Tese de Mestrado Integrado. Engenharia Informática e Computação. Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto. 2012

Pseudomonas aeruginosa 47T2 i P. aeruginosa 42A2, van ser aïllats a partir sols i aigües, respectivament, contaminades amb residus oliosos. Ambdues soques van ser seleccionades per la seva capacitat per sintetitzar compostos hidrofòbics, com polihidroxialcanoats (PHAs), ramnolípids (Rhls), o estòlids. Els PHAs són polièsters biodegradables i biocompatibles de gran interès biotecnològic per ser una bona alternativa als plàstics petroquímics. A més de produir PHAs, P. aeruginosa 47T2 és capaç de produir Rhls, compostos glicolípids coneguts com surfactants microbians que presenten activitats antimicrobiona i/o antifúngica. En canvi, P. aeruginosa 42A2 no produeix Rhls, però si és capaç de convertir els olis residuals en mono-, di- o tri-hidroxi àcids grassos i més tard polimeritzar-los en estòlids. Els estòlids són biopoliesters són coneguts per ser bons emulsificadors amb interessants aplicacions industrials. Donades les diferències metabòliques a nivell lipídic detectades entre ambdues soques, s’ha estudiat el seu sistema lipolític comparant-lo amb la soca tipus Pseudomonas aeruginosa PA01. Assajos SDS-Page i zimogrames, tant dels extractes cel.lulars com dels sobrenedants de les soques, indiquen l’existència d’un sistema lipolític complex constituït per diversos enzims, però la seva caracterització bioquímica no denota diferències significatives a nivell de preferència de substrat, temperatura i pH entre les tres soques. Es decideix doncs no continuar estudiant la dotació enzimàtica, que no ha estat determinant per saber a què es deuen les diferències en el metabolisme lipídic, i s’opta per estudiar productes lipídics d’interès d’aquestes soques. Prenent els productes lipídics comuns i diferents, i tenint en compte que comparteixen intermediaris comuns a les seves rutes biosintètiques, s’ha decidit obtenir mutants negatius per la producció de PHA per tal d’estudiar el flux de carbonis i poder així dilucidar part de les rutes metabòliques que generen determinats productes. Aquests mutants es generen per ambdues soques P. aeruginosa 47T28AD i P. aeruginosa 42A28AD. Desprès d’haver provat diferents estratègies de mutagènesi aleatòria sense èxit (irradiació controlada amb llum UV i transposició), els mutants s’obtenen a través de mutagènesi dirigida amb la qual es força la recombinació i per tant la mutació dels gens que codifiquen per l’enzim PHA sintasa, mitjançant el plasmidi suïcida pEX100Tlink. S’analitzen els mutants obtinguts per microscòpia electrònica de transmissió (MET) i la producció de PHAs s’analitza per ressonància magnètica nuclear (RMN). Ambdós processos permeten determinar que els potencials mutants no produeixen PHAs i per tal de confirmar-ho s’extreu i quantifica el PHA observant que la producció de PHAs desapareix en els mutants. Una cop obtinguts els mutants cal veure si aquesta mutació afecta a la producció d’altres metabòlits. En la soca P. aeruginosa 47T2, s’estudien els Rhls produïts a partir d’olis residuals, tant a nivell de quantitat de producció com de qualitat del producte. Es quantifiquen per gravimetria i HPLC-MS i es caracteritzen a nivell fisicoquímic (determinació de CMCs, diagrames ternaris de fases, capacitat emulsionant). Si bé la producció de PHAs desapareix en els mutants seleccionats, sembla que la producció de Rhls augmenta lleugerament respecte a la soca parental, però no de manera proporcional a la desaparició de PHAs. Per altra banda la caracterització dels biotensioactius tampoc mostra diferències significatives entre els productes obtinguts a partir del mutant i de la soca parental, però si és interessant per les possibilitats a nivell d’aplicacions biotecnològiques dels Rhls. Pel que fa a la soca P. aeruginosa 42A2, els mutants serviran per fer el mateix estudi quantitatiu i qualitatiu d’un altre producte, els estòlids, però això forma part d’un altre estudi del grup. En la tesi el que s’ha quantificat són els derivats hidroxilats (mono- i di-hidroxilats) a partir dels quals es formen els estòlids, que també tenen propietats tensioactives i antimicrobianes i/o antifúngiques. / "Obtaining and characterization of PHA-negative mutants on Pseudomonas strains for the production of interesting industrial compounds" Pseudomonas aeruginosa 47T2 and P. aeruginosa 42A2 were isolated from oil wastes contaminated environment, soil and water respectively. Both strains were selected for their capacity to synthesize hydrophobic compounds such as polyhydroxyalkanoates (PHAs), rhamnolipids (Rhls), or estolides. PHAs are biodegradable and biocompatible polyesters with a high biotechnological interest for being a good alternative to the petrochemical plastics. In addition, P. aeruginosa 47T2 is able to produce rhamnolipids, glycolipid compounds well-known as microbial surfactants that present antimicrobial and/or antifungal activities. Although P. aeruginosa 42A2 is not producing Rhls, it is capable to convert waste oils into mono, di or –tri hydroxyfatty acids and later polymerize these compounds into estolides. Estolides are biopolyesters that are known for being good emulsifiers with interesting industrial applications. The aim of this thesis was to compare the differences in the lipid metabolism of the selected strain using P. aeruginosa PA01 as a type strain. SDS-page assays and zimmograms of cellular extracts and supernatants, revealed a complex lipolytic system constituted by different enzymes with no relevant differences regarding substrate affinity, temperature or pH. Therefore, the next step was the study of the different lipidic products. Considering that on PHAs, Rhls and estolides biosynthesis, the different involved metabolic pathways are competing for the same substrates, PHA-negative mutants for P. aeruginosa 42A2 and P. aeruginosa 47T2 were constructed by site-directed mutagenesis in order to elucidate the carbon flows. PHA accumulation, in both PHA-negative mutants, was evaluated by means of transmission electron microscopy (TEM) and nuclear magnetic resonance analysis (NMR), confirming thus the mutant strains were handicapped for PHA production. Consequently, rhamnolipids production in P. aeruginosa 47T2 and its PHA-negative mutant was gravimetrically quantified and showed a slightly increase of the Rhls production in the PHA-negative mutant (P. aeruginosa 47T2 4AD). Furthermore, the biopolymers were characterized by HPLC-MS and their physicochemical properties evaluated by determining the critical micelle concentration (CMC), the surfactant capacity and constructing the ternary phase diagrams. The biotransformation of oleic acid into hydroxyfatty acids was followed and quantified in P. aeruginosa 42A2 and its PHA-negative mutant (P. aeruginosa 42A2 4AD) by gas chromatography (GC).

Brazilian cultural heritage is dispersed in archives, museums and libraries, all memory centers with a common focus: to collect conservation and make society memory available to its users and researchers. In archives the medium are many, manuscript documents, audiovisual, sound and bibliographical materials. The present study concentrated to investigate a specific documental medium, the glass negative. Invented in 1848, the glass negative was the main documental medium for photographic images until 1888 when the flexible negative film was invented. Therefore, visual information sources about the Brazilian history from the second half of the XIX Century still exists because at that time the existing medium for image sensitization was the glass plate. It was in this medium, that images from the end of Brazil Empire and early Republic of Brazil were produced, using heavy wood photography cameras, the so called Lambe-lambe . The importance of this documental medium glass negative as a research source for Brazilian and World history was proven after incursions in literature and research in Brazilian photographic heaps. It was found that photography is a powerful mean of visual communication besides its value as information source and documental heritage. This premise imposes the cultural institutions that custody these documental type the need to define specific policies to them. Under the light of conservation, access and diffusion which constitute the theoretical reference and chronologically determining the invention of the different photographic processes, this study analyzed conservation and access policies that are adopted by photographic documentation centers that custody glass negative heaps, based in the policies from two cultural institutions with similar heap, objectives and institutional goals but, with climatic differences due to its geographical location, the South and Northeast regions of Brazil. It was ratified the importance of the archivist functions: preservation and preventive conservation to the long term duration of documents; the access, the need to create research instruments that guarantee access to the images content and, cultural editorial and educative diffusion. Involving all this, there is the need of continuous planning programs the policies. As a result of this study and to meet the requirements of a Vocational Masters Program, we produced a Guide with the adequate procedures to preserve photographic documents, especially in the glass negative medium, that aims at orientating archivists, conservators, historians, librarians, museum experts and other professionals about the correct procedures for preventive conservation, preservation and image restoration of information kept in this documental medium. / Parte do patrimônio cultural brasileiro encontra-se disperso em arquivos, museus e bibliotecas, todos centros de memória com um objetivo comum: coletar, preservar e colocar a memória da sociedade à disposição de usuários e pesquisadores. Nos arquivos, os suportes materiais são os mais diversos: documentos manuscritos, audiovisuais, sonoros, bibliográficos. Este estudo deteve-se a investigar, dentro do universo dos acervos fotográficos, um suporte documental específico o negativo de vidro. Inventado em 1848, o negativo de vidro foi o principal suporte documental das imagens fotográficas no mundo até 1888, quando foi inventado o negativo em película flexível. Portanto, as fontes visuais de informação sobre a história brasileira da segunda metade do século XIX existem porque neste período o suporte existente para a sensibilização da imagem era a chapa de vidro. Foi nela que as imagens do final do Brasil Império e do início do Brasil República foram produzidas, por pesadas câmeras fotográficas de madeira - as famosas lambe-lambe. A importância do suporte documental negativo de vidro como fonte de pesquisa sobre a história mundial e brasileira foi comprovada mediante incursões na literatura e investigações em acervos fotográficos brasileiros. Verificou-se que a fotografia constitui-se em poderoso veículo de comunicação visual, além de seu valor como fonte de informação e como patrimônio documental. Esta premissa, por sua vez, impõe as instituições culturais custodiadoras deste tipo documental a necessidade de definir políticas específicas para as mesmas. À luz dos conceitos sobre preservação, acesso e difusão, os quais se constituíram nos referenciais teóricos; e situando cronologicamente a invenção dos diversos processos fotográficos, esse estudo analisou políticas de preservação e acesso adotadas por centros de documentação fotográfica detentoras de negativos de vidro com base naquelas identificadas em duas instituições culturais com semelhanças nos acervos preservados e nos objetivos e metas institucionais, porém, com diferenças climáticas devido a sua localização geográfica - nas regiões Sul e Nordeste do Brasil. Ratificou-se a importância das funções arquivísticas: a preservação e conservação preventiva para aumento da longevidade dos documentos; o acesso - a necessidade de elaboração de instrumentos de pesquisa para garantir o alcance ao conteúdo das imagens; e a difusão cultural, editorial e educativa. Permeando tudo isto, a necessidade da existência de programas como planejamentos contínuos as políticas. Como fruto deste estudo foi produzido o produto final exigido em mestrados profissionalizantes - um manual contendo os procedimentos adequados para a preservação do documento fotografia, especificamente no suporte documental negativo de vidro, que pretende orientar arquivistas, conservadores, historiadores, bibliotecários, museólogos e outros profissionais, nas ações pertinentes a conservação preventiva, preservação e restauração de imagens sobre este suporte documental.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-05-30T23:34:35Z No. of bitstreams: 1 AndreaMariaFerreiraMoura_TESE.pdf: 2515776 bytes, checksum: 2a8045cdd1293bd9f2d83943858c8ae2 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-06-02T20:57:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 AndreaMariaFerreiraMoura_TESE.pdf: 2515776 bytes, checksum: 2a8045cdd1293bd9f2d83943858c8ae2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-02T20:57:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AndreaMariaFerreiraMoura_TESE.pdf: 2515776 bytes, checksum: 2a8045cdd1293bd9f2d83943858c8ae2 (MD5) Previous issue date: 2015-03-27 / A rica hist?ria em torno da legitima??o dos negativos como n?meros se apresenta como o fio condutor da presente pesquisa, que tem como objetivo principal compreender, a dura rejei??o inglesa aos negativos, ocorrida na segunda metade do s?culo XVIII e in?cio do s?culo XIX. Para tanto, optamos por realizar uma an?lise nas obras A Dissertation on the Use of the Negative Sign in Algebra, publicada em 1758, Tracts on the Resolution of Affected Algebra?ick Equations, publicada em 1800, de Francis Maseres, e Principles of Algebra, publicada em 1796, de William Frend, pois essas obras foram consideradas as bases te?ricas aos que resistiam a aceitar a exist?ncia dos negativos na Inglaterra do fim do s?culo XVIII. Al?m delas, consideramos relevante estudar tamb?m a primeira obra inglesa sobre Teoria dos N?meros, An Elementary Investigation of the Theory of Numbers, publicada em 1811, e que ? de autoria de Peter Barlow, um dos ?ltimos a assumir a postura rejeitadora na Inglaterra. A an?lise das obras dos dois primeiros nos mostrou que a rejei??o aos negativos se alicer?ava na impossibilidade de uma defini??o clara e rigorosa para esses n?meros nos moldes da concep??o de matem?tica vigente, que tinha a geometria como ?nica norma de rigor e verdade, j? que era a ?nica ?rea da matem?tica axiomatizada at? o in?cio do s?culo XIX. Sendo assim, a postura rejeitadora alerta para a necessidade de uma fundamenta??o matem?tica mais coerente com as teorias em desenvolvimento, e dessa forma contribui com a mudan?a na concep??o de matem?tica ocorrida no s?culo XIX. Por outro lado, nossa pesquisa revelou tamb?m que as ideias rejeitadoras acarretavam limita??es e restri??es na matem?tica em desenvolvimento da ?poca, dentre as quais destacamos as limita??es impostas ?s opera??es alg?bricas e a impossibilidade de um n?mero negativo ser raiz de uma equa??o. Quanto ? obra de Barlow, nossa investiga??o evidenciou que a postura rejeitadora do autor acarreta a necessidade de ado??o de estrat?gias para adequar a teoria por ele em desenvolvimento com as limita??es impostas pelo seu posicionamento rejeitador dos negativos. Com o intuito de enriquecer o conhecimento sobre o tema principal, a problem?tica em torno da legitima??o dos negativos, apresentamos no in?cio da pesquisa um apanhado hist?rico, focado no uso, aceita??o, rejei??o e concep??o dos n?meros negativos ao longo dos s?culos, iniciando pela Antiguidade e terminando no s?culo XIX, quando finalmente toda a pol?mica foi resolvida com a amplia??o do conceito de n?mero, a axiomatiza??o da ?lgebra e a ado??o da atual concep??o de matem?tica como ci?ncia formal. / The main purpose of this research is to review the rich history around the legitimization of negative numbers. It is important to highlight that although negatives were born in Ancient times, their full acceptance as numbers only happened in the XIX century. During this struggle, that lasted almost 2 thousand years, English mathematics, especially the one developed in the second half of the XVIII century and the early XIX century, played a key role as a scenario in which the rejection to negative numbers was fiercer. Therefore, the general purpose of this research is to understand the strong English rejection to negatives that occurred between 1750 and 1830. Consequently, we analyzed the works A Dissertation on the Use of the Negative Sign in Algebra, published in 1758 and Tracts on the Resolution of Affected Algebra?ick Equations, published in 1800 by Francis Maseres, and Principles of Algebra, published in 1796 by William Frend, as we consider these works as the theoretical basis for those who refused to accept the existence of negative numbers in England by the end of the XVIII century. Besides these two works, we also consider relevant to study the first English work on the Theory of Numbers, An Elementary Investigation of the Theory of Numbers, published in 1811 by Peter Barlow, one of the last ones to adopt a position against negatives in England. Seeking to understand the English rejection to negatives, we set the following specific goals: to identify the theoretical basis of the rejecting stream, analyze the main implications that this rejection posture provoked in the mathematics under development by the end of the XVIII century and study how the rejection theory affected the production of the first English work on the Theory of Numbers. As a result of the analysis developed on Maseres? and Frend?s works, we concluded that the rejection to negatives was based on the impossibility to clearly and strictly define these numbers within the mathematical concepts that existed in those days. We also noticed that the rejection defended by English mathematicians, on the one hand alerted on the need for a more coherent mathematical substantiation with regards to the theories that were being developed and on the other hand, rejection ideas provoked limitations and restrictions in the mathematics under development by the end of the XVIII century. Among these limitations we highlight those imposed to algebraic operations and the impossibility of having a negative number as an equation root. As for Barlow?s work, research showed that the author?s position against negatives implied the need to adopt strategies to adapt his theory to the limitations imposed by his rejection to negatives. Seeking to improve our knowledge on this issue, we introduce a historical review focused on the use, acceptance, rejection and conception of negative numbers since the early days until the XIX century, when finally the whole controversy was solved with the widening of the concept of number, the axiomatization of algebra and the adoption of modern mathematics as a formal science.

Linezolida foi o primeiro fármaco da classe das oxazolidinonas a ser aprovado para o uso clínico. Esta nova oxazolidinona inibe a síntese protéica impedindo a formação do complexo de iniciação formado pelo mRNA, tRNA f-Met e a subunidade 50S do ribossomo bacteriano. Embora a resistência à linezolida possa ser mediada pelo produto do gene cfr ou por mutações nas proteínas ribossômicas L3, L4 e L22, o mecanismo de resistência mais comum envolve mutações no domínio V do gene rRNA 23S. Entre março de 2008 a dezembro de 2011, 38 cepas de estafilococos coagulase-negativos (SCNs) resistentes à linezolida (20 S. epidermidis, 14 S. haemolyticus, 3 S. hominis e 1 S. warneri) isoladas de hemoculturas e pontas de cateter de pacientes internados em dois hospitais terciários do Estado de São Paulo foram incluídas neste estudo para a determinação dos mecanismos de resistência e análise da estabilidade do fenótipo resistente. As cepas de SCNs apresentaram altos níveis de resistência à linezolida (CIMs de 16-128 µg/ml) e foram multi-resistentes, permanecendo sensíveis à vancomicina e teicoplanina. A mutação G2576T foi identificada no domínio V do gene rRNA 23S em todas as cepas de SCNs, exceto em uma cepa de S. haemolyticus. O gene cfr e mutações nas proteínas L4 e L22 não foram detectados. Em relação à proteína L3, todas as cepas de S. epidermidis do hospital A, incluindo a cepa controle sensível à linezolida, apresentaram a substituição Leu101Val, sugerindo que essa mutação seja um marcador clonal dessa população sem envolvimento com a resistência à linezolida. A única cepa proveniente do hospital B (S. epidermidis) foi selvagem para essa proteína ribossômica. Somente uma cepa de S. haemoyticus teve uma mutação no gene rplC, resultando na alteração Val154Leu. Em S. hominis, a mutação Phe147Ile foi identificada em uma cepa, enquanto a associação de Gly139Arg e Met156Thr foi observada nas outras duas cepas dessa espécie. A identificação dessas mutações na proteína L3 de cepas de S. haemoyticus e S. hominis resistentes à linezolida reforça o papel desses sítios na aquisição da resistência ao fármaco em Staphylococcus spp. No entanto, a presença de G2576T no rRNA 23S torna difícil determinar exatamente qual o envolvimento das mutações na L3 com os elevados níveis de resistência à linezolida apresentados por essas cepas. Na ausência da pressão seletiva do antimicrobiano, após 130 passagens, a resistência à linezolida mediada pela mutação G2576T permaneceu estável nas cepas de SCNs deste estudo, as quais, de acordo com os perfis de restrição do domínio V gerados por NheI, tinham tanto alelos rRNA 23S selvagens como mutados. O sequenciamento individual do domínio V das diferentes cópias do gene rRNA 23S mostrou G2576T em todas as cópias amplificadas por PCR: 4/4 e 5/5 em S. epidermidis e 3/3 em S. haemolyticus (CIMs de 16-32 µg/ml). A estabilidade da cópia rRNA 23S mutada foi observada mesmo em uma cepa S. epidermidis sensível à linezolida, a qual apresentou uma redução da CIM de 4 para 1 µg/ml mantendo seu único alelo mutado ao longo do processo de reversão ao fenótipo sensível. A similaridade genética foi determinada por PFGE e mostrou uma disseminação clonal das diferentes espécies de SCNs resistentes à linezolida. A análise das cepas de S. epidermidis por MLST mostrou a ocorrência do clone ST-2 (CC2) nos dois hospitais. O aumento da pressão seletiva devido a exposições cada vez mais frequentes à linezolida, provavelmente, favoreceu a seleção e a disseminação de clones endêmicos de SCNs com a mutação G2576T na instituição A desde 2008. De forma diferente, o uso mais restrito do fármaco na instituição B poderia explicar a ocorrência isolada de uma única cepa resistente desde 2005. / Linezolid was the first agent of the oxazolidinone class to be introduced clinically. This oxazolidinone inhibits protein biosynthesis by preventing the formation of the initiation complex that consists of the mRNA, the f-Met tRNA and the 50S subunit of the ribosome. Although linezolid resistance has been mediated by the cfr-encoded product or by ribosomal proteins (L3, L4 and L22), the most common mechanism of resistance involves mutations in the central loop of domain V of the 23S rRNA gene. From March 2008 to December 2011, 38 coagulase-negative staphylococci (CNS) strains (20 S. epidermidis, 14 S. haemolyticus, 3 S. hominis e 1 S. warneri) exhibiting resistance to linezolid were isolated from blood and catheter cultures from patients in two tertiary care hospitals in the State of São Paulo and were included in this study for the ascertainment of the resistance mechanisms to this antimicrobial agent and for the analysis of the stability of this resistance. The strains exhibited high-level resistance to linezolid (MICs 16-128 µg/ml) and all were multidrug resistant, remaining susceptible to vancomycin and teicoplanin. The G2576T mutation in domain V region of 23S rRNA was identified in all isolates, except in a linezolid-resistant S. haemolyticus strain. The cfr gene and mutations in ribosomal proteins L4 and L22 were not detected. Regarding L3 protein analysis, all S. epidermidis strains of hospital A, including the linezolid-susceptible control strain, showed the L3 Leu101Val mutation, suggesting that this alteration is probably not involved in linezolid resistance. The one strain from hospital B (S. epidermidis) was wild-type for this ribosomal protein. Only one S. haemolyticus strain had a mutation in the L3 protein, Val154Leu. Two S. hominis strains showed Gly139Arg/Met156Thr mutations whereas one strain had Phe147Ile in L3 protein. The identification of these mutations in L3 protein of the linezolid-resistant S. haemolyticus and S. hominis strains strengthens the role of these sites in the acquisition of linezolid resistance in Staphylococcus spp. However, the presence of G2576T in the 23S rRNA gene makes difficult to determine exactly the role of L3 mutations in conferring elevated linezolid MIC values showed by these clinical strains. In the absence of antibiotic pressure, after 130 passages, linezolid resistance was stable in the clinical strains of this study, which did not have all copies of the 23S rRNA gene mutated, according to the restriction of the domain V fragment with NheI enzyme. Sequencing of the individual copies of the 23S rRNA gene in the serially passaged strains showed G2576T in all amplified copies by PCR: 4/4 and 5/5 in S. epidermidis and 3/3 in S. haemolyticus strains (MIC of 16-32 µg/ml). The stability of the mutant rRNA copy was also observed in the linezolid-susceptible S. epidermidis strain (MIC of 4 µg/ml). After the passages in antibiotic-free medium, the linezolid MIC of this strain fell to 1 µg/ml and the G2576T mutation persisted in one 23S rRNA gene copy. The clonal relatedness of the strains was determined by PFGE and revealed a clonal dissemination of different CNS species. Regarding MLST analysis, all S. epidermidis strains belonged to the sequence type ST2 (CC2). Most likely, the increased selective pressure has contributed to the selection of endemic linezolid-resistant CNS clones showing the G2576T mutation that have been disseminated in the institution A since 2008. Differently, the restricted use of linezolid in the institution B could explain the occurrence of a single resistant strain since 2005.

Made available in DSpace on 2014-06-12T22:58:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4230_1.pdf: 1307892 bytes, checksum: 644bb78df70d6bc742be17ec4270551b (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Introdução: Apesar da depressão pós-parto ser bastante pesquisada, algumas lacunas importantes no conhecimento desse transtorno ainda existem. No Brasil, por exemplo, não existem estudos de prevalência que tenham utilizado entrevistas clínicas estruturadas para o seu diagnóstico. Além disso, também no nosso meio, não se conhece a prevalência dos transtornos de ansiedade no puerpério e a sua comorbidade com depressão. Outro aspecto relevante é que embora programas de tratamento de depressão pós-parto com psicoterapia cognitivocomportamental sejam realizados e pesquisados, estudos que comparem a freqüência de pensamentos disfuncionais entre puérperas deprimidas e puérperas sem depressão não têm sido encontrados na literatura. Tanto pesquisas que estudem comorbidade entre depressão pós-parto e transtornos de ansiedade quanto aquelas que possam avaliar quais pensamentos disfuncionais estão mais presentes nessas puérperas podem dar subsídios para a construção de programas de terapia cognitiva baseados em evidências. Objetivos: O estudo teve três eixos centrais: 1) Estimar a prevalência de depressão pós-parto em Recife-PE utilizando a Structured Clinical Interview for DSM-IV Axis I Disorders (SCID-I); 2) Avaliar quais pensamentos disfuncionais de acordo com o Postnatal Negative Thoughts Questionnaire (PNTQ) estavam mais presentes em mulheres com depressão pós-parto quando comparadas às puérperas sem depressão; 3) Estimar a prevalência de transtornos de ansiedade no puerpério e avaliar a freqüência de comorbidade com depressão. Método: Uma amostra de conveniência de 400 puérperas foi selecionada em ambulatórios públicos e em um consultório privado de puericultura enquanto aguardavam consultas para seus bebês. Essas mulheres foram entrevistadas com o uso da SCID-I para depressão e com o Mini International Neuropsychiatric Interview para transtornos de ansiedade. Além disso, foram solicitadas a preencherem o PNTQ. Esse último questionário precisou ser traduzido de maneira sistemática e teve a sua confiabilidade testada. Resultados: A prevalência de depressão pós-parto foi de 7,2%. Cerca de 30% das puérperas apresentaram pelo menos um transtorno de ansiedade, tendo sido mais prevalentes o transtorno de ansiedade generalizada (16,5%), a fobia social (11,2%) e o transtorno obsessivo-compulsivo (9,0%). Dentre as 29 puérperas que apresentaram depressão, 26 (89,7%) tinham pelo menos um transtorno de ansiedade comórbido, sendo que 9 (31,0%) tinham transtorno do pânico, 8 (27,6%) tinham agorafobia, 13 (44,8%) tinham fobia social, 14 (48,3%) tinham transtorno obsessivo-compulsivo, 9 (31,0%) tinham transtorno do estresse pós-traumático, e 19 (65,5%) preenchiam critérios para transtorno de ansiedade generalizada. Quanto aos pensamentos disfuncionais pesquisados pelo PNTQ, com a exceção do item eu não quero ficar sozinha com o meu bebê , todos tiveram correlação robusta com a depressão. Além disso, houve uma tendência ao maior aparecimento de pensamentos disfuncionais entre as mulheres que apresentaram depressão em comorbidade com transtorno de ansiedade generalizada do que entre aquelas deprimidas sem esse transtorno. A tradução para o português do PNTQ teve boa aceitação entre as puérperas e testes de confiabilidade com resultados satisfatórios. Conclusões: A taxa de depressão pós-parto nesta amostra foi de 7,2%. O PNTQ contém pensamentos disfuncionais que estão mais presentes em mulheres com depressão pós-parto. Cerca de 30% das puérperas apresentaram pelo menos um transtorno ansioso. Dentre as deprimidas 89,7% apresentavam pelo menos um transtorno de ansiedade

Submitted by Geandra Rodrigues (geandrar@gmail.com) on 2018-09-04T15:39:47Z No. of bitstreams: 1 homerogoncalvesjunior.pdf: 2526505 bytes, checksum: e3bc0f5bc2176febea8072cc318baab6 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2018-09-04T15:52:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 homerogoncalvesjunior.pdf: 2526505 bytes, checksum: e3bc0f5bc2176febea8072cc318baab6 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-04T15:52:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 homerogoncalvesjunior.pdf: 2526505 bytes, checksum: e3bc0f5bc2176febea8072cc318baab6 (MD5) Previous issue date: 2018-07-06 / O tratamento do câncer de mama baseia-se na classificação dos casos, em termos de estadiamento e do perfil biomolecular. Os Tumores Triplo Negativos (TTN) representam um grupo especial de neoplasias mamárias que não expressam receptores hormonais e nem o antígeno Her2. São considerados agressivos e de pior evolução, e quando estudados em particular, apresentam muita heterogeneidade. Importa saber se a caracterização dos tumores como Triplo Negativos, é suficiente para delimitar o grupo em termos de prognóstico e terapêutica. Este estudo teve como objetivo comparar os aspectos clínico-epidemiológicos dos Tumores Triplo Negativos em relação aos Não Triplo Negativos, em coorte de mulheres com câncer de mama assistidas em centros oncológicos de referência de Juiz de Fora, Minas Gerais. A sobrevida global e a sobrevida livre de doença foram calculadas pelo método de Kaplan Meier, e as curvas de sobrevida foram avaliadas pelo teste de Log-Rank, nos subgrupos Triplo Negativos e Não Triplo Negativos (NTN). Os fatores prognósticos foram comparados pelo modelo de riscos proporcionais de Cox. Os Tumores Triplo Negativos apresentaram diferenças demográficas em relação aos NTN, com acúmulo de pacientes não brancas e de baixo nível sociocultural; e ainda com aspectos de maior gravidade ao diagnóstico. A evolução também foi pior, tanto em termos de sobrevida global quanto sobrevida livre de doença dentre os TTN. Na análise univariada, os fatores: idade, cor da pele, escolaridade, tamanho do tumor e grau tumoral, estado das axilas e estadiamento, bem como taxas elevadas dos marcadores P53 e Ki 67, se mostraram associados a sobrevida livre de doença nos Tumores Não Triplo Negativos. No cálculo da sobrevida global, essas variáveis se mantiveram, exceto a idade; e foi constatado maior risco para as mulheres oriundas do serviço público de saúde, bem como o surgimento de metástases no decurso do seguimento. Para os Triplo Negativos, a análise univariada mostrou influência do estado axilar e estadiamento na sobrevida livre de doença; e os mesmos fatores acrescidos do surgimento de metástases, para a sobrevida global. Na análise multivariada a escolaridade e o estado axilar representaram risco à sobrevida livre de doença para NTN, enquanto a cor da pele e o estadiamento para a sobrevida global. Quanto aos TTN, sua evolução se mostrou ligada a dois aspectos: o comprometimento axilar para sobrevida livre de doença e global; e também a multicentricidade para a sobrevida global. Os Tumores Triplo Negativos aparentam ter biologia bem diversa dos Não Triplo Negativos, na dependência dos componentes histológicos e moleculares que portam. A classificação molecular por imunoistoquímica se mostrou capaz de identificar os dois grupos tumorais e auxiliar na orientação terapêutica. / Current breast cancer treatment is based on the classification of tumor stage and molecular profile. Triple-negative breast cancer (TNBC) is a specific subset of tumors characterized by the absence of hormone and HER2 receptors. Despite being usually associated with a more aggressive clinical course, there is high heterogeneity within TNBC. Therefore, it has been questioned whether current classification of TNBC is adequate enough to assess its prognosis and make therapeutic decisions. This study thus aimed to investigate to which extent TNBC profile classification was able to efficiently distinguish this tumor subtype from other subtypes of breast cancer. It was performed on a cohort of women with breast cancer treated at referral centers in Juiz de Fora, Southeastern Brazil. Overall and disease-free survival and prognostic factors were assessed and compared for TNBC and non-TNBC. Survival functions were calculated using the Kaplan-Meier method, and the log-rank test was used to compare the survival curves. Prognostic factors were analyzed by the Cox proportional hazards model. TNBC presented demographic differences compared to non-TNBC as it was more prevalent among nonwhite and less educated women. TNBC also presented at diagnosis with clinical parameters of advanced disease and had overall and disease-free survival significantly lower than non-TNBC. In univariate analysis the factors: age, color of the skin, education level, size and degree of tumor, axillary status and staging, as well as high rates of P53 e Ki 67 have been shown to be associated with disease-free survival in non-TNBC. These variables remained the same in the calculation of overall survival except for age; and it was also observed a greater risk for women from the public health service as well as the appearance of metastases during the follow-up. In multivariate analysis education level and axillary lymph node involvement presented a risk for disease-free survival while the color of skin and staging, for overall survival in non-TNBC. Regarding TNBC, its evolution was related to two aspects: axillary impairment for disease-free and global survival and multicentricity for overall survival. TNBC presents distinct biological properties compared to non-TNBC, which seems to be related to its specific histological and molecular components. The molecular classification by immunohistochemistry showed to be able to identify the two tumor groups and to support the therapeutic orientation.

A linhagem queratinolítica Chryseobacterium sp. Kr6 mostrou-se com possibilidade de aplicação em processos envolvendo queratinólise, principalmente na hidrólise de penas de frango e depilação de couro bovino. No presente trabalho avaliou-se o efeito da composição do meio sobre o crescimento e atividade proteolítica deste isolado e uma protease queratinolítica (queratinase) foi purificada e caracterizada. O microrganismo mostrou-se adaptado à utilização de queratina como substrato durante o crescimento, produziu diferentes proteases dependendo do meio utilizado e a maior atividade proteolítica foi atingida quando utilizado meio de cultivo com penas como única fonte de carbono e nitrogênio. A adição de fonte extra de nutrientes resultou em uma parcial repressão catabólica. Uma protease extracelular (Q1) foi purificada cerca de 14 vezes utilizando cromatografia de interação hidrofóbica em Phenyl-Sepharose CL 4B e gel filtração em Superose H12R. Q1 mostrou ser uma proteína monomérica com peso molecular de 64 KDa determinado por SDS-PAGE e pH e temperatura ótimos de 8,5 e 50°C respectivamente. O perfil de inibição indica tratar-se uma metaloprotease e as seqüências internas dos peptídeos resultantes de digestão tríptica mostraram homologia ao sítio ativo e de ligação ao Zn da família M14 (Carboxipeptidase). A atividade proteolítica foi estimulada pela presença de íons Ca2+ e Mg2+ e inibida por Cu2+, Zn2+, Al2+, Hg 2+ e agentes redutores. Q1 apresentou atividade queratinolítica sobre o substrato keratin azure, mas não foi capaz de hidrolisar penas de frango sugerindo a necessidade de outras enzimas durante o processo de degradação de penas. Utilizando os iniciadores degenerados desenhados com base na seqüência dos peptídeos, foi amplificado um fragmento de 470 pb correspondente a uma região do possível gene desta metaloproteína utilizando DNA e cDNA como molde. A seqüência do fragmento pode estar sendo expressa, mas não apresentou similaridade e homologia a proteínas conhecidas e portando, indicativa de uma nova metaloprotease. / The strain Chryseobacterium sp. kr6 shown to be useful for biotechnological purposes such as hydrolysis of poultry feathers and de-hairing of bovine pelts. The effect of media composition on the protease production and growth by this strain was studied and a keratinolytic protease (keratinase) was purified and characterized. The strain was adapted to use keratin as substrate to growth, produced different proteases in different media composition and the higher proteolytic activity was reached when used feather as only source of carbon and nitrogen. The addition of sources of nutrients has resulted in partially repressed catabolism. An extracellular protease Q1) was purified 14-fold by chromatography using the hydrophobic interaction Phenyl-Sepharose CL 4B column and gel filtração in Superose 12HR. SDS-PAGE indicated that the Q1 is a monomeric protein with molecular mass of 64 KDa. and optima pH and temperature were 8,5 e 50°C, respectively. The inhibition profile indicates to be a Zn-metalloprotease and analysis of tryptic peptides sequence revealed sequence homology to the conserved active site and Zn binding site, which may characterize keratinase Q1 as a member of M14 metalloprotease family (Carboxipeptidase). The activity was stimulated by of Ca2+ and Mg2+ and inhibited by Cu2+, Zn2+, Al2+, Hg 2+ and reducing agents. Q1 presented keratinolytic activity under substrate keratin azure, but was unable to hydrolyze poultry feather, suggesting the requirement by other enzymes in the feather hydrolysis mechanism. Degenerate primers amplified a 470 bp, corresponding to a probable gene region of this metalloprotein, with DNA and cDNA. The sequence is being expressed but do not showed similarity and homology to known proteins, thus indicating a new metalloprotease.

Esta dissertação apresenta uma experiência de aplicação de sequência de atividades cujo tema central é números relativos, envolvendo uso de jogos. Tal sequência foi aplicada em uma turma do sétimo ano de uma escola particular da cidade de Porto Alegre. A construção da sequência apoiou-se em literatura que afirma que jogos podem propiciar contextos que façam mais sentido aos alunos do que as situações ditas do cotidiano, comumente retratadas em livros didáticos. Buscou-se, por meio dos jogos, constituir contextos que provocassem a necessidade da representação de números de sentidos opostos e das operações com esses números, incluindo situações complexas como a do efeito resultante da retirada de um número negativo. Foram coletados registros da produção dos alunos e das discussões em sala de aula por meio de gravação em áudio, fotografias de cadernos e do quadro-negro, e questionários preenchidos pelos alunos após cada atividade. A análise desses materiais permitiu concluir que os jogos representaram uma sustentação para o pensamento lógico e operatório dos alunos, na construção dos esquemas mobilizados para somar e subtrair números positivos e negativos. / This work presents an experiment of an activity sequence centered on Relative Numbers and involving the use of games. Such sequence was applied in a seventh grade class of a Porto Alegre’s private school. The conception of the sequence was supported by literature that affirms that games can provide contexts that make more sense to the students than the so-called “daily situations” frequently presented in didactic books. It was sought, by the games, to constitute contexts that provoked the need for representation of numbers with opposite signs and the operations with those numbers, including more complex cases, like the result of subtracting a negative number. The data collected includes audio recordings of students’ production and discussions, notebooks and blackboard’s photographs, and questionnaires filled by students after each activity. The analysis of this data allowed me to conclude that games could support the logical and operational thinking of the students in the construction of mobilized schemes to add and subtract positive and negative numbers.

A linhagem queratinolítica Chryseobacterium sp. Kr6 mostrou-se com possibilidade de aplicação em processos envolvendo queratinólise, principalmente na hidrólise de penas de frango e depilação de couro bovino. No presente trabalho avaliou-se o efeito da composição do meio sobre o crescimento e atividade proteolítica deste isolado e uma protease queratinolítica (queratinase) foi purificada e caracterizada. O microrganismo mostrou-se adaptado à utilização de queratina como substrato durante o crescimento, produziu diferentes proteases dependendo do meio utilizado e a maior atividade proteolítica foi atingida quando utilizado meio de cultivo com penas como única fonte de carbono e nitrogênio. A adição de fonte extra de nutrientes resultou em uma parcial repressão catabólica. Uma protease extracelular (Q1) foi purificada cerca de 14 vezes utilizando cromatografia de interação hidrofóbica em Phenyl-Sepharose CL 4B e gel filtração em Superose H12R. Q1 mostrou ser uma proteína monomérica com peso molecular de 64 KDa determinado por SDS-PAGE e pH e temperatura ótimos de 8,5 e 50°C respectivamente. O perfil de inibição indica tratar-se uma metaloprotease e as seqüências internas dos peptídeos resultantes de digestão tríptica mostraram homologia ao sítio ativo e de ligação ao Zn da família M14 (Carboxipeptidase). A atividade proteolítica foi estimulada pela presença de íons Ca2+ e Mg2+ e inibida por Cu2+, Zn2+, Al2+, Hg 2+ e agentes redutores. Q1 apresentou atividade queratinolítica sobre o substrato keratin azure, mas não foi capaz de hidrolisar penas de frango sugerindo a necessidade de outras enzimas durante o processo de degradação de penas. Utilizando os iniciadores degenerados desenhados com base na seqüência dos peptídeos, foi amplificado um fragmento de 470 pb correspondente a uma região do possível gene desta metaloproteína utilizando DNA e cDNA como molde. A seqüência do fragmento pode estar sendo expressa, mas não apresentou similaridade e homologia a proteínas conhecidas e portando, indicativa de uma nova metaloprotease. / The strain Chryseobacterium sp. kr6 shown to be useful for biotechnological purposes such as hydrolysis of poultry feathers and de-hairing of bovine pelts. The effect of media composition on the protease production and growth by this strain was studied and a keratinolytic protease (keratinase) was purified and characterized. The strain was adapted to use keratin as substrate to growth, produced different proteases in different media composition and the higher proteolytic activity was reached when used feather as only source of carbon and nitrogen. The addition of sources of nutrients has resulted in partially repressed catabolism. An extracellular protease Q1) was purified 14-fold by chromatography using the hydrophobic interaction Phenyl-Sepharose CL 4B column and gel filtração in Superose 12HR. SDS-PAGE indicated that the Q1 is a monomeric protein with molecular mass of 64 KDa. and optima pH and temperature were 8,5 e 50°C, respectively. The inhibition profile indicates to be a Zn-metalloprotease and analysis of tryptic peptides sequence revealed sequence homology to the conserved active site and Zn binding site, which may characterize keratinase Q1 as a member of M14 metalloprotease family (Carboxipeptidase). The activity was stimulated by of Ca2+ and Mg2+ and inhibited by Cu2+, Zn2+, Al2+, Hg 2+ and reducing agents. Q1 presented keratinolytic activity under substrate keratin azure, but was unable to hydrolyze poultry feather, suggesting the requirement by other enzymes in the feather hydrolysis mechanism. Degenerate primers amplified a 470 bp, corresponding to a probable gene region of this metalloprotein, with DNA and cDNA. The sequence is being expressed but do not showed similarity and homology to known proteins, thus indicating a new metalloprotease.