Em ratos, a amígdala medial póstero-dorsal (AMePD) é uma região sexualmente dimórfica e está envolvida com o controle da reprodução. Os hormônios gonadais masculinos e femininos possuem um papel epigenético importante sobre a morfologia e a função neuro-glial na AMePD. Nesse trabalho dois grandes tópicos inéditos e pertinentes na literatura para o entendimento das bases celulares de funcionamento da AMePD foram estudados: (1) a atividade da NADPHdiaforase (NADPH-d) e o número de neurônios NADPH-d-positivos de ratos adultos, fêmeas ao longo do ciclo estral (diestro, proestro, estro e metaestro) ou após ovariectomia (OVX) seguida por terapia substitutiva consistindo em veículo/óleo (controle), somente estradiol (BE), estradiol e progesterona (BE+P) ou somente progesterona (P) e, (2) a modificação do volume somático e nuclear de neurônios da AMePD de ratas OVX adultas submetidas ao mesmo tratamento substitutivo, com o objetivo de revelar possíveis influências dos hormônios gonadais sobre esses parâmetros morfológicos. A histoquímica para a NADPH-d foi utilizada para estudar a densidade regional e neuronal da atividade da NADPH-d, seguida por uma análise semi-quantitativa utilizando-se a densitometria óptica. Todos os animais foram submetidos ao mesmo protocolo experimental para obtenção dos resultados. Com base nisso, machos apresentaram maior densidade óptica regional e neuronal quando comparados as fêmeas ao longo do ciclo estral, com exceção da fase de diestro (P < 0,01). Nenhuma diferença foi encontrada nesses dois mesmos parâmetros durante o ciclo ovariano (P > 0,05). Quanto ao número de neurônios NADPH-dpositivos, não foram encontradas diferenças estatisticamente significativas entre machos e fêmeas, estas ao longo do ciclo estral (P > 0,05). Como os hormônios gonadais são capazes de gerar respostas supra-fisiológicas distintas daquelas observadas durante o ciclo ovariano normal na AMePD, foram testados também os efeitos da OVX nesses parâmetros. Não houve diferença estatisticamente significativa na densidade óptica regional, na densidade óptica neuronal e no número de neurônios NADPH-d-positivos quando se comparam fêmeas OVX tratadas com óleo ou com as três diferentes terapias hormonais (P = 0,07, P = 0,18 e P = 0,95, respectivamente). Para medir os volumes somático e nuclear dos neurônios da AMePD, uma semana após a OVX e ao final do tratamento hormonal, os encéfalos foram cortados em secções semi-finas (1 m) e corados com azul de toluidina a 1% para a estimação estereológica, utilizando-se o método de Cavalieri associado à técnica de contagem de pontos. Tanto o volume somático quanto o neuronal apresentaram diferença estatisticamente significante quando comparados os dados entre as fêmeas OVX tratadas com óleo, BE, BE+P ou somente P (P < 0,05). Ou seja, ratas OVX tratadas com BE+P apresentaram maior volume somático e nuclear quando comparadas às fêmeas OVX tratadas com óleo (P < 0,01) ou somente com BE (P < 0,01). Além disso, fêmeas OVX tratadas somente com P apresentaram maior volume somático e nuclear quando comparadas às fêmeas OVX tratadas com óleo (P < 0,05). Esses resultados sugerem que a atividade da NADPH-d é diferente entre os sexos, mas em fêmeas não é afetada pelas mudanças nos níveis de hormônios gonadais em condições fisiológicas ou suprafisiológicas. Além disso, os volumes somáticos e neuronais podem ser modulados pelos hormônios gonadais administrados em fêmeas OVX, onde a P gerou maiores resultados. Esses achados revelam ações adicionais dos esteróides sexuais na AMePD e novas características na morfologia neuronal em ratos machos e fêmeas adultos, complementando e avançando a literatura atual com resultados que ampliam o número de ações dos hormônios gonadais nesta área telencefálica de ratos. / In rats, the posterodorsal medial amygdala (MePD) is a sexually dimorphic area and it is implicated in the control of reproduction. The male and female gonadal hormones have an important epigenetic role upon neuro-glial morphology and function in the rat MePD. In this work two great unpublished and relevant topics in the literature for the understanding of the cellular bases of functioning of the MePD were discovered: (1) the NADPH-diaphorase (NADPH-d) activity and the number of NADPH-d-positive neurons of adult males, females across the estrous cycle (diestrus, proestrus, estrus, and metaestrus) or following ovariectomy (OVX) and substitutive therapy consisting of vehicle/oil (control), estradiol benzoate alone (EB), estradiol benzoate and progesterone (EB+P), or progesterone alone (P), and, (2) the modification of the somatic and nuclear from MePD neurons of OVXed female rats submitted to the same hormonal therapy, aiming to reveal possible influence of sex steroids in these morphological parameters. The NADPH-d histochemical technique was used to study the regional and neuronal NADPH-d activity, followed by a semi-quantitative analysis using optical densitometry. All animals were submitted to the same experimental protocol. Males showed a higher regional and neuronal optical density when compared to females across the estrous cycle, with the exception of the diestrus phase (P < 0.01). No differences were found in these two parameters during the ovarian cycle (P > 0.05). As for the number of NADPH-d-positive neurons, there were no statistically significant differences found among males and cycling females (P > 0.05). Since the gonadal hormones are able to provide supra-physiologic answers different from those observed during the normal ovarian cycle in the MePD, the effects of the OVX were tested also in these parameters. No statistically significant difference was found in the regional optical density, in the neuronal optical density, or in the number of NADPH-d positive neurons when comparing the data from OVXed females treated with vehicle or the three different hormonal therapies (P = 0.07, P = 0.18, and P = 0.95, respectively). To measure the somatic and nuclear volumes from MePD neurons, one-week following ovariectomy and at the end of hormonal treatments, brains were cut to semithin sections (1 mm) and stained with 1% toluidine blue for stereological estimations, carried out using the Cavalieri method and the technique of point counting. Both the somatic and neuronal volume showed a statistically significant difference when comparing the data among OVXed females treated with vehicle (V), EB, EB+P or P. This is, OVX with EB+P treated females had higher mean somatic and nuclear volume when compared to V (P < 0.01) or with EB (P < 0.01). Also, OVXed females treated with P showed larger mean somatic and nuclear volume when compared to V (P < 0.05). Results suggest that NADPH-d activity in the rat MePD is different between sexes but in females is not affected by changing levels of circulating gonadal hormones in physiological or supraphysiological conditions. Moreover, somatic and nuclear volume can be modulated by substitutive ovarian hormones administered to OVXed females, for which P can lead to higher results. These findings reveal additional actions of the sexual steroids in the MePD and new features for the neuronal morphology in adult male and female rats, complementing and advancing the current literature with results that enlarge the number of actions of gonadal hormones in this telencephalic area of rats.

A função reprodutiva constitui-se em um dos diversos estados no qual o estresse pode atuar exercendo efeitos deletérios que colocam em risco a integridade individual e a manutenção da espécie. Dentre os diversos peptídeos que atuam controlando os processos reprodutivos, a angiotensina II (Ang II) possui um papel destacado pela sua atuação no controle de hormônios hipofisários, além de uma importante participação na regulação das respostas ao estresse. Considerando a importância dos mecanismos que controlam as funções reprodutivas e as evidências da influência do estresse sobre esses processos, esta tese teve como objetivo estudar os possíveis efeitos do estresse agudo sobre diferentes aspectos da função reprodutiva em fêmeas e a participação do sistema angiotensinérgico nesses mecanismos. Para isso, foi avaliada a resposta ao estresse de diversos hormônios com funções reprodutivas como a prolactina, o hormônio luteinizante e a progesterona em diferentes fases do processo reprodutivo. A participação do sistema angiotensinérgico foi avaliada através da utilização de antagonistas da Ang II e da quantificação da densidade de receptores de Ang II em núcleos do sistema nervoso central como o núcleo arqueado, o locus coeruleus, o núcleo pré-óptico mediano e o órgão subfornicial em modelos experimentais com diferentes concentrações de estradiol e progesterona. O presente estudo demonstrou que o estresse agudo provoca uma redução na concentração plasmática de prolactina em ratas ovariectomizadas tratadas com estradiol e progesterona e lactantes, sendo esta resposta mediada pelos receptores AT1 de Ang II no núcleo arqueado. Os esteróides gonadais aumentam a densidade destes receptores de Ang II no núcleo arqueado e a progesterona parece ser a principal moduladora desta regulação. Além disso, esse aumento também ocorre no locus coeruleus, núcleo pré-óptico mediano e órgão subfornicial, já que o tratamento de ratas ovariectomizadas com estradiol e progesterona provoca um aumento na densidade de receptores de Ang II nestes núcleos. Já o estresse agudo na manhã do proestro provocou uma redução nas concentrações plasmáticas de hormônio luteinizante, progesterona e prolactina na tarde do proestro, juntamente com uma redução na ovulação, sendo estes efeitos mediados pelos receptores AT1 de Ang II. A aplicação de um estresse agudo por contenção durante 1 hora na tarde do proestro provocou uma redução no comportamento sexual, porém esses efeitos não são mediados pelo sistema angiotensinérgico. Em conjunto, esses resultados permitem concluir que o estresse agudo provoca alterações em diferentes aspectos do processo reprodutivo em fêmeas, incluindo efeitos deletérios sobre a lactação, o comportamento sexual, a geração dos picos hormonais pré-ovulatórios e a ovulação. O sistema angiotensinérgico tem uma participação efetiva em diversos mecanismos envolvidos na resposta ao estresse e parece ser um importante regulador dessas respostas.

Submitted by BARBARA DE OLIVEIRA PURETZ null (bah_puretz@hotmail.com) on 2017-10-03T18:40:48Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Barbara_Puretz.pdf: 2806856 bytes, checksum: a2fab104ff83981c2b1014575c88480e (MD5) / Approved for entry into archive by Monique Sasaki (sayumi_sasaki@hotmail.com) on 2017-10-03T19:42:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 puretz_bo_me_bot.pdf: 2806856 bytes, checksum: a2fab104ff83981c2b1014575c88480e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-03T19:42:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 puretz_bo_me_bot.pdf: 2806856 bytes, checksum: a2fab104ff83981c2b1014575c88480e (MD5) Previous issue date: 2017-07-07 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Árvores do gênero Eucalyptus apresentam alto potencial econômico no setor florestal brasileiro, estão adaptadas às condições edafoclimáticas no Brasil proporcionando crescimento rápido, madeira de qualidade e usos múltiplos. No entanto, esta produção é comprometida por alguns fatores, destacando-se os insetos-praga. Uma das principais pragas exóticas do eucalipto no Brasil é Leptocybe invasa (Hymenoptera: Eulophidae). A fêmea realiza sua oviposição nas nervuras centrais das folhas, pecíolos e ramos, formando galhas, causando redução no crescimento, desfolha e morte da planta. Uma das principais medidas de controle deste inseto é o controle biológico, com o parasitoide exótico Selitrichodes neseri (Hymenoptera: Eulophidae). Neste trabalho foram avaliados a longevidade de adultos de S. neseri em diferentes concentrações de mel e diferentes temperaturas em laboratório, bem como foi realizado a descrição de ovários e sistema reprodutor masculino, e a recuperação de S. neseri em campo. Estes estudos básicos são importantes para analisar o potencial de S. neseri para controle de L. invasa em laboratório e em campo. Para a avaliação da longevidade de S. neseri, fêmeas e machos foram individualizados em tubos de vidro, esses insetos foram coletados recém emergidos, sexados, identificados e colocados nos tubos. Nesse experimento foram oferecidas as seguintes concentrações de mel: mel puro (100%), soluções de mel a 50% e 10% e testemunha (sem alimento). As temperaturas testadas foram 18°C, 22°C, 25°C, 30°C e 34°C. Todos os tratamentos foram conduzidos em câmaras climatizadas com UR de 60 ± 10% e fotoperíodo de 12 h, e avaliados do primeiro dia de emergência até a morte de cada parasitoide. Foi utilizado o teste de Tukey-Kramer ajustado por Sidak. Para descrição dos ovários e sistema reprodutor masculino foram analisadas três amostras, fêmeas acasaladas e virgens de S. neseri e machos de S. neseri, essas amostras foram emblocadas em historesina e submetidas a cortes histológicos de 2 μm. Esses cortes foram observados em miscroscópio de luz e fotografados. Para avaliação da recuperação de S. neseri em campo, os insetos foram liberados em oito estados brasileiros, em empresas florestais, em plantios de eucalipto infestados por L. invasa. Após, aproximadamente, 40 dias as empresas florestais enviaram ramos dos locais de liberação dos parasitoides para avaliação em laboartório, onde foi realizada a identificação e contagem dos insetos que emergiram dos ramos. Na longevidade de adultos de S. neseri a maior sobrevivência foi na temperatura de 22 °C, sendo a temperatura de 34 °C limitante para a longevidade desse inseto. Selitrichodes neseri necessita de uma fonte de carboidrato para aumento na sua longevidade. S. neseri é uma espécie sinovigênica e possui um ovário meroístico politrófico e os testículos dos machos se degeneram na fase adulta. S. neseri foi recuperado em três desses estados brasileiros. Os estudos de longevidade de S. neseri em diferentes condições são importantes para a liberação e estabelecimento desse parasitoide em campo. / Trees of the genus Eucalyptus are economically important to the Brazilian forestry, they have a good adaptation to the edaphoclimatic conditions in Brazil, providing fast growth, quality wood and multiple uses. However, this production is compromised by some factors, especially insect pests. One of the main exotic pest of eucalyptus in Brazil is Leptocybe invasa (Hymenoptera: Eulophidae). The female postures the eggs in the central ridge of the leaves, petioles and branches forming galls, causing growth reduction, defoliation and even plant death. One of the main control measures of this pest is the biological control, with the exotic parasitoid Selitrichodes neseri (Hymenoptera: Eulophidae). In this work the longevity of S. neseri adults in different concentrations of honey and different temperatures in the laboratory, description of ovaries and male reproductive system, and the recovery of S. neseri in the field were evaluated. These basic studies are important to analyze the potential of S. neseri for control of L. invasa in the laboratory and in the field. For the evaluation of the longevity of S. neseri, females and males were individualized in glass tubes, these insects were collected freshly emerged, sexed and identified to this experiment the following concentrations were used: pure honey (100%), 50% honey and 10% honey and control (without food). The temperatures tested were 18, 22, 25, 30 and 34 °C. All treatments were carried out in conditioned chambers with RH 60 ± 10% and of photoperiod 12 h, and evaluated from the first day of emergence until the death of each parasitoid. The Tukey-Kramer test adjusted by Sidak was used. For the description of the ovaries and the male reproductive system, three samples were analyzed, females of S. neseri mates, females of S. neseri virgins and males of S. neseri, these samples were placed in historesin and submitted to 2 μm histological cuts, these cuts were observed in light microscope. To evaluate the recovery of S. neseri in the field, the insects were released in eight Brazilian states, in eucaliptus plantations infested with L. invasa. After approximately forty days the branches samples were sent of the parasitoid release sites for evaluation in the laboratory, where the insects that emerged from the branches were identified and counted. The longevity of S. neseri populations was better was at 22 ° C, the temperature of 34 ° C was limiting for the longevity of this insect. Selitrichodes neseri needs a source of carbohydrate to a increase its longevity. S. neseri is a sinovigenic species and has a meroistic polytrophic ovary and the testicle of males degenerate into adul life. S. neseri were their field establishment in three of these states. The longevity studies of S. neseri in different conditions are important for the release and establishment of this parasitoid in the field.

A função reprodutiva constitui-se em um dos diversos estados no qual o estresse pode atuar exercendo efeitos deletérios que colocam em risco a integridade individual e a manutenção da espécie. Dentre os diversos peptídeos que atuam controlando os processos reprodutivos, a angiotensina II (Ang II) possui um papel destacado pela sua atuação no controle de hormônios hipofisários, além de uma importante participação na regulação das respostas ao estresse. Considerando a importância dos mecanismos que controlam as funções reprodutivas e as evidências da influência do estresse sobre esses processos, esta tese teve como objetivo estudar os possíveis efeitos do estresse agudo sobre diferentes aspectos da função reprodutiva em fêmeas e a participação do sistema angiotensinérgico nesses mecanismos. Para isso, foi avaliada a resposta ao estresse de diversos hormônios com funções reprodutivas como a prolactina, o hormônio luteinizante e a progesterona em diferentes fases do processo reprodutivo. A participação do sistema angiotensinérgico foi avaliada através da utilização de antagonistas da Ang II e da quantificação da densidade de receptores de Ang II em núcleos do sistema nervoso central como o núcleo arqueado, o locus coeruleus, o núcleo pré-óptico mediano e o órgão subfornicial em modelos experimentais com diferentes concentrações de estradiol e progesterona. O presente estudo demonstrou que o estresse agudo provoca uma redução na concentração plasmática de prolactina em ratas ovariectomizadas tratadas com estradiol e progesterona e lactantes, sendo esta resposta mediada pelos receptores AT1 de Ang II no núcleo arqueado. Os esteróides gonadais aumentam a densidade destes receptores de Ang II no núcleo arqueado e a progesterona parece ser a principal moduladora desta regulação. Além disso, esse aumento também ocorre no locus coeruleus, núcleo pré-óptico mediano e órgão subfornicial, já que o tratamento de ratas ovariectomizadas com estradiol e progesterona provoca um aumento na densidade de receptores de Ang II nestes núcleos. Já o estresse agudo na manhã do proestro provocou uma redução nas concentrações plasmáticas de hormônio luteinizante, progesterona e prolactina na tarde do proestro, juntamente com uma redução na ovulação, sendo estes efeitos mediados pelos receptores AT1 de Ang II. A aplicação de um estresse agudo por contenção durante 1 hora na tarde do proestro provocou uma redução no comportamento sexual, porém esses efeitos não são mediados pelo sistema angiotensinérgico. Em conjunto, esses resultados permitem concluir que o estresse agudo provoca alterações em diferentes aspectos do processo reprodutivo em fêmeas, incluindo efeitos deletérios sobre a lactação, o comportamento sexual, a geração dos picos hormonais pré-ovulatórios e a ovulação. O sistema angiotensinérgico tem uma participação efetiva em diversos mecanismos envolvidos na resposta ao estresse e parece ser um importante regulador dessas respostas.

Em ratos, a amígdala medial póstero-dorsal (AMePD) é uma região sexualmente dimórfica e está envolvida com o controle da reprodução. Os hormônios gonadais masculinos e femininos possuem um papel epigenético importante sobre a morfologia e a função neuro-glial na AMePD. Nesse trabalho dois grandes tópicos inéditos e pertinentes na literatura para o entendimento das bases celulares de funcionamento da AMePD foram estudados: (1) a atividade da NADPHdiaforase (NADPH-d) e o número de neurônios NADPH-d-positivos de ratos adultos, fêmeas ao longo do ciclo estral (diestro, proestro, estro e metaestro) ou após ovariectomia (OVX) seguida por terapia substitutiva consistindo em veículo/óleo (controle), somente estradiol (BE), estradiol e progesterona (BE+P) ou somente progesterona (P) e, (2) a modificação do volume somático e nuclear de neurônios da AMePD de ratas OVX adultas submetidas ao mesmo tratamento substitutivo, com o objetivo de revelar possíveis influências dos hormônios gonadais sobre esses parâmetros morfológicos. A histoquímica para a NADPH-d foi utilizada para estudar a densidade regional e neuronal da atividade da NADPH-d, seguida por uma análise semi-quantitativa utilizando-se a densitometria óptica. Todos os animais foram submetidos ao mesmo protocolo experimental para obtenção dos resultados. Com base nisso, machos apresentaram maior densidade óptica regional e neuronal quando comparados as fêmeas ao longo do ciclo estral, com exceção da fase de diestro (P < 0,01). Nenhuma diferença foi encontrada nesses dois mesmos parâmetros durante o ciclo ovariano (P > 0,05). Quanto ao número de neurônios NADPH-dpositivos, não foram encontradas diferenças estatisticamente significativas entre machos e fêmeas, estas ao longo do ciclo estral (P > 0,05). Como os hormônios gonadais são capazes de gerar respostas supra-fisiológicas distintas daquelas observadas durante o ciclo ovariano normal na AMePD, foram testados também os efeitos da OVX nesses parâmetros. Não houve diferença estatisticamente significativa na densidade óptica regional, na densidade óptica neuronal e no número de neurônios NADPH-d-positivos quando se comparam fêmeas OVX tratadas com óleo ou com as três diferentes terapias hormonais (P = 0,07, P = 0,18 e P = 0,95, respectivamente). Para medir os volumes somático e nuclear dos neurônios da AMePD, uma semana após a OVX e ao final do tratamento hormonal, os encéfalos foram cortados em secções semi-finas (1 m) e corados com azul de toluidina a 1% para a estimação estereológica, utilizando-se o método de Cavalieri associado à técnica de contagem de pontos. Tanto o volume somático quanto o neuronal apresentaram diferença estatisticamente significante quando comparados os dados entre as fêmeas OVX tratadas com óleo, BE, BE+P ou somente P (P < 0,05). Ou seja, ratas OVX tratadas com BE+P apresentaram maior volume somático e nuclear quando comparadas às fêmeas OVX tratadas com óleo (P < 0,01) ou somente com BE (P < 0,01). Além disso, fêmeas OVX tratadas somente com P apresentaram maior volume somático e nuclear quando comparadas às fêmeas OVX tratadas com óleo (P < 0,05). Esses resultados sugerem que a atividade da NADPH-d é diferente entre os sexos, mas em fêmeas não é afetada pelas mudanças nos níveis de hormônios gonadais em condições fisiológicas ou suprafisiológicas. Além disso, os volumes somáticos e neuronais podem ser modulados pelos hormônios gonadais administrados em fêmeas OVX, onde a P gerou maiores resultados. Esses achados revelam ações adicionais dos esteróides sexuais na AMePD e novas características na morfologia neuronal em ratos machos e fêmeas adultos, complementando e avançando a literatura atual com resultados que ampliam o número de ações dos hormônios gonadais nesta área telencefálica de ratos. / In rats, the posterodorsal medial amygdala (MePD) is a sexually dimorphic area and it is implicated in the control of reproduction. The male and female gonadal hormones have an important epigenetic role upon neuro-glial morphology and function in the rat MePD. In this work two great unpublished and relevant topics in the literature for the understanding of the cellular bases of functioning of the MePD were discovered: (1) the NADPH-diaphorase (NADPH-d) activity and the number of NADPH-d-positive neurons of adult males, females across the estrous cycle (diestrus, proestrus, estrus, and metaestrus) or following ovariectomy (OVX) and substitutive therapy consisting of vehicle/oil (control), estradiol benzoate alone (EB), estradiol benzoate and progesterone (EB+P), or progesterone alone (P), and, (2) the modification of the somatic and nuclear from MePD neurons of OVXed female rats submitted to the same hormonal therapy, aiming to reveal possible influence of sex steroids in these morphological parameters. The NADPH-d histochemical technique was used to study the regional and neuronal NADPH-d activity, followed by a semi-quantitative analysis using optical densitometry. All animals were submitted to the same experimental protocol. Males showed a higher regional and neuronal optical density when compared to females across the estrous cycle, with the exception of the diestrus phase (P < 0.01). No differences were found in these two parameters during the ovarian cycle (P > 0.05). As for the number of NADPH-d-positive neurons, there were no statistically significant differences found among males and cycling females (P > 0.05). Since the gonadal hormones are able to provide supra-physiologic answers different from those observed during the normal ovarian cycle in the MePD, the effects of the OVX were tested also in these parameters. No statistically significant difference was found in the regional optical density, in the neuronal optical density, or in the number of NADPH-d positive neurons when comparing the data from OVXed females treated with vehicle or the three different hormonal therapies (P = 0.07, P = 0.18, and P = 0.95, respectively). To measure the somatic and nuclear volumes from MePD neurons, one-week following ovariectomy and at the end of hormonal treatments, brains were cut to semithin sections (1 mm) and stained with 1% toluidine blue for stereological estimations, carried out using the Cavalieri method and the technique of point counting. Both the somatic and neuronal volume showed a statistically significant difference when comparing the data among OVXed females treated with vehicle (V), EB, EB+P or P. This is, OVX with EB+P treated females had higher mean somatic and nuclear volume when compared to V (P < 0.01) or with EB (P < 0.01). Also, OVXed females treated with P showed larger mean somatic and nuclear volume when compared to V (P < 0.05). Results suggest that NADPH-d activity in the rat MePD is different between sexes but in females is not affected by changing levels of circulating gonadal hormones in physiological or supraphysiological conditions. Moreover, somatic and nuclear volume can be modulated by substitutive ovarian hormones administered to OVXed females, for which P can lead to higher results. These findings reveal additional actions of the sexual steroids in the MePD and new features for the neuronal morphology in adult male and female rats, complementing and advancing the current literature with results that enlarge the number of actions of gonadal hormones in this telencephalic area of rats.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-07-20T20:18:23Z No. of bitstreams: 1 julianarasomarquesbecho.pdf: 1211488 bytes, checksum: 4196fd1ff0cfee03d2d19782ed5e338c (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-07-22T15:26:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 julianarasomarquesbecho.pdf: 1211488 bytes, checksum: 4196fd1ff0cfee03d2d19782ed5e338c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-22T15:26:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 julianarasomarquesbecho.pdf: 1211488 bytes, checksum: 4196fd1ff0cfee03d2d19782ed5e338c (MD5) Previous issue date: 2011-03-25 / Introdução: A rutina é um flavonóide glicosilado pertencente à subclasse dos flavonols, sendo extensamente encontrada na natureza em frutas, vegetais e bebidas como o vinho. Apresenta grande importância terapêutica por melhorar a resistência e permeabilidade dos capilares, atividade antioxidante, antiinflamatória, antimitótica dentre outras. Hidrolizada como quercetina, promove a inibição da motilidade dos espermatozóides, alterações na próstata, nos níveis de testosterona e de dihidrotestosterona, fatores que interferem com a fertilidade. Entretanto não foram observados estudos para verificar seu efeito sobre o sistema reprodutor de ratos. Hipótese: A rutina possui atividade tóxica sobre o sistema reprodutor de ratos. Objetivo: Avaliar a toxicidade da rutina sobre testículos, próstata, vesícula seminal, epidídimo e na concentração dos espermatozóides epididimários, assim como no fígado, rins e baço. Métodos: Ratos Wistar adultos provenientes da Colônia do Centro de Biologia da Reprodução da Universidade Federal de Juiz de Fora, foram distribuídos, aleatoriamente, em quatro grupos: Controle que recebeu por via intragástrica 1ml de água destilada; Tratado I, II e III onde os animais receberam, pela mesma via 5, 10 e 20 mg/Kg/dia rutina, diluída em água, respectivamente, durante sete dias consecutivos. Após eutanásia realizada 10, 42 e 60 dias do início do experimento foram retirados: testículos, próstata, vesícula seminal, epidídimo, fígado baço e rins. Obteve-se secreção epididimária para contagem de espermatozóides. No sangue foram feitas dosagens bioquímicas (ALT e creatinina) e hematológicas (hematimetria,hematócrito, hemoglobina, leucometria, CHGM, HGM e VGM). Os epidídimos foram processados histologicamente e a altura do epitélio foi medida através de cortes dos epidídimos. Em cada corte foram selecionados 10 túbulos circulares ao longo do epidídimo nos quais se obtiveram oito medidas ao longo de sua circunferência. A média dos valores foi considerada representativa da altura do epitélio do túbulo. Os dados coletados foram processados por análise de variância – uma via e teste post hoc de Dunnet T3 (α=0.05), e teste de KruskalWallis (α=0.05). Para análise da altura do epitélio do epidídimo, foi ulitizado ANOVA – uma via, seguido de teste post hoc de Dunnet (α=0.05). Resultados: Animais do grupo T3 tiveram menor peso e menor consumo de ração em relação aos controles (p<0.05). O Grupo T1 eutanasiados três dias após o término do tratamento apresentaram hepatomegalia e redução de HGM, que não ocorreu em outras doses e não se manifestou aos 42 e 60 dias. Todos os grupos apresentaram redução do peso do epidídimo (p<0.05) após 10 dias do início do experimento, porém essa alteração não persistiu aos 45 e 60 dias. Outras variáveis não apresentaram diferença significativa. Conclusão: A rutina não causou efeitos tóxicos gerais persistentes nos exames realizados, mas levou à toxicidade no o epidídimo, reduzindo o seu peso entretanto, o mecanismo de tal efeito não foi identificado nesse trabalho. / Introduction: Rutin is a glycosylated flavonoid belonging to the subclass of flavonols and widely found in nature in fruits, vegetables, and beverages such as wine. It has great therapeutic importance since it improves the resistance and permeability of capillaries, as well as the antioxidant, anti-inflammatory and antimitotic activities, among others. Hydrolyzed as quercetin, it promotes the inhibition of spermatozoa motility, changes in the prostate and in the levels of testosterone and dihydrotestosterone, factors that interfere with fertility. However, no studies were found regarding its effects on the reproductive system of rats. Hypothesis: Rutin has toxic activity on the reproductive system of rats. Objective: Evaluate the toxicity of rutin on testicles, prostate, seminal vesicles, epididymis, and epididymal spermatozoa concentration, as well as liver, kidneys, and spleen. Methods: Adult rats, from the vivarium of the Center for Reproductive Biology of the Federal University of Juiz de Fora, were distributed randomly into four groups: Control, which received intragastrically 1ml of distilled water; Treated I, II and III which received 5, 10 and 20 mg/kg/day of rutin, intragastrically, diluted in water, for seven consecutive days. Once euthanasia was performed, after 10, 42 and 60 days of the beginning of the experiment; testicles, prostate, seminal vesicles, epididymis, liver, spleen, and kidneys were removed. Epididymal secretion was obtained for spermatozoa count. Biochemical (ALT and creatinine) and hematological (hematimetry, hematocrit, hemoglobin, leukocyte counts, MGHC, MGH, and MGV) dosages were performed. The epididymides were processed histologically, and the epithelial height was measured by cutting the epididymis. In each cut, 10 circular tubules along the epididymis were selected and eight measurements along its circumference were obtained. The mean value was considered representative of the epithelial height of the tubule. The collected data were processed by variance analysis - one way and a post-hoc Dunnet T3 test (α = 0.05), and Kruskal-Wallis test with significance level α = 0.05. To analyse the epididymal epithelium, we used one way - ANOVA followed by Dunnet post hoc test (α = 0.05). Results: Animals of the TIII group had lower weight and lower feed intake compared to the control (p <0.05). The animals of the TI group, euthanized three days after the end of treatment, showed hepatomegaly and reduction of MGH, which did not occur in other doses and did not manifest at 42 and 60 days. All groups showed a reduction in the epididymis weight (p <0.05) after 10 days into the experiment, but this change did not endure at 45 and 60 days. Other variables showed no significant difference. Conclusion: Rutin did not cause persistent general toxic effects; however, it manifested toxicity to the epididymis, reducing its weight. Nevertheless, the mechanism of this effect was not identified in this study.

O Lobo-Marinho-do-Sul (Arctocephalus australis), carnívoro, caniforme, membro da superfamília dos Focóides, família Otaridae, é o mais comum mamífero marinho pertencente à fauna brasileira. É freqüentemente avistado, nos meses de outono e inverno na costa do Brasil, desde o Rio de Janeiro até o Rio Grande do Sul. Ainda é discutido se algum dia este animal já possuiu colônias reprodutivas neste país. É histórica a grande pressão antrópica que esta espécie recebeu, sendo explorado pelas populações litorâneas, para aproveitamento de sua pele, óleo e carne desde a antiguidade. No Uruguai, foram por muitos séculos abatidos em números que variavam em torno de 10 mil animais por ano, com o intuito de aproveitamento de sua pele para a confecção de casacos e testículos, para confecção de elixires no Oriente. Porém, deixou de ser explorado comercialmente naquele país na década de 80 e desde então seu número vem aumentando, e por isso especula-se sobre o surgimento de novos sítios reprodutivos em ilhas pedregosas, típicas de sua preferência. É possível até que estuários como o de Cananéia no litoral sul do Estado de São Paulo - BR, possam receber esta espécie nos meses de verão, o que, de acordo com a sazonalidade de sua reprodução, ocorre nesta época. Esse novo &quot;pólo reprodutivo&quot; pode representar um desbravamento de novas áreas (ou mesmo retorno a antigas áreas) pela espécie. É ainda muito escassa a literatura sobre esta espécie e poucos pesquisadores brasileiros a conhecem. Este trabalho buscou através da coleta de indivíduos (cinco jovens e um adulto) em óbito recente, por causas naturais, contribuir com conhecimentos anatômicos, histológicos, ultraestruturais e imuno-histoquímicos do sistema reprodutor masculino do Arctocephalus australis de animais jovens e adultos. Os resultados demonstraram muitas vezes a singularidade da espécie estudada: expressiva queratinização da camada córnea do epitélio escrotal e forte coloração negra nesta região; diferença estrutural existente entre as túnicas albugínea do testículo e do pênis: na primeira observaram-se fibras elásticas bem distribuídas e ausência destas fibras na segunda; ausência de ampolas nos ductos deferentes; uretra pélvica pequena; bulbo do pênis ventral aos pilares penianos e posicionamento singular do seu osso peniano; glande do pênis petaliforme. Encontramos um grande grau de adaptação do sistema reprodutor do macho ao da fêmea, nas duas idades estudadas, demonstrando que a evolução foi direcionada para o ciclo reprodutivo do tipo monoéstrico-estacional, de modo a otimizar a cópula e o volume do ejaculado, garantindo a deposição do sêmem o mais próximo possível do óstio uterino externo da fêmea, e conseqüentemente uma maior taxa de concepção. / The Southern-Fur-Seal (Arctocephalus australis) Carnivora, Caniform, member of the Superfamily Focoidae, Family Otaridae, is the most common marine mammal in brazilian sees, frequently seen in the months of autumn and winter in the coast from Rio de Janeiro until Rio Grande do Sul. There are controversies if some day A. australis already possessed reproductive colonies in this country. The great antropic pressure over the species is historical, being explored by cost populations because of its skin, oil, and meat. In Uruguay, it was slaughtered for many centuries in numbers that reached 10 000 animals per year: the skin was used for the confection of coats and testis, for elixir in the East. However, since the beginning of the decade of 80, commercial exploitation stopped and its number started increasing. Therefore one speculates on the sprouting of new reproductive places in stony islands, typical of its preference, and it is possible that estuaries like Cananéia, in the south coast of the State of São Paulo - BR, started to receiving this species in the summer months, what is in accordance with the reproductive season, which occurs at this time of the year. It can represent an opening of new areas (or even a return the old areas) for the species. Literature is still very scarce on this species and few brazilian researchers know about it. For developing this work, six recent dead for natural causes individuals (five young and one adult) were collected and the reproductive tract was submitted to anatomical, histological, ultrastructural and immunohistochemistry approaches aiming to improve the knowledge about the male reproductive system of the Arctocephalus australis of two ages. Results pointed towards peculiarities of the studied species: expressive keratinization of scrotal epithelium; structural differences between the tunica albuginea in the testis and penis: only in the testis elastic fibers could be observed; no ductus deferens ampulae, small pelvic urethra; glans penis in flower shape. We found a great degree of adaptation of the reproductive system of the male to the one of the female, in the two ages studied, demonstrating that the evolutive orientation was in direction of sazonal-monoestric reproductive cycle, in order to optimize copulation and the volume of the semen, guaranteeing the deposition of the semen as next as possible to the external female uterine ostium and consequently a bigger tax of conception.

Orientador: Eunice Oba / Resumo: As substâncias desreguladores endócrinas de diversas origens e propriedades químicas acomentem uma diversidade de mamíferos, animais silvestres e seres humanos, que podem interagir com o sistema reprodutivo feminino e prejudicar a homeostase hormonal. Dentro dessa classificação, os parabenos podem ser utilizados como conservantes em diversos produtos comerciais. Seus efeitos se tornam cada vez mais complexos em relação à idade, história reprodutiva, ambiente endócrino da espécime no momento da exposição, como também não é sabido todos os reais mecanismos desses compostos quando associados. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos dos parabenos em ratas Wistar durante um período de 90 dias consecutivos de exposição. Assim, as ratas foram distribuídas em quatro grupos experimentais: controle, que recebeu somente óleo de milho como veículo, e tratados com propil e buti-parabeno nas doses de 10 mg/kg, 100 mg/kg, ou 200 mg/kg e expostas via subcutânea. Foi utilizada a técnica de citologia vaginal para investigar a ciclicidade das fêmeas, bem como a caracterização das fases do ciclo estral pelo método Shorr. Além desses parâmetros, foram analisados aspectos morfológicos de ovários e útero, quantificação das estruturas ovarianas e avaliação ultraestutural de folículos pré-ovulatórios. Foram avaliados a concentração plasmática de estrógeno, peso corporal bem como o peso dos órgãos reprodutivos. Os resultados revelaram que o método Shorr, foi eficaz para identificar... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The endocrine disruption substances of many origins and chemistry properties affect a diversity of mammals, wild animals and human beings. These substances can interact with the female reproductive system and damage the hormonal homeostasis. In this classification, the paraben could be used as preservatives in different commercial products. Its effects get even worst and complex with the age, reproductive history, and endocrine environment of the specie in the moment of exposure of the drug. In complement, it is not known the actual mechanisms of those compounds when they are associated. Thus, the goal of this experiment was evaluate the effects of parabens in females Wistar during 90 consecutive days of exposure. Therefore, the females were divided in four experimental groups: Control group – Corn oil; and a mixture of propil and butyl paraben with 10 mg/kg, 100 mg/kg and 200 mg/kg and exposed through the subcutaneous pathway. The vaginal cytology was performed to investigate the cyclicality as well as the characterization of the estrous phases by the Shor method. Besides that, morphological aspects of the ovary and uterus, counting of ovaries structure and ultrastructural of pre-ovulatory follicle. To complete the evaluation, the plasmatic estrogen, body weight and reproductive organ weight were assessed. The Shor method was effective to characterize and identify the cells types of the vaginal epithelium and identify the estrous cycle phase. Moreover, the relative and absol... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2017-06-12T18:20:25Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DANIZE APARECIDA RIZZETTI.pdf: 8076050 bytes, checksum: 50d63818c8e4fc4af459fdd6f5b7aa78 (MD5) / Approved for entry into archive by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2017-06-12T18:20:53Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DANIZE APARECIDA RIZZETTI.pdf: 8076050 bytes, checksum: 50d63818c8e4fc4af459fdd6f5b7aa78 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-12T18:20:53Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DANIZE APARECIDA RIZZETTI.pdf: 8076050 bytes, checksum: 50d63818c8e4fc4af459fdd6f5b7aa78 (MD5) Previous issue date: 2016

Submitted by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2016-04-18T17:36:59Z No. of bitstreams: 1 MARIANE MAGALHÃES ZANCHI.pdf: 1185149 bytes, checksum: 5b02afd42e868819a353f05a3e1fb99a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-18T17:36:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MARIANE MAGALHÃES ZANCHI.pdf: 1185149 bytes, checksum: 5b02afd42e868819a353f05a3e1fb99a (MD5) Previous issue date: 2014-07-26 / A ciclofosfamida (CF) é um agente antineoplásico e imunossupressor, usada no tratamento de diversos tipos de tumores e em algumas doenças auto-imunes. A CF é considerada um pró-fármaco, portanto, precisa sofrer biotransformação hepática para formar seus metabólitos ativos, como a mostarda fosforamida e a acroleína. Seu metabólito terapêutico, a mostarda fosforamida, é responsável pelo efeito citotóxico na célula tumoral, enquanto a acroleína é conhecida por apresentar um efeito tóxico secundário, por aumentar a produção de espécies reativas ao oxigênio, causando estresse oxidativo. Esse, por sua vez, poderia estar diretamente relacionado com a redução da fertilidade causada por esta droga. Diante disso, compostos naturais com atividade antioxidante poderiam ser uma alternativa ao dano causado pela CF. O chá verde, obtido da planta Camellia sinensis, tem ação antioxidante e scavenger de radicais livres, devido ao alto conteúdo de polifenóis. O presente estudo avalia o papel protetor da infusão do chá verde sobre o dano oxidativo no sistema reprodutor de camundongos machos, e a sua relação com a fertilidade, após uma administração aguda de CF. Os camundongos foram pré-tratados por gavagem com veículo ou chá verde diariamente, por 14 dias, na dose de 250 mg/kg. A CF foi administrada via intraperitoneal no 14o dia, 1 hora após a administração do chá, na dose de 100 mg/kg. Os camundongos foram eutanasiados 24 horas após a administração da CF, e os testículos e epidídimos foram retirados para posteriores análises bioquímicas e avaliação espermática. O conteúdo de catequinas, principais constituintes do chá verde foi avaliada por HPLC. Epigalocatequina galato (EGCG) está presente em alta concentração na nossa infusão (1340,2 μg/mL), seguido por epicatequina (EC-500,95 μg/mL) e epicatequina galato (ECG-302,84 μg/mL). CF causou estresse oxidativo no sistema reprodutor dos animais, evidenciado neste trabalho por danificar tanto lipídios, como proteínas e DNA. A CF causou um aumento na peroxidação lipídica (níveis de MDA), dano de DNA (ensaio cometa) e atividade da enzima superóxido dismutase (SOD), enquanto diminuiu a atividade da glutationa peroxidase (GPx), glutationa-S-transferase (GST) e 17β–hidroxiesteróide desidrogenase (17β–HSD) em ambos os tecido testados. A atividade da enzima catalase (CAT) e a quantificação de proteína carbonil foram alteradas somente em testículo, mas não em epidídimo. Em relação à avaliação espermática, CF reduziu significativamente apenas a concentração de espermatozóides, comparado ao controle. O pré-tratamento com a infusão do chá verde reduziu significativamente a produção de MDA, carbonilação de proteína, dano de DNA e restaurou a atividade da GPx e GST. Em epidídimo, o chá verde também aumentou a concentração espermática e restaurou a atividade da enzima 17β–HSD. Pode-se concluir que a infusão do chá verde melhora o dano induzido pela CF, no sistema reprodutor de camundongos, e este efeito poderia ser atribuído ao alto conteúdo de catequinas presentes no chá e à sua atividade antioxidante. / Cyclophosphamide (CP) is an antineoplastic and immunosuppressive agent used to treat various types of tumors and in some autoimmune diseases. CP is considered a prodrug, therefore, must undergo hepatic biotransformation to form its active metabolites, such as phosphoramide mustard and acrolein. Its therapeutic metabolite, phosphoramide mustard, is responsible for the cytotoxic effect on tumor cells, while acrolein is known to provide a secondary toxic effect by increasing the reactive oxygen species production, causing oxidative stress. This might be directly related to the fertility reduction caused by this drug. Therefore, natural compounds with antioxidant activity could be an alternative to the damage caused by CP. Green tea, obtained from the plant Camellia sinensis, has antioxidant and free radical scavenging effect, due to the high content of polyphenols. The present study evaluates the protective role of the green tea infusion on oxidative damage on male mice reproductive system, and their relationship to fertility after an acute administration of CP. The mice were pre-treated by gavage with vehicle or green tea daily for 14 days at dose of 250 mg/kg. CP was administered intraperitoneally on day 14, 1 hour after administration of tea at dose of 100 mg/kg. Mice were euthanized 24 hours after the administration of the CP and testes and epididymis were removed for further biochemical analysis and sperm assessment. The content of catechins, the main constituents of green tea were evaluated by HPLC. Epigallocatechin gallate (EGCG) is present in high concentrations in our infusion (1340.2 μg/ml), followed by epicatechin (EC-500.95 μg/ml) and epicatechin gallate (ECG-302.84 μg/mL). CP caused oxidative stress in the reproductive system of animals, evidenced in this work by damaging not only lipids, but also proteins and DNA. CP increased lipid peroxidation (MDA), DNA damage (comet assay) and superoxide dismutase (SOD) activity, while decreased glutathione peroxidase (GPx), glutathione-S-transferase (GST) and 17β-hydroxysteroid dehydrogenase (17β-HSD) activity in both tissues tested. Catalase (CAT) activity and quantification of protein carbonyl were altered only in testes but not in the epididymis. Regarding sperm evaluation, CF significantly decreased only sperm concentration, compared to the control group. Pre-treatment with green tea infusion significantly reduced MDA production, protein carbonylation, DNA damage and restored GPx and GST activity. In epididymis, green tea also increased sperm concentration and restored 17 β-HSD activity. Green tea infusion improves the damage induced by CP in the reproductive system of mice, and this effect is attributed to the high content of catechins in tea and its antioxidant activity.