Embora existam vários mecanismos propostos, o papel das moléculas de histocompatibilidade na susceptibilidade ao DM1 ainda não está totalmente esclarecido. Existem várias evidências de que o número de células apresentadoras de antígenos e a densidade de expressão das moléculas de histocompatibilidade nessas células pode influenciar o resultado da resposta imune. Assim, neste estudo, foram avaliadas as porcentagens das células CD3+, CD4+, CD8+, CD19+ e CD14+, coexpressando as moléculas de histocompatibilidade de classe I e II, a densidade de expressão das moléculas de histocompatibilidade de classe I e II nessas populações linfomonocitárias e a correlação entre densidade de expressão dessas moléculas com o perfil imunogenético do DM1. Para esse fim, foram avaliados 20 pacientes com DM1, recentemente diagnosticados, metabolicamente compensados, sendo 12 do sexo masculino. Como controles, foram avaliados 20 indivíduos saudáveis, pareados com os pacientes em termos de idade, sexo e raça, procedentes da mesma região geográfica dos pacientes. A densidade de expressão das moléculas HLA nas diversas subpopulações linfomonocitárias foi avaliada por citometria de fluxo. Os marcadores imunogenéticos foram tipados utilizando-se iniciadores de oligonucleotídeos seqüência específicos. Os resultados foram analisados usando o teste não paramétrico de Mann Whitney U. Foi observado aumento da densidade de expressão das moléculas de histocompatibilidade de classe I em linfócitos T CD3+, CD4+ e CD8+ de pacientes com DM1 quando comparados aos controles. Em relação às moléculas HLA de classe II, o número e a porcentagem dos linfócitos T CD4+, coexpressando as moléculas HLA-DQ de pacientes estavam diminuídos em relação aos controles. Os resultados referentes à correlação do perfil genotípico dos pacientes revelam que pacientes portadores dos alelos HLA-DQB1*02 apresentaram diminuição no número e porcentagem das células CD3+, CD4+, CD8+, CD19+ e CD14+ coexpressando as moléculas HLA-DQ, e ainda, o aumento da densidade de expressão da molécula HLA-DQ nas células CD19+, em relação aos pacientes sem esses alelos. Pacientes com o alelo HLA-DQB1*0302 apresentaram aumento do número de células CD14+ e CD19+ coexpressando as moléculas HLA-DQ, e ainda, o aumento da densidade de expressão dessas molécula nas células CD14+ em relação aos pacientes negativos para esse alelo. Além da instabilidade de ligação dos peptídeos com as moléculas de susceptibilidade ao DM1, este estudo reafirma a importância da densidade de expressão das moléculas de classe II na susceptibilidade ao DM1. / Althougth the role of MHC molecules in the susceptibility to DM1 has not been elucidated, the density of MHC molecules on cell surface may influence the outcome of the immune response. In this study, the number of CD3+, CD4+, CD8+, CD19+ and CD14+ cells coexpressing MHC class I and II, and the correlation between the density of MHC molecules and the immunogenetic profile of DM1 patients were studied. A total of 20 recently diagnosed patients (12 males) and 20 control individuals matched to the patients in terms of age, sex and race were studied. MHC molecules on cell sufaces were evaluated using flow cytometry. MHC aleles were typed using sequence specific probes. Statistical analysis was performed by the non-parametric Mann Whitney-U test. Increased expression of MHC class I molecules was observed in patients T CD3+, CD4+ and CD8+ cells in relation to controls. The number and porcentage of double-positive CD4+/HLA-DQ+ cells were significantly decreased in patients. Compared to DM1 patients who were not typed as HLA-DQB1*02, DM1 patients typed as HLA-DQB1*02 exhibited decreased numbers of CD3+, CD4+, CD8+, CD19+ and CD14+ cells expressing HLA-DQ molecules, whereas the density of HLA-molecules was increased in CD19+ cells. Compared to non-HLA-DQB1*0302 patients, those typed as HLA-DQB1*0302 presented increased number of CD14+ and CD19+ cells expressing HLA-DQ molecules. Besides the instability of peptide ligation with susceptibility molecules, this study stresses the relevance of the density of MHC class II molecules on the susceptibility to DM1.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-09-01T11:58:23Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Poliana Ribeiro Valadares Veras - 2015.pdf: 4546054 bytes, checksum: d4bed497af887b82ba08b0d21d58ed42 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-09-01T11:58:38Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Poliana Ribeiro Valadares Veras - 2015.pdf: 4546054 bytes, checksum: d4bed497af887b82ba08b0d21d58ed42 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-01T11:58:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Poliana Ribeiro Valadares Veras - 2015.pdf: 4546054 bytes, checksum: d4bed497af887b82ba08b0d21d58ed42 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-07-02 / American tegumentary leishmaniasis (ATL) is an infectious parasitic disease caused by Leishmania protozoa. The disease presents as cutaneous leishmaniasis (CL) and mucosal leishmaniasis (ML). The mechanisms of the immunopathogenesis and infection control are not yet fully understood, and monocytes can be involved in these mechanisms. The monocytes are divided into three subsets (CD14hiCD16-, classical monocytes; CD14hiCD16+, the intermediates; and CD14loCD16+ non- classical) and are the major cell producing cytokines in peripheral blood.The objective of this study was to assess possible alterations in the percentages of monocytes subsets; and in the tumor necrosis factor (TNF) and interleukin 10 (IL -10) production in whole blood cultures from patients with CL and ML, before and after treatment. Peripheral blood from patients (n = 54; 31 CL and ML 23) and controls (n = 54) was used to identify monocytes by flow cytometry and for whole blood cultures. The blood was incubated in the absence (medium) or presence of toll-like receptor agonists (Pam3Cys and LPS for TLR2 and TLR4, respectively) or L. (V.) braziliensisantigens (AG) to assess TNF and IL-10. Cytokines were quantified by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).The results showed an increase in the percentage of CD16+ monocytes, especially CD14loCD16+monocyte subset in CL patients, but not in ML, before treatment (p <0.05). After treatment, the percentages of these monocytes in CL patients back to similar levels of those from healthy individuals. In patients with ML, there was also a reduction in the percentages of CD16+ monocytes after treatment. The production of TNF and IL-10 was not significantly altered in whole blood cultures from patients, compared with those from healthy controls. Among the stimuli used, only the AG did not induce significant amounts of IL-10 in whole blood cultures from patients. After treatment, TNF concentrations decreased in CL whole blood cultures, except when the stimulus was Pam3Cys (TLR2), which induced an increase in TNF levels (p <0.05). In ML whole blood cultures no significant differences were detected between the concentrations of TNF and IL-10 produced before and after treatment.The IL-10 concentrations were not significantly altered after treatment of CL patients. The data indicate that percentages of CD16+ monocytes are increased in CL. Also, they suggest that monocytes from patients with CL or ML show a decreased capacity to produce IL-10 in response to AG, what can hamper the control of the inflammatory response. The data also suggest that the ability of monocytes to be activatedthrough TLR2 can be suppressed in CL what isrecovered after treatment. An analysis of TLR2 and TLR4 in monocytes from patients with ATL can improve the knowledge about cytokine induction in these cells. / A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é uma doença infecto-parasitária causada por protozoários do gênero Leishmania. Esta doença apresenta-se como leishmaniose cutânea (LC) e leishmaniose mucosa (LM). Os mecanismos da imunopatogenia e do controle da infecção ainda não estão completamente esclarecidos, sendo que os monócitos podem participar destes mecanismos. Os monócitos são subdivididos em três populações (CD14hiCD16-, os clássicos; CD14hiCD16+, os intermediários; e CD14loCD16+, os não clássicos) e são as principais células produtoras de citocinas no sangue periférico. O objetivo deste estudo foi avaliar se existem alterações nas proporções das três subpopulações dos monócitos e das citocinas fator de necrose tumoral (TNF) e interleucina 10 (IL-10), em pacientes com LC ou LM, antes e após o tratamento. Sangue periférico de pacientes (n = 54; 31 LC e 23 LM) e controles (n = 54) foi utilizado para identificar os monócitos por citometria de fluxo e para hemoculturas. As hemoculturas foram incubadas na ausência (Meio) ou presença de agonistas (LPS, Pam3Cys) de receptores similares a toll dos tipos dois e quatro (TLR2 e TLR4) ou de antígenos (AG) de L. (Viannia) braziliensis, para avaliar a produção de TNF e IL-10. As citocinas foram quantificadas por ensaio imunoenzimático (ELISA). Os resultados mostraram um aumento da porcentagem dos monócitos CD16+, especialmente da subpopulação CD14loCD16+, em pacientes com LC, mas não com LM, antes do tratamento (p < 0,05). Após o tratamento, as porcentagens destes monócitos, em pacientes com LC, retornaram para níveis similares àqueles de indivíduos sadios. Em pacientes com LM, também ocorreu uma redução das porcentagens dos monócitos CD16+ após o tratamento. A produção de TNF e a de IL-10 não estavam significantemente alteradas nas hemoculturas de pacientes, quando comparadas com as de controles sadios. Entre os estímulos usados, somente o AG não induziu quantidades significantes de IL-10 nas hemoculturas dos pacientes. Após o tratamento, as concentrações de TNF diminuíram nas hemoculturas de pacientes com LC, exceto quando o estímulo foi Pam3Cys (TLR2), o qual induziu aumento na produção de TNF (p < 0,05). Em hemoculturas de pacientes com LM não foram detectadas diferenças significantes entre as concentrações de TNF e IL-10 produzidas antes e após o tratamento. As concentrações de IL-10 também não foram significantemente alteradas após o tratamento dos pacientes com LC. Os dados indicam que as porcentagens de monócitos CD16+ estão aumentadas na LC. Ainda, sugerem que monócitos de pacientes com LC ou LM apresentam uma diminuída capacidade de produção de IL-10 em resposta ao AG, o que pode dificultar o controle da resposta inflamatória. Os dados também sugerem que a capacidade de resposta dos monócitos via TLR2 pode estar suprimida na LC, sendo elevada após o tratamento. Uma análise de TLR2 e TLR4 em monócitos de pacientes com LTA pode auxiliar a entender melhor a indução de citocinas nestas células.

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:28:51Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3519_1.pdf: 967552 bytes, checksum: a5b82db84e8e7f4cfe177f807ab1eb17 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A tese ora apresentada trata da associação entre o sistema nervoso central (SNC) e o sistema imunológico. Mais especificamente, entre monócitos e esquizofrenia. A doença esquizofrênica é um grave transtorno psiquiátrico, de evolução crônica, com surtos psicóticos periódicos. Inicia-se na idade de adulto jovem e em seu desfecho clínico compromete sobremaneira o funcionamento global do indivíduo acometido. Ou seja, prejudica a integração social, a esfera afetiva, impede a progressão na vida acadêmica e incapacita para o trabalho. A expressão sintomatológica da esquizofrenia é denominada mental, porém a etiopatogenia e a fisiopatologia da doença é terreno em aberto. Para a compreensão desses aspectos os estudos se dirigem para a área da genética, neuroquímica, neuroimagem (neuroanatomia) e interpretações a partir da farmacodinâmica dos antipsicóticos. Uma das linhas de pesquisa direciona-se para o sistema imunológico. No início do século XX foram relatadas alterações em células imunocompetentes em pacientes com esquizofrenia. A princípio, por limitações técnicas, apenas a contagem e descrição da morfologia celular de leucócitos. Nas últimas décadas, todavia, as pesquisas vêm se aprofundando no estudo dos fenômenos e mecanismos intracelulares tais como produção de oxiradicais e citocinas. O nosso trabalho teve por objetivo principal avaliar a imunidade de pacientes com esquizofrenia nos seguintes aspectos: 2. No sangue periférico: a. Perfil leucocitário 3. Especificamente em monócitos: a. Taxa de fagocitose b. Produção de superóxido c. Produção de óxido nítrico d. Produção de Interleucina-12 e. Produção de Interferon-gama Secundariamente, acessamos aspectos da psicopatologia usando a escala de sintomas positivos e negativos (PANSS) e características demográficas. Para todos esses objetivos, estudamos um grupo de pacientes com esquizofrenia (n=30), comparados a controles sadios (n=30). Os pacientes tinham evolução da doença, em média, há 7.6 anos e estavam em fase aguda (surto psicótico) no momento do exame. Não usavam medicamentos há pelo menos 90 dias. Os controles foram voluntários e tomaram conhecimento do trabalho, de forma verbal, por diversas fontes. Os grupos foram pareados por sexo, faixa etária e condição de ser ou não fumante. As variáveis estudadas, os resultados e conclusões são descritas em três artigos que se seguem ao capítulo de revisão sobre aspectos imunológicos na esquizofrenia

Orientador: Carlos Alberto Flores / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-19T15:15:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Toffoli_MonicaCristina_M.pdf: 1649233 bytes, checksum: f3196ce84cf26274217e61ed3b1076da (MD5) Previous issue date: 1994 / Resumo: Este trabalho descreve os efeitos do IFN-'gama' sobre a atividade migratória de neutrófilos e monócitos para a cavidade peritoneal de camundongos; descreve também a relação espécie-específica entre os IFNs-'gama' recombinantes humano e murino, in vitro, bem como seu efeito modulador sobre a atividade quimiotática para neutrófilos induzida por LPS, in vivo, e sobre a liberação de fatores quimiotáticos para essas células, por macrófagos peritoneais estimulados, in vitro, pela endotoxina. Tanto o rmulFN-'gama' (150-1350 Ul/animal) quanto o rhulFN-'gama' (150 Ul/animal) nâo foram capazes de induzir migração de neutrófilos ou de monócitos para a cavidade de camundongos, avaliada 12 e 96 horas após a injeção dos estímulos e comparadas ao controle LPS (200 ng/animal) e tioglicolato 3% (1,5 ml/animal), respectivamente. Observou-se também, que em ratos, nenhum dos rlFN-? (humano ou murino) foi capaz de induzir migração de neutrófilos ou monócitos para a cavidade peritoneal desses animais. Os macrófagos peritoneais murinos, in vitro, quando estimulados simultaneamente com rmulFN-'gama' e LPS liberaram em torno de 30 µM de NO2- e esta liberação foi quase totalmente inibida com nitroarginina (NARG, 500 µM). Por outro lado, a estimulação desses macrófagos com rhulFN-'gama' e LPS não causou liberação significativa de NO, mesmo em doses de até 500 ui/ml. A estimulação de células mononucleares humanas com rhulFN-'gama' (20-500 Ul/ml) causou uma liberação dose-dependente de ânions superóxido, entretanto tal efeito não foi observado quando a célula estudada foi o neutrófilo. O rhulFN-'gama' potenciou a liberação desses ânions tanto em células mononucleares como em neutrófilos estimulados por PMA (3 nM), porém, quando o estímulo foi o zimosam, o efeito da potenciação não foi observado. Quando os estudos foram realizados utilizando-se rmulFN-'gama', esta citocina por si só, não causou liberação de ânions superóxido e não foi capaz de potenciar a liberação induzida por PMA ou zimosam, nos dois tipos celulares analisados. Macrófagos em cultura foram capazes de liberar no sobrenadante, após estimulação com LPS (5 µg/ml), um fator que induziu migração de neutrófilos para a cavidade peritoneal de camundongos. A injeção do sobrenadante de macrófagos estimulados por rmulFN-'gama' e LPS causou uma migração de neutrófilos para a cavidade peritoneal de camundongos cerca de 50% menor do que a induzida pelo sobrenadante obtido de macrófagos apenas estimulados com LPS. A dosagem de TNF-'alfa' no sobrenadante de cultura de macrófagos murinos estimulados com LPS (5 µg/ml) ou rmulFN-'gama' (20 Ul/ml), apresentaram valores semelhantes: 3,67 e 3,61 ng TNF/ml, respectivamente. O nível de TNF-'alfa' presente no sobrenadante de cultura de macrófagos estimulados com LPS e rmulFN-'gama' foi cerca de 3,5 vezes maior (12 ng TNF/ml). A administração simultânea de rmulFN-'gama' (150 Ul/animal) foi capaz de, dependendo da dose de LPS ou TNF-'alfa' utilizada, potenciar (1 ng de LPS ou 0,5 ng de TNF-'alfa'/animal) ou inibir (10,100 ng de LPS ou 100 ng de TNF-a/animal) a migração de neutrófilos induzida por esses estímulos, para a cavidade peritoneal de camundongos. Estes resultados mostram que IFN-'gama' não é quimiotático para neutrófilos ou monócitos e seus efeitos são espécie-específicos. O IFN-'gama' possue uma importante função moduladora sobre as atividades citotóxíca e liberadora de citocinas e/ou fatores quimiotáticos por macrófagos e não deve estar participando das etapas iniciais do processo inflamatório e sim na manutenção do mesmo. / Abstract: This thesis describes the effects of IFN-'gama' on the migration of monocytes and neutrophils into the peritoneal cavity of mice and also examines the species specificity of the in vitro actions of human and murine recombinant IFN-'gama' (rhulFN-'gama' and rmulFN-'gama', respectively). In addition, the effects of IFN-'gama' on the chemotactic activity of E. coli lipopolysaccharide (LPS)-induced neutrophils in vivo and on the release of chemotactic factors for these cells by peritoneal macrophages stimulated with LPS in vitro are also examined. Neither rmulFN-'gama' (150-1350 lU/animal) or rhulFN-'gama' (150 lU/animal) were able to induce monocyte or neutrophil migration into the peritoneal cavity of mice when compared with the response caused by LPS (200 ng/animal) and 3% thioglycollate (1,5 ml/animal) 12 and 96 h after injection, respectively. Both recombinant IFN-y were also unable to stimulate cell migration in rats. The simultaneous stimulation of murine peritoneal macrophages in vitro with rmulFN-'gama' and LPS caused the release of NO2" (30 µM) which could be almost totally inhibited by nitroargininr (NARG, 500 µM). When rhulFN-'gama' was replaced with rmulFN-'gama' in the above experiments, no formation of NO2" was detected even at interferon doses of up to 500 lU/ml. The exposure of human monocytes, but not neutrophils, to rhulFN-'gama' (20-500 Ul/ml) resulted in a dose-dependent release of superoxide anions. Furthermore, in both monocytes and neutrophils, the formation of superoxide anions in the presence of phorbol myristic acid (PMA, 3nM), but not zymosan, was potentiated by rhulFN-'gama'. In contrast to these results, rmulFN-'gama' was unable to stimulate superoxide anion formation in these cells and was also unable to potentiate the release in the presence of PMA or zymosam. Upon stimulation with LPS (5 µg/ml), macrophages in culture released a factor which induced the migration of neutrophils when injected into the peritoneal cavity of mice. This migration was inhibited by approximately 50% when the macrophages were co-stimulated with rmulFN and LPS. The levels of TNF-'alfa' in the culture medium of murine macrophages stimulated with either LPS (5 µg/ml) or rmulFN-'gama' (20 lU/ml) were very similar (3,67 vs 3,61 ng TNF/ml, respectively) but were about 3,5 fold lower than the levels observed in macrophages stimulated with LPS and IFN-'gama' (12 ng TNF/ml) of rmulFN-'gama' (150 lU/animal) either potentiated or inhibited the migration of neutrophils into the mouse peritoneal cavity induced by these agents; potentiation occured at LPS and TNF doses of 1 ng and 0,5 ng/animal, respectively, while inhibition was observed at LPS and TNF doses of 10-100 ng and 100 ng/animal, respectively. These results demonstrate that IFN-'gama' is not chemotactic for monocytes and neutrophils and that its effects are species-specific. Furthermore, IFN-'gama' has an important modulatory influence on the cytotoxic and mediator-releasing activities of cytokines and/or of the chemotactic factors liberated by macrophages. IFN-'gama' therefore seems to have a minimal role in the initial stages of the inflammatory reaction but is important in maintaining this process. / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Maria Terezinha Serrão Peraçoli / Resumo: A pré-eclâmpsia (PE) é uma síndrome específica da gestação que se caracteriza por um estado de má adaptação da tolerância imunológica, identificado por estresse oxidativo e ativação anormal do sistema imune inato. No plasma de gestantes portadoras de PE encontram-se níveis elevados de estruturas moleculares associadas ao estresse e morte celular, denominados padrões moleculares associados ao dano (DAMPs) tais como ácido úrico, que parecem contribuir para a patogênese dessa doença. As DAMPs podem ativar monócitos desviando-os para perfil proinflamatório M1. O desbalanço pró e anti-inflamatório na PE pode ser regulado através da administração de flavonóides com propriedades anti-inflamatórias como a silibinina. O presente trabalho tem por objetivo avaliar o efeito imunomodulador da silibinina sobre a expressão de marcadores de ativação e a via de sinalização do fator de transcrição nuclear NF-κB em monócitos de gestantes portadoras de PE. Monócitos de gestantes pré-eclâmpticas foram cultivados na presença ou ausência de silibinina e, a expressão de moléculas de superfície TLR4, CD64, CD163 e CD14, bem como dos fatores de transcrição IκB-α e NF-κBp65 intracelulares foi analisada por citometria de fluxo. A concentração das citocinas IL-6 e IL-8 no sobrenadante de cultura de monócitos foi determinada por cytometric bead array (CBA) e de IL-1β, IL-10, TNF-α, IL-12p70, IL-23 e TGF-β pela técnica de ELISA. Os resultados foram analisados por meio de testes paramétricos com nível de si... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Orientador: Rinaldo Poncio Mendes / Coorientador: Maria Sueli Parreira de Arruda / Banca: Daniela Vanessa Moris de Oliveira / Banca: Vânia Nieto Brito de Souza / Banca: Vanessa Soares Lara / Banca: Angela Satie Nishkako / Resumo: Diabetes mellitus (DM) é um importante fator de predisposição para o desenvolvimento de infecções, incluindo a candidíase. Embora a incidência e a gravidade das doenças infecciosas em pacientes diabéticos estejam com frequência relacionadas a disfunções da resposta imune, seus mecanismos ainda não foram bem esclarecidos. No presente estudo avaliou-se a influência da condição de hipoinsulinemia-hiperglicemia (HH) na evolução da candidíase experimental sistêmica. Parâmetros histológicos, microbiológicos e imunológicos envolvendo medula óssea, cérebro, baço e fígado, níveis plasmáticos de quimiocina e de citocinas, atividade macrofágica e distribuição de granulócitos e subpopulações de monócitos do sangue periférico foram avaliados. Para tanto, camundongos suiços, HH-induzidos ou não pela aloxana, foram inoculados com Candida albicans pela veia da cauda e avaliados 12, 24 e 96 horas e 7 dias após infecção. A presença de fungos foi avaliada em: sangue, medula óssea, rins, fígado, cérebro e baço. A atividade macrofágica foi estudada pela resposta de fagócitos peritoneais cultivados ou não com C. albicans mortas pelo calor, avaliando-se a produção de peróxido de hidrogénio e de óxido nítrico e os níveis de TNF-α, IL-6, IL-10, IFN-γ, IL-12p70 e CCL2 em sobrenadande de cultura. Os níveis plasmáticos destas citocinas também foram determinados. A distribuição de granulócitos e das subpopulações de monócitos circulantes foi determinada por citometria de fluxo. Os resultados mostraram aumento da mortalidade em camundongos HH; apesar da ausência de diferenças de resposta tecidual entre os grupos infectados; notamos diferenças importantes na carga fúngica presente nos diversos tecidos examinados (especificar). Estes animais também exibiam elevados níveis plasmáticos de IL-6 e TNF-α, e uma produção exacerbada de TNF-α pelos macrófagos. Após infecção ... / Abstract: Diabetis mellitus (DM) is an important predisposing factor for the development of infections, including candidiasis. Although the incidence and severity of infectious diseases in diabetic patients are related to dysfunction in the immune function, the mechanisms involved in the high susceptibility to this fungal infection are not clear. In the present study, we evaluated the influence of hypoinsulinemia-hyperglycemia (HH) on plasma levels of chemokine/cytokines, macrophage activity and distribution of peripheral blood granulocytes and monocytes subsets in a murine model of systemic candidiasis. C. albicans was intravenously inoculated in alloxan-induced HH mice, which were evaluated 12, 24 and 96 hours, and 7 days after infection. Colony-forming unit analysis and/or histopathological examination were performed on blood, bone-marrow, kidney, brain, liver and spleen. Peritoneal phagocytes were cultured with or without heat-killed C. albicans, and the production of hydrogen peroxide and nitric oxide were determined. The levels of TNF-α, IL-6, IL-10, IFN-γ, IL-12p70 and CCL2 were measured in the culture supernatants and also in the plasma of the mice. The distribution of peripheral blood granulocytes and monocytes subsets were performed by flow cytometry. Our findings showed an increased mortality in the infected HH mice, but they showed no significant differences in fungal recovery. Upon histopathological examination, no differences were observed between both infected groups, but strong discrepancies in fungal load were found among the tissues examined. High plasma levels of IL-6 and TNF-α as well as an excessive TNF-α-mediated macrophage response were also observed in the infected HH-induced mice. Soon after the fungal challenge, increased percentage of granulocytes and inflammatory monocytes was observed. C.albicans-infected HH mice presented a higher percentage of granulocytes than the non-HH ... / Doutor

Sepse é uma síndrome, na qual, o paciente apresenta lesões de órgãos com risco a vida, em decorrência de uma inflamação exagerada desencadeada por uma infecção. Estima-se uma ocorrência anual de 31,5 milhões de casos de sepse e 19,4 milhões de casos de choque séptico no mundo, causando potencialmente 5,3 milhões de mortes. Esses índices alarmantes fizeram com que em 2017, a Organização Mundial da Saúde (OMS) adotasse uma resolução com o objetivo de aperfeiçoar a prevenção, diagnóstico e tratamento dessa condição clínica que vem sendo negligenciada. A iniciação da sepse, ocorre quando há um descontrole da infecção, acarretando excessiva ativação de células do sistema imune inato. Isso resulta em uma inflamação sistêmica danosa que é responsável pela maioria das alterações fisiopatológicas da sepse. Nesse contexto do sistema imune inato, o papel de neutrófilos já é bem compreendido da patogênese da sepse. Contudo, a função dos monócitos inflamatórios ainda não é bem estabelecida. Ao mesmo tempo que essas células podem participar do controle de infecções, elas também podem contribuir com a inflamação sistêmica e a lesão de órgãos. Deste modo, a compreensão do papel dessas células se faz importante para determinação de novos alvos terapêuticos para essa condição clínica. Nossos resultados demonstraram, em modelo experimental de sepse, que o aumento da emigração de monócitos inflamatórios da medula óssea está relacionado com maior taxa de mortalidade dos animais e exacerbação da inflamação sistêmica. A migração dessas células para órgãos, como rim e pulmão, está relacionado com inflamação e aumento de lesões, nesses locais. Deste modo, conclui-se que monócitos inflamatórios possuem um papel deletério na patogênese da sepse / Sepsis is a syndrome in which the patient has life-threatening organ damage due to an exaggerated inflammation triggered by an infection. The annual occurrence is 31.5 million cases of sepsis and 19.4 million cases of septic shock in the world, which potentially cause 5.3 million deaths. In concern of these alarming reports in 2017, the World Health Organization (WHO) adopted a resolution aimed at improving the prevention, diagnosis and treatment of this neglected clinical condition. The initiation of sepsis occurs when the infection was not controlled, causing excessive activation of the innate immune cells. This excessive activation causes a systemic inflammation that is responsible for most pathophysiological phenomena in sepsis. In this context of the innate immune system, the role of neutrophils is already well understood in the pathogenesis of sepsis. However, the role of inflammatory monocytes is not yet well established. These cells can participate in the control of infections, or can also contribute to systemic inflammation and organs damage. Thus, the understanding of the roles of these cells become important for the development of new therapeutic targets for this clinical condition. Our results demonstrated that the systemic increase of the inflammatory monocytes frequency is related to higher mortality rate, exacerbation of systemic inflammation, increased migration to organs (lung and kidney), and in these sites, are related to inflammation and lesions. Thus, we concluded that these cells have a deleterious role in the pathogenesis of sepsis

Orientador: Maria Terezinha Serrão Peraçoli / Resumo: A pré-eclâmpsia (PE) é uma síndrome específica da gravidez, associada com inflamação sistêmica exacerbada, o que poderia ser dependente da deficiência de fatores reguladores, como a silibinina (SB), progesterona (PG) e vitamina D (VD), que são capazes de modular essa resposta inflamatória. O objetivo do trabalho foi avaliar, in vitro, o efeito modulador da SB, PG e VD sobre os inflamassomas NLRP1 e NLRP3 e sobre a via de sinalização dependente de TLR4-MyD88 em monócitos de gestantes portadoras de PE e em linhagem celular de monócitos humanos THP-1. Monócitos obtidos do sangue periférico de 20 gestantes com PE, 20 gestantes normotensas e células THP-1 foram cultivados na presença ou ausência de urato monossódico (MSU), hialurona (HA), SB, PG ou VD por diferentes períodos: a) por 30 min para determinação da fosforilação de NF-κB e para expressão dos fatores intra-citoplasmáticos NF-κB e IκBα por citometria de fluxo, b) por 4h para a expressão gênica de TLR4, MYD88, NFKB1, NLRP1, NLRP3, CASP1, IL1B, IL18, TNF e IL10 analisada por RT-qPCR e c) por 18h para a determinação da concentração das citocinas IL-1β, IL-18, TNF-α e IL-10 por ELISA e para expressão do receptor de superfície TLR4 por citometria de fluxo. Foram determinados os níveis plasmáticos de ácido úrico, PG e VD em gestantes pré-eclâmpticas e normotensas. Os resultados foram analisados por meio de testes paramétricos e não-paramétricos com nível de significância de 5%. Os níveis plasmáticos de PG e VD foram significati... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Preeclampsia (PE) is a specific pregnancy syndrome, associated with exacerbated systemic inflammation, which could be dependent on the deficiency of regulatory factors, such as silibinin (SB), progesterone (PG), and vitamin D (VD), which are able to modulate this inflammatory response. The aim of this study was to evaluate the modulating effect of SB, PG and VD on the NLRP1 and NLRP3 inflammasomes and on the TLR4-MyD88-dependent signaling pathway in monocytes from pregnant women with PE and human monocyte cell line THP-1. Monocytes obtained from the peripheral blood of 20 pregnant women with PE, 20 normotensive pregnant women and THP-1 cells were cultured in the presence or absence of monosodium urate (MSU), hyaluronan (HA), SB, PG or VD for different periods: a) for 30 min for the determination of NF-κB phosphorylation and for the expression of the intra-cytoplasmic factors NF-κB and IκBα by flow cytometry, b) for 4 h for the gene expression of TLR4, MYD88, NFKB1, NLRP1, NLRP3, CASP1, IL1B, IL18, TNF and IL10, analyzed by qPCR and c) for 18h for the determination of IL-1β, IL-18, TNF-α and IL-10 cytokines concentration by ELISA and for expression of the surface receptor TLR4 by flow cytometry. Plasma levels of uric acid, PG and VD in preeclamptic and normotensive pregnant women were determined. The results were analyzed using parametric and non-parametric tests with a significance level of 5%. Plasma levels of PG and VD were significantly lower, whereas those of uric acid we... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Maria Terezinha Serrão Peraçoli / Coorientador: José Carlos Peraçoli / Banca: Ricardo de Carvalho Cavalli / Banca: Débora Cristina Damasceno Meirelles dos Santos / Resumo: A pré-eclâmpsia (PE) é uma síndrome específica da gestação humana, caracterizada por uma resposta inflamatória sistêmica, de maior intensidade do que a observada na gestação normal. Nessa patologia, células do sistema imune inato como monócitos e granulócitos encontram-se ativadas endogenamente e secretam níveis elevados de radicais livres e citocinas inflamatórias. 1) Determinar o estado de ativação endógena de monócitos pela expressão de receptores TLR2 e TLR4, bem como a ativação do fator de transcrição nuclear NF-κB nessas células em gestantes portadoras de PE distribuídas quanto à idade gestacional de aparecimento das manifestações clínicas (precoce ou tardia) da doença; 2) Correlacionar a expressão de TLR2 e TLR4 com a produção de fator de necrose tumoral alfa (TNF-), interleucina-10 (IL-10) e IL-12 por monócitos estimulados com lipopolissacáride de Escherichia coli (LPS) e peptidoglicano (PGN) de bactéria Gram-positiva em gestantes com PE precoce ou tardia; 3) Verificar se os parâmetros estudados diferenciam PE precoce e tardia. Foram estudadas 92 gestantes, sendo 32 normotensas e 60 portadoras de PE, pareadas pela idade gestacional. As gestantes pré-eclâmpticas foram classificadas de acordo com o aparecimento das manifestações clínicas em PE precoce (<34 semanas de gestação, n=30) e PE tardia (≥34 semanas de gestação, n=30). Monócitos de sangue periférico obtidos de gestantes normotensas ou com PE foram cultivados por 18 h na ausência ou presença de LPS ou de PGN. A expressão de receptores TLR2 e TLR4, presentes na superfície de monócitos, foi detectada por citometria de fluxo, empregando-se anticorpos monoclonais específicos, marcados com fluorocromos. Para análise da ativação do fator de transcrição nuclear NF-κB os monócitos foram incubados na presença ou ausência de LPS ou PGN por 30 min e o extrato nuclear obtido foi empregado para dosagem de NF-κB. Monócitos ... / Abstract: Preeclampsia (PE) is a pregnancy-specific human syndrome characterized by a systemic inflammatory response, with higher intensity than the one observed in normal pregnancy. In this pathology, innate immune cells such as monocytes and granulocytes are activated endogenously and secrete high levels of inflammatory cytokines and free radicals. 1) to determine the activation state of monocytes by endogenous expression of TLR2 and TLR4 receptors as well as the nuclear transcription factor (NF-κB) activation in these cells in pregnant women with PE, distributed according to the gestational age of clinical manifestations (early or late-onset) of the disease; 2) to correlate TLR2 and TLR4 expression with TNF-α, IL-10 and IL-12 by monocytes stimulated with lipopolysaccharide (LPS) of Escherichia coli and peptidoglycan (PGN) of Gram-positive bacteria in pregnant women with early-onset or late-onset PE; 3) to verify if the parameters studied may differentiate early-onset or late-onset PE. We studied 92 pregnant women, 32 normotensive and 60 women with PE, paired for gestational age. Preeclamptic pregnant women were classified according to onset of clinical manifestations in early-onset PE (<34 weeks gestation, n=30) and late-onset PE (≥ 34 weeks gestation, n=30). Monocytes from peripheral blood obtained from preeclamptic and normotensive pregnant women were incubated for 18h in the absence or presence of LPS or PGN. Expression of TLR2 and TLR4 receptors present on the surface of monocytes, was detected by flow cytometry, using specific monoclonal antibodies labeled with fluorochromes. To analyze NF-κB, monocytes were incubated with or without LPS or PGN for 30 min and the nuclear extract obtained was employed for NF-κB determination. Monocytes were further cultured in the presence or absence of LPS and PGN and the supernatant obtained after 18h cultivation was aspirated and used for TNF-α, IL-10, IL-12p40 and IL-12p70 determination by ... / Mestre

Orientador: Wilma Aparecida Starke Buzetti / Banca: Willian Marinho Dourado Coêlho / Banca: Mary Marcondes / Resumo: O objetivo deste trabalho foi realizar um estudo descritivo sobre o perfil das células granulocíticas e monocíticas na mucosa intestinal de cães naturalmente infectados por Leishmania infantum, na presença ou na ausência do parasita no intestino. Além disso, realizou-se um estudo de correlação entre a intensidade parasitária e os fatores clínicos do hospedeiro, as células envolvidas e as alterações histopatológicas da parede intestinal. Dos 39 cães avaliados, somente 20 foram utilizados no estudo, sendo, 17 positivos para leishmaniose visceral canina (LVC) e três negativos. Os animais com LVC foram eutanasiados no Centro de Controle de Zoonoses (CCZ) de Ilha Solteira, SP, Brasil, e os negativos vieram a óbito natural por motivos diversos. As técnicas de histoquímica e imunoistoquímica foram utilizadas para marcar as células estudadas, identificar as amastigotas de Leishmania e auxiliar nas análises histopatológicas do trato intestinal. Os cães foram divididos em três grupos (G1, G2 e G3). Oito cães positivos para LVC e com amastigotas de L. infantum no intestino foram selecionados para o grupo G1; nove cães positivos para LVC sem amastigotas intestinais para o grupo G2 e, três cães negativos compuseram o grupo controle (G3). Todos os animais não apresentaram coinfecção parasitária gastrintestinal, mediante exames coproparasitológicos realizados in vivo ou pos-morten. As variáveis clínicas dos animais, a intensidade parasitária e a presença das células mononucleares (linfócitos T CD4+, CD8+ e macrófagos) foram avaliadas por uma classificação semiquantitativa baseada em escores que variaram de 1 a 4. Já as células granulocíticas (neutrófilos, eosinófilos e mastócitos) foram quantificadas na mucosa (unidade de vilo e cripta - UVC), submucosa e na muscular. Para as análises de comparação entre os grupos (G1, G2 e G3), o teste de KrusKal-Wallis foi empregado... / Abstract: The aim of this study was a descriptive evaluation on the profile of granulocytic and monocytes cells in the intestines of dogs naturally infected by Leishmania infantum in the presence or absence of the parasite in the intestine. In addition, it was performed a correlation study among parasite intensity, clinical factors of the host, the cells and the histopathological changes of the intestinal wall. 39 dogs were evaluated, but only 20 were used in the studies, 17 positive for canine visceral leishmaniasis (CVL) and three negative. The animals with CVL were euthanized in the Zoonosis Control Center (CCZ) of Ilha Solteira, SP, Brazil, and the negative animals had natural death for several reasons. The histochemical and immunohistochemical techniques were used to stain the cells and Leishmania amastigotes, and to proceed the histopathological analysis of the intestinal tract. The dogs were divided into three groups (G1, G2 and G3). Eight dogs positive for CVL and with amastigotes of L. infantum in the gut was selected to G1 group; nine CVL positive dogs without intestinal amastigotes were in G2 group and three negative dogs in the control group (G3). All animals showed no gastrointestinal parasite co- infection by coproparasitological examinations in vivo or post-mortem. Clinical variables of the animals, the parasite intensity, the presence of monocytic cells (CD4 + and CD8 + T lymphocytes and macrophages) were evaluated by a semiquantitative analysis based on scores ranging from 1 to 4. However, granulocytic cells (neutrophils, eosinophils, and mast cells) was quantified in the mucosa (villus and crypt unit - UVC), submucosa and muscle. For comparison analysis between groups (G1, G2 and G3), the Kruskal-Wallis test was used to evaluate the clinical variables, the t test for granulocytic cells, and Duncan's test to compare the monocytic cells. Correlation analyzes were based on Spearman test ... / Mestre