Submitted by Jean Medeiros (jeanletras@uepb.edu.br) on 2016-08-30T12:54:32Z No. of bitstreams: 1 PDF - Michelangela Suelleny de Caldas Nobre.pdf: 1299620 bytes, checksum: 913e06322c3ba929d99335a5d289dcea (MD5) / Approved for entry into archive by Secta BC (secta.csu.bc@uepb.edu.br) on 2016-08-31T18:13:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PDF - Michelangela Suelleny de Caldas Nobre.pdf: 1299620 bytes, checksum: 913e06322c3ba929d99335a5d289dcea (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-31T18:13:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PDF - Michelangela Suelleny de Caldas Nobre.pdf: 1299620 bytes, checksum: 913e06322c3ba929d99335a5d289dcea (MD5) Previous issue date: 2015-08-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The goat milk whey is a by-product of cheese production and often discharged without any kind of treatment as effluent, becoming a source of pollution. Instead, the use of whey to produce dairy drinks has been a very attractive option, remarkably because of its nutritional value. Probiotic cultures contain microorganisms that bring health benefits to the host by improving its intestinal balance, and they can be used in fermented beverages. This study aimed to evaluate the influence of different potential probiotic lactobacilli cultures on the physicochemical and microbiological features, and also on the pattern of protein degradation on reconstituted and fermented goat Coalho Cheese whey powder. The fermentation process was performed in four trials, C1, C2, C3 and C4, added, respectively, of Lactobacillus casei BGP93, Lactobacillus paracasei BGP1, L. paracasei and Lactobacillus rhamnosus LPC37 LR32, all of them also added of Streptococcus thermophilus TA40 as starter culture. Titratable acidity, pH values, and viability of both S. thermophilus and Lactobacillus sp. were monitored in the reconstituted whey after adding cultures before fermentation (TI), after fermentation (TF), and after 1 (D1) and 7 (D7) days of storage at 4 °C. The use of near infrared spectroscopy (NIR) was evaluated as an alternative method for the determination of Lactobacillus sp. populations. The analyses of proteolysis by the method o-phthaldialdehyde (OPA), ultrafast reversed phase high-performance liquid chromatography (RP- UFLC) and sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS- PAGE) were performed to evaluate the protein degradation in samples throughout the processing and storage period. The whey added of L. rhamnosus (C4) obtained the lowest pH (4.83) and the highest acidity (lactic acid 0.637g / 100 g) after 7 days of storage. The viability of Lactobacillus sp. in all trials (C1, C2, C3 and C4) obeyed the Brazilian criteria for probiotic foods, remaining above 9 log CFU in the recommended daily serving portion (200 ml). The calibration procedure for Lactobacillus sp. values in NIR analysis was adequate; however, it is required additional samples of each trial to improve the performance of calibration models and the construction of prediction models to be performed in future studies. The protein content was around 25 mg/g in all treatments over all sampling periods and, therefore, no significant difference between them was verified (p > 0.05). The chromatograms of the reconstituted whey without addition of cultures showed differences from those obtained for the TI, TF, D1 and D7 sampling periods in all trials, probably due to the thermal treatment of samples prior to the addition of cultures. The degree of proteolysis did not differ significantly between treatments (p > 0.05); however, according with the analysis of all the results, including electrophoresis and chromatography data for the C1 trial, in which low molecular weight fraction was formed, there was a trend towards of higher proteolytic activity in goat cheese whey added of the probiotic culture L. casei BGP93. / O soro caprino é um subproduto da produção queijeira e muitas vezes descartado sem nenhum tratamento como efluente, tornando-se uma fonte de poluição. Como alternativa, a utilização de soro de queijo para a produção de bebidas lácteas tem sido uma opção muito atraente, notadamente devido ao seu valor nutricional. Culturas probióticas são constituídas de microrganismos que conferem benefícios à saúde do hospedeiro, melhorando seu equilíbrio intestinal, podendo ser utilizadas em bebidas fermentadas. Este trabalho teve por objetivo avaliar a influência de diferentes culturas de lactobacilos com potencial probiótico sobre as características físico-químicas, microbiológicas e sobre o padrão de degradação proteica de soro de queijo de cabra tipo coalho em pó reconstituído fermentado. O processo de fermentação foi realizado em quatro tratamentos, C1, C2, C3 e C4, adicionados, respectivamente, das culturas de Lactobacillus casei BGP93, Lactobacillus paracasei BGP1, L. paracasei LPC37 e Lactobacillus rhamnosus LR32, todos eles também adicionados de Streptococcus thermophilus TA40 como cultura starter. Foram monitorados os valores de pH, acidez titulável, S. thermophilus e Lactobacillus sp. no soro reconstituído após a adição das culturas antes da fermentação (TI), depois da fermentação (TF), e após um (D1) e sete (D7) dias de armazenamento a 4 °C. Foi avaliado o uso da espectroscopia de infravermelho próximo (NIR) como método alternativo para a determinação de populações de Lactobacillus sp. As análises de grau de proteólise pelo método o-ftaldialdeído (OPA), cromatografia líquida ultrarrápida de alta eficiência em fase reversa (RP-UFLC) e eletroforese em gel de poliacrilamida-dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE) foram realizadas para avaliar a degradação proteica nas amostras ao longo do processamento e armazenamento. O soro contendo o microrganismo L. rhamnosus (C4) foi o que obteve pH mais baixo (4,83) e acidez mais alta (0,637g de ácido lático/100 g) após 7 dias de armazenamento. A viabilidade de Lactobacillus sp. em todos os tratamentos (C1, C2, C3 e C4) obedeceram aos critérios nacionais para alimentos probióticos, mantendo-se acima de 9 log UFC na porção diária recomendada (200 ml). O método NIR mostrou-se adequado no método de calibração para os valores de Lactobacillus sp.; no entanto, faz-se necessária quantidade maior de amostras de cada tratamento para melhorar a performance dos modelos de calibração e na construção de modelos de predição a serem realizados em trabalhos posteriores. O teor proteico foi próximo de 25 mg/g em todos os tratamentos durante todos os períodos de amostragem e, portanto, sem diferenças significativas entre eles (p > 0,05). Os cromatogramas do soro reconstituído sem adição da cultura apresentaram diferenças em relação àqueles obtidos para os tempos TI, TF, D1 e D7 em todos os tratamentos, provavelmente devido ao tratamento térmico aplicado nas amostras antes da adição das culturas. O grau de proteólise não diferiu significativamente entre os tratamentos (p > 0,05); entretanto, pela análise do conjunto de resultados obtidos, incluindo os dados de cromatografia e eletroforese para o tratamento C1, no qual houve o aparecimento de frações com baixo peso molecular, verificou-se uma tendência de maior atividade proteolítica no soro contendo a cultura probiótica L. casei BGP93.

O soro anti-elapidico brasileiro é produzido com uma mistura de veneno de Micrurus frontalis e de M. corallinus. Estudos indicam que o soro resultante não neutraliza o veneno de algumas espécies de Micrurus. Além disso, o baixo rendimento de veneno e as dificuldades de manutenção destas serpentes em cativeiro dificultam a produção de soro. Assim, um método alternativo para a produção deste soro seria de grande valor. Estudos têm mostrado que os venenos de elapideos brasileiros contêm toxinas com um elevado grau de homologia com as de suas congêneres australianas. O presente trabalho teve como objetivo comparar inicialmente o soro brasileiro e o australiano frente ao veneno de Micrurus frontalis e M. lemniscatus. A reatividade cruzada foi testada por Western-blot e ELISA com veneno de Micrurus frontalis e a capacidade neutralizante por soroneutralização com venenos de M. frontalis, M. lemniscatus, e em parceiria com venenos de M. corallinus, M. altirostris, M. spixii, M. ibiboboca, M. fulvius, M. pyrrhocryptus , M. nigrocinctus, em camundongos. Os dados obtidos indicam nível elevado de reatividade e neutralização cruzada entre os soros. Também comparamos a imunogenicidade do veneno nativo ou irradiado, não observando diferenças nos níveis de anticorpos obtidos. As serpentes australianas utilizadas para a produção de soro são mais fáceis de manusear e produzem maiores quantidades de venenos do que as corais brasileiras. Concluímos que um soro produzido com o veneno de serpentes australianas neutraliza a atividade tóxica das Micrurus estudadas, incluindo espécies que o soro nacional não neutraliza. Assim, o uso de venenos da Austrália como imunógeno constitui alternativa viável para sanar a carência do soro nacional. / The Brazilian coral snake antivenom is produced using a mixture of Micrurus corallinus and M. frontalis venom. Several studies have shown that this serum does not neutralize the venom of some species. Furthermore, the low venom yields and the difficulties of keeping coral snakes in captivity impair antivenom production. Althought belonging to different species, coral snakes and Australian elapids share many homologous toxins in their venom. The present work aimed to compare the Brazilian and Australian antivenoms against Micrurus venom. Cross- reactivity was assayed by Western blot and ELISA, while cross-neutralization was tested in mice. Both tipes of assays indicate high levels of cross-reactivity and neutralization. We also tested the immunogenicity of native or radiation-attenuated venom and no significant difference in antibody levels was observed. The Australian snakes used for antivenom production are much easier to breed and produce higher amounts of venom that their Brazilian relatives. From this study, we conclude that a serum produced using Australian venoms neutralizes the toxicity of coral snakes venoms, including several venoms which are not neutralized by the Brazilian antivenom. Thus, the use of Australian venoms as an immunogen might solve the bottleneck of coral snake antivenom production.

Orientador: Juliana Regina Peiró / Banca: Lina Maria Wehrle Gomide / Banca: Alexandre Secorun Borges / Resumo: A endometrite é uma das pricipais causas de redução da fertilidade em éguas. Desta forma, o diagnóstico de subfertilidade em éguas torna-se importante na tentativa de prevenir ou minimizar perdas econômicas. A quantificação de dímero-D tem sido avaliada em animais com diferentes enfermidades. Os objetivos do presente estudo foram determinar se as concentrações de dímero-D no soro e líquido uterino sofrem alteração em éguas susceptíveis à endometrite em relação a éguas resistentes antes e após lavagens uterinas seriadas e antibioticoterapia, determinar em qual compartimento o aumento do dímero-D refletiria melhor e mais rapidamente as alterações inflamatórias em éguas susceptíveis à endometrite em relação a éguas resistentes antes e após lavagens uterinas seriadas e antibioticoterapia, estabelecer valores de referência para as concentrações de dímero-D no soro e no líquido uterino de éguas resistentes e daquelas susceptíveis à endometrite e verificar se o dímero-D pode ser utilizado como um biomarcador para éguas susceptíveis à endometrite. A quantificação de dímero-D foi obtida de amostras de soro e líquido uterino de doze éguas da raça Quarto de Milha, divididas em dois grupos: éguas resistentes (grupo controle) e susceptíveis à endometrite (grupo experimental). Os resultados do presente estudo mostraram que não houve diferença entre as concentrações de dímero-D séricas ou do líquido uterino nos animais do grupo controle e experimental. Portanto, o dímero-D não pode ser util... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Endometritis is one of the main causes of fertility reduction in breeding mares. Therefore, the diagnosis of subfertility in mares becomes important in attempting to prevent or minimize economic losses. Quantification of D-dimer in animals with a variety of diseases has been published. The goals of this study were to determine whether D-dimer concentrations in serum and uterine fluid suffer changes in mares susceptible or resistant to endometritis before and after serial uterine washes in association with antibiotic therapy, to determine in which compartment increased D-dimer concentrations would reflect better and faster the inflammatory changes in mares susceptible to endometritis in comparison to resistant mares before and after serial uterine washes and antibiotic therapy, to establish reference values for concentrations of D-dimer in serum and uterine fluid of resistant mares and those susceptible to endometritis, and to verify whether D-dimer can be used as a biomarker in mares susceptible to endometritis. D-dimer was quantified in serum or uterine fluid of twelve Quarter Horses mares, divided into two groups: mares resistant to (control group) or susceptible to endometritis (experimental group). The results of this study showed no difference between serum or uterine fluid concentrations of serum D-dimer between groups. We concluded that D-dimer cannot be used as a biomarker to identify mares susceptible to endometritis. / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-06-05Bitstream added on 2014-06-13T20:30:12Z : No. of bitstreams: 1 moretti_br_me_sjrp.pdf: 1049707 bytes, checksum: e81356a6bcd04dcebd9ece45b3951ad8 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A busca por uma alimentação balanceada e por alimentos que possam trazer benefícios à saúde do consumidor fez aumentar a demanda de alimentos funcionais, incluindo os produtos lácteos probióticos. A combinação de um produto suplementado com proteínas e fermentado por microrganismos probióticos pode gerar um produto com propriedades tecnológicas, sensoriais e funcionais que atendam a demanda por esses produtos. A suplementação do leite para a fabricação de iogurtes com diferentes tipos de proteínas melhora o valor nutricional do produto e afeta principalmente a formação da estrutura do gel do iogurte, alterando propriedades como textura, firmeza, viscosidade, retenção de água e separação do soro. O objetivo deste trabalho foi estudar o efeito da suplementação do leite com proteínas de diferentes fontes (soro de leite, soja e colágeno) e do tipo de cultura láctica (culturas tradicionais e probióticas) sobre as características físico-químicas e microbiológicas de iogurtes. O aumento da concentração de suplemento protéico resultou em aumento da capacidade da retenção de água e em redução da sinérese dos iogurtes. A adição de fibra natural de colágeno aos iogurtes resultou em produtos com maior capacidade de retenção de água, sinérese e consistência, que são propriedades importantes para a qualidade do iogurte. Por outro lado, a suplementação com isolado protéico de soja resultou em produtos com propriedades tecnológicas inadequadas, embora tenha obtido os melhores resultados no estímulo do desenvolvimento das culturas durante a fermentação. Os iogurtes fermentados com a cultura tradicional (S. thermophilus e L. bulgaricus) apresentaram maior acidez titulável, maior capacidade de retenção de água e menor sinérese do que os iogurtes fermentados com a cultura probiótica (S. thermophilus, L. bulgaricus e L. acidophilus). A suplementação... / Not available.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico. Programa de Pós-Graduação em Ciência dos Alimentos. / Made available in DSpace on 2012-10-22T16:19:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 226461.pdf: 1057870 bytes, checksum: bfc68e4ef544378384f70c95885fefee (MD5)

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Ciência dos Alimentos. / Made available in DSpace on 2012-10-23T05:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Bebidas lácteas fermentadas por Streptococcus thermophilus, Lactobacillus acidophilus La-5 e Bifidobacterium BB-12, mantidas a 5 ± 1 ºC, foram elaboradas com 51 % de leite e 49% de soro de queijo, 60 % de leite e 40 % de soro e 70 % de leite e 30 % de soro. Em uma primeira etapa estas bebidas foram avaliadas quanto à preferência e à aceitabilidade dos julgadores; à viabilidade de contagem total de células probióticas, antes da etapa de incubação, no 1° e no 28° dia de armazenamento; à composição físico-química e valor calórico, no 1°, 14° e 28° dia de armazenamento; às propriedades de fluxo; à análise instrumental do perfil de textura; e quanto ao índice de sinerese, no 7° e 28° dia de armazenamento. Em uma segunda etapa a bebida láctea com 70 % de leite e 30 % do soro e leite fermentado, contendo as mesmas bactérias probióticas que as bebidas, foram também comparados quanto à composição físico-química, à contagem de células viáveis de bactérias probióticas e às medidas reológicas, nas temperaturas de 2,0 ± 0,1ºC; 4,0 ± 0,1 ºC; 6,0 ± 0,1 ºC e 8,0 ± 0,1 ºC. Na primeira etapa observou-se que todas as bebidas foram igualmente preferidas e aceitas pelos julgadores. As contagens de células probióticas não foram influenciadas pela proporção de soro, sendo que a partir dos resultados obtidos (> 106 UFC/mL) puderam ser classificadas como bebidas probióticas. Quanto menor a proporção de soro de queijo utilizada nas bebidas, maiores os teores de sólidos totais (p < 0,05) e valores calóricos encontrados (p < 0,05), porém após o 14° dia de armazenamento ambos aumentaram (p < 0,05). Neste mesmo período a acidez foi maior (p < 0,05) nas bebidas com 40 e 30 % de soro, enquanto os valores do pH das bebidas diminuíram (p < 0,05) nos 28 dias de armazenamento. Os demais valores referentes à composição físico-química não apresentaram diferenças (p > 0,05). Todas as bebidas apresentaram comportamento de fluido não-Newtoniano, observando também maior comportamento pseudoplástico e menor viscosidade nas bebidas com maior proporção de soro. A bebida láctea com 49 % de soro foi mais coesa (p < 0,05) e elástica (p < 0,05) do que a bebida láctea com 30 % de soro, mas a firmeza e a adesividade das bebidas não diferiram (p > 0,05), porém maior sinerese (p < 0,05) foi demonstrada pela bebida láctea com 49% de soro. Na segunda etapa a adição de soro resultou em uma bebida com menores teores (p < 0,05) de sólidos totais, proteínas, lipídios e valor calórico, quando comparados aos teores apresentados pelo leite fermentado. Já, os teores de cinzas, de carboidratos, a acidez e o pH da bebida láctea e do leite fermentado não diferiram (p > 0,05). Assim como a bebida, o leite fermentado também foi considerado probiótico. Tanto a bebida como o leite fermentado comportaram-se como fluidos pseudoplásticos, confirmando também o comportamento não-Newtoniano e apresentarando tixotropia. Os valores para a energia de ativação foram iguais a 1,89 Kcal.mol-1, para a bebida láctea, e 1,84 Kcal.mol-1, para o leite fermentado, indicando que a energia de ativação não foi influenciada pelo teor de soro empregado, bem como a temperatura também não influenciou sobre a viscosidade aparente das amostras.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Ciência dos Alimentos. / Made available in DSpace on 2012-10-23T06:09:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 242797.pdf: 1641566 bytes, checksum: 344ca738db61988162a36eddd229ecba (MD5) / The aim of this study was to assess the optimal conditions for transglutaminase cross-linking of whey proteins from reconstituted Concentrated whey solutions, in regards to heat treatment effects on transglutaminase kinetics and protein polymerization effects on gel Temperature. The effects of this enzymatic assay on physical properties of yogurt were also determined. The polymerization of whey proteins by the effect of transglutaminase activities was determined by the consistency index obtained from rheological measurements in reconstituted concentrated whey solutions (50 %pv-1) at different temperature-time treatments and Enzyme concentrations. The effects of heat treatment on whey proteins flow behavior before the reaction were determined by using the Power Law Model. The gelation temperature and turbidity of whey solutions were Examined after treatment for 4#24 h at different pH values (6.0; 7.0; 8.0). Furthermore, the physical properties yogurt treated with transglutaminase (0.5 Ug-1 protein) were studied. It was determined that the reaction between â-lactoglobulin, á- lactalbumin and transglutaminase was improved when carried out at 36 °C for 4 hours, at the optimum enzyme concentration of 50 Ug-1. The samples submitted to this treatment showed a pseudoplastic behavior and had a higher consistency index. Heat treatment of solutions at 85, 90 e 95 °C prior to enzyme addiction seemed to improve the reaction; the consistency index was higher (p<0.05) on solutions submitted to this procedure. After the enzyme activity, the gelation temperatures of whey solutions were lower than in control samples. This reduction was intensified by increasing the time of reaction. The production of yogurt with previous enzymatic treatment of milk and whey conferred less syneresis and higher gel firmness in texture analysis. These results proof that transglutaminase could be applied in order to compensate for the changes on physical properties on yoghurt caused by the addition of milk whey.

Orientador: Helio José Montassier / Banca: Ricardo Luiz Moro de Sousa / Banca: Antonio Carlos Paulillo / Banca: Ricardo de Albuquerque / Banca: Adolorata Aparecida Bianco Carvalho / Resumo: O vírus da doença de Newcastle (VDN) provoca uma das doenças infecciosas mais importantes para as aves domésticas, devido aos elevados impactos negativos para a saúde aviária e a interposição de barreiras comerciais para a indústria avícola. Isso requer a constante evolução de técnicas cada vez mais eficazes de diagnóstico para esse vírus. Neste contexto, a nucleoproteína (NP) de VDN é um dos componentes antigênicos ideais para uso no imunodiagnóstico, porque é mais conservada e tem uma elevada imunogenicidade, de modo que NP pode melhorar o desempenho de sorodiagnóstico do VDN. Assim, este estudo teve como objetivo determinar os perfis de produção de anticorpos (Acs) anti-VDN dos isótipos IgA, IgM e IgG, usando NP recombinante (NPr) do VDN como um antígeno alvo. Amostras de soro e de lágrima foram colhidas de plantéis comerciais de aves de postura e também de aves SPF infectadas experimentalmente com a estirpe vacinal LaSota do VDN. O método de ELISA indireto, usando a NPr do VDN como antígeno de revestimento, foi padronizado e utilizado de forma bem sucedida para a detecção de Acs de galinha anti-VDN dos isótipos IgG e IgM em amostras de soro, e de ambos os isotipos mais IgA para amostras de secreção lacrimal. Ainda, este método de ELISA com NPr foi capaz de diferenciar amostras positivas das negativas para o VDN de soro e de lágrima, e nas aves submetidas à infecção experimental com a estirpe vacinal LaSota, a soroconversão foi detectada mais precocemente para os anticorpos do isótipo IgA (lágrima) e IgM (lágrima e soro), que alcançaram uma concentração máxima no sétimo dia após a infecção (pi), enquanto que os níveis de anticorpos IgG anti-VDN começaram a ser detectados mais tardiamente e atingiram um pico aos 14 dias pi. Além disso, a aplicação do ELISA em amostras de soro e de lágrima colhidas a partir de plantéis comerciais de galinhas de postura, para detecção de dois... / Abstract: Newcastle disease virus (NDV) causes one of the most important infectious diseases for chickens, due to the high negative impacts for health and the demands of trade barriers to poultry industry. This requires the constant development of increasingly more effective diagnostic techniques. In this context, the nucleoprotein (NP) of VDN is one of the ideal antigenic components for immunodiagnostics, because it is more conserved and has a high immunogenicity, so that NP may improve the performance of serodiagnosis of NDV. Thus, this study aimed to determine the production profiles of anti-NDV antibodies of IgA, IgM and IgG isotypes, using recombinant NP (rNP) of VDN as a target antigen. Serum and tear samples were collected from commercial poultry flocks, and from SPF birds experimentally infected with the LaSota vaccine strain of NDV. The indirect ELISA method using the NPr VDN as coating antigen was standardized and used for the detection of anti-NDV chicken antibody isotypes IgG, IgM in serum samples and antibodies of both isotypes added of IgA isotype for lacrimal secretion samples. This ELISA method with NPr was effectively able to differentiate NDV-positive and NDV-negative serum and tear samples, and in the birds subjected to a experimental infection with vaccine strain, the seroconversion was detected earlier for the antibodies of the IgA (tear) and IgM (tear and serum) isotypes, which have reached maximum concentration on the 7th day post-infection (pi), while the IgG anti-NDV antibody levels began to be detected later and peaked at 14 days pi. Moreover, the application of ELISA in serum and lachrymal samples collected from commercial layer chickens,with the detection of two (IgG and IgM for serum samples) or three isotypes (IgG, IgM and IgA for lachrymal samples) of anti-NDV antibodies, resulted in the highest detection frequencies than each antibody isotype was individually detected. By comparing the results of serum samples for ... / Doutor

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-17T14:36:25Z No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 554608 bytes, checksum: 6313f872248e8f64eb7415715940cb97 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-17T14:36:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 554608 bytes, checksum: 6313f872248e8f64eb7415715940cb97 (MD5) Previous issue date: 2001-08-02 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Neste trabalho, foi utilizada a cromatografia por exclusão molecular (CEM) para purificação das proteínas do soro de queijo α-lactoalbumina (α-la) e β-lactoglobulina (β-lg) presentes, respectivamente, nas fases polimérica e salina de sistemas aquosos bifásicos (SAB), compostos por polietilenoglicol (PEG), água e fosfato de potássio (FFP). As viscosidades das fases foram o parâmetro empregado para selecionar a concentração de soro de queijo a ser adicionada aos SAB. Usando os dados de viscosidade, foi escolhido para estudo o SAB composto por 18% PEG 1500 + 18% FFP + 10% de soro de queijo + 54% água, (%peso/peso). Partindo deste sistema, foram determinadas as melhores condições operacionais para a CEM: 4,0 mL/min de vazão e 0,5 mL de volume de amostra para a fase polimérica e 2,0 mL/min de vazão e 0,5 mL de volume de amostra para a fase salina. Nestas condições, a resolução, a produtividade e o grau de purificação foram, respetivamente, de 1,53, 0,43 mg.(mL.h) -1 e 99,7% para a fase salina e de 1,29, 0,31 mg.(mL.h) -1 e 99,6% para a fase polimérica. A resina que melhor se adequou ao processo de separação foi a Shepadex G-25® médio (50-150) μm. Na modelagem do processo cromatográfico, foi empregado um modelo matemático cosiderando dispersão axial na coluna e difusão radial em cada partícula. Foram calculados os parâmetros de transferência de massa por meio de regressão não linear, utilizando o método de programação quadrática sucessiva. A modelagem levou a resultados satisfatórios descrevendo, adequadamente, o processo cromatográfico de exclusão molecular. / Size exclusion chromatography (SEC) was used in this work to purify the cheese whey proteins α-lactalbumin (α-la) and β-lactoglobulin (β-lg) present, respectively, in the polymeric and saline phases of aqueous two phase systems (ATPS), composed by polyethyleneglycol (PEG), water and potassium phosphate (FFP). The phase viscosities where the parameters applied to choose whey proteins concentration to be added into the ATPS. It was selected the ATPS formed by 18% (w/w) PEG 1500 + 18% (w/w) FFP + 10% (w/w) of cheese whey + 54% water. Based on this system, the best operational conditions for SEC were 4,0 mL/min of flow rate and 0,5 mL of sample volume for the polymeric phase and 2,0 mL/min of flow rate and 0,5 mL of sample volume for the saline phase. Under these conditions, resolution, productivity and purification degree were, respectively, of 1.53, 0.43 mg.(mL.h) -1 and 99.7% for the saline phase and 1.29, 0.31 mg.(mL.h) -1 and 99.6% for the polymeric phase. The resin that best fit the purification process was ShepadexG-25® medium (50-150 μm). A mathematical model with axial dispersion in the column and radial diffusion in each particle was used to model the chromatographic process. Mass transfer parameters were calculated by means of non-linear regression, using the successive quadratic programming method. The process was successful describe by the model

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2015-12-15T13:55:31Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2791905 bytes, checksum: 2d2f70d34d0c7441ea3eddfe80eafd1b (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-15T13:55:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2791905 bytes, checksum: 2d2f70d34d0c7441ea3eddfe80eafd1b (MD5) Previous issue date: 2009-02-18 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A proteína do capsídeo do circovirus suíno 2 (PCV2), codificada pela ORF2, é uma proteína estrutural, sendo altamente imunogênica. Anti-soro produzido a partir dessa proteína recombinante purificada, em coelhos, poderá apresentar as mesmas propriedades daquele produzido a partir de partículas virais purificadas e ser de relevância como ferramenta diagnóstica. O objeto do presente estudo foi padronizar uma técnica de imunoistoquímica, a partir da produção de um soro hiperimune anti-PCV2 em coelhos, utilizando como antígeno a proteína recombinante purificada do capsídeo do PCV2 (Cap PCV2). A proteína foi expressada em Escherichia coli BL21 e purificada por cromatografia de afinidade. Inoculações desta proteína foram realizadas em coelhos e os soros foram colhidos para avaliações por Western blotting, ELISA, imunocitoquímica e imunoistoquímica. Obteve-se sucesso na purificação da proteína recombinante e na produção do soro hiperimune em coelhos. A afinidade de ligação do anticorpo produzido ao antígeno (proteína recombinante) foi demonstrada pela técnica de Western blotting e ELISA e foi considerada eficiente e sensível. As técnicas de imunocitoquímica e imunoistoquímica apresentaram resultados considerados satisfatórios. O anticorpo produzido contra a proteína codificada pela ORF2 mostrou ter boa afinidade de ligação, podendo ser empregado como ferramenta diagnóstica. / The porcine circovirus 2 (PCV2) capsid protein, encoded by ORF2, is a structural protein and highly immunogenic. An antiserum produced from the purified recombinant protein in rabbits, may present the same properties as that produced from purified viral particles and may be of relevance as a diagnostic tool. The aim of this study was the immunohistochemistry technique standardartization from the production of an anti-PCV2 hyperimmune serum in rabbits using as antigen the purified recombinant protein from the capsidal of PCV2 (Cap PCV2). The protein was expressed in BL21 Escherichia coli and purified by affinity chromatography. Inoculations of this protein were performed in rabbits and the sera were collected for evaluation by Western blotting, ELISA, immunocytochemistry and immunohistochemistry. The recombinant protein purification and hyperimmune serum production in rabbits was achieved successfully. The antibody-binding affinity to the antigen (recombinant protein) was demonstrated by Western blotting and ELISA techniques and were considered efficient and sensitive. The immunocytochemistry and immunohistochemistry techniques results were considered satisfactory. The antibody produced against the protein encoded by ORF2 showed can be used as a diagnostic tool.