Spelling suggestions: "subject:"cysticercosis"" "subject:"cisticercose""
31 |
Seleção, caracterização e aplicação de anticorpos scFv (single chain variable fragment) na captura de antígenos para o sorodiagnóstico da neurocisticercose humana / Selection, characterization and aplication of scFv antibodies (single chain variable fragment) to capture antigens for human neurocysticercosis serodiagnosisRibeiro, Vanessa da Silva 06 July 2012 (has links)
Human neurocysticercosis (NC) is an important but neglected cause of epilepsy in
developing countries where the parasite occurs. Expression of single-chain variable fragment
(scFv) antibodies on the surface of bacteriophage is widely used to prepare antibodies with
pre-defined specificities. A phage antibody library was selected against peptides displayed
on phages coupled to beads and total saline extract of Taenia solium metacestodes
immobilized on microtiter plate wells. After two rounds of selection 96 phage clones of each
panning were selected, tested for scFv expression and specificity to each target. Specific
clones were further analyzed by ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay), Dot-blot,
sequencing and immunofluorescence. After selection, three clones were used for antigen
capture to characterize its targets for future immunodiagnostic assays development. Total
saline extract was fractionated on ion exchange resin diethylaminoethyl (DEAE), and
fractions were tested by ELISA to detect sera IgG from: NC, other parasites and health
controls (40 each). The fractions with best diagnostic parameters (sensitivity, specificity,
area under curve and likelihood ratio, calculated by TG-ROC) were selected and subjected to
antigen capture using each purified scFv clone. Each captured fraction was tested by ELISA
to detect IgG in 30 serum samples from each group. In immunofluorescence tests, no
fluorescence was observed in negative controls, and all clones showed a non-uniform
staining profile, and their targets were elucidated through mass spectrometry. After ion
exchange fractionation and ELISA tests, DEAE S2 fraction showed to be the best one and
was used to capture new antigens. DEAE S2 showed 93.3% specificity. Among all clones,
A4 and B6 captured antigens from saline extract and DEAE S2 fraction, respectively, with
the best diagnostic parameters. In conclusion, antibody phage display technology is a
potential approach for the study of antigen-antibody interactions, which can be used to
further elucidate the biology of interaction on neurocysticercosis and to capture new antigens
with potential applications in NC diagnosis and therapeutics. / A neurocistocercose humana (NC) é uma doença muito importante, porém
negligenciada e é a maior causa de epilepsia em países em desenvolvimento onde a
parasitose ocorre. A expressão de fragmentos de cadeia única das regiões variáveis de
anticorpo (scFv) na superfície de bacteriófagos é amplamente utilizada para obter anticorpos
com especificidades pré-definidas. Uma biblioteca de anticorpos foi utilizada para a seleção
de clones específicos à peptídeos expostos em fagos acoplados a beads e ao extrato salino
total de Taenia solium (S) imobilizado em placas de microtitulação. Após dois ciclos de
seleção, 96 clones de anticorpos foram selecionados contra cada alvo, testados para
expressão do scFv e especificidade pelo alvo. Aqueles clones que se mostraram específicos
foram melhor analisados por ELISA (Enzyme linked immunosorbent assay), Dot blot,
sequenciamento e imunofluorescência. Três clones foram selecionados para serem utilizados
na captura antigênica e caracterização do antígeno verdadeiro e para captura de novos
antígenos com potencial aplicação em testes diagnósticos. O extrato S foi fracionado em
resina de troca iônica diethylaminoethyl (DEAE) para obter frações que foram
posteriormente testadas por ELISA para detectar IgG em amostras de soro de pacientes: com
NC, outras parasitoses e saudáveis, 40 amostras cada grupo. A fração com melhores
parâmetros diagnósticos (sensibilidade, especificidade, área sob a curva e likelihood ratio,
calculadas por TG-ROC) foi selecionada e sujeita à captura antigênica usando cada clone de
scFv purificado. Cada fração capturada foi testada por ELISA para detectar IgG em 30
amostras de soro de cada grupo. Nos testes de imunofluorescência, nenhuma fluorescência
foi observada com os controles negativos e todos os clones mostraram um padrão de
marcação não uniforme, seus antígenos alvo foram elucidados por espectrometria de massas.
Após fracionamento por troca iônica e ELISA, a fração DEAE S2 se mostrou a melhor e foi
utilizada para a captura de novos antígenos. A fração DEAE S2 mostrou especificidade de
93,3%. Dentre todos os clones, o A4 e o B6 capturaram antígenos do extrato S e fração
DEAE S2, respectivamente, com os melhores parâmetros diagnósticos. Em conclusão a
tecnologia de exposição de anticorpos em fagos é uma técnica potencial para o estudo de
interações antígeno-anticorpo utilizadas para melhor elucidar a a biologia da interação na NC
e para capturar novos antígenos potencialmente aplicáveis para o diagnóstico da NC. / Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
|
32 |
Polimorfismo por Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) em metacestódeos de Taenia solium provenientes de diferentes áreas geográficas do Brasil e a reatividade de anticorpos IgG séricos de pacientes com neurocisticercose frente aos isolados obtidosBarcelos, Ivanildes Solange da Costa 07 April 2006 (has links)
Neurocysticercosis (NC) is a polymorphic disease and the immune response in
human carrier is heterogenic. In this study, 35 primers were used for amplifications by
Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) of Taenia solium metacestodes, from five
different geographic areas in Brazil: 1) Distrito Federal (DF), Center West; 2) Barreiras
(BA), Northeast and Southeast; 3) Hydro Basin of the Mosquito River (North of Minas
Gerais, RM-MG), 4) São Paulo (SP) and 5) Uberaba (Minas Gerais, UB-MG).
Metacestodes saline crude extracts of four populations (DF, BA, RM-MG e SP) were used
for the detection of specific IgG antibodies by ELISA and Western Blotting (WB). A total
of 157 serum samples of three groups, (G1): 49 NC patients; (G2): 68 patients with other
helminthiasis: hydatidosis (10), taeniasis (20), strongyloidiasis (20), schistosomiasis (10)
and hymenolepiasis (8); and (G3): 40 healthy individuals; were analyzed by ELISA. From
these, the 98 serum samples were assayed by WB; G1 (49), G2 (39) and G3 (10). The
genetic distances, in disagreement percentage, between the metacestode populations were
calculated from of 15 RAPD markers and showed 49.5% (DF), 48% (BA), 38.5% (UBMG)
and 28% (RM-MG and SP) of genetic distances. Six primers identified polymorphic
fragments and the primers 26 (GGGTTTGGCA) and 29 (TCGCCAGCCA) allowed a
better differentiation of populations. The fragments of 1000, 500 and 326 pb (pairs of
bases) in the UB-MG and of 600 and 244 pb in RM-MG were amplified by primer 26. The
fragments generated by primer 29 were 500, 800 and 1191 pb, 300 and 1377 pb, 1000 pb
and 244 and 434 pb in SP, UB-MG, DF and BA populations, respectively. In G1, the
positivity by ELISA was: 90% (DF), 69% (BA), 71% (MG) and 67% (SP). The DF extract
was more antigenic than others (p=0.02). In WB, the 64-68 kDa antigens were recognized
in all extracts, exclusively, in serum samples from active NC patients (p=0.001). Variation
in banding pattern was detected between the extracts (p<0.05). In G2, the serum samples
of hydatidosis patients presented from 70 to 90% positivity by ELISA in antigenic
extracts (p<0.05); however, the bands recognition pattern in WB was different from that
presented in G1 samples. The 77 kDa band was significantly identified in hydatidosis
samples (p=0.0001). In conclusion, the T. solium populations analyzed showed genetic
variability and antigenic differences. / A neurocisticercose (NC) constitui doença polimórfica, apresentando
heterogeneidade da resposta imune no hospedeiro humano. Nesse estudo, o teste Random
Amplified Polymorphic DNA (RAPD) foi utilizado com 35 primers na detecção de
polimorfismo em metacestódeos de Taenia solium provenientes de cinco áreas geográficas
distintas do Brasil: 1) Distrito Federal (DF), região Centro-Oeste; 2) Barreiras (BA), região
nordeste e da região sudeste: 3) Bacia Hidrográfica do Rio Mosquito (norte de Minas
Gerais, RM-MG), 4) São Paulo (SP) e 5) Uberaba (Minas Gerais, UB-MG). Os extratos
salinos totais de metacestódeos de quatro populações (DF, BA, RM-MG e SP) foram
utilizados na detecção de anticorpos IgG específicos pelo ELISA e Western Blotting
(WB). As 157 amostras de soro de três grupos (G) de indivíduos: G1: 49 pacientes com
NC; G2: 68 pacientes com outras helmintíases, sendo hidatidose (10), teníase (20),
estrongiloidíase (20), esquistossomose (10) e himenolepíase (8) e G3: 40 indivíduos
saudáveis (controles); foram analisadas pelo ELISA. Foram ensaiadas 98 amostras de
soro: G1 (49), G2 (39) e G3 (10) pelo WB. As distâncias genéticas, por porcentagem de
desacordo, foram de 49,5% (DF), 48% (BA), 38,5% (UB-MG) e 28% (RM-MG e SP) nas
populações de metacestódeos, calculadas a partir de 15 marcadores de RAPD. Seis
primers geraram fragmentos polimórficos nos isolados analisados, sendo que os
primers 26 (GGGTTTGGCA) e 29 (TCGCCAGCCA) permitiram melhor diferenciação
entre as populações, o primer 26 gerou os fragmentos de 1000, 500 e 326 pb (pares de
bases) na amostra de UB-MG, e de 600 e 244 pb em RM-MG. O 29 gerou fragmentos em
quatro das populações analisadas, sendo 500, 800 e 1191 pb em SP, 300 e 1377 pb em UBMG,
1000 pb no DF e 244 e 434 pb na BA. No G1, as freqüências de positividade no
ELISA, foram: 90% (DF), 69% (BA), 71% (MG) e 67% (SP), sendo o extrato do DF mais
antigênico que os demais (p = 0,02). No WB, o peptídeo de 64-68 kDa foi reconhecido em
todos os extratos, exclusivamente, em amostras de pacientes com NC ativa (p=0,001).
Detectou-se variação no padrão de reconhecimento de bandas entre os extratos (p<0,05).
No G2, as amostras de soro de pacientes com hidatidose apresentaram de 70 a 90% de
positividade no ELISA frente aos extratos analisados (p<0,05); porém, o padrão de
reconhecimento de bandas no WB diferiu do apresentado pelas amostras do G1, sendo que
a banda de 77 kDa foi significativamente identificada pelas amostras de pacientes com
hidatidose (p=0,0001). Concluiu-se que as populações de T. solium analisadas nesse
estudo, apresentaram variabilidade genética e diferenças de antigenicidade. / Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
|
33 |
Aspectos histopatológicos da neurocisticercose experimental e perfil de citocinas em camundongos C57BL/6 / Histopathological aspects of experimental neurocysticercosis and profile of cytokines in C57BL / 6 miceMilhomem, Anália Cirqueira 15 March 2017 (has links)
Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-04-12T11:58:21Z
No. of bitstreams: 2
Dissertação - Anália Cirqueira Milhomem - 2017.pdf: 1969169 bytes, checksum: 990bb0603cc940e039264e7209f95907 (MD5)
license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-04-12T11:58:37Z (GMT) No. of bitstreams: 2
Dissertação - Anália Cirqueira Milhomem - 2017.pdf: 1969169 bytes, checksum: 990bb0603cc940e039264e7209f95907 (MD5)
license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-12T11:58:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2
Dissertação - Anália Cirqueira Milhomem - 2017.pdf: 1969169 bytes, checksum: 990bb0603cc940e039264e7209f95907 (MD5)
license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5)
Previous issue date: 2017-03-15 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Neurocysticercosis (NCC) is one of the diseases neglected by the World Health Organization (WHO), and the parasitic infection that most affects the Central Nervous System (CNS) throughout the world. Thus, it is necessary to deepen the knowledge regarding its immunopathogenesis and physiopathology in order to elucidate mechanisms by which NCC causes tissue injury in infected patients. With the advent of this necessity the search for ways to facilitate the experimental study of this disease has arisen, and today, the use of the cysticercus species of Taenia crassiceps is well diffused in the scientific environment. The objective of this work was to describe the general pathological processes and the profile of systemic and in situ cytokines in C57BL / 6 mice after intracranial inoculation of viable cysticerci of T. crassiceps. Three experimental groups were used: healthy control, surgical control and infected group. After 90 days of infection, mice were euthanized and histopathological analysis of the brain, spleen cell culture, homogenate production and ELISA for IL-4, IL10 and IFN-γ were performed. The histopathological analysis of the encephalus allowed to verify the presence of cysticercus in the lateral ventricles or in the extraparenchymal region, presence of mononuclear inflammatory infiltrate (MN) around the parasite, microgliosis and meningitis. The analysis of the systemic and in situ immune profiles of the infected mice showed a predominance of Th2-type response, with high IL-4 concentration, low IFN-γ and IL-10 levels modulating the two responses, but mainly Th1. The in situ cytokine dosage was similar between the experimental groups, which leads us to conclude that the cysticercus exerts immunomodulation for its survival, in addition to which it also benefits from the cerebral immunoprivilege. In conclusion, correlating the immune and histological aspects described after the analysis, we can suggest that T. crassiceps cysticercosis infection in C57BL / 6 mice triggers an inflammatory response, a predominance of Th2 type profile with MN inflammatory infiltrate presence, Meningitis and microgliosis. / A neurocisticercose (NCC) é uma das doenças negligenciadas pela Organização Mundial de Saúde (OMS), e a infecção parasitária que mais acomete o Sistema Nervoso Central (SNC) em todo o mundo. Dessa forma, faz-se necessário aprofundar os conhecimentos quanto a sua imunopatogênese e fisiopatologia com o intuito de elucidar mecanismos pelos quais a NCC provoca lesão tecidual nos pacientes infectados. Com o advento desta necessidade a busca por formas de facilitar o estudo experimental desta doença surgiram, e hoje, a utilização da espécie de cisticercos de Taenia crassiceps está bem difundida no meio científico. O objetivo deste trabalho foi descrever os processos patológicos gerais e o perfil de citocinas sistêmicas e in situ em camundongos C57BL/6, após inoculação intracraniana de cisticercos viáveis de T. crassiceps. Para isso foram utilizados três grupos experimentais: controle saudável, controle cirúrgico e grupo infectado. Após 90 dias de infecção foi realizada eutanásia dos camundongos e posteriormente foi realizada análise histopatológica dos encéfalos, cultura de células do baço, produção de homogenato e ELISA para dosagem de IL-4, IL10 e IFN-γ. A análise histopatológica dos encéfalos permitiu comprovar a presença do cisticerco, nos ventrículos laterais ou na região extraparenquimal, presença de infiltrado inflamatório mononuclear (MN) ao redor do parasito, microgliose e meningite discretas. As análises dos perfis imunes sistêmico e in situ dos camundongos infectados não apresentou diferenças estatisticamente significativas entre os grupos analisados, o que nos fazer deduzir que o cisticerco exerce imunomodulação buscando sua sobrevivência, além do que se beneficia também do imunoprivilégio cerebral. Em conclusão, correlacionando os aspectos imunes e histológicos descritos após as análises realizadas, podemos sugerir que a infecção por cisticercos de T. crassiceps em camundongos C57BL/6, desencadeia resposta inflamatória com a presença infiltrado inflamatório MN, meningite e microgliose.
|
34 |
Neurocisticercose: relação entre dosagem de antígenos de Taenia no líquido cefalorraquidiano e imagem através de ressonância magnética / Neurocysticercosis: relationship between Taenia antigen detection in the cerebrospinal fluid and magnetic resonance imagingRonaldo Abraham 17 November 2006 (has links)
Neurocisticercose (NC) é a doença parasitária mais comum do SNC, representando grave problema de saúde pública em nosso país. O diagnóstico da NC é baseado em dados clínicos e epidemiológicos, reações sorológicas no soro e LCR, além de exames de neuroimagem. A detecção de antígenos de Taenia através de teste de ELISA, mediante a utilização de anticorpos altamente purificados, constitui metodologia recente capaz de informar sobre a vigência de atividade clínica da doença. O objetivo deste estudo foi determinar a relação entre a dosagem de antígenos de Taenia mo LCR com as imagens obtidas através da RM, em pacientes com o diagnóstico definido de NC segundo os critérios diagnósticos atuais. Sessenta e três pacientes foram submetidos a exame detalhado do LCR, além de pesquisa de antígeno de Taenia através de teste de ELISA, utilizando anticorpos de soro de coelhos imunizados com líquido vesicular de Taenia crassiceps. Uma amostra de sangue foi colhida simultaneamente à coleta do LCR, e um exame de RM encefálica foi realizado em todos os pacientes. Observamos relação significativa entre a detecção de antígenos de Taenia e o número total de lesões e do número de cistos íntegros detectados pela RM. Quando comparados dois ou mais cistos em degeneração com apenas um cisto, observamos detecção significativamente mais alta no primeiro grupo. Encontramos também detecção de antígenos significativamente mais alta quando as lesões se localizavam na profundidade dos hemisférios cererbrais, mas não na presença de cistos calcificados. Os resultados demonstram que a detecção de antígenos de Taenia se mostra congruente com os achados de neuroimagem. Algumas outras variáveis estudadas no LCR, como número de células, teor de globulinas gama e teste de ELISA, também se mostraram concordantes, demonstrando que a resposta inflamatória na NC mobiliza tanto a imunidade celular quanto a imunidade humoral. / Neurocysticercosis (NC) is the most common parasitic infection of the nervous system, remaining a serious public health in our country. NC diagnosis is supported by clinical and epidemiological data, specific serological reactions in the blood and CSF, and neuroimaging findings. Detection of anti-Taenia antigens using ELISA techniques is a recent methodology that provides information about clinical activity of the disease. The objective of the study was to determine relationship between Taenia antigen detection in the CSF and MRI in patients with definite diagnosis of NC according to current diagnostic criteria. Sixty-three patients were submitted to a thorough CSF examination and Taenia antigen research. Antigens were detected in CSF samples by ELISA assay obtained from rabbit sera antibodies immunized with Taenia crassiceps cysticerci vesicular fluid. A blood sample was simultaneously collected and a MRI was performed in every patient. We observed a significant relationship between Taenia antigen detection and the total number of lesions and intact cysts detected by MRI. When comparing two or more degenerating cysts with only one we observed a significant higher antigen detection in the first group. We also found a significant higher antigen detection when cysts were deeply located in the cerebral hemispheres, but not in the presence of calcified cysts. Results demonstrate that Taenia antigen detection is congruent with neuroimaging findings. Some CSF characteristics, like number of cells, gamma globulin concentration and ELISA assay were also concordant with Taenia antigen detection, indicating that inflammatory reaction in NC comprise cellular and humoral immunological factors.
|
35 |
Obtenção ex vivo de antígenos de excreção e secreção de cisticercos de Taenia crassiceps / The obtaining of ex vivo excretion-secretion antigen of Taenia crassiceps cysticercusGoebbels, Rosa Palmira Jácobo 13 February 2008 (has links)
Larvas de cisticercos de Taenia crassiceps foram deixadas em repouso em TRIS 9mM pH 7,2 com 1mM EDTA até 180 minutos, os sobrenadantes coletados e processados nos 30, 60, 120 e 180 minutos, dando origem aos antígenos de excreção e secreção (ES 30; ES 60; ES 120 e ES 180). A caracterização do antígeno de excreção e secreção de larvas de Taenia crassiceps foi feito por SDS-PAGE e imunoblot utilizando anticorpos monoclonais (AcMos) anti-T. crassiceps e anti-T. solium e anticorpos humanos. Os resultados mostraram que o rendimento do antígeno ES foi menor nos primeiros 30 minutos (0,4 µg) por larva quando comparado os demais ES (ES 60: 2,4 µg; ES 120: 2,9 µg; ES 180: 2,5 µg). O SDS-PAGE confirmou que no ES 30 há menos proteínas. No imunoblot, o ES 180 mostrou que 6 AcMos (anti-LV-Tcra; anti-ES-Tcra; anti-LV-Tso: A3; anti-T-Tso: B4, B11 e A6) reconheceram apenas as frações 18- e 14-kDa do antígeno ES 180. Os AcMos anti-E-Tso (B8) e anti-LV-Tso (B6) não reconheceram frações do antígeno ES 180. Anticorpos presentes em amostras humanas de pacientes com NC reconheceram as frações protéicas entre 94- a 30-kDa e as de 18- e 14-kDa. Utilizando antígeno ES 180 e amostras de soros de pacientes supostamente saudáveis (GC), foram identificadas proteínas acima de 30-kDa e somente uma amostra reconheceu a de 16- kDa, anômala em relação ao perfil 18- e 14-kDa. As amostras de soro de pacientes com outras parasitoses mostraram reatividade com frações ≥ de 30-kDa do ES 180 e o maior índice de reatividade foi com a proteína 71-KDa. Um total de 77%; 70%; 60% e 70% das amostras de pacientes com toxocaríase, esquistossomose mansônica, hidatidose e Chagas, respectivamente, reconheceram a fração 71-kDa do ES 180. O antígeno ES pode contribuir com futuros estudos abordando a complexa relação parasito hospedeiro na cisticercose e na produção de vacinas para o uso em suínos. / Cysticercus Larvae of Taenia crassiceps were maintained in TRIS 9mM pH 7,2 with 1mM EDTA for 180 minutes; the supernatant was collected and processed at 30; 60; 120 and 180 minutes, originating excretion-secretion antigens (ES 30; ES 60; ES 120 and ES 180). The characterization of the ES antigen was conducted through SDS-PAGE and immunoblot using anti-T. crassiceps and anti-T. solium monoclonal antibodies (AcMos) and human antibodies. The results showed that the production of ES antigen was lower in the first 30 min. (0,4 µg) compared with the others (ES 60: 2,4 µg; ES 120: 2,9 µg; ES 180: 2,5 µg). The SDS-PAGE confirmed that ES 30 presented less protein. By immunoblot,6 AcMos (anti-LV-Tcra; anti-ES-Tcra;anti-LV-Tso: A3; anti-T-Tso: B4, B11 and A6) have recognized only the 18- and 14-kDa fractions of the ES 180. The anti-E-Tso (B8) and the anti-LV-Tso (B6) AcMos did not recognize any fractions. Antibodies from human samples NC recognized the proteins from 94- to 30-kDa and from 18- and 14-kDa. Using serum samples of apparently healthy individuals (GC), the ES 180 antigen showed proteins > 30-kDa and one sample recognized the 16-kDa fraction, anomalous when compared to the 18- and 14-kDa fractions. The serum samples of subjects with other parasitoses showed reactivity ≥ 30-kDa, more frequently with 71-KDa protein. A total of 77%; 70%; 60% and 70% of the samples from subjects presenting toxocariasis, esquistossomose mansonic, hydatidosis and Chagas disease, respectively, recognized the 71-kDa fraction of ES 180. The ES antigen may contribute to further studies on the complex cysticercosis parasite/host relation as well as for the production of vaccines for swine.
|
36 |
Avaliação das lesões císticas da neurocisticercose na difusão e espectroscopia de prótons pela ressonância magnética / Evaluation of the cystic lesions of the neurocysticercosis on diffusion and magnetic resonance proton spectroscopyRaffin, Luciana Sanchez 27 October 2004 (has links)
OBJETIVO: O objetivo deste estudo é descrever as características do sinal nas lesões císticas da neurocisticercose nas imagens ponderadas em difusão e os metabólitos encontrados na espectroscopia de prótons. MATERIAL E MÉTODOS: Estudaram-se 38 pacientes (39 lesões) com neurocisticercose, usando-se difusão e espectroscopia de prótons. Os exames foram realizados em um magneto de 1,5 T (Signa Horizon LX: GE Medical Systems). A difusão foi realizada no plano axial, com múltiplos cortes com seqüência eco planar. A espectroscopia de prótons utilizou a seqüência PRESS (point-resolved spectroscopy) com TR of 1500 ms e TE de 30/135 ms. RESULTADOS: Os cistos apresentaram intensidade de sinal similar a do líquido cefalorraqueano (LCR) na difusão e valores de CDA sobreponíveis, variando de 1,36 a 3,18 x 10-3 mm2/s. Os picos detectáveis na espectroscopia foram lactato (96,3%), succinato (48%), alanina (40%), lipídeos (15%), aminoácidos citosólicos (7,5%) e acetato (3,7%). CONCLUSÃO: As lesões císticas da neurocisticercose apresentaram hipossinal na difusão e os picos encontrados na espectroscopia de prótons, em ordem decrescente de freqüência, foram lactato, succinato, alanina, lipídeos, aminoácidos citosólicos e acetato / PURPOSE: The objective of this study is to describe the signal behavior of cystic neurocysticercotic lesions on diffusion-weighted imaging (DWI) and single voxel proton spectroscopy findings. MATERIALS AND METHODS: We studied 38 patients (39 lesions) with neurocysticercosis, using diffusion-weighted images and proton MR spectroscopy. The examinations were performed on a 1.5 T scanner (Signa Horizon LX: GE Medical Systems). DWI was performed in the axial plane, using a multisection single shot echo planar pulse sequence. The single voxel proton spectroscopy technique used was the point-resolved spectroscopy (PRESS) sequence with a TR of 1500 ms, short and long TE of 30/135 ms. RESULTS: The cysts presented similar signal intensity to the CSF on DWI, with comparable ADC values, ranging from 1.36 to 3.18 x 10-3 mm2/s. The detectable peaks were lactate (96.3%), succinate (48%), alanine (40%), lipids (15%), cytosolic amino acids (7.5%) and acetate (3.7%). CONCLUSION: The cysts of neurocysticercosis presented hyposignal on DWI and peaks of lactate, succinate, alanine, lipids, cytosolic amino acids and acetate in proton spectroscopy, in decreasing order of frequency
|
37 |
Lesão tecidual e perfil de citocinas na neurocisticercose experimental / Tissue injury and cytokine profile in the experimental neurocysticercosisMoura, Vânia Beatriz Lopes 09 November 2015 (has links)
Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-03-03T13:38:21Z
No. of bitstreams: 2
Tese - Vânia Beatriz Lopes - 2015.pdf: 1571381 bytes, checksum: 95d706025dea6373e88193f8224608f3 (MD5)
license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-03-03T13:44:17Z (GMT) No. of bitstreams: 2
Tese - Vânia Beatriz Lopes - 2015.pdf: 1571381 bytes, checksum: 95d706025dea6373e88193f8224608f3 (MD5)
license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-03T13:44:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2
Tese - Vânia Beatriz Lopes - 2015.pdf: 1571381 bytes, checksum: 95d706025dea6373e88193f8224608f3 (MD5)
license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5)
Previous issue date: 2015-11-09 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The cysticercosis is endemic and is considered neglected by the World Health Organization. The neurocysticercosis (NCC) is the most common and severe form of cysticercosis, accounting for over 50,000 deaths annually. The use of experimental models in research, has been essential to the advancement of knowledge of various diseases, such as in understanding the pathophysiology, immune response and parasite host reactions. This study aimed to characterize the cellular immune response in situ and systemic, and the role of inflammatory cells in triggering changes in myelin standards. For this, we used an experimental model to evaluate the NCC intraventricular concentrations of cytokine in situ and systemically, by spleen cell culture, and changes in parenchymal patterns and periventricular desmielinizarão throughout the experimental period. No changes were detected in cytokine concentration at the infection site. Systemically, it is observed the presence of IL-10 initially and after 30 days of infection, there is a significant presence of all the cytokines analyzed as IL-4, IL-10, IL-17 and IFN-γ in the infected group. At the end of the infection, the Th2 profile was predominant. In evaluating pathological observed breaking the blood-brain barrier (BBB) allowing the initial influx of inflammatory cells in the two groups. At 30 days, there was a mixed inflammatory process, ventriculomegaly, foamy macrophages and periventricular desmielinizarão. At the end of the infection, predominance of mononuclear cells, ventriculomegaly, foamy macrophages and demyelination in the parenchyma mostly. In conclusion, the systemic immune response of BALB / c mice induced by cysticercus T. crassiceps, was characterized by a Th2-type immune profile and desmielinizarão parenchymal infection possibly at the end of the inflammatory process as well as the compressive effect on the parenchyma of the parasite brain. / A cisticercose é uma doença endêmica e é considerada negligenciada pela Organização Mundial de Saúde. A neurocisticercose (NCC) é a forma mais frequente e grave da cisticercose, sendo responsável por mais de 50 mil mortes anuais. A utilização de modelos experimentais em pesquisa tem sido essencial para o avanço do conhecimento de diversas doenças, como no entendimento da fisiopatologia, da resposta imune e das relações parasito hospedeiro. O presente estudo objetivou a caracterização da resposta imune celular in situ e sistêmica, e o papel das células inflamatórias em desencadear alterações nos padrões de mielina. Para isto, utilizou-se um modelo experimental de NCC intraventricular para avaliar as concentrações de citocinas in situ e sistemicamente, pela cultura de células do baço, e as alterações nos padrões de desmielinizarão periventricular e parenquimal ao longo do período experimental. Não foram detectadas alterações nas concentrações de citocinas no local da infecção. Sistemicamente, observa-se a presença de IL-10 inicialmente e aos 30 dias de infecção, observa-se a presença significante de todas as citocinas analisadas como, IL-4, IL-10, IL-17 e IFN-γ no grupo infectado. No final da infecção, o perfil Th2, foi predominante. Na avaliação anatomopatológica observou quebra da barreira hemato encefálica (BHE), que permitiu o influxo inicial de células inflamatórias nos dois grupos analisados. Aos 30 dias, observou-se processo inflamatório misto, ventriculomegalia, macrófagos espumosos e desmielinizarão periventricular. No final da infecção, predomínio de células mononucleares, ventriculomegalia, macrófagos espumosos e desmielinização no parênquima em sua maioria. Em conclusão, a resposta imune sistêmica dos camundongos BALB/c induzida por cisticercos de T. crassiceps, foi caracterizada por um perfil imune do tipo Th2e desmielinizarão parenquimal no final da infecção possivelmente pelo processo inflamatório como também pelo efeito compressivo do parasito sobre o parênquima encefálico.
|
38 |
Neurocisticercose experimental: efeito do tratamento anti-helmíntico no metabolismo energético e respiratório de cisticercosLeandro, Letícia de Almeida 28 February 2013 (has links)
Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2014-12-29T15:35:49Z
No. of bitstreams: 2
license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5)
Dissertação - Letícia de Almeida Leandro - 2013.pdf: 2111763 bytes, checksum: c992b02afb4a59e318265d06577e6454 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2014-12-29T15:40:58Z (GMT) No. of bitstreams: 2
license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5)
Dissertação - Letícia de Almeida Leandro - 2013.pdf: 2111763 bytes, checksum: c992b02afb4a59e318265d06577e6454 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-29T15:40:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2
license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5)
Dissertação - Letícia de Almeida Leandro - 2013.pdf: 2111763 bytes, checksum: c992b02afb4a59e318265d06577e6454 (MD5)
Previous issue date: 2013-02-28 / The analysis of the energetic and respiratory metabolism of Taenia crassiceps cysticerci innoculated into the encefalum of female BALB/c mice was performed. After 30 days of infection the mice were treated with low dosages (3.0 and 6.0 mg/kg) of albendazole and praziquantel aiming the observation of the alterations caused by a hostile environment on the parasite's metabolism. The aim of this study was to detect the influence of low dosages of anti-helminthic drugs on the production of organic acids related to the intermediary metabolism (oxaloacetate, malate, fumarate, succinate, citrate and α-ketoglutarate), carbohydrates metabolism (pyruvate, lactate, propionate, oxaloacetate and malate) and fatty acids and proteins catabolism (β-hydroxibutyrate, acetoacetate, acetate, α-ketoglutarate and oxalate) by T. crassiceps cysticerci innoculated into the CNS of BALB/c mice. Regarding the glycolisis, it was possible to detect lactate in all samples which shows that this parasite performs a lactic fermentation. As to the intermediary metabolism it was possible to detect oxaloacetate, citrate, malate, succinate, fumarate and α-ketoglutarate which indicates that the cysticerci may have used the tricarboxilic acid cycle (TCA) to produce energy. However facing the results found the evidences show that the cysticerci used a metabolic pathway denominated reversion of the TCA for energy production which presents as main end products propionate and acetate. There were no significant differences between the groups treated with the anti-helminthic and the control one except that the group treated with 6.0 mg/kg of albendazole presented acetate as main end product of the TCA reversion while the other groups presented propionate. In the groups treated with praziquantel, both concentrations, there was no production of acetate and in the 6.0 mg/kg of praziquntel there was no production of β-hydroxibutyrate wheter in the groups treated with both concentrations of albendazol there was an increase in the production of this organic acid which indicates the maximization of the energetic pathway of fatty acids oxidation and/or of the proteic catabolism. It was possible to conclude that T. crassiceps cysticerci when exposed to the conditions of this study preferred an anaerobic energy production pathway and probably performed the catabolism of carbohydrates, proteins and fatty acids. / Realizou-se a análise do metabolismo energético e respiratório de cisticercos de Taenia crassiceps inoculados no encéfalo de camundongos BALB/c fêmeas. Após 30 dias de infecção, esses camundongos foram tratados com baixas doses (3,0 e 6,0 mg/kg) de albendazol e praziquantel visando observação de alterações provocadas no metabolismo do parasito. O objetivo deste trabalho foi detectar a influência de baixas doses desses anti-helmínticos na produção dos ácidos orgânicos do metabolismo intermediário (citrato, α-cetoglutarato, succinato, fumarato, malato, oxaloacetato), de carboidratos (piruvato, lactato, oxaloacetato, malato, acetato e propionato), de ácidos graxos e proteínas (β-hidroxibutirato, acetoacetato, acetato, α-cetoglutarato e oxalato) realizados por cisticercos de T. crassiceps implantados no SNC de camundongos BALB/c fêmeas. Com relação a glicólise, detectou-se lactato em todas as amostras mostrando que esse parasito fez fermentação lática; em relação ao metabolismo intermediário foi possível detectar os ácidos orgânicos citrato, α-cetoglutarato, succinato, fumarato, malato e oxaloacetato, indicando que os cisticercos apresentaram elementos do ciclo do ácido cítrico para produzir energia. Porém diante dos resultados encontrados a principal evidência é de que esses cisticercos utilizaram uma via denominada reversão do ciclo do ácido cítrico para produzirem energia, obtendo como produtos finais propionato e acetato. Não se observou diferenças significativas entre os grupos que sofreram tratamentos e os grupos controle exceto pelo fato de que, o grupo tratado com albendazol 6,0 mg/kg de peso do camundongo teve como principal produto final da reversão do ciclo do ácido cítrico, o acetato, ao contrário dos demais grupos que tiveram o propionato; nos grupos tratados com praziquantel não houveram a produção de acetato como nos demais grupos e no grupo tratado com praziquantel 6,0 mg/kg não houve a produção de β-hidroxibutirato; nos grupos tratados com albendazol observou-se um aumento na produção de β-hidroxibutirato indicando que esse grupo maximizou a via de produção energética através da β-oxidação de ácidos graxos e/ou através do catabolismo proteico.Concluímos que os cisticercos de T. crassiceps, nas condições do presente trabalho, deram preferência para uma via de produção energética anaeróbia e provavelmente catabolizaram, além de carboidratos, proteínas e ácidos graxos para produzirem ATP.
|
39 |
Avaliação das lesões císticas da neurocisticercose na difusão e espectroscopia de prótons pela ressonância magnética / Evaluation of the cystic lesions of the neurocysticercosis on diffusion and magnetic resonance proton spectroscopyLuciana Sanchez Raffin 27 October 2004 (has links)
OBJETIVO: O objetivo deste estudo é descrever as características do sinal nas lesões císticas da neurocisticercose nas imagens ponderadas em difusão e os metabólitos encontrados na espectroscopia de prótons. MATERIAL E MÉTODOS: Estudaram-se 38 pacientes (39 lesões) com neurocisticercose, usando-se difusão e espectroscopia de prótons. Os exames foram realizados em um magneto de 1,5 T (Signa Horizon LX: GE Medical Systems). A difusão foi realizada no plano axial, com múltiplos cortes com seqüência eco planar. A espectroscopia de prótons utilizou a seqüência PRESS (point-resolved spectroscopy) com TR of 1500 ms e TE de 30/135 ms. RESULTADOS: Os cistos apresentaram intensidade de sinal similar a do líquido cefalorraqueano (LCR) na difusão e valores de CDA sobreponíveis, variando de 1,36 a 3,18 x 10-3 mm2/s. Os picos detectáveis na espectroscopia foram lactato (96,3%), succinato (48%), alanina (40%), lipídeos (15%), aminoácidos citosólicos (7,5%) e acetato (3,7%). CONCLUSÃO: As lesões císticas da neurocisticercose apresentaram hipossinal na difusão e os picos encontrados na espectroscopia de prótons, em ordem decrescente de freqüência, foram lactato, succinato, alanina, lipídeos, aminoácidos citosólicos e acetato / PURPOSE: The objective of this study is to describe the signal behavior of cystic neurocysticercotic lesions on diffusion-weighted imaging (DWI) and single voxel proton spectroscopy findings. MATERIALS AND METHODS: We studied 38 patients (39 lesions) with neurocysticercosis, using diffusion-weighted images and proton MR spectroscopy. The examinations were performed on a 1.5 T scanner (Signa Horizon LX: GE Medical Systems). DWI was performed in the axial plane, using a multisection single shot echo planar pulse sequence. The single voxel proton spectroscopy technique used was the point-resolved spectroscopy (PRESS) sequence with a TR of 1500 ms, short and long TE of 30/135 ms. RESULTS: The cysts presented similar signal intensity to the CSF on DWI, with comparable ADC values, ranging from 1.36 to 3.18 x 10-3 mm2/s. The detectable peaks were lactate (96.3%), succinate (48%), alanine (40%), lipids (15%), cytosolic amino acids (7.5%) and acetate (3.7%). CONCLUSION: The cysts of neurocysticercosis presented hyposignal on DWI and peaks of lactate, succinate, alanine, lipids, cytosolic amino acids and acetate in proton spectroscopy, in decreasing order of frequency
|
40 |
Obtenção ex vivo de antígenos de excreção e secreção de cisticercos de Taenia crassiceps / The obtaining of ex vivo excretion-secretion antigen of Taenia crassiceps cysticercusRosa Palmira Jácobo Goebbels 13 February 2008 (has links)
Larvas de cisticercos de Taenia crassiceps foram deixadas em repouso em TRIS 9mM pH 7,2 com 1mM EDTA até 180 minutos, os sobrenadantes coletados e processados nos 30, 60, 120 e 180 minutos, dando origem aos antígenos de excreção e secreção (ES 30; ES 60; ES 120 e ES 180). A caracterização do antígeno de excreção e secreção de larvas de Taenia crassiceps foi feito por SDS-PAGE e imunoblot utilizando anticorpos monoclonais (AcMos) anti-T. crassiceps e anti-T. solium e anticorpos humanos. Os resultados mostraram que o rendimento do antígeno ES foi menor nos primeiros 30 minutos (0,4 µg) por larva quando comparado os demais ES (ES 60: 2,4 µg; ES 120: 2,9 µg; ES 180: 2,5 µg). O SDS-PAGE confirmou que no ES 30 há menos proteínas. No imunoblot, o ES 180 mostrou que 6 AcMos (anti-LV-Tcra; anti-ES-Tcra; anti-LV-Tso: A3; anti-T-Tso: B4, B11 e A6) reconheceram apenas as frações 18- e 14-kDa do antígeno ES 180. Os AcMos anti-E-Tso (B8) e anti-LV-Tso (B6) não reconheceram frações do antígeno ES 180. Anticorpos presentes em amostras humanas de pacientes com NC reconheceram as frações protéicas entre 94- a 30-kDa e as de 18- e 14-kDa. Utilizando antígeno ES 180 e amostras de soros de pacientes supostamente saudáveis (GC), foram identificadas proteínas acima de 30-kDa e somente uma amostra reconheceu a de 16- kDa, anômala em relação ao perfil 18- e 14-kDa. As amostras de soro de pacientes com outras parasitoses mostraram reatividade com frações ≥ de 30-kDa do ES 180 e o maior índice de reatividade foi com a proteína 71-KDa. Um total de 77%; 70%; 60% e 70% das amostras de pacientes com toxocaríase, esquistossomose mansônica, hidatidose e Chagas, respectivamente, reconheceram a fração 71-kDa do ES 180. O antígeno ES pode contribuir com futuros estudos abordando a complexa relação parasito hospedeiro na cisticercose e na produção de vacinas para o uso em suínos. / Cysticercus Larvae of Taenia crassiceps were maintained in TRIS 9mM pH 7,2 with 1mM EDTA for 180 minutes; the supernatant was collected and processed at 30; 60; 120 and 180 minutes, originating excretion-secretion antigens (ES 30; ES 60; ES 120 and ES 180). The characterization of the ES antigen was conducted through SDS-PAGE and immunoblot using anti-T. crassiceps and anti-T. solium monoclonal antibodies (AcMos) and human antibodies. The results showed that the production of ES antigen was lower in the first 30 min. (0,4 µg) compared with the others (ES 60: 2,4 µg; ES 120: 2,9 µg; ES 180: 2,5 µg). The SDS-PAGE confirmed that ES 30 presented less protein. By immunoblot,6 AcMos (anti-LV-Tcra; anti-ES-Tcra;anti-LV-Tso: A3; anti-T-Tso: B4, B11 and A6) have recognized only the 18- and 14-kDa fractions of the ES 180. The anti-E-Tso (B8) and the anti-LV-Tso (B6) AcMos did not recognize any fractions. Antibodies from human samples NC recognized the proteins from 94- to 30-kDa and from 18- and 14-kDa. Using serum samples of apparently healthy individuals (GC), the ES 180 antigen showed proteins > 30-kDa and one sample recognized the 16-kDa fraction, anomalous when compared to the 18- and 14-kDa fractions. The serum samples of subjects with other parasitoses showed reactivity ≥ 30-kDa, more frequently with 71-KDa protein. A total of 77%; 70%; 60% and 70% of the samples from subjects presenting toxocariasis, esquistossomose mansonic, hydatidosis and Chagas disease, respectively, recognized the 71-kDa fraction of ES 180. The ES antigen may contribute to further studies on the complex cysticercosis parasite/host relation as well as for the production of vaccines for swine.
|
Page generated in 0.0971 seconds