Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Several compound present in fruits as polyphenols are able to kill or inhibit the growth of microorganisms. These proprieties are relevant mainly in tropical areas, as Amazonian region where infectious are highly prevalent. Therefore, this study investigated the tucumã Amazonian fruit antimicrobial activity against 37 microorganisms. The potential role of oxidative metabolism imbalance was also studied as causal mechanism of antimicrobial activity. The results showed antibacterial effect of pulp and peel tucumã hydro-alcoholic extracts on three gram-positive bacteria (Enteroccocus faecalis, Bacillus cereus, Listeria monocytogenes) and antifungical effect against Candida albicans. The antimicrobial contribution of main chemical compounds (quercetin, rutin, β-carotene and gallic, caffeic and chlorogenic acids) found in tucumã extracts was also investigated showing an inhibitory effect depending of the organism mainly by quercetin in bacteria and rutin in C.albicans. Analysis of kinetic of DNA releasing in extracellular medium by fluorescence using DNA Pico Green assay® and reactive oxygen species production (ROS) showed potential oxidative imbalance contribution on tucumã inhibitory effect. In B.cereus and C.albicans this effect was clear since after 24 hours the ROS levels were higher when compared to negative control group. In conclusion, tucumã extracts present antimicrobial activity to four microorganisms that have large problems of drug resistance, and the possible mechanism of action of this Amazon fruit is related to REDOX imbalance. / Aguns compostos, como por exemplo, os polifenóis presentes em várias frutas, são capazes de matar ou inibir o crescimento de microrganismos. Estas propriedades estão presentes principalmente em frutos de áreas tropicais, como a região amazônica. Portanto, este estudo investigou a atividade antimicrobiana contra 37 microrganismos de um fruto amazônico conhecido como tucumã. O potencial papel de desequilíbrio do metabolismo oxidativo também foi estudado como mecanismo causal da atividade antimicrobiana. Os resultados mostraram efeito antibacteriano para os extratos hidroalcóolicos da polpa e da casca do tucumã em três bactérias gram- positivas (Enterococcus faecalis, Bacillus cereus, Listeria monocytogenes) e efeito antifúngico contra Candida albicans. A contribuição antimicrobiana dos principais compostos químicos (quercetina, rutina, β- caroteno, ácidos clorogênicos, cafeico e gálico) encontrados em extratos do tucumã também foi investigada, apresentando um efeito inibidor dependendo principalmente do microrganismo, em bactérias pela quercetina e no fungo pela rutina. Análise da cinética da liberação de DNA no meio extracelular por fluorescência utilizando o ensaio de DNA Pico Green® e produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) mostrou efeito inibitorio do tucumã no potencial desequilíbrio oxidativo. Em B. cereus e C. albicans este efeito foi claro após as 24 horas onde os níveis de ROS foram maiores quando comparados ao grupo controle negativo. Em conclusão, os extratos de tucumã apresentam atividade inibitória de quatro microrganismos que possuem grandes problemas de resistência aos fármacos, e o possível mecanismo de ação deste fruto amazônico está relacionada com o desequilíbrio REDOX.

Orientadores: Jacqueline Mendonça Lopes de Faria, José Butori Lopes de Faria / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-26T10:54:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Duarte_DiegoAndreazzi_D.pdf: 28811769 bytes, checksum: 726e2f631efd3a14fedaf1f8148784aa (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A retinopatia diabética (RD) é uma doença devastadora que está entre as maiores causas de cegueira entre pessoas na idade adulta em todo o mundo. Considerada multifatorial e progressiva, a RD afeta células neurais e gliais, e também elementos vasculares da retina. Sabe-se que diversas vias estão envolvidas na patogênese da RD, no entanto, os mecanismos que levam a exacerbação da inflamação e morte de células gliais/neurais o que caracteriza a neurodegeneração da retina, ainda permanecem desconhecidos. Diante disso, a redução desses fatores tem sido extensivamente estudada como alvo no combate a RD. As Sirtuínas, histonas desacetilases dependentes de nicotinamida adenina dinucleotídeo (NAD+), atuam em resposta a vários estresses e atualmente tem sido relacionadas às importantes funções moleculares na regulação de várias doenças. Considerado um redox sensível, a SIRT1 pode estar reduzida em condição de doença, o que agravar ainda mais a situação patológica. No entanto, não se sabe ao certo o mecanismo de modulação e/ou atuação da SIRT1 frete às doenças neurodegenerativas, tais como a RD. No Artigo I, foram avaliados os possíveis efeitos protetores do cacau rico em polifenóis na retina diabética. As células Müller da retina (rMC-1) foram expostos por 24h à glicose normal (NG), alta glicose (HG) ou peróxido de hidrogênio (H2O2) e submetidas ao tratamento com cacau na presença ou não de um inibidor da SIRT1 ou siRNA. O estudo animal foi desenvolvido em ratos experimentalmente diabéticos induzidos por estreptozotocina e randomizado para receber tratamentos com cacau com baixa, intermediária, ou elevada dose de polifenol (0,12 mg; 2,9 mg; 22,9 mg/kg/dia) por gavagem durante 16 semanas. As células expostas a H2O2 ou HG apresentaram aumento de proteína acídica fibrilar glial (GFAP) e acetil-RelA/p65 e diminuição da atividade/expressão da SIRT1. Estes efeitos foram anulados pelo cacau, que diminuiu a produção de espécies reativas de oxigênio e reduziu a ativação da poli(ADP-ribose) polimerase-1 (PARP-1); melhorou os níveis intracelulares de NAD+ e consequentemente aumentou da atividade da SIRT1. As retinas dos ratos diabéticos exibiram os primeiros marcadores de retinopatia acompanhada pela eletrorretinografia prejudicada. A presença de diabetes levou a ativação da PARP-1 e diminuição dos níveis de NAD+, resultando em comprometimento da SIRT1. O aumento na acetilação do RelA/p65 levou na hiperexpressão do GFAP. A administração oral de cacau polifenol restaurou as alterações acima referidas. Este estudo revelou que o cacau enriquecido com polifenóis teve efeito protetor da retina diabética restabelecendo a via da SIRT-1. No Artigo II, foi investigado o possível efeito terapêutico de células derivadas de animais saudáveis (Dock7 m +/+ Leprdb db/m) e diabéticos (BKS.Cg-Dock7 m +/+ Leprdb/J, db/db) na retinopatia diabética (RD). Os camundongos db/db (espontaneamente diabéticos) com 8 semanas de idade foram randomizados para receber uma única injeção intravenosa de PBS ou células early outgrowth (EOCs) de doadores db/m ou db/db. Quatro semanas mais tarde, os animais foram sacrificados e os olhos enucleados. Para estudo in vitro, o meio condicionado das EOCs (EOC-CM) foi gerado a partir do cultivo de EOCs de animais db/m e db/db. As células rMC-1 foram expostas por 24h a NG ou HG e submetidas ao tratamento com db/m ou db/db EOC-CM, em presença ou não de um inibidor farmacológico (EX527) ou gênico (siRNA) da SIRT1. Nos ratos diabéticos, houve um aumento de marcadores de RD e do dano oxidativo, acompanhado por uma diminuição da proteína SIRT1 e seguido pelo aumento da acetilação da lisina-310 do complexo p65-NFkB. A terapia celular com EOCs reduziu significativamente todas as alterações mencionadas acima. As rMC-1 expostas a HG apresentaram aumento da expressão de GFAP, fator de crescimento do endotélio vascular e Nox4, acompanhado pelo aumento dos níveis de espécies reativas de oxigênio e acetil-lisina-310-p65-NFkB. Além disso, a expressão/atividade da SIRT1 foram reduzidas em ambiente diabético. O tratamento com EOC-CM impediu todas estas alterações. Este estudo demonstra que a capacidade parácrina das EOCs, na secreção de fatores, é eficaz no restabelecimento da via de SIRT1 retina, e assim, proteger a retina dos insultos diabéticos. Em resumo, a presente tese fornece evidências que tanto a administração oral do cacau enriquecido com polifenóis quanto à terapia celular com EOCs, conferem neuroproteção da retina aos insultos do diabetes. Portanto, intervenções que modulem a atividade das sirtuínas são promissoras no tratamento farmacológico da retinopatia diabética / Abstract: The diabetic retinopathy (RD) is a devastating disease and the principal cause of blindness among people in adulthood worldwide. The RD is considered a multifactorial and progressive disease, affecting neuronal and glial cells, and also vascular elements of the retina. It is known that several pathways are involved in the pathogenesis of RD, however, the mechanisms that lead to exacerbation of inflammation and death of glial/neuronal cell, characterizing retinal neurodegeneration, remain unknown. Therefore, the reduction of these factors have been extensively studied as a therapeutic target against RD. Sirtuin 1 (SIRT1), a family of histone deacetylase enzyme, acts in response to various stresses and, currently, has been related to important molecular functions in the regulation of various diseases. Considered a redox-sensitive, SIRT1 may be reduced under disease condition, whereby aggravate the pathological situation. However, is not known the mechanism of modulation/activity of SIRT1 in neurodegenerative diseases, such as RD. In the article I, were studies the possible protective effects of cocoa in the diabetic retina were assessed. rMCs exposed to NG, HG or H2O2 were submitted to cocoa treatment in the presence or absence of SIRT-1 inhibitor and siRNA. The experimental animal study was conducted in streptozotocin-induced diabetic rats and randomized to receive low, intermediate, or high polyphenol cocoa treatments via daily gavage for 16 weeks (i.e., 0.12 mg/kg/day, 2.9 mg/kg/day, or 22.9 mg/kg/day of polyphenols). The rMCs exposed to HG or H2O2 exhibited increased GFAP and acetyl-RelA/p65 and decreased SIRT1 activity/expression. These effects were cancelled out by cocoa, which decreased ROS production and PARP-1 activity, augmented the intracellular pool of NAD+, and improved SIRT1 activity. The rat diabetic retinas displayed the early markers of retinopathy accompanied by markedly impaired electroretinogram. The presence of diabetes activated PARP-1 and lowered NAD+ levels, resulting in SIRT1 impairment. This augmented acetyl RelA/p65 had the effect of upregulated GFAP. Oral administration of polyphenol cocoa restored the above alterations in a dose-dependent manner. This study reveals that cocoa enriched with polyphenol improves the retinal SIRT-1 pathway, thereby protecting the retina from diabetic milieu insult. In the article II, were investigated the possible therapeutic effect of cells derived from control (db/m) and spontaneously diabetic (db/db) mice on diabetic retinopathy. The db/db mice with 8 weeks of age were randomized to receive a unique intravenous injection of PBS or 0,5x105 db/m EOCs or 0,5x105 db/db EOCs. Four weeks later, the animals were euthanized and the eyes enucleated. For in vitro study, EOC-CM was generated from db/m and db/db EOCs cultures. rMCs were exposed for 24h to NG or HG combined or not with db/m or db/db EOC-CMs. In diabetic rats, there was an increase of DR and oxidative damage markers, accompanied by decrease in SIRT1 protein followed by lysine-310-p65-NF?B acetylation. The treatment with cells from db/m significantly reduced all the above-mentioned, but interestingly the treatment with cells from db/db mice fully restored the above alterations to normal levels. rMCs exposed to HG displayed GFAP and VEGF expression up regulated, accompanied by increase in Nox4 expression and ROS levels, and acetyl-lysine-310-p65-NF?B. SIRT1 protein expression and activity were markedly reduced in diabetic milieu conditions. The treatment with both EOC-CMs prevented all these abnormalities, but db/db EOC-CM fully restored to NG conditions. This study demonstrates that endocrine capacity of EOCs is effective in improving retinal SIRT1 pathway thus protecting the retina from diabetic milieu insult. In summary, compelling novel evidence is provided herein that either through oral administration of polyphenol enriched cocoa or cell therapy with EOCs, conferred retinal neuroprotection against diabetic insults in animal models. The identification of SIRT-1 as a potential therapeutic target in the treatment of diabetic retinopathy may provide new perspective in the pharmacological treatment of this diabetic complication / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The interruption of the blood supply causes a change in the cellular redox status, promotes oxidative stress, tissue damage and changes in heart function. Therefore, antioxidant compounds, such as usnic acid, can prevent these changes, since they are able to re-establish cellular redox status and preserve the tissue functions. The goal of this study was to determine whether pretreatment with inclusion complex usnic acid (UA) / β-cyclodextrin (βCD) promotes cardioprotection after ischemia and reperfusion. Initially, the characterization of inclusion complex between the AU and the βCD was performed through thermogravimetry / derivative thermogravimetry (TG / DTG), differential scanning calorimetry (DSC), spectrophotometry in the infrared (FTIR) and scanning electron microscopy (MEV). After characterization, was initiated evaluating the cardioprotective effects of the inclusion complex AU / βCD. For this, Wistar rats (250-300 g) divided into two groups: the group pretreated with 50 mg / kg / day AU / βCD and pretreated with βCD group. After the pretreatment, the heart of the animal was removed to be mounted in an isolated organ perfusion system for induction of ischemia and reperfusion and were evaluated the pressure developed in the left ventricle (LVDP), heart rate (HR) and arrhythmia severity index (ASI). Also was determined in liver and heart the amount of lactate dehydrogenase (LDH) released, the formation of malondialdehyde (MDA), the activity of superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT). Furthermore was verified the amount of thiol groups. The results of the physico-chemical characterization showed that UA was complexed in the cavity of βCD and may be seen in the TG weight loss in the second step, where the inclusion complex showed Δm = 19.2% while the physical mixture, Δm = 16.2%. Furthermore, it was demonstrated by SEM that the physical mixture has not interacted with βCD while the inclusion complex underwent shape change. The FTIR spectra indicated the presence of the AU in the inclusion complex in a higher proportion, in turn, the physical mixture was observed in the presence of AU lesser extent. When evaluating the cardioprotective effects of the inclusion complex AU / βCD, it was found that the pretreatment preserved LVDP (AU: 89.9% vs. 6.3 + βCD: 53.9 + 8.6%, p < 0 05) reduced the scores obtained in ASI (AU: 2.5 + 0.5 ua vs. βCD: 11.00 + 0.57 ua; p < 0.0001) and did not change the FC (AU / βCD: 78 5 + 8.6% vs βCD: 79.6 + 9.2%, p > 0.05). In biochemical assays, pretreatment reduced the amount of LDH released (AU: 0.063 + 0.026 U / L vs βCD: 0.224 + 0.036 U / L, p < 0.05) reduced the formation of MDA (AU: 5, 87 + 0.57 nmol MDA / g vs βCD: 13.02 + 1.04 nmol MDA / g, p < 0.0001), promoted the SOD activity (AU: 0.086 + 0.013 U SOD / mg protein vs. βCD: 0,050 + 0,004 U SOD / mg protein, p < 0.05) and CAT (AU: 0.054 + 0.006 ΔE / min / mg protein vs. βCD: 0.023 + 0.002 ΔE / min / mg protein; p < 0.001) and increased presence of thiol groups (AU: 97.83 + 4.23 mol / mg protein vs. βCD: 54.31 + 3.28 mol / mg protein, p < 0.0001 ). Moreover, to investigate the toxicity was not observed change in baseline levels of LDH (AU: 0.068 + 0.021 U / L vs βCD: 0.070 + 0,023U / L; p > 0.05) and MDA (AU: 8.59 + 0.27 nmol MDA / g vs βCD: 8.43 + 0.21 nmol MDA / g, p > 0.05) nor change in the SOD activity (AU: 0,025 + 0,001 U SOD / mg protein vs. βCD 0.026 + 0.001 U SOD / mg protein, p > 0.05), or CAT (AU: 0.020 + 0.004 ΔE / min / mg protein vs. βCD: 0.015 + 0.002 ΔE / min / mg protein, p > 0.05) in the liver by promoting increase of thiol groups only (AU: 245.4 + 15.6 mmol / mg protein vs. βCD: 181.8 + 14.3 mmol / mg protein , p < 0.05). Thus, it was found that the pretreatment with the inclusion complex preserved contractile function, heart protection promoted and showed no signs of toxicity. / A interrupção do suprimento sanguíneo causa alteração do status redox celular, promove estresse oxidativo, danos teciduais e alteração da função cardíaca. Diante disso, compostos antioxidantes, como o ácido úsnico, podem prevenir essas alterações, uma vez que são capazes de reestabelecer o status redox celular e de preservar as funções teciduais. Assim, o objetivo desse estudo foi verificar se o pré-tratamento com complexo de inclusão ácido úsnico (AU)/β-ciclodextrina (βCD) promove a cardioproteção após a lesão por isquemia e reperfusão. Inicialmente, foi realizada a caracterização do complexo de inclusão entre o AU e a βCD através das técnicas de termogravimetria/termogravimetria derivada (TG/DTG), calorimetria exploratória diferencial (DSC), espectrofotometria na região do infravermelho (FTIR) e microscopia eletrônica de varredura (MEV). Após a caracterização e confirmação da formação de complexo de inclusão entre o AU e a βCD, foi iniciado a avaliação dos efeitos cardioprotetores do complexo de inclusão AU/βCD. Para tanto, foram utilizados ratos wistar (250-300 g) distribuídos em dois grupos: o grupo pré-tratado com 50 mg/kg/dia de AU/βCD e o grupo pré-tratado com βCD. Após o pré-tratamento, o coração dos animais foi removido para ser montado em sistema de perfusão de órgão isolado para a indução da lesão por isquemia e reperfusão, onde foram avaliados a pressão desenvolvida no ventrículo esquerdo (PDVE), frequência cardíaca (FC) e o índice de severidade de arritmia (ASI). Em seguida, foi determinado em fígado e coração a quantidade de lactato desidrogenase (LDH) liberada, a formação de malondialdeído (MDA), a atividade das enzimas Superóxido Dismutase (SOD) e Catalase (CAT) e verificado a quantidade de grupamentos tióis. Os resultados da caracterização físico-química demonstraram que o AU foi complexado a cavidade da βCD, podendo ser visto na TG na segunda etapa de perda de massa, onde o complexo de inclusão apresentou Δm=19,2% enquanto a mistura física, Δm=16,2%. Além disso, foi demonstrado pela MEV que a mistura física não interagiu com a βCD ao passo que o complexo de inclusão sofreu alteração de forma. Os espectros de FTIR indicaram a presença do AU no complexo de inclusão em maior proporção, por sua vez, na mistura física foi observada a presença do AU em menor proporção. Ao avaliar os efeitos cardioprotetores do complexo de inclusão AU/βCD, verificou-se que o prétratamento preservou a PDVE (AU: 89,9 + 6,3% vs βCD: 53,9 + 8,6%; p < 0,05), reduziu os escores obtidos no ASI (AU: 2,5 + 0,5 u.a. vs βCD: 11,00 + 0,57 u.a.; p < 0,0001) e não alterou a FC (AU/βCD: 78,5 + 8,6% vs βCD: 79,6 + 9,2%, p > 0,05). Nos ensaios bioquímicos, o pré-tratamento reduziu a quantidade de LDH liberada (AU: 0,063 + 0,026 U/L vs βCD: 0,224 + 0,036 U/L; p < 0,05), diminuiu a formação de MDA (AU: 5,87 + 0,57 nmol de MDA/g de tecido vs βCD: 13,02 + 1,04 nmol de MDA/g de tecido, p < 0,0001), promoveu a atividade da SOD (AU: 0,086 + 0,013 U SOD/mg de proteína vs βCD: 0,050 + 0,004 U SOD/mg de proteína; p < 0,05) e da CAT (AU: 0,054 + 0,006 ΔE/min/mg de proteína vs βCD: 0,023 + 0,002 ΔE/min/mg de proteína; p < 0,001) e aumentou a presença de grupos tióis (AU: 97,83 + 4,23 μmol/mg de proteína vs βCD: 54,31 + 3,28 μmol/mg de proteína; p < 0,0001). Ademais, ao investigar a toxicidade, não foi evidenciada alteração dos níveis basais de LDH (AU: 0,068 + 0,021 U/L vs βCD:0,070 + 0,023U/L; p > 0,05) e de MDA (AU: 8,59 + 0,27 nmol de MDA/g de tecido vs βCD: 8,43 + 0,21 nmol de MDA/g de tecido, p > 0,05) , nem alteração da atividade da SOD (AU: 0,025 + 0,001 U SOD/ mg de proteína vs βCD: 0,026 + 0,001 U SOD/mg de proteína, p > 0,05) e nem da CAT (AU: 0,020 + 0,004 ΔE/min/mg de proteína vs βCD: 0,015 + 0,002 ΔE/min/mg de proteína; p > 0,05) no tecido hepático, promovendo apenas aumento de grupamentos tióis (AU: 245,4 + 15,6 μmol/mg de proteína vs βCD: 181,8 + 14,3 μmol/mg de proteína, p < 0,05). Assim, verificou-se que o pré-tratamento com o complexo de inclusão preservou a função contrátil, promoveu cardioproteção e não mostrou sinais de toxicidade.

Diversos estudos têm demonstrado que os danos causados pela exposição da pele à radiação ultravioleta (RUV) são relacionados aos fotodanos ao DNA, geração de espécies reativas de oxigênio e ativação de mediadores do processo inflamatório. Há, portanto, um crescente interesse pelo uso de antioxidantes com potencial fotoquimiopreventivo, como o extrato de maçã e a rutina. O modelo mais utilizado para avaliação de agentes fotoquimiovreventivos é a exposição de camundongos sem pelos à RUV. Porém, os esforços para diminuir ou mesmo evitar a utilização de animais em ensaios científicos tem levado a busca por métodos alternativos à experimentação animal. Na primeira etapa desse trabalho visou-se a otimização de parâmetros relativos ao processo de extração do pó da maçã, bem como a caracterização do extrato obtido e da rutina. Assim, as condições de extração da maçã otimizadas foram tempo de extração de 22 h, teor de etanol no solvente de 60 % (p/p) e proporção solvente:planta de 18 (p/p). A concentração dos ativos presentes na maçã levou ao extrato enriquecido com polifenóis da maçã (EEPM), que apresentou elevada atividade antioxidante in vitro e teor de rutina de 6,1 ± 0.3 ?g/g de extrato. Ambos os ativos apresentaram baixa ou nenhuma toxicidade contra os fibroblastos MRC5, bem como protegeram os fibroblatos contra a morte induzida pela RUV e inibiram a formação de peróxidos lipídicos gerados pelas células irradiadas no tratamento com 4000 e 100 ?g/mL de EEPM e rutina, respectivamente. Na segunda etapa desse trabalho visou-se a avaliação do potencial fotoquimiopreventivo do EEPM e da rutina adicionados a uma formulação tópica em modelos de biópsia de pele humana e pele humana reconstruída in vitro e de camundongo sem pelos in vivo. O EEPM (1,25 %) e a rutina (0,75 %) em formulação foram avaliados quanto à retenção cutânea in vitro utilizando célula de difusão vertical de Franz e, embora não tenha sido possível detectar compostos do EEPM, foi demonstrado que 2,04 ± 0,19 ?g/cm2 da rutina ficou retida na biópsia de pele humana. Na avaliação da eficácia fotoquimiopreventiva em modelos de pele humana in vitro o EEPM e a rutina adicionados em formulação foram capazes de evitar/diminuir a formação de sunburn cells, a indução de caspase-3, dímeros de ciclobutanodipirimidina, metaloproteinases e peroxidação lipídica em pele exposta à RUV. Quanto a atividade funcional in vivo, o extrato enriquecido com polifenóis da maçã apresentou leve efeito inibidor do infiltrado inflamatório induzido pela RUV, enquanto que tanto a rutina como o extrato inibiram a depleção dos níveis de GSH endógeno, o que sugere uma potente atividade fotoquimiopreventiva para estes princípios ativos. Estes resultados são promissores e apontam para o uso do EEPM e da rutina na prevenção/tratamento dos danos induzidos pela RUV na pele. / Several studies have shown that the ultraviolet radiation (UVR) - induced skin damage are related to DNA photolesions, generation of reactive oxygen species and activation of inflammatory mediators. Therefore, there is an increasing interest in the use of antioxidants with photochemoprotective potential, such as apple extract and rutin. The most used model for evaluation of photochemoprotective agents is the exposure of hairless mice to UVR. However, efforts to reduce or even avoid the use of animals in scientific trials has pursued for alternative methods to replace/reduce animal testing. The first step of this work aimed to optimize parameters for the extraction of apple powder and the characterization of the obtained extract and rutin. Thus, the optimized apple extraction conditions were extraction time of 22 h, ethanol content of 60% (w/w) and plant:solvent ratio of 18 (w/w). The apple extract concentration led to an enriched apple polyphenols extract (EEPM), which showed strong in vitro antioxidant activity and rutin content of 6.1 ± 0.3 ?g / g. The actives showed low or no toxicity against MRC5 fibroblasts, protected these cells against UVR - induced death and inhibited lipid peroxidation in irradiated cells (treatment with 4000 and 100 ?g/mL of EEPM and rutin, respectively). The second step of this study aimed to evaluate the photochemoprotective potential of EEPM and rutin added in a topical formulation and assayed in in vitro models of human skin biopsy and human reconstructed skin and in vivo hairless mouse. The EEPM (1.25%) and rutin (0.75%) formulations were evaluated for skin retention in vitro using the Franz diffusion cell and, although it was not possible to detect compounds of EEPM, rutin was retained in the human skin biopsy (2.04 ± 0.19 mg/cm2). As regard the The photochemoprotective efficacy in in vitro models of human skin, EEPM and rutin formulations were able to prevent/reduce the formation of sunburn cells, induction of caspase-3, cyclobutane pyrimidine dimers, matrix metalloproteinases and lipid peroxidation in skin exposed to UVR. As for in vivo functional activity, EEPM showed a slight inhibitory effect of UVR-induced inflammatory infiltrate, while both EEPM and rutin completely inhibited endogenous GSH levels depletion. These results are promising and suggest the use of EEPM and rutin in the prevention/treatment of ultraviolet radiationinduced damage to the skin.

Os extratos totais, assim como os compostos fenólicos isolados de diferentes partes de Anacardium occidentale conhecido popularmente no Brasil como cajueiro mostraram atividades antiúlcera e antibacteriana. O objetivo deste trabalho foi a verificação destas atividades nas folhas, estudo farmacobotânico, químico e toxicológico. Para a analise anatômica foram utilizados cortes do terço mediano inferior da lâmina fotiar. Nesta, as epidermes em vista frontal apresentam cutícula estriada, na face abaxial, a epiderme é constituída de células de formato poligonal, com paredes bem justapostas. Na face adaxial, as células são de paredes espessas, ligeiramente onduladas. A mesma é constituída de estômatos de tipo anomocítico e de tricomas glandulares de forma ovóide. O mesófilo é constituído de duas camadas de parênquima paliçádico, espessas, de forma quase regular e de parênquima lacunoso com células de forma irregular, envolvendo os feixes vasculares de nervuras secundarias. Extensões de fibras são observadas no mesófilo. A nervura mediana possui um colênquima desenvolvido e ductos são encontrados no floema assim como no parênquima medular. Drusas são encontradas no parênquima lacunoso assim como no parênquima fundamental e no colênquima. A partir da triagem fitoquímica, da cromatografia em camada delgada, cromatografia liquida de alta eficiência e cromatografia liquida acoplada a espectrometria de massa, verificou-se a presença nas folhas de cajueiro de compostos polifenólicos, particularmente de heterosídeos flavonóidicos. As estruturas de flavonóide que parecem ser mais evidentes, de acordo com a cromatografia liquida acoplada a massa, são principalmente os heterosídeos da quercetina. O extrato etanol 70% liofilizado das folhas do cajueiro foi submetido ao modelo agudo da úlcera gástrica em ratos e a ensaio antibacteriano, ensaiando as linhagens de Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escheríchía coli ATCC 35218 e ATCC 25922, Pseudomonas aerugínosa ATCC 27853 e de Campylobacter coli. Na úlcera aguda, a área relativa de lesão ulcerativa foi diminuída de 98% na dose 400mg/kg, em relação ao controle. A partir de um estudo de doses crescentes sobre a inibição de úlcera, a DE50 foi calculada como 150 mg/kg e as doses de extrato maiores ou iguais a 100 mg/kg exibiram uma inibição de lesão ulcerativa melhor que o lansoprazol 30mg. A fração metanólica, que inibiu as ulcerações de 88,20%, deve conter alguns dos princípios ativos da atividade antiúlcera. Quanto ao teste antimicrobiano, foram obtidas concentrações inibitória mínima e bactericida mínima, iguais a 320 &#181;g/mL, particularmente com a linhagem Staphylococcus aureus, a partir do extrato bruto e da sua fração rica em flavonóides. A partir de ensaio de toxicidade aguda em camundongos e ratos, a DL50 do extrato bruto foi considerada superior a 2000 mg/kg. Foi feito um estudo de toxicidade de administração reiterada em 30 e 90 dias. Baseados em analises bioquímicas para avaliação da função renal e da função hepato-biliar, os parâmetros uréia, creatinina, transaminases, proteína total, albumina, colesterol e cálcio tendem a comprovar que o produto é bem tolerado pelo organismo dos ratos. Este fato é também confirmado pelo estudo hematológico e pela histopatologia, não ocorrendo alterações, após administração subaguda do extrato em ratos. O potencial mutagênico foi avaliado através do teste de Ames e do teste do micronúcleo de medula óssea em camundongo. Foi obtido indício de indução de \"frameshift\" e substituição de pares de bases. Na dose de 2000mg/kg, o extrato de cajueiro parece induzir danos nos cromossomos porém, o fenômeno parece ser extremamente inferior (p<0,001) ao efeito clastogênico induzido pela ciclofosfamida, utilizada como agente mutagênico de referência. / Crude extracts as well as phenolics isolated from the bark or the fruit of Anacardium occidentale popularly known as cajueiro in Brazil, showed antiulcer and antibacterial effects. The aim of this work was to verify those effects in the leaf, botanical, chemical and toxicological studies. Ultrastructure of the leaf was carried on. Cross-sections from the third inferior part of the leaf blade were used. Cashew leaf contains uniseriate epidermis with a sub-eperdimic layer, anomocytic stomata and glandular ovoid trichomes on the inferior surface. The mesophyll exhibits two cell layers of palisadic parenchyma and a lacunose parenchyma containing vascular bundles of the secondary nervures. The median nervure contains a developed collenchyma. Several druses of calcium oxalate are present in the fundamental parenchyma, lacunose parenchyma and in the collenchyma. Resin ducts are also observed in the phloem as well as in the medullar parenchyma. Extensions of sclerenchymatous fibres are observed in the mesophyll. By phytochemical analyses using TLC, HPLC-DAD and positive ions LC-ESIMS, we verified the presence of polyphenols in cashew leaves particularly heterosids of flavonoids. From LC-ESI-MS, evident structures of flavonoids seemed to be heterosids of quercetin. Ethanol 70% extract of cashew leaves was used for antiulcer and antibacterial essays. With extract dose 400mg/kg, ulcer lesions induced by HCL/ethanol 60% in rats, decreased about 98%. By a dose-response effect study, ED50 was evaluated about 150 mg/kg. Extract doses higher than 100mg/kg showed potential of lesion inhibition superior to lansoprazol 30mg. Extract methanolic fraction that gave 88,20% of ulcer inhibition likely contains the principie active of the antiulcer effect. Using bacterial strains, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 35218 and ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 and a clinical isolate Campylobacter coli, for antibacterial essay, the ethanolic extract and one fraction rich in flavonoids were only active in S. aureus with MIC and MBC equal to 320 &#181;g/mL. Acute, 30-day and 90-day subacute toxicity studies were carried out. Crude extract DL50 was superior to 2000mg/kg. Based on biochemical analyses for the evaluation of renal and hepato-biliary functions, level of urea, creatinine, transaminases, total protein, albumin, bilirubin, cholesterol and calcium proved that the extract is biologically tolerated by rat organismo This result was also confirmed by studies in hematology and histopathology. Genotoxity was accessed by Ames test in Salmonella typhimurium strains TA97, TA98, TA100, TA102 and bone marrow micronucleus test in mice. The extract exhibited sign of frameshift and base pairs substitution. Extract dose 2000mglkg seemed to induce damage in the chromosomes however; the activity was extremely inferior to the c1astogenic effect induced by ciclophosphamide.

Made available in DSpace on 2015-04-17T14:49:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1623130 bytes, checksum: ccf5d30dde8e071e571fd76cece6358d (MD5) Previous issue date: 2009-09-04 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The objective of this study was to evaluate the presence of bioactive compounds and the antioxidant capacity of cut roses, aiming to evaluate the potential for being used as food. For this purpose, it was used thirteen genotypes of fresh roses petals subjected to analysis of coloration, pH, titratable acidity, soluble solids, soluble solids/ titratable acidity, total soluble sugars, reducing sugars, ascorbic acid, total pectin soluble pectin, bioactive compounds (flavonoids yellow, anthocyanins, carotenoids, total extractable polyphenols), total antioxidant activity (ABTS method) , chlorophyll, minerals (phosphorus, potassium, sodium, calcium, magnesium, copper, iron, manganese, zinc and sulfur), chemical composition (lipids, proteins, carbohydrates, fiber, ash, moisture). The results showed that the roses are low-acid vegetables, with a moderate level of soluble sugars (2,89g.100g-1) and reducing sugars (2,75g.100g-1), low levels of total and soluble pectin (0,07mg.100g-1 and 0,04mg.100g-1), good amount of ascorbic acid (70,47mg.100g-1), flavonoids yellow and anthocyanins reached values of 140,60mg.100g-1 and 356,77mg.100g-1, respectively. They have low levels of carotenoids, obtaining average 1.25mg.100g-1, high content of total extractable polyphenols (2550,03mg.100g-1), high antioxidant capacity (222,27μM trolox-1). The evaluation of the mineral contents reported that roses presents low contents of phosphorus (1,31mg.100g-1), potassium (18,77mg.100g-1), sodium (0,29mg.100g-1), calcium (2,07mg.100g-1), magnesium (2,12mg.100g-1) and sulfur (2,67mg.100g-1) and values that have considered copper (9,27mg.100g-1), iron (85,76mg.100g-1), manganese (22,06mg.100g-1) and zinc (35,20mg.100g-1). The descriptive statistics of the results was obtained by the use of software M-statc and Genes. Values quantified in this study were within the variations found in other plant foods commonly consumed. Thus, the roses have potential to be used for human feeding. / O objetivo deste trabalho foi avaliar a presença de compostos bioativos e a capacidade antioxidante de variedades de rosas de corte visando verificar suas potenciais utilizações para fim alimentício. Para tanto, foram estudadas treze genótipos de rosas in natura asnas quis foram realizadas análises de coloração, pH, acidez titulável, sólidos solúveis, relação sólidos solúveis/acidez titulável, açúcares solúveis totais, açúcares redutores, ácido ascórbico, pectina total, pectina solúvel, compostos bioativos (flavonóides amarelos, antocianinas totais, carotenóides totais, polifenóis extraíveis totais, atividade antioxidante total (método ABTS) e clorofila), minerais (fósforo, potássio, sódio, cálcio, magnésio, cobre, ferro, manganês, zinco e enxofre), composição química (lipídeos, proteínas, carboidratos, fibras, cinzas, umidade). Os resultados mostraram que as rosas são vegetais pouco ácidos, com razoável teor de açúcares solúveis totais (2,89g.100g-1) e açúcares redutores (2,75g.100g-1), baixos teores de pectina total e solúvel (0,07mg.100g-1 e 0,04mg.100g-1), boa quantidade de ácido ascórbico (70,47mg.100g-1), os flavonóides amarelos e as antocianinas totais alcançaram valores de 140,60mg.100g-1 e 356,77mg.100g-1, respectivamente. Possuem baixos níveis de carotenóides totais, obtendo valor médio 1,25mg.100g-1, elevado conteúdo de polifenóis extraíveis totais (2550,03mg/100g), alta capacidade antioxidante (222,27μM Trolox.g-1). A avaliação do conteúdo de, minerais reportou que as rosas apresentam baixos teores de fósforo (1,31mg.100g-1), potássio (18,77mg.100g-1), sódio (0,29mg.100g-1), cálcio (2,07mg.100g-1), magnésio (2,12mg.100g-1) e enxofre (2,67mg.100g-1) e, que possuem valores consideráveis de cobre (9,27mg.100g-1), ferro (85,76mg.100g-1), manganês (22,06mg.100g-1) e zinco (35,20mg.100g-1). A estatística descritiva dos resultados foi obtida pela utilização dos softwares M-Statc e Genes. Os valores quantificados no presente estudo mostraram-se dentro das variações encontradas em outros alimentos de origem vegetal consumidos comumente. Desta forma, as rosas apresentam potencial para ser inseridas na alimentação humana.

The Scrophulariaceae family is composed of some 25 genera and more than 1200 species. The genus Buddleja, widely distributed around the world, belongs to this family presently. Buddleja thyrsoides Lam. species, object of study in this work, is distributed in the southern of Brazil region and is popularly known by barbasco and cambarazinho-do-campo. Flowers and leaves decoction are used to treat bronchitis, asthma and cough. The first step of this was the morphoanatomical study of B. thyrsoides leaves aiming to established the identity of the species. The leaves present lanceolate-linear shape, straight adaxial face, serrata to subentire margin and little revolute close to the basis. The epidermis is uniseriate, with the epidermal cells of the adaxial face bigger than those of abaxial face, stomata and trichomes in abaxial face. The mesophyll is heterogeneous, bifacial and presents brachiblasts and crystals in druse form. The vascular system is of the open collateral type. Phytochemical screening showed alkaloids, flavonoids, cumarins, organic acids, antocyanic heterosides, saponins and volatile oils. The antioxidant activities, total phenolic contents, antimicrobial activities, antiplatelet action, acetylcholinesterase enzyme inhibition and toxicity of the crude extract (70% ethanol macerate) and dichloromethane, ethyl acetate and butanolic fractions of Buddleja thyrsoides were investigated. Total phenolic contents varied from 214.07 to 438.4 mg / g. The crude extract and fractions in order of increasing polarity exhibited scavenging activity with IC50 equal to 186.04, 137.70, 146.89, 165.71 μg/mL. A positive correlation between antioxidant activity and total phenolic contents was observed, where the ethyl acetate and dichloromethane fractions had the best results in both tests. The butanolic fraction was effective against S. cerevisiae (62.5 μg / mL for MIC and MFC) in the assessment of antimicrobial activity. The dichloromethane and ethyl acetate fractions were effective against S. aureus (250 and 500 μ g / mL for CIM and CBM), respectively. The crude extract and the fractions of B. thyrsoides did not shown toxicity against Artemia salina. The fractions (in order of increasing polarity) and crude extract showed antiplatelet action (42.35, 40.68, 43.57 and 41.52% respectively), whereas the AAS afforded 58.36% of inhibition. The crude extract inhibited in 22.77% the acetylcholinesterase enzyme after 24 hours. The major components of the essential oil were germacreno D (27.16%), 1,10-di - epi-cubenol (13.37%) and α - Cadinol (12.95%), biciclogermacreno (9.00%), δ - cadineno (8.59%) and cariofileno E (5.26%). / A família Scrophulariaceae é composta por cerca de 25 gêneros e mais de 1200 espécies. O gênero Buddleja, amplamente distribuído pelo mundo, atualmente, pertence a esta família. A espécie Buddleja thyrsoides Lam., objeto de estudo neste trabalho, encontra-se distribuída na região sul do Brasil e é conhecida popularmente por barbasco e cambarazinho-docampo. A decocção das flores e folhas é utilizada para bronquite, asma e tosse. Este trabalho objetiva em identificar morfoanatomicamente as folhas de B. thyrsoides, bem como analisar alguns parâmetros farmacológicos e biológicos para esta espécie. As folhas apresentam formato linear-lanceolado, face adaxial lisa, margem serreada até subinteira e pouco revoluta próxima à base. A epiderme é uniseriada, com as células epidérmicas da face adaxial maiores do que na face abaxial, estômatos e tricomas na face abaxial. O mesofilo é heterogêneo, bifacial e apresenta braquiblastos e cristais na forma de drusas. O sistema vascular é do tipo colateral aberto. Na análise fitoquímica foram detectados alcalóides, flavonóides, cumarinas, ácidos orgânicos, heterosídeos antociânicos, saponinas e óleos voláteis. O extrato bruto (de um macerado etanólico a 70 %) e frações diclorometano, acetato de etila e butanólica de Buddleja thyrsoides foram investigados quanto à atividade antioxidante, conteúdo de fenólicos totais, atividade antimicrobiana, ação antiagregante, inibição da enzima acetilcolinesterase e quanto à toxicidade. O conteúdo de fenólicos totais variou de 214,07 a 438,4 mg/g. O CI50 da atividade antioxidande para o extrato bruto e frações em ordem crescente de polaridade (186,04; 137,70; 146,89; 165,71 μg/mL). Foi observada uma correlação positiva entre a atividade antioxidante e o conteúdo de fenólicos totais, onde as frações acetato de etila e diclorometano apresentaram os melhores resultados em ambas análises. Na avaliação da atividade antimicrobiana, a fração butanólica foi efetiva contra S. cerevisae (62,5 μg/mL para CIM e CFM). As frações diclorometano e acetato de etila foram eficazes contra o S. aureus (250 e 500 μg/mL para CIM e CBM), respectivamente. O extrato bruto e as frações de B. thyrsoides não apresentaram toxicidade frente Artemia salina. As frações (em ordem crescente de polaridade) e extrato bruto mostraram ação antiagregante plaquetária (42,35; 40,68; 43,57 e 41,52 %, respectivamente), sendo que o AAS apresentou 58,36 % de inibição. O extrato bruto inibiu em 22,77 % a enzima acetilcolinesterase após 24 horas. Os componentes majoritários do óleo essencial são Germacreno D (27,16%), 1,10-di-epi-Cubenol (13,37 %) e α-Cadinol (12,95 %), Biciclogermacreno (9,00 %), δ-cadineno (8,59 % ) e Cariofileno E (5,26%).

Os extratos totais, assim como os compostos fenólicos isolados de diferentes partes de Anacardium occidentale conhecido popularmente no Brasil como cajueiro mostraram atividades antiúlcera e antibacteriana. O objetivo deste trabalho foi a verificação destas atividades nas folhas, estudo farmacobotânico, químico e toxicológico. Para a analise anatômica foram utilizados cortes do terço mediano inferior da lâmina fotiar. Nesta, as epidermes em vista frontal apresentam cutícula estriada, na face abaxial, a epiderme é constituída de células de formato poligonal, com paredes bem justapostas. Na face adaxial, as células são de paredes espessas, ligeiramente onduladas. A mesma é constituída de estômatos de tipo anomocítico e de tricomas glandulares de forma ovóide. O mesófilo é constituído de duas camadas de parênquima paliçádico, espessas, de forma quase regular e de parênquima lacunoso com células de forma irregular, envolvendo os feixes vasculares de nervuras secundarias. Extensões de fibras são observadas no mesófilo. A nervura mediana possui um colênquima desenvolvido e ductos são encontrados no floema assim como no parênquima medular. Drusas são encontradas no parênquima lacunoso assim como no parênquima fundamental e no colênquima. A partir da triagem fitoquímica, da cromatografia em camada delgada, cromatografia liquida de alta eficiência e cromatografia liquida acoplada a espectrometria de massa, verificou-se a presença nas folhas de cajueiro de compostos polifenólicos, particularmente de heterosídeos flavonóidicos. As estruturas de flavonóide que parecem ser mais evidentes, de acordo com a cromatografia liquida acoplada a massa, são principalmente os heterosídeos da quercetina. O extrato etanol 70% liofilizado das folhas do cajueiro foi submetido ao modelo agudo da úlcera gástrica em ratos e a ensaio antibacteriano, ensaiando as linhagens de Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escheríchía coli ATCC 35218 e ATCC 25922, Pseudomonas aerugínosa ATCC 27853 e de Campylobacter coli. Na úlcera aguda, a área relativa de lesão ulcerativa foi diminuída de 98% na dose 400mg/kg, em relação ao controle. A partir de um estudo de doses crescentes sobre a inibição de úlcera, a DE50 foi calculada como 150 mg/kg e as doses de extrato maiores ou iguais a 100 mg/kg exibiram uma inibição de lesão ulcerativa melhor que o lansoprazol 30mg. A fração metanólica, que inibiu as ulcerações de 88,20%, deve conter alguns dos princípios ativos da atividade antiúlcera. Quanto ao teste antimicrobiano, foram obtidas concentrações inibitória mínima e bactericida mínima, iguais a 320 &#181;g/mL, particularmente com a linhagem Staphylococcus aureus, a partir do extrato bruto e da sua fração rica em flavonóides. A partir de ensaio de toxicidade aguda em camundongos e ratos, a DL50 do extrato bruto foi considerada superior a 2000 mg/kg. Foi feito um estudo de toxicidade de administração reiterada em 30 e 90 dias. Baseados em analises bioquímicas para avaliação da função renal e da função hepato-biliar, os parâmetros uréia, creatinina, transaminases, proteína total, albumina, colesterol e cálcio tendem a comprovar que o produto é bem tolerado pelo organismo dos ratos. Este fato é também confirmado pelo estudo hematológico e pela histopatologia, não ocorrendo alterações, após administração subaguda do extrato em ratos. O potencial mutagênico foi avaliado através do teste de Ames e do teste do micronúcleo de medula óssea em camundongo. Foi obtido indício de indução de \"frameshift\" e substituição de pares de bases. Na dose de 2000mg/kg, o extrato de cajueiro parece induzir danos nos cromossomos porém, o fenômeno parece ser extremamente inferior (p<0,001) ao efeito clastogênico induzido pela ciclofosfamida, utilizada como agente mutagênico de referência. / Crude extracts as well as phenolics isolated from the bark or the fruit of Anacardium occidentale popularly known as cajueiro in Brazil, showed antiulcer and antibacterial effects. The aim of this work was to verify those effects in the leaf, botanical, chemical and toxicological studies. Ultrastructure of the leaf was carried on. Cross-sections from the third inferior part of the leaf blade were used. Cashew leaf contains uniseriate epidermis with a sub-eperdimic layer, anomocytic stomata and glandular ovoid trichomes on the inferior surface. The mesophyll exhibits two cell layers of palisadic parenchyma and a lacunose parenchyma containing vascular bundles of the secondary nervures. The median nervure contains a developed collenchyma. Several druses of calcium oxalate are present in the fundamental parenchyma, lacunose parenchyma and in the collenchyma. Resin ducts are also observed in the phloem as well as in the medullar parenchyma. Extensions of sclerenchymatous fibres are observed in the mesophyll. By phytochemical analyses using TLC, HPLC-DAD and positive ions LC-ESIMS, we verified the presence of polyphenols in cashew leaves particularly heterosids of flavonoids. From LC-ESI-MS, evident structures of flavonoids seemed to be heterosids of quercetin. Ethanol 70% extract of cashew leaves was used for antiulcer and antibacterial essays. With extract dose 400mg/kg, ulcer lesions induced by HCL/ethanol 60% in rats, decreased about 98%. By a dose-response effect study, ED50 was evaluated about 150 mg/kg. Extract doses higher than 100mg/kg showed potential of lesion inhibition superior to lansoprazol 30mg. Extract methanolic fraction that gave 88,20% of ulcer inhibition likely contains the principie active of the antiulcer effect. Using bacterial strains, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 35218 and ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 and a clinical isolate Campylobacter coli, for antibacterial essay, the ethanolic extract and one fraction rich in flavonoids were only active in S. aureus with MIC and MBC equal to 320 &#181;g/mL. Acute, 30-day and 90-day subacute toxicity studies were carried out. Crude extract DL50 was superior to 2000mg/kg. Based on biochemical analyses for the evaluation of renal and hepato-biliary functions, level of urea, creatinine, transaminases, total protein, albumin, bilirubin, cholesterol and calcium proved that the extract is biologically tolerated by rat organismo This result was also confirmed by studies in hematology and histopathology. Genotoxity was accessed by Ames test in Salmonella typhimurium strains TA97, TA98, TA100, TA102 and bone marrow micronucleus test in mice. The extract exhibited sign of frameshift and base pairs substitution. Extract dose 2000mglkg seemed to induce damage in the chromosomes however; the activity was extremely inferior to the c1astogenic effect induced by ciclophosphamide.