Orientadores: Carmen Verissima Ferreira Halder, Silvia Mika Shishido / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-20T22:59:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Machado_Daisy_D.pdf: 7339714 bytes, checksum: b126414072e5dc8abcca091c7af0fdbf (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Melanoma é o tipo mais agressivo de tumor de pele e uma das principais causas de morte por tumor de pele, devido a sua alta capacidade metastática. Em termos de estratégias terapêuticas de combate ao melanoma tem-se dado ênfase no controle da resistência e da metástase. Nosso grupo de pesquisa observou que a riboflavina irradiada (RFi) induz apoptose de células de câncer de próstata, renal e leucemia mielóide. Portanto, o objetivo geral deste trabalho foi utilizar a RFi para modular química e geneticamente as vias de transdução de sinal associadas com a sobrevivência, resistência e agressividade do melanoma. Assim, neste trabalho estão apresentados os dados sobre a influência da RFi em diferentes aspectos metabólicos das células de melanoma murino (B16F10), tais como: citotoxicidade, adesão, invasão, migração, capacidade de formação de colônia e em mediadores de transdução de sinal: Src quinase, mTOR e componentes da via sonic hedgehog. Em todos os experimentos a riboflavina (RF) foi previamente irradiada com UVA (dose de 9 J/cm²). Foi observado inibição da proliferação celular com valor de IC50 de 50 ?M. De forma interessante, RFi na faixa de concentração de nanomolar foi eficiente na inibição da formação de colônias. Além disso, causou a redução da adesão das células B16F10, quando utilizada na concentração de 1?M. A capacidade de migração e invasão das células de melanoma foi reduzida na presença da RFi, nas concentrações de 1 e 30 ?M respectivamente, porém a resposta foi independente da dose. A atividade e expressão das metaloproteinases foram diminuídas na presença de RFi, indicando inibição na capacidade de invasão. Sob o contexto de sinalização a RFi modulou negativamente a via sonic hedgehog, PI3K/mTOR e aumentou a expressão da p53 e PTEN. O conjunto de resultados obtidos nesse trabalho mostra que flavinas são candidatas promissoras para a intervenção farmacológica do melanoma / Abstract: Melanoma is the most aggressive type of skin disorder and a major cause of death by skin's disease due to its highly metastatic ability. In terms of melanoma therapeutic strategies has given emphasis on control of resistance and metastasis. Our group observed that irradiated riboflavin (RF) induces apoptosis of prostate cancer cells, kidney cancer cells and myeloid leukemia. Therefore, the goal of this study was to employ irradiated RF for modulating chemical and genetically signal pathways associated with melanoma survival, resistance and aggressiveness. Thus, in this manuscript data about the influence of RF in different cellular metabolic aspects of murine melanoma (B16F10) such as cytotoxicity, adhesion, invasion, migration, colony formation and signal transduction mediators Src kinase, mTOR and sonic hedgehog components, will be presented. In all experiments the RF was previously irradiated with UVA (dose of 9 J/cm²). Inhibition of cell proliferation was observed with IC50 value of 50 ?M. Interestingly, RF in a nanomolar concentration inhibited the formation of colonies. In addition, 1 ?M irradiated RF caused a reduction of B16F10 cells adhesion. The ability of migration and invasion of melanoma cells was reduced in the presence of RF, however, those cells response was dose-independent. The activity and expression of metalloproteinases were diminished indicating reduction of cellular invasiveness capacity. Sonic hedgehog and PI3K/mTOR pathways were negatively modulated and the expression of p53 and PTEN were increased in melanoma cells treated with irradiated RF. The findings showed in this study brought out flavins as promising candidates for pharmacological intervention of melanoma / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Lauro Tatsuo Kubota / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-03T14:33:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Yamashista_Miyuki_D.pdf: 2691412 bytes, checksum: d9599fb74aa0c3831f9b0cd0b287a7d8 (MD5) Previous issue date: 2002 / Doutorado

Objetivo: Evaluar el efecto inhibitorio de la terapia fotodinámica (TPD) con Diodo Emisor de Luz (LED) azul sobre Streptococcus mutans y Streptococcus sanguinis en presencia y ausencia de riboflavina (E - 101). Materiales y métodos: Se realizaron cuatro tratamientos en presencia y ausencia de la exposición de luz LED azul y riboflavina al 0.5% sobre Streptococcus mutans y Streptococcus sanguinis. Las bacterias fueron cultivadas en medio BHI y la unidad de medida utilizada fue las unidades formadoras de colonias (UFC/ml). Resultados: La fotoactivación con luz LED azul a 40 segundos no tuvo efecto inhibitorio sobre S. mutans y S. sanguinis. Sin embargo, al realizar la terapia fotodinámica en presencia de riboflavina, se observó que el crecimiento bacteriano fue menor (p<0.05). Asimismo, se identificó que la viabilidad bacteriana de S. sanguinis es menor que la de S. mutans, con un 40% y 66% respectivamente. Conclusiones: Se concluye que la riboflavina tiene un efecto inhibitorio significativo sobre la viabilidad bacteriana de S. mutans y S. sanguinis. / Objective: To evaluate the inhibitory effect of photodynamic therapy (TPD) with blue Light Emitting Diode (LED) on Streptococcus mutans and Streptococcus sanguinis in presence and absence of riboflavin (E-101). Materials and methods: Four treatments were performed in presence and absence of blue LED and riboflavin (0.5%) exposure on Streptococcus mutans and Streptococcus sanguinis. The bacteria were grown in BHI medium and the unit of measurement used was the colony forming units (CFU / ml). Results: Photoactivation with blue LED light at 40 seconds had no inhibitory effect on S. mutans and S. sanguinis. However, when performing photodynamic therapy in presence of riboflavin, it was observed that bacterial growth was lower (p <0.05). Likewise, it was identified that bacterial viability of S. sanguinis is lower than S. mutans, with 40% and 66% respectively. Conclusions: It is concluded that riboflavin has a significant inhibitory effect on the bacterial viability of S. mutans and S. sanguinis. / Tesis

Entende-se por pólen apícola o resultado da aglutinação do pólen das flores, efetuado pelas abelhas operárias, mediante néctar e substâncias salivares, o qual é recolhido no ingresso da colmeia. A literatura descreve que esse alimento contém proteínas, carboidratos, lipídeos, vitaminas e minerais. De acordo com estudo prévio, amostras de pólen apícola in natura e desidratado, da cidade de Pariquera-Açu (São Paulo), apresentaram teores significativos de vitamina B1(tiamina) e B2 (riboflavina), além da presença dos vitâmeros da vitamina B3 (ácido nicotínico e nicotinamida) e B6 (piridoxal, piridoxol e piridoxamina) em sua composição o que foi associado à flora local explorada pelas abelhas. A região Sul do Brasil possui clima, relevo e vegetação diferenciados de outras regiões, necessitando-se assim da verificação do potencial vitamínico deste produto local. Destaca-se, ainda, o fato de que nesta região encontra-se um dos dois maiores produtores nacionais de pólen apícola (estado de Santa Catarina). O presente trabalho teve como objetivo principal quantificar os teores das vitaminas do complexo B: vitaminas B1 e B2, assim como os vitâmeros das vitaminas B3 e B6. Foram coletados 28 lotes de pólen apícola desidratado de diferentes localidades da região Sul durante o período de agosto de 2011 a dezembro de 2012 que posteriormente foram armazenados, a -18 °C até o momento das análises. As vitaminas do complexo B foram analisadas por cromatografia liquida de alta eficiência (CLAE) na matriz pólen apícola desidratado e os resultados foram expressos em base seca. Entre as amostras analisadas foram verificados teores de vitamina B1 variando entre 0,46 e 1,83 mg / 100 g de pólen apícola; vitamina B2 de 0,40 à 1,86 mg / 100 g e quanto à vitamina B6 apenas os vitâmeros piridoxal e piridoxamina puderam ser quantificados em todos os lotes analisados. O piridoxal teve variação entre as amostras de 0,42 à 6,70 mg / 100 g e a piridoxamina de 0,26 à 0,95 mg / 100g. Em relação à vitamina B3, o vitâmero ácido nicotínico apresentou-se nos diferentes lotes variando de 0,68 à 3,93 mg / 100 g e a nicotinamida de 0,27 à 5,54 mg / 100 g de produto. Tomando-se como porção sugerida para consumo diário 25 g de pólen apícola, verificou-se que num total de 28 amostras, 15 foram consideradas fontes e 2 como ricas em tiamina; 19 lotes foram fontes e 3 ricos em riboflavina, e; 2 lotes foram fontes e 26 ricos em piridoxina segundo à Ingestão Diária Recomendada (IDR) para adultos como disponibilizado na Resolução de Diretoria Colegiada (RDC) nº. 269, de 22 de setembro de 2005. / Bee pollen is understood to be the result of agglutination of pollen from flowers, made by worker bees, and nectar through salivary substances, which is collected at the hive entrance. The literature describes that this product contains proteins, carbohydrates, lipids, vitamins, minerals. Previous study with fresh and dehydrated bee pollen, from the city of Pariquera-Açu (São Paulo) showed significant levels of vitamin B1 (thiamine), B2 (riboflavin), presence of B3 (nicotinic acid and nicotinamide) and B6 (pyridoxal, pyridoxamine, piridoxol) vitamins vitamers in its composition which was associated with the local flora explored by bees. Southern Brazil has a differentiated climate, topography and vegetation from other regions, thus requiring verification of vitamin potential of this local product. Also stands out the fact that this region is one of the two largest national producers of bee pollen (Santa Catarina state). This study aimed to quantify the levels of B complex vitamins: vitamins B1, B2, as well as the vitamers of vitamins B3 and B6. Thus, it was collected 28 batches of dehydrated bee pollen from different locations in the South during the period from August 2011 to December 2012. Samples were obtained and subsequently stored at -18 ° C until the analysis time. B vitamins were analyzed by high performance liquid chromatography (HPLC) in bee pollen dehydrated matrix and results were expressed on a dry basis. Among the samples it levels of vitamin B1 varied from 0.46 to 1.83 mg / 100 g; vitamin B2 from 0.40 to 1.86 mg / 100 g; and for vitamin B6, only the pyridoxal and pyridoxamine vitamers could be quantified in all analyzed batches. The pyridoxal had variation between samples from 0.42 to 6,70 mg / 100 g and pyridoxamine from 0.26 to 0.95 mg / 100g. Taking 25 g of bee pollen as suggested for daily intake portion, it was found in a total of 28 samples that 15 were considered sources and 2 rich in thiamine; 19 lots were sources and 3 rich in riboflavin, and; 2 lots were sources and 26 rich in pyridoxine in relation to the Reference Daily Intake (RDI) for adults as provided in Resolução de Diretoria Colegiada (RDC) nº 269, de setembro de 2005.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-01-28 / Objetivo: verificar a relação entre queixa, aspectos funcionais da deglutição e impacto na qualidade de vida referente à voz e à deglutição, em pacientes portadores da doença de Parkinson, submetidos à administração de riboflavina, no período de um ano. Métodos: participaram do estudo 16 pacientes portadores da Doença de Parkinson, com média de idade de 67,25 anos, média do nível de severidade da doença de II para III e média de tempo de diagnóstico da doença de Parkinson de 3,5 anos. As avaliações videofluoroscópicas da deglutição foram realizadas antes e após um ano da administração de riboflavina e restrição de carne vermelha e de aves. Foram realizadas a análise qualitativa da deglutição, a verificação da presença de queixa com relação à deglutição e aplicação de dois protocolos de qualidade de vida sendo relacionados um com o impacto da alteração vocal, e outro com o impacto da alteração na deglutição. A análise quantitativa compreendeu a realização de medidas de deslocamento do osso hióide, de abertura do esfíncter esofágico superior e de constrição da faringe. Resultados: foram observadas redução da queixa e discreta piora na qualidade de vida relacionada à voz e à deglutição, maior freqüência de ocorrência de deglutição normal, no momento pós-riboflavina. Não foram observadas diferenças significativas entre as medidas quantitativas. Conclusões: Conclui-se neste estudo que: houve melhora, apesar de não significativa, da queixa relacionada à deglutição; não ocorreram pioras significativas na dinâmica da deglutição, com exceção do deslocamento da cartilagem cricóidea na consistência de líquido fino após um ano de estudo; não houve piora com relação ao impacto na qualidade de vida, tanto relacionado à deglutição, quanto ao aspecto vocal; os pacientes que não apresentavam queixas de deglutição no momento pré apresentaram melhora na dinâmica da deglutição, com exceção da constrição da faringe; os pacientes com queixa de deglutição no momento pré apresentaram melhora nos índices de qualidade de vida e na auto-avaliação vocal segundo o QVV, no momento pós. / Objective: to verify the relation between clinical complaint, swallowing functional aspects and the impact on quality of life related to voice and swallowing in patients with Parkinson´s disease submitted to treatment with riboflavin during one year period. Method: sixteen patients with Parkinson´s disease participated in the study; mean age was 67.25 years old, mean degree of disease severity was II to III and mean time of disease diagnosis was 3.5 years. Videofluoroscopic evaluations were performed before and after one year of treatment with riboflavin and restriction diet of read meat and chicken. It were analyzed: qualitative analysis of swallowing, presence of complaints related to swallowing, application of questionnaires related to the impact of voice and swallowing alterations and quantitative analyses of swallowing, which included computerized measurements of hyoid bone and cricoid cartilage displacement, opening of the superior esophageal sphincter and pharyngeal constriction. Results: it were observed: decrease of complaints and slight worsening in quality of life impact regarding voice and swallowing and more frequent normal swallowing post riboflavin; there were no significant changes regarding quantitative measurements. Conclusions: there was a non significant improvement regarding swallowing complaints; it were not observed significant impairments of the swallowing dynamics, except for cricoid cartilage displacement during thin liquid ingestion at the end of the treatment; there was no impairment of quality of life regarding swallowing or voice; patients without swallowing complaints at the beginning of the treatment showed improvement in swallowing dynamics, except for pharyngeal constriction; patients with swallowing complaints at the beginning of the treatment showed improvement regarding quality of life and vocal selfevaluation after treatment. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Programa de Pós-Graduação em Engenharia Ambiental. PROÁGUA, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2014-12-05T15:50:54Z No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_ImobilizaçãoMediadorRedox.pdf: 2025276 bytes, checksum: 269132a3379ce8331bff474c7a962747 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2014-12-09T21:00:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_ImobilizaçãoMediadorRedox.pdf: 2025276 bytes, checksum: 269132a3379ce8331bff474c7a962747 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-09T21:00:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_ImobilizaçãoMediadorRedox.pdf: 2025276 bytes, checksum: 269132a3379ce8331bff474c7a962747 (MD5) Previous issue date: 2012 / A literatura tem demonstrado a eficiência de algumas substâncias na melhoria da cinética de remoção de cor em águas residuárias contendo corantes do tipo azo. Entre essas substâncias está a riboflavina (vitamina B2) que é conhecida por atuar como mediador redox nas transferências de elétrons de uma fonte doadora para o azo corante. A riboflavina em sua forma livre é solúvel em meio aquoso e pode ser perdida no efluente final em um sistema de tratamento. A imobilização desta vitamina em um suporte insolúvel pode proporcionar a retenção e recuperação da mesma nos reatores e consequentemente viabilizar o seu reuso diminuindo os custos do processo. Neste trabalho realizou-se a síntese de um novo material (CM3) contendo riboflavina imobilizada na celulose via ligação covalente e investigou-se a sua influência na degradação anaeróbia do azo corante amarelo ouro remazol RNL. Os ensaios foram feitos em escala de bancada e regime de batelada por períodos de 48 horas e temperatura controlada (25°C). A primeira etapa do trabalho consistiu na modificação química da celulose. Este polímero foi mercerizado, succinilado e passou por reação com anidrido acético para em seguida reagir com a riboflavina e dar origem à CM3. Os efeitos da modificação foram analisados por técnicas de infravermelho e análise elementar. A concentração de riboflavina introduzida na celulose foi estimada em 71,3mg/g. A estabilidade deste material foi testada em diferentes condições de pH e mostrou-se estável entre os pH 2 e 9. A segunda etapa do trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos da riboflavina imobilizada na degradação anaeróbia do azo corante amarelo ouro remazol RNL. Os experimentos realizados com lodo anaeróbio e CM3 mostraram uma taxa de remoção 1,56 vezes maior do que os ensaios feitos sem nenhum tipo de mediador redox, comprovando assim a efetividade deste material na melhoria da cinética de degradação anaeróbia do azo corante modelo. ______________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Reports in the literature have demonstrated the effectiveness of some substances in improving the kinetics of color removal in wastewater containing azo dyes. Among these substances is riboflavin (vitamin B2), which is known to act as a redox mediator in the transfer of electrons from a donor source such as glucose to an azo dye. The use of riboflavin in its free form, which is soluble in aqueous medium, is not attractive from an economic point of view since it is lost in the effluent upon treatment. Immobilization of this vitamin onto an insoluble support may provide improvements such as retention and recovery in the same reactor and allowing its reuse thereby reducing the costs related to the process. The aim of this work was to synthesize a new material (CM3) containing riboflavin immobilized covalently onto cellulose and investigate its influence on the anaerobic degradation of a model azo dye (Remazol Gold Yellow RNL). The tests were performed in batch reactors and the temperature of the system was set at 25° C and maintained for 48 h. The first stage of the study was the chemical modification of cellulose. For this, the homopolymer was mercerized (NaOH 20%), modified with succinic anhydride, and then reacted with acetic anhydride in order to form internal carboxylic acid anhydride functions which were used to bind riboflavin to cellulose, yielding CM3. Chemical modification of cellulose was evaluated by techniques as IR with Fourier transform and elemental analysis. The concentration of riboflavin introduced into the cellulose was estimated an 71.3mg/gCM3 and chemical stability tests with CM3 showed it was stable between pH 2 and 9. The second stage of the study was to evaluate the effects of riboflavin immobilized on to cellulose (CM3) on the anaerobic degradation of azo dye, Remazol Gold Yellow (RNL). The experiments with anaerobic sludge and CM3 showed a removal rate 1.65 times greater than those tests carried out without any redox mediator, thereby evidencing the effectiveness of the immobilized catalyst.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:10:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Julliane Tamara Araujo de Melo.pdf: 3651115 bytes, checksum: d9a05a183487ffcfb8bd75edd16acd9d (MD5) Previous issue date: 2010-06-28 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Riboflavin is a vitamin very important in aerobic organisms, as a precursor of many coenzymes involved in the electron transporter chain. However, after photosensitization of riboflavin with UV or visible light, it generates reactive oxygen species (ROS), which can oxidize the DNA. The repair of oxidative lesions on DNA occurs through the base excision repair pathway (BER), where APE1 endonuclease plays a central role. On the other hand, the nucleotide excision repair pathway (NER) repairs helix-distorting lesions. Recently, it was described the participation of NERproteins in the repair of oxidative damage and in stimulation of repair function fromAPE1. The aim of this research was to evaluate the cytotoxic effects of photosensitized riboflavin (RF*) in cells proficient and deficient in NER, correlating with APE1 expression. For this propose, the cells were treated with RF* and it was performed the cell viability assay, extraction of whole proteins, cells fractionation, immunoblotting, indirect immunofluorescence and analysis of polymorphisms of BER gens. The results evidenced that cells deficient in XPA and CSB proteins were more sensitive to RF*. However, XPC-deficient cells presented similar resistance to MRC5- SV cells, which is proficient in NER. These results indicate that XPA and CSB proteins have an important role on repair of oxidative lesions induced by RF*. Additionally, it was evidenced that single nucleotide polymorphisms (SNPs) in BER enzymes may influence in sensitivity of NER-deficient cell lines. Concerning the APE1 expression, the results showed that expression of this protein after treatment with RF* only changed in XPC-deficient cells. Though, it was observed that APE1 is recruited and is bound to chromatin in MRC5-SV and XPA cells after treatment with RF*. The results also showed the induction of DNA damage after treatment with RF*, through the analysis of-H2AX, since the treatment promoted an increase of endogenous levels of this phosphorylated protein, which acts signaling double strand-break on DNA. On the other hand, in XPC-deficient cells, regardless of resistance of RF*, the endogenous levels of APE1 are extremely reduced when compared with other cell lines and APE1 is not bound to chromatin after treatment with RF*. These results conclude that RF* was able to induce cell death in NERdeficient cells, where XPA and CSB cells were more sensitive when compared with MRC5-SV and XPC-deficient cells. This last result is potentially very interesting, since XPC-deficient cell line presents low levels of APE1. Additionally, the results evidenced that APE1 protein can be involved in the repair of oxidative damage induced by RF*, because APE1 is recruited and bound strongly to chromatin after treatment. / A riboflavina ? uma vitamina de fundamental import?ncia em organismos aer?bios, sendo precursora de importantes coenzimas que participam da cadeia transportadora de el?trons. Contudo, ap?s a sensibiliza??o da riboflavina com luz UV ou luz vis?vel, observou-se a forma??o de esp?cies reativas de oxig?nio (EROs), as quais podem oxidar o DNA. O reparo de les?es oxidativas no DNA ocorre principalmente atrav?s da via de reparo por excis?o de bases (BER), na qual a endonuclease APE1 exerce um papel central. Por sua vez, a via de reparo por excis?o de nucleot?deos (NER) atua reparando les?es no DNA que causam distor??es na dupla h?lice. Recentemente tem sido descrito a participa??o da via NER na remo??o de danos oxidativos e na estimula??o da fun??o de reparo de APE1. Desta forma, o objetivo desta pesquisa foi analisar os efeitos citot?xicos da riboflavina fotossensibilizada (RF*) em c?lulas proficientes e deficientes na via NER, correlacionando ? express?o de APE1. Para tanto, as linhagens proficientes e deficientes no NER foram submetidas ao tratamento com RF* e em seguida foram realizados os ensaios de viabilidade celular, extra??o de prote?nas totais, fracionamento celular, immunoblotting, imunofluoresc?ncia indireta e a an?lise de polimorfismos em genes da via BER. Os resultados evidenciaram perfis de sensibilidade distintos ao estresse oxidativo induzido pela RF*, onde as linhagens XPA e CSB foram mais sens?veis, enquanto a linhagem XPC mostrou resist?ncia similar ? linhagem MRC5-SV, a qual ? proficiente na via NER. Esses resultados indicam que as prote?nas XPA e CSB possuem um importante papel no reparo das les?es oxidativas induzidas pela RF*. Al?m disso, foi demonstrado que polimorfismos em um ?nico nucleot?deo (SNPs) em enzimas do BER podem influenciar na sensibilidade dessas linhagens. Em rela??o ?s an?lises dos n?veis de express?o de APE1, os resultados mostraram que houve altera??o na express?o dessa prote?na ap?s o tratamento com RF* somente na linhagem deficiente em XPC. Por?m, observou-se que APE1 ? recrutada e se torna ligada ? cromatina ap?s o tratamento nas linhagens MRC5-SV e XPA. Os resultados tamb?m comprovaram a indu??o de danos ap?s o tratamento com RF* atrav?s do estudo da prote?na-H2AX, pois o tratamento provocou um aumento nos n?veis end?genos desta prote?na fosforilada, a qual atua na sinaliza??o de quebras de fita dupla no DNA. Por?m, na linhagem XPC, al?m de ter sido observado uma curva de sobreviv?ncia semelhante ? linhagem MRC5-SV, os n?veis end?genos de APE1 s?o significativamente reduzidos quando comparados com as outras linhagens e APE1 n?o se encontra ligada ? cromatina ap?s tratamento com RF*. Conclui-se que a RF* foi capaz de induzir a morte celular em linhagens deficientes no sistema de reparo por excis?o de nucleot?deos, onde as linhagens XPA e CSB foram mais sens?veis quando comparadas ? linhagem normal MRC5-SV e ? linhagem XPC. Este ?ltimo resultado ? potencialmente interessante, considerando que a linhagem XPC apresenta baixos n?veis prot?icos de APE1. Adicionalmente, os resultados comprovaram que a prote?na APE1 pode estar envolvida no reparo de danos oxidativos causados pela RF*, j? que APE1 ? recrutada na cromatina e se liga fortemente a esta ap?s o tratamento.

Orientadores: Carmen Verissima Ferreira, Silvia Mika Shishido / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-13T19:46:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Machado_Daisy_M.pdf: 1450123 bytes, checksum: e8dc961f855a7ea88daa10bb8ee00685 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A riboflavina (RF) é uma vitamina hidrossolúvel pertencente ao complexo vitamínico B2 e precursora das coenzimas FMN e FAD. Além da função biológica como componente de coenzimas, a RF apresenta atividade antitumoral e fotossensibilizante. A proposta principal desse estudo se baseou na avaliação da fototoxicidade da RF, bem como na determinação de marcadores moleculares da inflamação, senescência e morte celular, ações deletérias normalmente desencadeadas pela radiação UVA. Os resultados obtidos indicam que a RF tem potencial aplicação na terapia fotodinâmica, levando se em conta os modelos celulares utilizados, fibroblastos (BALB/c 3T3) e queratinócitos humanos (HaCaT). As células BALB/c 3T3 tratadas com RF 6,0 mM e dose de 5 J/cm² de radiação UVA, apresentaram indução de apoptose principalmente pela via intrínseca. A indução de senescência foi evidenciada pelo aumento da p-caveolina e aumento da atividade da MMP-2 (principal protease responsável pela degradação de colágeno). De acordo com os níveis de NFkB e p- IKKa/b, a RF não alterou significativamente o processo de inflamação desencadeado pela radiação UVA. Nas células HaCaT, o tratamento com 5,0 mM de RF e dose de 5 J/cm² de radiação UVA levou a ativação da apoptose induzida tanto pela via extrínseca como pela intrínseca. O aumento nos níveis de p-caveolina, p21 e da atividade das MMPs-2 e -9 sugerem à indução de processo de senescência precoce também nos queratinócitos. Além disto, a diminuição da expressão do NF?B indica que o mesmo esteja se translocando para o núcleo e, portanto, regulando a resposta inflamatória. Outro aspecto avaliado foi a influência do copolímero F-127 na fototoxicidade da RF. A irradiação do hidrogel contendo F-127 e riboflavina manteve a propriedade fototóxica da mesma. Nossos dados sugerem que a RF apresenta potencial para uso em terapia fotodinâmica, uma vez que a mesma se mostrou fototóxica quando irradiada com doses subtóxicas de radiação UVA. / Abstract: Riboflavin (RF) is a water soluble vitamin which belongs to vitamin B2 complex, an essential precursor of FMN and FAD coenzymes. Besides being a component of coenzymes, RF displays antitumoral and photossensitizing activities. The main proposal of this study was to evaluate the RF phototoxicity, as well as to determine molecular markers of inflammation, senescence and cellular death, deleterious actions normally triggered by the UVA radiation. Taking into consideration both cell lines used as models, fibroblasts (BALB/c 3T3) and human keratinocytes (HaCaT), the results obtained indicate that RF has potential application in photodynamic therapy. BALB/c 3T3 cells treated with 6.0 µM RF associate with UVA radiation (5 J/cm²) showed apoptosis induction mainly via intrinsic pathway. An increase of p-caveolin and MMP-2 activity (major protease responsible for degradating collagen) evidenced senescence induction. According to NF?B and p-IKKa/ß levels, RF did not significantly change the process of inflammation triggered by UVA radiation, in fibroblast cells. In HaCaT cells 5.0 µM RF associated with UVA radiation (5 J/cm ²) was observed apoptosis induction thorough extrinsic and intrinsic pathways. Senescence process was also observed in keratinocytes as indicated by an increase of pcaveolin, p21 and MMPs-2 and -9 activities. Besides, the decrease of NF?B expression indicates that this transcription factor translocates into the nucleus and in turn, regulates inflammatory response. Other aspect evaluated in this work was the influence of the F-127 in the RF phototoxicity. The irradiation of hydrogel containing F-127 and RF remained RF phototoxicity property. Our findings suggest that RF displays potential for use in photodynamic therapy, once it was phototoxic when irradiated with subtoxic UVA dose / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Carmen Verissima Ferreira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-14T15:16:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ChavesNeto_AntonioHernandes_D.pdf: 8240508 bytes, checksum: 293949f75ca619cdc0fa61d29d1703ba (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Riboflavina (Rb - Vitamina B2) é o precursor das flavocoenzimas essenciais flavina mononucleotídeo (FMN) e flavina adenina dinucleotídeo (FAD). Estas coenzimas participam de processos enzimáticos dependentes das reações de transferências de elétrons, que ocorrem nas vias de produção de energia, biossíntese, desintoxicação e sequestro de elétrons. O aumento dietético da riboflavina e piridoxina foi associado com maiores densidades minerais em mulheres e homens idosos. Fotoderivados da riboflavina demonstraram efeitos citotóxicos em células cancerosas de próstata e leucemias, entretanto, o efeito direto da Rb e seus fotoderivados em osteoblastos não foram examinados. Neste trabalho os efeitos biológicos da Rb e riboflavina irradiada (IRb) foram investigados na linhagem de pré-osteoblastos MC3T3-E1, um modelo bem aceito de osteogênese in vitro caracterizado pela indução de genes específicos associados com o fenótipo osteoblástico quando tratados com ácido ascórbico e ß-glicerofosfato. A viabilidade celular foi avaliada através da redução do MTT, da incorporação do corante vermelho neutro e do conteúdo de ácidos nucléicos. Marcadores de diferenciação osteoblástica foram analisados através do RT-PCR semi-quantitativo (osteopontina e osteocalcina) e através de análises colorimétricas de atividade da fosfatase alcalina (FAL) e síntese de colágeno pela coloração de picrosirius. As atividades das metaloproteinases (MMP) -9 e -2 foram avaliadas pela zimografia de gelatina. Microarranjos de peptídeos com subtratos específicos para quinases e imunoblotting foram usados para identificar os efeitos na sinalização celular. As atividades de enzimas antioxidantes (superóxido dismutase, catalase, glutationa peroxidase e glutationa S-transferase) foram determinadas em lisados celulares usando métodos espectrofotométricos. As atividades das caspases-8, -9 e -3 foram analisadas através de métodos colorimétricos. Na primeira análise Rb e IRb causaram a parada do ciclo celular na fase G0/G1 e também a inibição da quinase AKT, um mediador da proliferação. Flavinas causaram a diferenciação de pré-osteoblastos, evidenciada pelo aumento da expressão de osteocalcina, osteopontina e BMP-2. Atividades mais elevadas de MMP-9 e MMP-2 também foram observadas. A capacidade das flavinas em engatilhar a diferenciação de osteoblastos foi reforçada pelo aumento da conexina 43, diminuição da caveolina-1 e repressão da sinalização Notch. Na segunda análise, nós encontramos que as interações entre Rb, em sua forma irradiada e não-irradiada, e indutores osteogênicos (ácido ascórbico e ß-glicerofosfato) afetaram significativamente a proliferação de osteoblastos, a atividade de FAL, biossíntese de colágeno, expressão de osteocalcina e osteopontina, a atividade das MMP-2 e MMP-9 e a expressão de fatores osteoclastogênicos (RANKL e osteoprotegerina). Nós também encontramos que os efeitos das flavinas em osteoblastos nesta segunda etapa foram independentes das suas propriedades antioxidantes. A atividade biológica da combinação de indutores osteogênicas com Rb e seus fotoprodutos foi associada com a ativação de diferentes vias de sinalização (AKT, FAK, CaMKII), caspases -8, -9 e -3 e aumento da expressão e/ou estabilização de fatores de transcrição osteoblásticos (Runx2 e ß-catenin). Este estudo nos trouxe fortes evidências que altas concentrações de Rb e IRb geraram um microambiente osteogênico através da modulação de diferentes vias de sinalização, além de promover um efeitos aditivo durante a diferenciação das células pré-osteoblasticas MC3T3 induzida por ácido ascórbico e ß- glicerofosfato. Em resumo, este estudo aponta para uma potencial aplicação da Rb e seus fotoprodutos no desenvolvimento do fenótipo osteoblástico e, consequentemente, uma alternativa terapêutica coadjuvante para osteoporose. / Abstract: Riboflavin (Rb-Vitamin B2) is the precursor of essential flavocoenzymes, flavin mononucleotide (FMN) and flavin adenine dinucleotide (FAD). These coenzymes participate in numerous enzymatic processes dependent on electron transfer reactions that occur in energyproducing, biosynthetic, and detoxifying and electron-scavenging pathways. Increase dietary riboflavin and pyridoxine intake has been associated with higher bone mineral density in elderly men and women. Photoderivatives of riboflavin have been shown strong activity in haematological malignancy and prostate cancer cells, however, the direct effect of Rb and its photoderivatives on osteoblast has not been examined. In this work, the biologic effects of Rb and irradiated riboflavin (IRb) were investigated in the MC3T3-E1 pre-osteoblastic cell line, a well-accepted model of osteogenesis in vitro characterized for the induction of specific genes associated with the osteoblastic phenotype when treated with ascorbic acid and ß-glycerophosphate. Cell viability was assessed by MTT reduction, neutral red uptake and nucleic acids content. Osteoblastic differentiation markers were analyzed by semiquantitative RT-PCR (osteopontin and osteocalcin), alkaline phosphatase (ALP) activity measured colorimetrically and collagen synthesis by Sirius red staining. Metalloproteinases (MMP) -9 and -2 activities were assayed by gelatin zymography. Peptide microarray of substrate specificity to kinases and immunoblotting were used to identify the effects on signal transduction pathways. Antioxidant enzyme activities (superoxide dismutase, catalase, glutathione peroxidase and glutathione Stransferase) were determined in cellular lysate using spectrophotometric methods. Caspase-8, -9 and -3 activation were measured by a colorimetric assay. In the first analysis Rb and IRb caused cell cycle arrest at G0/G1 phase and accordingly inhibited AKT kinase, a proliferation mediator. Flavins caused differentiation of preosteoblast cells as evidenced by increase of osteocalcin, osteopontin and BMP2 expressions. In addition, higher MMP-9 and -2 activities were observed. Importantly, the capacity of flavins to trigger osteoblasts differentiation was also reinforced by upregulation of connexin 43, down regulation of caveolin-1 and negative modulation of Notch cascade. In the second analysis, we found that the interaction between Rb and IRb and osteogenic inductors (ascorbic acid and ß-glycerophosphate) significantly affected the osteoblast proliferation, alkaline phosphatase activity, collagen biosynthesis, osteopontin and osteocalcin mRNA expression, MMP-2 and MMP-9 activities and the expression of osteoclastogenesis factors (RANKL and OPG). We also showed that the effects of flavins in osteoblasts cells were independent on flavins antioxidant property. The biological activity of the combination of osteogenic medium with riboflavin and its photoderivatives was associated with the activation of different signaling pathways (AKT, FAK, CaMKII), caspases -8, -9 and -3, and up-regulation and/or stabilization of osteoblastic transcription factors (Runx2 and ß-catenin). This study brought out strong evidences that high concentration of Rb and IRb generates an osteogenic microenvironment through modulating different mediators of signaling pathways, besides of the additive effect of riboflavin and its photoproducts during the ascorbate and ß-glycerophosphateinduced osteoblast differentiation of MC3T3-E1 cells. In summary, this study pointed out the potential application of Rb and its photoproducts in osteoblasts phenotype development and, consequently, it is possible use as an alternative therapeutic adjuvant of osteoporosis. / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Walkiria Hanada Viotto / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-23T15:48:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Urzedo_AnaCarolinaBorgesde_D.pdf: 4425198 bytes, checksum: ca9f39f7b13a21e55c2d558014da6722 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: A foto-oxidação do leite é o fator determinante na vida de prateleira do leite microfiltrado pasteurizado. A exposição do leite à luz, nas gôndolas dos supermercados, desencadeia a foto-oxidação da riboflavina e das proteínas do leite, provocando mudanças na cor e formação de off-flavors. O objetivo do trabalho foi verificar, em condições reais, a influência do tipo de embalagem e da intensidade da luz na degradação da riboflavina, formação de lumicromo, oxidação de proteína, cor e vida de prateleira do leite desnatado microfiltrado pasteurizado. Leite desnatado microfiltrado pasteurizado foi acondicionado em garrafas de vidro e de polietileno de alta densidade, e armazenados no escuro (controle) e sob incidência de luz (500 e 1200 lux), durante 14 dias de estocagem refrigerada. Análises de espectroscopia de fluorescência da riboflavina, lumicromo, triptofano e ditirosina e análise de cor instrumental foram realizadas para acompanhar a foto-oxidação dos componentes do leite. Para estimar a vida de prateleira do leite microfiltrado pasteurizado, sob diferentes condições de luz e embalagem, contagens de micro-organismos mesófilos aeróbios e análise sensorial com assessores treinados, teste de aceitação e intenção de compra foram realizados durante o tempo de armazenamento refrigerado. Assessores foram treinados para avaliação da cor, aroma e sabor característicos de leite desnatado e de leite desnatado oxidado. Aos 14 dias de estocagem refrigerada, 76,1% da riboflavina foi degradada no leite exposto à radiação de 500 lux. Já a 1200 lux, esse valor foi de 86,4%. A degradação da riboflavina, a formação de lumicromo e a fotodegradação do triptofano foram maiores e mais rápidas quando a intensidade de luz foi mais intensa (1200 lux). Durante o armazenamento refrigerado, a oxidação das proteínas resultou em desnovelamento da estrutura terciária, e consequentemente, em exposição e posterior degradação do triptofano. No período estudado, houve somente formação de ditirosina para os leites submetidos à intensidade de luz mis intensa (1200 lux). A vida de prateleira dos leites armazenados no escuro (controle) foi de 10 a 14 dias. O aparecimento do sabor oxidado, proveniente da foto-oxidação dos componentes do leite, foi o parâmetro determinante para o fim da vida de prateleira dos leites armazenados sob luz. O tipo de embalagem somente influenciou a vida de prateleira do leite, quando a intensidade de exposição à luz foi mais baixa (500 lux). Nessa intensidade de radiação luminosa, a vida de prateleira do leite pasteurizado aumentou de 4-6 dias para 10-13 dias, quando a embalagem de vidro foi substituída pela de polietileno / Abstract: Photo-oxidation of milk is probably the main cause for the end of shelf life of a microfiltered pasteurized milk. Milk is inevitably exposed to light on the supermarket shelves, which triggers the photo-oxidation of riboflavin and milk proteins, affecting the sensory quality with changes in color and formation of off-flavors. The objective was to verify, in real conditions, the influence of the type of packaging and the light intensity on the riboflavin degradation, protein oxidation, color, shelf life of microfiltered pasteurized skim milk. After processing, milk was packaged in glass and high density polyethylene bottles and stored in the dark (control) and under influence of light (500 and 1200 lux), during 14 days of refrigerated storage. Analyses of fluorescence spectroscopy of riboflavin, lumicrome, tryptophan and dityrosine and instrumental color were performed to monitor the photo-oxidation of milk components. The shelf life of pasteurized microfiltered skim milk, under different light conditions and packaging was estimated by standard plate count of aerobic mesophilic and sensory analysis with trained assessors, acceptance testing, and purchase intent, during refrigerated storage time. Assessors were trained to evaluate sensorially the color, aroma and flavor of skim milk and oxidized skim milk. At 14 days of refrigerated storage, 76.1% of riboflavin was degraded in milk exposed to radiation of 500 lux. However, at 1200 lux, degradation of riboflavin reached 86.4% of its initial content in milk. Riboflavin degradation, lumicrome and tryptophan formation were higher and faster when light intensity was more intense (1200 lux). During storage time, the oxidation of proteins resulted in the tertiary structure unfolding, and exposure and subsequent degradation of tryptophan. During this period of time, there was formation of dityrosine only for the milks exposed to more intense light radiation (1200 lux). The shelf life of milk stored in the dark (control) was 10-14 days. The development of oxidized flavor, derived from the photo-oxidation of milk components, was the main parameter for determining the ending of the shelf life of milk stored under light. Packaging material influenced the milk shelf life when the intensity of light was lower (500 lux). In this condition, the shelf life of pasteurized milk increased from 10-13 days to 4-6 days when the glass container was replaced by polyethylene bottle / Doutorado / Tecnologia de Alimentos / Doutora em Tecnologia de Alimentos