Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-07-19T17:20:40Z No. of bitstreams: 1 Fred da Silva Juliao Uso de método de biologia molecular....pdf: 3387831 bytes, checksum: 0efc6396d21a6e8a634b8026665afe7c (MD5) / Made available in DSpace on 2012-07-19T17:20:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fred da Silva Juliao Uso de método de biologia molecular....pdf: 3387831 bytes, checksum: 0efc6396d21a6e8a634b8026665afe7c (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / A leishmaniose visceral (LV) é uma zooantroponose sistêmica de importância reconhecida em saúde pública, 90% dos casos no novo mundo são oriundos do Brasil. Os cães domésticos e as raposas são considerados como os principais reservatórios. A persistência da Leishmania em áreas endêmicas e o insucesso das medidas de prevenção, dirigidas exclusivamente ao reservatório canino, sugerem que outros animais podem ter importância na manutenção do ciclo de transmissão da LV. OBJETIVO: Avaliar potenciais reservatórios para LV numa área endêmica, utilizando método de biologia molecular quantitativo (PCR real-time). MÉTODOS: Foram estudados animais domésticos (bovinos, equídeos, caprinos e ovinos) e animais silvestres (marsupial), no município de Salinas da Margarida, Bahia, de 2007 a 2009. Todos os animais domésticos de produção mantidos e/ou pernoitando nas áreas urbanas do município foram incluídos. Os marsupiais foram capturados com armadilha animal modelo Tomahawk colocadas no peridomicílio das residências onde ocorreram casos de LV humana e/ou canina na localidade de Encarnação. Nos animais domésticos de produção foi coletado apenas amostra de sangue periférico e nos marsupiais, além de sangue, foi obtida uma amostra de pele através de biópsia da orelha. Em todas as amostras foi realizado PCR real-time para investigar a presença de DNA do parasito e estimar a carga parasitária. Os primers e sondas utilizados foram selecionados em gene SSU rRNA, que aparece 160 vezes no genoma de Leishmania spp. e é altamente conservado entre as espécies de Leishmania. RESULTADOS: No total, foram avaliados 80 animais domésticos (20 bovinos, 33 equídeos, 20 caprinos e 7 ovinos) e 103 marsupiais, todos da espécie Didelphis albiventris. Cinco bovinos foram positivos no teste de PCR real-time com carga parasitária variando de 12,7 a 183,5 parasitos/mL. Apenas um marsupial apresentou amostra de sangue positiva (6,0 parasitos/mL). Todos os demais animais testaram negativo. CONCLUSÃO: A técnica de PCR real-time pode ser uma ferramenta útil para avaliar o papel de potenciais reservatórios domésticos e silvestres para LV. A execução do PCR real-time é menos trabalhosa e mais prática do que a realização do teste de xenodiagnóstico, além disso, ela poder ser automatizada, permitindo a análise de grande número de amostras em estudos epidemiológicos. A detecção de carga parasitária de Leishmania em sangue de bovinos, em quantidade comparável à encontrada em cães, sugere que eles podem ser reservatórios para LV. A relativa abundância de bovinos nas áreas endêmicas para LV, assim como as evidências da preferência alimentar do vetor por estes animais, ressaltam a importância do papel que os bovinos podem ter na transmissão da LV. Mais trabalhos são necessários para elucidar estas questões. / Visceral leishmaniasis (VL) is a systemic zooantroponose of public health relevance, 90% of cases in the new world are from Brazil. Domestic dogs and foxes are considered the main reservoirs. The persistence of Leishmania in endemic areas and the failure of preventive measures, directed exclusively to the canine reservoir, suggest that other animals may be important in maintaining the transmission cycle of Leishmania. OBJECTIVE: To investigate potential reservoirs for VL in an endemic area, using molecular biology quantitative method (real-time PCR). METHODS: We studied domestic animals (cattle, horses, goats and sheeps) and wildlife (marsupial), in the city of Salinas da Margarida, Bahia, from 2007 to 2009. All livestock animals maintained and/or staying overnight in the urban areas of the municipality were included. The marsupials were captured with Tomahawk model animal traps placed outside the home of homes where there were human and/or dog VL cases in the locality of the Encarnação. In livestock animals, we collected only a sample of peripheral blood and in marsupials, in addition to blood we also collected a sample of ear skin biopsy. In all samples we carried out real-time PCR to detect the presence of parasite DNA and to estimate the parasite load. The primers and probes used were selected on SSU rRNA gene, which appears 160 times in the genome of Leishmania spp. and is highly conserved among species of Leishmania. RESULTS: In total, 80 livestock animals were evaluated (20 cattle, 33 horses, 20 goats and 7 sheep), and 103 marsupials, all Didelphis albiventris. Five cattle were positive by real-time PCR with parasite load ranging from 12.7 to 183.5 parasites/mL. Only one marsupial had a positive blood sample (6.0 parasites/mL). All other animals tested negative. CONCLUSION: The real-time PCR technique can be a useful tool for assessing the potential role of domestic and wild reservoir for LV. The implementation of real-time PCR is less laborious and more practical than the test of xenodiagnosis, in addition, it can be automated, allowing for the analysis of large number of samples in epidemiological studies. Detection of Leishmania parasite load in the blood of cattle, in an amount comparable to that found in dogs, suggests that they may be reservoirs for VL. The relative abundance of cattle in endemic areas for VL, as well as evidence of vector feeding preference for these animals, highlight the important role that cattle may exert in the transmission of VL. More research is needed to clarify these issues.

SOUZA, Carlos Eduardo Azevedo. Análise proteômica do plasma seminal e secreções do epidídimo em ruminantes: potenciais associações com o desenvolvimento sexual, parâmetros seminais e função espermatica. 2007. 185 f. Tese (doutorado em zootecnia)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2007. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-04-07T19:20:05Z No. of bitstreams: 1 2007_tese_ceasouza.pdf: 1841396 bytes, checksum: 739bf3cd94874396bf0fb93e6971b775 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-05-25T19:34:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_tese_ceasouza.pdf: 1841396 bytes, checksum: 739bf3cd94874396bf0fb93e6971b775 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-25T19:34:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_tese_ceasouza.pdf: 1841396 bytes, checksum: 739bf3cd94874396bf0fb93e6971b775 (MD5) Previous issue date: 2007 / This research includes three different studies, evaluating distinct aspects about the composition of proteins expressed in the ruminant reproductive tract fluids. The first study describes variations in the seminal plasma protein profile of Santa Inês rams. The second identifies proteins present in the cauda epididymal fluid of Holstein bulls, and the third study details the binding pattern of BSPs and osteopontin to bovine sperm membrane. In Study 1, semen samples of sixteen rams were collected and centrifuged to obtain seminal plasma. A volume containing 150 μg of proteins was used to prepare the 2D gels, which were scanned and electronically analyzed. The quantification of the protein spots was given as PPM of the total integrated optical density. We detected 186 ± 10 spots in the gels prepared with the 48 weeks samples, similar to the amount found in the gels obtained from samples of 34 (183) and 30 (179) weeks of age. Maps representing 34 and 48 weeks showed a train of spots with 63 kDa (pI 4.2 to 5.0) that was not present in early ages. New proteins were detected in the gels as the rams matured. In the maps of 20 weeks, high molecular weight trains (158 to 160 kDa) were detected compared to other gels obtained before that age. Quantitative changes in the spots with age were more evident before puberty. We also described a relationship between the intensity of some spots in the 48-week maps and semen scores. We conclude that protein secretion in the seminal plasma of hairy rams is synchronized with a series of complex changes during the sexual development of the males. The objective of Study 2 was to describe the binding pattern of OPN and BSP proteins to the membrane of ejaculated bovine sperm and after in vitro exposure of these cells to bovine oviductal fluid. Semen samples of five Holstein bulls were obtained and subjected to the following treatments: 1. Ejaculated sperm; 2. Ejaculated sperm incubated with isthmus oviductal fluid; 3. Ejaculated sperm incubated sequentially with isthmus and ampullary oviductal fluid. From each of these treatments, sperm samples were subjected to immunocytochemistry and confocal microscopy. Positive reaction for BSP-A1/A2 was detected in the midpiece, equatorial and post-equatorial regions and acrosome, in all treatments. The signal was higher in the midpiece compared to the rest of the cells, irrespective of the treatment. The binding pattern of BSP-30kDa was similar to that observed for BSP-A1/A2. Additionally, sperm with a reacted acrosome showed a reduction in the signal of 4.9 and 3.6 times, after exposure to isthmic and ampullary fluids, respectively. OPN binding was detected in the post-equatorial region and acrosome of ejaculated sperm, with higher intensity in the acrosome. A greater amount of capacitated sperm and capable of acrosome reaction in response to LPC was seen after exposure to isthmic (39.8% and 79%) and ampullary (20.5% and 69.3%, respectively) compared to sperm exposed to MTMS alone (12.3% and 49.3%) or heparin (23.7% and 38.9%). We conclude that sperm exposure to oviductal fluids influences interactions between seminal plasma proteins and sperm membrane, possibly modulating sperm function. In Study 3, we used a proteomic approach to identify the proteins present in cauda epididymal fluid (CEF) of Holstein bulls. CEF samples were obtained from 11 bulls and used to prepare 2D gels. The spots were cut and identified using mass spectrometry. This first analysis showed that albumin composed almost 21% of the total intensity of the spots, interfering with the identification of low abundance proteins. To improve resolution, we depleted albumin from the samples using affinity spin columns and new maps were prepared. Spots detected after depletion not seen before were also identified. We observed 114 ± 3 spots before albumin detection. We identified 55 of them, comprising 23 different proteins. Based on the optical density, the most abundant proteins in the CEF samples were albumin (21.1%), cholesterol binding proteins (6 low molecular weight isoforms; 10.5%), prostaglandin D synthase (7.6%) and gelsolin (6%), accounting for 45.2% of the proteins. Another 36 spots were also identified, corresponding to 13 different proteins. After albumin depletion, the intensity of the albumin spot in the gels was reduced to 10%, and the number of spots in the maps increased to 137 ± 4. Also, 48 spots were at least 3 times more abundant after depletion. The identity of those proteins suggest a wide range of functions, including sperm metabolism regulation, changes in membrane and sperm protection against oxidative damage during epididymal storage. / Este trabalho se compõe de três estudos distintos, avaliando diferentes enfoques da composição das proteínas expressas nos fluidos reprodutivos de ruminantes. O primeiro estudo descreve as variações no perfil protéico do plasma seminal de ovinos Santa Inês. O segundo avalia as proteínas presentes no fluido da cauda do epidídimo de touros Holandês maduros. A terceira parte mostra detalhes da distribuição topográfica e intensidade de ligação das BSPs e da osteopontina à membrana de espermatozóides bovinos. No estudo 1, amostras de sêmen de dezesseis cordeiros da raça Santa Inês foram colhidas. As amostras foram centrifugadas para obtenção do plasma seminal. Um volume contendo 150 µg de proteínas foi utilizado para a preparação de géis bidimensionais, que foram digitalizados e analisados. A quantificação das proteínas nos géis foi dada como PPM da densidade óptica total integrada de todas as proteínas, de acordo com o programa. Foram encontrados 186 ± 10 spots protéicos nos géis oriundos de amostras coletadas às 48 sem., semelhante ao encontrado às 34 (183) e 30 (179) semanas de idade. Os mapas representando 34 e 48 semanas apresentaram uma seqüência de spots de 63 kDa (pI 4,2 a 5,0) que não estava presente nas idades mais jovens. À medida que os animais amadureceram, novas proteínas foram detectadas no plasma seminal. Nos mapas de 20 semanas de idade, seqüências de elevada massa molecular (158 a 160 kDa) foram detectadas, diferentemente dos mapas obtidos em idades mais jovens. Mudanças quantitativas na secreção dos spots em função da idade foram mais evidentes durante a fase pré-púbere. Detectaram-se também relações entre a intensidade de alguns spots nos mapas protéicos de amostras obtidas às 48 sem. de idade e parâmetros espermáticos. Portanto, a secreção de proteínas no plasma seminal em cordeiros Santa Inês ocorre de forma sincronizada com uma série de alterações complexas no desenvolvimento sexual como um todo. Estas mudanças foram mais marcantes na fase de pré-puberdade, justamente quando os espermatozóides começaram a adquirir motilidade progressiva. O objetivo do estudo 2 foi avaliar a distribuição topográfica e a intensidade de ligação das proteínas BSP A1/A2, BSP-30kDa e OPN à membrana de espermatozóides ejaculados e após exposição destas células in vitro às secreções do oviduto. O padrão de ligação das proteínas BSP-A1/A2, BSP-30kDa e osteopontina foi avaliado em espermatozóides obtidos de sêmen fresco e exposto seqüencialmente aos fluidos do istmo (IODF) e da ampola (AODF) do oviduto. Foram utilizadas amostras de sêmen de cinco touros Holandês, submetidos às seguintes condições: 1. Espermatozóides ejaculados; 2. Espermatozóides ejaculados incubados com IODF; 3. Espermatozóides ejaculados + IODF incubados com AODF. De cada um desses tratamentos foram colhidas alíquotas de células espermáticas para o procedimento de imunocitoquímica e análise por microscopia confocal. Uma reação positiva para BSP-A1/A2 foi detectada na peça intermediária, regiões equatorial e pós-equatorial e acrossomo dos espermatozóides, em todos os tratamentos. A análise dos diferentes planos de várias células mostrou fluorescência significativamente mais intensa na peça intermediária, em comparação com o restante das células, independente das condições de incubação. O modelo de ligação da BSP-30kDa aos espermatozóides foi semelhante àquele observado para a BSP-A1/A2. Além disso, nos espermatozóides com acrossomo reagido, a fluorescência apresentou redução de 4,9 e 3,6 vezes após exposição aos fluidos do istmo e da ampola, respectivamente. A ligação da osteopontina foi identificada na região pós-equatorial e na extremidade do acrossomo em espermatozóides ejaculados, apresentando fluorescência mais intensa no acrossomo em comparação com o segmento pós-equatorial. A maior percentagem de células capacitadas e capazes de reação acrossômica em resposta ao LPC ocorreu após exposição das células aos fluidos do istmo (39,8% e 79%) e ampola (20,5% e 69,3%, respectivamente) em comparação aos espermatozóides expostos apenas ao MTMS (12,3% e 49,3%) e à heparina (23,7% e 38,9%). Conclui-se que a exposição dos espermatozóides aos fluidos do oviduto modifica as interações entre as BSPs, a osteopontina e a membrana espermática, sendo potencialmente um mecanismo modulatório da função espermática. No estudo 3, o objetivo foi utilizar uma abordagem proteômica para identificar detalhadamente as proteínas presentes no fluido epididimal de touros sexualmente maduros. Foram obtidas amostras de fluido da cauda do epidídimo (CEF) de 11 touros Holandês maduros, canulados nos ductos deferentes. As amostras foram utilizadas para a preparação de mapas protéicos, através de eletroforese 2D, os quais foram analisados pelo software PDQuest, sendo os spots identificados por espectrometria de massa. Esta primeira análise do CEF mostrou que cerca de 21% da intensidade de todos os spots dos géis era composta por albumina, prejudicando a identificação de proteínas menos abundantes. Para contornar esse obstáculo, a albumina foi parcialmente removida das amostras utilizando-se cromatografia de afinidade e foram preparados novos mapas bidimensionais, novamente sujeitos à análise computadorizada. Os spots detectados nesses novos géis, não identificados nos mapas anteriores foram também sujeitos a espectrometria de massa. Foram detectados 114 ± 3 spots, nas amostras antes da depleção de albumina, dos quais foram identificados 55, representando 23 proteínas. Com base na densidade óptica integrada dos spots, as proteínas mais abundantes no CEF foram albumina (21,1%), proteínas ligadoras de colesterol (6 isoformas de baixa massa molecular; 10,5%), prostaglandina D sintetase (PGDS; 7,6%), e gelsolina (6%), totalizando quase a metade (45,2%) do total de proteínas. Outros 36 spots também foram identificados, correspondendo a 13 diferentes proteínas. Após a depleção da albumina, o número de spots detectados nos mapas passou para 137 ± 4 spots. Comparação dos géis antes e após o procedimento de depleção, mostrou que a intensidade da albumina foi reduzida para 1/10 da intensidade nos géis não submetidos à depleção. Além do aumento no número de spots, 48 deles tiveram sua intensidade aumentada em 3X, pelo menos, nos géis depletados em comparação aos originais. A identidade dessas proteínas sugere que elas apresentam uma enorme gama de funções, incluindo a modulação do metabolismo espermático, participação na modificação superficial da membrana e proteção dos espermatozóides durante seu armazenamento na cauda epididimal.

Esta tese foi dividida em duas pesquisas com o intuito de avaliar o fornecimento de extratos de orégano e chá verde para novilhas e vacas leiteiras. A primeira delas teve como objetivo verificar a inclusão de doses de extrato de orégano (EO) (Origanum vulgare) fornecido a novilhas da raça Holandês sobre a aceitabilidade do alimento, consumo, medidas fisiológicas e desenvolvimento corporal. Trinta e quatro novilhas em pastejo da raça Holandês foram agrupadas aleatoriamente em quatro tratamentos: C = controle - sem adição de EO; 2,5 gramas (g); 5,0 g e 7,5 g de EO. Os tratamentos foram ofertados diariamente e individualmente durante 56 dias. O extrato de orégano adicionado em 7,5 g/dia ao concentrado exerce efeitos adversos de pequena magnitude sobre a aceitabilidade do concentrado e seu consumo e a inclusão de até 7,5 g/dia não melhora o consumo total de dieta, o desenvolvimento corporal e medidas fisiológicas. A segunda pesquisa objetivou avaliar os efeitos da inclusão de EO, chá verde (CV) (Camellia sinensis L.) e sua associação no concentrado fornecido a vacas das raças Holandês e mestiços Holandês e Gir sobre o comportamento, consumo, produção e composição do leite, perfil hematológico e enzimas de estresse oxidativo. Trinta e duas vacas das raças Holandês e mestiços Holandês e Gir foram distribuídas aleatoriamente em quatro tratamentos: C = controle, EO = com adição de 10 g de extrato de orégano, CV = com adição de 5,0 g de extrato de chá verde e Mix = associação de ambos os tratamentos. Vacas recebendo chá verde apresentaram maior consumo e produziram mais leite em relação aos grupos controle e Mix. Animais do grupo orégano produziram leite com menor concentração de lactose enquanto do grupo Mix produziram leite com menor contagem de células somáticas que as vacas que receberam orégano. Menores valores das enzimas de oxidação da diclorofluoresceína nos eritrócitos (DCFER) e plasma (DCFPLA) e níveis mais elevados de Glutationa peroxidase reduzida (GSH) foram verificados nos animais suplementados com CV. Vacas suplementadas com extrato de chá verde apresentaram maior número de observações de ruminação total e menor número de observações deitada. Conclui-se que o fornecimento de extrato de orégano não alterou expressivamente o desenvolvimento corporal de novilhas, mas a dose mais elevada (7,5 g EO) alterou negativamente a aceitabilidade do alimento. O extrato de chá verde melhora a produção leiteira, altera a composição do leite, modifica o perfil hematológico e enzimas antioxidantes, constituindo-se como opção de aditivo para vacas em lactação. / Oregano and green tea extracts were supplied for heifers and dairy cows in two trials. The first study aimed to verify effect of the inclusion of doses of oregano extract (Origanum vulgare) fed to Holstein heifers on the acceptability of concentrate, physiological measurements and body development. Thirty-four heifers grazing of Holstein were distributed randomly into four treatments: C = control - without adding OE; OE2.5 = 2.5 grams (g); OE5.0 = 5.0 g and OE7.5 = 7.5 g of OE per day. The treatments were offered daily and individually for 56 days, after an adaptation period of 14 days, when heifers received just the basal diet. Heifers fed with 7.5 g of EO into the concentrate spent more time to eat the concentrate, reduced the latency to enter the trough and the concentrate intake. The inclusion of oregano extract did not alter the total dietary intake, body weight gain, body condition score (BCS), respiratory rate, rectal temperature and urinary pH. The second study aimed to evaluate the effects of addin OE, green tea - GT (Camellia sinensis L.) and both vegetal extracts into the concentrate fed to Holstein and Holstein and Gir crossbred cows on behavior, intake, milk yield and composition, blood profile and enzymes of oxidative stress. Thirty-two Holstein and Holstein and Gir crossbred cows were randomly distributed into four treatments: C = control, OE = with addition of 10 g of oregano extract, GT = with addition of 5.0 g of green tea extract and with Mix = combination of both treatments. Cows fed GT had higher total intake and produced more milk compared to control groups and Mix; cows receiving GT and control produced more milk, but the body weight or BCS did not differ between treatments. Animals fed with OE produced milk with lower concentration of lactose while the cows fed with the Mix produced milk with lower somatic cell count than cows fed with OE. Smaller values of dichlorofluorescein oxidation enzymes in the erythrocytes and plasma and higher levels of reduced glutathione peroxidase levels were observed in animals supplemented with GT. Cows receiving the control showed higher number of intake activities compared to the other treatments, total number of lying and lying in idleness observations, and, in contrast, fewer observations in standing position, both in idleness as ruminating. Cows supplemented with GT showed a higher number of total rumination observations and Oregano and green tea extracts change the ingestive, postural and social behavior, improves intake, milk yield, altering its composition, the hematological profile and antioxidant status and, thus, the use of oregano and green tea extracts may be use as an option of additive for dairy cows.

Physiology of nutrition and feeding of farm animals is an essential factor influencing production efficiency and its quality. For these factors is important to provide optimal supply of nutrients by suitable feeds. Felicitous feed ration raise the economic realization of genetic potential of animals. Therefore we have to know the nutritional requirements of animals, including microorganisms, whose function in the diet of cattle is irreplaceable. The aim of this study was to determine the nutritional value of forage and lupine feeds (n = 8) by laboratory methods. Samples were analyzed for individual feed nutrients (crude protein (CP), fat, crude fiber, ash, neutral detergent fiber (NDF), acid detergent fiber (ADF), acid detergent lignin (ADL)), gross energy and nitrogen fractions, and the results were statistically processed. Determination of individual nitrogen fractions was according to methods of Licitra et al. (1996). For this purpose were used following laboratory methods: (1) determination of non-protein nitrogen (NPN) (2), determination of soluble nitrogen and protein, (3) determination of nitrogen insoluble in acid detergent (ADIP), (4) determination of nitrogen insoluble in neutral detergent (NDIP). From these were obtained the results of NPN, IP (insoluble protein), SOLP (soluble protein), ADIP (nitrogen insoluble in acid detergent) and NDIP (insoluble nitrogen in neutral detergent). Averaged values (g.kg-1 of dry matter) of were 144.3 for NPN, 97.5 for IP, 78.7 for SOLP, 30.4 for ADIP and 80.3 for NDIP. Nitrogen fractions, i.e. fraction A (nonprotein nitrogen), fraction B1 (rapidly degraded protein), fraction B2 (intermediately degraded protein), fraction B3 (slowly degraded protein) and fraction C (bound protein) were calculated by equations of Ghoorchi and Arbabi (2010). The range of values was from 2.5 to 51.2 % of CP for fraction A, from 13.4 to 20.7 % of CP for fraction B1, from 0 to 19.9 % of CP for fraction B2, from 5.5 to 51.9 % of CP for fraction B3 and from 10.1 to 32.4 % of CP for fraction C.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-09-02Bitstream added on 2014-06-13T19:12:38Z : No. of bitstreams: 1 camargo_dg_me_araca.pdf: 318118 bytes, checksum: 3053b9617288a97a69f4b15bd88a287a (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os objetivos deste estudo foram determinar os valores hemogasométricos e equilíbrio ácido-básico, parâmetros vitais, pontuação do sistema Apgar, proteinograma sérico, contagem total e diferencial de leucócitos, glicemia e cortisolemia em cabritos nascidos de partos eutócicos e avaliar a influencia do tipo de parto sobre essas variáveis, do nascimento até o final do primeiro dia de vida. Para tanto, determinaram-se os valores hemogasométricos, parâmetros vitais, concentração sérica de proteínas totais, glicemia, e cortisolemia nos momentos zero, cinco dez e 15 minutos e 24 horas pós-parto. A pontuação Apgar foi realizada apenas nos momentos zero, cinco, dez e 15 minutos pós-parto e a contagem total e diferencial de leucócitos nos momentos zero e 24 horas pós-parto. Os animais neonatos nascidos de partos eutócicos apresentavam, no pós-parto imediato, quadro de acidose respiratória e os animais nascidos através de cesarianas demonstraram quadro de acidose mista; contudo, em ambos os grupos, o equilíbrio ácido-básico se normalizou no decorrer do primeiro dia de vida. Os animais nascidos de cesarianas foram classificados, segundo o sistema Apgar, como deprimidos; já, os nascidos de partos eutócicos, foram classificados como possuidores de boa vitalidade. O proteinograma sérico e a contagem total e diferencial de leucócitos não foram influenciados pelo tipo de parto. Os níveis séricos de cortisol dos cabritos nascidos de partos normais, no pós-parto imediato, apresentavam-se bem elevados e decresceram significativamente até o final do primeiro dia de vida. Animais nascidos de partos gemelares possuíam concentrações séricas de cortisol, ao nascimento, menores que os cabritos nascidos de partos simples / The aims of this study were to determine blood gas values and acid-base balance, vital parameters, the Apgar score, serum total proteins, WBC, glucose levels and cortisolemia in newborn goat kids born from normal deliveries and evaluate the influence of the type of delivery on these variables, between delivery and the end of the first day of life. For this, the blood gas values, vital parameters, serum total protein (refractometry), glucose levels, and cortisolemia were measured immediately after birth, and then at five, ten and 15 minutes and 24 hours postpartum. The Apgar score was calculated only at birth and then at five, ten and 15 minutes after delivery, and WBC were determined immediately after birth and 24 hours postpartum. The kids born from normal delivery presented respiratory acidosis in the immediate postpartum period, while animals born by caesarian section showed mixed acidosis; however, in both groups, the acid-base balance returned to normal during the first day of life. Animals born in assisted births were classified according to Apgar scoring as depressed; in contrast, the kids born from normal deliveries were classified as having good vitality. Serum protein and WBC were not influenced by type of delivery. The serum cortisol levels of the kids born of normal deliveries in the immediate postpartum period, were very high but decreased significantly by the end of the first day of life. Animals born of twin pregnancies had serum cortisol levels, at birth, lower than the kids from single births

Este projeto foi desenvolvido no Laboratório de Patologia Experimental do Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA), com a aprovação da Comitê de Ética em Pesquisa do HCPA e com apoio financeiro parcial do Fundo de Incentivo à Pesquisa e Eventos do HCPA (FIPE). O experimento 1, chamado de projeto piloto, teve como objetivo implementar a técnica de IHQ para identificar a Listeria monocytogenes (L.m.), utilizando anticorpo policlonal antilisteria monocytogenes (Biodesig ). Vários testes foram realizados para acertar a diluição (1:1000) que foi diferente da preconizada pelo fabricante. Os blocos de parafina, de dez placentas provenientes de parto prematuro ou aborto foram utilizados para os cortes histológicos e a preparação das lâminas para a coloração Hematoxilina e Eosina (HE) e imunoistoquímica (IHQ). As lâminas foram identificadas por números para resguardar a identidade das pacientes. O resultado do HE mostrou alterações inflamatórias em oito placentas e L. m. foi identificada pelo IHQ em cinco dessas placentas. O objetivo do 2º experimento foi identificar a L. m. em tecido nervoso cerebral de ruminantes, utilizando a técnica implementada no projeto piloto. O material utilizado neste trabalho foi cedido pelo Setor de Patologia Veterinária do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Santa Maria. Os casos estudados (2 ovinos, 1 caprino e 2 bovinos) tinham suspeitas clínicas diversas e as necropsias dos animais evidenciaram aspectos sugestivos da doença. Os cinco casos foram confirmados pelo IHQ, comprovando a importância da utilização desta técnica para o diagnóstico da listeriose no SNC de ruminantes. O 3º experimento objetivou identificar a L. m. em placentas encaminhadas ao Serviço de Patologia do HCPA no ano 2000. Da mesma forma que no experimento 1, as lâminas foram identificadas por números. Após o levantamento realizado nos registros dos exames anatomopatológicos (AP) deste setor, observou-se que 714 AP eram de placentas provenientes de aborto, parto prematuro e nascimento a termo examinados naquele período. Foram sorteados 254 AP para análise através de HE, revelando que 148 desses AP apresentavam alterações inflamatórias (corioamnionite, vilite e deciduite). Os blocos destas placentas foram utilizados para fazer as lâminas e realizar IHQ. A consulta aos prontuários dos casos com alterações inflamatórias permitiu observar que um deles tinha a confirmação bacteriológica de L. m. na placenta, tornando-se este o controle positivo. O controle negativo foi selecionado entre aqueles sorteados que não apresentavam alterações inflamatórias. A presença de L. m. foi identificada em 33,78% das placentas analisadas pela técnica IHQ. Corioamnionite e vilite foram as alterações inflamatórias que mostraram diferença estatística significativa nas placentas positivas. L. m. estava presente nas placentas de 1º, 2º e 3º trimestres gestacionais. A idade das gestantes, casos de aborto e/ou parto prematuro não mostraram diferença estatística significativa com a presença ou ausência de L. m. nas placentas. Abortos habituais ocorreram em pacientes com ou sem L. m. no tecido placentário. Conclusão: a técnica de imunohistoquímica pode ser utilizada para confirmar o diagnóstico histopatológico de listeriose em placentas e tecido nervoso central de ruminantes. / This project was developed at the Pathology Experimental Laboratory of Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA), after approval by the local Research Ethics Committee, and received partial financial support from the Research Incentive Fund (FIPE) of HCPA. The first experiment (or pilot scheme) aimed at implementing the immunohistochemistry (IHC) technique for the identification of Listeria monocytogenes (L.m.), by way of anti-listeria polyclonal antibody (Biodesign ). Several tests were performed in order to find the correct dilution (1:1000), which was different from that which had been recommended by the manufacturer. Paraffin-embedded blocks of placentas obtained from premature birth or abortion were used for the histological sections, and the slides were prepared for hematoxylin-eosin (HE) staining and immunohistochemistry. The slides were labeled with numbers in order to preserve patient anonymity. The result of HE staining revealed inflammatory disorders in eight placentas and L.m. was identified by IHC in five of them. The aim of the second experiment was to identify L.m. in the brain tissue of ruminants by employing the technique implemented in the pilot scheme. The material used in this study was provided by the Division of Veterinary Pathology of the Department of Pathology of Universidade Federal de Santa Maria. The animals studied (2 sheep, 1 goat and 2 cows) exhibited several clinical suspicions and the necropsy results were suggestive of the disease. The five cases were confirmed by IHC, highlighting the importance of this technique to the diagnosis of listeriosis in the CNS of ruminants. The aim of the third experiment was to identify L.m. in placentas and abortion specimens that had been referred to the Division of Pathology of HCPA in year 2000. As with the first experiment, the slides were numbered. After surveying the registries of pathoanatomical exams (PAs), we noted that 714 PAs corresponded to placentas, obtained from abortion, premature delivery and full-term birth, examined during that period. Two hundred fifty- four PAs were randomly selected (drawn out) for HE staining, and 148 of these PAs showed evidence of inflammatory disorders (chorioamnionitis, villitis and deciduitis). The blocks of these placentas were used for preparing the slides and carrying out IHC. The analysis of medical records in the cases with inflammatory disorders allowed us to observe that one of the records contained bacteriological confirmation of L.m. in the placenta (positive control). The negative control was chosen among the drawn-out PAs that did not present inflammatory disorders. L. m. was detected in 33.78% of the placentas analyzed by IHC. Chorioamnionitis and villitis showed significant statistical difference in the positive placentas. L. m. occurred in the 1st, 2nd and 3rd trimesters of pregnancy. The age of pregnant women, the cases of abortion and/or premature births were not statistically different as to the presence or absence of L. m. in the placentas. Habitual abortions occurred in patients with or without L. m in the placental tissue. Conclusion: Immunohistochemistry may be used to confirm the histopathological diagnosis of listeriosis in placentas and brain tissue of ruminants.

O experimento foi conduzido no Sistema de Pecuária de Leite (SISPEL), na Embrapa, em Pelotas, Rio Grande do Sul, com 32 vacas em lactação da raça Jersey em lactação, divididas em quatro grupos, de acordo com a produção de leite, peso vivo, escore corporal e tempo de lactação. O estudo teve o objetivo de avaliar o efeito da suplementação de diferentes fontes e níveis de selênio (Se) em vacas em lactação, sobre as características físicoquímicas do leite, produção de leite e concentração desse no sangue e leite, assim como verificar a ocorrência do leite instável não ácido (LINA) e as alterações na composição do leite e sangue decorrentes da instabilidade. Os tratamentos foram determinados como: grupo controle (dieta padrão), Selênio Inorgânico 0,3 (dieta padrão + 0,3mg Selenito de sódio/kg de concentrado), Selênio Orgânico 0,3 (dieta padrão + 0,3 mg Selêniometionina/kg de concentrado) e Selênio Orgânico 0,6 (dieta padrão + 0,6 mg selêniometionina/kg de concentrado). No leite, foram analisadas composição química, características físicas, contagem de células somáticas (CCS) e teores de Se, cálcio iônico e uréia e, no sangue, albumina, uréia, triglicerídeos, colesterol, glicose, proteína total, Ca, Mg, P e Se. A suplementação de selênio aumentou linearmente a concentração do mineral no leite e no sangue, independente da fonte. Porém, não ocorreram alterações expressivas nas características físico-químicas, CCS e produção de leite relacionada com a suplementação. Das 124 amostras de leite analisadas durante o experimento, 101 (81,45%) foram estáveis e 23 (18,55%) precipitaram em concentrações de etanol até 72%. O leite classificado como leite instável não ácido (LINA) apresentou maior concentração de cálcio iônico e menor concentração de lactose que o leite normal. O sangue de animais que produziram LINA apresentou maior concentração de uréia e triglicerídeos. / The trial was lead in the intensive system of milk production - SISPEL, at the Embrapa, in Pelotas, Rio Grande do Sul State, with 32 lactating Jersey cows, distributed in four groups, according to milk production, body weight, body condition score and days in milking. The study had the objective to evaluate the effect of the supplementation with different sources and levels of selenium (Se) for dairy cows, on the physical-chemical characteristics of milk, milk yield and selenium concentration in the blood and milk, as well as, to verify the occurrence of not acid unstable milk (LINA) and the alterations in the composition of milk and blood. The treatments were denominated as follows: control (diet without added selenium), Inorganic Selenium (standard diet + 0,3 mg sodium Selenite /kg concentrate), Organic Selenium 0,3 (standard diet + 0,3 mg Selenomethionine/kg concentrate) and Organic Selenium 0,6 (diet standard diet + 0,6 mg selenomethionine/ kg concentrate). Physical-chemical characteristics, somatic cells count (SCC), concentration of Se, ionic calcium and urea in milk and albumen, urea, triglycerides, cholesterol, glucose, total protein, Ca, Mg, P in blood had been analyzed. Supplementation of selenium increased linearly the concentration of the Se in milk and blood, independently of the source. There were not expressive alterations for physical and chemical characteristics, SCC and milk yield related to supplementation. Of the 124 analyzed milk samples during the experiment, 101 (81,45%) were stable and 23(18,55%) precipitated in alcoholic solutions wirth ethanol concentrations to 72%. Milk samples classified as not acid unstable milk (LINA) presented greater concentration of ionic calcium and lower concentration of lactose that stable milk. The blood of animals that had produced LINA presented greater concentration of lactosis and triglycerides.

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Para avaliar o efeito do uso oral de omeprazol em ruminantes adultos saudáveis, foram utilizados cinco ovinos machos, com dois anos de idade, hígidos e providos de cânula abomasal, que ou não receberam nada (grupo controle) ou receberam omeprazol oral em pasta, na dose de 4 mg/kg de peso vivo a cada 24 horas, durante 7 dias, em delineamento experimental de cross-over, com período de 'wash-out' de 7 dias. Diariamente os animais foram avaliados clinicamente e foram realizados o hemograma, a hemogasometria venosa; a mensuração dos eletrólitos, o perfil bioquímico, a concentração de pepsinogênio e o pH abomasal, urinário e fecal. Foi realizada, no último dia do período experimental a curva de 24 horas, com intervalo de duas horas, para o pH abomasal e o pepsinogênio sérico. Não houve efeito de tratamento para as variáveis analisadas, que permaneceram dentro do intervalo fisiológico para a espécie ovina. O uso do omeprazol na dose de 4 mg/kg de peso corporal durante sete dias, apesar de não aumentar o pH abomasal, diminuiu as concentrações de cálcio iônico e de cloro séricas / To evaluate the effect of oral omeprazole in healthy adult ruminants, five male sheep, two years old, healthy and provided with abomasal cannula, were used. Either received nothing (control group) or received oral omeprazole paste in dose of 4 mg /kg body weight every 24 hours for 7 days in experimental design of cross-over, with period of 'wash-out' of 7 days. Every day the animals were evaluated clinically and were performed the blood test, venous blood gas analysis; the measurement of electrolytes, biochemical profile, the concentration of pepsinogen and abomasal pH, urinary and fecal. It was held in last day trial period to 24 hours curve with an interval of two hours for the abomasal pH and serum pepsinogen. There was no treatment effect for the variables that remained within the physiological range for the sheep. The use of omeprazole at 4 mg / kg body weight for seven days, while not increasing the pH abomasal decreased the calcium ion concentration and serum chlorine

Para avaliar a influência prolongada de oferecimento de dietas com diferentes graus de carência de energia sobre o perfil hormonal, metabólico e clínico de bovinos em crescimento, 12 garrotes foram aleatoriamente distribuídos em três grupos iguais e receberam, por 140 dias, as seguintes dietas: (G1) adequada, para ganho de peso de 900g/dia ( 17,7 Mcal/d de ED); (G2) 80% dos requerimentos de mantença (5,8 Mcal/d de ED); e (G3) 60% desses requerimentos (4,7 Mcal/d de ED). A carência provocou uma acentuada diminuição do peso vivo, do consumo de alimentos, das freqüências cardíaca e respiratória e da temperatura retal; ambos os grupos carentes (G2 e G3) apresentaram hipoglicemia e menor síntese de ácido propiônico no rúmen. Em relação ao perfil hormonal, o déficit energético provocou uma redução destacada nos teores sangüíneos de IGF-1, insulina e T3 e em menor grau em T4. A perda de peso foi uma direta conseqüência do menor consumo de alimentos, da qualidade inferior da dieta ingerida e da menor atuação de IGF-1 e T3. O consumo de alimentos ficou diminuído devido ao oferecimento de dieta menos palatável e por influência de um quadro de hipoinsulinemia. A diminuição do número de batimentos cardíacos, movimentos respiratórios e em menor grau a queda na temperatura retal refletiram o baixo status energético imprimido e foram influenciados negativamente pelos baixos teores de T3. A hipoglicemia foi causada primariamente pela baixa produção de ácido propiônico no rúmen, além da menor concentração de T3; os baixos teores de glicose induziram um quadro de hipoinsulinemia (r = 0,77). O IGF-1 foi considerado o principal indicador do status energético, pois diminuiu de maneira sensível e rápida sua concentração no decorrer da carência; este hormônio foi diretamente influenciado pelos teores de T3 (r = 0,83) e em menor grau pela insulina (r = 0,52). As concentrações de T3 no sangue foram de alguma forma controlados pela ação positiva do IGF-1 e da insulina, assim como pelas concentrações de T4 (r = 0,78) / To evaluate the influence of diets with different degrees of energy deficiency on the hormonal profile, and on metabolic and clinical states of steers, 12 steers were randomly distributed in 3 groups of 4 animals each. Each group received the following diets for 140 days: (G1) 100% of the maintenance to stimulate to weight gain of 900 gr/day (DE: 17.7 Mcal/d); (G2) 80% of the maintenance (DE: 5.8 Mcal/d); (G3) 60% of the same requirements (DE: 4.7 Mcal/d). In both energy deficiency groups (G2 and G3) there was a decrease in body weight, in feed intake, in cardiac and respiratory rates and in rectal temperature during experimental period; in addition these groups had hypoglycemia and reduced production of propionic acid in the rumen. In relation to hormonal profile, the energy deficit caused an acute reduction in plasma levels of IGF-1, insulin and T3, and in a lesser degree in T4. Weight loss was due to lower feed intake, poor quality of diet ingested and also due to low concentrations of IGF-1 and T3. In addition, feed intake was decreased by the low palatability of the diet and due to the influence of hypoinsulinemia. The reduction of heart and respiratory rate and the lower degree of reduction in rectal temperature, all reflected the low energetic status and were influenced negatively by the low level of T3. Hypoglycemia was primarily caused by the lower production of propionic acid in the rumen, besides the action of a lower level of T3; and hypoglycemia induced a hypoinsulinemia (r = 0.77). The IGF-1 was considered the best indicator of the energetic status, because its blood levels reduction was sensible and rapid during the dietary energy deficit; and it was influenced directly by level of T3 (r = 0.83) and in a lower degree by insulin (r = 0.52). The plasma level of T3 was in someway controlled by positive action of IGF-1 and insulin, as well as for T4 level (r = 0.78)