La Escherichia coli puede causar diarreas y producir la muerte en crías y alpacas de temprana edad. Por ello, el presente estudio tuvo como objetivo evaluar una vacuna recombinante en un modelo murino contra Escherichia coli enterohemorrágica (EHEC). Para ello, se detectaron genéticamente los patotipos y tipos fimbriales de E coli, en aislados de alpacas con cuadros entéricos y fatales, obteniendo 42/226 (18.58%) aislados patogénicos, de los cuales el (24/42) 57% poseen el tipo fimbrial F17, cuya subunidad de la adhesión fue insertada y expresada en BL21 (pET-9a). Luego, se evaluó la inmunogenicidad de F17 y el vector en células mononucleares periféricas de sangre (PBMC) de alpaca, la cual estimuló la producción de citoquinas de Th1/Th2, predominantemente IFN-γ e IL-4. Posterior a ello, se inmunizó ratones BALB/c por vía oral con BL21-F17+, se recolectó sangre y heces para la medición de anticuerpos IgG e IgA, respectivamente, a los 14, 28 y 42 días, obteniendo niveles serológicos significativamente mayores de IgG total (DO:1.115); control (<DO:0.53) con predominio de las subclases IgG2a/IgG2b sobre IgG1; y en heces los niveles de IgA en animales inmunizados (DO:1.206); control (<DO:0.330) fueron significativamente incrementados en las 3 evaluaciones. Para finalmente, evaluar la eficiencia de la vacuna desafiando los ratones inmunizados con una cepa patógena, E coli F17 (EHEC), cuyos ratones inmunizados disminuyeron significativamente la carga bacteriana en heces durante los 8 posteriores días al desafío (103.7– 105.1 UFC/g) y mantuvieron la ganancia de peso, hasta 12 + 1.33% del peso promedio inicial, posterior al desafío, mientras que el grupo control, tuvo una carga alta a los 4 (107 UFC/g) y 6 días( 105.5 UFC/g ) y redujeron la ganancia de peso significativamente durante 4 días posteriores al desafío, reduciendo hasta un 2.19 + 2.18% del peso promedio inicial. Por lo tanto, BL21-F17+, podría ser considerado como un potencial candidato vacunal para la prevención de las diarreas en alpacas producidas por Escherichia coli. / Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (Perú). Fondo Nacional de Desarrollo Científico y Tecnológico (Fondecyt) / Tesis

El fucoidan es un polisacárido extraído de algas pardas y ha sido ampliamente estudiado por sus propiedades anticoagulantes, antivirales, antiinflamatorias, antioxidantes, antitumorales, antiangiogénicas e inmunomoduladoras, que varían de acuerdo a la especie. Lessonia trabeculata es un alga parda del litoral peruano que se emplea en la industria alimentaria; sin embargo, tiene otros usos potenciales que deben ser investigados. El desarrollo de nuevos productos con actividad biológica a partir de estas algas requiere de evaluaciones in vitro e in vivo. El objetivo fue evaluar la producción de citoquinas de respuesta inmune celular: TNF-α, TNF-β, IFN-γ e IL-2, la producción de especies reactivas de oxígeno (ERO) y óxido nítrico (NO) en ratones inmunizados con glóbulos rojos de carnero (GRC) y tratados con diferentes concentraciones del extracto liofilizado rico en fucoidan de Lessonia trabeculata, empleándose como control fucoidan de Fucus vesiculosus. Los ratones fueron tratados durante 14 días por vía oral, para evaluar la respuesta inmune primaria (RIP), y durante 28 días, para la respuesta inmune secundaria (RIS). Las ERO se evaluaron mediante el ensayo de reducción de nitroazul de tetrazolio, y el NO por la reacción de Griess. La expresión génica y la presencia de citoquinas séricas se determinaron mediante PCR convencional y ELISA de tipo sándwich, respectivamente. Los resultados obtenidos demuestran que el extracto liofilizado rico en fucoidan de Lessonia trabeculata no influye en la producción de ERO ni NO, incrementa la expresión de TNF-α y la concentración en suero de TNF-α, IFN-γ e IL-2 e inhibe la expresión de TNF-β en RIP, promueve la expresión de TNF-β e IL-2, inhibe la expresión de TNF-α y reduce la concentración en suero de IL-2 en RIS. Se concluye que el extracto liofilizado rico en fucoidan de Lessonia trabeculata estimula la inmunidad celular en la respuesta primaria y secundaria, sin embargo, es necesario complementar estos resultados con posteriores investigaciones. / Perú. Ministerio de la Producción. Programa Nacional de Innovación para la Competitividad y Productividad (Innóvate Perú) / Universidad Nacional Mayor de San Marcos (Lima). Vicerrectorado de Investigación y Posgrado / Tesis

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Determina los efectos del Malathion sobre el desarrollo embrionario post-implantacional usando como modelo biológico al ratón. Los efectos del Malathion sobre el desarrollo embrionario post-implantacional son evaluados usando ratonas albinas preñadas separadas en 4 grupos de tratamiento a las que se les administra intraperitonealmente diferentes dosis de Malathion de grado comercial (150, 100, 50 y 0 mg de Malathion/ Kg de peso del animal) desde el día 9 al día 17 de preñez. En el día 18 de preñez las ratonas son sacrificadas realizándose la evaluación sobre el desarrollo embrionario post-implantacional en los fetos. Los resultados encontrados muestran que Malathion produce toxicidad materna cuando son expuestas a la dosis más alta (150 mg de Malathion/ Kg de peso del animal). También se halla un aumento en la embriotoxicidad evidenciado por la mortalidad fetal y en la morfogénesis del sistema esquelético por retraso en la osificación. Se encuentran algunas malformaciones pero ninguna es significativamente diferente al grupo control (p≥0.05). / Tesis

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Evalúa el daño tisular ocasionado por la infección de la cepa Arequipa de T. cruzi en modelo murino y compararla con la infección ocasionada por dos cepas ya conocidas de T. cruzi. Se utilizaron 20 ratones de la cepa C57BL/6, los cuales fueron divididos en 4 grupos, 3 de los cuales fueron infectados con 10000 tripomastigotes sanguíneos de las cepas Arequipa, Colombia y CL Brener, mientras el cuarto se empleó como control. Se evaluó la parasitemia en sangre de cada ratón, se realizaron análisis morfométricos de cada cepa durante su pico máximo de parasitemia y se evaluó histopatológicamente los corazones, cerebros, músculos, colon y esófagos de cada ratón a los 5, 15, 30, 60 y 120 días post infección. El periodo prepatente de las cepas Arequipa y Colombia fue de 11 días, mientras la cepa CL Brener fue de 9 días post infección. Las cepas Arequipa y CL Brener presentaron dos formas morfométricas: tripomastigotes de formas delgadas y gruesas, encontrando la mayor concentración de formas delgadas en la cepa CL Brener. Todas las cepas parasitaron al corazón comprobándose así su tropismo y siendo este el órgano más afectado durante la infección, presentando infiltración celular, fibrosis y nidos de amastigotes. La cepa Arequipa fue la primera en presentar nidos a los 5 días post infección, pero no generó muertes en los ratones, en comparación de la cepa CL Brener que ocasionó la muerte del 20% de ratones a los 27 días. Se presentan estos datos como valores importantes para comprender el comportamiento de la cepa Arequipa de T. cruzi y como esta varía en comparación con otras cepas del mismo parásito. / Tesis

Menciona que Leishmania braziliensis es un protozoario causante de la leishmaniasis o uta, enfermedad endémica crónica de baja patogenicidad, alta morbilidad, metaxénica y zoonótica que compromete piel, mucosas y vísceras. Es transmitida por un díptero del género Lutzomyia, afecta alrededor de 12 millones de personas alrededor del mundo y a 12 departamentos en el Perú. Leishmania braziliensis tiene patrones moleculares de membrana asociadas a patógenos que son reconocidos por los receptores tipo toll (TLR) presentes en el hospedero, tanto en la superficie celular como a nivel intracelular. Los TLRs están conformados por una familia de 23 tipos que van a reconocer ligandos presentes en patógenos en común. Cuando se da la unión del ligando con un TLR desencadenará una secuencia de señales activando la expresión de moléculas coestimuladoras y citoquinas promoviendo una inflamación y activando la respuesta adaptativa. El presente trabajo tiene como objetivos caracterizar a la cepa C234 de Leishmania braziliensis mediante secuenciamiento y detectar y cuantificar los niveles de expresión de mRNA de los genes TLR-3, TLR-4 y TLR-9 y de las citoquinas IL-12 y TNF-α en macrófagos murinos enfrentados a la cepa C234 de Leishmania braziliensis, endémica del Perú. Se infectó macrófagos peritoneales de ratones Balb/c con promastigotes de Leishmania braziliensis y se cultivaron por 24 horas, se midió los niveles de óxido nítrico (ON), se extrajo mRNA de los macrófagos y se detectó y cuantificó los niveles de expresión en los genes de TLR-3, TLR- 4 y TLR-9, y de las citoquinas proinflamatorias IL-12 y TNF-α, a través de la técnica de retrotranscripción mediante la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa en tiempo real (RT-qPCR). Los resultados indicaron que el estudio filogenético de la cepa C234 mostró alta homología (96%) para Leishmania braziliensis. Además, los macrófagos infectados con Leishmania braziliensis presentaron mayor producción de ON sólo en las primeras horas de infección, descendiendo a las 24 y 48 horas; y se detectó expresión de mRNA para los genes TLR-3, TLR-4 y TLR-9 y de las citoquinas IL-12 y TNF-α. Se concluye que la cepa nativa C234 pertenece a la especie Leishmania braziliensis y que la disminución de la producción de ON está relacionada al mayor tiempo de infección y bajos niveles de expresión del gen TLR-4, así mismo, el incremento del nivel de expresión de mRNA de los genes TLR-3 y TLR-9 podrían estar implicados en la activación de la expresión génica de la citoquina IL-12 en macrófagos peritoneales murinos infectados con Leishmania braziliensis. / Tesis

Realiza un estudio de investigación experimental correlacional, prospectivo y transversal, llevado a cabo en el laboratorio de Farmacología de la Facultad de Farmacia y Bioquímica-UNMSM. Se evaluó el extracto etanólico de Desmodium molliculum (Kunth) DC. “manayupa” y su influencia en el efecto antiinflamatorio y analgésico en comparación con los medicamentos comerciales Fenazopiridina (Pyridium®) y Tramadol (Tramal®) respectivamente, realizado en estudios in vivo. La muestra fue recolectada en el distrito de Callejón de Huaylas, departamento de Ancash, Perú. Se determinó los metabolitos secundarios mediante la marcha fitoquímica; identificándose: alcaloides, flavonoides, taninos, saponinas, aminoácidos, azúcares reductores y fenoles. La actividad antiinflamatoria se evaluó mediante el ensayo de edema plantar inducido por Ȝ-carragenina y la actividad analgésica se evaluó mediante la prueba de placa caliente (Hot Plate). Las dosis administradas del extracto de Desmodium molliculum (Kunt) DC, fueron de 50mg/kg, 100mg/kg y 200mg/kg. Demostrando que el extracto etanólico a una concentración de 200mg/kg no posee efecto antiinflamatorio mientras a concentración de 50mg/kg y 100mg/kg se evidenció actividad antiinflamatoria significativa. Por otro lado evaluando el efecto analgésico, se evidenció que no posee tal efecto a ninguna concentración trabajada. Se realizaron análisis descriptivos y pruebas estadísticas de significancia ANOVA. Los resultados encontrados demuestran que el extracto etanólico de Desmodium molliculum (Kunth) DC tiene un efecto antiinflamatorio y ausencia del efecto analgésico. En conclusión, bajo las condiciones experimentales de la presente investigación el extracto etanólico de Desmodium molliculum (Kunth) DC ha demostrado efecto antiinflamatorio en ratas Holtzman y estadísticamente no tiene el efecto analgésico en ratones albinos. / Tesis

Determina el efecto hipoglicemiante y antioxidante del extracto hidroalcohólico de la corteza de Curarea tecunarum “abuta”. Esta investigación se realiza con treinta ratones albinos Balb C57 hembras, con peso promedio de 30 ± 5 g a los cuales se indujo hiperglicemia por administración intraperitoneal de aloxano mediante el método de Méndez modificado. Posteriormente se les administra el extracto hidroalcohólico de corteza de Curarea tecunarum, a dosis de 30 mg/kg, 50 mg/kg y 100 mg/kg y se compara el efecto hipoglicemiante con la droga patrón glibenclamida 10 mg/Kg. La actividad antioxidante se determina en las concentraciones de 300 ppm y 600 ppm del extracto hidroalcohólico de la corteza de Curarea tecunarum mediante el método de Brand-Williams (DPPH), comparando la actividad antioxidante de la “abuta” frente a la vitamina C, obteniendo como resultado 96% de actividad antioxidante. / Tesis

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Determina la acción fotoprotectora de una crema dermocosmética a base de extracto de semilla de Theobroma cacao L. en la piel de ratones Mus musculus Balb c, sometidos a radiación ultravioleta. Se evalúan las características fisicoquímicas (solubilidad, cantidad de fenoles totales, capacidad antioxidante) y marcha fitoquímica del extracto se semilla de Theobroma cacao L. Se diseñan formulaciones a concentraciones diferentes de extracto en la crema. Posteriormente son sometidas a estudios de estabilidad preliminar a la temperatura de 5, 25 y 40 0C durante 15 días, teniendo como parámetros de análisis organolépticos: aspecto, color y olor; parámetros fisicoquímicos: pH, viscosidad. La formulación óptima es la Nº 5 en concentraciones al 1, 2 y 3% de extracto seco de semilla de cacao; se realizan análisis microbiológicos y capacidad antioxidante de las tres concentraciones de la crema. / Tesis

[ES] Los síndromes mielodisplásicos (SMD) constituyen un grupo heterogéneo de enfermedades de naturaleza clonal caracterizadas por presentar una hematopoyesis ineficaz, citopenias y riesgo variable de evolución a leucemia mieloide aguda (LMA) secundaria. En la última década, las nuevas tecnologías de secuenciación masiva han revelado que más del 80 % de pacientes con SMD presenta mutaciones somáticas y que éstas pueden agruparse en diversas categorías en función de las rutas biológicas que se vean alteradas. Además, se ha visto que existen patrones de concurrencia y exclusión entre estas categorías de mutaciones. La adquisición secuencial y la concurrencia entre estas mutaciones desencadenan, en parte, el desarrollo de la enfermedad y genera la heterogeneidad clínica característica de los SMD. Las mutaciones en factores de splicing aparecen a menudo simultáneamente con mutaciones en reguladores epigenéticos como es el caso de los genes U2 Small Nuclear RNA Auxiliary Factor 1 (U2AF1) y Ten-eleven translocation 2 (TET2) que se encuentran co-mutados en un 13 % de los casos. A pesar de su prevalencia, los efectos de la concurrencia en las mutaciones en U2AF1 y TET2 no han sido estudiados. Por ello, en esta tesis nos propusimos estudiar esta cooperación cruzando, en primer lugar, dos líneas mutantes de ratón generadas mediante el sistema de edición genética CRISPR/Cas9. El efecto de estas alteraciones sobre la hematopoyesis de las tres líneas mutantes, U2af1mut/+, Tet2-/- y U2af1mut/+ Tet2-/-, fue examinado mediante el hemograma, citometría de flujo (CF), análisis morfológicos, ensayos de Unidades Formadoras de Colonias (CFU) y estudios funcionales como el trasplante hematopoyético. Para finalizar, se realizó un análisis transcriptómico mediante secuenciación de ARN (ARN-seq) para detectar los posibles cambios en el patrón de splicing entre las líneas mutantes y los controles. La línea mutante U2af1mut/+ no presentó ninguna alteración destacable de la hematopoyesis ni en ratones jóvenes (12-13 semanas) ni envejecidos (2 años). Sin embargo, sus células madre y progenitoras hematopoyéticas (HSPC) fueron incapaces de injertar en la médula ósea de ratones trasplantados. En el caso de los ratones mutantes Tet2-/-, observamos un incremento de células mieloides, esplenomegalia, aumento del compartimento LSK (HSPC con inmunofenotipo Linaje- Sca-1+ c-kit+) y, en los experimentos de trasplante, una capacidad de reconstitución hematopoyética superior a la de los controles. Por último, la cooperación de ambas alteraciones en la línea doble mutante U2af1mut/+ Tet2-/-, no mostró un efecto sinérgico entre ellas. Así pues, se detectaron variaciones en los progenitores mieloeritroides y un aumento significativo de células mieloides y LSK. No obstante, igual que ocurría con la línea U2af1mut/+, las HSPC no producían prendimiento en los ratones trasplantados. A pesar de las alteraciones observadas, ninguna de las tres líneas mutantes desarrollaba SMD ni fallecía antes que los controles. Respecto al análisis transcriptómico, el salto de exón fue el evento de splicing alternativo observado con mayor frecuencia en las líneas U2af1mut/+, Tet2-/- y U2af1mut/+ Tet2-/-. Únicamente un 6.6 % del total de genes que presentaba eventos de splicing alternativo fueron coincidentes en las tres líneas mutantes. A pesar de que en el análisis bioinformático se detectaron alteraciones en las rutas biológicas relacionadas con el ciclo celular, en los ratones U2af1mut/+, y el daño al ADN, en las líneas U2af1mut/+ y U2af1mut/+ Tet2-/-, en la validación mediante CF no se encontraron variaciones respecto a los controles. Para concluir, nuestros datos sugieren que, a pesar de producirse alteraciones en la hematopoyesis, la cooperación entre la mutación en U2af1 y la pérdida de Tet2 es insuficiente para iniciar SMD en ratón. / [CA] Les síndromes mielodisplàstiques (SMD) constituïxen un grup heterogeni de malalties de naturalesa clonal caracteritzades per presentar una hematopoesi ineficaç, citopènies i risc variable d'evolució a leucèmia mieloide aguda (LMA) secundària. En l'última dècada, les noves tecnologies de seqüenciació massiva han revelat que més del 80 % de pacients amb SMD presenta mutacions somàtiques i que aquestes poden agrupar-se en diverses categories en funció de les rutes biològiques que es vegen alterades. A més, s'ha vist que hi ha patrons de concurrència i exclusió entre aquestes categories de mutacions. L'adquisició seqüencial i la concurrència entre aquestes mutacions desencadenen, en part, el desenvolupament de la malaltia i genera l'heterogeneïtat clínica característica de les SMD. Les mutacions en factors de splicing apareixen sovint simultàniament amb mutacions en reguladors epigenètics com és el cas dels gens U2 Small Nuclear RNA Auxiliary Factor 1 (U2AF1) i Ten-eleven translocation 2 (TET2) que es troben co-mutats en un 13 % dels casos. A pesar de la seua prevalença, els efectes de la concurrència en les mutacions en U2AF1 i TET2 no han sigut estudiats. Per això, en aquesta tesi ens vam proposar estudiar aquesta cooperació creuant, en primer lloc, dos línies mutants de ratolí generades per mitjà del sistema d'edició genètica CRISPR/Cas9. L'efecte d'aquestes alteracions sobre l'hematopoesi de les tres línies mutants, U2af1mut/+, Tet2-/- i U2af1mut/+ Tet2-/-, va ser examinat per mitjà de l'hemograma, citometría de flux (CF), anàlisis morfològiques, assajos d'Unitats Formadores de Colònies (CFU) i estudis funcionals com el trasplantament hematopoètic. Per últim, es va realitzar l'anàlisi transcriptòmic per mitjà de seqüenciació d'ARN (ARN-seq) per a detectar els possibles canvis en el patró de splicing entre les línies mutants i els controls. La línia mutant U2af1mut/+ no va presentar cap alteració destacable de l'hematopoesi ni en ratolins jóvens (12-13 setmanes) ni envellits (2 anys). No obstant això, les seues cèl·lules mare i progenitores hematopoetiques (HSPC) van ser incapaços d'empeltar en la medul·la òssia de ratolins trasplantats. En el cas dels ratolins mutants Tet2-/-, observarem un increment de cèl·lules mieloides, esplenomegàlia, augment del compartiment LSK (cèl·lules mare amb inmunofenotip Llinatge- Sca-1+ c-kit+) i, en els experiments de trasplantament, una capacitat de reconstitució hematopoética superior a la dels controls. Finalment, la cooperació d'ambdues alteracions en la línia doble mutant U2af1mut/+ Tet2-/-, no va mostrar un efecte sinèrgic entre elles. Així, doncs, es van detectar variacions en els progenitors mieloeritroids i un augment significatiu de cèl·lules mieloides i LSK. No obstant això, igual que ocorria amb la línia U2af1mut/+, les HSPC no produïen empelt en els ratolins trasplantats. A pesar de les alteracions observades, cap de les tres línies mutants desenvolupava SMD ni moria abans que els controls. Respecte a l'anàlisi transcriptòmic, el salt d'exó va ser l'esdeveniment de splicing alternatiu observat amb major freqüència en les línies U2af1mut/+, Tet2-/- i U2af1mut/+ Tet2-/-. Únicament un 6.6 % del total de gens que presentava esdeveniments de splicing alternatiu van ser coincidents en les tres línies mutants. Encara que en l'anàlisi bioinformàtica es van detectar alteracions en les rutes biològiques relacionades amb el cicle cel·lular, en els ratolins U2af1mut/+, i el dany a l'ADN, en les línies U2af1mut/+ i U2af1mut/+ Tet2-/-, en la validació per mitjà de CF no es van trobar variacions respecte als controls. Per a concloure, les nostres dades suggerixen que, a pesar de produir-se alteracions en l'hematopoesi, la cooperació entre la mutació en U2af1 i la pèrdua de Tet2 és insuficient per a iniciar SMD en ratolí. / [EN] Myelodysplastic syndromes (MDS) comprise a heterogeneous group of clonal malignancies characterized by ineffective hematopoiesis, cytopenia and a variable risk of progression to secondary acute myeloid leukemia (AML). In the last decade, next-generation sequencing technologies have deciphered that more than 80 % of MDS patients have somatic mutations and that those can be grouped into several categories depending on which biological routes have been altered. Furthermore, it has been observed that there are concurrency and exclusion patterns among these mutation categories. The sequential acquisition and the concurrency between these driver mutations trigger, in part, the development of the disease and generate the clinical heterogeneity characteristic of MDS. The splicing factor mutations often occur simultaneously with mutations in epigenetic regulators such as the U2 Small Nuclear RNA Auxiliary Factor 1 (U2AF1) and Ten-eleven translocation 2 (TET2) genes, which are found co-mutated in 13 % of cases. Despite their prevalence, the effects of concurrence in mutations in U2AF1 and TET2 have not been studied. Consequently, in this thesis we aim to study this cooperation. Firstly, we crossed two mutant mouse lines that were previously generated using the CRISPR/Cas9 gene editing system. The effects of these alterations on hematopoiesis in the three mutant lines, U2af1mut/+, Tet2-/- y U2af1mut/+ Tet2-/-, was examinated by the blood counts, flow cytometry (FC), morphological analysis, Colony Forming Units assays (CFU) and functional studies such as the hematopoietic transplantation. Finally, transcriptomic analysis was peformed by RNA sequencing (RNA-seq) to detect possible splicing pattern changes between mutant lines and control samples. U2af1mut/+ mutant line did not present any remarkable alteration of hematopoiesis in either in young (12-13 weeks) or aged (2 years) mice. However, their hematopoietic stem and progenitor cells (HSPC) were unable to engraft into the bone marrow of transplanted mice. In the case of Tet2-/- mutant mice, we observed an increase of myeloid cells, splenomegaly, an increased LSK compartment (HSPC: Lineage- Sca-1+ c-kit+) and an enhanced ability, relative to wild-type, to reconstitute hematopoiesis in transplantation assays. Finally, the cooperation of both alterations in U2af1mut/+ Tet2-/- double mutant line did not show a synergistic effect between them. Nonetheless, the myeloerythroid progenitors were altered and also myeloid and LSK cells were increased. However, as in the U2af1mut/+ line, HSPC did not produce any engraftment in transplanted mice. Despite the observed alterations, none of the three mutant lines developed MDS or die earlier than control mice. Regarding the transcriptomic analysis, exon skipping was the most frequently observed alternative splicing event in the U2af1mut/+, Tet2-/- y U2af1mut/+ Tet2-/- lines. Only 6.6 % of the total number of genes showing alternative splicing events were coincident in the three mutant lines. Although the bioinformatic analysis revealed alterations in biological pathways related to the cell cycle in the U2af1mut/+ mice and DNA damage in the U2af1mut/+ and U2af1mut/+ Tet2-/- lines, the validation by CF found no variations with respect to the controls. In conclusion, our data suggest that, despite alterations in hematopoiesis, the cooperation between U2af1 mutation and Tet2 loss is insufficient to initiate MDS in mice. / Martínez Valiente, C. (2022). Desarrollo y caracterización de un modelo de ratón doble mutante en U2af1 y Tet2 para el estudio de los Síndromes Mielodisplásicos [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/187749 / TESIS

Exocrine pancreatic cancer is the fifth leading cause of death from malignant disease in Western society and it is one of the most aggressive human tumors. Once diagnosed, the 12-month patient survival is less than 5%. More than 90% of human exocrine tumors are classified as "ductal adenocarcinomas" on the basis of their microscopic appearance. The plasminogen system plays a critical role in intravascular thrombolysis as well as in other biological processes that require cellular migration, such as angiogenesis, inflammatory reactions, tissue remodelling, and tumor progression. There are two types of plasminogen activators that catalyze plasmin generation from plasminogen: tissue-type (tPA) and urokinase-type (uPA). Activation of plasminogen to plasmin results in progressive degradation of fibrin and other extracellular matrix components and may also lead to activation of metalloproteases, latent growth factors, and proteolysis of membrane glycoproteins. All these processes may contribute to tumor development and metastasis. There is extensive evidence supporting the notion that the uPA system, including its receptor and plasminogen activator inhibitor PAI-1, can contribute to tumorigenesis in a variety of tissue types but there is less evidence for such a role regarding tPA and annexin A2 (AnxA2), a putative tPA receptor. Previous studies of our group have shown that tPA is commonly expressed in pancreas cancer tissues and cell lines and appears to be selectively associated with the neoplastic phenotype. Using neutralizing antibodies or chemical inhibitors leads to reduced in vitro tumor invasion. Our results support that - in the pancreas - the tPA system plays an important role in tumor development and/or progression whereas the uPA system may play a more dominant role in pancreatitis. More recent studies have shown that tPA stimulates cell proliferation and angiogenesis in exocrine pancreatic tumors. These results allow new approaches to improve the treatment of this disease, but to do so it is necessary to use of mouse models of disease. In attempt to explore the role of tPA and its receptor, annexin A2, in pancreatic tumorigenesis, we have taken advantage of two well established transgenic mouse models: Ela1-TAg (1-127) and Ela1-myc. In these mice, transgenes are targeted to acinar cells using the Elastase-1 enhancer/promoter. We have also analyzed the pancreas of Ela1-CCK2 and MT-TGFa transgenic mice, as models of acinar-ductal transdifferentiation and ductal complex formation. Our results show that expression of tPA is undetectable in the non-neoplastic pancreatic epithelium and in metaplastic ducts and in acinar tumors. By contrast, tPA is overexpressed in neoplastic pancreatic ducts. This pattern expression is in agreement with the results described in humans, indicating that mouse models of pancreatic cancer may be useful for the study of human pathology. On the other hand, AnxA2 is undetectable in acinar tumors but it is detected in the apical membrane of normal and metaplastic duct epithelium. In addition, AnxA2 is strongly expressed in ductal tumor cells where it shows a non-polarized distribution. These results suggest that different molecular events may participate in the activation of tPA and its receptor, AnxA2, in non-neoplastic ducts. In order to analyze the role of tPA in the progression of pancreatic tumors, we mated Ela1-TAg and Ela1-myc transgenic mice to tPA-deficient mice. The proportion of tumors displaying pure acinar differentiation or mixed acinar/ductal components was similar in both mouse strains, indicating that tPA is not required for in acinar-ductal transdifferentiation. However, it was observed an increased survival in hybrid mice Ela1-myc:tPA-/- supporting a critical role for tPA in the progression of pancreatic ductal tumors. To get insight into the mechanism by wich tPA participates in this process we have analyzed factors related to tumor progression: tumors arising in a tPA-/- genetic background show a lesser vessel density and proliferation rate than those arising in wild type mice. These results indicate that tPA could play a role in angiogenesis stimulation and cell proliferation and suggest that the increase in survival observed in Ela1-myc tPA-/- mice could be a consequence of the inhibition of tumor angiogenesis and cell proliferation. In addition, we have analyzed the differential gene expression between Ela1-myc and Ela1-myc tPA-/- mice by microarrays. This analysis has led to the identification of related genes with tumor progression and invasion that can be a target for the action of tPA, although more work is necessary to determined their role. Finally, we have studied the direct effects of the expression of tPA in the pancreas, by the generation of two transgenic mice which tPA expression is targeted to acinar cells, using the Elastase-1 enhancer/promoter (Ela1-tPA), or to ductal cells using the Citokeratin 19 promoter (CK19-tPA). The results in Ela1-tPA mice show that overexpression of tPA in acinar cells does not affect normal mouse development. The effects on the pancreas analysed are currently being analyzed in greater detail. Altogether, the data described here support the relevant role of tPA in pancreas cancer progression and indicate that mouse models of pancreatic cancer may be useful for the preclinical evaluation of drugs targeting the tPA system.