As doenças hipertensão e obesidade têm sido descritas como graves problemas de saúde pública. Além de causar problemas sistêmicos, ambas as doenças podem afetar as condições bucais. Diante disso, o objetivo deste estudo foi investigar a associação entre condição periodontal e hipertensão arterial, em pacientes obesos mórbidos candidatos à cirurgia bariátrica e avaliar o volume do fluxo salivar. A amostra foi composta por 225 indivíduos distribuídos em três grupos: Grupo obeso hipertenso (G1=75), Grupo obeso não hipertenso (G2=75) e Grupo eutrófico (G3=75). A avaliação antropométrica dos indivíduos foi realizada através do IMC, circunferência da cintura e do quadril e, relação cintura-quadril. O exame periodontal foi realizado por meio da profundidade de sondagem, recessão gengival, presença ou ausência de cálculo e sangramento. Foi avaliado o volume de fluxo salivar estimulado. Para a análise estatística foi aplicado o teste de Kolmorov- Smirnov para verificar a normalidade da amostra, seguido do teste Kruskall-Wallis, análises multivariadas empregando modelos de regressão linear (p<0,05). Entre os indivíduos examinados, foi observado maior prevalência de sítios com profundidade de sondagem e recessão de 0 a 3 mm nos eutróficos e maior prevalência de sítios com profundidade de sondagem e recessão 4mm nos grupos de obesos(p<0,05), sendo ligeiramente maior nos obesos hipertensos. Além disso, houve maior perda dentária no grupo G1, com diferença estatisticamente significativa entre os grupos (p<0,05). O ISG e a prevalência de sítios com sangramento foi maior nos grupos dos obesos (p<0,05), sendo discretamente maior nos hipertensos. A presença de cálculo foi maior nos obesos, sem diferença significativa entre os grupos. Em relação ao fluxo salivar, todos os grupos semelhantes volumes, sendo baixo. Conclui-se que os pacientes obesos apresentam maior profundidade de sondagem e maior número de sítios com sangramento que os eutróficos, mas sem diferença na presença ou ausência de hipertensão arterial. / Hypertension and obesity diseases have been described as serious public health problems. Further, they have increased the systemic and oral problems. Therefore, the aim of this study was to investigate the association between periodontal condition and hypertension in morbidly obese patients candidates for bariatric surgery and to assess salivary flow. The sample consisted of 225 individuals divided into three groups: hypertensive obese group (G1 = 75), non-hypertensive obese group (G2 = 75) and eutrophic group (G3 = 75). Anthropometric evaluation of the individuals was performed through BMI, waist and hip circumference, and waisthip ratio. Periodontal examination was performed by depth of probing, gingival recession, presence or absence of calculus and bleeding on probing. The salivary flow was evaluated through the volume of saliva stimulated. Kolmorov-Smirnov test was used to verify the normality of the sample, followed by Kruskall-Wallis test and multivariate analysis by linear regression models (p <0.05). In eutrophic group, the sites of 0 to 3 mm probing depth and recession were higher prevalence and in obese groups, 4 mm probing depth and recession were higher(p <0.05), being slightly higher in hypertensive obese patients (HOP).In addition, there was greater tooth loss in HOP, with a significant difference between groups (p<0.05). GBI and prevalence of sites with bleeding on probing were higher in the obese groups (p<0.05), and were slightly higher in HOP. Calculus presence was higher in the obese patients (p>0.05). All groups showed similar volumes of stimulated saliva. It can be concluded that obese patients present the higher depth probing and major number of bleeding sites than the eutrophic group, however without difference between presence or absence of hypertension.

As doenças hipertensão e obesidade têm sido descritas como graves problemas de saúde pública. Além de causar problemas sistêmicos, ambas as doenças podem afetar as condições bucais. Diante disso, o objetivo deste estudo foi investigar a associação entre condição periodontal e hipertensão arterial, em pacientes obesos mórbidos candidatos à cirurgia bariátrica e avaliar o volume do fluxo salivar. A amostra foi composta por 225 indivíduos distribuídos em três grupos: Grupo obeso hipertenso (G1=75), Grupo obeso não hipertenso (G2=75) e Grupo eutrófico (G3=75). A avaliação antropométrica dos indivíduos foi realizada através do IMC, circunferência da cintura e do quadril e, relação cintura-quadril. O exame periodontal foi realizado por meio da profundidade de sondagem, recessão gengival, presença ou ausência de cálculo e sangramento. Foi avaliado o volume de fluxo salivar estimulado. Para a análise estatística foi aplicado o teste de Kolmorov- Smirnov para verificar a normalidade da amostra, seguido do teste Kruskall-Wallis, análises multivariadas empregando modelos de regressão linear (p<0,05). Entre os indivíduos examinados, foi observado maior prevalência de sítios com profundidade de sondagem e recessão de 0 a 3 mm nos eutróficos e maior prevalência de sítios com profundidade de sondagem e recessão 4mm nos grupos de obesos(p<0,05), sendo ligeiramente maior nos obesos hipertensos. Além disso, houve maior perda dentária no grupo G1, com diferença estatisticamente significativa entre os grupos (p<0,05). O ISG e a prevalência de sítios com sangramento foi maior nos grupos dos obesos (p<0,05), sendo discretamente maior nos hipertensos. A presença de cálculo foi maior nos obesos, sem diferença significativa entre os grupos. Em relação ao fluxo salivar, todos os grupos semelhantes volumes, sendo baixo. Conclui-se que os pacientes obesos apresentam maior profundidade de sondagem e maior número de sítios com sangramento que os eutróficos, mas sem diferença na presença ou ausência de hipertensão arterial. / Hypertension and obesity diseases have been described as serious public health problems. Further, they have increased the systemic and oral problems. Therefore, the aim of this study was to investigate the association between periodontal condition and hypertension in morbidly obese patients candidates for bariatric surgery and to assess salivary flow. The sample consisted of 225 individuals divided into three groups: hypertensive obese group (G1 = 75), non-hypertensive obese group (G2 = 75) and eutrophic group (G3 = 75). Anthropometric evaluation of the individuals was performed through BMI, waist and hip circumference, and waisthip ratio. Periodontal examination was performed by depth of probing, gingival recession, presence or absence of calculus and bleeding on probing. The salivary flow was evaluated through the volume of saliva stimulated. Kolmorov-Smirnov test was used to verify the normality of the sample, followed by Kruskall-Wallis test and multivariate analysis by linear regression models (p <0.05). In eutrophic group, the sites of 0 to 3 mm probing depth and recession were higher prevalence and in obese groups, 4 mm probing depth and recession were higher(p <0.05), being slightly higher in hypertensive obese patients (HOP).In addition, there was greater tooth loss in HOP, with a significant difference between groups (p<0.05). GBI and prevalence of sites with bleeding on probing were higher in the obese groups (p<0.05), and were slightly higher in HOP. Calculus presence was higher in the obese patients (p>0.05). All groups showed similar volumes of stimulated saliva. It can be concluded that obese patients present the higher depth probing and major number of bleeding sites than the eutrophic group, however without difference between presence or absence of hypertension.

京都大学 / 0048 / 新制・課程博士 / 博士(社会健康医学) / 甲第22008号 / 社医博第94号 / 新制||社医||10(附属図書館) / 京都大学大学院医学研究科社会健康医学系専攻 / (主査)教授 中山 健夫, 教授 木原 正博, 教授 別所 和久 / 学位規則第4条第1項該当 / Doctor of Public Health / Kyoto University / DFAM

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Firstly, the aims of the study were to investigate the influences of various factors, sex differences, Cytomegalovirus/Epstein-Barr virus (CMV/EBV) serostatus and vitamin D concentrations on respiratory illness incidence and immune function during the winter months in a student cohort of endurance athletes. In Chapter 3, the findings of the study concur with recent reports of illness incidence at major competitive games which indicate that female athletes may be more susceptible than their male counterparts to upper respiratory tract illness (URTI) symptoms and that lower oral-respiratory mucosal immunity may, in part, account for this. It was also found that previous coinfection with CMV and EBV might promote protective immune surveillance to lower the risk of URTI. In addition, it can be concluded that athletes with low plasma vitamin D concentrations may have a higher risk of URTI and suffer more severe symptoms when URTI is present. This may be due to impaired mucosal and systemic immunity as secretory immunoglobulin A (SIgA) secretion, cathelicidin levels and antigen-stimulated pro-inflammatory cytokine production appear to be increased by vitamin D-dependent mechanisms. A series of follow-up studies were also conducted to examine the effect of vitamin D on mucosal and systemic immunity in athletes. In Chapter 4, it was reported that the influence of vitamin D on circulating cytokines might be different in athletes compared with non-athletes and that both pro-inflammatory and anti-inflammatory cytokine production by multi-antigen stimulated whole blood culture were not influenced by 1,25-dihydroxy vitamin D (1, 25(OH)2D) iconcentrations within the normal healthy range. In Chapter 5, it was found that 5000 IU of vitamin D3 supplementation daily appears to have a beneficial effect in up-regulating the expression of SIgA and cathelicidin in athletes during a winter training period. Nevertheless, the findings reported in Chapter 6 showed that there were no significant effects of vitamin D status and a 4-week period of daily high does vitamin D3 supplementation on salivary antimicrobial protein (AMP) responses to prolonged exercise. In conclusion, a series of studies in this thesis have demonstrated the influence of various factors (sex differences, CMV/EBV serostatus and vitamin D concentrations) on susceptibility to URTI among athletes. Moreover, it was suggested that vitamin D3 supplementation could have a positive effect on immune function and lead to decreased incidence of respiratory infections.

Objetivo: Comparar os resultados obtidos com a sialoendoscopia na melhora do fluxo salivar aferido através cintilografia em pacientes com síndrome de Sjögren primária. Material e método: Pacientes provenientes do Ambulatório de Reumatologia do HCPA com diagnóstico de Síndrome de Sjögren Primária foram submetidos a cintilografia de parótidas previamente ao procedimento de sialoendoscopia. Durante o procedimento de sialoendoscopia, uma das glândulas parótida foi lavada com solução fisiológica e a outra com solução de corticóide, escolha esta predeterminado por randomização. Após completo um mês do procedimento, um novo exame de cintilografia de glândulas parótidas foi realizado visando observar o fluxo salivar para comparação. Resultados: Participaram e completaram a pesquisa 13 pacientes, todas do sexo feminino, com idade média de 53,38 anos (27 - 76 anos). Houve melhora dos resultados de excreção salivar com radiofármaco no exame de cintilografia, após a realização da sialoendoscopia, em 10 pacientes, perfazendo 76,92% da amostra. Analisando cada glândula tratada separadamente (26 glândulas), houve melhora após a sialoendoscopia em 18 glândulas (69,23%), 8 destas utilizaram dexametasona e 10 utilizaram solução fisiológica na lavagem. Não houve melhora em 8 glândulas (30,77%). Conclusão: Este estudo mostra a sialoendoscopia como importante ferramenta na melhora do fluxo salivar aferido por cintilografia em pacientes com Síndrome de Sjögren Primária, aumentando a excreção salivar através da dilatação e consequente desobstrução dos ductos. Sugere que não há diferença estatisticamente significativa entre as soluções de lavagem intraductal solução fisiológica e solução com dexametasona. / Objective: To compare the results utilizing sialendoscopy to improve salivary flow mensured by scintigraphy in Primary Sjögren’ Syndrome. Material and method: Patients from Rheumatology clinic of Porto Alegre’s Clinic Hospital with diagnose of Primary Sjögren' Syndrome were submitted to parotid’s scintigraphy previous to sialendoscopy of both parotid. During the perform of sialendoscopy, one of the parotid gland was wash down with saline solution and the other with dexamethasone solution. Previous determination of the sides was achieved by randomization. After one month of procedure, a new scintigraphy of parotid’s glands was performed to observe the salivary flow for further comparison. Results: Participated and completed the study 13 patients, all female, with average age of 53,38 years (17 - 76 years old). The improve of salivary excretion on scintigraphy was achieved in 10 patients, performing 76,92% of the sample. Analyzing each gland in separate (26 glands), the improve after sialendoscopy was achieved in 18 glands (69,23%), 8 of these used dexamethasone and 10 used saline solution in washing. There was no improve in 8 glands (30,77%). Conclusion: This study demonstrate the use of sialedoscopy as an important tool to improve salivary flow mensured by scintipraphy in Primary Sjögren’ Syndrome patients, increasing the salivary excretion due to the dilatation and consequently clearing of ducts. It suggests that is no statistically difference between the solutions saline versus dexamethasone.

Determinação da composição da Película Adquirida formada sobre o esmalte humano in vivo e da sua modificação após estimulação química e mecânica do fluxo salivar: estudo proteômico. Todas as superfícies sólidas expostas na cavidade bucal são cobertas por uma camada proteinácea denominada película adquirida do esmalte. Trata-se de um filme orgânico, livre de bactérias, que recobre os tecidos dentários e é composto basicamente por proteínas. Diversos trabalhos têm se concentrado na caracterização e no impacto protetor da película adquirida formada sobre a superfície do esmalte. Porém tanto para a película adquirida formada sobre o esmalte in situ quanto in vivo, as considerações sobre o tipo de saliva que contribuiu para sua formação são bastante limitadas, senão inexistentes. Com base nisto, o objetivo deste estudo foi comparar o perfil proteico em películas adquiridas formadas in vivo sobre o esmalte humano em condições de repouso, bem como analisar as películas formadas após estimulação salivar mecânica e química, através de espectrometria de massa. Os experimentos foram realizados por três dias consecutivos, seguindo um delineamento cruzado. Em cada dia, os voluntários (n=9) receberam uma meticulosa profilaxia dentária. Em seguida, aguardaram por duas horas para que a película adquirida fosse formada naturalmente sobre o esmalte (saliva não estimulada Grupo 1, controle). Após o período em questão, cada quadrante da boca foi enxaguado, seco e a película adquirida foi então coletada com auxílio de um papel filtro de eletrodos (electrode wick filter paper, Bio-Rad) embebido em ácido cítrico 3%. Os procedimentos descritos acima foramrepetidos em outros dois dias consecutivos para cada voluntário, sendo que em um dos dias os voluntários estimularam o fluxo salivar mecanicamente (saliva com estimulação mecânica Grupo 2), através da mastigação de Parafilm®, durante o mesmo período de tempo. Em outro dia, o fluxo salivar foi estimulado através de gotejamento de ácido cítrico 2% (p/v) em ambas as bordas laterais da língua, em intervalos de 1 minuto, durante o mesmo período de tempo. O restante dos procedimentos foi repetido como descrito. Para cada grupo, foi feito um pool com os papéis de filtro dos 9 voluntários. Após extração e digestão das proteínas presentes nos papéis, foi realizada a separação dos peptídeos por nano-HPLC (nano- Cromatografia Líquida de Alta Performace) interligada a um espectrômetro de massa (LC-ESI-MS/MS). Os dados MS/MS obtidos foram processados e pesquisados junto ao banco de dados de proteínas humanas (UniProt and TrEMBL, Swiss Institute of Bioinformatics) utilizando algorítimo SEQUEST no software Proteome Discoverer 1.3 (Thermo Scientific). Foram detectadas no total 115 proteínas/peptídeos identificados por pelo menos dois peptídeos. Todos apareceram em pelo menos três corridas de cada Grupo, sendo que 51 proteínas apareceram nos três grupos. O perfil protéico da película adquirida foi semelhante em todos os grupos, embora tenham sido detectadas proteínas específicas para cada grupo. Utilizando a tecnologia de quantificação SIEVE, foi observado que a concentração de proteínas foi maior nos grupos nos quais houve estimulação salivar (2 e 3). Os resultados sugerem que a estimulação do fluxo salivar, tanto mecânica quanto química, promove a formação de película adquirida com maior concentração de proteínas protetoras como anidrase carbônica, mucinas, cistatinas e imunoglobulinas, o que pode resultar num maior caráter protetor para o esmalte dentário. Contudo, são necessários mais estudos para se compreender por completo o complexo processo de formação (mediante variadas condições) e as dinâmicas funções deste importante tegumento. / All solid surfaces exposed in the oral cavity are covered by a closely adherent protein film termed the acquired enamel pellicle (AEP). It is an organic, bacteria-free film that overlies the hard dental tissues and is basically composed by glycoproteins and proteins. Recently, many studies have focused on the characterization and the protector impact of the acquired pellicle formed over the enamel surface. However either for the in situ or in vivo formed AEP, information regarding the type of saliva which has contributed for its formation is quite limited, or even inexistent. Based on this, the aim of the present study was to compare the protein profile of acquired pellicles formed in vivo over the human enamel surfaces under resting condition and also to analyze the protein profile of the pellicles formed after mechanical and chemical salivary flow stimulation using mass spectrometry. The experiments were performed on three consecutive days, following a crossover design. On each day, the volunteers (n=9) received a meticulous dental prophylaxis and then waited for two hours to allow the AEP formation (non stimulated saliva - group 1). After the time span, each quadrant of the mouth was rinsed with water, dried by air spray and then the collection of the AEP was carried out using a filter paper (electrode wick filter paper, Bio-Rad) presoaked in 3% citric acid The procedures described above were repeated on two other consecutive days for each volunteer. However, in one day their salivary flow was mechanically stimulated (mechanical stimulation Group 2) by chewing on Parafilm® during the same period of time. In another day, the salivary flow was chemically stimulated (Chemical stimulation Group 3) by 2% citric acid drops on each side of the tongue, once per minute, for the same period of time. For each group, a pool with the wick filters from all 9 volunteers was made. After the extraction and digestion of the proteins from the paper strips, peptide separation and mass spectrometric analyses were carried out with a nano-HPLC Proxeon linked to mass spectrometer (LC-ESI-MS/MS). The obtained MS/MS spectra were searched against human protein databases (UniProt and TrEMBL, Swiss Institute of Bioinformatics) using SEQUEST algorithm in Proteome Discoverer 1.3 software (Thermo Scientific). The combination of all 3 experiments yielded a total of 115 proteins/peptides identified by at least two peptides. All proteins were identified in at least three runs at each Group fifty-one proteins were found in all three Groups. The protein profile of the AEP observed in each study group was similar, but all groups presented specific proteins. Using the SIEVE quantification technology, it was observed that the amount of proteins that compose the AEP was greater in the groups in which the salivary stimulation was performed (2 and 3). The data suggest that salivary flow stimulation, either mechanical or chemical/gustatory, promotes the formation of AEP with higher concentration of protective proteins, such as carbonic anhydrase, mucins, cystatins and immunoglobulins, which may result with a greater protective character for the tooth enamel. However, further studies are necessary to fully understand the complex process of formation (under various conditions) and the dynamic functions of this important integument.

Objetivo: Comparar os resultados obtidos com a sialoendoscopia na melhora do fluxo salivar aferido através cintilografia em pacientes com síndrome de Sjögren primária. Material e método: Pacientes provenientes do Ambulatório de Reumatologia do HCPA com diagnóstico de Síndrome de Sjögren Primária foram submetidos a cintilografia de parótidas previamente ao procedimento de sialoendoscopia. Durante o procedimento de sialoendoscopia, uma das glândulas parótida foi lavada com solução fisiológica e a outra com solução de corticóide, escolha esta predeterminado por randomização. Após completo um mês do procedimento, um novo exame de cintilografia de glândulas parótidas foi realizado visando observar o fluxo salivar para comparação. Resultados: Participaram e completaram a pesquisa 13 pacientes, todas do sexo feminino, com idade média de 53,38 anos (27 - 76 anos). Houve melhora dos resultados de excreção salivar com radiofármaco no exame de cintilografia, após a realização da sialoendoscopia, em 10 pacientes, perfazendo 76,92% da amostra. Analisando cada glândula tratada separadamente (26 glândulas), houve melhora após a sialoendoscopia em 18 glândulas (69,23%), 8 destas utilizaram dexametasona e 10 utilizaram solução fisiológica na lavagem. Não houve melhora em 8 glândulas (30,77%). Conclusão: Este estudo mostra a sialoendoscopia como importante ferramenta na melhora do fluxo salivar aferido por cintilografia em pacientes com Síndrome de Sjögren Primária, aumentando a excreção salivar através da dilatação e consequente desobstrução dos ductos. Sugere que não há diferença estatisticamente significativa entre as soluções de lavagem intraductal solução fisiológica e solução com dexametasona. / Objective: To compare the results utilizing sialendoscopy to improve salivary flow mensured by scintigraphy in Primary Sjögren’ Syndrome. Material and method: Patients from Rheumatology clinic of Porto Alegre’s Clinic Hospital with diagnose of Primary Sjögren' Syndrome were submitted to parotid’s scintigraphy previous to sialendoscopy of both parotid. During the perform of sialendoscopy, one of the parotid gland was wash down with saline solution and the other with dexamethasone solution. Previous determination of the sides was achieved by randomization. After one month of procedure, a new scintigraphy of parotid’s glands was performed to observe the salivary flow for further comparison. Results: Participated and completed the study 13 patients, all female, with average age of 53,38 years (17 - 76 years old). The improve of salivary excretion on scintigraphy was achieved in 10 patients, performing 76,92% of the sample. Analyzing each gland in separate (26 glands), the improve after sialendoscopy was achieved in 18 glands (69,23%), 8 of these used dexamethasone and 10 used saline solution in washing. There was no improve in 8 glands (30,77%). Conclusion: This study demonstrate the use of sialedoscopy as an important tool to improve salivary flow mensured by scintipraphy in Primary Sjögren’ Syndrome patients, increasing the salivary excretion due to the dilatation and consequently clearing of ducts. It suggests that is no statistically difference between the solutions saline versus dexamethasone.

Objetivo: Comparar os resultados obtidos com a sialoendoscopia na melhora do fluxo salivar aferido através cintilografia em pacientes com síndrome de Sjögren primária. Material e método: Pacientes provenientes do Ambulatório de Reumatologia do HCPA com diagnóstico de Síndrome de Sjögren Primária foram submetidos a cintilografia de parótidas previamente ao procedimento de sialoendoscopia. Durante o procedimento de sialoendoscopia, uma das glândulas parótida foi lavada com solução fisiológica e a outra com solução de corticóide, escolha esta predeterminado por randomização. Após completo um mês do procedimento, um novo exame de cintilografia de glândulas parótidas foi realizado visando observar o fluxo salivar para comparação. Resultados: Participaram e completaram a pesquisa 13 pacientes, todas do sexo feminino, com idade média de 53,38 anos (27 - 76 anos). Houve melhora dos resultados de excreção salivar com radiofármaco no exame de cintilografia, após a realização da sialoendoscopia, em 10 pacientes, perfazendo 76,92% da amostra. Analisando cada glândula tratada separadamente (26 glândulas), houve melhora após a sialoendoscopia em 18 glândulas (69,23%), 8 destas utilizaram dexametasona e 10 utilizaram solução fisiológica na lavagem. Não houve melhora em 8 glândulas (30,77%). Conclusão: Este estudo mostra a sialoendoscopia como importante ferramenta na melhora do fluxo salivar aferido por cintilografia em pacientes com Síndrome de Sjögren Primária, aumentando a excreção salivar através da dilatação e consequente desobstrução dos ductos. Sugere que não há diferença estatisticamente significativa entre as soluções de lavagem intraductal solução fisiológica e solução com dexametasona. / Objective: To compare the results utilizing sialendoscopy to improve salivary flow mensured by scintigraphy in Primary Sjögren’ Syndrome. Material and method: Patients from Rheumatology clinic of Porto Alegre’s Clinic Hospital with diagnose of Primary Sjögren' Syndrome were submitted to parotid’s scintigraphy previous to sialendoscopy of both parotid. During the perform of sialendoscopy, one of the parotid gland was wash down with saline solution and the other with dexamethasone solution. Previous determination of the sides was achieved by randomization. After one month of procedure, a new scintigraphy of parotid’s glands was performed to observe the salivary flow for further comparison. Results: Participated and completed the study 13 patients, all female, with average age of 53,38 years (17 - 76 years old). The improve of salivary excretion on scintigraphy was achieved in 10 patients, performing 76,92% of the sample. Analyzing each gland in separate (26 glands), the improve after sialendoscopy was achieved in 18 glands (69,23%), 8 of these used dexamethasone and 10 used saline solution in washing. There was no improve in 8 glands (30,77%). Conclusion: This study demonstrate the use of sialedoscopy as an important tool to improve salivary flow mensured by scintipraphy in Primary Sjögren’ Syndrome patients, increasing the salivary excretion due to the dilatation and consequently clearing of ducts. It suggests that is no statistically difference between the solutions saline versus dexamethasone.

Determinação da composição da Película Adquirida formada sobre o esmalte humano in vivo e da sua modificação após estimulação química e mecânica do fluxo salivar: estudo proteômico. Todas as superfícies sólidas expostas na cavidade bucal são cobertas por uma camada proteinácea denominada película adquirida do esmalte. Trata-se de um filme orgânico, livre de bactérias, que recobre os tecidos dentários e é composto basicamente por proteínas. Diversos trabalhos têm se concentrado na caracterização e no impacto protetor da película adquirida formada sobre a superfície do esmalte. Porém tanto para a película adquirida formada sobre o esmalte in situ quanto in vivo, as considerações sobre o tipo de saliva que contribuiu para sua formação são bastante limitadas, senão inexistentes. Com base nisto, o objetivo deste estudo foi comparar o perfil proteico em películas adquiridas formadas in vivo sobre o esmalte humano em condições de repouso, bem como analisar as películas formadas após estimulação salivar mecânica e química, através de espectrometria de massa. Os experimentos foram realizados por três dias consecutivos, seguindo um delineamento cruzado. Em cada dia, os voluntários (n=9) receberam uma meticulosa profilaxia dentária. Em seguida, aguardaram por duas horas para que a película adquirida fosse formada naturalmente sobre o esmalte (saliva não estimulada Grupo 1, controle). Após o período em questão, cada quadrante da boca foi enxaguado, seco e a película adquirida foi então coletada com auxílio de um papel filtro de eletrodos (electrode wick filter paper, Bio-Rad) embebido em ácido cítrico 3%. Os procedimentos descritos acima foramrepetidos em outros dois dias consecutivos para cada voluntário, sendo que em um dos dias os voluntários estimularam o fluxo salivar mecanicamente (saliva com estimulação mecânica Grupo 2), através da mastigação de Parafilm®, durante o mesmo período de tempo. Em outro dia, o fluxo salivar foi estimulado através de gotejamento de ácido cítrico 2% (p/v) em ambas as bordas laterais da língua, em intervalos de 1 minuto, durante o mesmo período de tempo. O restante dos procedimentos foi repetido como descrito. Para cada grupo, foi feito um pool com os papéis de filtro dos 9 voluntários. Após extração e digestão das proteínas presentes nos papéis, foi realizada a separação dos peptídeos por nano-HPLC (nano- Cromatografia Líquida de Alta Performace) interligada a um espectrômetro de massa (LC-ESI-MS/MS). Os dados MS/MS obtidos foram processados e pesquisados junto ao banco de dados de proteínas humanas (UniProt and TrEMBL, Swiss Institute of Bioinformatics) utilizando algorítimo SEQUEST no software Proteome Discoverer 1.3 (Thermo Scientific). Foram detectadas no total 115 proteínas/peptídeos identificados por pelo menos dois peptídeos. Todos apareceram em pelo menos três corridas de cada Grupo, sendo que 51 proteínas apareceram nos três grupos. O perfil protéico da película adquirida foi semelhante em todos os grupos, embora tenham sido detectadas proteínas específicas para cada grupo. Utilizando a tecnologia de quantificação SIEVE, foi observado que a concentração de proteínas foi maior nos grupos nos quais houve estimulação salivar (2 e 3). Os resultados sugerem que a estimulação do fluxo salivar, tanto mecânica quanto química, promove a formação de película adquirida com maior concentração de proteínas protetoras como anidrase carbônica, mucinas, cistatinas e imunoglobulinas, o que pode resultar num maior caráter protetor para o esmalte dentário. Contudo, são necessários mais estudos para se compreender por completo o complexo processo de formação (mediante variadas condições) e as dinâmicas funções deste importante tegumento. / All solid surfaces exposed in the oral cavity are covered by a closely adherent protein film termed the acquired enamel pellicle (AEP). It is an organic, bacteria-free film that overlies the hard dental tissues and is basically composed by glycoproteins and proteins. Recently, many studies have focused on the characterization and the protector impact of the acquired pellicle formed over the enamel surface. However either for the in situ or in vivo formed AEP, information regarding the type of saliva which has contributed for its formation is quite limited, or even inexistent. Based on this, the aim of the present study was to compare the protein profile of acquired pellicles formed in vivo over the human enamel surfaces under resting condition and also to analyze the protein profile of the pellicles formed after mechanical and chemical salivary flow stimulation using mass spectrometry. The experiments were performed on three consecutive days, following a crossover design. On each day, the volunteers (n=9) received a meticulous dental prophylaxis and then waited for two hours to allow the AEP formation (non stimulated saliva - group 1). After the time span, each quadrant of the mouth was rinsed with water, dried by air spray and then the collection of the AEP was carried out using a filter paper (electrode wick filter paper, Bio-Rad) presoaked in 3% citric acid The procedures described above were repeated on two other consecutive days for each volunteer. However, in one day their salivary flow was mechanically stimulated (mechanical stimulation Group 2) by chewing on Parafilm® during the same period of time. In another day, the salivary flow was chemically stimulated (Chemical stimulation Group 3) by 2% citric acid drops on each side of the tongue, once per minute, for the same period of time. For each group, a pool with the wick filters from all 9 volunteers was made. After the extraction and digestion of the proteins from the paper strips, peptide separation and mass spectrometric analyses were carried out with a nano-HPLC Proxeon linked to mass spectrometer (LC-ESI-MS/MS). The obtained MS/MS spectra were searched against human protein databases (UniProt and TrEMBL, Swiss Institute of Bioinformatics) using SEQUEST algorithm in Proteome Discoverer 1.3 software (Thermo Scientific). The combination of all 3 experiments yielded a total of 115 proteins/peptides identified by at least two peptides. All proteins were identified in at least three runs at each Group fifty-one proteins were found in all three Groups. The protein profile of the AEP observed in each study group was similar, but all groups presented specific proteins. Using the SIEVE quantification technology, it was observed that the amount of proteins that compose the AEP was greater in the groups in which the salivary stimulation was performed (2 and 3). The data suggest that salivary flow stimulation, either mechanical or chemical/gustatory, promotes the formation of AEP with higher concentration of protective proteins, such as carbonic anhydrase, mucins, cystatins and immunoglobulins, which may result with a greater protective character for the tooth enamel. However, further studies are necessary to fully understand the complex process of formation (under various conditions) and the dynamic functions of this important integument.