Made available in DSpace on 2016-07-01T13:10:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-01-08. Added 1 bitstream(s) on 2016-07-01T13:13:43Z : No. of bitstreams: 1 000866933_20170204.pdf: 402819 bytes, checksum: 62d187d37e44d6a246ccce84bcfdddc7 (MD5) Bitstreams deleted on 2017-02-10T12:53:31Z: 000866933_20170204.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-02-10T12:54:12Z : No. of bitstreams: 1 000866933.pdf: 1093450 bytes, checksum: 3a386b29a7bb7aa4f0c3076928611c70 (MD5) / O objetivo do presente estudo foi avaliar clínica e histologicamente, os efeitos do uso do PRP na viabilidade de enxertos cutâneos autólogos e homólogos de espessura total em coelhos. Para isso foram constituídos quatro grupos experimentais (n=9), designados como: G1: o enxerto autólogo tratado com o PRP; G2: enxerto autólogo; G3: enxerto homólogo tratado com PRP e G4: enxerto homólogo. Deste modo, cada coelho foi submetido ao tratamento com PRP e seu controle dos enxertos autólogos e homólogos, totalizando 36 amostras. Todas a etapas foram documentadas para a avaliação clínica macroscópica e no 19º dia foi coletado da área central, um fragmento de cada enxerto para a avaliação histomorfológica. O tratamento do enxerto autólogo com o PRP promoveu influência positiva na fase inicial ou de pega do enxerto, demonstrada por coloração avermelhada à avaliação macroscopia e aspecto cosmético comparado aos demais tratamentos. Na avaliação histomorfométrica, o número de macrófagos foi superior nos enxertos homólogos em relação aos autólogos. Porém, não houve diferença no número de macrófagos e fibroblastos com a instituição do tratamento com PRP. O tratamento do enxerto autólogo com o PRP, na forma líquida, promove influência positiva na fase inicial ou de pega do enxerto / The objective of this study was to evaluate clinically and histologically, the effect of PRP on the viability of the autologous and homologous full thickness grafts in rabbits. Four experimental groups (n=9) were studied and designated as G1: autologous graft treated with PRP; G2: autograft; G3: homograft treated with PRP and G4: homograft. Each rabbit was subjected to treatment with PRP and its control of autologous and homologous grafts, representing 36 samples. All steps were documented for the macroscopic clinical assessment and at 19th postoperative days, skin biopsy was collected from the central area, for histomorphological evaluation. The treatment of graft with PRP resulted positive influence in the initial phase or handle of the graft, demonstrated by the reddish macroscopic and cosmetic appearance compared to others treatments. The histomorphometric evaluation, the number of macrophages in the grafts was higher in homologs compared to autologous. However, there was no difference in the number of macrophages and fibroblasts with the PRP treatment. The treatment of the graft with PRP in liquid form, promotes a positive influence on the initial phase or take of the graft

Submitted by ISABELE SILVEIRA ROSA null (isabelesrv@gmail.com) on 2016-08-08T14:40:35Z No. of bitstreams: 1 IsabeleSilveiraRosaVanniMestrado - ok pdf.pdf: 3226160 bytes, checksum: 4bfd14d4c9a8ade0e472c57642b58870 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-08-10T12:14:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 vanni_isr_me_bot.pdf: 3226160 bytes, checksum: 4bfd14d4c9a8ade0e472c57642b58870 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-10T12:14:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 vanni_isr_me_bot.pdf: 3226160 bytes, checksum: 4bfd14d4c9a8ade0e472c57642b58870 (MD5) Previous issue date: 2016-07-18 / Não recebi financiamento / Muitas especialidades médicas têm utilizado o Plasma Rico em Plaquetas (PRP) em diferentes modalidades terapêuticas, como está ocorrendo com a Ortopedia e em Cirurgia Plástica. No entanto, a denominação utilizada para o PRP é muitas vezes equivocada. Diante do crescente número de especialidades médicas usando PRP ou Hormônios Derivados de Plaquetas (HDP) este trabalho foi delineado. Objetivo: compreende três etapas: 1) Levantamento bibliográfico em base de dados com a palavra-chave: platelet rich plasma com intuito de avaliar criticamente os artigos publicados na literatura em revistas com Fator de Impacto (FI)≥1; 2) Obter PRP, Concentrado de Plaquetas (CP) e HDP de indivíduos saudáveis, pela técnica de lisado plaquetário, após a utilização de agonista e congelamento / descongelamento (N=10) e 3) Avaliar o desempenho destes preparados como substituto do Soro Fetal Bovino na cultura de Células Tronco Mesenquimais humanas (CTMh). Casuística e Métodos: Os indicadores monitorados foram: idade, sexo, tipagem ABO/RhD, fenotipagem eritrocitária Rh, Kell e determinação de fatores de crescimento pelo sistema Multiplex-Milliplex®: PDGF- AA, RANTES/CCL5, PAI-1 (total), VEGF-A, FGF-1/FGF-ácido, FGF-2/FGF-básico, EGF, Angiopoietina-2, Fibrinogênio e Fator von Willebrand, estes dosados nas 3 preparações: PRP, CP e HDP. Todos os indicadores monitorados foram realizados análise estatística. Resultados: Foram analisados 50 artigos entre 2012-2016, destes, 29 com a palavra-chave platelet-rich plasma, 14 platelet lysate (PL) e 7 platelet growth factor (PGF). Os artigos publicados com a palavra-chave PL são de periódicos com maior FI e maior coerência com a metodologia, seguida do PGF e PRP. Contata-se que a maioria dos trabalhos com a terminologia PRP foi empregada de forma equivocada. Estes indicadores registram que não existe correlação entre a contagem plaquetária e a dosagem de hormônios. A idade dos indivíduos está inversamente relacionada com a concentração de fator, à exceção do FGF. Não há correlação da quantidade de fatores de crescimento e sexo. Indivíduos do grupo sanguíneo A, e fenótipo ee são melhores secretores de hormônios de crescimento. Quando se comparam os 3 métodos analisados, o CP e o HDP são estatisticamente superiores ao PRP quanto à dosagem de fatores de crescimento. A análise desempenho dos preparados, na concentração de 20% quando comparado com o Soro Fetal Bovino na mesma concentração, identifica que o melhor desempenho quantitativamente foi CP>PRP>HDP=CTLE. No entanto a análise histológica evidencia um grande número de células aderidas ao scaffold de fibrina, com desempenho nitidamente superior para o HDP. Conclusão: A maioria dos trabalhos publicados usa a terminologia PRP incorretamente. Levando-se em consideração a quantificação dos hormônios plaquetários dosados e o desempenho em cultura celular as melhores técnicas são CP e HDP, ficando o PRP em desvantagem. / Diversity medical specialties have been using Platelet Rich Plasma (PRP) therapy form as is happening with the Orthopedics and Plastic Surgery. However, the name used for the PRP is often used wrongly. This work was outlined considering the growing number of medical specialties using PRP or platelet-derived hormones (PDH). Objective: The work consisted of three steps: 1) Bibliographic search with the key word PRP in order to evaluate the articles published in journals with Impact Factor (IF) ≥1; 2) obtaining of PRP, platelet concentrate (PC) and PDH from healthy individuals using the platelet lysate technique after use agonist and freeze / thaw (N = 10); 3) evaluate the performance of these preparations as substitute for fetal bovine serum in culture of human mesenchymal stem cells. Methods: The indicators monitored were: age, sex, ABO / RhD, erythrocyte phenotyping Rh, Kell and determination of growth factors by Multiplex-Milliplex® system(PDGF-AA, RANTES / CCL5, PAI-1 (total), VEGF-A, FGF-1 / FGF-acid, FGF-2 / FGF-basic, EGF, Angiopoietin-2, fibrinogen and Factor von Wilebrand. The monitored indicators were performed statistical analysis. Results: These parameters were measured in three preparations: PRP, PC and PDH. It was analyzed 50 articles between 2012-2016, of these, 29 with the platelet-rich plasma password, 14 platelet lysate (PL) 7 and platelet growth factor (PGF). Articles published with the keyword PL are journals with higher IF and greater consistency with the methodology followed by PGF and last PRP. It was observed that most of the work with the PRP terminology was used wrongly. These indicators showed that there is no correlation between the platelet count and the dosage of hormones. The age of individuals is inversely related with the concentration of factors, excepting FGF. There is no correlation between the amount of growth factors and gender. Individuals belonging to blood group A and no phenotype E are better secreting of growth hormones. When comparing the three methods analyzed, PC and PDH are statistically higher than PRP on the dosage of growth factors. Compared with 20% of Fetal Bovine Serum, the performance was quantitatively better to PC> PRP> CTL=PDH on the viability of suspension cell. However, the histological analysis showed a large number of cells attached to the fibrin scaffold with higher performance to the PDH. Conclusion: The majority of published studies using PRP terminology are incorrectly. Considering the quantitation of platelet hormones and the performance in cell culture, the best techniques are PC and PDH.

Orientador: Cláudia Valéria Seullner Brandão / Banca: Sheila Canevese Rahal / Banca: Carlos Roberto Teixeira / Banca: Fernando de Biasi / Banca: Bruno Watanabe Minto / Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar clínica e histologicamente, os efeitos do uso do PRP na viabilidade de enxertos cutâneos autólogos e homólogos de espessura total em coelhos. Para isso foram constituídos quatro grupos experimentais (n=9), designados como: G1: o enxerto autólogo tratado com o PRP; G2: enxerto autólogo; G3: enxerto homólogo tratado com PRP e G4: enxerto homólogo. Deste modo, cada coelho foi submetido ao tratamento com PRP e seu controle dos enxertos autólogos e homólogos, totalizando 36 amostras. Todas a etapas foram documentadas para a avaliação clínica macroscópica e no 19º dia foi coletado da área central, um fragmento de cada enxerto para a avaliação histomorfológica. O tratamento do enxerto autólogo com o PRP promoveu influência positiva na fase inicial ou de "pega" do enxerto, demonstrada por coloração avermelhada à avaliação macroscopia e aspecto cosmético comparado aos demais tratamentos. Na avaliação histomorfométrica, o número de macrófagos foi superior nos enxertos homólogos em relação aos autólogos. Porém, não houve diferença no número de macrófagos e fibroblastos com a instituição do tratamento com PRP. O tratamento do enxerto autólogo com o PRP, na forma líquida, promove influência positiva na fase inicial ou de "pega" do enxerto / Abstract: The objective of this study was to evaluate clinically and histologically, the effect of PRP on the viability of the autologous and homologous full thickness grafts in rabbits. Four experimental groups (n=9) were studied and designated as G1: autologous graft treated with PRP; G2: autograft; G3: homograft treated with PRP and G4: homograft. Each rabbit was subjected to treatment with PRP and its control of autologous and homologous grafts, representing 36 samples. All steps were documented for the macroscopic clinical assessment and at 19th postoperative days, skin biopsy was collected from the central area, for histomorphological evaluation. The treatment of graft with PRP resulted positive influence in the initial phase or "handle" of the graft, demonstrated by the reddish macroscopic and cosmetic appearance compared to others treatments. The histomorphometric evaluation, the number of macrophages in the grafts was higher in homologs compared to autologous. However, there was no difference in the number of macrophages and fibroblasts with the PRP treatment. The treatment of the graft with PRP in liquid form, promotes a positive influence on the initial phase or "take" of the graft / Mestre

Orientador: Elenice Deffune / Resumo: Muitas especialidades médicas têm utilizado o Plasma Rico em Plaquetas (PRP) em diferentes modalidades terapêuticas, como está ocorrendo com a Ortopedia e em Cirurgia Plástica. No entanto, a denominação utilizada para o PRP é muitas vezes equivocada. Diante do crescente número de especialidades médicas usando PRP ou Hormônios Derivados de Plaquetas (HDP) este trabalho foi delineado. Objetivo: compreende três etapas: 1) Levantamento bibliográfico em base de dados com a palavra-chave: platelet rich plasma com intuito de avaliar criticamente os artigos publicados na literatura em revistas com Fator de Impacto (FI)≥1; 2) Obter PRP, Concentrado de Plaquetas (CP) e HDP de indivíduos saudáveis, pela técnica de lisado plaquetário, após a utilização de agonista e congelamento / descongelamento (N=10) e 3) Avaliar o desempenho destes preparados como substituto do Soro Fetal Bovino na cultura de Células Tronco Mesenquimais humanas (CTMh). Casuística e Métodos: Os indicadores monitorados foram: idade, sexo, tipagem ABO/RhD, fenotipagem eritrocitária Rh, Kell e determinação de fatores de crescimento pelo sistema Multiplex-Milliplex®: PDGF- AA, RANTES/CCL5, PAI-1 (total), VEGF-A, FGF-1/FGF-ácido, FGF-2/FGF-básico, EGF, Angiopoietina-2, Fibrinogênio e Fator von Willebrand, estes dosados nas 3 preparações: PRP, CP e HDP. Todos os indicadores monitorados foram realizados análise estatística. Resultados: Foram analisados 50 artigos entre 2012-2016, destes, 29 com a palavra-chave platelet-rich ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

As queimaduras são eventos comuns e recorrentes no dia a dia dos atendimentos médicos. Há uma constante busca para entender a sua fisiopatologia, no intuito de minimizar seus resultados devastadores. Plasma rico em plaquetas (PRP) é um concentrado de plaquetas com capacidade de liberação local de múltiplos fatores de crescimento (FC) que aceleram a cicatrização. Este estudo consiste em dois experimentos: o primeiro visa validar um modelo experimental para a criação de queimaduras de tamanho e profundidade padronizados e, o segundo, avalia o uso de PRP em queimaduras. Para o desenvolvimento de queimaduras na validação do modelo experimental, foi idealizado um equipamento que permitisse o controle preciso da temperatura, além da utilização em conjunto de uma técnica inovadora de fixação que garante pressão constante no momento das queimaduras. Para o primeiro experimento, foram utilizados 12 ratos, por grupo, submetidos a queimaduras de 60 oC, 70 oC ou 80 oC por dez segundos, com um equipamento que desenvolvemos. Metade dos animais de cada grupo foi morta no terceiro dia e suas feridas foram analisadas por histologia, e, na outra metade, a ferida foi mensurada e acompanhada até o seu fechamento. No uso de PRP em queimaduras, foram avaliadas queimaduras de segundo grau (SG), segundo grau com diabetes mellitus induzido (SGD) e queimaduras de terceiro grau (TG). Noventa animais foram distribuídos em três grupos (SG, SGD e TG), onde, em cada um, dez animais foram tratados, dez serviram de controle e dez foram utilizados para o preparo do PRP. As áreas das feridas foram acompanhadas até o vigésimo primeiro dia, quando os animais foram mortos e biópsias de pele foram realizadas. Os resultados da validação do modelo mostram que as queimaduras produzidas com 60 oC foram de SG superficial (28% da derme envolvida); com 70 oC foram de SG profundo (72% da derme envolvida); e com 80 oC foram de TG (100% da derme envolvida). Em relação ao uso de PRP em queimaduras, observou-se que nos grupos tratados SG e SGD houve aceleração do fechamento da ferida e redução no número de células CD31, CD163, CD68, MPO e TGF-β positivas, e aumento do número de células MMP2 positivas. A neoepiderme foi mais fina nos controles dos grupos SG e SGD, e o tecido de granulação foi reduzido nos controles SGD e TG. O modelo utilizado é seguro e confiável para produzir queimaduras regulares e uniformes, de diâmetros variados, pela capacidade do controle fino da temperatura e pelo posicionamento do animal, e reprodutíveis. PRP parece acelerar a cicatrização de queimaduras de SG e SGD, mas não de TG. / Burns are common and recurring events in the daily lives of medical care. There is a constant search to understand itsphysiopathology, in order to minimize its devastating results. Platelet-rich plasma (PRP) is a platelet concentrate with capacity of local release of multiple growth factors (FC) that accelerate healing. This study consists in two experiments: the first to validate an experimental model for the creation of standardized burns in size and depth and the second to evaluate the use of PRP in burns. The burns were achieved in an experimental burn model using an equipment that we developed and allows precise temperature control and in association with a innovative fixation technique that creates a constant pressure. Twelve rats per group underwent burns at 60oC, 70oC or 80oC for 10 seconds, with a device that we developed. Half of the animals of each group was killed on the third day and their wounds were analyzed by histology, and in the other half the wounds were measured and monitored until their closure. In the use of PRP in burns, second degree burns (SD), second degree burns with induced diabetes mellitus (SDD) and third degree burns (TD) were evaluated. Ninety animals were divided into three groups (SD, SDD, and TD) and in each one10 animals were treated, 10 animals served as controls, and 10 animals were used for PRP preparation. The wound areas were accompanied until the twenty-first day, when the animals were killed and skin biopsies were obtained. The results of the validation of the model show that the burns derived from 60oC were of superficial SD (28% of the dermis involved); for 70 C they were deep SD (72% of the dermis involved); and for 80oC they were TD (100% of the dermis involved). Regarding the use of PRP in burns, it was observed that in the SD and SDD treated groups the wound closure was accelerated and there was reduction in the number of CD31, CD163, CD68, MPO, and TGF-β positive cells, and increasing of the number of MMP2 positive cells. The neoepidermis was thinner in control of both SD and SDD groups, and the granulation tissue was reduced in both control SDD and TD. The model used is safe and reliable to produce regular and uniform burns of varying diameters, by its ability of the fine control of temperature, by the animal positioning, and by its reproducibility. PRP appears to accelerate the healing of burns of SD and SDD, but not TD.

Enfermidade muito observada nas articulações dos equinos, o processo degenerativo articular crônico na articulação tibio-társica pode ser de origem primária, ou secundária à osteocondrose dissecante. A confirmação diagnóstica é feita por avaliação radiográfica. Importantes aliados diagnósticos são a avaliação do líquido sinovial, a avaliação ultrassonografia e a cirurgia de video-artroscopia, sendo esta última o tratamento para a enfermidade. Por sua evolução crônica e às vezes assintomática, a osteocondrose dissecante causa alterações no ambiente articular, como a perda de matriz cartilagínea, o que limita o potencial atlético do animal, acarretando em queda na performace e perdas econômicas. É comum o uso terapêutico intra-articular no periodo pós operatório recente de substâncias autólogas como o plasma rico em plaquetas (PRP), bem como o uso ácido hialurônico (HA), como adjuvante para o tratamento cirúrgico. O presente trabalho objetiva comparar e avaliar estes tratamentos. Foram utilizados 18 equinos, com idade variando entre 2 a 6 anos de idade, da raça Brasileiro de Hipismo, com peso corpóreo entre 400 e 650 kg, oriundos do mesmo criatório, com osteocondrose dissecante, na crista intermédia do osso tíbia. Estes animais no décimo dia pós operatório são dividos em três grupos experimentais: grupo AH, grupo PRP e grupo RCL como controle. Dados clínicos, ultrassonográficos e laboratoriais foram coletados em tempos definidos. Os resultados demonstraram que os animais do grupo controle - grupo RCL, que receberam solução de ringer com lactato intraarticular, apresentaram respostas clínicas e laboratoriais que indicaram menor indução do processo inflamatório ao ambiente articular quando comparado aos grupos PRP e AH. Os animais que receberam PRP apresentaram maior efusão sinovial e resposta positiva ao teste de flexão quando comparados aos animais que receberam AH; ao passo que a administração intra-articular de AH induziu maiores alteração citológica do líquido sinovial quando comparadas aos animais que receberam PRP. / One of the most commom diseases in the equine joint, the degenerative joint disease in the tibio tarsal joint could be a primary disease, or secondary to osteochondrosis dissecans. The diagnosis is made by radiographic study. Allies in diagnosing this disease includes sinovial fluid evaluation, ultrasonographic evaluation and video arthroscopy surgery, which is the way to treat this disease. The osteochondrosis dissecans has a chronic evolution, and several times asymptomatic, which causes an alteration on articular environment that contributes to a loss in the cartilage matrix. Resulting in the limited development of the athletic potential of the animal, poor performance and economic losses. Is common to use therapeutical autholog substances intra articular as the platelet rich plasma, and hialuronic acid, in the early post surgical treatment as an adjuvant therapy to the surgical treatment. This study reaches to compare and evaluate those treatments. Were used 18 horses, with ages between 2 to 6 years old, Brasileiro de Hipismo breed, weighting between 400 and 650 kg, from the same breeding center, with osteochondrosis dissecans fragments from the intermediate tibial crest. Those patients, 10 days after the video arthroscopy surgery, were divided in three experimental groups: AH group, PRP group, and RCL group as control group. Laboratorial data, clinical signs and ultrassonographic exam were performed. The results proved that RCL group had show less induction of inflamatory process on articular enviroment, when we compare with PRP group and AH group. The PRP group had shown more synovial effusion, and more sensibility to the flexion test when we compare to AH group; but the AH group had shown more laboratorial alterations when we compare to the PRP group.

A cicatrização do tendão é um complexo processo que envolve uma variedade de moléculas reguladoras. Como exemplos temos os fatores de crescimento positivamente correlacionados com a expressão de genes responsáveis pela síntese da matriz extracelular, bem como os proteoglicanos que atuam como organizadores dos tecidos capazes de modular o crescimento e a maturação celular de tecidos especializados. No intuito de reparar o tendão com lesão existem várias opções de tratamento, mas nenhuma tem sido relatada como plenamente eficaz. Sendo assim, na busca de tratamentos regenerativos e não apenas reparativos, o objetivo deste trabalho foi investigar a influência do plasma rico em plaquetas (PRP) no processo de cicatrização do tendão flexor digital superficial de equinos, utilizando-se deste tratamento isoladamente ou associado ao laser terapêutico. Com essa finalidade, 26 membros torácicos de equinos foram distribuídos aleatoriamente em quatro grupos distintos: o grupo 1 (G1) foi composto por oito membros torácicos sadios provenientes de cadáveres frescos; no grupo 2 (G2) em seis membros foi induzida a tendinite, sem a realização de qualquer tipo de tratamento; no grupo 3 (G3) a tendinite também foi induzida em seis membros, os quais receberam o tratamento com o PRP; e no grupo 4 (G4) a tendinite foi induzida em seis membros torácicos que receberam o tratamento com o PRP associado ao laser terapêutico. Os animais foram avaliados clinicamente e ultrassonograficamente. Já as amostras do tecido tendíneo, obtidas por biópsia guiada por ultrassom, foram avaliadas por imunoistoquímica quanto a presença dos proteoglicanos: decorim, biglicam, fibromodulim e agrecam, Nessas amostras também foi realizada a análise da birrefringência do colágeno. Na avaliação clínica verificou-se que o grupo G4 foi o único que não mais apresentou sensibilidade à palpação no local da lesão ao término do experimento. Já na avaliação ultrassonográfica, os tendões dos membros torácicos dos grupos G3 e G4 que receberam os tratamento com PRP demonstraram melhora na ecogenicidade tanto do tendão como da lesão. Além disso, os tendões do grupo G4 apresentaram melhora no paralelismo das fibras de colágeno. Na avaliação imunoistoquímica os resultados demostraram que o biglicam, o fibromodulim e o agrecam tiveram sua expressão aumentada nas amostras do grupo G4 tratados com a associação PRP e laser quando comparados com as amostras do tendão hígido do grupo G1. Já no grupo G2 observou-se apenas o aumento da expressão de agrecam em relação ao G1. Na análise da birrefringência do colágeno o maior valor de retardo óptico (OR) foi apresentado também nas amostras do grupo tratado com a associação do PRP e laser (G4). Durante o processo de regeneração de um tendão lesado há uma tendência para o aumento dos valores de OR, o que representa uma melhora na organização do colágeno. Provavelmente, o laser foi capaz de produzir um aumento na síntese de colágeno e uma melhor agregação e alinhamento das fibras de colágeno. Assim, concluímos que o tratamento com PRP associado ao laser demonstrou melhora clínica, ultrassonográfica, de birrefringência e na expressão de proteoglicanos da matriz extracelular, o que não ocorreu quando utilizado isoladamente. / Tendon healing is a complex process involving a variety of regulatory molecules. Growth factors are a family of such molecules; and their presence is positively correlated with the expression of genes responsible for extracellular matrix synthesis. Proteoglycans more than extracellular matrix components are tissue organizers capable of modulating cell growth and maturation in specialized tissues. In order to repair the tendon injury there are several treatment options, but none has been reported as fully effective. In this scenario, regenerative approaches are currently preferred over reparative therapeutic procedures. Therefore, the aim of this study was to investigate the influence of platelet-rich plasma (PRP) in the healing of the equine superficial digital flexor tendon, using this treatment, alone or associated with the laser therapy. For this purpose, 26 equine forelimbs were randomly divided into four groups: group 1 (G1) consisted of eight healthy forelimbs from fresh cadavers; in group 2 (G2), tendinitis was induced in six forelimbs, without performing any type of treatment; in group 3 (G3), tendinitis was also induced in six forelimbs which received PRP treatment; and in group 4 (G4), tendinitis was induced in six forelimbs that received treatment with PRP associated with laser therapy. All animals were evaluated clinically and sonographically. Additionally, tendon tissue samples were obtained by ultrasound-guided biopsy, and assessed by immunohistochemistry to determine proteoglycans expression (decorin, biglycan, fibromodulin and aggrecan). These samples were further analyzed for collagen organization through birefringence. In the clinical evaluation, only G4 animals had absent painful response to direct digital palpation at the end of the experiment. During sonographic evaluation, it was observed that tendons from groups G3 and G4, that received the treatment with PRP, demonstrated improvement in both tendon and lesion echogenicity. Furthermore, tendons from the G4 group showed improvement in axial alignment of collagen fibers. The results showed an increase in biglycan, fibromodulin and aggrecan expression at immunohistochemical evaluation of G4 samples, when compared with healthy tendon samples (G1). In tendons from the G2 group only an increased aggrecam expression compared to G1 was observed. Though the analysis of the collagen birefringence, the highest value of optical retardation (OR) was also presented in the samples of the group treated with the combination of PRP and laser (G4). During the regeneration process of an injured tendon, there is a trend to increase OR values, which represents an improvement of the collagen organization. Probably, the laser was able to induce an increased synthesis and a better aggregation and alignment of collagen. So, we conclude that the animals treated with PRP associated with laser therapy improved clinically and sonographically. Moreover, this treatment improved the arrangement of collagen fibril and enhanced the proteoglycans expression in the extracellular matrix, what did not occur when PRP treatment was used alone.

INTRODUÇÃO: O plasma rico em plaquetas (PRP) é utilizado em medicina esportiva para aumentar e acelerar o processo de reparação tecidual em lesões tendineas e ligamentares, no intuito de proporcionar um retorno mais rápido às atividades esportivas. No entanto faltam estudos com alto nível de evidência comprovando sua eficácia no tratamento destas lesões. Com o objetivo de estudar o efeito da aplicação do PRP no sitio doador de enxerto do ligamento da patela para reconstrução do ligamento cruzado anterior (LCA), realizamos ressonância magnética aos seis meses de pós-operatório para avaliar o ligamento da patela. Também aplicamos questionários de função do joelho e realizamos teste isocinético após seis meses da cirurgia. MÉTODOS: O presente estudo prospectivo, randomizado, avaliador cego incluiu 27 pacientes. Comparamos doze pacientes em que foi utilizado o PRP no defeito criado no terço central do ligamento da patela para retirada de enxerto com quinze pacientes do grupo controle. Aos seis meses de cirurgia realizamos ressonância magnética, em que foi avaliada a área não regenerada do defeito no terço central do ligamento da patela, a área de secção transversa do ligamento e a altura da patela pelo índice de Insall- Salvati. Realizamos teste isocinético e aplicamos questionários específicos de função do joelho. Quantificamos a dor pós-operatória imediata com escala visual analógica (EVA) de dor. RESULTADOS: Aos seis meses de pós-operatório a área não regenerada do defeito no terço central do ligamento da patela foi 4,95 mm2 no grupo PRP e 9,38 mm2 no grupo controle (p=0,046, teste t de Student). A área de secção transversa do ligamento da patela no grupo PRP foi de 173,05 mm2 e no grupo controle 176,29 mm2 (p=0,856). O índice de Insall-Salvati nos grupos PRP e controle foi de 1,04 e 1,06, respectivamente (p=0,808). Não houve diferença entre os grupos nos resultados dos questionários e teste isocinético. Nos pacientes em que foi utilizado o PRP houve menos dor pós-operatória imediata (p=0,02). CONCLUSÃO: Concluímos, nessa amostra, que o uso do PRP no defeito do terço central do ligamento da patela na reconstrução do LCA, nos primeiros seis meses; determinou maior regeneração do defeito; diminuiu a intensidade da dor pós-operatória imediata; não ocasionou alterações estruturais na avaliação por ressonância magnética; e não modificou os resultados clínicos e funcionais da cirurgia / INTRODUCTION: Platelet-rich plasma (PRP) has been used in sports medicine to improve and accelerate ligaments and tendons healing, in an effort to provide a faster return to sports activities. However there is a lack of high evidence level studies to support its use. With the purpose to study the effect of PRP, patellar ligament was evaluated six months after harvesting its central third with magnetic resonance imaging (MRI). We also applied specific questionnaires of knee function and isokinetic testing. METHODS: This blinded, randomized, prospective study included 27 patients. Twelve patients in whom we added PRP in the patellar ligament after harvesting its central third for ACL reconstruction were compared to fifteen patients in the control group. After six months we evaluated the non-regenerated area of the patellar ligament, the cross section area of the patellar ligament and its length (Insall-Salvati index) with MRI. We also evaluated the results of isokinetic testing and specific questionnaires of knee function. Immediate post-operative pain was evaluated with visual analogical scale (VAS) score. RESULTS: The non-regenerated area of the patellar ligament was 4,95 mm2 in the PRP group and 9,35 mm2 in the control group (p=0,046 test). The cross section area of the patellar ligament in the PRP group was 173,05 mm2 and in the control group 176,29 mm2 (p=0,856). The Insall- Salvati index in the PRP and control group was 1,04 and 1,06, respectively (p=0,806). There was no difference between the groups in the questionnaires and isokinetic testing results. PRP group patients had less post-operative pain (p=0,02). CONCLUSION: We concluded, in this sample, that the use of PRP in the patellar ligament after harvesting its central third for ACL reconstruction, in the first six months: improved the ligament regeneration; reduced the intensity of immediate post-operative pain; did not cause structural changes in the patellar ligament in MRI; and did not modify the clinical and functional results of the procedure

Orientador: Maria Helena Andrade Santana / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química / Made available in DSpace on 2018-08-27T09:34:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Shimojo_AndreaArrudaMartins_D.pdf: 2752681 bytes, checksum: 11e9996d95e39a313bd958eee397ff40 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: Este trabalho teve como objetivo estudar o desempenho in vitro do plasma rico em plaquetas (PRP) com scaffolds de ácido hialurônico (AH) ou quitosana (CHT) como um scaffold compósito para a proliferação e diferenciação osteogênica de células tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo humano (h-AdMSCs). O PRP é um produto autólogo obtido do sangue total (WB). O ácido hialurônico é um glicosaminoglicano e principal componente do fluido sinovial. A quitosana é um polissacarídeo natural encontrado principalmente na carapaça de crustáceos. O PRP puro (P-PRP, rico em plaquetas e pobre em leucócitos) foi obtido a partir da centrifugação controlada do WB, e ativado com os agonistas soro autólogo e cálcio. Os scaffolds foram estruturados em micropartículas ou esponjas, para atender os requisitos de formulações injetáveis ou sólidas, respectivamente. Nesse contexto, os seguintes scaffolds foram preparados e caracterizados: sólidos porosos (esponjas) de quitosana não estabilizados (PCHTs) e estabilizados (SPCHTs); micropartículas de quitosana-tripolifosfato de sódio (iCHT-TPPs); micropartículas e esponjas de ácido hialurônico autorreticulado (ACPs) e de ácido hialurônico reticulado com 1,4-butanodiol diglicidil éter (HA-BDDE); e esponjas e micropartículas de ACP e CHT (PECs). PCHTs foram preparados por congelamento e liofilização de soluções de CHT, variando a concentração e as condições de congelamento. As estabilizações foram realizadas pelo tratamento dos PCHTs com hidróxido de sódio, série de etanol ou reticulação com tripolifosfato. Os iCHT-TPPs foram preparados por reticulação iônica de quitosana com TPP em diferentes razões mássicas. ACPs foram obtidos por autoesterificação organocatalisada. HA-BDDE foi preparado por eterificação dos grupos hidroxílicos do HA com o epóxido BDDE. PECs foram preparados por reticulação iônica do ACP com a CHT. Para a preparação de scaffolds compósitos, P-PRP ativado contendo h-AdMSCs foi imediatamente pipetado sobre a superfície dos scaffolds. Os resultados mostraram que os scaffolds não apresentam citotoxicidade. Micrografias obtidas por microscopia eletrônica de varredura mostraram compatibilidade estrutural com as redes de fibrina formadas no interior dos poros ou na superfície de scaffolds compósitos. Os scaffolds compósitos estimularam o crescimento de h-AdMSCs e a diferenciação osteogênica. Os scaffolds compósitos também promoveram liberação gradual dos fatores de crescimento PDGF-AB e TGF-?1. Assim, concluímos que os scaffolds compósitos estudados neste trabalho são promissores para engenharia de tecidos, particularmente para a cicatrização e regeneração óssea, no âmbito da medicina regenerativa / Abstract: This work aimed to study the in vitro performance of platelet-rich plasma (PRP) with scaffolds of hyaluronic acid (HA) and/ or chitosan (CHT) as a composite scaffold for proliferation and osteogenic differentiation of human adipose-derived mesenchymal stem cells (h-AdMSCs). The PRP is an autologous product obtained from whole blood (WB). Hyaluronic acid is a glycosaminoglycan and the main component of the synovial fluid. Chitosan is a natural polysaccharide found mainly in the carapace of crustaceans. The pure PRP (P-PRP, rich in platelet and poor in leukocytes) was obtained from controlled centrifugation of WB, and activated with the agonists autologous serum and calcium. The scaffolds were structured in microparticles or sponges, to comply the requirements of injectable or solid formulations, respectively. In this context, the following scaffolds were prepared and characterized: chitosan porous solid (sponge) unstabilized (PCHTs) and stabilized (SPCHTs); chitosan-sodium tripolyphosphate microparticles (iCHT-TPPs); microparticles and sponges of auto-crosslinked hyaluronic acid (ACPs) and of hyaluronic acid crosslinked with 1,4-butanediol diglycidyl ether (HA-BDDE); and microparticles and sponges of ACP and CHT (PECs). PCHTs were prepared by freezing and lyophilization of CHT solutions, varying the concentration and freezing conditions. Stabilization was performed by treating the PCHTs with sodium hydroxide, an ethanol series or by crosslinking with tripolyphosphate. The iCHT-TPPs were prepared by ionic crosslinking of chitosan with TPP at different mass ratios. ACPs was prepared by organocatalyzed auto-esterification. HA-BDDE was prepared by etherification of the hydroxyl groups of HA with the epoxide BDDE. PECs were prepared by ionic crosslinking of ACP with CHT. For the preparation of composite scaffolds, activated P-PRP containing h-AdMSCs was immediately pipetted onto the surface of the scaffolds. The results showed that the scaffolds do not exhibit cytotoxicity. Micrographs obtained by scanning electron microscopy (SEM) showed structural compatibility with fibrin networks formed inside the pores or on the surface of scaffolds. The composite scaffolds stimulated the growth of h-AdMSCs and osteogenic differentiation. Composite scaffolds also promoted gradual release of growth factors PDGF-AB and TGF-?1 and osteogenic differentiation. Thus, we conclude that the composite scaffolds studied in this work are promising for tissue engineering, particularly for healing and bone regeneration in regenerative medicine / Doutorado / Engenharia Química / Doutora em Engenharia Quimica

A cicatrização das lesões ligamentares é lenta e muitas vezes ineficiente. Uma vez lesado, o ligamento suspensor do boleto (LSB) dificilmente recupera suas propriedades biomecânicas originais. A desmite do LSB proximal dos membros torácicos ocorre em cavalos de todas as raças e todas as disciplinas esportivas. O objetivo deste trabalho foi avaliar clinicamente e por ultrassonografia, a influência do plasma rico em plaquetas (PRP), e do PRP associado ao LASER terapêutico, na cicatrização da região proximal do LSB, em cavalos com desmite induzida por colagenase. Para isto foram utilizados 18 animais sem raça definida, distribuídos em três grupos. O G1 foi formado por seis animais, submetidos a indução da desmite na região proximal do LSB, que não receberam qualquer tratamento. O G2 foi formado por seis animais, que foram submetidos a desmite induzida e após três semanas receberam aplicação intralesional de PRP guiada pelo ultrassom. O G3 foi formado por seis animais, que após indução da desmite receberam tratamento com LASER terapêutico a partir da segunda semana, e na terceira semana pós-lesão receberam aplicação intralesional de PRP guiada pelo ultrassom. A indução da desmite foi realizada por meio de infiltração guiada pelo ultrassom na região proximal do LSB, sendo este considerado o tempo 0. A cada semana e até a semana oito, os cavalos foram avaliados clinicamente, por ultrassonografia e por análise cinemática, ao trote em linha reta. Houve diferença significativa na comparação entre grupos para as variáveis aumento de volume na avaliação clínica, e área no corte transversal do ligamento e, área no corte transversal da lesão na avaliação ultrassonográfica. Na comparação entre os diferentes momentos de observação as variáveis aumento de volume e dor à palpação do G2 e G3 mostraram escores maiores quando comparados ao G1, sendo que o G2 apresentou escore maior que o G3. Ultrassonograficamente, a ecogenicidade da lesão mostrou diminuição dos escores, a partir da quinta semana de avaliação nos grupos tratados. As demais variáveis clínicas ou ultrassonográficas, bem como a análise cinemática da claudicação não mostraram diferenças significativas entre os grupos. O PRP, apesar de ocasionar inflamação leve e transitório após infiltração, influenciou positivamente o processo de cicatrização da parte proximal do LSB, com um efeito analgésico adicional quando associado ao LASER terapêutico. / The healing process of injured ligaments is slow and often inefficient. Once damaged the suspensory ligament (SL) hardly recover their original biomechanical properties. The forelimb proximal suspensory ligament desmitis occurs in horses of all breeds and all sports. The aim of this study was to evaluate clinically and ultrasonographically, the influence of platelet-rich plasma (PRP), and PRP associated with LASER therapy, on the healing process of the proximal region of the SL in horses with collagenase-induced demitis. For this purpose it were used 18 cross breed horses divided into 3 groups. G1 was composed of six horses subjected to induction of proximal suspensory desmitis, with no treatment. G2 was composed of six horses subjected to desmitis induction and after three weeks they received ultrasound-guided intralesional injection of PRP. G3 was composed of six horses subjected to desmitis induction and after two weeks they received laser therapy and one week later they received intralesional guided-ultrasound injection of PRP. Induction of desmitis was made using ultrasound-guided infiltration in PSL, which was considered day zero. Horses were evaluated clinically, in straight line trot for cinematic analysis and ultrasonographically, every week until eighth week. There were significant difference between groups for swelling, the cross-sectional area of the ligament, and the cross-sectional area of the injury on ultrasound evaluation. Comparing the different times of observation, descriptively were a difference for G2 and G3 in the clinical variables that evaluated swelling and pain on palpation, showed higher scores compared to the G1, and G2 had higher scores than the G3. Sonographically, the echogenicity of the lesion showed decreased scores from the fifth week of evaluation in the treated groups. The other clinical variables or ultrasound, as well as the kinematic analysis of lameness showed no significant differences between groups. PRP, although causing transient and mild inflammation after infiltration, positively influenced the healing process of the proximal part of the SL, with additional analgesic effect when combined with laser therapy.