindicated in CKD patients on HD. In addition, this study showed that there is a strong correlation between gut microbiota and CKD

A necessidade de economias sustentáveis tem aumentado o interesse no desenvolvimento de plataformas microbianas para novos processos, tanto para a produção de biocombustíveis quanto para a síntese de compostos que demandam alta capacidade energética e processamento químico em sua produção. O isolamento de microrganismos, capazes de degradação materiais lignocelulósicos, resistentes a diferentes inibidores e com rendimento elevado na biossíntese de moléculas específicas faz-se necessário para atender tais propósitos. Neste trabalho, microrganismos cultiváveis isolados do trato digestivo de larvas dos insetos pragas de cana-de-açúcar, besouro da raiz, Migdolus fryanus, bicudo da cana, Sphenophorus levis, broca-gigante da cana, Telchin licus licus e de broca-da-cana, Diatraea saccharalis, foram caracterizados quanto a atividade enzimática em fontes de carbono e identificados por técnicas moleculares. Larvas no terceiro ínstar de M. fryanus e S. levis e quinto ínstar de T. licus licus e D. saccharalis foram coletadas em plantios de cana-de-açúcar no interior de São Paulo. Um total de 341 microrganismos cultiváveis foram avaliados quanto a capacidade de degradação de substratos lignocelulósicos, como única fonte de carbono em meio sólido usando o índice de atividade enzimática (I.E.). Os isolados foram identificados por sequênciamento das regiões do 16S rRNA para bactérias, ITS rDNA para fungos e 26S rDNA para leveduras. Bactérias com atividade enzimática foram relacionadas aos gêneros do filo Firmicutes Bacillus, Enterobacter Serratia e Citrobacter. Os isolados relacionados à B. amyloliquefaciens destacaram-se na degradação da celulose. Entre fungos filamentosos, leveduras e leveduriformes, a atividade enzimática foi destacada para a degradação da hemicelulose. Fungos filamentosos e leveduras pertencem ao filo Ascomycota e os leveduriformes ao filo Chlorophyta. Fungos que apresentaram hidrólise de xilano foram relacionados aos gêneros Pyrenophora, Aspergillus e Penicillium. As leveduras relacionam-se a nove gêneros, majoitariamente aos gêneros Meryerozyma e Candida. Leveduras com capacidade hidrolítica destacada foram relacionadas à Meyerozyma guilliermondii, Cryptococcus laurentti, Candida pseudointermedia, C. parapsilosis, C. solani e Aureobasidium pullulans. Entre as leveduras, 40 isolados apresentam sequências que diferem em mais de 1% das sequências referência, podendo-se inferir a respeito de possíveis novas espécies. No ensaio cinético, realizado para a triagem de leveduras com capacidade de bioconversão da D-xilose em xilitol e etanol, o maior rendimento em xilitol foi demonstrado pelo microrganismo relacionado à Prototheca zopfi var. hydrocarbonea. A capacidade desse organismo de produzir xilitol não havia sido descrita. Os resultados obtidos nesse trabalho, revelaram que o trato digestivo das pragas de cana-de-açúcar como uma fonte de microrganismos que apresentam capacidade de degradação enzimática para celulose e xilano cujo potencial para utilização na biotecnologia industrial ainda precisa ser revelado / The pursuit for sustainable economies has increased the interest in development of microbial-based platforms for new processes, both for biofuel production and for the synthesis of compounds, which demands high energetic capacity and chemical processing in its production. The isolation of microorganisms capable of degradation of lignocellosic materials, resistant to different inhibitors and highly efficient in the biosynthesis of specific molecules is necessary to achieve such purposes. In this research, cultivable microorganisms isolated from the larval gut of sugarcane pests: sugarcane borer root Migdolus fryanus, sugarcane weevil Sphenophorous levis, giant sugarcane borer Telchin licus licus and sugarcane borer Diathrea saccharalis, were characterized according to their extracellular enzymatic activity in carbon sources and molecularly identified. Third-instar larvae of Migdolus fryanus and S. levis and fifth-instar larvae of T. licus licus and D. saccharalis were collected in sugarcane fields in São Paulo, Brazil. A total number of 341 strains were evaluated for their capacity of degradation of lignocelulitic substrates, as single carbon sources in solid medium. The enzymatic activities of the strains were estimated by Enzymatic Activity Index (EAI); further, the strains were molecularly identified by sequencing of the 16S rRNA region for bacterias; ITS rDNA region for filamentous fungi and 26S rDNA region for yeasts. Bacteria strains which presented enzymatic activity were related to Firmiculites genera Bacillus, Enterobacter, Serratia and Citrobacter. Strains related to B. amyloliquefaciens have demonstrated higher levels of cellulosic degradation. Among filamentous fungi, yeasts and yeast-like organisms higher activity was showed to degradation of hemicelluloses. Filamentous fungi and yeasts belong to phylum Ascomycota, and the yeast-like organisms to phylum Chlorophyta. Six filamentous fungi which presented higher hidrolisys of xylan were related to Pyrenophora, Aspergillus and Penicillium genera. Yeasts were related mostly to the Meryerozyma and Candida genera. Yeasts with higher hydrolysis cababilities were reated to Meyerozyma guilliermondii, Cryptococcus laurentti, Candida pseudointermedia, C. parapsilosis, C. solani e Aureobasidium pullulans. Among the yeasts, 40 strains showed sequences that differ by more than 1% from reference sequences, which allows infering about possible new species. In the kinetic assay carried out for screening for yeasts capable of bioconverting D-xylose into xylitol and ethanol, higher yields of xylitol were obtained for the yeast-like organism related to Prototheca zopfi var. hydrocarbonea. This microorganism\'s ability to produce xylitol had not been reported yet. The results obtained in this work have demonstrated the gut of sugarcane pests as source of microorganisms capable of enzymatic degradation of cellulose and xylan, whose potential for use in the industrial biotechnology has yet to be revealed.