As infecções por Hantavirus têm obtido nos últimos anos maior atenção por parte dos órgãos de saúde pública dos países da Europa, Ásia e Américas por produzirem graves doenças. No Brasil, já chegam a 1077 os casos notificados de Síndrome Pulmonar e Cardiovascular por Hantavirus (SPCVH), sendo que 70 destes ocorreram na região de Ribeirão Preto, com letalidade de 48%. Sabendo que os Hantavirus do Continente Americano só passaram a ser conhecidos a partir de 1993, interroga-se se infecções por estes agentes ocorriam no Brasil antes deste ano, o que serviu de motivação para este trabalho. Trata-se de um estudo retrospectivo sobre a situação das infecções por Hantavirus na população do Município de Cássia dos Coqueiros, região de Ribeirão Preto, SP. Com cerca de 2800 habitantes, o Município tem sua atividade econômica essencialmente agrícola, tendo mostrado, em anos recentes, grande intensidade de cultivo da gramínea Brachiaria decumbens. De 1999 a 2003 ali ocorreram 4 casos de SPCVH entre trabalhadores rurais. A presente investigação utilizou 1876 soros coletados entre 1986 e 1991, por ocasião de uma pesquisa sobre hepatites virais, e mantidos desde então em soroteca. Os soros foram testados para pesquisa de IgG contra Hantavirus utilizando um ELISA que tem como antígeno a proteína N recombinante do vírus Araraquara, que produziu os casos de SPCVH na região. Dentre os soros analisados, 89(4,7%) apresentaram resultados positivos, mostrando que esta infecção já ocorria, previamente à descrição dos Hantavirus americanos, e que, provavelmente, deve estar ocorrendo há muitos anos nesta região. / As infecções por Hantavirus têm obtido nos últimos anos maior atenção por parte dos órgãos de saúde pública dos países da Europa, Ásia e Américas por produzirem graves doenças. No Brasil, já chegam a 1077 os casos notificados de Síndrome Pulmonar e Cardiovascular por Hantavirus (SPCVH), sendo que 70 destes ocorreram na região de Ribeirão Preto, com letalidade de 48%. Sabendo que os Hantavirus do Continente Americano só passaram a ser conhecidos a partir de 1993, interroga-se se infecções por estes agentes ocorriam no Brasil antes deste ano, o que serviu de motivação para este trabalho. Trata-se de um estudo retrospectivo sobre a situação das infecções por Hantavirus na população do Município de Cássia dos Coqueiros, região de Ribeirão Preto, SP. Com cerca de 2800 habitantes, o Município tem sua atividade econômica essencialmente agrícola, tendo mostrado, em anos recentes, grande intensidade de cultivo da gramínea Brachiaria decumbens. De 1999 a 2003 ali ocorreram 4 casos de SPCVH entre trabalhadores rurais. A presente investigação utilizou 1876 soros coletados entre 1986 e 1991, por ocasião de uma pesquisa sobre hepatites virais, e mantidos desde então em soroteca. Os soros foram testados para pesquisa de IgG contra Hantavirus utilizando um ELISA que tem como antígeno a proteína N recombinante do vírus Araraquara, que produziu os casos de SPCVH na região. Dentre os soros analisados, 89(4,7%) apresentaram resultados positivos, mostrando que esta infecção já ocorria, previamente à descrição dos Hantavirus americanos, e que, provavelmente, deve estar ocorrendo há muitos anos nesta região.

As infecções por Hantavirus têm obtido nos últimos anos maior atenção por parte dos órgãos de saúde pública dos países da Europa, Ásia e Américas por produzirem graves doenças. No Brasil, já chegam a 1077 os casos notificados de Síndrome Pulmonar e Cardiovascular por Hantavirus (SPCVH), sendo que 70 destes ocorreram na região de Ribeirão Preto, com letalidade de 48%. Sabendo que os Hantavirus do Continente Americano só passaram a ser conhecidos a partir de 1993, interroga-se se infecções por estes agentes ocorriam no Brasil antes deste ano, o que serviu de motivação para este trabalho. Trata-se de um estudo retrospectivo sobre a situação das infecções por Hantavirus na população do Município de Cássia dos Coqueiros, região de Ribeirão Preto, SP. Com cerca de 2800 habitantes, o Município tem sua atividade econômica essencialmente agrícola, tendo mostrado, em anos recentes, grande intensidade de cultivo da gramínea Brachiaria decumbens. De 1999 a 2003 ali ocorreram 4 casos de SPCVH entre trabalhadores rurais. A presente investigação utilizou 1876 soros coletados entre 1986 e 1991, por ocasião de uma pesquisa sobre hepatites virais, e mantidos desde então em soroteca. Os soros foram testados para pesquisa de IgG contra Hantavirus utilizando um ELISA que tem como antígeno a proteína N recombinante do vírus Araraquara, que produziu os casos de SPCVH na região. Dentre os soros analisados, 89(4,7%) apresentaram resultados positivos, mostrando que esta infecção já ocorria, previamente à descrição dos Hantavirus americanos, e que, provavelmente, deve estar ocorrendo há muitos anos nesta região. / As infecções por Hantavirus têm obtido nos últimos anos maior atenção por parte dos órgãos de saúde pública dos países da Europa, Ásia e Américas por produzirem graves doenças. No Brasil, já chegam a 1077 os casos notificados de Síndrome Pulmonar e Cardiovascular por Hantavirus (SPCVH), sendo que 70 destes ocorreram na região de Ribeirão Preto, com letalidade de 48%. Sabendo que os Hantavirus do Continente Americano só passaram a ser conhecidos a partir de 1993, interroga-se se infecções por estes agentes ocorriam no Brasil antes deste ano, o que serviu de motivação para este trabalho. Trata-se de um estudo retrospectivo sobre a situação das infecções por Hantavirus na população do Município de Cássia dos Coqueiros, região de Ribeirão Preto, SP. Com cerca de 2800 habitantes, o Município tem sua atividade econômica essencialmente agrícola, tendo mostrado, em anos recentes, grande intensidade de cultivo da gramínea Brachiaria decumbens. De 1999 a 2003 ali ocorreram 4 casos de SPCVH entre trabalhadores rurais. A presente investigação utilizou 1876 soros coletados entre 1986 e 1991, por ocasião de uma pesquisa sobre hepatites virais, e mantidos desde então em soroteca. Os soros foram testados para pesquisa de IgG contra Hantavirus utilizando um ELISA que tem como antígeno a proteína N recombinante do vírus Araraquara, que produziu os casos de SPCVH na região. Dentre os soros analisados, 89(4,7%) apresentaram resultados positivos, mostrando que esta infecção já ocorria, previamente à descrição dos Hantavirus americanos, e que, provavelmente, deve estar ocorrendo há muitos anos nesta região.

Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-10-01T01:06:28Z No. of bitstreams: 1 Tese Mestrado MT 2010 Viviane F Meneses.pdf: 1266674 bytes, checksum: 3a1ab36412880125693e28ed53b23715 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-01T01:06:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Mestrado MT 2010 Viviane F Meneses.pdf: 1266674 bytes, checksum: 3a1ab36412880125693e28ed53b23715 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A infecção pelo vírus da hepatite C (HCV) é um problema de saúde pública, não somente no Brasil, mas em todo o mundo. A disponibilidade de testes diagnósticos data de 1989, quando foi caracterizado o genoma do HCV. A partir desses estudos foi possível o desenvolvimento de testes que permitem a detecção de anticorpos contra o HCV, como os testes imunoenzimáticos (ELISA ou enzyme-linked immunosorbent assay) e RIBA (recombinant immunoblot assay), bem como técnicas para detecção qualitativa e quantitativa do RNA do HCV por meio da reação em cadeia de polimerase (PCR) e técnicas para determinação dos genótipos do HCV. Recentemente, foi lançado um teste comercial de detecção simultânea de anticorpos anti-HCV e antígeno core do HCV, cujos estudos têm demonstrado uma redução significativa no período de janela imunológica quando comparado à detecção de anticorpos anti-HCV, tornando-o de grande eficácia para o diagnóstico precoce. Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo avaliar o desempenho do teste imunoenzimático baseado na detecção simultânea de anticorpos anti-HCV e antígenos core do HCV (Murex HCV Combinação Ag/Ac) no diagnóstico de pacientes com infecção aguda e crônica pelo HCV. A partir da análise do banco de dados do Programa de Diagnóstico Molecular da Hepatite C, foram selecionadas amostras de soro de pacientes com infecção crônica e com resultados inconclusivos de anti-HCV, além de amostras negativas para controle negativo e de um painel de casos agudos de hepatite C. Estas amostras foram submetidas ao teste Murex HCV Combinação Ag/Ac, ao teste de detecção de anticorpos anti-HCV (HCV Ab; RADIM) e testes de detecção qualitativa e quantitativa do HCV-RNA (COBAS AMPLICOR HCV Detection v2.0 e COBASTM AMPLICOR HCV MONITOR v2.0). Os resultados foram registrados em banco de dados criado no programa Access e analisados com auxílio do programa estatístico EpiInfo versão 3.3.2. O teste Murex HCV Combinação Ag/Ac, além de ser de fácil e rápida execução, demonstrou ótimo desempenho em comparação com os outros testes sorológicos e moleculares analisados, sendo 100% eficiente na detecção de amostras reativas independente do genótipo e do subtipo infectante. O teste Murex HCV Combinação Ag/Ac forneceu resultados 100% concordantes com os resultados obtidos pelos outros testes realizados nos diferentes grupos, excetuando-se apenas o grupo de amostras de pacientes com resultados inconclusivos de anti-HCV, onde o teste Murex HCV Combinação Ag/Ac teve uma concordância de 96,4% em relação à detecção de anticorpos anti-HCV. Contudo, o teste Murex HCV Combinação Ag/Ac pode ser uma alternativa para o diagnóstico molecular da infecção pelo HCV em países em desenvolvimento, onde a utilização dos testes baseados em NAT ainda é pouco exequível. / A infecção pelo vírus da hepatite C (HCV) é um problema de saúde pública, não somente no Brasil, mas em todo o mundo. A disponibilidade de testes diagnósticos data de 1989, quando foi caracterizado o genoma do HCV. A partir desses estudos foi possível o desenvolvimento de testes que permitem a detecção de anticorpos contra o HCV, como os testes imunoenzimáticos (ELISA ou enzyme-linked immunosorbent assay) e RIBA (recombinant immunoblot assay), bem como técnicas para detecção qualitativa e quantitativa do RNA do HCV por meio da reação em cadeia de polimerase (PCR) e técnicas para determinação dos genótipos do HCV. Recentemente, foi lançado um teste comercial de detecção simultânea de anticorpos anti-HCV e antígeno core do HCV, cujos estudos têm demonstrado uma redução significativa no período de janela imunológica quando comparado à detecção de anticorpos anti-HCV, tornando-o de grande eficácia para o diagnóstico precoce. Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo avaliar o desempenho do teste imunoenzimático baseado na detecção simultânea de anticorpos anti-HCV e antígenos core do HCV (Murex HCV Combinação Ag/Ac) no diagnóstico de pacientes com infecção aguda e crônica pelo HCV. A partir da análise do banco de dados do Programa de Diagnóstico Molecular da Hepatite C, foram selecionadas amostras de soro de pacientes com infecção crônica e com resultados inconclusivos de anti-HCV, além de amostras negativas para controle negativo e de um painel de casos agudos de hepatite C. Estas amostras foram submetidas ao teste Murex HCV Combinação Ag/Ac, ao teste de detecção de anticorpos anti-HCV (HCV Ab; RADIM) e testes de detecção qualitativa e quantitativa do HCV-RNA (COBAS AMPLICOR HCV Detection v2.0 e COBASTM AMPLICOR HCV MONITOR v2.0). Os resultados foram registrados em banco de dados criado no programa Access e analisados com auxílio do programa estatístico EpiInfo versão 3.3.2. O teste Murex HCV Combinação Ag/Ac, além de ser de fácil e rápida execução, demonstrou ótimo desempenho em comparação com os outros testes sorológicos e moleculares analisados, sendo 100% eficiente na detecção de amostras reativas independente do genótipo e do subtipo infectante. O teste Murex HCV Combinação Ag/Ac forneceu resultados 100% concordantes com os resultados obtidos pelos outros testes realizados nos diferentes grupos, excetuando-se apenas o grupo de amostras de pacientes com resultados inconclusivos de anti-HCV, onde o teste Murex HCV Combinação Ag/Ac teve uma concordância de 96,4% em relação à detecção de anticorpos anti-HCV. Contudo, o teste Murex HCV Combinação Ag/Ac pode ser uma alternativa para o diagnóstico molecular da infecção pelo HCV em países em desenvolvimento, onde a utilização dos testes baseados em NAT ainda é pouco exequível.

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:28:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3477_1.pdf: 1865463 bytes, checksum: de324c7ff5c3b583186c6ff1009cb98f (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As reações hansênicas são fenômenos inflamatórios que ocorrem durante a evolução da hanseníase. Avaliar a carga bacilar e as características clínicas e laboratoriais bem como a evolução clínica dos indivíduos com episódios reacionais após o tratamento se faz necessário. Trata-se de um estudo analítico do tipo caso-controle, prospectivo e de caráter observacional. Foram comparados, clinicamente e laboratorialmente, os casos de reação hansênica após o tratamento de hanseníase com a PQT/MB com o grupo controle sem relato de reação após alta, pareados por ano/alta do tratamento com uma margem de ± 6 meses, para analisar a possível associação entre a reação hansênica após alta e a carga bacilar, utilizando o teste sorológico anti PGL-1/ML Flow (Glicolípide Fenólico 1/ Teste do Fluxo Lateral para M. leprae). O estudo foi realizado em dois serviços de referência em atendimento a pacientes portadores de hanseníase na cidade de Recife Pernambuco Brasil, onde participaram 208 pacientes multibacilares tratados com poliquimioterapia multibacilar (PQT/MB) tendo sido correlacionados à reação após alta com a carga bacilar através do teste sorológico anti PGL 1 (ML Flow) além das variáveis: sexo, idade, forma clínica, índice baciloscópico Inicial (IBI), reação durante o tratamento, uso de corticóide, esquema terapêutico, grau de incapacidade e tipo de reação. A associação entre a reação após alta e a carga bacilar e as demais variáveis investigadas foram verificadas utilizandose: cálculo do odds ratios (OR) pareado, intervalos de confiança (IC 95%) e valor de p. Foi observado no presente estudo que os resultados encontrados indicam que a reação após alta está estatisticamente associada à carga bacilar através da positividade da sorologia após alta (anti PGL 1) ( OR: 10,4), e com baciloscopia após alta (OR; 7,21) e o IBI > 2,0 além da associação com o sexo masculino ( OR: 2,07), idade acima de 60 anos ( OR: 0,26 ), com a forma clínica virchowiana (OR: 3,7), com a presença da reação hansênica durante o tratamento (OR: 4,33), a reação tipo 2 durante o tratamento (OR: 12,3) e o uso de corticóide. Foi realizada uma análise multivariada onde se observou que a magnitude dos odds ratio estimados não foi modificada, portanto existe uma associação entre carga bacilar (avaliada através do anti PGL-1) e a reação hansênica, independente da idade, forma clínica e a reação durante o tratamento. Avaliando conjuntamente os resultados, que apontam para a associação entre a reação após alta e a presença da carga bacilar através da positividade do anticorpo anti PGL 1, bem como da baciloscopia, além de evidenciar marcadores clínicos e laboratoriais para a ocorrência da reação após alta, pode-se concluir que é fundamental que as equipes e serviços de saúde estejam preparados adequadamente para conduzir essas complicações, e devem estar alertas às situações após a cura clínica. No entanto, estudos futuros serão necessários para determinar quanto esses indivíduos apresentam risco de desenvolver recidiva

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:32:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo8155_1.pdf: 1221756 bytes, checksum: 99d55a889ab37d72604bbe577193b298 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / O risco de transmissão do vírus da imunodeficiência humana (HIV) através de doações de sangue constitui uma preocupação para os profissionais da saúde pública. Nestes últimos anos, várias medidas foram adotadas e o avanço tecnológico no diagnóstico laboratorial tem contribuído para reduzir a transmissão do vírus. Este artigo tem como objetivo fazer uma atualização sobre a infecção pelo HIV na hemoterapia e os principais métodos de diagnóstico utilizados para sua detecção. Realizou-se uma busca online, nas bases de dados Medline-PubMed, Science Direct e Scielo. A pesquisa permitiu identificar as medidas que foram introduzidas desde o surgimento da epidemia visando reduzir o risco da transmissão do HIV nos bancos de sangue. Apesar do avanço dos métodos sorológicos apresentando maior sensibilidade e melhor especificidade e a implantação de métodos moleculares em alguns hemocentros do país, ainda permanece o risco residual de transmissão do vírus por transfusão sanguínea

Submitted by Elizabete Silva (elizabete.silva@ufes.br) on 2015-11-13T21:13:04Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) DESEMPENHO DA TÉCNICA DE CITOMETRIA DE FLUXO, NO.pdf: 3747193 bytes, checksum: ef571a9dce24b87b45d8fd8d89916048 (MD5) / Approved for entry into archive by Morgana Andrade (morgana.andrade@ufes.br) on 2015-11-16T21:07:49Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) DESEMPENHO DA TÉCNICA DE CITOMETRIA DE FLUXO, NO.pdf: 3747193 bytes, checksum: ef571a9dce24b87b45d8fd8d89916048 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-16T21:07:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) DESEMPENHO DA TÉCNICA DE CITOMETRIA DE FLUXO, NO.pdf: 3747193 bytes, checksum: ef571a9dce24b87b45d8fd8d89916048 (MD5) Previous issue date: 2014 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / O diagnóstico de rotina pós-natal da toxoplasmose congênita é baseado na detecção de anticorpos IgM e/ou IgA anti-T. gondii no soro dos neonatos. No entanto, em um número significativo de neonatos infectados esses anticorpos não são detectados, dificultando o diagnóstico precoce da doença. Portanto, neste estudo foi avaliado o desempenho da pesquisa de anticorpos anti-T. gondii por citometria de fluxo no diagnóstico sorológico pós-natal precoce da toxoplasmose congênita. Foram avaliados 88 amostras de soro de crianças com infecção congênita pelo T. gondii (TOXO) e 19 amostras de soro de crianças não infectadas (NI). A sensibilidade do teste foi de 47,6% para IgM, 72,6% para IgA e 75% para IgG, com 100% de especificidade para todos os testes. Quanto a pesquisa de subclasses de IgG, a sensibilidade foi de 73,9% para IgG1, 60,2% para IgG2 e 83% para IgG3 com 100% de especificidade para todos os testes. A sensibilidade de IgG4 foi superior às demais, alcançando 94,7%, embora apresentou uma baixa especificidade de 4,6%. A pesquisa da avidez de IgG quando aplicada para segregação dos grupos TOXO e NI, apresentou um ótimo desempenho com 97% de sensibilidade e 93% de especificidade. Foi também realizado uma análise comparativa da presença de IgG e IgG3 em crianças do grupo TOXO e NI com suas respectivas mães. Nossos resultados mostraram que as crianças infectadas apresentaram uma reatividade média desses anticorpos equivalentes a de suas respectivas mães, o que sugere estarem sintetizando estes anticorpos em resposta a infecção pelo T. gondii. Em contraste, as crianças não infectadas apresentaram uma menor reatividade média desses anticorpos em relação à suas respectivas mães. Além disso, nosso estudo propôs um algoritmo para o diagnóstico da toxoplasmose congênita utilizando o teste de IgM por métodos convencionais disponíveis na rotina dos laboratórios clínicos como estratégia inicial seguido da pesquisa de IgG3 e avidez de IgG pela citometria de fluxo com desempenho final de 98% de sensibilidade e 93% de especificidade. A análise dos dados demonstrou a aplicabilidade da citometria de fluxo para a pesquisa de anticorpos IgG3 e avidez de IgG anti-T. gondii como uma ferramenta complementar para o diagnóstico precoce da toxoplasmose congênita. / The routine diagnosis of pos-natal congenital toxoplasmosis is based on the detection of IgM and/or IgA anti-T. gondii antibodies in neonates sera. However, in a significant number of infected newborns these antibodies are not detected, hindering the early diagnosis of the disease. Therefore, in this study it was evaluated the performance of the detection of anti-T. gondii antibodies by flow cytometry in the sorological diagnosis of early pos-natal congenital toxoplasmosis., Eight eight sera samples of children with congenital infection by T.gondii (TOXO) and 19 sera samples of uninfected children were evaluated. The sensitivity of the test was 47.6% for IgM, 72.6% for IgA, and 75% for IgG, with 100% of specificity for all tests. As to the IgG subclasses, the sensitivity was 73.9% for IgG1, 60.2% for IgG2, and 83% for IgG3 with 100% of specificity for all tests. The sensitivity of IgG4 was superior to the aformentioned subclasses reaching 94.7%, although achieved a poor specificity of 4.6%. The IgG avidity when employed to segregate TOXO and NI groups presented a great performance, with 97% of sensitivity and 93% of specificity. It was also done a comparative analysis of the presence of IgG and IgG3 in children of TOXO and NI groups with their respective mothers. Our results showed that the children with congenital toxoplasmosis presented an average reactivity of these antibodies equivalent to their respective mothers, which suggests that they are producing antibodies in response to T.gondii infection. In contrast, uninfected children presented a lower average reactivity of those antibodies in comparison to their respective mothers. In addition, our study proposed an algorithm for the diagnosis of congenital toxoplasmosis using IgM test performed by conventional methods available in routine clinical laboratories as the initial approach followed by the search for IgG3 and IgG avidity using flow cytometry, reaching a final performance of 98% of sensitivity and 93% of specificity. Data analysis showed the applicability of flow cytometry for the detection of IgG3 antibodies and IgG anti-T. gondii avidity as a complementary tool for the early diagnosis of congenital toxoplasmosis.

Indivíduos que se submetem ao teste sorológico para dosagem de anticorpos contra o Vírus da Imunodeficiência Humana (anti-HIV ) podem ficar expostos a grande dose de estresse, nem sempre suportada pela estrutura psíquica, com o risco de ocorrer suicídio ou ato desordenado. Isto demonstra as implicações psíquicas pelas quais o indivíduo passa ao realizar exame, independente do resultado. A realização do exame exige uma série de diferentes cuidados e atenção para com esses indivíduos. É importante avaliar-se quanto esses indivíduos gostariam de saber, qual a possível reação frente a um resultado positivo. Por outro lado um resultado negativo também traz grande ansiedade havendo ainda os que não acreditam que o resultado seja negativo e com isso estão sendo poupados pela equipe de saúde. A proposta deste trabalho foi compreender melhor os aspectos da realização do teste após 30 meses, verificando mudanças na qualidade de vida da população estudada. A casuística foi composta por 24 sujeitos, sendo 15 soronegativos e 9 soropositivos, que realizaram o exame anti-HIV no serviço do Centro de Testagem e Aconselhamento (CTA), de agosto de 2000 a setembro de 2001. Utilizou-se o instrumento de avaliação de qualidade de vida WHOQOL-100 da Organização Mundial de Saúde, o qual é composto de 100 questões e desenvolvido com 24 categorias e características psicométricas para a avaliação dos resultados. Para tratamento dos dados as respostas obtidas no instrumento de avaliação de qualidade de vida WHOQOL-100 foram submetidas as etapas frente as Facetas e Domínios, realizando a análise estatística dos dados pelo teste não- paramétrico Wilcoxon, adotando o nível de significância de p=0.05. Os escores médios de cada indivíduo foram analisados de forma pareada nos períodos estabelecidos: agosto de 2000 a setembro de 2001 e fevereiro de 2003 a abril de 2004. Paralelamente aplicou-se uma entrevista individual, composta por duas questões abertas. As entrevistas foram analisadas pela metodologia qualitativa de pesquisa de acordo com o pressuposto teórico de Bardin, seguindo três pólos cronológicos: pré- análise, exploração do material e interpretação final. A análise feita individualmente para cada um dos grupos soronegativos e soropositvos, revelou aspectos importantes que interferiram na qualidade de vida. Este estudo propiciou algumas reflexões que podem contribuir para minimizar o sofrimento desses indivíduos (soronegativos e soropositivos) e melhorar a qualidade de vida, são elas: as reações emocionais provocadas pela realização do teste interferem na qualidade de vida dos soronegativos e soropositivos; após a devolutiva, oferecer psicoterapia de apoio individual a todos os indivíduos que realizaram o teste; a elaboração de novas estratégias de prevenção na atuação dos profissionais da saúde junto aos soronegativos, na tentativa de provocar mudanças no comportamento e conseqüente melhora na qualidade de vida; os profissionais de saúde necessitam estar mais preparados para revelar o resultado de sorologia positiva para o HIV; o teste sorológico para o HIV e a informação oferecida em alguns serviços parecem não ser suficientes para minorar o sofrimento provocado pela realização do teste e o resultado positivo. / Individuals submitted to the serologic test for the determination of antibodies against human immunodeficiency virus (anti-HIV) may be exposed to a great deal of stress not always tolerated by their psychic structure, with the risk of suicide or of a disordered act. This demonstrates the psychic implications faced by an individual when taking the test, regardless of the result. The individuals who take this test require a series of different acts of care and attention. It is important to evaluate how much these individuals would like to know and what their possible reaction would be to a positive result. On the other hand, a negative result also brings a lot of anxiety, with some individuals not believing that the result is negative but thinking that the health team is just sparing them. The proposal of the present study was to better understand the aspects involved in having taken the test, 30 months after its execution, and to determine possible changes in the quality of life of the population studied. The series consisted of 24 subjects, 15 of them seronegative and 9 seropositive, who took the anti-HIV test in the service of the Testing and Counseling Center (CTA) from August 2000 to September 2001. The instrument used for the evaluation of quality of life was the WHOQOL-100 of the World Health Organization, which comprises 100 questions and is developed with 24 psychometric categories and characteristics for the evaluation of the results. For data treatment, the replies to the WHOQOL-100 were submitted to Facets and Domains stages and the data were analyzed statistically by the non-parametric Wilcoxon test, with the level of significance set at p=0.05. The mean scores for each individual were analyzed in a paired manner during the periods established, i.e., August 2000 to September 2001 and February 2003 to April 2004. An individual interview consisting of two open questions was held in parallel. The interviews were analyzed by the qualitative research methodology according to the theoretical assumption of Bardin, involving three chronological phases: pre-analysis, exploration of the material and final interpretation. The analysis, carried out individually for the seronegative and seropositive groups, revealed important aspects that interfered with the quality of life. The present study permitted some reflections that can contribute to minimizing the suffering of these individuals (seronegative and seropositive) and to improving their quality of life, as follows: the emotional reactions provoked by taking the test interfere with the quality of life of both seronegative and seropositive subjects; after revealing the result of the test, individual support psychotherapy should be offered to all subjects who took it; new prevention strategies should be elaborated by the health professionals for seronegative subjects in an attempt to induce changes of behavior and a consequent improvement of quality of life; the health professionals should be better prepared to reveal a positive serology result for HIV; the serologic HIV test and the information offered in some services appear not to be sufficient to reduce the suffering provoked by taking the test and receiving a positive result.

A hanseníase é uma doença infecciosa que acomete pele e nervos periféricos. Seu diagnóstico é baseado eminentemente nos seus aspectos clínicos variáveis e poucos são os exames complementares que auxiliam no diagnóstico, como baciloscopia do raspado intradérmico, histopatologia, ELISA anti- PGL1 (APGL1) e anti-LID, geralmente positivos nas formas multibacilares, dificultando o diagnóstico das formas paucibacilares. Busca-se comparar os resultados obtidos com o teste rápido imunológico (LID-NDO) Orange Life® com os resultados da PCR tempo real realizada nas amostras de raspado intradérmico e os resultados do ELISA APGL1 coletadas durante a ação por demanda espontânea (Hanseníase Brasília 2014), além de comparar eficiência entre dois métodos diferentes de conservação destas amostras (papel-filtro x álcool). Foram coletadas 277 amostras de raspado dérmico de 50 pacientes clinicamente diagnosticados com hanseníase durante a ação. Na mesma ocasião, os indivíduos diagnosticados foram submetidos à coleta de sangue periférico para teste rápido sorológico (Orange Life®) e ELISA APGL1. A extração de DNA do raspado intradérmico, armazenado no álcool e no papel-filtro, foi realizada no Laboratório de Dermatologia do HC-FMRP-USP. A PCR em tempo real foi realizada usando par de primers específicos RLEP, e o master mix sybr greenPromega. Dos 50 pacientes diagnosticados clinicamente, 90% são multibacilares. Todos os testes, tanto o teste rápido sorológico como a PCR, apresentaram maior positividade nos pacientes multibacilares. O teste rápido sorológico foi positivo em 64,44% dos pacientes multibacilares e em 40% dos paucibacilares. A PCR nas amostras armazenadas no álcool foi positiva em 19,05% dos pacientes multibacilares e a PCR do papel-filtro em 17,78%; nenhuma PCR foi positiva em pacientes paucibacilares. O ELISA APGL foi positivo em 56% dos pacientes diagnosticados. Na PCR das amostras armazenadas no papel-filtro, o sítio de coleta com maior positividade foram os cotovelos (75%). A concordância entre o teste rápido sorológico e a PCR e a concordância entre o teste rápido e o ELISA APGL1 foram fair (suave). Já a concordância entre a PCR das amostras armazenadas no álcool e a PCR das amostras armazenadas no papel-filtro foi perfeita. Concluímos que o exame clínico é ainda essencial para o diagnóstico da hanseníase, principalmente das formas paucibacilares. Os métodos de armazenamento do material coletado por raspado intradérmico (papel-filtro x álcool) não interferiram no resultado final da PCR, portanto o armazenamento no papel-filtro pode ser feito preferencialmente, pois apresenta menor custo para a extração de DNA. O teste rápido sorológico e o ELISA anti-PGL1 têm baixa especificidade, porém podem ter outras aplicações, diferentes do diagnóstico da hanseníase. / Leprosy is an infectious disease that affects skin and peripheral nerves. Leprosy diagnosis is mainly based on its variable clinical aspects and few complementary tests that aid in the diagnosis, such as bacilloscopy, histopathology, besides the antiPGL1 ELISA (APGL1) and anti-LID, all of which are generally positive in multibacillary forms, confirming the difficulty in diagnosis of paucibacillary patients. The aim of this study was to compare the results obtained with the Orange Life® Immunological Rapid Test (LID-NDO) with the real-time PCR results obtained in the intradermal scraping samples and the results of the ELISA APGL1, collected during the \"Hanseníase\" action in Brasília in January 2014, in addition to comparing efficiency between two different methods of preservation of these samples (filter paper x alcohol). A total of 277 dermal smear samples were collected from 50 patients clinically diagnosed with leprosy during the procedure. At the same time, the individuals diagnosed were submitted to peripheral blood collection for serological rapid test (Orange Life®) and ELISA APGL1. The extraction of DNA from intradermal scrapings, stored in alcohol and filter paper, was carried out at the Dermatology Laboratory of HC-FMRP-USP. Real-time PCR was performed using a pair of primers specific for the RLEP gene, and the master sybr green-Promega. From 50 patients diagnosed clinically, 90% are multibacillary. All tests, both the serological rapid test and the PCR, were more positive in multibacillary patients. The rapid serological test was positive in 64.44% of the multibacillary patients, and in 40% of the paucibacillary. The PCR in the samples stored in the alcohol was positive in 19.05% of the multibacillary patients and the PCR of the filter paper in 17.78%; PCR weren\'t positive in paucibacillary patients. ELISA APGL was positive in 56% (28) of the diagnosed patients. In the PCR of the samples stored in the filter paper, the collection site with the highest positivity was the elbows (75%). The agreement between the rapid serological test and the PCR and the agreement between the rapid test and the ELISA APGL1 were fair. The agreement between the PCR of the samples stored in the alcohol and the PCR of the samples stored on the filter paper was perfect. We conclude that the clinical examination is still essential for the diagnosis of leprosy, especially in paucibacillary forms. We also concluded that the methods of storing the material collected by intradermal scraping (filter paper x alcohol) do not interfere in the final result of the PCR, therefore the storage in the filter paper can be done preferentially because it presents a lower cost for the extraction of DNA. Rapid serological test and the anti-PGL1 ELISA have low specificity, but may have other different applications than the diagnosis of leprosy.

Uma biblioteca genômica de T. cruzi, construída no vetor λgt11, foi selecionada com um soro anti-tripomastigota. Dois clones, denominados B12 e B13, foram isolados, verificando-se que expressam proteínas que contém repetições seriadas de 20 aminoácidos (B12) e 12 aminoácidos (B13). Os insertos respectivos foram subclonados e expressos em fusão com β-galactosidase no vetor pMSgt11. A caracterização dos antígenos em T. cruzi foi feita por Western blot, utilizando soros de coelho contra as proteínas de fusão ou anticorpos imuno-selecionados de soros de pacientes chagásicos. Concluiu-se que B12 corresponde a antígenos de 230 kDa e 200 kDa expressos em tripomastigotas e epimastigotas, respectivamente. Anticorpos contra B13 reconheceram antígenos de 140 kDa e 116 kDa nas duas formas evolutivas. A imunoprecipitação de parasitas radioiodados indicou que o antígeno de 140 kDa está localizado na superfície de tripomastigotas, enquanto os demais polipeptídios correspondem a antígenos internos em ambos os estágios evolutivos. As proteínas recombinantes B12 e B13 foram avaliadas no diagnóstico sorológico da doença de Chagas por radioimunoensaio. Foi feito um levantamento com 128 soros, sendo 70 de pacientes chagásicos, 38 de pacientes com outras parasitoses e 20 de indivíduos normais. B12 e B13 obtiveram índices Kappa, que estimam a proporção de acertos verdadeiros, de 0,94 e 0,61, respectivamente. Esses resultados indicam que o antígeno B13 é um candidato potencial para ser empregado no diagnóstico sorológico da doença de Chagas. Os insertos dos clones B12 e B13 foram usados como sondas para o isolamento de clones genômicos de uma biblioteca em λEMBL3.O mapa de restrição de uma região de 32 kb do genoma de T. cruzi indicou que os genes B12 e B13 são contíguos. Em ensaios de Northern blot B12 hibridizou com transcritos de 7,2 e 8,8 kb e B13 com mRNAs de 3,5 e 4,2 kb. O arranjo genômico de B12 e B13, deduzido de Southern blots de DNA e de cromossomos separados por eletroforese de campo pulsado, é compatível com genes de cópia única. A seqüência completa de um gene homólogo a B13 foi previamente descrita por Buschiazzo e cols. (Mol. Biochem. Parasitol, 54: 125-128, 1992), indicando que 75 repetições seriadas de 36 pb estão presentes em um único bloco. A seqüência completa do gene B12 e da região intergênica entre B12 e B13 foi determinada. B12 codifica uma proteína de 223 kDa contendo um domínio de 173 aminoácidos repetido 3 vezes ao longo da proteína e intercalado por blocos contendo um número variável de repetições seriadas de 20 aminoácidos. A estrutura de B12 é peculiar, uma vez que em outros antígenos de T. cruzi clonados as repetições seriadas estão contidas em um único bloco. Uma busca no banco de dados GenBank demonstrou homologia com proteínas ricas em prolina, incluindo a subunidade pesada da proteína triplet de neurofilamento (NF-H)de mamíferos. Um terceiro gene, denominado B11, e que hibridiza com um transcrito de 5,5 kb, foi localizado a cerca de 9,5 kb a montante de B12. Análises de Southem blot, feitas a partir de DNA de T. cruzi digerido com enzimas de restrição ou de cromossomos, demonstrou que B11 apresenta múltiplas cópias dispersas no genoma do parasita. A seqüência nucleotídica de um fragmento de 0,7 kb de B11 revelou homologia, a nível protéico, com o produto de TRS-1, um elemento semelhante a retrotransposon, isolado de T. brucei (Murphy et al.: J. Mol. Biol. , 195: 855-871, 1987). / Characterization of two contiguous antigen genes of Trypanosoma cruzi presenting immunodominant repetitive epitopes A genomic library of T. cruzi in the vector λgt11 was screened with antitrypomastigote serum. Two clones, named B12 and B13, were isolated and shown to express proteins which contain tandemly repeated units of 20 amino acids (B12) and 12 amino acids (B13). lnserts from clones B12 and B13 were subcloned in the vector pMSgt11 and expressed as β-galactosidase fusion proteins. The characterization of T. cruzi antigens coded by recombinants B12 and B13 was performed by Western blot, using either rabbit antisera to the fusion proteins or immunoselected antibodies from chagasic patients. It was concluded that B12 corresponds to antigens of 230 kDa and 200 kDa found, respectively, both in trypomastigotes and epimastigotes, whereas B13 corresponds to polypeptides of 140 kDa and 116 kDa expressed in both evolutive stages. Immunoprecipitation of radioiodinated parasites indicates that the 140 kDa antigen is located on the surface of trypomastigotes, whereas the other polypeptides correspond to internal antigens. B12 and B13 recombinant proteins were evaluated by radioimmunoassay in the serological diagnosis of Chagas\' disease. Analysis of 128 sera from 20 normal individuals, 70 chagasic patients and 38 patients with other parasitoses indicated kappa indexes of 0.94 and 0.61, respectively, for the B12 and B13 proteins. These data indicate that B13 polypeptide is a potential candidate for the diagnosis of Chagas\' disease. The inserts of B12 and B13 were used to isolate genomic clones from a λEMBL3 library. The restriction map of a region of 32 kb from T. cruzi genome indicated that B12 and B13 genes are contiguous. Northern blots showed that B12 corresponds to 7.2 and 8.8 kb mRNAs, whereas B13 hybridizes to transcripts of 3.5 and 4.2 kb. Southern blot analysis of total digested T. cruzi DNA and pulse field-separated chromosomes lead to the conclusion that B12 and B13 correspond to single copy genes. The entire sequence of a gene homologous to B13 was previously reported (Buschinazzo et aI.: MoI. Biochem. Parasitol. , 54: 125-128, 1992), indicating that ca. 75 units of the 36 bp repeat motif are organized in a single cluster. The complete sequence of B12 gene and the intergenic region between B12 and B13 genes were determined. B12 encodes a 223 kDa protein bearing a 173 amino acids motif repeated 3 times along the sequence and intercalated by clusters containing a variable number of tandemly repeated 20 amino acids units. The sequence of B12 gene is peculiar since in other cloned antigen genes of T. cruzi the repeat units are generally located in a single cluster. A search for homology, with the BLAST program, revealed some homology to proline-rich proteins, like mammalian heavy neurofilament subunit (NF-H). A third gene, denominated B11 and hybridizing to a 5.5 mRNA species, was identified 9.5 kb upstream from the 5\' end of B12 gene. Southern blots of digested DNA and pulse field-separated chromosomes hybridized with the B11 probe, indicating that B11 is a multicopy gene distributed in many chromosomes. The nucleotide sequence of a 0.7 kb fragment from B11 was determined and a search in GenBank database, performed with BLAST program, revealed a significant homology at the protein leveI to the product of TRS-l element, a retrotransposon-like sequence of T. brucei (Murphy et aI.:J MoI. Biol., 195:855-871).

A doença de Chagas ainda é causa importante da morte de milhares de pessoas nos países em desenvolvimento, sendo de grande importância a identificação e confirmação de indivíduos chagásicos, principalmente mulheres e crianças. Neste trabalho avaliamos o valor clínico dos resultados do teste sorológico TESAcruzi como confirmatório de infecção chagásica em amostras de sangue colhidas em papel de filtro . Foram estudadas 8.788 amostras de sangue coletadas em papel filtro (tipo Whatman nº4) de crianças de 0 a 5 anos de idade incompletos de zonas rurais de 13 estados do Brasil, enviadas ao Laboratório de Soroepidemiologia e Imunobiologia do Instituto de Medicina Tropical de São Paulo pelo Laboratório de Chagas do Hospital das Clínicas-UFG, para confirmação e controle de qualidade da infecção chagásica. Foram utilizados os testes sorológicos ELISA - BIOELISACRUZI, IFI - IMUNOCRUZI e WB - TESAcruzi (BioMérieux-Brasil). Das 8.788 amostras de sangue analisadas, 166 (1,9%) foram reagentes por ELISA (cut off 0,3) e 313 (3,6%) por IFI a partir de 1/40. Todas as amostras reagentes ou duvidosas foram ensaiadas por TESAcruzi para confirmação dos resultados. Foram reagentes 77 eluatos (0,9%). Considerando que o TESAcruzi apresenta 100% de sensibilidade e 99,6% de especificidade, os valores preditivos positivos e negativos obtidos, conferem aos resultados um alto valor clínico para a confirmação de resultados positivos, negativos e inconclusivos na sorologia da doença de Chagas. A introdução do TESAcruzi na sorologia da doença de Chagas é uma ferramenta importante quando se deseja confirmar casos com sorologia duvidosa ou inconclusiva. / Identifying and confirming Chagas disease patients is a goal to be achieved at this moment, just when many countries from Latin America had announced its control an/or eradication. In this project we studied the TESAcruzi as confirmatory test for Chagas Disease diagnosis using serum samples collected from children (0-5 years old) living in different states of Brazil and selected by statistics criteria. The study is part of the seroepidemiological survey that is occurring in Brazil looking for ongenital or acquired Chagas disease. Blood samples collected by fingerprint in nº4 Whatman filter paper (10% of total and all reagents and inconclusive samples) were sent to our laboratory by central laboratory located in Goiania - Goias to confirm previous results. For this we used traditional commercial reagents, IgG indirect immunofluorescence - IgG-IFI, enzyme immunoassay - IgG - ELISA and introduced TESAcruzi, western blotting reagent, recently registered by BioMerieux S.A. From 8.788 samples 166 (1.9%) were reagents in IgG-ELISA (C.O = 0.300) and 313 (3.64%) by IgG IFI (C.O 1/40). From these, 77 (0.9%) were reagents in TESAcruzi. Considering the predictive values of TESAcruzi (NPV = 100% and PPV = 99.5%) the results obtained had high clinical value to define the Chagasic patients. TESAcruzi reagent seems to be an important tool for Chagas disease diagnosis when it is necessary to confirm reagents or inconclusive results.