Tese (Doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Nanociência e Nanobiotecnologia, 2018. / A necessidade da utilização de métodos mais sustentáveis que visassem reduzir os potenciais efeitos deletérios sobre a saúde dos organismos vivos e meio ambiente fez com que a busca por rotas alternativas para produção de nanopartículas de prata (AgNPs) se tornasse uma crescente nos últimos anos. Além disso, os estudos envolvendo avaliações de suas atividades biológicas vêm representando uma forte linha de pesquisa em nanotecnologia, em virtude das suas aplicações representarem estratégias úteis na prevenção, no tratamento e no controle de diversas patologias de importância biomédica e agrícola. Assim sendo, o objetivo desta Tese é investigar o potencial de extratos aquosos das folhas de Pterodon emarginatus (sucupira branca) na formação de nanopartículas de prata (NpSB) e nos seus potenciais efeitos citotóxicos, antioxidantes, hemolíticos, antibacterianos e nematotóxicos; além de também verificar o potencial de um metabolito secundário presente nas folhas de P. emarginatus (quercetina) na síntese de AgNPs (NpQ) para fins nematotóxicos e analisar os efeitos desses nanossistemas no desenvolvimento de plantas modelo Arabidopsis thaliana. Para isso, os extratos aquosos das folhas de sucupira branca nas concentrações finais equivalentes de 10, 20 e 40 mg de folhas congeladas/mL foram adicionados às soluções aquosas de nitrato de prata para concentração final de 1 mM para produção de NpSB. As reações foram incubadas à 75ºC por 150 min e monitoradas a cada 30 min por espectroscopia de absorção em 425 nm. Enquanto que para produção de NpQ, as soluções aquosas de quercetina nas concentrações finais de 5, 10 e 20 μM foram adicionadas às soluções aquosas de nitrato de prata na concentração final de 1 mM. As reações foram submetidas à 75ºC por 15 min e monitoradas por espectroscopia de absorção em 425 nm. Assim, foi verificado que os extratos das folhas coletadas nas duas estações (verão e inverno) exibiram ações redutoras dos íons de prata satisfatórias, tendo a concentração de 20 mg/mL melhor capacidade de induzir o processo de formação de AgNPs com considerável estabilidade coloidal. As estações de coleta das folhas de P. emarginatus interferiram na síntese e no rendimento das NpSBs e também nos seus diâmetros hidrodinâmicos e potenciais Zeta. Entretanto, essas partículas apresentaram dimensões secas, perfis de massa molecular e padrões de cristalinidade dos átomos similares. Além disso, foi averiguado que as NpSBs apresentaram atividades citotóxicas expressivas sobre linhagens de melanoma murino (B16F10), atividade antioxidante marcante na remoção de radicais hidroxilas, efeito hemolítico insignificante, efeito antibacteriano frente às cepas Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis e Escherichia coli, e efeito nematotóxico em Meloidogyne incognita. No que se referem às NpQs foi verificado que as soluções aquosas de quercetina apresentaram potencial para rápida formação de AgNPs, sendo o rendimento mais alto utilizando a concentração de quercetina de 20 μM (NpQ 20). De acordo com DLS, as NpQ 20 apresentaram diâmetros hidrodinâmicos de 29,06 nm (Z-Average), índice de polidispersividade de 0,561 e potencial Zeta de -23,7 mV. Além disso, as NpQ 20 demonstraram ainda atividades nematotóxicas in vitro e em solo contendo A. thaliana infestadas por M. incognita, não comprometendo as etapas do ciclo celular, a germinação de sementes e o desenvolvimento desse modelo vegetal. Em suma, a partir desses resultados é possível inferir que os extratos aquosos das folhas de P. emarginatus e as soluções aquosas de quercetina apresentaram capacidades formadoras de AgNPs satisfatórias, que por sua vez demostraram potenciais biomédicos e agrícolas. Além disso, foi possível revelar que alguns parâmetros das NpSBs são moduláveis por aspectos sazonais da P. emarginatus e apresentando assim novos potencias biológicos para esta espécie de planta da biodiversidade brasileira. / The need to use more sustainable methods to reduce the potential deleterious effects on the health of living organisms and the environment has made the search for alternative routes for the production of silver nanoparticles (AgNPs) a growing trend in recent years. In addition, studies involving evaluations of its biological activities have represented a strong line of research in nanotechnology, since its applications represent useful strategies in prevention, treatment, and control of several pathologies of biomedical and agricultural importance. Therefore, the aim of this thesis is to investigate the potential of aqueous extracts of leaves from Pterodon emarginatus (sucupira branca) in formation of silver nanoparticles (NpSB) and its potential cytotoxic, antioxidant, hemolytic, antibacterial, and nematotoxic effects; as well as to verify the potential of a secondary metabolite present in leaves of P. emarginatus (quercetin) in the synthesis of AgNPs (NpQ) for nematotoxic purposes and to analyze the effects of these nanosystems on development of Arabidopsis thaliana plants. For this, aqueous extracts of sucupira branca leaves at equivalent final concentrations of 10, 20, and 40 mg of frozen leaves/mL were added to aqueous solutions of silver nitrate to a final concentration of 1 mM for NpSB production. Reactions were incubated at 75°C for 150 min and monitored every 30 min by absorption spectroscopy at 425 nm. While for NpQ production, aqueous solutions of quercetin at final concentrations of 5, 10, and 20 μM were added to the aqueous solutions of silver nitrate at the final concentration of 1 mM. The reactions were submitted to 75ºC for 15 min and monitored by absorption spectroscopy at 425 nm. Thus, it was verified that extracts of leaves collected in the two seasons (summer and winter) exhibited satisfactory silver ion reducing actions, and the concentration of 20 mg/mL was better able to induce the formation process of AgNPs with considerable colloidal stability. P. emarginatus leaf collection stations interfered in synthesis and yield of NpSBs and also in their hydrodynamic and potential Zeta diameters. However, these particles had similar dry dimensions, molecular mass profiles, and crystallinity atom patterns. In addition, it was found that the NpSBs showed significant cytotoxic activities on murine melanoma (B16F10) lines, marked antioxidant activity in removal of hydroxyl radicals, insignificant hemolytic effect, antibacterial effect against strains Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis and Escherichia coli, and effect nematotoxic in Meloidogyne incognita. Regarding NpQs, it was verified that aqueous quercetin solutions showed potential for rapid formation of AgNPs, with the highest yield using quercetin concentration of 20 μM (NpQ 20). According to DLS, NpQ 20 presented hydrodynamic diameters of 29.06 nm (Z-Average), polydispersity index of 0.561 and Zeta potential of -23.7 mV. In addition, NpQ 20 also demonstrated nematotoxic activities in vitro and in soil containing A. thaliana infested by M. incognita, without compromising the stages of cell cycle, seed germination, and development of this plant model. In summary, from these results it is possible to infer that the aqueous extracts of leaves from P. emarginatus and aqueous solutions of quercetin showed satisfactory AgNPs forming capacities, which in turn demonstrated biomedical and agricultural potentials. In addition, it was possible to reveal that some parameters of NpSBs are tunable by seasonal aspects of P. emarginatus and thus presenting new biological capabilities for this species of Brazilian biodiversity plant.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-03-24T11:15:38Z No. of bitstreams: 1 rafaelcyprianodutra.pdf: 3011312 bytes, checksum: 4c00c8174a3da34ddf967baca38a6905 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-03-24T12:55:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 rafaelcyprianodutra.pdf: 3011312 bytes, checksum: 4c00c8174a3da34ddf967baca38a6905 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-24T12:55:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 rafaelcyprianodutra.pdf: 3011312 bytes, checksum: 4c00c8174a3da34ddf967baca38a6905 (MD5) Previous issue date: 2008-02-15 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Pterodon emarginatus Vogel (Leguminosae), popularmente conhecida como sucupira-branca ou faveiro, é uma planta nativa, dispersa por quase toda a região central do Brasil. A infusão de suas cascas, folhas e sementes têm eficiente ação anti-reumática, analgésica e antiinflamatória. O presente trabalho realizou análise fitoquímica e farmacológica do óleo essencial (OE) e frações obtidas das sementes de P. emarginatus Vogel. O OE foi extraído por hidrodestilação e as respectivas frações hexânica (FH), acetato de etila (FA), butanólica (FB) e metanólica (FM) foram preparadas utilizando aparelho de Soxhlet. Testes de classe de substâncias revelaram a presença de flavonóides, leucoantocianidinas, taninos, heterosídeos cardiotônicos, cumarinas e saponinas nas sementes, assim como taninos, leucoantocianidinas e heterosídeos cardiotônicos em todas as frações testadas. O OE das sementes apresentou atividade bactericida contra Staphylococcus aureus ATCC 25923 e toxicidade aguda frente à Artemia salina. As FH e FB apresentaram atividade leishmanicida frente às formas promastigotas de Leishmania amazonensis. As FB e FM apresentaram atividade antioxidante frente ao radical DPPH. O OE e as frações obtidos das sementes de P. emarginatus apresentaram atividade antinociceptiva, nos modelos de contorções abdominais induzidas por ácido acético, teste da placa quente e tempo de lambida da pata. O creme contendo OE e FH apresentaram potencial cicatrizante em modelo de queimaduras. O OE apresentou atividade gastroprotetora, nos modelos utilizando etanol absoluto, indometacina e HCl/etanol, atividade antiinflamatória no modelo de pleurisia induzida por carragenina e atividade antitumoral para todas as linhagens celulares tumorais utilizadas. Estes resultados são promissores, pois as sementes de Pterodon emarginatus Vogel possuem componentes ativos podendo constituir uma nova opção terapêutica. / Pterodon emarginatus Vogel (Leguminosae), popularly Known as “sucupira-branca” or “faveiro”, is native plant, easily found all over central Brazil. The infusion of its bark leaves and seeds are effective action anti-rheumatic, analgesic and antiinflammatory. The present work available the phytochemistry and pharmacological potential of P. emarginatus Vogel seeds. The essential oil (EO) was extracted for hydrodistillation and the respective fractions hexanic (HF), ethyl acetate (AF), buthanolic (BF) and methanolic (MF) prepared using Soxhlet apparatus. Tests class of substances showed the presence of flavonoids, leucoantocianidines, tannins, cardiotonic heterosides, cumarins and saponis in the seeds and leucoantocianidines, tannins, cardiotonic heterosides in all fractions tested. The EO was active against Staphylococcus aureus ATCC 25923 and showed acute toxicity against Artemia salina. The HF and BF showed leishmanicidal activity against Leishmania amazonensis promastigote forms. The BF and MF showed antioxidant activity against DPPH radicals. The EO and the fractions obtained of P. emarginatus seeds showed antinociceptive activity, in acetic acid-induced abdominal writhing, formalin test and hot plate test. The cream containing EO and HF produced potential activity against burns. The EO showed antiulcer activity in ethanol absolute, indomethacin and HCl/ethanol models, anti-inflammatory activity in the pleurisy induced by carrageenan and antitumoral activities for all tumor cells lines used in this work. These results are promising and the Pterodon emarginatus Vogel seeds seem have actives components might be a new therapeutic option.

Submitted by Liliane Ferreira (ljuvencia30@gmail.com) on 2018-11-28T12:01:20Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Marcos Vinícius Pereira Pinto - 2017.pdf: 1766318 bytes, checksum: 434666d4b4d8dea79ee04fb075107a9b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-11-28T13:49:22Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Marcos Vinícius Pereira Pinto - 2017.pdf: 1766318 bytes, checksum: 434666d4b4d8dea79ee04fb075107a9b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-28T13:49:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Marcos Vinícius Pereira Pinto - 2017.pdf: 1766318 bytes, checksum: 434666d4b4d8dea79ee04fb075107a9b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-09-22 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Genetic diversity is a fundamental component for the survival of any species over evolutionary time, because it is the repertoire of possible responses to environmental pressures, which are dynamic and constant. Knowledge of the magnitude and structuring patterns of this diversity allows to understand how environmental and microevolutionary factors have interacted over time and shaped the populations. Microsatellite markers have been the most used molecular tool in recent decades for mapping studies of diversity and genetic structure due to its high degree of polymorphism, genomic abundance and codominant nature. For native species these markers rarely are available, however, the regions flanking the microsatellites are usually conserved among evolutionarily close species, which allows the transfer of these markers. Pterodon emarginatus Vogel, popularly known as Sucupira branca, is a tree plant belonging to the legume family. This species is widely used for medicinal purposes because of the broad properties of its secondary compounds. In addition, it provides rigid wood of interest for construction and is also used as an ornamental species. Despite the substantial number of studies directed to the medicinal potential, little is known about the genetic diversity present in this species. Therefore, the objectives of the work were to transfer to P. emarginatus microsatellite markers developed for Dipteryx alata and to access the diversity and genetic structure in natural populations of P. emarginatus. For this, the cross-amplification of 25 primers were tested and 12 natural populations were genotyped for 6 loci. Of the 25 primers tested, 2 (8%) showed good amplification and polymorphism pattern. The set of markers used revealed a total of 45 alleles for the 12 populations evaluated, with a mean of 7.667 per locus. This value ranged from 4 (DaE12) to 22 (PVESTBR067). Populations showed intermediate levels of genetic diversity (He = 0.555) and greater variability within populations than among populations. Small but significant levels of inbreeding were detected due to both the mating system and the population subdivision (f = 0.07; Fst = 0.073). These results support that the species presents a mixed mating system, being preferentially allogama. The pattern of divergence among populations was moderately structured in space (Mantel = 0.440, p <0.002) indicating a profile of large continuous populations with significant levels of gene flow over distances up to approximately 400 km. / A diversidade genética é componente fundamental para a sobrevivência de qualquer espécie ao longo do tempo evolutivo, isto porque configura-se como o repertório de possíveis respostas ás pressões ambientais, que são dinâmicas e constantes. O conhecimento da magnitude e dos padrões de estruturação dessa diversidade permite entender como fatores ambientais e microevolutivos tem interagido ao longo do tempo e moldado as populações, possibilitando melhor uso e conservação. Marcadores microssatélites tem sido a ferramenta molecular mais utilizada nas últimas décadas para estudos de mapeamento de diversidade e estrutura genética, devido ao seu alto grau de polimorfismo, abundância genômica e natureza codominante. Para espécies nativas raramente esses marcadores estão disponíveis, no entanto, as regiões que flanqueiam os microssatélites costumam ser conservadas entre espécies evolutivamente próximas, o que possibilita a transferência desses marcadores. Pterodon emarginatus Vogel, popularmente conhecida como Sucupira Branca, é uma planta arbórea pertencente à família das leguminosas. Esta espécie é amplamente utilizada com propósitos medicinais devido ao vasto potencial terapêutico de seus compostos secundários. Além disso, fornece madeira rígida de interesse para construção civil e também é utilizada como espécie ornamental. Apesar da grande quantidade de estudos direcionados para o potencial medicinal, pouco se sabe sobre a diversidade genética presente nessa espécie. Diante disso, os objetivos do trabalho foram transferir para P. emarginatus marcadores microssatélites desenvolvidos para Dipteryx alata e acessar a diversidade e estrutura genética em populações naturais de P. emarginatus. Para isso, foi testada à amplificação cruzada de 25 iniciadores e 12 populações naturais foram genotipadas para 6 locos microssatelites. Dos 25 iniciadores testados, 2 (8%) apresentaram bom padrão de amplificação e polimorfismo. O conjunto de marcadores utilizados revelou um total de quarenta e cinco alelos, com uma média de 7,667 por loco. Esse valor variou de 4 (DaE12) a 22 (PVESTBR067). As populações apresentaram nível intermediário de diversidade genética (He=0,555) e maior variabilidade dentro de populações do que entre populações. Foram detectados pequenos, porém significativos, níveis de endogamia devido tanto ao sistema de acasalamento quanto a subdivisão populacional (f= 0,07; Fst= 0,073). Esses resultados suportam que a espécie apresenta sistema misto de acasalamento. O padrão de divergência entre as populacionais demonstrou-se moderadamente estruturado no espaço (Mantel= 0,440; p<0,002) indicando um perfil de grandes populações continuas, com níveis significativos de fluxo gênico em distancias até aproximadamente 400 km.

Orientador: Mary Ann Foglio / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T12:01:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Grando_Rogerio_M.pdf: 3627366 bytes, checksum: 922ac0cfe7471065c3f3722c5e2b97bf (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O uso de plantas medicinais é uma prática comum na medicina popular, entretanto, seu uso indiscriminado pode trazer sérios danos à saúde. Portanto é de fundamental importância estudos que comprovem a eficácia, segurança e qualidade de uma espécie vegetal. Estudos conduzidos pelo nosso grupo de pesquisa comprovaram atividade anti-inflamatória, antinociceptiva e antiproliferativa do extrato diclorometano de Pterodon pubescens Benth. e de três vouacapanos isolados e identificados a partir desta espécie. Com base nesses resultados aliados as informações do uso popular dos chás da espécie, o presente trabalho teve por objetivo avaliar a eficácia do extrato aquoso de P. pubescense, avaliar a estabilidade de micropartículas produzidas com esse extrato, e a atividade anti-artrica do extrato diclorometano da espécie. Estudos fitoquímicos desses extratos demonstraram que o extrato apolar continha Geranilgeraniol, composto não detectado no extrato aquoso. Já os compostos vouacapanos foram detectados em concentrações análogas no extrato aquoso (Ppa) como no extrato diclorometano (Pp). A atividade farmacológica foi observada através dos modelos de contorções abdominais induzido por acido acético, lambedura de pata induzido por formalina, hiperalgésia e edema de pata induzido por carragenina. O extrato diclorometano (Pp) demonstrou melhor eficácia (Contorção abdominal inibição de 53% Ppa e 71% Pp ANOVA p<0,05; Formalina fase 1: Ppa Inativo; Pp 77,3% ANOVA p<0,05, fase 2: Ppa 85,6% Pp 98,0% ANOVA p<0,05 e Edema da pata Ppa 50% na dose de 100mg/kg Pp 50% na dose de 100mg/kg ANOVA p<0,05) quando comparado ao extrato aquoso. Esses dados nos sugeriram um provável efeito sinérgico dos compostos vouacapanos e geranilgeraniol aumentando o efeito antinociceptivo do extrato de diclorometano. A atividade anti-artrite reumatoide do extrato diclometânico foi evidenciado pela redução do índice de artrite, índice de alodínia e diminuição do número de linfócitos. Nesse ultimo modelo também foi evidenciado que o tratamento contínuo durante 14 dias, não interferiu nas funções renais e hepáticas dos animais. Também foi observado que o processo de microencapsulação por atomização preservou as características físicas e químicas do extrato aquoso durante o teste de estabilidade, sendo uma alternativa para o prolongamento do tempo de armazenamento desse extrato / Abstract: Medicinal plants have been used to treat various diseases; however, the random use can cause serious damage. Pterodon pubescens Benth. (Sucupira) seeds have been widely used by local people for treatment of various inflammatory processes. Previous studies showed that geranylgeraniol and three voucapans isolated and identified from this species were involved with anti-inflammatory and antinociceptive activity. Brazilian folkmedicine employ teas prepared from this species seeds to treat pain. The ethno pharmacological data combined with the results previously produced by our research group promoted the present study that proposed the efficacy evaluation of the aqueous P. pubescense extract on antinociceptive experimental models, stability of microparticles produced from the extract. Also since the plant species is described in folk medicine for treatment of chronic pain, arthritis experimental model induced by CFA (Complet Freund's Adjuvants) were undertaken.Phytochemical comparison evaluation showed that the dichloromethane(Pp) extract contained geranylgeraniol, and furan diterpenes (vouacapans) whereas only vouacapans were detected in the polar aqueous extract (Ppa) . The pharmacological activity was measured by writhing induced by acetic acid, paw licking induced by formalin hyperalgesia and paw edema induced by carrageenan models. The dichloromethane extract (Pp) showed better efficacy in comparison to the aqueous extract (inhibition of writhing by 53% Ppa and 71% Pp ANOVA p <0.05; Formalin phase 1: Idle Ppa; inhibition of 77.3% Pp ANOVA p <0.05, Phase 2: Inhibition of 98.0% in Pp and 85,6 in Ppa ANOVA p <0.05. Ppa inhibited paw edema in 50% at a dose of 100mg/kg Pp and Ppa. ANOVA p <0.05) therefore the nonpolar extract (Pp) was chosen to go forward with the arthritis experimental model. Furthermore this data corroborates previous studies that suggest a synergistic effect of geranylgeraniol and vouacapans on the antinociceptive activity . The dichlorometanic extract (Pp) was tested using 30, 100 and 300 mg/kg oral doses during 14 days treatment . The results indicated that Pp protected rats against CFA induced arthritis by decreasing paw volume (30% compared to control group ANOVA p>0,05) and increasing nociceptive threshold (42,84% compared to control group ANOVA p>0,005). The extract showed no toxic effect against liver and kidneys demonstrating immunosuppressive effect by reducing significant dose-dependent lymphocytes. The present investigation, suggest that Pp extract has an anti-arthritic activity. Moreover sub-acute treatment did not cause significant changes in biochemical parameters. However further studies are still required to assess the possible immunosuppressive action of this extract / Mestrado / Fármacos, Medicamentos e Insumos para Saúde / Mestre em Biociências e Tecnologia de Produtos Bioativos

Orientadores: José Francisco Höfling, Mary Ann Foglio / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-24T00:11:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Roque_FabianaPaganotti_M.pdf: 3230605 bytes, checksum: 40a2f5ebcd24ad13b6c7e4064b29c923 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Pesquisas que visam extrair e identificar compostos isolados de plantas tem sido levada a efeito há muitos anos, com o intuito de descobrir compostos com ação antimicrobiana e produzir medicamentos devido ao aumento da resistência apresentada pelos microrganismos aos antimicrobianos disponíveis no mercado. A ação dos compostos presentes na semente, casca, folha e frutos das plantas do gênero Pterodon spp. tem sido estudadas em bactérias, leveduras e protozoários, estando relacionada à ação antimicrobiana, antiinflamatória, antiproliferativa e contra cercárias de Schistossoma mansoni. Leveduras do gênero Candida spp., bactérias do gênero Streptococcus spp. e Staphylococcus spp. estão associadas à formação do biofilme em dispositivos médicos, sendo esta uma estratégia para resistir aos agentes antimicrobianos e às células do sistema imunológico. O composto denominado FrB, identificado através de espectrometria de massas com esqueleto vouacapano, e os compostos geranilgeraniol, éster 6?,7?-diidroxivouacapano-17? oato de metila e os isômeros éster 6?-hidroxi-7?-acetoxi-vouacapano-17?-oato de metila e acetoxi-7?- hidroxi-vouacapano-17?-oato de metila, foram testados através da técnica de concentração inibitória mínima (CIM) em quatro espécies de Candida spp, e nas bactérias Streptococcus mutans e Staphylococcus aureus. Foi observada CIM de 2mg/mL apenas nas quatro cepas de Candida spp., não sendo ativo contra as bactérias. Através da microscopia eletrônica de varredura e de transmissão, observou-se que FrB provocou modificações na parede celular fúngica. O composto diterpeno com esqueleto vouacapano foi testado no biofilme de Candida albicans SC 5314 e verificou-se uma inibição de 70% do biofilme em formação na concentração de 1mg/mL. No entanto, nenhum dos quatro compostos foram ativos contra bactérias. A partir dos resultados obtidos, podemos afirmar que o vouacapano, isolado do óleo da semente de Pterodon pubescens, apresenta atividade antifúngica, sendo uma potencial fonte para produção de medicamentos a base de plantas / Abstract: Research aimed at identifying and extracting compounds isolated from plants have been under a many years ago with the aim of discovering bioactive compounds and produce phyto due to the increased resistance of microorganisms to the antimicrobial commercially used. The action of bioactive compounds present in the seeds, bark, leaves and fruits of plants of the genus Pterodon spp. has been studied in bacteria, yeasts and protozoa, is related to antimicrobial, antiinflammatory, antiproliferative and against infection by Schistosoma mansoni. Yeasts of the genus Candida spp. and bacteria of the genus Streptococcus spp. and Staphylococcus spp. are associated with biofilm formation in medical devices, which is a strategy to resist antimicrobial agents and cells of the immune system. The compound FrB named, isolated from the seed oil Pterodon pubescens and identified by mass spectrometry with skeleton vouacapan, and the compounds geranylgeraniol, éster 6?,7?-dihydroxyvouacapan-17? oato de metila and ester 6?-hidroxi-7?-acetoxi-vouacapan-17?-oate metil e acetoxi-7?- hidroxi-vouacapan-17?-oato metil were tested using the technique of minimal inhibitory concentration (MIC) in four species of Candida spp, and bacteria Streptococcus mutans and Staphylococcus aureus. Was observed MIC of 2 mg/mL to the four strains of Candida spp., although was not active against bacteria. By scanning and transmission electron microscopy, it was observed that FrB caused changes in the fungal cell wall. The diterpen vouacapan was tested on Candida albicans SC 5314 biofilm and there was a 70% inhibition of biofilm formation in a concentration of 1mg/mL. From the results obtained, we can affirm that diterpen skeleton with vouacapan, isolated from the seed oil of Pterodon pubescens, has antifungal activity and is a potential source for the production of plant based medicinal / Mestrado / Microbiologia e Imunologia / Mestra em Biologia Buco-Dental

Fundação Carlos Chagas Filho de Amparo a Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / O gênero Pterodon pertence à família das Papilonaceas e inclui cinco espécies nativas do Brasil: P. pubescens Benth., P. emarginatus Vog., P. apparicioi Pedersoli e P. abruptus Benth., sendo a espécie objeto deste estudo a P. polygalaeflorus Benth.. Seus frutos são livremente comercializados em mercados da flora medicinal e utilizados pela medicina popular devido a propriedades anti-reumática, analgésica, antiinflamatória, dentre outros efeitos associados a esses frutos. O principal uso popular está relacionado ao efeito antiartrítico que parece se encontrar na fração oleosa do fruto. O objetivo deste trabalho foi avaliar o extrato etanólico de Pterodon polygalaeflorus (EEPpg) quanto ao seu potencial antiinflamatório crônico através do modelo de artrite induzida por colágeno (CIA) e seu efeito sobre os linfócitos in vitro, bem como sobre a expansão de células MAC-1+ induzida por adjuvante completo de Freund (AFC). A caracterização química do EEPpg foi realizada por cromatografia em camada delgada (TLC), cromatografia líquida de alta performance (HPLC) e cromatografia gasosa acoplada a espectrômetro de massa (GC-MS), através dos quais uma gama de compostos, incluindo terpenóides de polaridades variadas e flavonóides, foram observados. No modelo de CIA, o EEPpg reduziu significativamente parâmetros associados ao desenvolvimento e progressão da doença e à severidade da doença , inibindo em até 99% o seu desenvolvimento e levando a ausência de sinais clínicos evidentes após tratamento com as menores doses do extrato (0,01 mg/kg e 0,001 mg/kg). O tratamento com EEPpg também reduziu características histopatológicas típicas de articulações de animais com CIA, que também são observadas na artrite reumatóide. O EEPpg reduziu significativamente o peso dos linfonodos dos camundongos, bem como o número absoluto de segmentados, monócitos e linfócitos no sangue. In vitro, O EEPpg mostrou uma atividade anti-proliferativa dos esplenócitos estimulados com concanavalina A (Con A) ou lipopolissacarídeo (LPS) analisada através do ensaio de redução do sal de tetrazólio MTT, corroborada pelo seu efeito sobre o ciclo celular de linfócitos estimulados com Con A, onde o EEPpg nas concentrações de 5, 10 e 20 &#956;g/mL reduziu significativamente, de maneira concentração-dependente, o número de células nas fases S+G2/M e aumentou na fase G0/G1 do ciclo celular. O efeito anti-proliferativo do EEPpg parece também estar associado ao aumento da apoptose dos linfócitos após estimulação com Con A, com aumento estatisticamente significativo no percentual de células mortas por apoptose nas maiores concentrações . O EEPpg inibiu a expansão de células Mac-1+ induzida por AFC no baço, porém não no peritônio. Esse resultado sugere um efeito inibidor do EEPpg sobre a migração celular para as articulações artríticas. Esses resultados contribuem para a validação do uso popular de P. polygalaeflorus contra doenças relacionadas a processos inflamatórios e imunes, sobretudo na artrite reumatóide, antes nunca demonstrado. / The genus Pterodon belongs to the family Papilonaceas and includes five native species of Brazil: P. pubescens Benth., P. emarginatus Vog., P. apparicioi Pedersoli and P. abruptus Benth., being the object of this study the species P. polygalaeflorus Benth . Its fruits are freely traded in markets and medicinal plants used in folk medicine due to anti-rheumatic, analgesic, antiinflammatory, among other effects associated with these fruits. The main use is related to the popular anti-arthritic effect that seems to be found in oily fraction of the fruit. The aim of this study was to evaluate the ethanol extract of Pterodon polygalaeflorus (EEPpg) for their potential anti-inflammatory chronic through the model of collagen-induced arthritis (CIA) and its effect on lymphocytes in vitro, as well as the MAC-cell expansion 1 + induced by Freund's complete adjuvant (CFA). The chemical characterization of EEPpg was performed by thin layer chromatography (TLC), high-performance liquid chromatography (HPLC) and gas chromatography coupled with mass spectrometry (GC-MS), through which a range of compounds, including terpenoids polarity varied and flavonoids, were observed. In model of CIA, EEPpg significantly reduced parameters associated with the development and progression of disease and disease severity, inhibiting up to 99% its development and leading to the absence of obvious clinical signs after treatment with lower doses of the extract (0,01 mg/kg and 0.001 mg/kg). Treatment with EEPpg also reduced histopathological features typical of arthritic joints that are also observed in rheumatoid arthritis. The EEPpg significantly reduced the weight of the lymph nodes of mice as well as the absolute number of segmented, monocytes and lymphocytes in the blood. In vitro, EEPpg showed an anti-proliferative activity of splenocytes stimulated with concanavalin A (Con A) or lipopolysaccharide (LPS) analyzed by testing to reduce the tetrazolium salt MTT, supported by its effect on the cell cycle of lymphocytes stimulated with Con A, where the EEPpg at concentrations of 5, 10 and 20 mg/mL significantly reduced in concentration-dependent manner, the number of cells in phases S + G2 / M and increased G0/G1 phase of cell cycle. The anti-proliferative EEPpg seems also to be associated with increased apoptosis of lymphocytes after stimulation with Con A, with a statistically significant increase in the percentage of dead cells by apoptosis at higher concentrations. The EEPpg inhibited the expansion of Mac-1 + cells induced by AFC in the spleen but not in the peritoneum. This suggests an inhibitory effect on cell migration by EEPpg into arthritic joints. These results help to validate the popular use of P. polygalaeflorus against diseases related to inflammatory and immune disorders, especially rheumatoid arthritis, never shown before.

Fundação Carlos Chagas Filho de Amparo a Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / O gênero Pterodon pertence à família das Papilonaceas e inclui cinco espécies nativas do Brasil: P. pubescens Benth., P. emarginatus Vog., P. apparicioi Pedersoli e P. abruptus Benth., sendo a espécie objeto deste estudo a P. polygalaeflorus Benth.. Seus frutos são livremente comercializados em mercados da flora medicinal e utilizados pela medicina popular devido a propriedades anti-reumática, analgésica, antiinflamatória, dentre outros efeitos associados a esses frutos. O principal uso popular está relacionado ao efeito antiartrítico que parece se encontrar na fração oleosa do fruto. O objetivo deste trabalho foi avaliar o extrato etanólico de Pterodon polygalaeflorus (EEPpg) quanto ao seu potencial antiinflamatório crônico através do modelo de artrite induzida por colágeno (CIA) e seu efeito sobre os linfócitos in vitro, bem como sobre a expansão de células MAC-1+ induzida por adjuvante completo de Freund (AFC). A caracterização química do EEPpg foi realizada por cromatografia em camada delgada (TLC), cromatografia líquida de alta performance (HPLC) e cromatografia gasosa acoplada a espectrômetro de massa (GC-MS), através dos quais uma gama de compostos, incluindo terpenóides de polaridades variadas e flavonóides, foram observados. No modelo de CIA, o EEPpg reduziu significativamente parâmetros associados ao desenvolvimento e progressão da doença e à severidade da doença , inibindo em até 99% o seu desenvolvimento e levando a ausência de sinais clínicos evidentes após tratamento com as menores doses do extrato (0,01 mg/kg e 0,001 mg/kg). O tratamento com EEPpg também reduziu características histopatológicas típicas de articulações de animais com CIA, que também são observadas na artrite reumatóide. O EEPpg reduziu significativamente o peso dos linfonodos dos camundongos, bem como o número absoluto de segmentados, monócitos e linfócitos no sangue. In vitro, O EEPpg mostrou uma atividade anti-proliferativa dos esplenócitos estimulados com concanavalina A (Con A) ou lipopolissacarídeo (LPS) analisada através do ensaio de redução do sal de tetrazólio MTT, corroborada pelo seu efeito sobre o ciclo celular de linfócitos estimulados com Con A, onde o EEPpg nas concentrações de 5, 10 e 20 &#956;g/mL reduziu significativamente, de maneira concentração-dependente, o número de células nas fases S+G2/M e aumentou na fase G0/G1 do ciclo celular. O efeito anti-proliferativo do EEPpg parece também estar associado ao aumento da apoptose dos linfócitos após estimulação com Con A, com aumento estatisticamente significativo no percentual de células mortas por apoptose nas maiores concentrações . O EEPpg inibiu a expansão de células Mac-1+ induzida por AFC no baço, porém não no peritônio. Esse resultado sugere um efeito inibidor do EEPpg sobre a migração celular para as articulações artríticas. Esses resultados contribuem para a validação do uso popular de P. polygalaeflorus contra doenças relacionadas a processos inflamatórios e imunes, sobretudo na artrite reumatóide, antes nunca demonstrado. / The genus Pterodon belongs to the family Papilonaceas and includes five native species of Brazil: P. pubescens Benth., P. emarginatus Vog., P. apparicioi Pedersoli and P. abruptus Benth., being the object of this study the species P. polygalaeflorus Benth . Its fruits are freely traded in markets and medicinal plants used in folk medicine due to anti-rheumatic, analgesic, antiinflammatory, among other effects associated with these fruits. The main use is related to the popular anti-arthritic effect that seems to be found in oily fraction of the fruit. The aim of this study was to evaluate the ethanol extract of Pterodon polygalaeflorus (EEPpg) for their potential anti-inflammatory chronic through the model of collagen-induced arthritis (CIA) and its effect on lymphocytes in vitro, as well as the MAC-cell expansion 1 + induced by Freund's complete adjuvant (CFA). The chemical characterization of EEPpg was performed by thin layer chromatography (TLC), high-performance liquid chromatography (HPLC) and gas chromatography coupled with mass spectrometry (GC-MS), through which a range of compounds, including terpenoids polarity varied and flavonoids, were observed. In model of CIA, EEPpg significantly reduced parameters associated with the development and progression of disease and disease severity, inhibiting up to 99% its development and leading to the absence of obvious clinical signs after treatment with lower doses of the extract (0,01 mg/kg and 0.001 mg/kg). Treatment with EEPpg also reduced histopathological features typical of arthritic joints that are also observed in rheumatoid arthritis. The EEPpg significantly reduced the weight of the lymph nodes of mice as well as the absolute number of segmented, monocytes and lymphocytes in the blood. In vitro, EEPpg showed an anti-proliferative activity of splenocytes stimulated with concanavalin A (Con A) or lipopolysaccharide (LPS) analyzed by testing to reduce the tetrazolium salt MTT, supported by its effect on the cell cycle of lymphocytes stimulated with Con A, where the EEPpg at concentrations of 5, 10 and 20 mg/mL significantly reduced in concentration-dependent manner, the number of cells in phases S + G2 / M and increased G0/G1 phase of cell cycle. The anti-proliferative EEPpg seems also to be associated with increased apoptosis of lymphocytes after stimulation with Con A, with a statistically significant increase in the percentage of dead cells by apoptosis at higher concentrations. The EEPpg inhibited the expansion of Mac-1 + cells induced by AFC in the spleen but not in the peritoneum. This suggests an inhibitory effect on cell migration by EEPpg into arthritic joints. These results help to validate the popular use of P. polygalaeflorus against diseases related to inflammatory and immune disorders, especially rheumatoid arthritis, never shown before.

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2015-10-28T14:21:00Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Carolina de Fátima Reis - 2015.pdf: 1195189 bytes, checksum: e77613f54e17ab204bf8a94706552ef6 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-10-28T14:47:30Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Carolina de Fátima Reis - 2015.pdf: 1195189 bytes, checksum: e77613f54e17ab204bf8a94706552ef6 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-28T14:47:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Carolina de Fátima Reis - 2015.pdf: 1195189 bytes, checksum: e77613f54e17ab204bf8a94706552ef6 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-06-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The use of medicinal plants for the treatment of hypertension treatment has been extensively studied. The genus Pterodon spp. Vogel (Fabaceae), popularly known as sucupira, has five native Brazilian cerrado species. Studies demonstrated that the Pterodon spp has antispasmodic and myorelaxant activities. Phytochemical studies of sucupira found furanic diterpenes with vouacapanic skeleton in their fruits, and the therapeutics activities from this gender are essentially attributed to these compounds. The aim of this study was to evaluete the possible vasorelaxant activity and the mechanisms of action of the oil-resin of sucupira (SOR) and its isolated diterpene, methyl-6α-acetoxy-7β-hydroxyvouacapan-17β-oate in isolated rat aorta preparations. For comparison, verapamil curves (1 nM – 100 μM) were also obtained. The results demonstrated that both, S0R (0 – 56 μg/mL) and the isolated diterpene (0 – 48 μg/mL) have a reversible concentration-dependent vasorrelaxant activity. Endothelium denudation did not impair in the relaxant effect of both, ORS and the diterpene. Aortic rings KCl-stimulated obtained a lower IC50 value than rings contracted with phenylephrine under increasing concentrations of the tested substances. The SOR and diterpene relaxant activity was not impaired when nonselective K+ channels blockers were used (Tetraethylammonium). The use of cyclopiazonic acid (SERCA inhibitor) indicated that there was no involvement of the Ca2+ reuptake by sarcoplasmatic reticulum and the use of ODQ (an inhibitor of guanylyl cyclase) and MDL-12,330A (an inhibitor of adenylyl cyclase), showed that the 3, 5- cyclic guanosine monophosphate (cGMP) and 3',5'-cyclic adenosine monophosphate (cAMP) pathways were not involved in SOR relaxant activity. However, the results indicate a possibly activity of the soluble guanylyl ciclase on diterpene relaxant effect. Both, SOR and isolated diterpene inhibited the CaCl2 induced contractions in aortic rings stimulated with phenylephrine (0.1μM) or Bay K8644 (a Cav1.2 channel activator; 1μM) and by depolarizing KCl solution (40 mM). Computational molecular docking studies demonstrated that the vasodilator effect of diterpene relies on blocking the Cav1.2 channel, and patch clamp results showed that diterpene substantially decreased the ionic current through Cav1.2 in freshly dissociated vascular smooth muscle cells. These findings suggest that SOR and its isolated diterpene induce endothelium-independent vascular relaxation by blocking the L-type Ca2+ channel (Cav1.2). / O uso de plantas medicinais para o tratamento da hipertensão tem sido bastante estudado. O gênero Pterodon spp. Vogel (Fabaceae), popularmente conhecido como sucupira, possui cinco espécies nativas do Cerrado brasileiro. Estudos indicam que Pterodon spp possui efeito antiespasmódico e miorrelaxante. A caracterização fitoquímica da sucupira constatou a presença de diterpenos com esqueleto furânico do tipo vouacapânico em seus frutos, sendo esses metabólitos provavelmente responsáveis pelas funções terapêuticas do gênero. O objetivo deste estudo foi avaliar a possível atividade vasorrelaxante bem como os possíveis mecanismos de ação do oleorresina de sucupira (ORS) e do seu diterpeno isolado, 6α-acetoxi-7β-hidroxivouacapano-17β-oato de metila, em preparações isoladas de aorta de ratos. Para fins de comparação, curvas para verapamil (1 nM – 100 μM) foram obtidas. Os resultados indicaram que tanto o ORS (0 – 56 μg/mL) quanto o diterpeno (0 – 48 μg/mL) possuem atividade vasorrelaxante reversível de maneira concentração-dependente. A remoção do endotélio vascular não alterou a atividade tanto do ORS quanto do seu diterpeno. Preparações estimuladas por KCl obtiveram um menor valor de IC50 que preparações previamente contraídas por fenilefrina quando submetidas a concentrações crescentes das substâncias teste. O relaxamento induzido pelo ORS e diterpeno não foi alterado na presença do inibidor não seletivo de canal de K+, tetraetilamônio. Não houve envolvimento quanto à mobilização intracelular de Ca2+ quando as preparações foram incubadas com inibidor da SERCA, o ácido cliclopiazônico. A utilização de ODQ, inibidor da guanilato ciclase solúvel e MDL-12,330A, inibidor da adenilato ciclase, demonstrou que as vias dos nucleotídeos cíclicos guanosina 3, 5- monofosfato cíclico (GMPc) e adenosina 3',5'-monofosfato cíclico (AMPc), também não estão envolvidas na atividade do ORS, embora suponha-se possível envolvimento da guanilato ciclase solúvel sGC na atividade vasorrelaxante do diterpeno. Ambos, ORS e diterpeno, impediram a contração induzida por solução de CaCl2 em preparações estimuladas por fenilefrina (0,1μM) ou Bay K8644 (ativador específico de Cav1.2; 1μM) e por estímulo despolarizante com solução de KCl (40 mM). Estudos de docking molecular demonstraram que o efeito vasodilatador do diterpeno baseia-se no bloqueio de Cav1.2 e os resultados obtidos pela técnica de patch-clamp com o diterpeno mostraram substancial diminuição da corrente iónica através Cav1.2 em células de músculo liso vascular recentemente dissociados. Estes resultados sugerem que ORS e seu diterpeno isolado induzem relaxamento vascular endotélio independente, bloqueando o canal de Ca2+ do tipo L (Cav1.2).

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-02-23T12:52:23Z No. of bitstreams: 1 Fenanda Lucia Passos Fukahori.pdf: 1391699 bytes, checksum: f829980f477d48fffc2d9c919805108e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-23T12:52:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fenanda Lucia Passos Fukahori.pdf: 1391699 bytes, checksum: f829980f477d48fffc2d9c919805108e (MD5) Previous issue date: 2017-02-16 / The objective of this study was to standardize a method for the diagnosis of inflammatory foci using infrared thermometry in healthy dogs and dogs that exhibit clinical signs of inflammation in the coxofemoral joint and to investigate the anti-inflammatory effect of Sucupira seed in dogs with inflammatory diseases of the coxofemoral joint. For the standardization of the use of the thermograph, 31 dogs, adults, of different races from the outpatient clinic of the UFRPE. All animals were referred to an air-conditioned room at 25 ° C, relative air humidity above 70%, where after a period of 20min the rectal temperature was recorded using a conventional clinical thermometer and the temperature on the axis of the Articulation in anteroposterior and lateral plugs by a digital thermograph for capturing electromagnetic waves in the infrared spectral band model TG165 from Flir Systems. In this work, in order to minimize the external interferences on the reading of the equipment, a PVC cannula coated with frosted black paint, with a length of 30cm was coupled to the equipment outlet. At the time of recording the temperature readings, the cannula and the equipment were juxtaposed over the desired region, after adequate positioning of the animal in each record. The focus, under these conditions, was equivalent to an area of 1.23cm2. The emissivity of the equipment was adjusted to e = 0.95 in all measurements. From a total of 31 animals evaluated, all previously submitted to a clinical evaluation, there was a significant difference between the normalized joint temperature values found for the groups of animals with inflammation in relation to the animals without articular disease, showing sensitivity of 80, 0%, specificity of 87.5% and method accuracy of 83.87%. In order to obtain the sucupira seed extract, it was prepared in preparations with Biotônico Fontoura in the proportion of 15% (m / v), generating an extract that was applied in the dose and 300 mg / kg (vo) in animals clinically positive for inflammation in the joint Hip. At times of t = 0, t = 10 days and t = 21 days, the body temperature and the temperature on the joint were measured in the lateral dimension (thermography), defining the FT factor as a parameter to measure the thermal transformations on the inflammation. As a result, it was verified that in sucupira-treated animals, significant changes occurred in the FT factor, denoting the positive effect of the extract on the containment of the inflammatory process associated with the inflammation on the joint. Animals treated with meloxican (0.1mg / kg) did not present significant variations of the FT factor, showing little effect on the inflammatory process. The rate of infinitesimal FT variation in animals treated with sucupira extract was 61% more effective than FT obtained for animals treated with meloxican. No significant changes in biochemical parameters, blood count and leukogram were observed in blood samples obtained after 21 days of treatment with sucupira extract. / Este trabalho teve como objetivo de propor a padronização de um método para o diagnóstico de focos inflamatórios, mediante o emprego da termometria por infravermelho, em cães sadios e cães que exibem sinais clínicos de inflamação na articulação coxofemoral e de investigar a o efeito anti-inflamatório da semente de sucupira em cães portadores de doenças de ordem inflamatória da articulação coxofemoral. Para a padronização da utilização do termógrafo foram avaliados 31 cães, adultos, de diferentes raças provenientes do ambulatório do HV da UFRPE. Todos os animais foram encaminhados para uma sala climatizada a 25°C, umidade relativa do ar acima de 70%, onde após um período de 20min era efetuado o registro da temperatura retal, mediante uso de termômetro clínico convencional e da temperatura sobre o eixo da articulação coxofemoral em tomadas anteroposterior e lateral por um termógrafo digital de captura de ondas eletromagnéticas na faixa espectral do infravermelho modelo TG165 da Flir Systems. Neste trabalho, afim de que fossem minimizadas as interferências externas sobre a leitura do equipamento, foi acoplado à saída do equipamento uma cânula de PVC revestida com película tinta preto fosco, com 30cm de comprimento. No momento do registro das leituras de temperatura, a cânula e o equipamento eram justapostos sobre a região desejada, após posicionamento adequado do animal em cada registro. O foco, nestas condições foi equivalente à uma área de 1,23cm2. A emissividade do equipamento foi ajustada para e = 0,95 , em todas aferições. De um total de 31 animais avaliados, todos submetidos previamente à uma avaliação clínica, verificou-se diferença significativa entre os valores normalizados da temperatura da articulação encontrados para os grupos de animais com inflamação em relação aos animais sem doença articular, apresentando sensibilidade de 80,0%, especificidade de 87,5% e precisão do método de 83,87%. Para a obtenção do extrato de semente de sucupira foi confeccionado em preparações com Biotônico Fontoura na proporção de 15% (m/v), gerando um extrato que foi aplicado na dose e 300mg/Kg (v.o.) em animais clinicamente positivo para inflamação na articulação coxofemoral. Nos tempos de t=0, t=10dias e t=21dias, tomadas de temperatura corpórea (termômetro clínico) e temperatura sobre a articulação na dimensão lateral (termografia), definindo-se o fator FT, como parâmetro para dimensionar as transformações térmicas sobre a inflamação. Como resultado verificou-se que em animais tratados com sucupira, ocorreram transformações significativas no fator FT denunciando efeito positivo do extrato na contenção de processo inflamatório associado à inflamação sobre a articulação. Animais tratados com meloxican (0,1mg/Kg), não apresentaram variações significativas do fator FT, apresentando pouco efeito sobre o processo inflamatório. A taxa de variação infinitesimal de FT em animais tratados com extrato de sucupira foi 61% mais eficaz do que FT obtido para animais tratados com meloxican. Não foram observadas alterações significativas nos parâmetros bioquímicos, no hemograma e leucograma em amostras de sangue obtidas após 21 dias de tratamento com extrato de sucupira.

Foi desenvolvida uma nova metodologia de análise de extratos e partes de plantas medicinais, via espectrometria de massas (MS) com infusão direta de amostra, técnica analítica denominada fingerprinting ou \"impressão digital\" química. Essa abordagem, que envolve mínimo prepraro de amostra, foi aplicada visando detectar as condições e as épocas adequadas para cultivo e/ou coleta de produtos naturais, permitindo a obtenção de uma matéria-prima vegetal com princípios ativos e concentrações padronizadas, assim como auxiliar no reconhecimento e na compreensão das interações ecológicas do vegetal com seu ambiente. A metodologia analítica envolveu MS com fonte de ionização por electrospray (ESI) nos modos positivo e negativo e experimentos de fragmentação de íons de interesse (MS/MS) por inserção direta do extrato diluído e frações ativas de Maytenus ilicifolia, de extratos de Arrabidaea chica de diferentes acessos (origens geográficas), assim como óleos de Pterodon pubescens e as amêndoas e o pedúnculo de diferentes clones de Anacardium occidentale. A caracterização das amêndoas e pedúnculos de A. occidentale, assim como de seus respectivos clones por meio do perfil de seus constituintes químicos foi realizada com sucesso. Na extração da amêndoa empregando-se éter, foi possível caracterizar o perfil de triacilgliceróis (TAG) por ESI(+) e ácidos graxos livres por ESI(-). Na extração do suco do pedúnculo empregando-se isopropanol, foram detectados íons referentes aos ácidos anacárdicos por ESI(-). Foram avaliados os principais parâmetros que possibilitam a ionização por ESI, tais como voltagens do capilar, cone e do cone extrator, e a influência de cada um destes parâmetros no perfil obtido nos espectros de ESI(-) do suco. Para A. chica a metodologia mostrou-se eficiente na bioprospecção de antocianidinas e dentre os nove acessos analisados, foi possível indicar aquele que produziu maior quantidade de material corante em relação a biomassa. Também foram avaliadas metodologias de extração por tratamento enzimático, o qual ocasionou aumento da intensidade de agliconas, provavelmente devido à hidrólise das antocianinas. A ocorrência de hidrólise também foi observada na em diferentes metodologias de secagem das folhas, principalmente na secagem realizada ao sol com borrifação de água. Houve variação sazonal na produção de metabólitos secundários, como pudemos observar nos experimentos realizados com amostras coletadas de 2007 a 2009. Para M. ilicifolia, foi possível caracterizar uma série de compostos relacionados à atividade antiúlcera já conhecidos da literatura, como dulcitol, catequina e derivados e flavonóides glicosilados. A metodologia proposta foi aplicada ainda na avaliação do melhoramento agrícola de M. ilicifolia por comparação dos perfis dos compostos identificados. A metodologia desenvolvida para análise direta de P. pubescens mostrou-se eficiente na detecção e identificação de compostos bioativos, possibilitando a caracterização rápida e sem preparo de amostra do óleo da semente. Em conclusão, a técnica de fingerprinting MS permite de maneira rápida, informativa e com mínimo preparo que amostras, que produtos naturais sejam caracterizados e tenham sua qualidade monitorada. / A new analytical methodology for the analysis of medicinal plant parts and extracts via direct infusion mass spectrometry (MS) has been developed. This analytical approach, named chemical fingerprinting, involves minimal sample preparation and was applied in this work with the aim to detect optimal culture conditions, culture periods and harvest times for obtaining raw natural products with highest active principle and concentrations, as well as to understand and recognizing ecological interactions between plant and its surrounding environment. The analytical methodology included MS with electrospray ionization (ESI) in the positive (+) and negative (-) modes, as well as fragmentation of ions of interest (MS/MS) experiments. The diluted extract and active fractions of Maytenus ilicifolia, extracts of Arrabidaea chica from diverse geographic origins (accesses), as well as the oil from Pterodon pubescens and nuts of various clones of Anacardium occidentale were introduced by direct injection. Characterization of nuts and stems from A. occidentale, as well as of its respective clones by their chemical constituents has been successfully performed. After ether extraction of nuts, it was possible to characterize the triacylglycerols (TAG) by ESI(+) and free fatty acids by ESI (-). After extraction of stem juice with isopropanol, diverse ions were identified as anacardic acids by ESI(-). Also, parameters influencing to the ionization process, such as capillary voltage, cone voltage and cone extraction voltage, have been evaluated for the stem juice at ESI(-). For A. chica, the proposed methodology has been proven to efficiently bioprospect the anthocyanins, and among the nine accesses evaluated, it has been possible to identify the one producing higher amounts of dying material proportionally to the biomass. We also evaluated the enzymatic treatment extraction methodology, which resulted in the increase of aglycones content, probably due to anthocyanins hydrolysis. The occurrence of hydrolysis has been also observed when leaves have been water-sprayed while drying in the sun. Seasonal influence on the production of secondary metabolite has been observed in the samples collected on the experiments performed from 2007 to 2009. For M. ilicifolia, it has been possible to characterize a series of compounds related to the anti ulcer activity and already reported in the literature, such as dulcitol, catechin and derivatives and flavonoid glycosides. The proposed methodology has been applied in the evaluation of genetic improvement of M. ilicifolia by comparing the identified compounds profiles. The developed methodology aimed at direct analyzing P. pubescens has successfully detected and identified bioactive compounds of the seed oil, allowing the fast characterization. In conclusion, the proposed MS fingerprinting methodology allows in an informative, straightforward and with minimal sample preparation the chemical characterization and quality control of natural products.