A tuberculose é responsável por mais de 2 milhões de mortes ao ano. A imunidade protetora contra a tuberculose está relacionada com a ativação de linfócitos CD4+ e CD8+ produtores de IFN-g, citocina que potencializa os mecanismos microbicidas dos macrófagos para eliminação dos bacilos. Nos últimos anos, o leucotrieno B4 (LTB4) destacou-se como mediador lipídico que participa da imunidade protetora contra diversas infecções, incluindo a tuberculose. Dessa forma, o objetivo desse estudo foi avaliar o papel dos leucotrienos na proteção induzida pela imunização homóloga com DNA-HSP65 ou heteróloga com BCG/DNA-HSP65. Para isso, inicialmente, nós confirmamos a participação dos leucotrienos no controle da infecção por M. tuberculosis ao mostrar que animais C57BL/6, que controlam a replicação dos bacilos, secretam mais LTB4; e ao bloquear a síntese de leucotrienos com a droga MK-886, estes animais ficaram suscetíveis à infecção. Em seguida, nós passamos a avaliar se os leucotrienos participavam da proteção conferida pela imunização homóloga com DNA-HSP65 ou heteróloga (prime-boost) com BCG/DNA-HSP65. Nossos resultados mostraram que animais deficientes para a síntese de LT (5-LO KO) infectados foram mais suscetíveis à infecção em relação aos animais WT. A maior suscetibilidade dos animais 5-LO KO foi associada à redução na secreção de IFN-g, nitrito e IL-17, aumento na secreção de PGE2, defeitos no recrutamento de células inflamatórias e aumento no influxo de células Foxp3+ para os pulmões. A imunização homóloga perdeu completamente seu efeito protetor na ausência de leucotrienos, enquanto a imunização heteróloga induziu proteção parcial. Animais 5-LO KO imunizados pelo esquema prime-boost secretaram concentrações mais elevadas de IL-17 e tiveram menor influxo de células Foxp3+ para os pulmões quando comparados aos animais 5-LO KO não imunizados e infectados. A inibição da síntese de prostaglandinas durante o protocolo de imunização pela estratégia prime-boost reduziu a capacidade protetora da vacina tanto em animais WT como nos 5-LO KO, sugerindo que as prostaglandinas podem desempenhar papel no processo de imunização. Em conjunto, nossos resultados reforçam a importância dos leucotrienos na imunidade protetora contra tuberculose, sugerindo sua atuação indireta, uma vez que, além de contribuírem para síntese de IFN-g e nitrito, também parecem colaborar na síntese de IL-17. / Tuberculosis is responsible for more than 2 millions of death for year. The immune response against tuberculosis is related to activation of IFN-g-producing CD4+ and CD8+ cells. IFN-g increases the microbicidal mechanisms of macrophages to kill intracellular bacilli. Recently, the lipid mediator leukotriene B4 (LTB4) has been related to protection against several diseases, including tuberculosis. In this sense, the aim of this study was to evaluate the role of leukotrienes in the protection induced by homologous immunization with DNA-HSP65 or heterologous with BCG/DNA-HSP65 (prime-boost). Firstly, we confirmed the role of leukotrienes to control the replication of M. tuberculosis when we showed that C57BL/6 mice, which are able to contain bacilli growth, secreted high levels of LTB4; and when we blocked leukotrienes synthesis by treatment with MK-886, C57BL/6 mice became more susceptible to infection. Then, we evaluated the role of leukotrienes in the protection induced by homologous or heterologous (prime-boost) immunization. Our data showed that animals deficient in leukotrienes synthesis (5-LO KO) infected with M. tuberculosis were more susceptible to infection than WT mice. The higher susceptibility of 5-LO KO was related to the decreasing of IFN-g, nitrite and IL-17 production, increasing of PGE2 secretion, defective recruitment of inflammatory cells and increased influx of Foxp3+ cells to the lungs. Homologous immunization has lost completely its protector effect in the absence of leukotrienes, while heterologous immunization induced only partial protection. Prime-boost-immunized 5-LO KO mice secreted higher levels of IL-17 and had lower influx of Foxp3+ cells to the lungs, when compared to non-immunized infected 5-LO KO. The abrogation of the synthesis of prostaglandins during the immunization by prime-boost reduced the protector effect of the vaccine either in WT and 5-LO KO mice, suggesting that prostaglandins may be important to the process of immunization. Together, our data reinforce the key role of leukotrines in immune response against tuberculosis, suggesting that these lipid mediators may act indirectly to induce IFN-g, nitrite and IL-17 synthesis.

CIBA VISION S.A. (Barcelona)

Ao contrário de outras espécies de animais domésticos, na égua os embriões descem tardiamente para o útero, creditando-se isto a uma dependência da PGE2. Conseqüentemente, são recuperados embriões que já estão em fases mais avançadas de desenvolvimento (blastocisto e blastocisto expandido) e com um tamanho que normalmente ultrapassa os 300 micrômetros quando a colheita é realizada após o 6º dia. Isto reflete em um insucesso nos protocolos de criopreservação embrionária. Em razão deste problema, testou-se a eficácia da aplicação da PGE2 por dois métodos (experimento I) e a eficácia da PGE1 e do análogo misoprostol (experimento II) na promoção da recuperação antecipada de embriões. Os dois experimentos foram realizados em éguas superestimuladas com Extrato de Pituitária Eqüina. No primeiro experimento, no 4º dia após a ovulação (D4), duas éguas foram submetidas à laparoscopia pela fossa paralombar para a deposição de 0,2 mg de PGE2 em gel sobre a tuba uterina e em outras três éguas a PGE2 foi administrada topicamente sobre a junção útero-tubárica (JUT) com auxílio de uma pipeta flexível (método não-cirúrgico). Vinte e quatro horas após a deposição do gel (D5), para ambos os métodos, foi realizada uma primeira tentativa de recuperação embrionária sendo que não foram recuperados embriões. Uma nova tentativa foi realizada entre o D6-6,5, sendo que desta vez, foram recuperados dois embriões das cinco éguas (40%), um de cada grupo. No segundo experimento, duas aplicações de 0,2 mg de PGE1 100% (n=5) ou de misoprostol 1% (n=5) diluídos em gel foram realizadas na região da JUT, no D4, pelo método não-cirúrgico. Não foram recuperados embriões no D5 das éguas que receberam PGE1 (0/5) e apenas de uma delas foram recuperados dois embriões no D6-6,5. Do grupo que recebeu misoprostol recuperaram-se três embriões de diferentes éguas no D5 (3/5), sendo uma mórula e dois embriões de sete dias provenientes de ovulações não-sincrônicas. No D6, entretanto, foram recuperados oito embriões de todas as éguas (5/5) que receberam misoprostol, resultado que é significativamente superior (P=0,048) ao do grupo que recebeu PGE1 (1/5). Apesar do pequeno número de animais, foram recuperados 11 embriões das 12 ovulações que ocorreram nas éguas do grupo misoprostol, todos com diâmetro igual ou inferior a 300 micrômetros. No último experimento detectou-se qualitativamente por imuno-histoquímica os diferentes subtipos de receptores (EP1 a EP4) para as PGE no útero, na JUT e nos diferentes segmentos da tuba uterina das éguas, em todas as fases do ciclo estral e durante dois períodos da gestação, porém, há uma menor quantidade (P< 0,0001) de receptores do subtipo EP1 em comparação aos demais subtipos. Os resultados obtidos por imuno-histoquímica indicam que realmente parece ser efetiva a administração tópica de PGE na JUT pelo método não-cirúrgico e os resultados obtidos nos dois primeiros experimentos demonstram que apesar de não antecipar a descida do embrião eqüino para o útero, o protocolo utilizando misoprostol 1% em éguas superovuladas mostrou-se eficaz em aumentar de maneira significativa a recuperação de embriões de seis dias com características desejáveis para a criopreservação. / Differently of any other ways of occurrence among the domestic animals, concerning mares, their embryos migrate in a delayed lapse of time to their uterus due to a correlation to the PGE2. Consequently, one extracts embryos which are already into some more advanced phase of their development (blastocyst and expanded blastocyst) normally exceeding 300 micrometers when their extraction is performed after the 6th day. This fact results into a failure concerning the protocols of embryonic cryopreservation. Regarding this problem, the effectiveness of applying PGE2 using two different methods (experiment I) and the effectiveness of PGE1 and the analogous misoprostol (experiment II) for promoting the anticipated extraction of the embryos, were evaluated. Both experiments were carried on some superstimulated mares using Equine Pituitary Extract. Experiment I: after the 4th day after the ovulation (D4), two mares were submitted to laparoscopy through the flank for depositing 0.2mg of PGE2 gel on the oviduct; to three other mares PGE2 was topically applied on the uterus-tube junction (UTJ) with the aid of a flexible pipette (not-surgical method). Twenty and four hours after the gel disposal (D5) regarding both methods, a first attempt for extracting the embryos was unsuccessfully performed. Another attempt was performed between the D6-6.5, and this time two embryos were extracted from the five mares (40%), one of each group. Experiment II: two applications of 0.2mg of PGE1 gel 100% (n=5) or misoprostol gel 1% (n=5) were accomplished on the UTJ region, at D4, through the not-surgical method. There werent any extracted embryos at D5 from the mares which had received PGE1 (0/5) and there were just two embryos extracted from a mare at D6-6.5. From the group which had received misoprostol three embryos from different mares were extracted at D5 (3/5), being a morula and two embryos aged seven days, from not-synchronous ovulations. However, at D6, eight embryos were extracted from all of the mares (5/5) which have received misoprostol, a significantly superior result (P=0.0048) comparing to the group which received PGE1 (1/5). Although the small number of animals, there were extracted eleven embryos from the twelve ovulations into the group which received misoprostol, all of them with a diameter 300 micrometers. In the last experiment it was qualitatively detected by immunohistochemistry the different receptor subtypes (EP1 to EP4) for the PGEs in the uterus, on the UTJ and in the different segments of the oviduct, in all stages of the estrous cycle and during two periods of gestation; however, there is a smaller amount (P<0.0001) of the receptor subtype EP1 in comparison to the other subtypes. The obtained results by immunohistochemistry genuinely indicate that the topical application of PGE on the UTJ through a not-surgical method seems effective and the obtained results in the first two experiments show that even though it doesnt anticipate the embryos migration to the uterus, the protocol using misoprostol 1% in superstimulated mares was significantly effective for increasing the extraction of embryos aged six days with desirable characteristics for the cryopreservation.

O objetivo deste estudo foi comparar alterações histológicas induzidas por análogos de prostaglandinas e maleato de timolol na conjuntiva de coelhos. Cinqüenta coelhas da raça Nova Zelândia com idade e peso semelhantes foram divididos em cinco grupos de dez animais. Os olhos esquerdos foram tratados com uma gota diária de bimatoprosta 0,03%, travoprosta 0,004%, latanoprosta 0,005%, maleato de timolol 0,5% ou lágrimas artificiais contendo cloreto de benzalcônio (CBA) durante 30 dias. Os olhos contra-laterais serviram como controles. Realizaram-se biópsias na conjuntiva limbar superior com dimensões de 5 mm x 5 mm no oitavo e trigésimo dias em cinco coelhos de cada grupo. A conjuntiva foi imediatamente fixada com formaldeído a 10% por 24 horas, seguido de coloração por Hematoxilina-Eosina (HE) e Ácido Periódico de Shiff (PAS) e avaliação qualitativa por microscopia óptica. A avaliação histo-morfométrica quantitativa foi realizada usando o programa Image Pro-Plus 4.5. Os parâmetros avaliados foram: infiltrado inflamatório, espessura epitelial, número de células caliciformes, diâmetro e número de vasos sanguíneos. Observou-se leve infiltrado inflamatório focal no tecido conectivo subepitelial nos olhos controle e do grupo CBA, que consistia de aglomerados de linfócitos e raros neutrófilos. Todos os demais grupos exibiram no oitavo e trigésimo dias de tratamento infiltrado inflamatório moderado, composto por linfócitos e neutrófilos, que foi mais denso no grupo tratado com maleato de timolol do que nos grupos dos análogos de prostaglandinas. No trigésimo dia, o grupo que recebeu timolol mostrou aumento da densidade subepitelial de colágeno e aumento estatisticamente significante da espessura epitelial (P=0,004), que não foram observados nos demais grupos. Observou-se um aumento estatisticamente significante do número de vasos no grupo tratado com timolol (P=0,001). O diâmetro vascular no grupo que recebeu travoprosta apresentou aumento estatisticamente significante no oitavo dia de tratamento (P=0,008) e redução no 30º dia (P=0,035). A densidade de células caliciformes aumentou significativamente no grupo que recebeu travoprosta no oitavo dia (P=0,001) e no 30º dia nos grupos tratados com bimatoprosta (P=0,002) e latanoprosta (P=0,009). Conclui-se que, na conjuntiva de coelhos, o número de células caliciformes aumenta com o uso de análogos das prostaglandinas. O estudo sugere que essas drogas, entretanto, induzem menos alterações que o maleato de timolol na conjuntiva de coelhos / The purpose of this study was to compare histological changes induced by prostaglandin analogues and timolol maleate in the rabbit conjunctiva. Fifty New Zealand female rabbits with similar age and weight were divided in five groups of 10 animals. The left eyes were treated with one daily drop of bimatoprost 0,03%, travoprost 0,004%, latanoprost 0,005%, timolol maleate 0,5% or artificial tears containing benzalkonium chloride (BAC) for 30 days. The fellow eyes served as controls. Limbal superior conjunctival biopsies of 5 mm x 5 mm were performed at the 8th and 30th day in five rabbits of each group each time. The conjunctiva was immediately fixed with 10% formaldehyde for 24 hours, followed by Hematoxiline-Eosine (HE) and Periodic Acid Shiff (PAS) staining and optical qualitative microscopic evaluation. Morphohistometric quantitative analyses were conducted using the Image Pro-Plus 4.5 software. The evaluated parameters were: inflammatory infiltrate, epithelial thickness, number of goblet cells, diameter and number of blood vessels. A low level infiltration, consisting of localized clusters of lymphocytes and rare neutrophils, was observed in the subepithelial connective tissue of the control eyes and in the BAC group. At the 8th and 30th day post treatment, all other groups exhibited a diffuse inflammatory infiltrate, composed by lymphocytes and neutrophils, which was denser in the timolol group than in the prostaglandin analogue groups. At the 30th day, the timolol group also showed an increased subepithelial collagen density and a significant increase in epithelial thickness (P=0.004), which was not present in the other groups. A significant increase (P =0.001) in the number of blood vessels was observed in the group treated with timolol. An initial increase in the vascular diameter was observed at the 8th day in the travoprost group (P=0,008) although a significant reduction was observed at the 30th day (P =0,035). The goblet cell density was significantly increased at the 8th day in the group treated with travoprost (P =0.001) and at the 30th day in those treated with bimatoprost (P =0.002) and latanoprost (P =0.009). We conclude that an increase in the number of goblet cell was initially observed with the use of all prostaglandin analogues. This study suggests that these drugs, however, induce fewer changes than timolol maleate in the rabbit conjunctiva

A ação de fosfolipases A2 (FLA2s): miotoxinas (MTs) ?II e III, isoladas de Bothrops asper (VBa) e CB2, de Crotalus durissus terrificus (VCdt) e os venenos brutos, sobre a expressão de ciclooxigenases (COXs) e síntese de prostaglandina (PG) E2 e PGD2 foi avaliada. As MTs e VBa mas não CB2 e nem VCdt induziram a expressão de COX-2 por leucócitos. Em estudos in vitro ocorreram a liberação de PGs e expressão de COX-2, após a incubação de macrófagos (M?s) com FLA22s e, de neutrófilos (N?s) e M?s, com VBa. A CB2 induziu somente a liberação de PGs. A inibição de FLA2 citosólica (cFLA2), diminuiu os níveis de PG induzidos pelas MTs, mas não pela CB2, e não afetou a expressão de COX-2 induzida pelas MTs. O envolvimento do NF-?kB na expressão de COX-2 foi mostrado com inibidores. Em conclusão, MTs, CB2 e VBa estimulam a síntese de PGs in vivo e in vitro e MTs e VBa, mas não CB2, induzem a expressão de COX-2. O VCdt não afeta estes parâmetros. O efeito das MTs sobre a expressão de COX-2 e PGs é mediado pelo NF-kB e pela cFLA2, respectivamente. Os efeitos de CB2 na produção de PGs são independentes de cFLA2s e COX-2. O fato da MT-II ser destituída de atividade enzimática sugere que a atividade catalítica per se, não seja relevante para os efeitos observados. / Action of the phospholipase A2 (PLA22): myotoxins (MTs) -II and -III, from Bothrops asper (BaV) and CB2, from Crotalus durissus terrificus (CdtV) and these venoms on cyclooxygenases (COXs) and synthesis of prostaglandins (PGs) E2 and D2 were studied in vivo and in vitro. Intraperitoneal injection of sPLA22s and BaV but not CdtV released PGD2 and PGE2. MTs and BaV but neither CB2 nor CdtV induced expression of COX-2 by leukocytes. Release of PGs and expression of COX-2 occurred in vitro after incubation of macrophages (M?s) with PLA2 and neutrophils (N?) and M?s with BaV. CB2 induced only PGs release. Inhibition of cytosolic PLA2 (cPLA2), reduced PG levels caused by MTs, but not by CB2 while did not affect MTs-induced COX-2 expression. Involvement of NF-kB in COX-2 was showed using with inhibitors. In conclusion MTs, CB2 and BaV stimulate the synthesis of PGs in vivo and in vitro and MTs and BaV, but not CB2, induce COX-2 expression. VCdt does not affect these parameters. Effect of MTs on COX-2 is mediated by NF-kB, and on PGs by cPLA2. Effects of CB2 on PGs are independent of cPLA2 and OX-2. Since MT-II lacks catalytic activity the PLA2 activity per se is not relevant for activation of this cascade.

O glioblastoma multiforme (GBM) é um dos gliomas mais comuns, classificado como um glioma de grau IV (Organização Mundial da Saúde - OMS) e notoriamente difícil de ser tratado. O tratamento recomendado consiste na ressecção cirúrgica seguida de radio e quimioterapia, e a sobrevida média dos pacientes é de apenas 12 meses após o diagnóstico. Portanto, novas terapias que focam a redução do volume do tumor e o aumento da morte das células tumorais são urgentemente necessárias. Estudos pré-clínicos sugerem que a inibição de COX-1 e 2 com Anti-inflamatórios não esteroidais (AINEs), como o Ibuprofeno (IBP), inibiram significantemente a proliferação e a migração celular em diferentes tumores. Assim, o presente estudo teve como objetivo avaliar in vitro o efeito da inibição de COX-1 e COX-2 através do tratamento com IBP, e também com inibidores específicos como SC-560 e NS-398 respectivamente, na migração e na proliferação da linhagem celular de glioma humano U251-MG. O presente estudo demonstrou através de diversos ensaios que a inibição de COX-1 e COX-2 através do IBP, do SC-560 e do NS-398 inibiu significativamente a migração e a proliferação celular da linhagem celular U251-MG. Dessa maneira, concluímos que a PGE2 está envolvida na migração e proliferação celular das células desta linhagem celular. / Glioblastoma Multiforme (GBM) is the most common glioma, classified as grade IV (World Health Organization WHO) and notoriously difficult to treat. The recommended treatment consists of surgery followed by radiotherapy and chemotherapy, and the median survival is ten to twelve months. Preclinical studies suggest that inhibiton of cyclooxygenase-2 by treatment with non-steroidal anti-inflammatory drugs, such as ibuprofen, significantly blocked the proliferation of different tumors including gliomas. Thus this study aimed to evaluate the migration of glioma cell line U251-MG after inhibition of cyclooxygenases 1 and 2 by treatment with ibuprofen (IBP), and specifics inhibitors such as SC-560 for COX-1 and NS-398 for COX-2. The present study demonstrated by various assays where inhibition of COX-1 and COX-2 by IBP, SC-560 and NS-398, significantly inhibited migration and cell proliferation of U251-MG cell line. Thus, we conclude that PGE2 is involved in this cell line migration and cell proliferation.

Ao contrário de outras espécies de animais domésticos, na égua os embriões descem tardiamente para o útero, creditando-se isto a uma dependência da PGE2. Conseqüentemente, são recuperados embriões que já estão em fases mais avançadas de desenvolvimento (blastocisto e blastocisto expandido) e com um tamanho que normalmente ultrapassa os 300 micrômetros quando a colheita é realizada após o 6º dia. Isto reflete em um insucesso nos protocolos de criopreservação embrionária. Em razão deste problema, testou-se a eficácia da aplicação da PGE2 por dois métodos (experimento I) e a eficácia da PGE1 e do análogo misoprostol (experimento II) na promoção da recuperação antecipada de embriões. Os dois experimentos foram realizados em éguas superestimuladas com Extrato de Pituitária Eqüina. No primeiro experimento, no 4º dia após a ovulação (D4), duas éguas foram submetidas à laparoscopia pela fossa paralombar para a deposição de 0,2 mg de PGE2 em gel sobre a tuba uterina e em outras três éguas a PGE2 foi administrada topicamente sobre a junção útero-tubárica (JUT) com auxílio de uma pipeta flexível (método não-cirúrgico). Vinte e quatro horas após a deposição do gel (D5), para ambos os métodos, foi realizada uma primeira tentativa de recuperação embrionária sendo que não foram recuperados embriões. Uma nova tentativa foi realizada entre o D6-6,5, sendo que desta vez, foram recuperados dois embriões das cinco éguas (40%), um de cada grupo. No segundo experimento, duas aplicações de 0,2 mg de PGE1 100% (n=5) ou de misoprostol 1% (n=5) diluídos em gel foram realizadas na região da JUT, no D4, pelo método não-cirúrgico. Não foram recuperados embriões no D5 das éguas que receberam PGE1 (0/5) e apenas de uma delas foram recuperados dois embriões no D6-6,5. Do grupo que recebeu misoprostol recuperaram-se três embriões de diferentes éguas no D5 (3/5), sendo uma mórula e dois embriões de sete dias provenientes de ovulações não-sincrônicas. No D6, entretanto, foram recuperados oito embriões de todas as éguas (5/5) que receberam misoprostol, resultado que é significativamente superior (P=0,048) ao do grupo que recebeu PGE1 (1/5). Apesar do pequeno número de animais, foram recuperados 11 embriões das 12 ovulações que ocorreram nas éguas do grupo misoprostol, todos com diâmetro igual ou inferior a 300 micrômetros. No último experimento detectou-se qualitativamente por imuno-histoquímica os diferentes subtipos de receptores (EP1 a EP4) para as PGE no útero, na JUT e nos diferentes segmentos da tuba uterina das éguas, em todas as fases do ciclo estral e durante dois períodos da gestação, porém, há uma menor quantidade (P< 0,0001) de receptores do subtipo EP1 em comparação aos demais subtipos. Os resultados obtidos por imuno-histoquímica indicam que realmente parece ser efetiva a administração tópica de PGE na JUT pelo método não-cirúrgico e os resultados obtidos nos dois primeiros experimentos demonstram que apesar de não antecipar a descida do embrião eqüino para o útero, o protocolo utilizando misoprostol 1% em éguas superovuladas mostrou-se eficaz em aumentar de maneira significativa a recuperação de embriões de seis dias com características desejáveis para a criopreservação. / Differently of any other ways of occurrence among the domestic animals, concerning mares, their embryos migrate in a delayed lapse of time to their uterus due to a correlation to the PGE2. Consequently, one extracts embryos which are already into some more advanced phase of their development (blastocyst and expanded blastocyst) normally exceeding 300 micrometers when their extraction is performed after the 6th day. This fact results into a failure concerning the protocols of embryonic cryopreservation. Regarding this problem, the effectiveness of applying PGE2 using two different methods (experiment I) and the effectiveness of PGE1 and the analogous misoprostol (experiment II) for promoting the anticipated extraction of the embryos, were evaluated. Both experiments were carried on some superstimulated mares using Equine Pituitary Extract. Experiment I: after the 4th day after the ovulation (D4), two mares were submitted to laparoscopy through the flank for depositing 0.2mg of PGE2 gel on the oviduct; to three other mares PGE2 was topically applied on the uterus-tube junction (UTJ) with the aid of a flexible pipette (not-surgical method). Twenty and four hours after the gel disposal (D5) regarding both methods, a first attempt for extracting the embryos was unsuccessfully performed. Another attempt was performed between the D6-6.5, and this time two embryos were extracted from the five mares (40%), one of each group. Experiment II: two applications of 0.2mg of PGE1 gel 100% (n=5) or misoprostol gel 1% (n=5) were accomplished on the UTJ region, at D4, through the not-surgical method. There werent any extracted embryos at D5 from the mares which had received PGE1 (0/5) and there were just two embryos extracted from a mare at D6-6.5. From the group which had received misoprostol three embryos from different mares were extracted at D5 (3/5), being a morula and two embryos aged seven days, from not-synchronous ovulations. However, at D6, eight embryos were extracted from all of the mares (5/5) which have received misoprostol, a significantly superior result (P=0.0048) comparing to the group which received PGE1 (1/5). Although the small number of animals, there were extracted eleven embryos from the twelve ovulations into the group which received misoprostol, all of them with a diameter 300 micrometers. In the last experiment it was qualitatively detected by immunohistochemistry the different receptor subtypes (EP1 to EP4) for the PGEs in the uterus, on the UTJ and in the different segments of the oviduct, in all stages of the estrous cycle and during two periods of gestation; however, there is a smaller amount (P<0.0001) of the receptor subtype EP1 in comparison to the other subtypes. The obtained results by immunohistochemistry genuinely indicate that the topical application of PGE on the UTJ through a not-surgical method seems effective and the obtained results in the first two experiments show that even though it doesnt anticipate the embryos migration to the uterus, the protocol using misoprostol 1% in superstimulated mares was significantly effective for increasing the extraction of embryos aged six days with desirable characteristics for the cryopreservation.

A destruição crônica do aparelho de inserção periodontal devido a uma intensa resposta inflamatória a bactérias conduz a uma condição clínica conhecida como doença periodontal. A inflamação periodontal geralmente provoca úlceras superficiais no sulco gengival, onde os capilares sanguíneos estão expostos a bactérias. Patógenos periodontais, assim como seus produtos podem ser translocados e liberados do sulco gengival para a corrente sanguínea e, portanto, ter efeitos periféricos. A bolsa periodontal é também importante reservatório de mediadores inflamatórios que podem atingir a corrente sanguínea. Diversos estudos avaliam a relação entre a doença periodontal e as doenças cardiovasculares. Sabe-se que muitas doenças cardiovasculares têm início em desordens vasculares, principalmente na camada endotelial dos vasos sanguíneos de grande condutância. Assim, o foco deste estudo foi investigar a reatividade vascular de aortas de animais com periodontite. Tanto a contração para a norepinefrina quanto o relaxamento para a acetilcolina estão diminuídos em animais com periodontite, mas os mecanismos para estes efeitos são diferentes. A diminuição da resposta contrátil à norepinefrina parece estar associada a um aumento da produção de óxido nítrico através da isoforma induzível da óxido nítrico sintase e a diminuição da resposta relaxante à acetilcolina parece estar associada a produção de prostanóides principalmente derivados da isoforma do tipo II da enzima ciclooxigenase. / The chronic destruction of the periodontal attachment apparatus due to an intense inflammatory response to bacteria leads to a condition known as periodontal disease. The periodontal inflammation usually causes superficial ulcers in the gingival sulcus, where blood capillaries are exposed to bacteria. Periodontal pathogens, as well as their products can be translocated and released into the gingival sulcus, subsequently into the bloodstream and thus have peripheral effects. The periodontal pocket is also an important reservoir of inflammatory mediators that can reach the bloodstream. Several studies have evaluated the relationship between periodontal disease and cardiovascular disease. It is known that many cardiac diseases begin as vascular disorders, especially in the endothelial layer of blood vessels of large conductance. Thus, the focus of this study was to investigate the vascular reactivity of aortas from animals with periodontitis. Both norepinephrine-mediated contraction and acetylcholine-mediated relaxation are decreased in animals with periodontitis, but the mechanisms are different for these responsess. The contraction appears to be associated with increased production of nitric oxide by inducible isoform of nitric oxide synthase and relaxation with prostanoids primarily derived type II isoform of the enzyme cyclooxygenase.

A sepse é caracterizada por uma produção excessiva de mediadores inflamatórios, acompanhada de taquicardia e hipotensão. Experimentalmente, a administração de endotoxina (Lipopolissacarídeo, LPS) em doses relativamente elevadas induz choque endotoxêmico, sendo um bom modelo de estudo da sepse. Diversos grupos têm demonstrado ações antiinflamatórias e antitumorais do citral, um composto do óleo essencial de Cymbopogon citratus. Nosso laboratório demonstrou ação antipirética do citral em modelo de febre induzida por LPS, acompanhada de redução nos níveis de citocinas plasmáticas e de prostaglandina E2 (PGE2) no plasma e área pré óptica do hipotálamo (POA), importante região termorregulatória. A hipótese testada neste trabalho foi a de que o citral atenua a hipotensão provocada pela endotoxina, além de amenizar as alterações termoregulatórias. Todos os procedimentos foram executados de acordo com os princípios éticos de experimentação animal, aprovados pelo comitê de ética local (CEUA 2015.1 1214 58-2). Foi realizado o implante de cânulas na artéria e veia femoral para registro da pressão arterial e administração de LPS (1,5 mg/kg) ou salina apirogênica 0,9% além do implante de datalogger na cavidade peritoneal de ratos Wistar, para registro da temperatura corporal. No dia do registro, 30 minutos antes da administração de LPS ou salina, os animais receberam citral (100 mg/kg) ou tween 80 a 1% (veículo) por via oral. Os parâmetros cardiovasculares e temperatura corporal foram registrados por 300 minutos após os respectivos tratamentos. Os valores de pressão arterial média (PAM) e frequência cardíaca (FC) foram coletados a cada 10 minutos após o tratamento e a temperatura corporal foi registrada pelo datalogger em intervalos de 5 minutos. Em outro protocolo foi realizado apenas o implante de cânula na veia femoral dos animais de todos os grupos para administração de LPS ou salina, coleta de sangue para dosagem de interleucina 6, PGE2, nitrito e nitrato e corticosterona e coleta do encéfalo para dosagem de PGE2 e PGD2. As diferenças estatísticas entre os grupos foram analisadas pelo teste ANOVA two-way seguido por pós teste de Newman-Keuls, com o nível de significância adotado de p < 0,05. A administração de LPS provocou queda na PAM eaumento na FC. Tais respostas não foram afetadas pela administração prévia de citral. O LPS também induziu febre e aumento nas concentrações plasmáticas de interleucina - 6 (IL-6), óxido nítrico (NO), PGE2 e corticosterona. Esses parâmetros não foram alterados pela pré- administração de Citral. No entanto, o citral provocou redução na produção de PGD2 naPOA, sem alterar a de PGE2 nesta região. Podemos concluir que o citral não previne as alterações nos parâmetros cardiovasculares no modelo de endotoxemia em ratos, porém reduz a produção de um mediador termorregulatório e inflamatório do sistema nervoso central (a PGD2), sem alterar a produção de outros mediadores inflamatórios a nível periférico (no plasma). Portanto, em um modelo mais agressivo de inflamação sistênica o citral não se mostrou suficiente para proteger o organismo das ações deletérias do LPS. / Sepsis is characterized by the overproduction of inflammatory mediators, accompanied by tachycardia and hypotension. Experimentally, administration of endotoxin (Lipopolysaccharide, LPS) in relatively high doses induces endotoxemic shock, a widely used model of sepsis in rats. Several groups have demonstrated anti-inflammatory and antitumor roles of citral, an essential oil compound of Cymbopogon citratus. Emilio-Silva et al. (2017) have shown an antipyretic role of citral in a model of LPS-induced fever, accompanied by a reduction of cytokines and prostaglandin E2 plasma levels and in the preoptic area of hypothalamus (POA), the hierarchically most important thermoregulatory region. We hypothesized that citral attenuates the LPS-induced hypotension, besides mitigating the thermoregulatory adjustments in rats. All procedures were performed in agreement with ethical guidelines for animal experimentation aproved by the local ethical committee (CEUA 2015.1 1214 58-2). Femoral artery and vein were implanted with cannulas for blood pressure recording and LPS (1.5 mg/kg) or 0.9% apyrogenic saline injection. In a second surgical procedure a datalogger was implanted into the peritoneal cavity for measurements of body temperature. All surgical procedures were performed under Ketamin/xilazin (100/10 mg/kg) anesthesia. One day after arterial catheterization, 30 minutes prior to LPS or saline administration, the animals received either citral (100 mg / kg) or 1% tween 80 (vehicle) oralstarly. The cardiovascular parameters and body temperature were recorded for 300 minutes after the respective treatments. Mean blood pressure (MAP) and heart rate (HR) were collected every 10 minutes after treatments and body temperature was recorded by the datalogger at 5 minute intervals. Blood samples were obtained in another set of rats for interleukin-6, PGE2, nitrite and nitrate and corticosterone analyses. The brain was removed for PGE2 and PGD2 analyses. Statistical differences between groups were analyzed by the two-way or one-way ANOVA test followed by Newman-Keuls post-test, with significance level adopted at p <0.05. As expected, LPS administration caused a decrease in MAP and an increase in HR, and these responses were not affected by citral. LPS also induced fever and increased plasma levels of interleukin - 6 (IL - 6), nitric oxide (NO), prostaglandin E 2 andcorticosterone. These parameters were also not altered by citral. On the other hand, citral caused a reduction in prostaglandin D2 concentration in the POA, but failed to alter PGE2 levels in this region. Our data are consistent with the notion that citral does not affect changes in cardiovascular and thermoregulatory parameters. Consistently, citral also caused no changes in both LPS-induced peripheral inflammatory mediators (in plasma) and in the POA, except PGD2. Therefore, in our model which mimetic a fairly critical situation, citral may not be sufficient to protect the organism from the deleterious actions of LPS. Financial support: FAPESP / CAPES.

Orientador: José Antonio Dell´Aqua Junior / Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar o fluxo sanguíneo luteal e os efeitos colaterais em jumentas após administração de dois agentes luteolíticos. Cinco dias após a ovulação, oito fêmeas asininas foram randomizadas em crossover design, em dois grupos experimentais. No grupo 1 (GI) foi utilizado Dinoprost Trometamina, e no grupo 2 (G2) Cloprostenol sódico. Foram realizados exames ultrassonográficos modo B e modo Doppler 15 minutos antes (-15) da administração dos análogos da PGF2α, e nos tempos 0, 15, 30, 45 e 60 minutos e 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 12 e 24 horas pós-aplicação. Já os efeitos colaterais foram observados nos tempos 0, 15, 30, 45 e 60 minutos pós-administração dos agentes luteolíticos. O fluxo sanguíneo e a área do corpo lúteo reduziram gradativamente durante as primeiras 24 horas em ambos os grupos. Em relação a observação dos efeitos colaterai, a aplicação de Dinoprost Trometamina provocou um maior grau de sudorese, enquanto que, após aplicação de Cloprostenol Sódico, maior desconforto abdominal e diarreia foram observados como efeitos colaterais. Conclui-se que ambos os tratamentos (dinoprost e cloprostenol) são eficientes na promoção da luteólise, entretanto os efeitos colaterais diferem em resposta à administração de cada ativo. Novos estudos se fazem necessários, com redução das doses luteolíticas efetivas visando minimizar os efeitos colaterais observados. / Abstract: The aim of the study was to evaluate the blood flow and side effect in jennies after treatment with two luteolytic drugs. Five days after ovulation, eight jennies included were randomized in crossover design into two experimental groups. In group 1 (GI) Dinoprost Tromethamine was used, and in group 2 (G2) Cloprostenol sodium. Mode B and Doppler ultrasound examinations were performed 15 minutes before (-15) administration of PGF2α, and at times 0, 15, 30, 45 and 60 minutes and 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 12 and 24 hours after application. Side effects were observed at 0, 15, 30, 45 and 60 minutes after luteolytic agents administration. Blood flow and corpus luteum area decreased gradually during the first 24 hours in both groups. Regarding the observation of side effects, G1 presented major score of sweating, while in G2, greater abdominal discomfort and diarrhea was evidenced as a major side effect. It is concluded that both treatments (dinoprost and cloprostenol) are efficient in promoting luteolysis, however side effects differ between each active. Further studies are needed to determine whether low doses may be effective in inducing luteolysis to minimize side effects. Keywords: jennies, corpus luteum, Doppler ultrasonography, prostaglandins. / Mestre