Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:39Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-09-16Bitstream added on 2014-08-13T18:01:31Z : No. of bitstreams: 1 000746985_20150927.pdf: 1074107 bytes, checksum: 736b109d2ccde3c59ca3e85ff6da7aea (MD5) Bitstreams deleted on 2015-09-28T16:42:56Z: 000746985_20150927.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-28T16:43:44Z : No. of bitstreams: 1 000746985.pdf: 3182272 bytes, checksum: 2f1f8eea88932fcd1181df434e0bea11 (MD5) / O vírus da dengue afeta milhões de pessoas a cada ano no mundo todo. O processo de infecção viral pela via endossomal é intermediada pela sequência 98 a 112 (DRGWGNGCGLFGKGG), conhecido como peptídeo de fusão, este segmento faz parte da glicoproteína E, localizado no envelope do vírus. Todos os flavivirus, incluindo os quatro sorotipos da dengue, apresentam esta sequência em regiões próximas, além de apresentarem alta identidade. Apesar de intensas pesquisas e o aumento da incidência de casos da dengue, não existem drogas antivirais específicas, até este momento, para o combate desta doença. Deste modo, a compreensão da interação do vírus com as células hospedeiras é importante na busca de novos fármacos. Neste sentido, este trabalho visou entender melhor o modo de ação do peptídeo de fusão da dengue e a importância de suas regiões laterais. O objetivo deste projeto teve por finalidade avaliar as contribuições das regiões laterais ao peptídeo de fusão, isto é, 88-97 e 113-123, em sua atividade, para os quatro sorotipos da dengue. A obtenção dos peptídeos foi realizada por meio da síntese em fase sólida. Os modelos de membrana utilizados foram micelas zwitteriônicas (LPC) e vesículas (PC ovo e POPG). Sabendo-se que a exposição desta sequência e, consequente, fusão da membrana é dependente do pH do meio, os estudos foram realizados em pHs 5,5 e 7,1. Nestes estudos, foram utilizadas as técnicas de Transferência de Energia de Ressonância de Föster (FRET), Dicroísmo Circular, Fluorescência, Monocamadas de Langmuir e BAM. O aminoácido triptofano foi usado como sonda para analisar a profundidade da inserção em miméticos de membrana. Os resultados mostraram que a SPFS foi útil, obtendo os materiais desejados. Avaliando a habilidade fusogênica dos 14 peptídeos estudados, observamos que cada sorotipo apresenta atividade diferente um do outro, sendo que os peptídeos do sorotipo 2 foram os que... / Dengue virus affects millions of people worldwide every year. The process of viral infection via endosomal is mediated by the sequence 98-112 (DRGWGNGCGLFGKGG), known as the fusion peptide. This segment is part of the glycoprotein envelope of the virus. All flavivirus, including all four dengue serotypes, contain this fusion sequence and all serotypes present high sequence identity. Although intense researches, the dengue cases have increased and, up to date, there are no specific antiviral drugs to combat this disease. Thus, understanding the virus interaction with host cells is essential for the search and development of new drugs against the dengue virus. Therefore, this study craved a better understanding of the mode of action of the dengue fusion peptide sequence and the importance of its lateral regions. This project aimed to assess the contributions of the lateral regions of the fusion peptide (88-97 and 113-123 sequences) on its activity, for the four dengue serotypes. The synthesis of peptides was performed by solid phase peptide synthesis (SPPS). The membrane models used were zwitterionic micelles (LPC) and vesicles (egg PC and POPG). Since the exposure of this sequence and the resulting membrane fusion is dependent on pH, studies were performed in pH 5.5 and 7.1. In these studies, the techniques of Resonance Energy Transfer Föster (FRET), circular dichroism, fluorescence, Langmuir monolayers and BAM (Brewster angle microscopy) were used. The amino acid and natural fluorophore tryptophan was used as a probe to analyze the insertion depth of the fusion peptide in the membrane mimetic by fluorescence. The results showed that the SPPS was feasible, obtaining the desired materials. Assessing the fusogenic ability of 14 peptides studied, the data indicated that each serotype has different activity and the serotype 2 peptides presented the major interaction. The studies of interaction peptide/membrane mimetic indicated...

Orientador: Eduardo Maffud Cilli / Banca: Reinaldo Marchetto / Banca: Saulo Santesso Garrido / Banca: Pietro Ciancaglini / Banca: Luciana Malavolta Quaglio / Resumo: O vírus da dengue afeta milhões de pessoas a cada ano no mundo todo. O processo de infecção viral pela via endossomal é intermediada pela sequência 98 a 112 (DRGWGNGCGLFGKGG), conhecido como peptídeo de fusão, este segmento faz parte da glicoproteína E, localizado no envelope do vírus. Todos os flavivirus, incluindo os quatro sorotipos da dengue, apresentam esta sequência em regiões próximas, além de apresentarem alta identidade. Apesar de intensas pesquisas e o aumento da incidência de casos da dengue, não existem drogas antivirais específicas, até este momento, para o combate desta doença. Deste modo, a compreensão da interação do vírus com as células hospedeiras é importante na busca de novos fármacos. Neste sentido, este trabalho visou entender melhor o modo de ação do peptídeo de fusão da dengue e a importância de suas regiões laterais. O objetivo deste projeto teve por finalidade avaliar as contribuições das regiões laterais ao peptídeo de fusão, isto é, 88-97 e 113-123, em sua atividade, para os quatro sorotipos da dengue. A obtenção dos peptídeos foi realizada por meio da síntese em fase sólida. Os modelos de membrana utilizados foram micelas zwitteriônicas (LPC) e vesículas (PC ovo e POPG). Sabendo-se que a exposição desta sequência e, consequente, fusão da membrana é dependente do pH do meio, os estudos foram realizados em pHs 5,5 e 7,1. Nestes estudos, foram utilizadas as técnicas de Transferência de Energia de Ressonância de Föster (FRET), Dicroísmo Circular, Fluorescência, Monocamadas de Langmuir e BAM. O aminoácido triptofano foi usado como sonda para analisar a profundidade da inserção em miméticos de membrana. Os resultados mostraram que a SPFS foi útil, obtendo os materiais desejados. Avaliando a habilidade fusogênica dos 14 peptídeos estudados, observamos que cada sorotipo apresenta atividade diferente um do outro, sendo que os peptídeos do sorotipo 2 foram os que... / Abstract: Dengue virus affects millions of people worldwide every year. The process of viral infection via endosomal is mediated by the sequence 98-112 (DRGWGNGCGLFGKGG), known as the fusion peptide. This segment is part of the glycoprotein envelope of the virus. All flavivirus, including all four dengue serotypes, contain this fusion sequence and all serotypes present high sequence identity. Although intense researches, the dengue cases have increased and, up to date, there are no specific antiviral drugs to combat this disease. Thus, understanding the virus interaction with host cells is essential for the search and development of new drugs against the dengue virus. Therefore, this study craved a better understanding of the mode of action of the dengue fusion peptide sequence and the importance of its lateral regions. This project aimed to assess the contributions of the lateral regions of the fusion peptide (88-97 and 113-123 sequences) on its activity, for the four dengue serotypes. The synthesis of peptides was performed by solid phase peptide synthesis (SPPS). The membrane models used were zwitterionic micelles (LPC) and vesicles (egg PC and POPG). Since the exposure of this sequence and the resulting membrane fusion is dependent on pH, studies were performed in pH 5.5 and 7.1. In these studies, the techniques of Resonance Energy Transfer Föster (FRET), circular dichroism, fluorescence, Langmuir monolayers and BAM (Brewster angle microscopy) were used. The amino acid and natural fluorophore tryptophan was used as a probe to analyze the insertion depth of the fusion peptide in the membrane mimetic by fluorescence. The results showed that the SPPS was feasible, obtaining the desired materials. Assessing the fusogenic ability of 14 peptides studied, the data indicated that each serotype has different activity and the serotype 2 peptides presented the major interaction. The studies of interaction peptide/membrane mimetic indicated... / Doutor

Uma série de derivados quirais (e.e. > 99%) foram sintetizados a partir do meso- exo-(3R,5S)-3,5-dihidróximetilenotriciclo[5,2.1.02,6]decano com altos rendimentos, usando catálise enzimática (lipases) em reações de transesterificação. A resolução do respectivo diéster racêmico através da hidrólise catalisada com esterase (PLE) não forneceu o monoéster opticamente enriquecido; enquanto que a dessimetrização do anidrido usando indutores quirais (quinina e quinidina) resultou no monoéster opticamente enriquecido (e.e.≅ 60%). O respectivo amino-álcool protegido foi preparado. Alguns análogos inéditos de peptídeos restritos incorporados do triciclodecano foram sintetizados.

Ureases (EC 3.5.1.5) são metaloenzimas que hidrolisam uréia para produzir amônia e dióxido de carbono. Essas proteínas têm atividade inseticida e fungicida, efeitos independentes da sua atividade ureolítica. A atividade inseticida de ureases depende, em parte, da liberação de peptídeos internos através da hidrólise por catepsinas digestivas do inseto. Um desses peptídeos foi isolado e um recombinante chamado Jaburetox –V5 foi produzido em E. coli a partir da sequência da urease. Outra propriedade relevante de ureases é sua atividade antifúngica, que ocorre em concentrações de 10-7 M para certos fungos filamentosos, causando danos à membrana celular, visualizados por microscopia eletrônica de varredura. Moléculas antifúngicas de origem vegetal representam uma alternativa estratégica para o surgimento de espécies resistentes de fungos. Sabendo que a atividade antifúngica das ureases é cerca de 3-4 de magnitude mais ativa do que a maioria das proteínas antifúngicas já descritas, neste trabalho, avaliamos o efeito tóxico da urease de C. ensiformis (JBU) sobre diferentes espécies de leveduras. Além disso, buscamos identificar as regiões responsáveis por essa atividade através da fragmentação da JBU por hidrólise enzimática. Os efeitos tóxicos da JBU também ocorrem em espécies de leveduras, indicando que atividade antifúngica não afeta somente fungos filamentosos. Os efeitos da JBU nas leveduras variam conforme o gênero e a espécie, tanto em termos qualitativos como quantitativos, indicando seletividade espécie-específica. Os efeitos fungitóxicos consistem de inibição da multiplicação, indução de alterações morfológicas com formação de pseudo-hifas, alterações do transporte de H+ e no metabolismo energético, permeabilização de membranas, podendo ocorrer morte celular. Nas condições testadas, não houve produção de espécies reativas de oxigênio associada ao efeito fungitóxico da JBU. A hidrólise da JBU com papaína produziu fragmentos tóxicos com massa molecular ~10 kD. Esses hidrolisados foram analisados por espectrometria de massas e um fragmento contendo parte da sequência N-terminal do peptídeo entomotóxico Jaburetox foi encontrado. A atividade fungitóxica do peptídeo recombinante Jaburetox – V5 foi testada, sendo observada atividade tóxica sobre leveduras e fungos filamentosos. A atividade antifúngica do Jaburetox-V5 requer concentrações 2-3 vezes maiores do que aquela observada para a holoproteína JBU, indicando a possibilidade de que outros domínios da proteína estejam envolvidos nessa atividade. A descoberta de novos agentes antifúngicos é urgente e imperativa, devido ao crescente número de casos de micoses invasivas. Ureases de plantas, como a JBU, e peptídeos derivados, podem representar uma nova alternativa para controle de fungos de importância clínica e fitopatogênicos, principalmente em se considerando a potente atividade, na faixa de 10-6 a 10-7 M . Estudos estrutura versus atividade adicionais, aprofundando a identificação de domínios antifúngicos, e a construção de recombinantes contendo esses domínios, são etapas futuras para avaliar o real potencial fungicida/fungistático das ureases e peptídeos derivados. / Ureases (EC 3.5.1.5) are metalloenzymes that hydrolyze urea to produce ammonia and carbon dioxide. These proteins have insecticidal and fungicidal effects not related to their enzyme activity. The insecticidal activity of urease is mostly dependent on the release of internal peptides consequent to hydrolysis of the ingested protein by insect digestive cathepsins. One of these peptides was isolated and its recombinant version, named Jaburetox-V5, was produced in E. coli. Another important property of ureases is their antifungal activity, which occurs at concentrations of 10-7 M for certain filamentous fungi, causing damage to the cell membranes, as visualized by scanning electron microscopy. Antifungal molecules from plants represent an alternative strategy to the emergence of resistant fungal species. Considering that the antifungal activity of urease is about 3-4 orders of magnitude more potent than most of the antifungal proteins already described, in this study, we evaluated the toxic effect of Canavalia ensiformis urease (JBU) on different species of yeast. Furthermore, studies aiming to identify antifungal domain(s) of JBU by enzymatic hydrolysis were carried out. The results showed that JBU exerts toxic effects on yeast species, indicating that antifungal activity is not restricted to filamentous fungi. The effects of JBU in yeast varied according to the genus and species of yeasts, both in qualitative and quantitative terms, indicating a species-specific selectivity. The fungitoxic effects consisted in inhibition of proliferation, induction of morphological alterations with formation of pseudo hyphae, changes in the transport of H+ and carbohydrate metabolism, permeabilization of membranes, eventually leading to cell death. Under the conditions tested, there was no production of reactive oxygen species associated with the antifungal effect of JBU. Hydrolysis of JBU with papain resulted in fungitoxic fragments with molecular mass ~ 10 kD. These peptides were analyzed by mass spectrometry, revealing the presence of a fragment containing the Nterminal sequence of the entomotoxic peptide Jaburetox. We tested the recombinant peptide Jaburetox-V5 for antifungal effects and observed fungitoxic activity on yeast and filamentous fungi. The antifungal activity of Jaburetox-V5 requires 2-3 times larger concentrations than those observed for the holoprotein JBU, indicating the possibility that other protein domains are involved in this activity. The discovery of new antifungal agents is imperative to face the increasing number of cases of invasive mycoses. Plant ureases, such as JBU, and its derived peptides, may represent a new alternative to control medically important and phytopathogenic fungi, especially considering their potent activity in the range of 10-6 to 10-7 M. More studies are necessary to clarify the structure versus activity relationships of ureases. Construction of mutants containing ureasederived antifungal domains is one of the necessary steps to assess the real fungicidal/ fungistatic potential of ureases and derived peptides.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-10-13T04:06:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 334986.pdf: 3007298 bytes, checksum: 345c7bf625ce51f5b2dfaa536659484c (MD5) Previous issue date: 2015 / A hipercolesterolemia familiar é uma doença do metabolismo das lipoproteínas causada por anormalidades genéticas que direta ou indiretamente prejudicam a função do receptor de lipoproteína de baixa densidade (LDL). Esta condição é caracterizada pelo catabolismo defeituoso da LDL, o qual resulta em aumento das concentrações plasmáticas de colesterol desde o nascimento e aterosclerose prematura. Recentemente, estudos clínicos e pré-clínicos demonstraram uma associação entre a hipercolesterolemia familiar e o desenvolvimento de comprometimento cognitivo leve, considerado um estágio de transição entre o envelhecimento saudável e os primeiros sintomas da doença de Alzheimer ? principal causa de prejuízos cognitivos em pessoas com mais de 65 anos. De fato, há mais de duas décadas o envolvimento da hipercolesterolemia no acúmulo e deposição de peptídeo ß-amiloide (Aß) cerebral vem sendo intensamente estudado. Por outro lado, inúmeros estudos recentes têm indicado o receptor de LDL como uma via fisiológica importante que medeia a regulação celular dos níveis de Aß cerebral. Nesse sentido, hipotetizamos que os efeitos neurotóxicos induzidos pelo Aß podem ser potencializados em indivíduos com hipercolesterolemia familiar, uma vez que a depuração cerebral deste peptídeo estaria prejudicada. Inicialmente, para validar experimentalmente esta hipótese, camundongos nocautes para o receptor de LDL (LDLr-/-) ? modelo experimental de hipercolesterolemia familiar humana ? foram expostos à administração intracerebroventricular (i.c.v.) do Aß1-40. Os resultados desta tese demonstraram que camundongos LDLr-/- são mais susceptíveis à neurotoxicidade induzida pela administração i.c.v. do Aß1-40. Especificadamente, em comparação com os camundongos C57BL/6 do tipo selvagem, os camundongos LDLr-/- apresentam maior ativação glial, dano de membrana celular, disfunção da barreira hemato-encefálica (BHE), e desbalanço oxidativo e da atividade da acetilcolinesterase no hipocampo após a administração do Aß1-40. Alterações na expressão gênica hipocampal e cortical de proteínas envolvidas no processamento e metabolismo do Aß (BACE-1, PS-1 e LRP-1) e na indução do processo apoptótico (Bax e Bcl2), parecem estar envolvidas no comprometimento neuronal dos camundongos LDLr-/-. Com o objetivo de avaliar mais precisamente a integridade da BHE dos camundongos LDLr-/-, estes foram submetidos a uma dieta rica em colesterol durante trinta dias. A dieta hipercolesterolêmica levou a um aumento ainda mais pronunciado na permeabilidade da BHE nos camundongos LDLr-/-. Além disso, a exposição à LDL isolada prejudicou o desenvolvimento e polarização de neurônios hipocampais. Por fim, tendo em mente a participação do receptor de LDL no metabolismo e degradação do Aß, nós avaliamos se o fibrato Genfibrozila seria capaz de modular os níveis de receptores de LDL ao nível cerebral. O Genfibrozila foi capaz de aumentar os níveis de RNAm no tecido hepático, mas não no hipocampo, de camundongos Swiss, e este efeito não foi relacionado com mudanças nos níveis de colesterol plasmático. Em conjunto, os resultados do presente estudo reforçam a particular associação da hipercolesterolemia familiar e o desenvolvimento de prejuízos cognitivos característicos da doença de Alzheimer. Além disso, os achados deste estudo nos encorajam a buscar por moléculas que sejam capazes de modular a expressão de receptores de LDL no SNC.<br> / Abstract : Familial hypercholesterolemia is a lipoprotein metabolism?s disorder caused by genetic abnormalities that directly or indirectly affect the function of the low density lipoprotein (LDL) receptor. This condition is characterized by defective catabolism of the LDL which results, from the time of birth, in increased plasma cholesterol concentrations and premature atherosclerosis development. Recently, clinical and preclinical studies have demonstrated an association between familial hypercholesterolemia and mild cognitive impairment, considered to be a transitional stage between normal aging and early-stage Alzheimer?s disease ? the main cause of cognitive decline in people over 65 years. In fact, over the past decades the involvement of hypercholesterolemia in the accumulation and deposition of cerebral ß-amyloid peptide (Aß) has been intensively studied. On the other hand, compelling recent studies have identified the LDL receptor as a pathway for mediating the cellular regulation of brain Aß levels. In this regard, we hypothesized that the Aß-induced neurotoxic effects could be increased in individuals with familial hypercholesterolemia, since the brain Aß clearance might be impaired in this context. Firstly, to test this hypothesis LDL receptor knockout mice (LDLr-/-), which is the most used mouse model of familial hypercholesterolemia, were injected intracerebroventricularly with Aß1-40. The results presented herein show that LDLr-/- mice were more susceptible to Aß1-40-induced neurotoxicity. Specifically, LDLr-/- mice treated with Aß1-40 presented increased glial activation, cellular membrane damage, blood brain barrier (BBB) disruption, increased acetylcholinesterase activity, and oxidative imbalance within the hippocampus in comparison with Aß1-40-treated C57BL/6 wild-type mice. Alterations in hippocampal and cortical gene expression of proteins involved in Aß processing and metabolism (BACE-1, PS-1 and LRP-1) and apoptosis (Bax and Bcl-2) appears to be related with neuronal damage in the LDLr-/- mice. In order to assess the BBB integrity more accurately in the LDLr-/- mice, these mice were treated for 30 days with a hypercholesterolemic diet. A more pronounced BBB permeability was observed in the LDLr-/- mice fed with hypercholesterolemic diet. In addition, LDL cholesterol significantly affected neuronal polarity in vitro. Finally, taking in account that the LDL receptor modulates Aß metabolism and degradation, we evaluated whether the Gemfibrozil (fibrate) could modulate brain LDL receptor levels. Gemfibrozil treatment increased gene expression of LDL receptor in the hepatic tissue, but not in the hippocampus, of Swiss mice. This effect was not related with changes in the plasma cholesterol levels. Overall, this data reinforce the particular relation between familial hypercholesterolemia and the characteristic cognitive impairments of Alzheimer?s disease. Additionally, our findings encourage us to look for compounds that are capable of modulating LDL receptor expression in the brain.

Made available in DSpace on 2015-10-23T12:43:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 ana_lima_ioc_mest_2013.pdf: 1197134 bytes, checksum: 2020503be811540cfd43d20788a70e53 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-04-14 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Triatoma brasiliensis é um dos vetores da doença de Chagas no Nordeste do Brasil, apresentando altos índices de infecção natural pelo Trypanosoma cruzi. No presente estudo, dois aspectos foram abordados: primeiro a coleta de exemplares de T. b. brasiliensis oriundos de Caicó, RN, para análise de infecção natural por T. cruzi, em períodos diferentes (abril e novembro de 2011). O segundo aspecto abordado está relacionado ao estudo do gene que codifica defensinas como marcador molecular filogenético para a análise de diferentes espécies de triatomíneos, incluindo o complexo T. brasiliensis, além de exemplares de T. b. brasiliensis coletados em Caicó. Em relação à infecção natural de T. b. brasiliensis por T. cruzi observamos um alto índice (86%), mais especificamente na localidade de Penedo. Também foi observado que não houve diferenças significativas entre as expedições realizadas nos períodos de chuva (abril de 2011) e seca (novembro de 2011) Além disso, cinco isolados de T. cruzi foram caracterizados molecularmente por duas metodologias: mini-exon, 24S\03B1 rDNA e 18S rDNA. Como resultados observamos os dois genótipos (TcI e TcII) circulando em Caicó. Foram obtidas sequências do gene que codifica defensina, onde diferentes isoformas deste gene puderam ser identificadas e caracterizadas nas diferentes espécies de triatomíneos estudadas. A espécie Panstrongylus megistus ficou nos mesmos clados que representantes do gênero Rhodnius. Houve uma clara separação dos clados em relação aos gêneros Triatoma e Rhodnius. Com relação aos membros do complexo T. brasiliensis, não foi possível uma clara distinção entre as espécies pelo fato da molécula de defensina apresentar menos que 500 bp em seu tamanho, além de ser bastante conservada, não sendo portanto um bom marcador para separar grupos muito proximamente relacionados / Triatoma brasiliensis is one of the main Chagas disease vectors in Northeastern Brazil, presenting a high natural Trypanosoma cruzi infection rate. In the present work, two diffe re nt aspects were investigated: First, t riatomines of the sub species T. b. brasiliensis were collected in Caicó, RN for analysis of natural infection by T. cruzi in two dissimilar periods (April and N ovember 2011). The second aspect is related to use of de fensin encoding genes as a phylogenetic marker for the study of different triatomine species, mainly the T. brasiliensis species complex, including T. b. brasiliensis specimens from Caicó. The results showed a high infection rate (86%) of T. b. brasiliensi s from Caicó by T. cruzi , especially in insects from Penedo. No significant differe nces between the rainy period (A pril 2011) and dried season (November 2011) could be observed. In addition, five T. cruzi isolates were cultivated and characterized by three different molecular methods (mini - exon, 24S α rDNA and 18S rDNA). The results showed the presence of TcI and TcII genotypes circulating in Caicó . Defensin encoding genes were amplified and sequenced for different triatomine species, showing three differing forms. Panstrongylus megistus clustered tog ether with representatives of the genus Rhodnius . A separation between the genus Triatoma and Rhodnius could also be detected. However, inside of the T. brasiliensis species complex the taxa could not be well separated. Since this molecular marker has a si ze of less than 500 bp and is highly conserved defensin encoding sequences might not be a good marker to separate closely related species and subspecies

AMARAL, Érico Sucupira. Ánalise do perfil de proteínas salivares de crianças com sobrepeso e obesidade do instituto da primeira infância – Iprede no estado Ceará. 2015. 72 f. Dissertação (Mestrado em Odontologia) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-10-20T14:09:35Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_ésamaral.pdf: 1288817 bytes, checksum: 24ac6c815487ff8225a8b101493509b6 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-10-20T15:54:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_ésamaral.pdf: 1288817 bytes, checksum: 24ac6c815487ff8225a8b101493509b6 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-20T15:54:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_ésamaral.pdf: 1288817 bytes, checksum: 24ac6c815487ff8225a8b101493509b6 (MD5) Previous issue date: 2015 / Obesity is a recurring theme in today's scientific literature. This is due to the exponential increase in its prevalence in all layers of society. The popularity of this theme also made matters associat ed with it emerged and gained greater notability in healthcare publications. The use of saliva as a diagnostic method has advanced considerably in recent years. Imbalances in the quantity and quality of saliva can generate both oral diseases as being indic ative of some important systemic change. This research studies the salivary protein profile and total human saliva in patients with overweight and obesity. The sample consisted of sixty patients with obesity and overweight (experimental group) and sixty pa tients with normal weight (control group) and was rated the salivary flow, the diet diary and the protein profile. Unstimulated saliva was collected and stored at - 80 ° C. Subsequently the enzyme inhibitor was added and the samples were centrifuged at 15, 000 rpm for 15 minutes at 4 ° C and the separated supernatant to perform protein dosing. The salivary concentration of total proteins was determined by the bicinchoninic acid method using a curve of bovine serum albumin (BSA). When analyzing the unstimulat ed salivary flow was observed that the study group had a mean less than the control group, and this difference was statistically significant (p = 0.006). The control group had an average total protein concentration greater than the experimental group was s tatistically significant (p = 0.002). The results of this study suggest different patterns in salivary composition between these two groups. / A obesidade é um tema recorrente na literatura científica da atualidade. Isso se deve ao aumento exponencial de sua prevalência em todas as camadas da sociedade. A popularidade deste tema fez também com que assuntos associados a ele emergissem e ganhassem maior notabilidade em publicações da área da saúde. O uso da saliva como método diagnóstico avançou consideravelmente nos últimos anos. Desequilíbrios na quantidade e na qualidade da saliva podem tanto gerar afecções bucais quanto ser indicativo de alguma alteração sistêmica importante. Este trabalho objetivou estudar o perfil de proteínas salivar e saliva total humana em pacientes com sobrepeso e obesidade. A amostra foi constituída por sessenta pacientes com obesidade e sobrepeso (grupo experimental) e sessenta pacientes com peso adequado (grupo controle), tendo sido avaliado o fluxo salivar, o diário de dieta e o perfil proteico. Saliva total não estimulada foi coletada e armazenada a – 80°C. Posteriormente foi adicionado o inibidor enzimático e as amostras foram centrifugadas a 15.000 rpm por 15 minutos a 4°C, sendo o sobrenadante separado para realização da dosagem de proteínas. A concentração de proteínas totais salivares foi determinada pelo método do Ácido Bicinconínico, usando uma curva de albumina sérica bovina (BSA). Ao analisar o fluxo salivar não estimulado foi possível observar que o grupo de estudo apresentou média menor que o grupo controle, sendo essa diferença estatisticamente significante (p=0,006). O grupo controle apresentou uma média de concentração total de proteínas maior que o grupo experimental, sendo essa diferença estatisticamente significante (p=0,002). Os resultados deste estudo sugerem haver padrões diferenciados na composição salivar entre os grupos avaliados.

ARRUDA, Lucas Machado. Espectroscopia vibracional do Ala-Ala policristalino em função da temperatura. 2013. 83 f. Dissertação (Mestrado em Física) - Programa de Pós-Graduação em Física, Departamento de Física, Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2013. / Submitted by Edvander Pires (edvanderpires@gmail.com) on 2015-10-23T19:25:25Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_lmarruda.pdf: 1784833 bytes, checksum: ba811ef51d1ea0fb3df0f5b8a35f0cf8 (MD5) / Approved for entry into archive by Edvander Pires(edvanderpires@gmail.com) on 2015-10-23T19:39:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_lmarruda.pdf: 1784833 bytes, checksum: ba811ef51d1ea0fb3df0f5b8a35f0cf8 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-23T19:39:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_lmarruda.pdf: 1784833 bytes, checksum: ba811ef51d1ea0fb3df0f5b8a35f0cf8 (MD5) Previous issue date: 2013 / Espectros de infravermelho e Raman do L-alanil-L-alanina (Ala-Ala) policristalino foram estudados em função da temperatura. Para as medidas de Infravermelho a temperatura variou entre 83 K e 293 K a intervalos regulares de 10 K. Não foram observadas mudanças qualitativas nos espectros de infravermelho entre estas temperaturas, indicando que a estrutura cristalina do Ala-Ala é estável em 83 K. Foi feita uma identificação de muitos dos modos normais de vibração devido aos grupos moleculares constituintes da molécula do Ala-Ala e comparada com a literatura. Para as medidas de espalhamento Raman a temperatura variou de 20 K a 300 K a intervalos regulares de 20 K. Como nas medidas de infravermelho, não foram observadas mudanças qualitativas nos espectros Raman entre as temperaturas de 80 K e 300 K. Foram observadas apenas mudanças quantitativas nos modos normais de vibração do Ala-Ala policristalino inerentes a variações de temperatura da ordem de 220 K. Para temperaturas abaixo de 80 K, foram observadas também mudanças qualitativas graduais nos espectros Raman do Ala-Ala policristalino, evidenciando uma transição de fase estrutural de segunda ordem. Da análise da teoria de grupos e dos espectros Raman, o cristal de Ala-Ala deve passar da estrutura tetragonal com grupo fator C4 com quatro moléculas na célula primitiva, para uma estrutura monoclínica com grupo fator C2, com os íons moleculares ocupando sítios locais de simetria C1 e mantendo quatro moléculas na célula primitiva. Foi realizada uma análise detalhada do comportamento das frequências dos modos normais de vibração ativos no Raman com a temperatura no intervalo de 20 K a 300 K. As frequências da maioria dos modos estudados apresentam um comportamento linear com a temperatura que é normal para qualquer tipo de cristal quando submetido a variações de temperatura da ordem de 300 K. Da análise dos gráficos da dependência de ωj com T, observa-se que o cristal de Ala-Ala exibe a transição de fase estrutural para temperaturas entre 80 K e 60 K. A identificação dos modos normais de vibração do Ala-Ala para temperaturas de 300 K, 80 K e 20 K indica que o mecanismo da transição de fase estrutural é governado pela ocupação de sítios locais de simetria C1 não equivalentes pelos íons moleculares CH3.

Submitted by Morgana Andrade (morgana.andrade@ufes.br) on 2016-04-13T21:32:23Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) DISSERTAÇÃO_ANALISE IN SILICO_PEPTIDEO ANTIMICROBIANOS.pdf: 5274880 bytes, checksum: d59f6bb66ce0d7814f525e182679a031 (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barros (patricia.barros@ufes.br) on 2016-05-17T13:57:59Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) DISSERTAÇÃO_ANALISE IN SILICO_PEPTIDEO ANTIMICROBIANOS.pdf: 5274880 bytes, checksum: d59f6bb66ce0d7814f525e182679a031 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-17T13:57:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) DISSERTAÇÃO_ANALISE IN SILICO_PEPTIDEO ANTIMICROBIANOS.pdf: 5274880 bytes, checksum: d59f6bb66ce0d7814f525e182679a031 (MD5) / A relação estabelecida entre os micro-organismos causadores de doenças e a humanidade vem de longa data, sendo as bactérias um dos principais agentes causadores de doenças na espécie humana, cujo controle pode ser por meio do uso de antibióticos, entretanto, com o passar do tempo, o surgimento e o aumento da resistência bacteriana ao uso de tais medicamentos tem se tornado uma preocupação crescente. Diante de perspectivas negativas ocasionadas pela multirresistência, o investimento em pesquisas que permitam a obtenção de novos medicamentos tem se tornado uma necessidade, porém, por mais dinâmicas que sejam as empresas farmacêuticas, a busca por novos antibacterianos não tem acompanhado o desenvolvimento da multirresistência. Desta forma, a elaboração de novas estratégias para o combate crescente a essa resistência tem recebida maior atenção, e os peptídeos antibacterianos (PAMs) surgem como uma perspectiva. Muitos PAMs já foram isolados de animais e plantas apresentando eficácia comprovada. Além de isolados diretamente de organismo diversos, outra possibilidade de obtenção de PAMs é a síntese artificial de peptídeos projetados ou ainda a utilização de peptídeos obtidos da fragmentação de moléculas orgânicas existentes na composição biológica normal dos seres vivos. Modelações computacionais permitem escolhas de peptídeos com maior eficácia e que possam exercer um combate efetivo contra micro-organismos multirresistentes, assim, o desenvolvimento e a validação de técnicas que usem a bioinformática para facilitar a descoberta desses PAMs e minimizar custos de pesquisa estão se destacando no campo da biotecnologia. Neste trabalho, foi selecionada a proteína eritropoetina humana (EPO) para a obtenção de PAMs por meio de simulações in silico. Os peptídeos obtidos foram avaliados e testados em diferentes modelos computacionais visando a predição de possíveis efeitos antibacterianos, pensando em uma eventual síntese para testes futuros, com a perspectiva de que esses agentes atuem como novas armas contra a constante evolução da resistência bacteriana, desde que não gerem respostas imunológica de rejeição, alergenicidade ou citotoxicida ao serem usados em terapias. / The relationship established between the micro-organisms disease causing and humanity has a long history, the bacteria being one of the main causative agents of disease in humans, some easily controlled others less, usually through the use of antibiotics, however, with the passage of time, the emergence and spread of bacterial resistance to the use of such medications has become a growing concern. In the face of negative perspectives caused by multi-resistance, investment in research that allows the obtaining of new drugs has become a necessity, however, even the pharmaceutical companies had been dynamic, the search for new anti-bacterials has not accompanied the development of multidrug resistance. Therefore, the development of new strategies to combat this growing resistance have received more attention, and antibacterial peptides (PAMs) arise as a perspective. Many PAMs have been isolated from animals and plants showing proven effectiveness. Beyond directly isolated from various organisms, another possibility of obtaining PAMs is design artificial synthesis of peptides or the use of peptides obtained from the fragmentation of organic molecules in the biological composition existing in the standard of living beings. Computational modeling allow choices of peptides more effectively and that may have an effective combat against multidrug-resistant micro-organisms, thus, the development and validation of techniques that use bioinformatics to facilitate the discovery of these PAMs and minimize search costs are excelling in the biotechnology field. In this work, we selected the human erythropoietin protein (EPO) to obtain PAMs through simulations in silico. The peptides were evaluated and tested in different computational models aimed at predicting possible antibacterial effects, considering a possible synthesis for future testing, with the prospect that these agents act as new weapons against the constant evolution of bacterial resistance, since there do not generate immune responses of rejection, allergenicity and cytotoxicity when used in therapies.

Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa de Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by giuliana silveira (giulianagphoto@gmail.com) on 2016-02-19T18:08:21Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_PropecçãoPeptídeosBioativos.pdf: 3147932 bytes, checksum: cb1d8983cbab4d5d804dd91c66b36c7a (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2016-02-25T16:55:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_PropecçãoPeptídeosBioativos.pdf: 3147932 bytes, checksum: cb1d8983cbab4d5d804dd91c66b36c7a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-25T16:55:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_PropecçãoPeptídeosBioativos.pdf: 3147932 bytes, checksum: cb1d8983cbab4d5d804dd91c66b36c7a (MD5) Previous issue date: 2015 / A busca de peptideos bioativos com potencial capacidade de interacao e modulacao da atividade proteolitica do proteassoma 20S constitui tema de grande interesse em biologia celular. O uso de inibidores de proteassoma ja vem sendo aplicado no tratamento de doencas como o cancer, e varias moleculas encontram-se atualmente em fase de testes clinicos. O presente trabalho teve como objetivos a purificacao do proteassoma 20S e a avaliacao do potencial inibitorio de peptideos sobre a atividade quimotripsina-simile do complexo 20S. Neste intuito duas abordagens distintas foram utilizadas: 1) analise do potencial inibitorio de moleculas analogas ao inibidor de proteassoma PR-11, e 2) obtencao de novos alvos com capacidade de interacao e modulacao da atividade proteassomal por meio de tripsinolise de proteinas sericas. Para purificacao do proteassoma 20S utilizou-se de filtracao molecular e troca ionica, as quais proporcionaram a obtencao de dois perfis distintos do complexo 20S, apos analise por eletroforese unidimensional. A confirmacao das identidades das subunidades do proteassoma e a identificacao de proteinas co-eluidas foram realizadas por espectrometria de massas. Quanto ao potencial inibitorio dos analogos do PR-11, foram selecionados os peptideos F12, G9F12 e I9F12. Esses demonstraram eficacia nas taxas de inibicao da atividade proteolitica do proteassoma 20S com destaque para o F12 o qual foi capaz de inibir em cerca de 70 e 53% a atividade quimotripsina simile, quando utilizado na concentracao de 0,25 e 0,125 ƒÊM respectivamente. Para a identificacao de novos alvos moduladores de atividade do proteassoma, proteinas sericas foram digeridas com tripsina seguido de avaliacao do potencial inibitorio dos peptideos resultantes. Os ensaios de atividade demonstraram cerca de 40 e 10% de inibicao quando os peptideos tripticos totais foram empregados nas concentracoes de 50 ƒÊM e 6,25 ƒÊM, respectivamente. A identificacao dos peptideos tripticos ligantes de proteassoma por espectrometria de massas necessitara de novas abordagens tecnicas para ligacao e recuperacao da fracao peptidica ligada. Os resultados obtidos neste trabalho permitiram concluir que analogos estruturais do PR-11 representam moleculas inibidoras de alta potencia e ainda que a tecnica de tripsinolise serica utilizada, e capaz de fornecer peptideos alternativos para modulacao da atividade proteassomal. ________________________________________________________________________________ / ABSTRACT : The search for bioactive peptides endowed with modulatory capability over the activity of 20S proteasomes is a subject of major interest in cell biology. Proteasome inhibitors have been applied in the treatment of diseases such as cancer, and several new molecules are currently under investigation. This study aimed the purification of the 20S murine proteasome and the evaluation of potential inhibitory peptides over its chymotrypsin-like activity. To accomplish these goals two different approaches were used: 1) analysis of the inhibitory activity of three PR-11 derivatives, and 2) generation of new proteasome target molecules through trypsinolysis of serum proteins. 20S proteasome purification was achieved by gel filtration and ion exchange. These chromatographic steps resulted in two distinct and highly homogeneous 20S complexes as judged by one-dimensional gel electrophoresis. Confirmation of the identities for alpha and beta proteasome subunits and co-eluted proteins was made by mass spectrometry. The inhibitory potential of three PR-11 analogs F12, G9F12 and I9F12 was then evaluated. These PR-11 derivatives proved to be efficient 20S proteasome inhibitors highlighting that F12 was able to inhibit approximately 70 and 53% of the chymotrypsin-like activity when used at a concentration of 0.25 and 0.125 μM respectively. For the identification of new target modulators of proteasome activity, serum proteins were digested with trypsin, followed by evaluation of the inhibitory potency of the resulting peptides. Activity assays showed approximately 40 and 10% inhibition when total tryptic peptides were used at concentrations of 50 and 6.25 μM, respectively. The identification of such novel proteasome ligands by mass spectrometry will require the utilization of new approaches for binding and recovering of the bound peptide fraction. The results of this study indicate that structural analogues of PR-11 represent inhibitory molecules endowed with high potency and serum trypsinolysis may offer alternative molecules for modulating proteasome activity.