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Global analysis of host cell factors involved in the growth of Salmonella Typhimurium inside human epithelial cellsRiede, Oliver 22 February 2010 (has links)
Die molekularbiologische Untersuchung der Wechselwirkungen zwischen Pathogenen und ihren Wirtszellen ist ein wertvoller Ansatz zur Erschließung bakterieller Pathogenitätsmechanismen und hilft, unser ständig wachsendes Wissen über fundamentale Prozesse in eukaryotischen Zellen zu erweitern. Das Gram-negative Bakterium Salmonella Typhimurium ist ein gängiger Modellorganismus, um den intrazellulären Lebensstil bakterieller Pathogene und deren Einfluss auf Wirtszellprozesse zu erforschen. In der vorliegenden Arbeit wurde ein FACS-basierter Hochdurchsatz RNA Interferenz Screen etabliert und durchgeführt, um Wirtszellfaktoren zu entschlüsseln, welche in die intrazelluläre Replikation von Salmonella Typhimurium in humanen Epithelzellen involviert sind. Ein Salmonellen-Stamm, der zwei fluoreszierende Reporterproteine exprimiert, wurde konstruiert, um die bakterielle Replikation und die metabolische Aktivität in infizierten Wirtszellen zu detektieren. Der Einsatz einer humanen Kinase-Bibliothek lieferte 48 potentielle Kandidatengene, von denen 15 in einer anschließenden Validierung als relevante Faktoren identifiziert werden konnten. Die Mitogen-aktivierte Protein Kinase MKK7, deren Depletion eine verminderte bakterielle Replikation zur Folge hatte, wurde für eine weitergehende funktionelle Charakterisierung ausgewählt. Es zeigte sich, dass reduzierte MKK7 Proteinmengen eine Verringerung des Proteins zytosolische Phospholipase A2 (cPLA2) durch eine transkriptionelle Regulation zur Folge hatten. Die Bedeutung von cPLA2 für die bakterielle Infektion wurde durch die Salmonellen-induzierte, dauerhafte Phosphorylierung des Faktors deutlich und konnte durch Replikationsvergleiche in cPLA2-depletierten und nicht-depletierten Zellen bestätigt werden. Mikroskopische Ergebnisse deuteten darauf hin, dass die Phospholipase für den fehlerfreien Aufbau von Salmonellen-induzierten Filamenten notwendig ist, welche unerlässlich für die Salmonellenreplikation in Epithelzellen sind. / The study of pathogen-host cell interactions on the molecular level is a valuable tool to reveal bacterial pathogenicity mechanisms and, moreover, contributes to our increasing knowledge of fundamental cellular processes of eukaryotic cells. The Gram negative bacterium Salmonella Typhimurium is a well established model organism to investigate the intracellular lifestyle of bacterial pathogens and their modulation of host cell processes. In this work, a FACS-based high-throughput RNA interference screen was established and performed to elucidate host cell factors involved in the intracellular replication of Salmonella Typhimurium. A Salmonella strain expressing two fluorescent reporter constructs was generated which allowed for monitoring the bacterial replication and metabolic activity within infected cells. A human kinome-wide siRNA library was screened and 48 candidates were chosen for further validation. Among these, 15 host cell genes were identified to influence Salmonella intracellular replication. The mitogen activated protein kinase MKK7, whose depletion caused a decrease in bacterial replication, was selected for a more profound functional characterization. It could be demonstrated that the knock down of MKK7 caused a decrease in phospholipase A2 (cPLA2) protein levels due to a transcriptional regulation. A role for cPLA2 during the bacterial intracellular lifestyle was implicated by the finding that Salmonella induced a permanent phosphorylation of the phospholipase. The necessity of cPLA2 was confirmed with replication assays in cPLA2 depleted cells using siRNA and shRNA mediated knock down strategies. Microscopic experiments indicated that the phospholipase A2 is involved in the accurate generation of Salmonella-induced filaments, structures that were reported to be indispensable for replication.
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Desenvolvimento de uma nova estratégia vacinal com propriedades profiláticas contra a síndrome hemolítica urêmica (SHU) associada a linhagens de Escherichia coli enterohemorrágica (EHEC) produtoras da toxina \"Shiga-like\" (Stx2). / Developing a new vaccine strategy with prophylactic properties against hemolytic uremic syndrome (HUS) associated with strains of enterohaemorrhagic Escherichia coli (EHEC) produced by \"Shiga-like \"(Stx).Rojas, Robert Leonardo Gálvez 14 December 2010 (has links)
O Objetivo deste trabalho foi desenvolver uma estratégia vacinal de utilizando linhagens de salmonellas capazes de expressar uma forma atoxica da principal toxina associada a linhagens de EHEC que causa a síndrome hemolítica urémica. Estas linhagens de salmonellas diferem na expressão de flagelina, a principal unidade estrutural do flagelo. As linhagens foram capazes de expressar uma forma atóxica da proteína \"Shiga-like\" no interior da bactéria e no espaço extracelular, apresentaram alta estabilidade plasmidial in vitro e in vivo e foram capazes de aumentar o grau de colonização intestinal. Além disso, avaliamos o potencial imunogênico de estas linhagens e encontramos que a imunização com três doses de salmonelas foram capazes de gerar anticorpos sistêmicos (IgG) e locais (IgA) com propriedades neutralizantes in vitro e proteção parcial em condições in vivo frente a ensaios de desafios com a toxina nativa. Não fomos capazes de encontrar diferencias significativas em lãs propriedades imunogênicas entre as linhagens que diferem na expressão de flagelina. Nossos resultados indicam que formas atóxicas da proteína Stx2 expressadas em vetores biológicos podem ser uma alternativa de estratégia vacinal para controlar a SHU. / The goal of this study was to develop a vaccine strategy of using Salmonella strains capable of expressing a nontoxic form of the main toxin associated with EHEC strains that cause hemolytic uremic syndrome. These strains of Salmonella differ in flagellin expression, the main structural unit of the flagellum. The strains were capable of expressing a nontoxic form of the protein \"Shiga-like\" within the bacteria and the extracellular space, showed high plasmid stability in vitro and in vivo and were able to increase the degree of intestinal colonization. Furthermore, we evaluated the immunogenic potential of these strains and found that immunization with three doses of salmonella were able to generate (IgA) humoral and (IgG) systemic antibodies with neutralizing properties in vitro and partial protection in vivo conditions facing trials challenges with the native toxin. We were unable to find significant differences in the immunogenic properties between these strains that differ in flagellin expression. Our results indicate that nontoxic forms of Stx2 expressed in biological vectors can be an alternative vaccine strategy to control the SHU.
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Genetic adaptation of Salmonella enterica to phagocytic cells /Eriksson, Sofia, January 2003 (has links)
Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karol. inst., 2003. / Härtill 4 uppsatser.
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Interação entre Lipopolissacarídeo de Salmonella Typhimurium e Fumonisina B1 em frangos de corteRauber, Ricardo Hummes January 2012 (has links)
Lipopolissacarídeo (LPS) é o principal componente da parede celular de bactérias Gram-negativas, sendo liberado durante a divisão celular ou morte da bactéria após lise. O LPS é um dos mais potentes ativadores do sistema imune, desencadeando uma resposta inflamatória inespecífica. A exposição ao LPS tem sido associada a uma gama de efeitos tóxicos em frangos e outras aves, como hipertermia, inflamação, caquexia e, eventualmente, morte. A fumonisina B1 (FB), um metabólito secundário produzido pelo Fusarium verticilloides, tem sido descrita como causa de doenças previamente conhecidas (leucoencefalomalácea equina e edema pulmonar suíno), bem como causando alguns efeitos em aves. Os principais sinais clínicos da intoxicação por FB em frangos são desempenho reduzido, ascite, edema e congestão dos rins, diarreia, peso relativo do fígado aumentado e mortalidade. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos individuais e combinados do LPS de Salmonella Typhimuruim (sLPS) e FB sobre o desempenho produtivo (peso corporal [PC], consumo de ração [CR] e conversão alimentar [C]), peso relativo de fígado (PRF), parâmetros biológicos (proteínas plasmáticas totais [PPT], albumina [Alb], cálcio [Ca], triglicerídeos [Tri], colesterol total [Col], fósforo [P], ácido úrico [AU], proteína C-reativa [CRP], alanina aminotransferase [ALT], aspartato aminotransferase [AST], fosfatase alcalina [FA], gama glutamiltransferase [GGT] e relação esfinganina/esfingosina [SA:SO]), avaliação morfológica do intestino delgado (altura de vilosidades [AV], profundidade de criptas [PC] e relação vilosidade/cripta [V:C]) e avaliações histológicas de vários tecidos de 432 frangos de corte, machos, com um dia de idade, divididos em nove tratamentos, conforme a dose de FB (0, 100 ou 200 mg/kg, do primeiro ao 28º dia de experimento) e sLPS (0, 250 ou 500 μg/ave por aplicação, a cada 48 horas, do 15º ao 27º dia. Ao final do experimento (28 dias): efeitos significativos do sLPS foram observados sobre PC, Ca, Col, P, AU, CRP, AST, FA e AV; efeitos significativos da FB foram observados sobre PC, CR, C, PRF, PPT, Alb, Ca, Tri, Col, AU, CRP, ALT, GGT, SA:SO, AV e V:C; efeitos significativos da interação sLPS*FB foram observados sobre PRF, Alb, Col, P, AU e CRP. Alterações histológicas foram observadas para sLPS, FB e sLPS*FB no fígado e rins. De acordo com estes resultados, sLPS e FB (isolados ou associados) determinam efeitos sobre o desempenho e parâmetros biológicos de frangos de corte. / Lipopolysaccharide (LPS) is the main component of Gram-negative bacterial cell wall, and is released during cellular division or bacterial death after lysis. This is one of the most powerful activators of the immune system, leading to a non-specific inflammatory response. LPS exposure has been related to a role of effects in broilers and other avian species, such as hyperthermia, inflammation, cachexia, and eventually, death. Fumonisin B1 (FB), a secondary metabolite produced by Fusarium verticilloides, has been shown to be associated to some previously known diseases or syndromes (equine leucoencephalomalacea and porcine pulmonary edema) and has also been described as causing some effects in poultry. The main clinical signs of FB intoxication in broilers are reduced productive performance, ascites, kidney edema and congestion, diarrhea, increased relative weight of the liver, and mortality. The aim of this research was to evaluate the individual and combined effects of Salmonella Typhimurium Lipopolysaccharide (sLPS) and FB on performance (body weight, feed intake, and feed conversion rate), relative weight of the liver, biological parameters (total plasma proteins [TPP], albumin [Alb], calcium [Ca], triglycerides [Tri], total cholesterol [Col], phosphorus [Ph], uric acid [UA], C-reactive protein [CRP], alanine aminotransferase [ALT], aspartate aminotransferase [AST], alkaline phosphatase [AP], gamma glutamiltransferase [GGT] and sphinganine-to-sphingosine [SA:SO] ratio), morphological evaluation of jejunum/ileum (villous height [VH], crypt depth [CD], and villous-to-crypt [V:C] ratio), and histological evaluation of several tissues from 432 day-old male broiler chickens divided into nine treatments according to the dose of FB (0, 100, or 200 mg/kg, from day 1 to day 28) and sLPS (0, 250, or 500 μg/application/bird, every other day, from day 15 do day 27). At the end of the experiment (28 d), significant effects of: sLPS were observed on BW, Ca, Col, Ph, UA, CRP, AST, AP, and VH; FB were observed on BW, FI, FCR, RWL, TPP, Alb, Ca, Tri, Col, UA, CRP, ALT, GGT, SA:SO, VH, and V:C; Interaction sLPS*FB were observed on RWL, Alb, Col, Ph, UA, and CRP. Histopathological evaluations showed significant lesions in liver and kidney caused by sLPS, FB and their association. According to these results, both sLPS and FB (isolated or associated) determine significant effects on performance and biological parameters of broilers at 28 days of age.
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Interação entre Lipopolissacarídeo de Salmonella Typhimurium e Fumonisina B1 em frangos de corteRauber, Ricardo Hummes January 2012 (has links)
Lipopolissacarídeo (LPS) é o principal componente da parede celular de bactérias Gram-negativas, sendo liberado durante a divisão celular ou morte da bactéria após lise. O LPS é um dos mais potentes ativadores do sistema imune, desencadeando uma resposta inflamatória inespecífica. A exposição ao LPS tem sido associada a uma gama de efeitos tóxicos em frangos e outras aves, como hipertermia, inflamação, caquexia e, eventualmente, morte. A fumonisina B1 (FB), um metabólito secundário produzido pelo Fusarium verticilloides, tem sido descrita como causa de doenças previamente conhecidas (leucoencefalomalácea equina e edema pulmonar suíno), bem como causando alguns efeitos em aves. Os principais sinais clínicos da intoxicação por FB em frangos são desempenho reduzido, ascite, edema e congestão dos rins, diarreia, peso relativo do fígado aumentado e mortalidade. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos individuais e combinados do LPS de Salmonella Typhimuruim (sLPS) e FB sobre o desempenho produtivo (peso corporal [PC], consumo de ração [CR] e conversão alimentar [C]), peso relativo de fígado (PRF), parâmetros biológicos (proteínas plasmáticas totais [PPT], albumina [Alb], cálcio [Ca], triglicerídeos [Tri], colesterol total [Col], fósforo [P], ácido úrico [AU], proteína C-reativa [CRP], alanina aminotransferase [ALT], aspartato aminotransferase [AST], fosfatase alcalina [FA], gama glutamiltransferase [GGT] e relação esfinganina/esfingosina [SA:SO]), avaliação morfológica do intestino delgado (altura de vilosidades [AV], profundidade de criptas [PC] e relação vilosidade/cripta [V:C]) e avaliações histológicas de vários tecidos de 432 frangos de corte, machos, com um dia de idade, divididos em nove tratamentos, conforme a dose de FB (0, 100 ou 200 mg/kg, do primeiro ao 28º dia de experimento) e sLPS (0, 250 ou 500 μg/ave por aplicação, a cada 48 horas, do 15º ao 27º dia. Ao final do experimento (28 dias): efeitos significativos do sLPS foram observados sobre PC, Ca, Col, P, AU, CRP, AST, FA e AV; efeitos significativos da FB foram observados sobre PC, CR, C, PRF, PPT, Alb, Ca, Tri, Col, AU, CRP, ALT, GGT, SA:SO, AV e V:C; efeitos significativos da interação sLPS*FB foram observados sobre PRF, Alb, Col, P, AU e CRP. Alterações histológicas foram observadas para sLPS, FB e sLPS*FB no fígado e rins. De acordo com estes resultados, sLPS e FB (isolados ou associados) determinam efeitos sobre o desempenho e parâmetros biológicos de frangos de corte. / Lipopolysaccharide (LPS) is the main component of Gram-negative bacterial cell wall, and is released during cellular division or bacterial death after lysis. This is one of the most powerful activators of the immune system, leading to a non-specific inflammatory response. LPS exposure has been related to a role of effects in broilers and other avian species, such as hyperthermia, inflammation, cachexia, and eventually, death. Fumonisin B1 (FB), a secondary metabolite produced by Fusarium verticilloides, has been shown to be associated to some previously known diseases or syndromes (equine leucoencephalomalacea and porcine pulmonary edema) and has also been described as causing some effects in poultry. The main clinical signs of FB intoxication in broilers are reduced productive performance, ascites, kidney edema and congestion, diarrhea, increased relative weight of the liver, and mortality. The aim of this research was to evaluate the individual and combined effects of Salmonella Typhimurium Lipopolysaccharide (sLPS) and FB on performance (body weight, feed intake, and feed conversion rate), relative weight of the liver, biological parameters (total plasma proteins [TPP], albumin [Alb], calcium [Ca], triglycerides [Tri], total cholesterol [Col], phosphorus [Ph], uric acid [UA], C-reactive protein [CRP], alanine aminotransferase [ALT], aspartate aminotransferase [AST], alkaline phosphatase [AP], gamma glutamiltransferase [GGT] and sphinganine-to-sphingosine [SA:SO] ratio), morphological evaluation of jejunum/ileum (villous height [VH], crypt depth [CD], and villous-to-crypt [V:C] ratio), and histological evaluation of several tissues from 432 day-old male broiler chickens divided into nine treatments according to the dose of FB (0, 100, or 200 mg/kg, from day 1 to day 28) and sLPS (0, 250, or 500 μg/application/bird, every other day, from day 15 do day 27). At the end of the experiment (28 d), significant effects of: sLPS were observed on BW, Ca, Col, Ph, UA, CRP, AST, AP, and VH; FB were observed on BW, FI, FCR, RWL, TPP, Alb, Ca, Tri, Col, UA, CRP, ALT, GGT, SA:SO, VH, and V:C; Interaction sLPS*FB were observed on RWL, Alb, Col, Ph, UA, and CRP. Histopathological evaluations showed significant lesions in liver and kidney caused by sLPS, FB and their association. According to these results, both sLPS and FB (isolated or associated) determine significant effects on performance and biological parameters of broilers at 28 days of age.
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Interação entre Lipopolissacarídeo de Salmonella Typhimurium e Fumonisina B1 em frangos de corteRauber, Ricardo Hummes January 2012 (has links)
Lipopolissacarídeo (LPS) é o principal componente da parede celular de bactérias Gram-negativas, sendo liberado durante a divisão celular ou morte da bactéria após lise. O LPS é um dos mais potentes ativadores do sistema imune, desencadeando uma resposta inflamatória inespecífica. A exposição ao LPS tem sido associada a uma gama de efeitos tóxicos em frangos e outras aves, como hipertermia, inflamação, caquexia e, eventualmente, morte. A fumonisina B1 (FB), um metabólito secundário produzido pelo Fusarium verticilloides, tem sido descrita como causa de doenças previamente conhecidas (leucoencefalomalácea equina e edema pulmonar suíno), bem como causando alguns efeitos em aves. Os principais sinais clínicos da intoxicação por FB em frangos são desempenho reduzido, ascite, edema e congestão dos rins, diarreia, peso relativo do fígado aumentado e mortalidade. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos individuais e combinados do LPS de Salmonella Typhimuruim (sLPS) e FB sobre o desempenho produtivo (peso corporal [PC], consumo de ração [CR] e conversão alimentar [C]), peso relativo de fígado (PRF), parâmetros biológicos (proteínas plasmáticas totais [PPT], albumina [Alb], cálcio [Ca], triglicerídeos [Tri], colesterol total [Col], fósforo [P], ácido úrico [AU], proteína C-reativa [CRP], alanina aminotransferase [ALT], aspartato aminotransferase [AST], fosfatase alcalina [FA], gama glutamiltransferase [GGT] e relação esfinganina/esfingosina [SA:SO]), avaliação morfológica do intestino delgado (altura de vilosidades [AV], profundidade de criptas [PC] e relação vilosidade/cripta [V:C]) e avaliações histológicas de vários tecidos de 432 frangos de corte, machos, com um dia de idade, divididos em nove tratamentos, conforme a dose de FB (0, 100 ou 200 mg/kg, do primeiro ao 28º dia de experimento) e sLPS (0, 250 ou 500 μg/ave por aplicação, a cada 48 horas, do 15º ao 27º dia. Ao final do experimento (28 dias): efeitos significativos do sLPS foram observados sobre PC, Ca, Col, P, AU, CRP, AST, FA e AV; efeitos significativos da FB foram observados sobre PC, CR, C, PRF, PPT, Alb, Ca, Tri, Col, AU, CRP, ALT, GGT, SA:SO, AV e V:C; efeitos significativos da interação sLPS*FB foram observados sobre PRF, Alb, Col, P, AU e CRP. Alterações histológicas foram observadas para sLPS, FB e sLPS*FB no fígado e rins. De acordo com estes resultados, sLPS e FB (isolados ou associados) determinam efeitos sobre o desempenho e parâmetros biológicos de frangos de corte. / Lipopolysaccharide (LPS) is the main component of Gram-negative bacterial cell wall, and is released during cellular division or bacterial death after lysis. This is one of the most powerful activators of the immune system, leading to a non-specific inflammatory response. LPS exposure has been related to a role of effects in broilers and other avian species, such as hyperthermia, inflammation, cachexia, and eventually, death. Fumonisin B1 (FB), a secondary metabolite produced by Fusarium verticilloides, has been shown to be associated to some previously known diseases or syndromes (equine leucoencephalomalacea and porcine pulmonary edema) and has also been described as causing some effects in poultry. The main clinical signs of FB intoxication in broilers are reduced productive performance, ascites, kidney edema and congestion, diarrhea, increased relative weight of the liver, and mortality. The aim of this research was to evaluate the individual and combined effects of Salmonella Typhimurium Lipopolysaccharide (sLPS) and FB on performance (body weight, feed intake, and feed conversion rate), relative weight of the liver, biological parameters (total plasma proteins [TPP], albumin [Alb], calcium [Ca], triglycerides [Tri], total cholesterol [Col], phosphorus [Ph], uric acid [UA], C-reactive protein [CRP], alanine aminotransferase [ALT], aspartate aminotransferase [AST], alkaline phosphatase [AP], gamma glutamiltransferase [GGT] and sphinganine-to-sphingosine [SA:SO] ratio), morphological evaluation of jejunum/ileum (villous height [VH], crypt depth [CD], and villous-to-crypt [V:C] ratio), and histological evaluation of several tissues from 432 day-old male broiler chickens divided into nine treatments according to the dose of FB (0, 100, or 200 mg/kg, from day 1 to day 28) and sLPS (0, 250, or 500 μg/application/bird, every other day, from day 15 do day 27). At the end of the experiment (28 d), significant effects of: sLPS were observed on BW, Ca, Col, Ph, UA, CRP, AST, AP, and VH; FB were observed on BW, FI, FCR, RWL, TPP, Alb, Ca, Tri, Col, UA, CRP, ALT, GGT, SA:SO, VH, and V:C; Interaction sLPS*FB were observed on RWL, Alb, Col, Ph, UA, and CRP. Histopathological evaluations showed significant lesions in liver and kidney caused by sLPS, FB and their association. According to these results, both sLPS and FB (isolated or associated) determine significant effects on performance and biological parameters of broilers at 28 days of age.
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Efeito do Quorum Sensing na Motilidade e na Multiplicação de Salmonella Typhimurium. / Effect of the Quorum Sensing on the Salmonella Typhimurium Growth and MotilityConceição, Rita de Cássia dos Santos da 21 December 2012 (has links)
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Previous issue date: 2012-12-21 / Salmonella spp. is the most commonly bacterium transmitted through contamined food. The foods of animal are the most responsible for the worldwide distribution of this bacterium. Salmonella spp. is able to induce a variety of diseases, ranging from an enteric fever, septicemia, gastroenteritis and infections focused. This is due to the bacteria produce different pathogenicity factors and these factors, the flagellum was the target of our study and it is one of the pathogenicity factors induced by Quorum Sensing. Quorum Sensing is a bacterial signaling system that operates through the
so-called autoinducer (AI). Gram-negative bacteria produce three auto-inducers. Studies find that catecholamines are able to use the same pathway the autoinducer 3 (AI-3) to active certain genes. Epinephrine and norepinephrine are catecholamines that are present in the mammalian gastrointestinal tract can modulate bacterial gene expression. This work had as objectives to evaluate the Quorum Sensing signaling system on motility, on the growth and flagellar assembly gene expression of Salmonella enterica serovar Typhimurium (ST) and do a review about pathogenicity factors
of Salmonella spp. induced by Quorum Sensing. ST was exposed to different concentrations of epinephrine and conditioned medium and its association. The combination of 500 μM epinephrine with 50 % conditioned medium increased ST bacterial motility, growth and increased the expression of the fliC, motA, motB and fliA genes. These results suggest that epinephrine in association with conditioned medium increases ST growth and motility, by modulating the expression of genes involved in flagellum assembly. These observations provide valuable insight into the association between catecholamine and autoinducer and their role in the outcome of Salmonella spp. infection. / Salmonella spp. é um dos principais patógenos transmitidos por alimentos. Os produtos de origem animal são os maiores responsáveis pela distribuição mundial desta bactéria. Salmonella spp. é capaz de induzir uma série de doenças, que vão desde uma febre entérica, septicemia, gastroenterite e infecções focalizadas. Isto é decorrente da bactéria produzir diferentes fatores de patogenicidade e dentre estes fatores, o flagelo foi o alvo no nosso estudo e é um dos fatores de patogenicidade induzidos por Quorum Sensing. Este é um de sistema de sinalização entre as bactérias, através de substâncias denominadas de auto-indutores (AI). As bactérias
Gram-negativas produzem três auto-indutores. Estudos verificaram que catecolaminas são capazes de usar a mesma via de sinalização do auto-indutor 3 (AI-3) para ativar determinados genes. Adrenalina e noradrenalina são
catecolaminas presentes no trato gastrointestinal de humanos e animais que são capazes de modular a expressão de gênica de bactérias. O presente trabalho teve por objetivos avaliar o sistema de sinalização Quorum Sensing (AI-3) na motilidade,
no crescimento celular e na expressão de genes envolvidos na montagem do flagelo de Salmonella enterica sorovar Typhimurium (ST) e fazer uma revisão bibliográfica de
fatores de patogenicidade de Salmonella spp. induzidos por Quorum Sensing. ST foi exposta a diferentes concentrações de adrenalina e esta associada ao meio condicionado. A combinação de 500 μM de adrenalina + 50% de meio condicionado aumentou a motilidade de ST, o crescimento celular e induziu a expressão dos genes motA, motB, fliA e fliC. Estes resultados sugerem que a maior motilidade de
ST foi decorrente de uma maior expressão de genes envolvidos com a montagem do flagelo. Estas observações fornecem dados valiosos sobre a associação da adrenalina com os auto-indutores e seu papel na infecção causada por Salmonella
spp..
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Desenvolvimento de uma nova estratégia vacinal com propriedades profiláticas contra a síndrome hemolítica urêmica (SHU) associada a linhagens de Escherichia coli enterohemorrágica (EHEC) produtoras da toxina \"Shiga-like\" (Stx2). / Developing a new vaccine strategy with prophylactic properties against hemolytic uremic syndrome (HUS) associated with strains of enterohaemorrhagic Escherichia coli (EHEC) produced by \"Shiga-like \"(Stx).Robert Leonardo Gálvez Rojas 14 December 2010 (has links)
O Objetivo deste trabalho foi desenvolver uma estratégia vacinal de utilizando linhagens de salmonellas capazes de expressar uma forma atoxica da principal toxina associada a linhagens de EHEC que causa a síndrome hemolítica urémica. Estas linhagens de salmonellas diferem na expressão de flagelina, a principal unidade estrutural do flagelo. As linhagens foram capazes de expressar uma forma atóxica da proteína \"Shiga-like\" no interior da bactéria e no espaço extracelular, apresentaram alta estabilidade plasmidial in vitro e in vivo e foram capazes de aumentar o grau de colonização intestinal. Além disso, avaliamos o potencial imunogênico de estas linhagens e encontramos que a imunização com três doses de salmonelas foram capazes de gerar anticorpos sistêmicos (IgG) e locais (IgA) com propriedades neutralizantes in vitro e proteção parcial em condições in vivo frente a ensaios de desafios com a toxina nativa. Não fomos capazes de encontrar diferencias significativas em lãs propriedades imunogênicas entre as linhagens que diferem na expressão de flagelina. Nossos resultados indicam que formas atóxicas da proteína Stx2 expressadas em vetores biológicos podem ser uma alternativa de estratégia vacinal para controlar a SHU. / The goal of this study was to develop a vaccine strategy of using Salmonella strains capable of expressing a nontoxic form of the main toxin associated with EHEC strains that cause hemolytic uremic syndrome. These strains of Salmonella differ in flagellin expression, the main structural unit of the flagellum. The strains were capable of expressing a nontoxic form of the protein \"Shiga-like\" within the bacteria and the extracellular space, showed high plasmid stability in vitro and in vivo and were able to increase the degree of intestinal colonization. Furthermore, we evaluated the immunogenic potential of these strains and found that immunization with three doses of salmonella were able to generate (IgA) humoral and (IgG) systemic antibodies with neutralizing properties in vitro and partial protection in vivo conditions facing trials challenges with the native toxin. We were unable to find significant differences in the immunogenic properties between these strains that differ in flagellin expression. Our results indicate that nontoxic forms of Stx2 expressed in biological vectors can be an alternative vaccine strategy to control the SHU.
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Rôle des récepteurs autophagiques dans la maturation des autophagosomes / A role for autophagic receptors in autophagosome maturationVerlhac, Pauline 20 September 2016 (has links)
La xénophagie est une forme d'autophagie sélective permettant de capture des pathogènes dans les autophagosomes et de les dégrader dans les autolysosomes. Cette sélectivité est assurée par une famille de protéines ; les récepteurs autophagiques qui reconnaissent des substrats cytosoliques d'un côté et les membres de la famille LC3 ancrés dans la membrane de l'autophagosome de l'autre. Parmi ces récepteurs, NDP52 cible la bactérie Salmonella Typhimurium vers l'autophagie.Nous décrivons un rôle nouveau et inattendu pour NDP52 ; assurer la maturation d'autophagosomes durant l'infection par Salmonella mais aussi durant l'autophagie basale. De manière intéressante, ce rôle de NDP52 dans la maturation est indépendant de son rôle dans le ciblage de la bactérie puisque ces fonctions nécessitent des domaines et des partenaires moléculaires de NDP52 distincts. Nous montrons aussi que d'autres récepteurs peuvent participer à la maturation comme Optineurine. Ce travail montre donc que NDP52 assure deux rôles durant la xénophagie en ciblant les bactéries vers les autophagosomes en formation puis en promouvant la maturation de l'autophagosome. De plus, nous proposons aussi un possible mécanisme de régulation de ces deux fonctions par des modifications post-traductionnelles des récepteurs autophagiques.Ce travail démontre que les récepteurs autophagiques jouent des rôles au-delà du ciblage des pathogènes qui sont aussi cruciaux pour une xénophagie efficace. De plus, les récepteurs autophagiques sont aussi nécessaires pour le déroulement de l'autophagie basale. Ces travaux offrent une nouvelle compréhension de la régulation moléculaire de l'autophagie et de la xénophagie / Xenophagy relies on the ability of the autophagy process to selectively entrap intracellular pathogens within autophagosomes to degrade them into autolysosomes. The selectivity of the process relies on proteins named autophagy receptors that share the ability to recognise cytosolic cargos on one hand and autophagosome-bound members of the ATG8 family on the other. Among autophagy receptors NDP52 has been described to target Salmonella Typhimurium to the growing autophagosome. We describe a new unexpected role for NDP52, as this receptor also regulates the maturation of Salmonella-containing autophagosomes and during ongoing autophagy. Interestingly, the role of NDP52 in maturation is independent from its role in targeting as they rely on different binding domains and protein partners. We also show that other autophagy receptors also mediate autophagosome maturation such as Optineurin. Therefore, our work shows that NDP52 plays a dual function during xenophagy first by targeting bacteria to growing autophagosomes and then by assuring autophagosome maturation. Moreover, we also provide insights as to how these dual roles are regulated by post-translational modifications of autophagy receptors.This work demonstrates that autophagy receptors have other roles beyond pathogen targeting that are also crucial for an efficient xenophagy. Moreover, autophagy receptors are also necessary for autophagy completion in uninfected cells. These results strengthen our understanding of both ongoing autophagy and xenophagy molecular mechanisms
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Avaliação do potencial adjuvante da flagelina FliCi de Salmonella enterica sorovar Thyphimurium no desenvolvimento de uma vacina contra leptospirose. / Adjuvant activity of Salmonella enterica serovar Thyphimurium FliCi flagellin in the development of a subunit vaccine against leptospirosis.Denize Monaris 28 January 2011 (has links)
A leptospirose é uma zoonose de importância global causada por espiroquetas patogênicas do gênero Leptospira. Foi avaliado o potencial adjuvante da flagelina FliCi de Salmonella enterica sorovar Thyphimurium na indução de resposta imunoprotetora em uma formulação vacinal acelular composta pela proteína LigAc e por seis prováveis lipoproteínas de membrana externa recombinantes de Leptospira interrogans sorovar Copenhageni como alternativa profilática. Grupos de hamsters imunizados com LigAc co-administrada com o pool das proteínas acrescidas de FliCi ou Al(OH)3 apresentaram altos títulos de anticorpos contra as proteínas recombinantes e foram protegidos do desafio letal (86-100%). Grupos imunizados com vacina comercial, bacterina ou pool+LigAc+FliCi apresentaram redução na colonização renal (0-28%). Dados sugerem aumento da expressão dos genes das citocinas de resposta Th1/Th2. Os resultados demonstram que novas formulações vacinais, compostas por proteínas recombinantes e flagelina FliCi como adjuvante, é um caminho promissor. / Leptospirosis is a global zoonotic disease caused by pathogenic spirochetes of the genus Leptospira. In the present study, we evaluated the adjuvant activity of Salmonella enterica FliCi flagellin in the protective immunity induced by the LigAc and also by six other novel recombinant leptospiral outer membrane lipoproteins (OMP) of Leptospira interrogans serovar Copenhageni. Immunization of hamsters with LigAc or LigAc coadministered with OMPs cocktail, both with FliCi or Al(OH)3, induced robust antibody responses against recombinant proteins, and conferred protection after challenge (86-100%). Moreover, only groups inoculated with the commercial vaccine, bacterin or LigAc coadministered with OMPs cocktail and FliCi as adjuvant showed reduced bacterial load in kidneys (0-28%) with significant enhancement of gene expression of both Th1 and Th2 cytokines. Taken together, our data pave the way for the development of novel vaccine formulations against leptospirosis, using recombinant proteins and FliCi as adjuvant.
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