Orientador: Elizabeth Orika Ono / Banca: João Domingos Rodrigues / Banca: Ana Claudia Macedo / Resumo: A utilização de reguladores vegetais é uma realidade presente nas mais diversas áreas de cultivo, inclusive na olericultura. Os inibidores da biossíntese do hormônio vegetal giberelina compõe a classe de retardantes de crescimento mais utilizada na agricultura, onde os diversificados produtos disponíveis são atuantes em diversas fases da biossíntese desse hormônio vegetal. Tendo em vista a importância econômica do tomateiro no país, bem como a necessidade de maiores estudos da ação desses produtos em culturas hortícolas, o presente trabalho objetivou averiguar a influência dos inibidores da síntese de giberelina, cloreto de chlormequat (CCC) e prohexadione-Ca (ProCa), na cultura do tomateiro, avaliando a possível atuação no crescimento vegetativo e interferência no desenvolvimento reprodutivo. Foram conduzidos dois experimentos em ambiente protegido na área experimental da Fazenda de Ensino, Pesquisa e Produção de São Manuel, localizada no município de São Manuel (SP), pertencente à Faculdade de Ciências Agronômicas da Universidade Estadual Paulista-UNESP, Campus de Botucatu-SP. Os delineamentos experimentais nos experimentos foram em blocos casualizados. Para o experimento I, os tratamentos consistiram em crescentes concentrações de Cloreto de Chlormequat (CCC): T1 - testemunha (água); T2- CCC a 500 mg i.a. L-1; T3- CCC a 1000 mg i.a. L-1; T4- CCC a 1500 mg i.a. L-1; T5- CCC a 2000 mg i.a. L-1. Para o experimento II, os tratamentos foram compostos de crescentes concentrações... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The use of plant regulators is substantially present in the most diverse areas of cultivation, including in the olericulture. Inhibitors of gibberellin biosynthesis are the most used class of growth retardants in agriculture, where the diverse products available are active in several phases of the biosynthesis of this plant hormone. In order to study the economic importance of tomato plant in the country, as well as the need for further studies on the action of these products on horticultural crops, the objective of this study was to investigate the influence of the inhibitors of gibberellin biosynthesis, chlormequat chloride (CCC) and prohexadione-Ca (Pro-Ca), applied in tomato culture, evaluating its possible performance on the vegetative growth and interference in the reproductive development. Two experiments were performed in a protected environment in the experimental area of the São Manuel's Farm of Education, Research and Production, located in the city of São Manuel (SP), which belongs to the Faculty of Agronomic Sciences of São Paulo State University - UNESP, Botucatu Campus - SP. The randomized blocks designs were used in the experiments. For the experiment I, the treatments were composed of increasing concentrations of Chlormequat Chloride (CCC): T1 - control (water); T2 - CCC at 500 mg i.a. L-1 ; T3 - CCC at 1000 mg i.a. L-1 ; T4 - CCC at 1500 mg i.a. L-1 ; T5 - CCC at 2000 mg i.a. L-1 . For Experiment II, the treatments were composed of increasing concentrations of Prohexadione-Ca (ProCa): T1 - control (water); T2 - ProCa at 500 mg i.a. L-1 ; T3 - ProCa at 1000 mg i.a. L-1 ; T4 - ProCa at 1500 mg i.a. L-1 ; T5 - ProCa at 2000 mg i.a. L-1 . The treatments were leaf application in the culture every 10 days. The effects of both products were evaluated by growth, productivity and production analyzes, quantification of the antioxidant enzymes activity and post-harvest biochemical ... / Mestre

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. / Made available in DSpace on 2012-10-17T13:49:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / O presente trabalho evidenciou a influência da fonte de explante sobre o comportamento posterior do cultivo in vitro de bananeira e também dos fitorreguladores e antiauxinas sobre a liberação e/ou diminuição da dominância apical in vitro. A utilização de gemas apicais oriundas de plantas matrizes com graus de baixa e média dominância apical resultou nas maiores médias de brotos formados ao final de 5 subcultivos, com 141,76 e 143,96 brotos para as cvs. Grand Naine e Nanicão, respectivamente. A suplementação do meio de proliferação MS com BAP (11,1 mmol/l) resultou nas maiores médias de brotos formados ao final de seis subcultivos, com um total de 620,43, 785,96 e 224,97 brotos para as cvs. Grand Naine, Nanicão e Enxerto, respectivamente. Suplementando o meio com TDZ (0,090 mmol/l) e TIBA (0,019 mmol/l) obteve-se taxas proliferativas significativas e índices baixíssimos de variantes somaclonaias quando comparamos ao meio suplementado com BAP (11,1 mmol/l). As análises enzimáticas da AIA-Oxidase em rizomas de bananeira (cv. Grand Naine) revelaram que culturas mantidas em meio de proliferação MS, suplementado com BAP (11,1 mmol/l) ocorreu uma destruição crescente de AIA na região basal até o terceiro dia e quando o meio de cultura foi suplementado com BAP (4,44 mmol/l) e TIBA (0,019 mmol/l) ou BAP (4,44 mmol/l) e PCIB (46,7mmol/l) ocorreu uma redução do AIA destruído até o quinto e sexto dias na região basal em função das antiauxinas contidas no meio. As maiores médias de brotos adventícios formados por túberas cultivadas in vitro ocorreram em meios de proliferação MS, suplementados com BAP (11,1 mmol/l) ou TDZ (0,090 mmol/l) e TIBA (0,019 mmol/l), resultando em valores médios de 4,60 e 5,30 para a cv. Grand Naine, 2,00 e 6,50 para cv. Nanicão e 2,25 e 1,50 para cv. Enxerto, para os respectivos tratamentos.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico. Programa de Pós-graduação em Engenharia Mecânica / Made available in DSpace on 2012-10-23T22:51:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 261998.pdf: 2569972 bytes, checksum: 9a47119fedcfdfc20346edf4f85d0679 (MD5) / Introdutoriamente este trabalho apresenta um contexto a respeito do projeto de usinas hidrelétricas, dando ênfase aos seus componentes, como conduto forçado e duto de descarga da turbina, turbina, gerador, sistema distribuidor e sistema regulador de velocidade, o qual é composto pelos sistemas de alimentação e atuação óleo hidráulico e de controle elétrico-eletrônico. Estes componentes são expostos os fenômenos físicos que podem ocorrer durante o funcionamento da usina hidrelétrica e que devem ser previstos pelo projeto. Após apresentar os detalhes de projeto dos componentes, inserem-se conceitos a respeito da modelagem e simulação em projeto, vinculados às abordagens via fluxo de sinal, muito utilizada pela teoria de controle, e via fluxo de potência, baseada na teoria de Bond-graphs e indicada na modelagem de sistemas mecânicos complexos. O objetivo deste trabalho é modelar um regulador de velocidade para usina hidrelétrica utilizando a modelagem via fluxo de potência, apresentando assim a sua vantagem comparada à modelagem via fluxo de sinal, atualmente utilizada. Para isso, construiu-se os modelos dos componentes usando o software AMESim®, que utiliza o fluxo de potência para modelar e simular sistemas dinâmicos. Os componentes são então modelados e parametrizados, conforme as suas condições e características de uso. Para a simulação, utilizou-se de três ensaios típicos de comissionamento a fim de validar o modelo. Os mesmos ensaios foram realizados no sistema físico usado para validação teórico-experimental. O diferencial deste trabalho, em relação a outros que utilizam fluxo de sinal, está nos resultados do modelo que expõe além das variáveis de saídas dos componentes, as variáveis de estado do mesmo. Além disso, esta comparação entre os resultados do sistema físico e do modelo permite aperfeiçoar tanto os modelos como os parâmetros utilizados e conseqüentemente os resultados obtidos. O trabalho conclui que o modelo construído foi validado e pode ser usado na etapa de análise de concepção de projeto de uma usina hidrelétrica, desde que devidamente parametrizado. Com isso, o modelo utilizado pelo projetista apresenta um maior número de variáveis para avaliação na fase de tomadas de decisão do projeto de uma usina hidrelétrica e do seu regulador de velocidade. This work presents the context related to the design of hydroelectric plants, emphasizing their components, such as penstock, draft tube, turbine, generator, distributor and governing systems, composed of fluid power and control systems. These components are exposed to physical phenomena that may occur during operation of the hydroelectric plant and that should be evaluated during the design phase. After presenting the details of the components, the work introduces the modeling and simulation concepts, related to signal flow, widely used by the theory of control, and to the power flow approaches, based on the theory of Bond-graphs and more adequate to model complex mechanical systems. The aim of this work is to build a model of governing system for hydroelectric power plant using the power flow approach, to show its advantage compared to modeling using signal flow approach, which is currently used by the industry. In order to do that, the component models were developed in the software AMESim®, which applies the power flow approach to model dynamic systems. The components parameters are defined according to their conditions and characteristics of use. In simulation, three typical commissioning tests were used to validate the model. The same tests were carried out on the real system that was used for experimental validation. The main point of this work, when compared to others that use signal approach, is that the model provides results besides the common outputs, i.e. the model gives access to the system state variables. Indeed, this comparison between the results of the physical system and the model can be used to improve the models as well as their parameters and therefore the results obtained. In doing so, this work concludes that the model built and validated could be used in the analysis stage of design of a hydroelectric power plant, if the adequate parameters are set. Hence, the model used by the designer presents a great number of variables to facilitate the decision-making phase of the design of hydroelectric power plant and its governing system.

Orientador: Carlos Alexandre Costa Crusciol / Banca: João Domingos Rodrigues / Banca: Godofredo Cesar Vitti / Banca: Gaspar Henrique Korndorfer / Banca: Rafaella Rossetto / Resumo: Objetivou-se, mediante o presente estudo, avaliar a eficácia da aplicação foliar de boro (B) associado, ou não, aos maturadores etil-trinexapac, etefon e sulfometuron metil na pré colheita da cana-de-açúcar, as alterações fisiológicas e suas implicações na qualidade e produtividade de colmos. O presente projeto foi composto de três subprojetos, sendo o primeiro abordando o uso de B associado ao etil-trinexapac, o segundo ao etefon e o terceiro ao sulfometuron metil. Para cada subprojeto foram conduzidos 4 experimentos em início e 4 em final de safra (2 locais e 2 anos), totalizando 12 experimentos em início de safra e 12 em final de safra, ou seja, 24 experimentos. Nos experimentos em início de safra, foi utilizada a variedade de cana-de-açúcar RB855453 (maturação precoce) nos dois locais e em final de safra foi utilizada a variedade SP80-3280 (maturação tardia) no Grupo Raízen e a variedade RB867515 (maturação média-tardia) no Grupo Tereos. Os tratamentos foram constituídos da aplicação dos maturadores etil-trinexapac, etefon, sulfometuron metil e do controle (maturação natural), associados à aplicação de B foliar. As doses empregadas foram, respectivamente, 200 g i.a. ha-1 (0,8 L p.c. Moddus ha-1), 480 g i.a. ha-1 (0,66 L p.c. Ethrel ha-1), 0,15 g i.a. ha-1 (0,20 g p.c. Curavial ha-1) e para o B, a dose foi 0,18 kg ha-1 (1060 g ácido bórico ha-1). Foram avaliados os parâmetros bioquímicos, biométricos, tecnológicos e nutricionais. Concluiu-se que a deficiência de B limita o acúmulo de sacarose em início e final de safra; a aplicação de maturadores em início de safra, isoladamente ou em associação ao B, possibilitou antecipação no corte da matéria-prima em cerca de 15 dias e o B aplicado isoladamente foi ainda mais eficiente, antecipando a maturação em cerca de 18 dias; em final de ... / Abstract: The aim, through this study, was to evaluate the effectiveness of foliar application of boron (B), associated or not to the ripeners trinexapac-ethyl, ethephon and sulfometuron methyl in pre harvest of sugarcane, the physiological changes and their implications on quality and stalk yield. This project was composed of three subprojects, the first evaluating the use of B associated with trinexapac-ethyl, the second to ethephon and the third to sulfometuron methyl. For each subproject 4 experiments were carried out at the early and at the late season (2 places and 2 years), so were 12 experiments at early season and 12 at late season, totaling 24 experiments. In the experiments at early season, was used the variety of sugarcane RB855453 (early ripening) in both locations and at late season was used the variety SP80-3280 (late ripening) in Raízen Group and variety RB867515 (middle-late season) in Tereos group. The treatments consisted in the application of the ripeners trinexapac-ethyl, ethephon, sulfometuron methyl and control (natural ripening) associated with the application of B. The doses used were, respectively, 200 g i.e. ha-1 (0,8 L c.p. Moddus ha-1), 480 g i.e. ha-1 (0,66 L c.p. Ethrel ha-1), 0,15 g i.e. ha-1 (0,20 g c.p. Curavial ha-1) and for B the dose was 0,18 kg ha-1 (1060 g boric acid ha-1). Biochemical, biometric, technological and nutritional parameters were evaluated. It was concluded that B deficiency in pre-harvest of sugarcane limits the accumulation of sucrose at early and at late season; at early season the ripeners applied alone or in association with B enabled anticipation in the raw material harvesting in about 15 days and B applied alone was even more efficient, anticipating in about 18 days; at late season the ripeners were effective in maintaining the high sucrose concentration longer than control treatment, as well as B applied alone or in association with ... / Doutor

Orientador: Kathia Fernandes Lopes Pivetta / Banca: Renata Gimenes / Banca: Paulo Hercílio Viegas Rodrigues / Banca: Cláudia Fabrino Machado Mattiuz / Banca: Eloiza Santana Seixas Vitória / Resumo: A implantação e manejo de gramados esportivos está entre as atividades agrícolas de mais alta tecnologia. Do ponto de vista ornamental, os gramados constituem um dos componentes paisagísticos mais importantes. A sua manutenção constante torna-se uma operação onerosa e muitas vezes, as operações de poda podem oferecer riscos de acidentes. Desta forma, é muito importante a busca de alternativas que visem diminuir a frequência das podas e uma delas é o uso de reguladores de crescimento. Sendo assim, este trabalho teve como objetivo avaliar a eficiência de doses dos reguladores de crescimento, paclobutrazol e trinexapac-ethyl, no crescimento vegetativo de grama-esmeralda (Zoysia japonica), grama-bermudas 'Tifway 419' (Cynodon dactylon x Cynodon transvaalensis) e grama-bermudas 'Celebration' (Cynodon dactylon) em condições de campo como alternativa ao manejo tradicional realizado por meio de podas semanais. O trabalho foi realizado em uma área de produção comercial de grama localizada na Fazenda São José, município de Jardinópolis/SP, em 2013. Foi realizado um experimento para cada grama e em todos, o delineamento experimental foi o de blocos ao acaso; foram oito tratamentos (testemunha 1: sem poda; testemunha 2: poda semanal; três doses de paclobutrazol: 70, 140 e 280 g ha-1; três doses de trinexapac-ethyl: 100, 200 e 400 g ha-1) e quatro repetições. Foi realizada uma única aplicação dos produtos. Foram efetuadas avaliações aos 15, 30, 45 e 60 dias após a aplicação sendo avaliadas altura (cm); massa seca da parte aérea; Índice de Cor Verde Escuro (ICVE) e qualidade (notas). Verificou-se que o paclobutrazol, nas doses testadas, não foi efetivo para suprimir o crescimento de grama-esmeralda e também não afetou a qualidade do gramado; ao contrário, trinexapac-ethyl foi efetivo na supressão do crescimento desta grama, principalmente na dose de 400 g i.a. ha-1, que mostrou eficiência de redução... / Abstract: The implementation and management of sports fields is among the agricultural activities of high technology. The ornamental point of view, the lawns are one of the most important landscape components. Its constant maintenance becomes an expensive operation and often mowing operations can offer the risk of accidents. Therefore, it is very important to search for alternatives for reducing the frequency of mowing and one of them is the use of growth regulators. Thus, this study had as objective to evaluate the efficiency of doses of growth regulators, Paclobutrazol and trinexapac-ethyl on the vegetative growth of zoysiagrass (Zoysia japonica), bermudasgrass 'Tifway 419' (Cynodon dactylon x Cynodon transvaalensis) and bermudasgrass 'Celebration' (Cynodon dactylon) under field conditions as an alternative to traditional management performed through cuts weekly. The experiment was conducted in a commercial production area of grass located in the Fazenda São José, municipality of Jardinópolis / SP, in the period from October to December 2013. The experimental design was a randomized block; there were eight treatments (control 1: no pruning; witness 2: pruning weekly, three Paclobutrazol doses: 70, 140 and 280 g ha-1; three trinexapac-ethyl: 100, 200 and 400 g ha-1). It was performed a single application of the product and the irrigation was conducted followed the technique used in the company which allocated the area for this experiment. Ratings were made at 15, 30, 45 and 60 days after application being evaluated height (cm); dry mass of shoots; dark green color index (ICVE) and quality (notes). It was found that the Paclobutrazol at the dosages tested, was not effective to suppress the zoysiagrass growth and did not affect the quality of the lawn.On the contrary, trinexapac-ethyl was effective in suppressing growth of this grass, mainly in the dose of 400 g ai ha-1, which showed a decrease in growth efficiency up to 45 days ... / Doutor

Memoria para optar al título profesional de: Ingeniero Agrónomo Mención Manejo de suelos y aguas / Durante la temporada 2003 - 2004, se evaluó el efecto de la poda de raíces y tratamiento complementario (aplicación de bioestimulante), sobre el crecimiento y distribución de las raíces en un parrón de vid “Sultanina”, en la Región Metropolitana. Adicionalmente, utilizando un “rizotrón”, se realizó el seguimiento del crecimiento de las raíces y la temperatura de suelo en 5 profundidades. Se realizaron 4 tratamientos, con 3 repeticiones, correspondientes a: T0 (sin poda de raíces, sin aplicación de bioestimulante), T1 (sin poda de raíces, con aplicación de bioestimulante en el punto de goteo), T2 (con poda de raíces a 80 cm de ambos lados de la planta, con aplicación de bioestimulante en el punto de corte) y T3 (con poda de raíces, sin aplicación de bioestimulante).

Orientador: Durvalina Maria Mathias dos Santos / Banca: Carlos Alberto Martinez Huaman / Banca: Rogério Falleiros Carvalho / Resumo: Muitos estudos apontam que o ácido salicílico (AS) está envolvido na adaptação de plantas a estresses abióticos. Entretanto, pouco se sabe sobre a ação deste hormônio na síntese de importantes metabólitos secundários em condições de estresse, como a lignina. Para tanto, foram estudados neste trabalho os efeitos de AS exógeno no crescimento, lignificação, metabolismo antioxidativo, acúmulo de osmólitos compatíveis e acúmulo de Na+ e macronutrientes em folhas de milho sob concentrações crescentes de NaCl. O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado em esquema fatorial 2x4, representado pelas concentrações de AS (0,0 e 0,5 mM) e concentrações de NaCl (0, 50, 100 e 150 mM). As plantas foram submetidas aos tratamentos no estádio fenológico V4 (quatro folhas completamente desenvolvidas), enquanto que as avaliações foram realizadas no estádio V6 (seis folhas completamente desenvolvidas). Foram avaliados os seguintes parâmetros na parte aérea: área foliar, massa seca, teor de lignina, peroxidação lipídica, teor de peróxido de hidrogênio (H2O2), atividade enzimática da superóxido dismutase (SOD) e catalase (CAT), teor de prolina (Pro) e glicina betaína, relação Na+/K+ e teor de macronutrientes (N, P, Ca, Mg, S). O estresse salino reduziu o crescimento da parte aérea da planta, além de induzir maior acúmulo de Pro e GB, peroxidação lipídica, atividade da CAT e lignificação foliar. A adição de AS à solução nutritiva atenuou o efeito da salinidade sobre o crescim... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Several studies demonstrate that salicylic acid (AS) is involved in the adaptation responses of plants to abiotic stresses. However, not much is known about the action of this hormone on the synthesis of important secondary metabolites, as lignin. For this purpose, in this work it was assessed the effects of exogenous application of SA on the growth, lignification, antioxidant metabolism, compatible osmolytes content, and concentration of Na+ and in maize leaves under increasingly NaCl concentrations. It was adopted a completely randomized design and a 2x4 factorial layout, representing SA concentrations (0.0 and 0.5 mM) and NaCl concentrations (0, 50, 100 and 150 mM) in hydroponics. Plants were exposed to the treatments at the V4 phenological stage (with four completely developed leaves), and evaluations were performed at V6 stage (six completely developed leaves). The following parameters were assessed on shoots: leaf area, dry weight, lignin content, lipid peroxidation, enzymatic activity of superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT), proline (Pro) and glycinebetaine (GB) contents, Na+ /K+ ratio and macronutrients concentration (N, P, Ca, Mg and S). Salt stress impaired shoot growth, also inducting higher accumulation of Pro and GB, lipid peroxidation, CAT activity, leaf lignification and also lower content of all evaluated nutrients. The application of AS alleviated the deleterious effects of salinity on maize shoot growth until 100 mM of NaCl, what can be related to a... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Introdução: O fator de transcrição FOXP3 está aumentado em pacientes com rejeição aguda do transplante renal, mas a sua influência na função e sobrevida do enxerto ainda não é clara. O objetivo deste estudo foi correlacionar a expressão gênica e protéica de FOXP3 com os desfechos do enxerto renal, e avaliar a sua associação com células apresentadoras do antígeno em biópsias do enxerto renal. Métodos: Foram avaliados 91 receptores de transplante renal submetidos à biópsia do enxerto por disfunção aguda ou crônica, classificados pela histologia de Banff. O RNAm de FOXP3 foi analisado por PCR em tempo real, e a proteína de FOXP3 e as células dendríticas CD83+ (CDs) por imuno-histoquímica. Todas as análises foram feitas em tecidos fixados em formalina e incluídos em parafina. A magnitude de expressão de FOXP3 foi estabelecida por curva ROC. A função e a sobrevida do enxerto em 5 anos pós-transplante foram avaliados, assim como fatores preditores de perda do enxerto. Resultados: A correlação da expressão intra-enxerto do gene e da proteína de FOXP3 foi positiva e significativa (r=0.541, p<0.001). Tanto o RNAm quanto a proteína de FOXP3 estavam aumentados em pacientes com rejeição aguda (RA), em comparação com aqueles sem rejeição (SR) (p=0,039 e p<0,001, respectivamente) ou fibrose intersticial/atrofia tubular (FI/AT) (p=0,035 e p=0,034, respectivamente). Níveis elevados do RNAm de FOXP3 (≥ 2,36 log10 RNAm) ou da proteína (≥ 2,5 células FOXP3+/mm2) não se correlacionaram com variáveis demográficas ou do transplante, mas pacientes com FOXP3 RNAm elevado tiveram maiores taxas de filtração glomerular estimada (TFGe) e uma tendência de variação positiva da TFG ao final do seguimento. O número de CDs CD83+ tendeu a ser maior nas biópsias com FI/AT em comparação com SR (p=0,065), mas não na RA. Pacientes com alta expressão de FOXP3 apresentaram maior número de CDs CD83+ na biópsia: 0,86 (0,25-4,0) vs. 0,44 (0-1,12) células/mm2, p=0,032. A sobrevida cumulativa do enxerto em 5 anos não foi influenciada pela expressão do RNAm de FOXP3 (p = 0,69, log-rank test). Na análise de regressão Cox, RNAm e proteína de FOXP3 não foram preditores independentes da perda do enxerto, somente maior TFGe foi fator protetor contra perda do enxerto. Conclusões: Este estudo mostra que a análise molecular de FOXP3 em tecido parafinado do enxerto renal é possível, uma vez que o RNAm e proteína correlacionaram-se positiva e significativamente. Como esperado, houve uma expressão aumentada de FOXP3 em biópsias com RA. Bióspias com alta expressão de FOX3 tiveram maior densidade de células dendríticas. Nesta coorte, o FOXP3 não foi associado à melhor função ou sobrevida do enxerto renal. / Background. The transcription factor FOXP3 is increased in acute rejection in renal transplant recipients, but its influence in graft function and survival is not clear yet. The aim of this study was to correlate FOXP3 gene and protein expression with graft outcomes, and to evaluate its association with antigen presenting cells in kidney graft biopsies. Methods. We assessed 91 kidney transplant recipients undergoing allograft biopsy for acute or chronic dysfunction, classified by Banff histology. FOXP3 mRNA was analyzed by real-time PCR, and FOXP3 protein and dendritic cells (CD83+ DCs) by immunohistochemistry. All analyzes were done in formalinfixed, paraffin-embedded tissue. The magnitude of FOXP3 expression was established by the receiver operating characteristics (ROC) curve. Graft function and survival at 5 years post transplantation were assessed, as well as independent predictors of graft loss. Results. Intra-graft FOXP3 gene and protein expression were significantly correlated (r=0.541, p<0.001). Both FOXP3 mRNA and protein were increased in patients with acute rejection (AR) as compared to those with no rejection (NR) (p=0.039 and p<0.001, respectively) or interstitial fibrosis/tubular atrophy (IF/TA) (p=0.035 and p=0.034, respectively). FOXP3-RNAmhigh (≥ 2.36 log10RNAm ) or FOXP3-proteinhigh (≥ 2.5 FOXP3+ cells/mm2) did not correlate with demographic or transplant variables, but patients with FOXP3-RNAmhigh had higher glomerular filtration rates (GFR) and tended to have a positive delta of GFR at last follow up. CD83+ DCs tended to be increased in biopsies with IF/TA as compared to NR (p=0.065), but were not associated to AR. Patients with FOXP3-RNAmhigh had more CD83+ DCs on biopsy: 0.86 (0.25-4.0) vs. 0.44 (0-1.12) cells/mm2, p=0.032. The cumulative 5-year graft survival of these renal allografts was not influenced by FOXP3 mRNA expression (p=0.69, log-rank test). Neither FOXP3 mRNA or protein were predictors of graft survival, only higher eGFR at biopsy was a protective factor against graft loss. Conclusions: This study gives support for performing FOXP3 molecular analysis in archival tissue of renal graft biopsies, where FOXP3 mRNA and protein had a good correlation. As expected, there was an increased FOXP3 expression in biopsies with AR, and biopsies with FOXP3-RNAmhigh associated with greater number of dendritic cells. In this cohort, FOXP3 was not associated with better renal graft outcomes.

Ingeniero en Biotecnología Molecular / TRPM4 es un canal catiónico no selectivo activado por Ca2+ intracelular, permeable a iones monovalentes tales como Na+ y K+. Se encuentra principalmente en los complejos de adhesiones focales (FAs) regulando la entrada de Ca2+, la dinámica de FA y migración celular. TRPM4 participa en diversos procesos fisiológicos tales como la activación de células T, vasoconstricción miogénica, muerte celular y proliferación, secreción de insulina, regulación de las dinámicas de adhesiones focales y migración celular. El nivel de expresión de TRPM4 se encuentra incrementado en eventos fisiopatológicos tales como daño espinal, episodios isquémicos y enfermedades neurodegenerativas. Además, datos no publicados de nuestro laboratorio sugieren que el silenciamiento del canal TRPM4 disminuye la invasión celular en células de melanoma in vitro y también favorece el proceso de metástasis in vivo. Por tanto, el estudio de los mecanismos de regulación de la expresión, tráfico y actividad de TRPM4 tienen una alta relevancia biomédica. En nuestro laboratorio, hemos demostrado que este canal interactúa con las proteínas End-Binding (EBs) a través de un motivo consenso “S/TxIP” localizado en el extremo amino terminal, regulando la exportación y el tráfico de los canales desde el retículo endoplásmico al Aparato de Golgi y a la membrana plasmática. Por otra parte, hemos generado péptidos que afectan competitivamente la interacción del canal TRPM4 con las proteínas EBs (EGFP-N-TRPM4WT), disminuyendo la disponibilidad del canal en la membrana plasmática. Se determinó que la competencia de la interacción TRPM4-EBs, disminuye significativamente el desensamblaje de las adhesiones focales, y en consecuencia a la invasión celular. xii Estos datos sugieren que la competencia de la interacción entre TRPM4 y EB puede constituir potenciales herramientas farmacológicas para ser usados como agente anti-metastásico, para su posterior uso en pacientes que padezcan de cáncer. / TRPM4 is a non-selective cationic channel, activated by intracellular Ca2+, permeable to monovalent ions such as Na+ and K+, which is mainly found in focal adhesions (FAs). On these complexes, TRPM4 regulates Ca2+ entry, FAs dynamics and cell migration. In addition, TRPM4 participates in several physiological processes such as T cell activation, myogenic vasoconstriction, cell death and proliferation, insulin secretion, regulation of FA dynamics and cell migration. On the other hand, it has been shown that their level of expression is increased in several pathophysiological events such as spinal damage, ischemic episodes and neurodegenerative diseases. Moreover, unpublished data from our laboratory suggest that TRPM4 silencing decreases the cellular invasion in melanoma cells and supresses the process of metastasis in vivo. Therefore, the study of the mechanisms of regulation of the expression, trafficking and activity of TRPM4 has high biomedical relevance. In our laboratory, we have demonstrated that TRPM4 channels interact with End-Binding proteins (EBs) through a “S/TxIP” consensus motif located at the amino terminus, regulating the exporting and trafficking of the channels from the endoplasmic reticulum to the Golgi apparatus and the plasma membrane. Since TRPM4 channel would be regulated by the “SWIP” motif, we have generated peptides that competitively affect the interaction of the TRPM4 channel with the EBs proteins, decreasing the availability of the channel in the plasma membrane. The functional effect of this competition on cell invasion was determined by transwell chamber assays, and the effect of competition on the distribution of focal adhesion was determinated by immunofluorescence and confocal microscopy. xiv Finally, we determined that a cell penetrating peptide (TAT-N-TRPM4WT) reduces the invasion of A549 cells and also affect the number and the size of FA in both A549 and B16-F10 cell lines. These data suggest that the competition of the interaction between TRPM4 and EB proteins may constitute a potential pharmacological target to be used as an anti-metastatic agent. / diciembre 2018

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O linfoma de Hodgkin classico (LHc) e a neoplasia linfoide mais comum em adultos jovens. Trata-se de doenca curavel em 75% dos casos, porem 25% dos pacientes vao apresentar doenca refrataria ou recidivada com pior evolucao. Diferente de todas as neoplasias humanas, as celulas malignas do LHc, denominadas Reed-Sternberg (RS), compoe 1 a 5% de toda a massa tumoral, sendo o restante composto por celulas inflamatorias normais. As celulas de RS perpetuam-se em meio a este microambiente devido a incapacidade do sistema imune em reconhece-las e combate-las. Linfocitos T reguladores (LTR) sao moduladores importantes do microambiente em doencas linfoproliferativas e tem a capacidade de limitar a funcao dos linfocitos T efetores (LTE). Ja foi descrito que, no microambiente tumoral, os LTR estao aumentados e os LTE diminuidos. Mas o comportamento destas celulas no sangue periferico de pacientes com neoplasias ainda nao esta bem explicado. Portanto, compreender qual o papel do desequilibrio imunologico no LHc e crucial para o desenvolvimento de novos fatores prognosticos e alvos terapeuticos. Objetivos: Quantificar os LTR e LTE no sangue periferico e microambiente de pacientes com LHc. Correlacionar a presenca dos LTR e LTE no microambiente tumoral com o sangue periferico. Correlacionar a presenca do EBV nas celulas RS com a quantificacao destas subpopulacoes de linfocitos T. Avaliar a importancia da presenca do EBV, dos LTR e LTE na resposta ao tratamento dos pacientes com LHc. Avaliar o impacto do tratamento na quantificacao de linfocitos T reguladores e TH17 de pacientes com LHc. Casuistica e Metodo: Foram recrutados para este estudo, prospectivamente, 60 pacientes diagnosticados com LHc entre marco de 2009 e marco de 2013 em dois servicos de Hematologia distintos da cidade de São Paulo. Foram incluidos, tambem, 19 controles saudaveis recrutados no banco de sangue do Hemocentro da UNIFESP apos serem aprovados para doacao. A quantificacao de LTR e LTE foi avaliada por citometria de fluxo utilizando os anticorpos CD3, CD4, CD25, FOXP3, GITR e IL17 e por imunoistoquimica utilizando o anticorpo FOXP3. Resultados: A quantificacao de celulas T CD4+FOXP3+ e CD4+GITR+ foi maior em pacientes que nos controles (36,92 u 23,5%; p=0,009 e 39,63 - 14,3%; p<0,0001 respectivamente). O tratamento do LHc reduz a quantificacao de linfocitos T CD4+GITR+ (19,44 - 16,8%; p=0,036). A contagem de linfocitos T CD4+FOXP3+, CD4+CD25highFOXP3+ e CD4+IL17+ e maior nos pacientes que nos controles (32,1 u 24,24%; p=0,009, 31,28 u 21,79%; p=0,037, 32,9 - 18,71%; p=0,002 e 33,00 u 18,53; p=0,001, respectivamente). Os pacientes com sintomas B apresentaram quantificacao de linfocitos CD4+FOXP3+ no microambiente maior (p=0,032). Conclusoes: Houve correlacao positiva e significante entre a quantificacao de LTR circulante e no microambiente e o estadiamento avancado da doenca e entre a quantificacao de LTR e LTE circulantes nos pacientes e nos controles. Nao houve correlacao da quantificacao de LTR e LTE no sangue periferico ou no microambiente com a presenca do virus EBV nas celulas de RS ou entre a quantificacao de LTR e LTE em sangue periferico e a quantificacao de LTR no microambiente tumoral dos pacientes estudados. O tratamento quimio e radioterapico diminuiu a quantificacao de LTR e LTE circulantes. / BV UNIFESP: Teses e dissertações