Resumo: A espécie Lavandula angustifolia Miller apresenta características medicinais e aromáticas e apresenta-se com importância econômica devido à produção de óleo essencial. O mesmo tem destaque em indústrias de perfumaria, cosmética, farmacêutica, alimentos e higiene pessoal, em razão da presença dos constituintes linalol e acetato de linalila. Assim este trabalho teve por objetivo desenvolver um protocolo de micropropagação para a propagação normal de mudas e caracterizar o óleo essencial de L. angustifolia cv. Provence Blue. Para o estabelecimento das culturas in vitro foram utilizados como explantes ápices caulinares, a partir de plantas matrizes mantidas em casa de vegetação. Dentre os meios de cultura testados, o meio LS foi o que apresentou melhor resposta no cultivo das brotações por não apresentar brotações com necrose apical. Hiperidricidade e necrose apical das brotações foram observadas durante a micropropagação, e o aumento de CaCl2 no meio de cultura, de 440 mg L-1 para 1.320 mg L-1, reduziu significativamente esses problemas. O aumento da concentração de CaCl2 no meio de cultura levou ao aumento de Ca2+ nas brotações, sendo este encontrado em maior concentração na base das brotações, seguido do terço médio e ápice. O enraizamento das brotações in vitro, após a fase de multiplicação, não apresentou bons resultados, apenas 47% das microestacas enraizaram em meio isento de regulador vegetal, porém o enraizamento ex vitro com o uso de ácido indolbutírico na concentração de 5,0 mM, aplicado via solução ou talco, foi satisfatório com alta porcentagem de enraizamento das microestacas (100%). A L. angustifolia cv. Provence Blue apresentou elevada taxa de sobrevivência (aproximadamente 82%) quando transferida para o ambiente ex vitro. As mudas obtidas a partir da micropropagação, após 180 dias de aclimatização em casa de vegetação, foram estabelecidas a campo na Estação Experimental da EPAGRI, em São Joaquim (SC). As inflorescências foram colhidas em janeiro de 2011, e o óleo essencial foi extraído por hidrodestilação. Os constituintes majoritários encontrados no óleo essencial foram linalol, acetato de linalila, 1,8-cineol, acetato de lavandulila, borneol, trans-cariofileno e trans-?-ocimeno. Conclui-se que a micropropagação de Langustifolia cv. Provence Blue, seguida do enraizamento ex vitro com simultânea aclimatização é uma técnica eficiente para a produção de mudas, as quais foram estabelecidas com sucesso no campo, obtendo-se altos teores de linalol.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-06-15Bitstream added on 2014-06-13T19:24:45Z : No. of bitstreams: 1 pereira_ga_dr_ilha.pdf: 676017 bytes, checksum: 076edefb20fc0b9ca3fe2971dd3db42e (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A evolução da bananicultura brasileira foi possível em virtude dos progressos obtidos no que se refere à disponibilidade de material genético diversificado, à disponibilidade de mudas sadias e de boa qualidade genética, às práticas culturais de manejo pré e pós-colheita, às técnicas fitossanitárias desenvolvidas, às técnicas de nutrição e de irrigação, e à melhoria do nível técnico e organizacional do bananicultor brasileiro. Métodos de propagação, como a micropropagação in vitro, vêm sendo desenvolvidos e aperfeiçoados, para elevar a taxa de multiplicação em curto espaço de tempo e melhorar a qualidade das mudas. O processo de micropropagação é realizado em fases, sendo estas a escolha da planta matriz, desinfestação do material, estabelecimento, multiplicação enraizamento e aclimatação das mudas. Objetivou-se com este trabalho estabelecer um protocolo de micropropagação de explantes de bananeira ‘Thap maeo’, envolvendo as etapas de desinfestação utilizando concentrações de cloro ativo e os antibióticos ampicilina sódica e cloranfenicol, multiplicação estudando concentraçoes de citocininas como o 6-Benzilaminopurina (BAP) e Cinetina e no enraizamento in vitro verificando concentrações de auxinas como o Ácido Indol Butírico (AIB) e o Ácido Naftaleno Acético (ANA). Concluiu-se que a concentração de 2% de cloro ativo proporcionou redução de 92% e 88% respectivamente para bactérias e fungos. Para os antibióticos ampicilina sódica e cloranfenicol a concentração de 20 mg L-1 reduziu em 70% de desinfestação de bactérias e fungos. Quando se utilizou os reguladores vegetais, BAP e cinetina, o maior numero de brotos obtido foi na concentração foi de 4mg L-1 conseguindo em média 3,8 brotos por explantes no 4o subcultivo. Para o enraizamento in vitro a concentração de 4,0 mg L-1 de AIB apresentou melhor resultado com 3,2 raizes por broto / The evolution of Brazilian banana was possible because of progress in relation to the availability of diverse genetic material, the availability of healthy seedlings and good quality genetics, cultural practices of management and post-harvest phytosanitary techniques developed techniques, nutrition and irrigation, and improving the technical and organizational bananicultor Brazil. Propagation methods, such as in vitro micropropagation, have been developed and improved to increase the multiplication rate in a short time and improve the quality of seedlings. The acclimatization process is performed in phases, these being the choice of the mother plant, disinfection equipment, establishment, multiplication, rooting and acclimatization of the seedlings. The objective of this study establish a protocol for micropropagation of banana explants 'Thap Maeo', involving the steps of disinfection using chlorine concentrations and antibiotic ampicillin sodium and chloramphenicol, multiplication studying concentrations of cytokinins like 6-Benzylaminopurine (BAP ) and Kinetin and in vitro rooting checking concentrations of auxin and Indole Butyric acid (IBA) and Naphthalene Acetic Acid (NAA). It was concluded that the 2% concentration provided a reduction of active chlorine of 92% and 88% respectively for bacteria and fungi. For the antibiotics sodium ampicillin and chloranphenicol concentration of 20 mg.L-1 reduced by 70% of disinfection of bacteria and fungi. When using the plant growth regulators, BAP and kinetin, the highest number of shoots was obtained on concentration was 4 mg L -1 achieving an average of 3,8 shoots per explant in the 4th subculture. For rooting in vitro concentration of 4.0 mg L-1 IBA showed the best result with 3,2 roots per shoot

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade em Agronomia e Veterinária, 2016. / Submitted by Camila Duarte (camiladias@bce.unb.br) on 2016-09-14T19:07:12Z No. of bitstreams: 1 2016_LuziaRenatadeOliveiraDias.pdf: 585188 bytes, checksum: c1d67f8ad9c30dc53f569fab1b6a16a0 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-10-24T11:06:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_LuziaRenatadeOliveiraDias.pdf: 585188 bytes, checksum: c1d67f8ad9c30dc53f569fab1b6a16a0 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-24T11:06:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_LuziaRenatadeOliveiraDias.pdf: 585188 bytes, checksum: c1d67f8ad9c30dc53f569fab1b6a16a0 (MD5) / A criopreservação de embriões produzidos in vitro (PIV) é afetada pelas altas concentrações de gotículas lipídicas que se acumulam no interior dos blastômeros. A remoção parcial de lipídios intracitoplasmáticos, por estímulo da lipólise química no citoplasma celular ou pela diminuição da captação e síntese de ácidos graxos pelas células, pode ser uma alternativa para melhorar a criopreservação desses embriões. Neste sentido, objetivou-se estimar o efeito de alguns agentes delipidantes, L-carnitina e o isômero trans-10 cis-12 do ácido linoleico conjugado (CLA), durante o cultivo na quantidade, qualidade e conteúdo lipídico de embriões bovinos produzidos in vitro. Foram utilizados 2.448 ovócitos de grau 1 e 2 obtidos de ovários de abatedouro, que foram maturados in vitro por 24h a 38,5ºC, 5% de CO2. Após a co-incubação dos complexos cumulus ovócitos (COC) com os espermatozoides (16-18 horas), os possíveis zigotos foram distribuídos em quatro tratamentos: T1) Controle (n=616): meio fluido de oviduto sintético (SOF), suplementado com 5% de soro fetal bovino (SFB); T2) L-carnitina (n=648): meio SOF suplementado com 5% de SFB, acrescido de 0,6 mg mL-1de L-carnitina; T3) CLA (n=627): meio SOF suplementado com 5% de SFB, acrescido de 100 μM de trans-10 cis-12 CLA; e T4) L-carnitina+CLA (n=597): meio SOF suplementado com 5% de SFB, acrescido de 0,6 mg mL-1de L-carnitina e 100 μM de trans-10 cis-12 CLA. As taxas de clivagem e blastocisto foram avaliadas no dia 2 e dia 7 de cultivo e, os blastocistos expandidos (Bx) foram armazenados para quantificação de lipídios utilizando o corante Sudan Black B. Os dados de produção de embriões foram analisados pelo teste Chi-quadrado (P<0,05) e os de quantificação de lipídios por análise de variância (ANOVA) (P<0,05). A taxa de clivagem foi semelhante (P>0,05) entre todos os tratamentos (T1=95±4,3; T2=95±3,5; T3=95±3,7 e T4=95±3,1). A taxa de blastocisto foi superior (P<0,05) no grupo controle do que nos demais tratamentos que não diferiram (P>0,05) entre si tanto no D6 (T1=19±2,7; T2=13±2,4; T3=14±2,6 e T4=13±2,6), quanto no D7 (T1=49±3,5; T2=39±3,0; T3=42±3,9 e T4=39±3,9). Não foi observada diferença entre os tratamentos (P>0,05) quanto à velocidade de desenvolvimento, sendo que em todos os grupos a maioria dos embriões de D7 encontravam-se no estágio de blastocisto expandido. Os embriões do T2 apresentaram menor quantidade de lipídios no citoplasma do que os de T1 (P=0,0138) e de T3 (P=0,0261), sendo que os do T4 foram semelhantes (P>0,05) aos demais tratamentos. Os resultados obtidos indicaram que a suplementação com agentes delipidantes não afeta a qualidade, mas afeta negativamente a produção de embriões. Entretanto, a presença de L-carnitina durante o cultivo in vitro (CIV) diminuiu a quantidade de lipídios sugerindo que sua utilização pode resultar em embriões com maior resistência a criopreservação. ________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cryopreservation of in vitro produced (IVP) embryosis affected by the high concentrations of lipid droplets that accumulate inside the blastomeres. Therefore, the partial removal of intracytoplasmic lipids by chemical lipolysis stimulation or by decreasing uptake or synthesis of fatty acids by cells can be an alternative to improve cryopreservation of IVP embryos. For that, this study aimed to evaluate the effect of some delipidant agents, L-carnitine and the trans-10 cis-12 isomer conjugated linoleic acid (CLA), during culture on the quantity, quality and lipid content of bovine embryos produced in vitro. A total of 2,448 oocytes graded 1 and 2, obtained from slaughterhouse ovaries were matured in vitro for 24 hours at 38.5 ° C, 5% CO2. After co-incubation (16-18 hours) of sperm and cumulus oocyte complex (COC), the presumptive zygotes were distributed into four treatments: T1) Control (n=616): sinthect oviduct fluid (SOF) medium supplemented with 5% bovine calf serum (FCS); T2) L-carnitine (n=648): SOF medium supplemented with 5% FCS plus 0.6 mg ml-1 of L-carnitine; T3) CLA (n=627): SOF medium supplemented with 5% FCS plus 100 uM trans-10 cis 12 CLA; and T4) L-carnitine + CLA (n=597): SOF medium supplemented with 5% FCS plus 0.6 mg ml-1 of L-carnitine and 100 uM of trans-10 cis-12 CLA. The cleavage and blastocyst rates were evaluated on day 2 and day 7 of culture, and expanded blastocysts (Bx) were stored for lipid quantification by Sudan Black B stain. Embryo production data were analyzed by Chi-square test (P<0.05) and lipids quantification by analysis of variance (ANOVA) (P<0.05). Cleavage rate was similar (P>0.05) among all treatments (T1=95±4.3; T2=95±3.5; T3=95±3.7 e T4=95±3.1). Blastocyst rate was higher (P<0.05) on the control group than the other treatments, wich were similar (P>0.05) among on D6 (T1=19 ± 2.7; T2=13±2.4; T3=14±2.6 and T4=13±2.6) and on D7 (T1=49±3.5; T2=39±3.0; T3=42±3.9 and T4=39±3.9). There was no difference between treatments (P>0.05) on the development speed, and for all treatments the majority of D7 embryos were already on expanded blastocyst stage. Embryos from T2 showed lower cytoplasmic lipids than those from T1 (P=0.0138) and T3 (P=0.0261), being T4 similar to all treatments. The results suggested that supplementation with delipidant agents had not affected quality but had negatively affected embryo production. However, the presence of L-carnitine during in vitro culture (CIV) decreased the amount of lipids, suggesting that its use can result in bovine IVP embryos more resistant to cryopreservation.

Orientador: Aparecida Conceição Boliani / Banca: Luiz de Souza Corrêa / Banca: Enes Furlani Junior / Banca: Fernando Alves de Azevedo / Banca: José Carlos Cavichioli / Resumo: A evolução da bananicultura brasileira foi possível em virtude dos progressos obtidos no que se refere à disponibilidade de material genético diversificado, à disponibilidade de mudas sadias e de boa qualidade genética, às práticas culturais de manejo pré e pós-colheita, às técnicas fitossanitárias desenvolvidas, às técnicas de nutrição e de irrigação, e à melhoria do nível técnico e organizacional do bananicultor brasileiro. Métodos de propagação, como a micropropagação in vitro, vêm sendo desenvolvidos e aperfeiçoados, para elevar a taxa de multiplicação em curto espaço de tempo e melhorar a qualidade das mudas. O processo de micropropagação é realizado em fases, sendo estas a escolha da planta matriz, desinfestação do material, estabelecimento, multiplicação enraizamento e aclimatação das mudas. Objetivou-se com este trabalho estabelecer um protocolo de micropropagação de explantes de bananeira 'Thap maeo', envolvendo as etapas de desinfestação utilizando concentrações de cloro ativo e os antibióticos ampicilina sódica e cloranfenicol, multiplicação estudando concentraçoes de citocininas como o 6-Benzilaminopurina (BAP) e Cinetina e no enraizamento in vitro verificando concentrações de auxinas como o Ácido Indol Butírico (AIB) e o Ácido Naftaleno Acético (ANA). Concluiu-se que a concentração de 2% de cloro ativo proporcionou redução de 92% e 88% respectivamente para bactérias e fungos. Para os antibióticos ampicilina sódica e cloranfenicol a concentração de 20 mg L-1 reduziu em 70% de desinfestação de bactérias e fungos. Quando se utilizou os reguladores vegetais, BAP e cinetina, o maior numero de brotos obtido foi na concentração foi de 4mg L-1 conseguindo em média 3,8 brotos por explantes no 4o subcultivo. Para o enraizamento in vitro a concentração de 4,0 mg L-1 de AIB apresentou melhor resultado com 3,2 raizes por broto / Abstract: The evolution of Brazilian banana was possible because of progress in relation to the availability of diverse genetic material, the availability of healthy seedlings and good quality genetics, cultural practices of management and post-harvest phytosanitary techniques developed techniques, nutrition and irrigation, and improving the technical and organizational bananicultor Brazil. Propagation methods, such as in vitro micropropagation, have been developed and improved to increase the multiplication rate in a short time and improve the quality of seedlings. The acclimatization process is performed in phases, these being the choice of the mother plant, disinfection equipment, establishment, multiplication, rooting and acclimatization of the seedlings. The objective of this study establish a protocol for micropropagation of banana explants 'Thap Maeo', involving the steps of disinfection using chlorine concentrations and antibiotic ampicillin sodium and chloramphenicol, multiplication studying concentrations of cytokinins like 6-Benzylaminopurine (BAP ) and Kinetin and in vitro rooting checking concentrations of auxin and Indole Butyric acid (IBA) and Naphthalene Acetic Acid (NAA). It was concluded that the 2% concentration provided a reduction of active chlorine of 92% and 88% respectively for bacteria and fungi. For the antibiotics sodium ampicillin and chloranphenicol concentration of 20 mg.L-1 reduced by 70% of disinfection of bacteria and fungi. When using the plant growth regulators, BAP and kinetin, the highest number of shoots was obtained on concentration was 4 mg L -1 achieving an average of 3,8 shoots per explant in the 4th subculture. For rooting in vitro concentration of 4.0 mg L-1 IBA showed the best result with 3,2 roots per shoot / Doutor

Orientadores: Clarice Weis Arns, Fernando Rosado Spilki / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-16T04:41:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_MarciaMercesAparecidaBianchidos_D.pdf: 3376725 bytes, checksum: 4e17791ec1d7e56265e067f2ce1f62bf (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: O Metapneumovirus aviário (aMPV) pertence à família Paramyxoviridae, subfamília Pneumovirinae, gênero Metapneumovirus. O vírus, relatado pela primeira vez no Brasil em 1995, é o agente etiológico da Rinotraqueíte em perus (TRT) e está associado também à Síndrome da Cabeça Inchada (SHS) em frangos e poedeiras comerciais. O presente estudo foi dividido em três partes. Na primeira foi avaliada a suscetibilidades de oito sistemas celulares para a propagação de amostras virais do aMPV subtipos A e B. As células chicken embryo related (CER), Vero e baby hamster kidney cells (BHK-21) demonstraram ser as mais apropriadas para a multiplicação de ambos os subtipos. Além disso, cultivo de anel de traquéia (TOC) e cultivo primário de embrião de galinha (CEF) foram permissíveis à infecção por aMPV após terem sido isolados e propagados em CER. As curvas da cinética viral foram realizadas nas três linhagens celulares e ambos os subtipos tiveram títulos mais altos em CER durante as primeiras 30 horas após a infecção. Não foram observadas diferenças significativas entre os títulos obtidos em células CER e Vero, demonstrando que as células CER são tão adequadas à propagação do aMPV quanto as células Vero. A segunda parte do trabalho consistiu em analisar a virulência de uma amostra de aMPV subtipo B após sofrer passagens seriadas em células CER. Cinco variantes provenientes das passagens em CER foram inoculadas em galinhas e a excreção viral foi analisada. Os resultados obtidos com as amostras de traquéia demonstram que a virulência do aMPV diminui gradualmente enquanto o título viral aumenta com o número de passagens. Em contrapartida, nas amostras de seio nasal foi observado aumento da carga viral, demonstrando que não houve diminuição no fitness viral para este órgão. As seqüências do gene G das amostras utilizadas para desafio foram obtidas, porém este gene parece não ser afetado pela propagação em células CER. Na terceira e última parte deste estudo, foi avaliada a proteção viral conferida por uma vacina comercial contra isolados brasileiros do aMPV subtipos A e B em frangos de corte. Para tanto, uma amostra de cada subtipo foi avaliada quanto à sua virulência. O isolado do subtipo B foi detectado em um período mais longo e em maiores quantidades quando comparado ao subtipo A. Os resultados da analise da proteção demonstram que algumas aves imunizadas receberam proteção viral completa contra o vírus virulento heterólogo. Porém, a mesma vacina forneceu proteção viral parcial quando as aves foram desafiadas com o vírus virulento homologo ao vacinal / Abstract: Avian metapneumovirus (aMPV) belongs to the Paramyxoviridae family, Pneumovirinae subfamily, within the genus Metapneumovirus. The virus, first described in Brazil in 1995, is responsible for an acute rhinotracheitis in turkeys (TRT) and is associated with swollen head syndrome in broiler chickens and layer hens. The present study is divided in three parts. In the first part, eight cell culture systems were evaluate for the propagation of aMPV subtypes A and B. The chicken embryo related (CER) cells, Vero and baby hamster kidney cells (BHK-21) cells were shown to be the most appropriate for propagation of both subtypes of aMPV. In addition, propagation of aMPV in chicken embryo fibroblasts (CEF) and tracheal organ culture (TOC) remained efficient after the primary isolation and several passages of viruses in the CER cell line. The growth curves were created using CER, Vero and BHK-21 cell lines. Compared with growth, both yielded higher titres in CER cells during the first 30 hours after infection, but no significant difference was observed in the results obtained from CER and Vero cells. This data show that CER cell are adequate for aMPV propagation, giving similar results to Vero cells. The second part of this study was conducted to analyze the virulence of an aMPV subtype B strain after serial passage in CER cells. To accomplish this, chickens were infected with 5 different variants derived from serial passage and the amount of viral shedding was determined. The results of tracheal samples showed that the virulence decreases gradually with passage, while in vitro viral titre increases. However, an increase in viral shedding was observed in sinusal samples, demonstrating no decrease in fitness for this organ. The G gene sequences of challenge samples were analyzed, however this gene appears to not be affected when aMPV is propagated in CER cells. Finally, the last part of this study aimed to examine a commercially available vaccine in broiler chickens in terms of it ability to provide virological protection against aMPV subtypes A and B. To accomplish this, the virulence of each virulent strain was analyzed. The results demonstrate that the subtype B virulent strain could be observed longer and in larger quantities compared to subtype A. A complete heterologous virological protection was provided by the subtype B vaccine; however, a lack of complete homologous virological protection was observed when chickens were challenged with the homologous subtype B strain / Doutorado / Microbiologia / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

O objetivo deste trabalho foi estudar a variabilidade genética, a biologia floral e a propagação in vitro de P. lindleyanum var. sargentianum em remanescente de Mata Atlântica no Estado da Bahia. Para o estudo da variabilidade genética foi uttilizada análise morfométrica das peças florais empregando-se métodos estatísticos univariados e multivariados. A biologia floral foi realizada por meio de observações em campo, e a propagação in vitro por meio de experimentos de germinação, multiplicação e crescimento. Houve diferença significativa entre as populações, para 11 caracteres florais, sendo as populações 2 e 3 as mais distantes geneticamente. A floração durou cerca de 2 meses e meio, e o seu pico ocorreu em setembro. As flores duraram em média 9,4 dias. A frutificação natural foi alta, assim como a frutificação após a polinização cruzada manual e autopolinização manual, e os frutos necessitaram de cerca de 75 dias para alcançarem a maturidade. Os principais visitantes florais foram os curculionídeos e as abelhas. O padrão de distribuição espacial foi agregado. Os meios de cultura compostos por 1/3 dos sais de MS na presença de luz e 1/4 dos sais de MS na ausência de luz, promoveram uma cultura rica em protocormos na germinação in vitro. A utilização de BAP na concentração de 1,0 mg.L-1 acrescido de 0,1 mg.L-1 de ANA resultou em maior número de brotos adventícios, e a concentração de 40 g.L-1 de sacarose foi a mais eficiente no crescimento in vitro das plantas. / O objetivo deste trabalho foi estudar a variabilidade genética, a biologia floral e a propagação in vitro de P. lindleyanum var. sargentianum em remanescente de Mata Atlântica no Estado da Bahia. Para o estudo da variabilidade genética foi uttilizada análise morfométrica das peças florais empregando-se métodos estatísticos univariados e multivariados. A biologia floral foi realizada por meio de observações em campo, e a propagação in vitro por meio de experimentos de germinação, multiplicação e crescimento. Houve diferença significativa entre as populações, para 11 caracteres florais, sendo as populações 2 e 3 as mais distantes geneticamente. A floração durou cerca de 2 meses e meio, e o seu pico ocorreu em setembro. As flores duraram em média 9,4 dias. A frutificação natural foi alta, assim como a frutificação após a polinização cruzada manual e autopolinização manual, e os frutos necessitaram de cerca de 75 dias para alcançarem a maturidade. Os principais visitantes florais foram os curculionídeos e as abelhas. O padrão de distribuição espacial foi agregado. Os meios de cultura compostos por 1/3 dos sais de MS na presença de luz e 1/4 dos sais de MS na ausência de luz, promoveram uma cultura rica em protocormos na germinação in vitro. A utilização de BAP na concentração de 1,0 mg.L-1 acrescido de 0,1 mg.L-1 de ANA resultou em maior número de brotos adventícios, e a concentração de 40 g.L-1 de sacarose foi a mais eficiente no crescimento in vitro das plantas. / Tese submetida ao Colegiado de Curso do Programa de Pós-Graduação em Ciências Agrárias da Universidade Federal do Recôncavo da Bahia, como requisito para obtenção do Grau de Doutor em Ciências Agrárias.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2018-06-04T18:24:37Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1088198 bytes, checksum: 9e47c35efa990076df569a8a2c0f1e94 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-04T18:24:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1088198 bytes, checksum: 9e47c35efa990076df569a8a2c0f1e94 (MD5) Previous issue date: 2018-02-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A importância das espécies do gênero Corymbia e de seus híbridos interespecíficos tem sido evidenciada nos programas de silvicultura, principalmente devido à sua qualidade da madeira e capacidade de adaptações as condições ambientais. Essas considerações têm estimulado o desenvolvimento de protocolos mais eficientes na propagação vegetativa necessária para a clonagem destas plantas. O presente estudo teve como objetivo geral a micropropagação de clones híbridos de Corymbia torelliana x C. citriodora e Corymbia citriodora x C. torelliana, e especificamente avaliar: i) o efeito da fonte de luz na introdução in vitro de clones híbridos de Corymbia torelliana x C. citriodora e Corymbia citriodora x C. torelliana; ii) o efeito da fonte de luz, regulador de crescimento BA e o número de subcultivos na fase de multiplicação in vitro de clones híbridos de Corymbia torelliana x C. citriodora e Corymbia citriodora x C. torelliana, e; iii) o efeito da fonte de luz, trocas gasosas e concentração de sacarose no alongamento in vitro e porcentagem de enraizamento e sobrevivência in vitro e ex vitro de microestacasde clones híbridos de Corymbia torelliana x C. citriodora e Corymbia citriodora x C. torelliana. O material experimental utilizado para obtenção dos explantes foi proveniente de minicepas de três clones híbridos de Corymbia torelliana x C. citriodora (TC01, TC02, TC03) e um de Corymbia citriodora x C. torelliana (CT01). Os experimentos in vitro foram conduzidos no Laboratório de Cultura de Tecidos II do Instituto de Biotecnologia Aplicada à Agropecuária (BIOAGRO), da Universidade Federal de Viçosa (UFV), localizado no município de Viçosa/MG, e o experimentos ex vitro foram conduzidos no Viveiro de Pesquisas do Departamento de Engenharia Florestal da UFV. Com base nos resultados obtidos, pode-se concluir que: i) o uso da fonte de luz LEDs correspondeu aos melhores resultados, para as características avaliadas na introdução in vitro; ii) o uso de LEDs vermelho azul obteve os melhores resultados, para os clones analisados na multiplicação in vitro; os explantes apresentaram resposta eficiente ao estimulo do regulador de crescimento BA, na concentração de 0,5 mg L- 1 para os clones Corymbia torelliana x C. Citriodora (TC01, TC02 e TC03) e 1,0 mg L- 1 para o clone Corymbia citriodora x C. torelliana (CT01), promovendo maior número de brotações; quanto ao número de subcultivos os melhores resultados foi diante do nono subcultivo, no qual conseguiu atingir maiores valores para o número de brotos por explante e vigor; iii) o uso de LEDs vermelho azul proporcionou a melhor resposta, para os clones analisados no alongamento e enraizamento in vitro; a concentração de 15g L -1 de sacarose apresentou os melhores resultados diante das variáveis analisadas, concentração essa que apresenta redução desse componente no meio nessas condições de cultivo; os explantes alongados (microestacas) apresentaram melhor resposta ao enraizamento e sobrevivência das plantas obtidas na condição in vitro. / The importance of the species belonging to the genus Corymbia and its interspecific hybrids has been highlighted in the silviculture programs, mainly due to its wood quality and adaptability to the environmental conditions. These considerations have stimulated the development of an efficient protocol for the vegetative propagation necessary for the cloning of these plants. The present study had the general objective of micropropagating hybrid clones of Corymbia torelliana x C. citriodora and Corymbia citriodora x C. torelliana, and specifically to evaluate: i) the effect of the light source on the in vitro introduction of hybrid clones of Corymbia torelliana x C. citriodora and Corymbia citriodora x C. torelliana; ii) the effect of the light source, growth regulator BA and the number of subcultures on the in vitro multiplication phase of hybrid clones of Corymbia torelliana x C. citriodora and Corymbia citriodora x C. torelliana, and; iii) the effect of light source, gas exchange and sucrose concentration on in vitro elongation and percentage of rooting and in vitro and ex vitro survival of micro-cuttings of hybrid clones of Corymbia torelliana x C. citriodora and Corymbia citriodora x C. torelliana. The experimental material used to obtain the explants was from mini-stumps of three hybrid clones of Corymbia torelliana x C. citriodora (TC01, TC02, TC03) and one of Corymbia citriodora x C. torelliana (CT01). The in vitro experiments were conducted at the Tissue Culture Laboratory II of the Institute of Applied Biotechnology for Agriculture, Federal University of Viçosa (UFV), Viçosa/MG, and the ex vitro experiments were conducted at the Research Nursery of the Forest Engineering Department of UFV. Based on the results, it can be concluded that: i) the use of the LED light source corresponded to the best results, for the characteristics evaluated in the in vitro introduction; ii) the use of red blue LEDs generated the best results for the clones analyzed in the in vitro multiplication; the explants presented efficient response to BA growth regulator at 0.5 mg L-1 concentration for Corymbia torelliana x C. Citriodora clones (TC01, TC02 and TC03) and 1.0 mg L-1 for the clone Corymbia citriodora x C. torelliana (CT01), promoting greater number of shoots; as to the number of subcultures the best results were in the ninth subculture, in which it was able to reach higher values for the number of shoots per explant and vigor; iii) the use of red blue LEDs provided the best response, for the clones analyzed in the in vitro elongation and rooting; the concentration of 15 g L-1 of sucrose presented the best results in relation to the analyzed variables, a concentration that shows a reduction of this component in the medium under these conditions of cultivation; the elongated explants (micro- shoots) showed a better response to the rooting and survival of the plants obtained in the in vitro condition.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2018-06-14T11:32:09Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1318170 bytes, checksum: 08d6f1be67944b7fdde01f7047316cfe (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-14T11:32:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1318170 bytes, checksum: 08d6f1be67944b7fdde01f7047316cfe (MD5) Previous issue date: 2018-03-07 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A macaúba (Acrocomia aculeata) tem despertado interesse econômico devido ao seu elevado teor de óleo. Entretanto, problemas na propagação desta espécie limitam seu uso em larga escala, sendo necessários estudos que viabilizem a sua produção em escala comercial. Por conseguinte, a micropropagação se apresenta como uma excelente alternativa para esta finalidade. A embriogênese somática é uma ferramenta promissora para esta espécie. Porém, balanços hormonais adequados são requisitos fundamentais para a indução da calogênese. Com isso, este trabalho teve por objetivo estabelecer um protocolo de calogênese in vitro a partir de folíolos imaturos de plantas adultas de macaúba. Foram realizados dois experimentos. No primeiro foi avaliada a influência de acessos, meios de cultura e auxinas. No segundo, além da influência dos acessos, também foram avaliadas diferentes vitaminas e concentração de sacarose. Para o primeiro experimento, aos 90 dias após a inoculação, os explantes foram avaliados. Uma amostra dos explantes com calos foi avaliada anatomicamente, sendo os demais transferidos para um meio de multiplicação contendo ou não citocinina. Para o segundo experimento, aos 75 dias após a inoculação, foi realizada a avaliação da resposta dos explantes ao meio de cultivo. Os resultados mostraram que diferentes acessos de A. aculeata respondem de forma distinta às mesmas condições de cultivo, para o primeiro experimento. O meio de indução contendo 17,34 mM de nitrogênio acrescido de vitaminas B5 modificadas, 135 μM de Picloram e 20 ou 30 g L -1 de sacarose foi o melhor para a indução de calos em explantes foliares de plantas adultas de macaúba. Para a multiplicação, o meio com citocinina aumentou a proliferação dos calos. Segundo os estudos anatômicos, no primeiro experimento, não houve a formação de calos embriogênicos. Dessa maneira, foi estabelecido o meio de cultura para a calogênese, sendo necessários estudos para confirmar a resposta eficiente do meio independentemente do acesso. / Macaw palm (Acrocomia aculeata) has awakened great economic interest due to its high oil content. Nevertheless, propagation issues affecting this species impose limitations on its widespread use, being desirable studies focusing on making feasible its production on a commercial scale. In this sense, micropropagation is an excellent alternative. Somatic embryogenesis is a promising tool for this species, but it requires a proper balance of hormones for inducting callogenesis accordingly. Taking this into account, the goal of this study is to establish a protocol for in vitro callogenesis induction from immature leaflets of adult macaw palm plants. To this end, two experiments were undertaken. In the first one, the influence of two different genotypes, culture media, and auxins was assessed. In the second one, in addition to the influence of genotypes, several vitamins as well as sucrose concentrations were assessed too. For the first experiment, 90 days after inoculation, the explants’ response was evaluated. A sample was chosen, from those explants that generated calli, for being anatomically assessed. The remaining explants were transferred to two different multiplication media, containing or not cytokinin. For the second experiment, 75 days after inoculation, the evaluation of the explants’ response to the culture medium was performed. The results showed different responses for the selected genotypes from A. aculeata when the same treatment was applied. The best medium for callus’ induction, in foliar explants coming from adult macaw palm plants, was the one containing 17.34 mM of nitrogen with modified B5 vitamins, 135 μM of Picloram, and 20 or 30 g·L -1 of sucrose added on it. Regarding multiplication, the medium with cytokinin increased calli proliferation. As reported by the anatomic study, no embryogenic calli formation appeared in the first experiment. In conclusion, this work established a culture medium for callogenesis induction, even if further studies should be conducted to verify the efficient response of the proposed medium irrespectively of the genotype.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-09-20T04:01:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 340551.pdf: 2534346 bytes, checksum: bee632d7e3b4d8a516ae521bdc5d0c02 (MD5) Previous issue date: 2016 / As orquídeas compreendem espécies frequentes do bioma Mata Atlântica, as quais têm sofrido ameaça continua devido à destruição e fragmentação dos seus habitats naturais. Devido às características ornamentais e paisagísticas, elas têm sido extraídas desordenadamente de seus habitats e comercializadas em todo o país. Técnicas de cultura de tecidos abrangem ferramentas que podem ser aplicadas à propagação massal e a conservação de orquídeas em extinção. Durante o estabelecimento in vitro, um padrão de resposta morfogênico definido como estruturas semelhantes à protocormos (ESPs) tem sido proposto para várias espécies de orquídeas como a espécie em estudo. Neste contexto, o objetivo desse trabalho foi avaliar o padrão de desenvolvimento de ESPs em Cattleya tigrina, visando o avanço no conhecimento desta rota da morfogênese e dos fatores que modulam, bem como, suas aplicações para a conservação e propagação de germoplasma. Explantes foliares, obtidos de plantas jovens, micropropagadas in vitro foram inoculados em meio de cultura MS/2 suplementado com 9µM de TDZ, para a indução e desenvolvimento das ESPs. As culturas foram coletadas aos zero, dois, sete, 14, 30, 60 e 100 dias de cultivo para posteriores análises. Realizou-se análises proteômicas mediante a combinação de géis bidimensionais e espectrometria de massas. Adicionalmente, foram realizadas avaliações do padrão de carboidratos solúveis totais e amido, qualificação dos açúcares e quantificação do hormônio AIA (ácido indol-3-acético) durante a indução e desenvolvimento das ESPs. Através dos resultados foi possível verificar uma reprogramação gênica durante a indução e desenvolvimento dessas estruturas, acompanhada de alterações anatômicas, bioquímicas e metabólicas. Na indução das ESPs foi possível verificar um número significativo de proteínas expressas ao zero dia de cultivo, quando comparado aos demais tempos de cultivo. Proteínas relacionadas ao metabolismo energético e carboidratos; defesa e resposta ao estresse e síntese de proteínas apresentaram significativas alterações na sua expressão durante a indução das ESPs. Durante o desenvolvimento das ESPs alterações na expressão de proteínas associadas aos processos metabólicos; metabolismo energético e carboidratos; ciclo celular e metabolismo secundário e fitohormônios, contribuíram no elevado potencial regenerativo dessas estruturas. Aos 100 dias de cultivo houve maior expressão de proteínas em relação aos demais tempos, o que pode estar relacionado com a ativação do metabolismo em relação ao desenvolvimento das ESPs. Em relação as avalições bioquímicas, foi possível observar que a indução e o desenvolvimento das ESPs foram claramente acompanhados por um aumento nos teores de AIA e diminuição nos teores de açúcares, sendo que este sinal parece ter sido importante para que as células se diferenciassem e adquirissem a necessária competência. Os resultados aqui obtidos ampliam a base científica para aprofundar a compreensão dos fatores que modulam o processo de indução e desenvolvimento das ESPs em C. tigrina.<br> / Abstract : Orchids are species of the Atlantic Forest biome, which are under continuing threat due to the destruction and fragmentation of their natural habitats. Because of its ornamental features, they have been inordinately taken from their habitats and marketed throughout the country. Tissue culture techniques include tools that can be applied to mass propagation and conservation of endangered orchids. During establishment of in vitro cultures of this species, a pattern of morphogenic response defined as protocorm-like bodies (PLBs) have been proposed for various orchid species as the species under study. In this context, the aim of this study was to evaluate the PLBs development pattern in C. tigrina for the advancement in knowledge of this morphogenetic route (pathways) and the factors that modulate, and their applications in the conservation and propagation of germplasm. Leaf explants obtained from young plants, in vitro micropropagated were inoculated into culture medium MS/2 supplemented with 9µM TDZ for the induction and development of PLBs. The cultures were collected after zero, two, seven, 14, 30, 60 and 100 days of cultivation, for further analysis. Proteomic analysis were performed by combining two-dimensional gels and mass spectrometry. Additionally, we performed standard evaluations of total soluble carbohydrates and starch, sugars qualification and quantification of the IAA (Indole-3-acetic acid) hormone during induction and development of PLBs .Through the results it was possible to check a reprogramming of gene during induction and development of these structures, accompanied by anatomical, biochemical and metabolic changes.The induction of PLBs observed a significant number of proteins expressed to zero days of culture, when compared to other cultivation times. Proteins related to energy and carbohydrate metabolism; defense and response to stress and in protein synthesis showed significant changes in expression during induction of PLBs. During the development of PLBs changes in expression of proteins associated with metabolic processes; energy and carbohydrate metabolism; cell cycle and secondary metabolism and phytohormones, contributed to the high regenerative potential of these structures. After 100 days of cultivation there was greater expression of proteins compared to the other times, which may be related to metabolic activation in relation to the development of PLBs. Regarding the biochemical evaluations, it was observed that the induction and development of PLBs was clearly accompanied by an increase in IAA level and a decrease in sugar content, and this signal appears to be important for cells to differentiate and acquire the necessary competence. The results obtained broaden the scientific basis for a deeper understanding of the factors that modulate the process of induction and development of PLBs in C. tigrina.

Orientador : Rolf Dieter Illg / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-18T15:24:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alves_MarcosNopper_M.pdf: 11750543 bytes, checksum: 1e11833393cdb525ec96a953e4e0389a (MD5) Previous issue date: 1993 / Resumo: A flora tropical sul-americana é rica em espécies produtoras de farmacos. Cecropia glaziovii é uma das espécies tropicais indicadas pela Central de Medicamentos como possuidora de atividade farmacológica comprovada no tratamento da bronquite, tosse, coqueluche e cancro. O único princípio ativo até hoje identificado nesta espécie, a isovitexina é indicado também como diurético e tônico cardíaco. Esta espécie alógama possui na sua população natural uma variação morfológica que se reflete diretamente na sua biomassa, como também na variação em concentrações de princípios ativos presentes nas suas folhas e estípula. Uma fonte de dificuldades no uso de plantas diretamente a partir de populações naturais é a variação genética, fisiológica e química, que leva eventualmente a atividades biológicas muito variáveis ou em casos extremos até opostas. Medidas que visem a obtenção de clones que possuem altos teores de princípios ativos seriam de grande valia para estudos químicos e farmacológicos desta espécie. O presente trabalho objetivou o desenvolvimento de metodologia de cultura ¿ in vitro¿ dessa espécie arbórea visando a sua multiplicação em larga escala. A finalidade por um lado é de obter metodologia adequada para clonagem de plantas possuidoras de princípios ativos em quantidades elevadas através de micropropagação, por outro lado, objetivamos a regeneração de plantas com possível variabilidade morfológica de interesses agronômico e químico. Todos os ensaios foram conduzidos em condições controladas de luz e temperatura. Visando a multiplicação vegetativa, brotos apicais, axilares e submeristemas previamente esterilizados foram inoculados em meios de cultura compostos por sais de Murashige & Skoog (1962) suplementado com diferentes concentrações dos fitoreguladores BAP, 2iP, KIN, ZEA e IAA. Folhas, estípulas e pecíolos previamente esterilizados foram testados para a indução de calos em meio básico de M.S. suplementado com diferentes concentrações de BAP, 2iP, KIN, 2,4-D e IAA. Tentativas de regeneração de plântulas via organogênese ou embriogênese foram realizadas a partir de meios de M.S. suplementado com diferentes concentrações de BAP, 2,4-D, IAA, 2iP e ZEA inoculados com calos compactos e friáveis. Os resultados demonstraram que as combinações BAP 10,0 mg/1 + NAA 2,0 mg/1 e BAP 10,0 + IAA 1,0 mg/1 e apenas BAP 10,0 mg/1 levaram a uma maior proliferação vegetativa de brotos. Calos foram obtidos com maior frequência quando meios de M;S. suplementado com 2,4-D 5,0 mg/1 + BAP 1,0 mg/1, foram inoculados com pecíolos e incubados na ausência de luz à temperatura de 25º C. Plântulas foram regeneradas a partir de calos por organogênese quando estes foram mantidos em meio M>S. suplementado com 2,4-D 10,0 mg/1 ou 2,4-D 1,0 mg/1 + ZEA 0,1 mg/1 por 30 dias. As plantas regeneradas foram posteriorm,ente propagadas vegetativamente utilizando os melhores meios de propagação vegetativa já descritos acima. O enraizamento foi obtido transferindo-se brotos para meio M.S. acrescido de IAA 1,0 mg/1. As plantas foram aclimatadas durante 30 dias em substrato de vermiculita, sob alta umidade relativa (90 a 100%) acrescida de solução nutritiva de Hoagland a cada 2 dias / Mestrado / Biologia Vegetal / Mestre em Ciências Biológicas