As oncoproteínas E6 e E7 do Papilomavírus Humano (HPV) estão envolvidas na desregulação do sistema imune inato, provocando alterações na expressão dos receptores do tipo Toll (TLR). Considerando-se a função da via de sinalização iniciada por TLR, haveria uma vantagem para o vírus capaz de manipular a resposta desta via de modo que possa persistir nas células sem ser detectado pelo sistema imune ou ainda modulando essa resposta e criando um ambiente mais propício à manutenção da infecção. No entanto, muitos dos mecanismos que levam à eliminação da infecção ou persistência do HPV ainda são pouco conhecidos. O objetivo principal desse trabalho é investigar o papel das vias de TLR no processo de carcinogênese mediado por HPV. Inicialmente, foi analisada a expressão de genes da via de TLR em linhagens de tumores cervicais e em células expressando as oncoproteínas virais. Foram identificados vários genes diferencialmente expressos entre linhagens de células tumorais e queratinócitos normais, incluindo moléculas adaptadoras da via de TLR e genes associados à via da MAP quinase, ativação de NFkappaB e resposta imune antiviral. Cerca de 90% destes genes foram regulados negativamente. Entre eles, destacamos HMGB1, que apesar de possuir menos RNAm nas células tumorais possui um nível proteico muito maior, além de ter-se mostrado de grande importância para a viabilidade e proliferação das células tumorais, conforme demonstrado através de experimentos de supressão gênica. Em conjunto, os nossos dados indicam que E6 e E7 de HPVs de alto risco inibem proteínas da via de sinalização de TLR / Previous studies have shown that E6 and E7 HPV oncoproteins are involved in innate immune system dysregulation, causing alterations on Toll-like receptors (TLR) expression. Considering TLR pathway function, it would be advantageous for a virus to manipulate the response of this pathway so it can persist in cells without being detected by the immune system or to modulate this response to create a better environment for persistence of infection. However, many of the mechanisms leading to HPV infection clearance or persistence are still unknown and matter of active investigation. We analyzed in cervical cancer cell lines expression of genes from TLR pathway; several were differentially expressed between tumor cells lines and normal keratinocytes, including TLR adaptors molecules and genes associated with MAP kinase pathway, NFkappaB activation and antiviral immune response. About 90% of these genes were down regulated. Among them, we selected HMGB1 for further characterization due to its interference with tumor cell viability and proliferation. Altogether, our data indicate that high risk HPV E6 and E7 can inhibit TLR signaling pathway

Made available in DSpace on 2016-03-22T17:27:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 olga maria.pdf: 1818990 bytes, checksum: 0695caafcf21600e2b61d3fae8bdefd8 (MD5) Previous issue date: 2014-09-17 / This thesis aims to reveal, on the basis of voices present in the discourse of black teachers in teaching institutions of the city of Pelotas-RS, the strategies used by the discourse of silencing, which persists in defending the idea of an equality of conditions between people independently of the color of their skin. The analyses of these perceptions take as its basis reports of experiences lived by black teachers in the institutional and social context of Pelotas. For doing this, we sent electronically a questionnaire to sixteen black teachers of several teaching networks (municipal, state, federal and private) composed by six open questions, from which we weave some reflections on the voices of these actors as for the discourse of silencing that tries, without results, make invisible their role as black people, citizens and teachers in the service of teaching. The inquiry, by means of the discourse of these teachers, aims to contribute to a more critical analysis regarding some postures that humiliatingly and depreciatively keep on populating the imaginary of some institutions and Pelotas society itself regarding black men and women who act as. The main purpose of the work is to contribute to a new glance on racial prejudice in Pelotas, as well as demonstrating how these teachers are reacting to break this silence that persists in subjecting them to embarrassing situations. Theoretically, the inquiry is based especially in the concepts of exotopy and alterity, by Mikhail Bakhtin, relevant to think about the non-indifferent but necessary distancing of the researcher regarding the object and the perception and respect for others so necessary for the construction of a we , as well as for understanding how the discourse of subjects reflects their social position. In order to understand the identitary processes built for creating silencing of black people in our society, we use proposals of Stuart Hall and Zygmunt Bauman, who talk on the fragmentation and the conflict of identities, and Munanga, who re-discusses why black people is considered unable to build really mobilizing identities / Esta tese visa desvelar, com base nas vozes presentes no discurso dos docentes negros em Instituições de Ensino da cidade de Pelotas-RS, as estratégias a que recorre o discurso do silenciamento que persiste em defender a ideia de haver uma igualdade de condições entre as pessoas independentemente da cor da pele. As análises dessas percepções têm como base relatos de experiências vivenciadas por professores negros no âmbito institucional e social de Pelotas. Para tanto, enviamos eletronicamente um questionário a dezesseis professores negros de diversas redes de ensino (municipal, estadual, federal e particular) composto por seis perguntas abertas, a partir das quais tecemos algumas reflexões sobre as vozes desses atores quanto ao discurso do silenciamento que tenta, porém, sem êxito, invisibilizar o seu papel como sujeito negro, cidadão e professor no exercício do magistério.A pesquisa, através do discurso desses professores, visa trazer contribuições para uma análise mais crítica em relação a algumas posturas que, de forma humilhante e depreciativa, continuam povoando o imaginário de algumas instituições e da própria sociedade pelotense em relação aos negros e negras que aqui exercem seu papel de docentes. O propósito maior do trabalho é trazer contribuições para um novo olhar sobre o preconceito racial na cidade de Pelotas, bem como demonstrar como esses docentes estão reagindo para quebrar esse silêncio que persiste em submetê-los a situações embaraçosas. Teoricamente, a pesquisa se sustenta sobretudo nos conceitos de exotopia e alteridade de Mikhail Bakhtin, pertinentes para refletir sobre o distanciamento não indiferente, mas necessário, do pesquisador diante do objeto pesquisado e da percepção e do respeito pelo outro tão necessários para a construção de um nós e para o entendimento a respeito de como o discurso do sujeito reflete sua posição social. A fim de compreendermos os processos identitários construídos de modo a criar o silenciamento do negro em nossa sociedade, utilizamos propostas de Stuart Hall e Zygmunt Bauman, que nos falam sobre a fragmentação e o conflito das identidades, e Munanga, que rediscute o porquê de os negros serem considerados incapazes de construir identidades verdadeiramente mobilizadoras

Esta pesquisa propõe uma análise discursiva de sentidos de bilinguismo, educação bilíngue e currículo em escolas bilíngues português-inglês no sistema educacional brasileiro. Os percursos da análise se fizeram a partir de uma entrada, teoricamente orientada pela análise de discurso pecheutiana, num complexo de discursividades heterogêneas configuradas sobre o real da expansão dessas escolas, frequentemente justificado por uma demanda crescente pela aquisição da língua inglesa cada vez mais cedo. Tendo em vista esse complexo de discursividades, o corpus de pesquisa foi configurado a partir da construção de quatro arquivos: a) arquivo do discurso científico sobre bilinguismo, constituído de um levantamento das pesquisas e publicações acadêmicas sobre esse tema; b) arquivo do discurso político-educacional, constituído de documentos legislativos, normativos e curriculares; c) arquivo do discurso institucional, constituído de textos disponibilizados nos sites das escolas e na mídia jornalística/publicitária; d) arquivo do discurso profissional, constituído de entrevistas com professores e coordenadores do Ensino Fundamental de três escolas bilíngues na cidade de São Paulo. Na primeira parte da pesquisa, são analisadas a formação de conceitos, as condições de produção e a circulação de sentidos de bilinguismo e educação bilíngue nos três primeiros arquivos (científico, político-educacional e institucional). Na segunda parte da pesquisa, focaliza-se a análise discursiva de sentidos do currículo da escola bilíngue português-inglês nos dizeres do discurso profissional, considerando possibilidades de seu atravessamento pelas discursividades analisadas na primeira parte. Uma das questões iniciais que mobilizou a investigação foi assim formulada: como se constituem e se organizam os saberes sobre a(s) língua(s) nessas instituições, considerando que essa modalidade de ensino não é contemplada por uma regulamentação específica? A análise indicou que os sentidos dessa ausência funcionam diferentemente, num processo discursivo que hipotetizamos como uma tensão entre o silêncio e o dizível produzida pela (des)regulação do discurso político-educacional. Formulou-se a hipótese inicial de que os sentidos sobre o ensino de inglês na modalidade bilíngue são produzidos por um pré-construído, um já-dito, que funciona a partir de uma memória de deslegitimação do ensino da língua inglesa na educação básica brasileira. No decorrer da pesquisa, entretanto, essa hipótese foi apenas parcialmente confirmada, pois se constatou a incidência de outros sentidos nesse processo discursivo, em que ganhou destaque a representação da língua como mediação, configurando um imaginário de tensão entre o aprender em inglês e o aprender inglês. A partir da análise, concluímos que um olhar sobre o currículo como instrumento linguístico poderia constituir um caminho fértil de interpretação desses sentidos, uma tomada de posição que demandou deslocamentos teóricos na busca por possibilidades de entremeio. / This research proposes a discursive analysis of meanings of bilingualism, bilingual education and curriculum in Portuguese-English bilingual schools in the Brazilian educational system. Drawing on the materialist discourse analysis framework proposed by Michel Pêcheux in the 1970s, it examines a complex of heterogeneous discursivities shaping the real of the fast increasing number of those schools, which is often justified by a growing demand for the acquisition of the English language at an earlier age. In view of that complex of discursivities, research data comprises texts from four archives: a) scientific discourse on bilingualism, consisting of a bibliographic survey of academic research and publications on bilingualism; b) political-educational discourse, consisting of national/state language policies and curriculum guidelines; c) institutional discourse, consisting of texts available on bilingual schools websites and news/advertising media; d) professional discourse, consisting of interviews with teachers and coordinators of three bilingual schools in the city of São Paulo. The first part of the research analyzes the formation of concepts, the conditions of production and circulation of meanings of bilingualism and bilingual education in the first three archives (scientific, political-educational and institutional). The second part of the research focuses on a discursive analysis of meanings of Portuguese-English bilingual schools curricula in professional discourse, considering possibilities of its imbrications with the discourses analyzed in the first part. The main research question was formulated as follows: how is knowledge about language(s) constituted and organized in those school institutions, considering that Portuguese-English bilingual education is not regulated by law? The analysis indicates that the meanings of this lack of regulation function differently in a discursive process interpreted as a tension between the silenced and the sayable which is produced by the (de)regulation of political-educational discourse. The initial hypothesis predicted that meanings of English language teaching in bilingual education provision were produced by the preconstructed (the already said of other discourses) evoked by a social-historical memory of delegitimation of English language teaching in the Brazilian educational system. However, that hypothesis was only partially confirmed, as an incidence of other meanings was found in this discursive process, such as the representation of language as mediation, which has configured an imaginary of tension between learning in English and learning English We concluded that these meanings could be better understood if the curriculum were interpreted as a linguistic tool.

When conspecific individuals are crossed, the ensuing hybridization creates a spectrum of phenotypes in the resulting offspring. Many of hybrid traits will be additive, similar to the parental phenotypes. In some cases however, transgressive phenotypes are formed, outside the range of that of the parental phenotypes. Transgressive phenotypes can either be restricted to the F1 generation or be heritable throughout the hybrid lineage. While the mechanism behind heritable transgressive phenotyped is yet to be determined, transgressive gene expression is thought to be the root cause of their formation. Epigenetics modifications, heritable variation separate to the DNA code, can alter gene expression, persist through generations, and vary between individuals and over time. This makes them ideal candidates to be involved in the formation of transgressive phenotypes. RNA silencing is an epigenetic mechanism of gene regulation relying on 20Q24nt single stranded small RNAs (sRNAs). Small RNAs, due to their ability to set up persistent epigenetic marks at a locus, have the potential to create heritable transgressive gene expression. For example, when genetic variation from one parental genome presents novel targets to the sRNAs of the other parental genome, new epigenetic marks such as DNA methylation or secondary sRNAs can be created at target sites. In order to understand the potential of small RNAs to influence hybrid phenotype, I designed crossing experiments with Chlamydomonas reinhardtii, choosing this unicellular alga due to the genetic tools available and the haploid nature of its vegetative cells. The specific aim of the experiment was to identify transgressively expressed sRNA populations. Crossing two geographically distinct strains of C. reinhardtii, and sequencing both the genomes and sRNAomes of parents and recombinants, I was able catalogue both genetic and epigenetic variation in the parental strains providing unique insight into the inheritance of small RNAs in this alga. In this thesis, I first compare the genomes of the parental strains, identifying polymorphisms and assessing genetic variation in RNA silencing pathway components. I then describe the sRNA profiles of the parental strains, identifying differentially expressed sRNA loci. I then describe my approach to identifying transgressively expressed sRNA loci in the hybrids. While many sRNA loci in the recombinants exhibit additive sRNA expression, I found multiple transgressively expressed sRNA loci. Using the available bioinformatics tools, I identified potential miRNAs and phased secondary sRNAs within the list of transgressively expressed loci. Target analysis of one of the transgressively expressed miRNAs linked it with the transgressive expression of certain phased loci, suggesting a potential for sRNAs to be able to set up heritable epigenetic marks in recombinant C. reinhardtii cells.

Made available in DSpace on 2017-07-25T19:30:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Leticia Reis.pdf: 8581445 bytes, checksum: 82298b67980249e52bd02781fd0c08df (MD5) Previous issue date: 2014-02-05 / significant world production. The true fruits of the strawberry are dry and called achenes while the fleshy and edible portion actually it is the floral receptacle developed. This set of achene and receptacle features the non-climacteric fruit pattern ripening, characterized by not show a peak respiration and ethylene production during the ripening process and also for this fruits not being able to complete the ripening after harvesting. Due to the small size of the plant, rapid propagation and production of fruit, the strawberry became the model plant in studies of non- climacteric fruit ripening, particularly with regard to the ethylene role in this process. Fruit ripening the focused studies have revealed the existence of a family of protein receptors responsible for the plant ethylene perception. In strawberry, have been identified so far three ethylene receptors genes sequences, divided into two subfamilies (FaETR1 and FaERS1 - subfamily I and FaERS2 - subfamily II). Among these genes, based on the literature, we believe that FaETR1 gene, a member of the ethylene receptors subfamily I, can develop a greater role to the other receptors in the control of perception and ethylene signal transduction. To assess the involvement of FaETR1 ethylene receptor in the strawberry ripening and toward an understanding of the relationship between ethylene and nonclimacteric fruits ripening, we seek the silencing of this particular gene. Thus, the objective of this work was the construction of a binary plasmid structure in hairpin format (hpRNA) that induces the activation of RNA interference system (RNAi) on the translation of FaETR1 gene in ethylene receptor protein. Also, knowing the importance of an appropriate regeneration an plant transformed selection method, we seek also develop a proper in vitro regeneration protocol of Camino Real and Festival strawberries cultivar, as well as to assess the sensitivity of these plants to kanamycin (antibiotic) and glufosinate ammonium (herbicide) selective agents, whose genes are present in pCAMBIA 3301 and pCAMBIA2301 cloning vectors used in this study. / O morangueiro (Fragaria x ananassa Duch.) é uma cultura de elevado valor comercial e de expressiva produção mundial. Os frutos verdadeiros do morangueiro são secos e chamados de aquênios enquanto que a porção carnosa e comestível na verdade se trata do receptáculo floral desenvolvido. Este conjunto de aquênio e receptáculo apresenta padrão de maturação de frutos não-climatéricos, caracterizado por não apresentar um pico de respiração e produção de etileno durante o processo de maturação e também, por não serem capazes de completar a maturação após a colheita. Devido o pequeno tamanho da planta, rápida propagação e produção de frutos, o morangueiro se tornou planta modelo nos estudos sobre a maturação de frutos não-climatéricos, principalmente no que se refere ao papel do etileno neste processo.Estudos voltados à maturação de frutos revelaram a existência de uma família de receptores proteicos responsável pela percepção do etileno em plantas. Em morangueiro, foram identificadas até o momento três sequencias de genes de receptores de etileno, divididos em duas subfamílias (FaETR1 e FaERS1 – Subfamília I e FaERS2 – Subfamília II). Dentre estes genes, baseados na literatura, acreditamos que o gene FaETR1, membro da subfamília I dos receptores de etileno, possa desenvolver um papel superior aos demais no controle da percepção e transdução de sinal do etileno. No intuito de avaliar o envolvimento do receptor de etileno FaETR1 na maturação do morangueiro e visando o entendimento da relação entre etileno e maturação de frutos não-climatéricos, buscamos o silenciamento deste gene em específico. Para tanto, o objetivo deste trabalho foi a construção em plasmídeo binário de uma estrutura em formato de grampo (hpRNA) que induza a ativação do sistema de RNA de interferência (RNAi) sobre a tradução do gene FaETR1 em proteína receptora de etileno. Além disso, sabendo da importância de um apropriado método de regeneração e seleção de plantas transformadas, buscamos também desenvolver protocolo de regeneração in vitro de plantas de morangueiro das cultivares Camiño Real e Festival, bem como, avaliar a sensibilidade destas plantas aos agentes seletivos canamicina (antibiótico) e glufosinato de amônia (herbicida) cujos genes estão presentes nos vetores de clonagem pCAMBIA3301 e pCAMBIA2301 utilizados neste trabalho.

O programa federal de transferência de renda Bolsa-Família foi estudado nesta pesquisa com o objetivo de analisar a identidade local no processo de fortalecimento comunitário dos sujeitos que residem na periferia do município de São Paulo, utilizando como referência o bairro de São Miguel Paulista. Observou-se que na busca pelos direitos sociais básicos, esses sujeitos reagem a outras ações do Estado, as quais lhes negam e até mesmo silenciam a plenitude de experiências sociais e políticas no território. Neste viés, em um processo de gestão social, a renda confere condições básicas para a sobrevivência das famílias ao passo que pode sofisticar a tentativa de tutela e controle sobre as mesmas, levando-as ao silenciamento político e/ou a compactuar com a luta política dentro de limites institucionais nos quais as relações de poder encontram-se consolidadas. Para escutarmos a produção de sentidos a partir das interfaces entre o Bolsa Família e a identidade periférica em uma realidade dialética realizamos entrevistas com bolsistas. Por meio de seus discursos identificamos dispositivos cotidianos de resistência e de sociabilidade. No limite, a transferência de renda associada ao processo de pertencimento ao cotidiano da vizinhança podem impulsionar sentidos relacionados à emancipação individual e coletiva, favorecendo a construção de pontes à participação política / The federal program Bolsa Familia cash transfer was studied in this research in order to analyze the local identity in the community strengthening process of the individuals residing in the outskirts of São Paulo, using as reference the São Miguel Paulista neighborhood. It was observed that in the search for basic social rights, these guys react to other state actions, which they deny and even silence the fullness of social and political experiences in the territory. In this bias, in a social management process, income gives basic conditions for the survival of families while can sophisticate attempting to protection and control over them, leading them to the political silencing and / or condoning the political struggle within institutional boundaries in which power relations are consolidated. To listen to the production of meaning from the interfaces between the Bolsa Família and peripheral identity in a dialectic reality we conducted interviews with bolsistas. Through his speeches we identify everyday devices resistance and sociability. Ultimately, the transfer of income associated with the process of belonging to the neighborhood daily can boost meanings related to individual and collective emancipation, favoring the construction of bridges to political participation

O câncer de mama é o tumor mais incidente entre as mulheres no mundo. Assim como em outros tumores, a tumorigênese nas mamas é um processo complexo resultante da combinação de fatores genéticos e ambientais que dirigem a transformação das células normais em células malignas. O gene PAWR, conhecido como PAR-4 (Prostatic apoptosis response-4) foi primeiramente identificado em células de câncer de próstata de rato induzidas a apoptose e codifica uma proteína de 342 aminoácidos que é efetiva na indução de apoptose nas células tumorais e causa regressão dos tumores ativando Fas/FasL e inibindo a atividade de NF-B. O aumento de Par-4 é suficiente para causar apoptose seletiva em células tumorais, mas não em células normais ou imortalizadas. Recentemente, um estudo de nosso grupo demonstrou que a expressão reduzida de Par-4 está associada a um pior prognóstico em câncer de mama e que esta proteína pode ter um papel importante na morfogênese da glândula mamária. O estudo funcional do gene Par-4 em diferentes linhagens de mama é importante para o melhor entendimento do papel deste gene no processo tumorigênico da glândula mamária. Portanto, a proposta do presente estudo foi investigar os efeitos do aumento de expressão ou supressão de Par-4 na proliferação celular e sobrevivência das células normais e tumorais de mama. As células MCF10A e MCF-7 foram transfectadas com os vetores de expressão para Par-4 (pCMV6-PAR-4) ou com oligos siRNA para supressão transiente de Par-4. A caracterização dos clones foi feita por Real Time PCR e Western Blot. Os ensaios de proliferação foram feitos por MTT e os ensaios de apoptose por dupla marcação com Laranja de Acridina/ Hoechst 33342 e por citometria de fluxo. O aumento da expressão de Par-4 diminuiu a proliferação de ambas às células comparadas às células-controle (p<0,01). Por outro lado, a diminuição de expressão de Par-4 por siRNA levou ao aumento da proliferação das células tumorais MCF-7 (p<0,01). A quantificação das células em apoptose mostrou um aumento significativo de apoptose nas células MCF-7 com aumento de Par-4 em relação às células controle MCF-7 pcNEO tratadas com ambas as concentrações de docetaxel (5 nM 13,24% versus 3,89%; p=0.001; 100 nM 24,81% versus 6,07%; p=0,0001) por 24 horas. Embora preliminares, os resultados de citometria também mostraram que as células MCF-7 com aumento de Par-4 apresentam maior porcentagem de células em apoptose na ausência de tratamento e após tratamento com 100 nM de docetaxel por 24 horas. Embora novos estudos sejam necessários, nossos dados sugerem que o aumento de expressão de Par-4 sensibilizou as células MCF-7 ao quimioterápico docetaxel. Pela primeira vez, mostramos o efeito inibitório de Par-4 no crescimento e sobrevivência das células epiteliais mamárias / Breast cancer is the most common tumor among women in the world. As for other malignancies the tumorigenic process of the breast involves genetic alterations that drive the progressive transformation of normal cells into malignant cells with and aggressive phenotype. Alterations in cells that upregulate proliferation or downregulate apoptosis are one of essential mechanisms that dictate tumor growth. The PAWR gene, also known as PAR-4 (Prostatic apoptosis response-4), was first identified in prostate cancer cells undergoing apoptosis and encodes a 332 aminoacid protein that is effective in inducing cancer cell apoptosis and cause regression of tumors by activating Fas/FasL and inhibiting NF-B activity. Interestingly, Par-4 overexpression is sufficient to cause apoptosis in cancer cells, but not in normal or immortalized cells. Recently, we demonstrated that reduced expression of PAR-4 is associated with breast cancer poor prognosis and this protein may have a role in the process of the mammary gland morphogenesis. The functional study of Par-4 gene in different cell lines of breast is important to better understand its role in the tumorigenic process of the breast. Therefore, the purpose of the present study was to investigate the effects of overexpression and suppression of PAR-4 in cell proliferation and survival in mammary epithelial cells. MCF10A and MCF-7 cells were transfected with expression vectors for PAR-4 overexpression (pCMV6-PAR-4) or with small interfering RNAs duplexed oligonucleotides. Clone characterization was performed using real time PCR and western blot. Proliferation assays were carried out using MTT and apoptotic assays were performed by doublefluorescence staining technique (Acridine Orange/Hoechst 33342) or using flow cytometry. PAR-4 overexpression decreased the proliferation rates in both MCF10A and MCF-7 cells compared to the parental or control cells (p<0,01). On the other hand, PAR-4 knockdown leads to increased proliferation in MCF7 cells (p<0,01). We observed a significant increase in apoptosis of MCF-7 cells with increased expression of Par-4 compared to control cells (MCF-7 pcNEO) in both concentrations of docetaxel (5 nM 13,24% versus 3,89%, p = 0,001; 100 nM 24,81% versus 6,07%, p < 0,0001). Cytometry analysis, although preliminary, showed that MCF-7 pcPar-4 have a higher percentage of apoptotic cells in the absence of treatment and after treatment of 100 nM of docetaxel. Although more studies are needed, our data suggest that increased expression of Par-4 sensitizes breast cancer cells to treatment with docetaxel. This is the first report showing that PAR-4 has inhibitory effects on mammary epithelial cells proliferation and survival

<p>In multicellular organisms all cells in one individual have an identical genotype, and yet their bodies consist of many and very different tissues and thus many different cell types. Somehow there must be a difference in how genes are interpreted. So, there must be signals that tell the genes when and where to be active and inactive, respectively. In some instances a specific an expression pattern (active or inactive) is epigenetic; it is established and maintained throughout multiple rounds of cell divisions. In the developing <i>Drosophila</i> embryo, the proper expression pattern of e.g. the homeotic genes <i>Abd-B</i> and <i>Ubx</i> is to be kept active in the posterior part and silenced in the anterior. Properly silenced homeotic genes are crucial for the correct segmentation pattern of the fly and the Polycomb group (Pc-G) proteins are vital for maintaining this type of stable repression.</p><p>As part of this thesis, <i>Suppressor of zeste 12 (Su(z)12)</i> is characterized as a <i>Drosophila</i> Pc-G gene. Mutations in the gene cause widespread misexpression of several homeotic genes in embryos and larvae. Results show that the silencing of the homeotic genes <i>Abd-B</i> and <i>Ubx</i>, probably is mediated via physical binding of SU(Z)12 to Polycomb Response Elements in the BX-C. <i>Su(z)12</i> mutations are strong suppressors of position-effect-variegation and the SU(Z)12 protein binds weakly to the heterochromatic centromeric region. These results indicate that SU(Z)12 has a function in heterochromatin-mediated repression, which is an unusual feature for a Pc-G protein. The structure of the <i>Su(z)12</i> gene was determined and the deduced protein contains a C2-H2 zinc finger domain, several nuclear localization signals, and a region, the VEFS box, with high homology to mammalian and plant homologues. <i>Su(z)12 </i>was originally isolated in a screen for modifiers of the zeste-white interaction and I present results that suggests that this effect is mediated through an interaction between <i>Su(z)12 </i>and <i>zeste</i>. I also show that <i>Su(z)12</i> interact genetically with other Pc-G mutants and that the SU(Z)12 protein binds more than 100 euchromatic bands on polytene chromosomes. I also present results showing that SU(Z)12 is a subunit of two different E(Z)/ESC embryonic silencing complexes, one 1MDa and one 600 kDa complex, where the larger complex also contains PCL and RPD3. </p><p>In conclusion, results presented in this thesis show that the recently identified Pc-G gene, <i>Su(z)12</i>, is of vital importance for correct maintenance of silencing of the developmentally important homeotic genes.</p>

Crown gall disease is an agricultural problem caused by the soil-borne bacterium, Agrobacterium tumefaciens. A. tumefaciens oncogenes cause transformed plant cells to overproduce the hormones, auxin and cytokinin. High hormone levels cause unorganized plant cell growth resulting in a gall. Control of crown gall disease is difficult because after plant cell transformation has occurred, the bacterium is no longer required for the disease to progress. Apple trees engineered to express double-stranded RNA of two A. tumefaciens oncogenes, ipt and iaaM, silenced the expression of the wild-type oncogenes and prevented crown gall disease. Only the iaaM oncogene was targeted for posttranscriptional gene silencing (PTGS) as measured by biological assays and by quantitative reverse-transcription polymerase chain reaction (q-RTPCR) on transgenic tissue. However, if the translation initiation sequence of the iaaM construction was eliminated, gall formation was not prevented, indicating that translatable RNA initiates silencing whereas untranslatable RNA does not. Other data indicate that the Arabidopsis thaliana micro-RNA pathway gene is involved in A. tumefaciens-mediated tumorigenesis. A. thaliana plants with a mutation in HEN1, a gene required for micro-RNA maturation, demonstrated a tenfold reduction in tumorigenesis upon A. tumefaciens infection compared to wild-type. The same plant line showed no difference in T-DNA transfer and nuclear uptake. / Graduation date: 2006

Industrial hemp (Cannabis sativa) is a highly productive crop that is well suited to cultivation in Canada. To better understand the development of bast (phloem) fiber secondary walls and to facilitate reverse genetics screening for improved germplasm, I undertook two sets of microarray experiments. The first compared transcript expression in stem peels at three positions along the length of the stem. The second set of microarray experiments compared transcript expression in adjacent tissue layers along the radial axis of the stem. The transcripts that were enriched in fiber-producing tissues in both studies were consistent with a dynamic program of cell wall deposition. Detailed qRT-PCR analysis of specific lignification genes identified the best targets for reverse genetics. Finally, as a first step towards establishing a virally induced gene silencing (VIGS) system, I identified viruses that produced visual symptoms of infection, although qRT-PCR failed to confirm the infection / Plant Biology