Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-04-12T11:58:21Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Anália Cirqueira Milhomem - 2017.pdf: 1969169 bytes, checksum: 990bb0603cc940e039264e7209f95907 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-04-12T11:58:37Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Anália Cirqueira Milhomem - 2017.pdf: 1969169 bytes, checksum: 990bb0603cc940e039264e7209f95907 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-12T11:58:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Anália Cirqueira Milhomem - 2017.pdf: 1969169 bytes, checksum: 990bb0603cc940e039264e7209f95907 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-03-15 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Neurocysticercosis (NCC) is one of the diseases neglected by the World Health Organization (WHO), and the parasitic infection that most affects the Central Nervous System (CNS) throughout the world. Thus, it is necessary to deepen the knowledge regarding its immunopathogenesis and physiopathology in order to elucidate mechanisms by which NCC causes tissue injury in infected patients. With the advent of this necessity the search for ways to facilitate the experimental study of this disease has arisen, and today, the use of the cysticercus species of Taenia crassiceps is well diffused in the scientific environment. The objective of this work was to describe the general pathological processes and the profile of systemic and in situ cytokines in C57BL / 6 mice after intracranial inoculation of viable cysticerci of T. crassiceps. Three experimental groups were used: healthy control, surgical control and infected group. After 90 days of infection, mice were euthanized and histopathological analysis of the brain, spleen cell culture, homogenate production and ELISA for IL-4, IL10 and IFN-γ were performed. The histopathological analysis of the encephalus allowed to verify the presence of cysticercus in the lateral ventricles or in the extraparenchymal region, presence of mononuclear inflammatory infiltrate (MN) around the parasite, microgliosis and meningitis. The analysis of the systemic and in situ immune profiles of the infected mice showed a predominance of Th2-type response, with high IL-4 concentration, low IFN-γ and IL-10 levels modulating the two responses, but mainly Th1. The in situ cytokine dosage was similar between the experimental groups, which leads us to conclude that the cysticercus exerts immunomodulation for its survival, in addition to which it also benefits from the cerebral immunoprivilege. In conclusion, correlating the immune and histological aspects described after the analysis, we can suggest that T. crassiceps cysticercosis infection in C57BL / 6 mice triggers an inflammatory response, a predominance of Th2 type profile with MN inflammatory infiltrate presence, Meningitis and microgliosis. / A neurocisticercose (NCC) é uma das doenças negligenciadas pela Organização Mundial de Saúde (OMS), e a infecção parasitária que mais acomete o Sistema Nervoso Central (SNC) em todo o mundo. Dessa forma, faz-se necessário aprofundar os conhecimentos quanto a sua imunopatogênese e fisiopatologia com o intuito de elucidar mecanismos pelos quais a NCC provoca lesão tecidual nos pacientes infectados. Com o advento desta necessidade a busca por formas de facilitar o estudo experimental desta doença surgiram, e hoje, a utilização da espécie de cisticercos de Taenia crassiceps está bem difundida no meio científico. O objetivo deste trabalho foi descrever os processos patológicos gerais e o perfil de citocinas sistêmicas e in situ em camundongos C57BL/6, após inoculação intracraniana de cisticercos viáveis de T. crassiceps. Para isso foram utilizados três grupos experimentais: controle saudável, controle cirúrgico e grupo infectado. Após 90 dias de infecção foi realizada eutanásia dos camundongos e posteriormente foi realizada análise histopatológica dos encéfalos, cultura de células do baço, produção de homogenato e ELISA para dosagem de IL-4, IL10 e IFN-γ. A análise histopatológica dos encéfalos permitiu comprovar a presença do cisticerco, nos ventrículos laterais ou na região extraparenquimal, presença de infiltrado inflamatório mononuclear (MN) ao redor do parasito, microgliose e meningite discretas. As análises dos perfis imunes sistêmico e in situ dos camundongos infectados não apresentou diferenças estatisticamente significativas entre os grupos analisados, o que nos fazer deduzir que o cisticerco exerce imunomodulação buscando sua sobrevivência, além do que se beneficia também do imunoprivilégio cerebral. Em conclusão, correlacionando os aspectos imunes e histológicos descritos após as análises realizadas, podemos sugerir que a infecção por cisticercos de T. crassiceps em camundongos C57BL/6, desencadeia resposta inflamatória com a presença infiltrado inflamatório MN, meningite e microgliose.

Larvas de cisticercos de Taenia crassiceps foram deixadas em repouso em TRIS 9mM pH 7,2 com 1mM EDTA até 180 minutos, os sobrenadantes coletados e processados nos 30, 60, 120 e 180 minutos, dando origem aos antígenos de excreção e secreção (ES 30; ES 60; ES 120 e ES 180). A caracterização do antígeno de excreção e secreção de larvas de Taenia crassiceps foi feito por SDS-PAGE e imunoblot utilizando anticorpos monoclonais (AcMos) anti-T. crassiceps e anti-T. solium e anticorpos humanos. Os resultados mostraram que o rendimento do antígeno ES foi menor nos primeiros 30 minutos (0,4 µg) por larva quando comparado os demais ES (ES 60: 2,4 µg; ES 120: 2,9 µg; ES 180: 2,5 µg). O SDS-PAGE confirmou que no ES 30 há menos proteínas. No imunoblot, o ES 180 mostrou que 6 AcMos (anti-LV-Tcra; anti-ES-Tcra; anti-LV-Tso: A3; anti-T-Tso: B4, B11 e A6) reconheceram apenas as frações 18- e 14-kDa do antígeno ES 180. Os AcMos anti-E-Tso (B8) e anti-LV-Tso (B6) não reconheceram frações do antígeno ES 180. Anticorpos presentes em amostras humanas de pacientes com NC reconheceram as frações protéicas entre 94- a 30-kDa e as de 18- e 14-kDa. Utilizando antígeno ES 180 e amostras de soros de pacientes supostamente saudáveis (GC), foram identificadas proteínas acima de 30-kDa e somente uma amostra reconheceu a de 16- kDa, anômala em relação ao perfil 18- e 14-kDa. As amostras de soro de pacientes com outras parasitoses mostraram reatividade com frações ≥ de 30-kDa do ES 180 e o maior índice de reatividade foi com a proteína 71-KDa. Um total de 77%; 70%; 60% e 70% das amostras de pacientes com toxocaríase, esquistossomose mansônica, hidatidose e Chagas, respectivamente, reconheceram a fração 71-kDa do ES 180. O antígeno ES pode contribuir com futuros estudos abordando a complexa relação parasito hospedeiro na cisticercose e na produção de vacinas para o uso em suínos. / Cysticercus Larvae of Taenia crassiceps were maintained in TRIS 9mM pH 7,2 with 1mM EDTA for 180 minutes; the supernatant was collected and processed at 30; 60; 120 and 180 minutes, originating excretion-secretion antigens (ES 30; ES 60; ES 120 and ES 180). The characterization of the ES antigen was conducted through SDS-PAGE and immunoblot using anti-T. crassiceps and anti-T. solium monoclonal antibodies (AcMos) and human antibodies. The results showed that the production of ES antigen was lower in the first 30 min. (0,4 µg) compared with the others (ES 60: 2,4 µg; ES 120: 2,9 µg; ES 180: 2,5 µg). The SDS-PAGE confirmed that ES 30 presented less protein. By immunoblot,6 AcMos (anti-LV-Tcra; anti-ES-Tcra;anti-LV-Tso: A3; anti-T-Tso: B4, B11 and A6) have recognized only the 18- and 14-kDa fractions of the ES 180. The anti-E-Tso (B8) and the anti-LV-Tso (B6) AcMos did not recognize any fractions. Antibodies from human samples NC recognized the proteins from 94- to 30-kDa and from 18- and 14-kDa. Using serum samples of apparently healthy individuals (GC), the ES 180 antigen showed proteins > 30-kDa and one sample recognized the 16-kDa fraction, anomalous when compared to the 18- and 14-kDa fractions. The serum samples of subjects with other parasitoses showed reactivity ≥ 30-kDa, more frequently with 71-KDa protein. A total of 77%; 70%; 60% and 70% of the samples from subjects presenting toxocariasis, esquistossomose mansonic, hydatidosis and Chagas disease, respectively, recognized the 71-kDa fraction of ES 180. The ES antigen may contribute to further studies on the complex cysticercosis parasite/host relation as well as for the production of vaccines for swine.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-03-03T13:38:21Z No. of bitstreams: 2 Tese - Vânia Beatriz Lopes - 2015.pdf: 1571381 bytes, checksum: 95d706025dea6373e88193f8224608f3 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-03-03T13:44:17Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Vânia Beatriz Lopes - 2015.pdf: 1571381 bytes, checksum: 95d706025dea6373e88193f8224608f3 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-03T13:44:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Vânia Beatriz Lopes - 2015.pdf: 1571381 bytes, checksum: 95d706025dea6373e88193f8224608f3 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-11-09 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The cysticercosis is endemic and is considered neglected by the World Health Organization. The neurocysticercosis (NCC) is the most common and severe form of cysticercosis, accounting for over 50,000 deaths annually. The use of experimental models in research, has been essential to the advancement of knowledge of various diseases, such as in understanding the pathophysiology, immune response and parasite host reactions. This study aimed to characterize the cellular immune response in situ and systemic, and the role of inflammatory cells in triggering changes in myelin standards. For this, we used an experimental model to evaluate the NCC intraventricular concentrations of cytokine in situ and systemically, by spleen cell culture, and changes in parenchymal patterns and periventricular desmielinizarão throughout the experimental period. No changes were detected in cytokine concentration at the infection site. Systemically, it is observed the presence of IL-10 initially and after 30 days of infection, there is a significant presence of all the cytokines analyzed as IL-4, IL-10, IL-17 and IFN-γ in the infected group. At the end of the infection, the Th2 profile was predominant. In evaluating pathological observed breaking the blood-brain barrier (BBB) allowing the initial influx of inflammatory cells in the two groups. At 30 days, there was a mixed inflammatory process, ventriculomegaly, foamy macrophages and periventricular desmielinizarão. At the end of the infection, predominance of mononuclear cells, ventriculomegaly, foamy macrophages and demyelination in the parenchyma mostly. In conclusion, the systemic immune response of BALB / c mice induced by cysticercus T. crassiceps, was characterized by a Th2-type immune profile and desmielinizarão parenchymal infection possibly at the end of the inflammatory process as well as the compressive effect on the parenchyma of the parasite brain. / A cisticercose é uma doença endêmica e é considerada negligenciada pela Organização Mundial de Saúde. A neurocisticercose (NCC) é a forma mais frequente e grave da cisticercose, sendo responsável por mais de 50 mil mortes anuais. A utilização de modelos experimentais em pesquisa tem sido essencial para o avanço do conhecimento de diversas doenças, como no entendimento da fisiopatologia, da resposta imune e das relações parasito hospedeiro. O presente estudo objetivou a caracterização da resposta imune celular in situ e sistêmica, e o papel das células inflamatórias em desencadear alterações nos padrões de mielina. Para isto, utilizou-se um modelo experimental de NCC intraventricular para avaliar as concentrações de citocinas in situ e sistemicamente, pela cultura de células do baço, e as alterações nos padrões de desmielinizarão periventricular e parenquimal ao longo do período experimental. Não foram detectadas alterações nas concentrações de citocinas no local da infecção. Sistemicamente, observa-se a presença de IL-10 inicialmente e aos 30 dias de infecção, observa-se a presença significante de todas as citocinas analisadas como, IL-4, IL-10, IL-17 e IFN-γ no grupo infectado. No final da infecção, o perfil Th2, foi predominante. Na avaliação anatomopatológica observou quebra da barreira hemato encefálica (BHE), que permitiu o influxo inicial de células inflamatórias nos dois grupos analisados. Aos 30 dias, observou-se processo inflamatório misto, ventriculomegalia, macrófagos espumosos e desmielinizarão periventricular. No final da infecção, predomínio de células mononucleares, ventriculomegalia, macrófagos espumosos e desmielinização no parênquima em sua maioria. Em conclusão, a resposta imune sistêmica dos camundongos BALB/c induzida por cisticercos de T. crassiceps, foi caracterizada por um perfil imune do tipo Th2e desmielinizarão parenquimal no final da infecção possivelmente pelo processo inflamatório como também pelo efeito compressivo do parasito sobre o parênquima encefálico.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-08-09T12:17:35Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lilian Cristina Morais de Andrade - 2013.pdf: 1070622 bytes, checksum: c44e7d6decc4c88ffa0d3bbacd190bc6 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-08-09T12:19:51Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lilian Cristina Morais de Andrade - 2013.pdf: 1070622 bytes, checksum: c44e7d6decc4c88ffa0d3bbacd190bc6 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-09T12:19:51Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lilian Cristina Morais de Andrade - 2013.pdf: 1070622 bytes, checksum: c44e7d6decc4c88ffa0d3bbacd190bc6 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2013-09-06 / Taenia crassiceps cysticerci possess antigenic similarities to T. solium cysticerci and because of this and added to the relative easiness in its maintainance in laboratory they are used as an experimental model to T. solium studies. The objective of this study was to analyze the in vitro influence of glucose and insulin on the energetic and respiratory metabolism of T. crassiceps cysticerci exposed to low dosages of anti-helminthic drugs, albendazol and praziquantel, and also to different concentrations of glucose and insulin. Glucose is the main energy source to these parasites in their larval and adult stages and glycogen is their main energetic reserve. Glycogen may be converted into glucose in case of low glucose uptake and is stored in the cysticerci tegument. The cysticerci were collected from the peritoneal cavity of BALB/c female mice experimentally infected and maintained in the animal facilities of IPTSP/UFG. After 24hours of culture in RPMI culture medium supplemented and with glucose, glargine insulin (LANTUS®, Sanofi Aventis), albendazol and praziquantel, the cysticerci were removed and the medium was frozen in liquid nitrogen as to allow the metabolix stasis. Afterwards this culture medium was analyzes through HPLC as to permit the quantification of the following organic acids related to the carbohydrates metabolism: lactate and pyruvate, intermediary metabolism: citrate, α-ketoglutarate, succinate, fumarate, malate and oxaloacetate, fatty acids metabolism: β-hydroxibutyrate and propionate. It was possible to detect propionate and β-hydroxibutyrate secreted by T. crassiceps cysticerci which indicates the fatty acids oxidation as an alternative energy xv source used by the initial stage cysticerci which are in rapid growth. Also the detection of organic acids from the citric acid cycle indicates the in vitro aerobiosis performed by the initial stage cysticerci. / Os cisticercos de Taenia crassiceps possuem similaridades antigênicas com cisticercos de Taenia solium e por este motivo, associado ao fato de uma relativa facilidade de sua manutenção em animais de laboratório, são utilizados como modelo experimental para estudos da cisticercose por T. solium. O objetivo deste trabalho foi analisar in vitro a influência da glicose e da insulina no metabolismo energético e respiratório de cisticercos de T. crassiceps expostos aos fármacos anti-helmínticos albendazol e praziquantel em baixas doses, e diferentes concentrações de glicose e insulina. A glicose é a principal fonte de energia para estes parasitos tanto na fase larval quanto adultos e o glicogênio, que pode ser novamente convertido em glicose, é fonte de reserva energética, sendo encontrado armazenado em suas membranas. Os cisticercos foram provenientes da cavidade peritoneal de camundongos fêmeas Balb/c infectados experimentalmente e mantidos no biotério do IPTSP/UFG. Após 24 horas de cultivo em meio RPMI® suplementado e adicionado de glicose, insulina glargina (LANTUS®, Sanofi Aventis), albendazol e praziquantel, foram retirados da placa e o meio foi congelado em nitrogênio líquido para ocorrer estase metabólica. Posteriormente o meio de cultura passou por um processo de extração sendo analisado em Cromatografia Líquida de Alta Performance com detector UV (CLAE) dos seguintes ácidos orgânicos oriundos do metabolismo de carboidratos (lactato, piruvato), metabolismo intermediário (citrato, α-cetoglutarato succinato, fumarato, malato, oxaloacetato) e metabolismo de ácidos graxos (β-hidroxibutirato e propionato). Foram detectados propionato e β-hidroxibutirato secretados por cisticercos de T. crassiceps indicando a oxidação de ácidos graxos como fonte de energia alternativa, utilizada em especial nos estádios de crescimento e também em situações de baixas concentrações de substancias energéticas provenientes do hospedeiro. Em adição, a detecção de xiv ácidos orgânicos do ciclo do ácido cítrico nos cisticercos analisados confirma a aerobiose in vitro do estádio evolutivos inicial dos cisticercos.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 928214 bytes, checksum: f836c005563b3eda57ceef56008490fb (MD5) Previous issue date: 2007-07-17 / The bovine cisticercosis is an illness caused by the larva of Taenia saginata called Cysticercus bovis. Recently the implementation of immunologic tests has been suggested as alternative for the diagnosis of the illness, amongst these tests the Immunoblotting, that basically detect antibodies in the serum. The present work objectives the evaluation of the Immunoblotting performance in the immunodiagnosis of bovine cisticercosis as well as of Taenia saginata and Taenia crassiceps antigens. The Taenia saginata antigens (Tsag) was gotten from the calves through the experimental infection and the Taenia crassiceps (LVcra and Tcra) antigen was gotten through experimental infection in mice balb/c. The antigens had been tested in four groups of Immunoblot control-serum: 28 samples of animals experimentally infected, 32 from naturally infected animals, 28 samples without illnesses and 19 samples with other pathologies. The peptides that had only reacted with the positive serum had been selected and identified as important, observing the localization criteria (molecular weight) as well as its physical appearance, particularly the color intensity. Related to these characteristics, valid for three tested antigens, the bands of 4-6, 14 and 18KDa had been distinguished between the others, showing the highest taxes of performance and a differentiated profile, with bigger area and height, similar to a spot. The 4-6KDa peptides presented the taxes of 66.7, 66.7 and 50% of sensitivity and 97.5, 84.6 and 96.2% of specificity when used the LVcra, Tcra and Tsag antigens, respectively. The 14KDa peptide presented 87.5, 87.5 and 77.8% of sensitivity and 97.5 94.9 and 100% of specificity with the LVcra, Tcra and Tsag antigens, respectively. The 18KDa peptide presented for LVcra, Tcra and Tsag, respectively, 75, 41.7 and 88.9% sensitivity values and 97.5, 89.7 and 92.3% of specificity. Crossed reactions with other illnesses between the three antigenic preparations and the 4-6, 14 and 18KDa peptides had not been observed. The values reached in this experiment indicate that the peptides with molecular weight of 4-6, 14 and 18KDa, can be considered important in the diagnosis of bovine cisticercosis. Low sensitivity values of Immunoblot had been observed when serum of animals with natural infection, generally discrete, had been considered. On the other hand, serum samples of antibodies from the studied bovines demonstrated high taxes of performance in the recognition of the 4-6, 14 and 18 Kda peptides, what characterize the test qualitatively, becoming it useful for the diagnosis of cisticercosis, as well as teste antigens. / A cisticercose bovina é uma doença causada pela larva de Taenia saginata, denominada Cysticercus bovis. Recentemente, tem sido sugerida, como alternativa para o diagnóstico da doença, a implementação de testes imunológicos, dentre eles o Imunoblot, que tem por princípio a detecção de anticorpos no soro. O presente trabalho objetiva a avaliação do desempenho do imunoblot no imunodiagnóstico da cisticercose bovina, bem como, dos antígenos de Taenia saginata e Taenia crassiceps. Os antígenos de Taenia saginata (Tsag) foram obtidos através da infecção experimental dos bezerros e os de Taenia crassiceps (LVcra e Tcra), através da infecção experimental em camundongos balb/c. Os antígenos foram testados no Immunoblotting frente a quatro grupos de soros-controle: 28 amostras de soro de animais experimentalmente infectados, 32 de animais naturalmente infectados, 28 sem doenças e 19 com outras patologias. Foram selecionados os peptídeos que reagiram somente com os soros positivos, os quais foram identificados como importantes, observando os critérios de localização (peso molecular), bem como sua aparência física, particularmente a intensidade de cor. As bandas de 4-6, 14 e 18KDa destacaram-se entre as outras, mostrando as mais altas taxas de desempenho e um perfil diferenciado, com área e altura maiores, semelhantes a uma mancha. Os peptídeos de 4-6KDa apresentaram as taxas de 66,7, 66,7 e 50% de sensibilidade e 97,5, 84,6 e 96,2% de especificidade quando utilizados os antígenos LVcra, Tcra e Tsag, respectivamente. O peptídeo de 14KDa apresentou 87,5, 87,5 e 77,8% de sensibilidade e 97,5 94,9 e 100% de especificidade com os antígenos LVcra , Tcra e Tsag , respectivamente. O peptídeo de 18KDa apresentou para LVcra, Tcra e Tsag, respectivamente, valores de 75, 41,7 e 88,9% de sensibilidade e 97,5, 89,7 e 92,3% de especificidade. Não foram observadas reações cruzadas com outras doenças entre as três preparações antigênicas e os peptídeos de 4-6, 14 e 18KDa. Os valores alcançados neste experimento indicam que os peptídeos com peso molecular de 4-6, 14 e 18KDa, podem ser considerados importantes no diagnóstico da cisticercose bovina. Observaram-se baixos valores de sensibilidade do imunoblot quando se consideraram soros de animais com infecção natural, geralmente discreta. Por outro lado, as altas taxas de desempenho demonstradas no reconhecimento dos peptídeos de 4-6, 14 e 18KDa, pelos anticorpos presentes nas amostras de soros dos bovinos estudados, caracterizam qualitativamente o teste, tornando-o útil no diagnóstico da cisticercose.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2014-12-29T15:35:49Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação - Letícia de Almeida Leandro - 2013.pdf: 2111763 bytes, checksum: c992b02afb4a59e318265d06577e6454 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2014-12-29T15:40:58Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação - Letícia de Almeida Leandro - 2013.pdf: 2111763 bytes, checksum: c992b02afb4a59e318265d06577e6454 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-29T15:40:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação - Letícia de Almeida Leandro - 2013.pdf: 2111763 bytes, checksum: c992b02afb4a59e318265d06577e6454 (MD5) Previous issue date: 2013-02-28 / The analysis of the energetic and respiratory metabolism of Taenia crassiceps cysticerci innoculated into the encefalum of female BALB/c mice was performed. After 30 days of infection the mice were treated with low dosages (3.0 and 6.0 mg/kg) of albendazole and praziquantel aiming the observation of the alterations caused by a hostile environment on the parasite's metabolism. The aim of this study was to detect the influence of low dosages of anti-helminthic drugs on the production of organic acids related to the intermediary metabolism (oxaloacetate, malate, fumarate, succinate, citrate and α-ketoglutarate), carbohydrates metabolism (pyruvate, lactate, propionate, oxaloacetate and malate) and fatty acids and proteins catabolism (β-hydroxibutyrate, acetoacetate, acetate, α-ketoglutarate and oxalate) by T. crassiceps cysticerci innoculated into the CNS of BALB/c mice. Regarding the glycolisis, it was possible to detect lactate in all samples which shows that this parasite performs a lactic fermentation. As to the intermediary metabolism it was possible to detect oxaloacetate, citrate, malate, succinate, fumarate and α-ketoglutarate which indicates that the cysticerci may have used the tricarboxilic acid cycle (TCA) to produce energy. However facing the results found the evidences show that the cysticerci used a metabolic pathway denominated reversion of the TCA for energy production which presents as main end products propionate and acetate. There were no significant differences between the groups treated with the anti-helminthic and the control one except that the group treated with 6.0 mg/kg of albendazole presented acetate as main end product of the TCA reversion while the other groups presented propionate. In the groups treated with praziquantel, both concentrations, there was no production of acetate and in the 6.0 mg/kg of praziquntel there was no production of β-hydroxibutyrate wheter in the groups treated with both concentrations of albendazol there was an increase in the production of this organic acid which indicates the maximization of the energetic pathway of fatty acids oxidation and/or of the proteic catabolism. It was possible to conclude that T. crassiceps cysticerci when exposed to the conditions of this study preferred an anaerobic energy production pathway and probably performed the catabolism of carbohydrates, proteins and fatty acids. / Realizou-se a análise do metabolismo energético e respiratório de cisticercos de Taenia crassiceps inoculados no encéfalo de camundongos BALB/c fêmeas. Após 30 dias de infecção, esses camundongos foram tratados com baixas doses (3,0 e 6,0 mg/kg) de albendazol e praziquantel visando observação de alterações provocadas no metabolismo do parasito. O objetivo deste trabalho foi detectar a influência de baixas doses desses anti-helmínticos na produção dos ácidos orgânicos do metabolismo intermediário (citrato, α-cetoglutarato, succinato, fumarato, malato, oxaloacetato), de carboidratos (piruvato, lactato, oxaloacetato, malato, acetato e propionato), de ácidos graxos e proteínas (β-hidroxibutirato, acetoacetato, acetato, α-cetoglutarato e oxalato) realizados por cisticercos de T. crassiceps implantados no SNC de camundongos BALB/c fêmeas. Com relação a glicólise, detectou-se lactato em todas as amostras mostrando que esse parasito fez fermentação lática; em relação ao metabolismo intermediário foi possível detectar os ácidos orgânicos citrato, α-cetoglutarato, succinato, fumarato, malato e oxaloacetato, indicando que os cisticercos apresentaram elementos do ciclo do ácido cítrico para produzir energia. Porém diante dos resultados encontrados a principal evidência é de que esses cisticercos utilizaram uma via denominada reversão do ciclo do ácido cítrico para produzirem energia, obtendo como produtos finais propionato e acetato. Não se observou diferenças significativas entre os grupos que sofreram tratamentos e os grupos controle exceto pelo fato de que, o grupo tratado com albendazol 6,0 mg/kg de peso do camundongo teve como principal produto final da reversão do ciclo do ácido cítrico, o acetato, ao contrário dos demais grupos que tiveram o propionato; nos grupos tratados com praziquantel não houveram a produção de acetato como nos demais grupos e no grupo tratado com praziquantel 6,0 mg/kg não houve a produção de β-hidroxibutirato; nos grupos tratados com albendazol observou-se um aumento na produção de β-hidroxibutirato indicando que esse grupo maximizou a via de produção energética através da β-oxidação de ácidos graxos e/ou através do catabolismo proteico.Concluímos que os cisticercos de T. crassiceps, nas condições do presente trabalho, deram preferência para uma via de produção energética anaeróbia e provavelmente catabolizaram, além de carboidratos, proteínas e ácidos graxos para produzirem ATP.

Larvas de cisticercos de Taenia crassiceps foram deixadas em repouso em TRIS 9mM pH 7,2 com 1mM EDTA até 180 minutos, os sobrenadantes coletados e processados nos 30, 60, 120 e 180 minutos, dando origem aos antígenos de excreção e secreção (ES 30; ES 60; ES 120 e ES 180). A caracterização do antígeno de excreção e secreção de larvas de Taenia crassiceps foi feito por SDS-PAGE e imunoblot utilizando anticorpos monoclonais (AcMos) anti-T. crassiceps e anti-T. solium e anticorpos humanos. Os resultados mostraram que o rendimento do antígeno ES foi menor nos primeiros 30 minutos (0,4 µg) por larva quando comparado os demais ES (ES 60: 2,4 µg; ES 120: 2,9 µg; ES 180: 2,5 µg). O SDS-PAGE confirmou que no ES 30 há menos proteínas. No imunoblot, o ES 180 mostrou que 6 AcMos (anti-LV-Tcra; anti-ES-Tcra; anti-LV-Tso: A3; anti-T-Tso: B4, B11 e A6) reconheceram apenas as frações 18- e 14-kDa do antígeno ES 180. Os AcMos anti-E-Tso (B8) e anti-LV-Tso (B6) não reconheceram frações do antígeno ES 180. Anticorpos presentes em amostras humanas de pacientes com NC reconheceram as frações protéicas entre 94- a 30-kDa e as de 18- e 14-kDa. Utilizando antígeno ES 180 e amostras de soros de pacientes supostamente saudáveis (GC), foram identificadas proteínas acima de 30-kDa e somente uma amostra reconheceu a de 16- kDa, anômala em relação ao perfil 18- e 14-kDa. As amostras de soro de pacientes com outras parasitoses mostraram reatividade com frações ≥ de 30-kDa do ES 180 e o maior índice de reatividade foi com a proteína 71-KDa. Um total de 77%; 70%; 60% e 70% das amostras de pacientes com toxocaríase, esquistossomose mansônica, hidatidose e Chagas, respectivamente, reconheceram a fração 71-kDa do ES 180. O antígeno ES pode contribuir com futuros estudos abordando a complexa relação parasito hospedeiro na cisticercose e na produção de vacinas para o uso em suínos. / Cysticercus Larvae of Taenia crassiceps were maintained in TRIS 9mM pH 7,2 with 1mM EDTA for 180 minutes; the supernatant was collected and processed at 30; 60; 120 and 180 minutes, originating excretion-secretion antigens (ES 30; ES 60; ES 120 and ES 180). The characterization of the ES antigen was conducted through SDS-PAGE and immunoblot using anti-T. crassiceps and anti-T. solium monoclonal antibodies (AcMos) and human antibodies. The results showed that the production of ES antigen was lower in the first 30 min. (0,4 µg) compared with the others (ES 60: 2,4 µg; ES 120: 2,9 µg; ES 180: 2,5 µg). The SDS-PAGE confirmed that ES 30 presented less protein. By immunoblot,6 AcMos (anti-LV-Tcra; anti-ES-Tcra;anti-LV-Tso: A3; anti-T-Tso: B4, B11 and A6) have recognized only the 18- and 14-kDa fractions of the ES 180. The anti-E-Tso (B8) and the anti-LV-Tso (B6) AcMos did not recognize any fractions. Antibodies from human samples NC recognized the proteins from 94- to 30-kDa and from 18- and 14-kDa. Using serum samples of apparently healthy individuals (GC), the ES 180 antigen showed proteins > 30-kDa and one sample recognized the 16-kDa fraction, anomalous when compared to the 18- and 14-kDa fractions. The serum samples of subjects with other parasitoses showed reactivity ≥ 30-kDa, more frequently with 71-KDa protein. A total of 77%; 70%; 60% and 70% of the samples from subjects presenting toxocariasis, esquistossomose mansonic, hydatidosis and Chagas disease, respectively, recognized the 71-kDa fraction of ES 180. The ES antigen may contribute to further studies on the complex cysticercosis parasite/host relation as well as for the production of vaccines for swine.

Mesocestoides corti and Taenia crassiceps are tapeworms, larvae of which are characterized by their ability to reproduce asexually. In this work, the effect of infection by M. corti and T. crassiceps in BALB/c, C57BL/6J and ICR mice on the growth and metastasis of B16F10 melanoma tumors was investigated. Although an increase in metastatic activities was observed after intravenous administration of melanoma cells to M. corti-infected mice, both tapeworms showed a strong suppressive effect on the size and number of tumors and metastases formed when the cells were administered intraperitoneally. This, in some cases, led to a complete elimination of tumor cells. In vitro cultivation of B16F10 cells in the presence of larval excretory-secretory products led to a decrease in their viability but an increase in their migration ability. Flow cytometry proved that M. corti infection has an effect on the increased number and proportion of macrophage populations in the peritoneum of ICR mice. Our work confirmed the anti-tumor effect of T. crassiceps infection in mice and introduced M. corti as a new helminth species capable of influencing cancer. Key words: helminths, cestodes, cancers, Mesocestoides corti, Taenia crassiceps

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1492276 bytes, checksum: 4d382ffe8ee028de0569c86987765f6b (MD5) Previous issue date: 2004-12-14 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This study was carried out with the purpose to develop an serological diagnosis protocol of bovine cysticercosis for the ELISA test using two metacestodes antigens of Taenia crassiceps and three of Taenia solium. There were used 20 sera of experimentally infected cattle with T. saginata eggs, 60 of cattle with natural infection, diagnosed at slaughterhouses, five of cattle negative for cisticercose, reared in isolation, 55 of negative bovine in slaughterhouses and 10 of bovine with actinomicosis (n=2), actinobacilosis (n=1), fasciolosis (n=1) diagnosed at slaughterhouse and of experimentally infected cattle with Anaplasma marginale (n=3), Babesia sp. (n=2) and concomitant infection for Anaplasma marginale and Babesia bovis (n=1). There were used the total and fluid cistic antigens of T. Crassiceps metacestodes and escólex and membrane antigens of T. solium metacestodes in ELISA test, after previous characterization in polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) in gradient 5 to 20%. The better antigen concentration was 1 µg and the better sera and conjugated dilutions were 1:25 and 1:5.000, respectively. Although the T. solium antigens have provided the most sensibility values, the T. crassiceps antigens also showed good performance to the bovine cysticercosis diagnosis. Different control serum groups employed for the cut-off calculation had changed the ELISA test results. We can concluded that the ELISA test for antibodies detection presents deficiencies in the diagnosis of naturally infected animals that showed low sensibility (5 to 32%) for different antigens. However, for experimentally infected cattle, the sensibility was high, 75 to 90% for different antigens. The test could still be considered useful in the differentiation between the cisticercose and other diseases, due to its high specificity rates (81 to 100%). / A cisticercose bovina é uma zoonose que tem o ser humano como único hospedeiro definitivo. Além de sua importância para a Saúde Pública, esta parasitose acarreta prejuízos econômicos em matadouros, ao levar as carcaças acometidas a julgamento. Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de um teste de diagnóstico sorológico da cisticercose bovina pelo teste ELISA empregando dois antígenos de larvas de Taenia crassiceps e três de Taenia solium. Foram utilizados 20 soros de bovinos infectados experimentalmente com ovos de T. saginata, 60 de bovinos com infecção natural, diagnosticados em matadouros, cinco de bovinos negativos para cisticercose, criados sob isolamento, 55 de bovinos considerados negativos em matadouros e 10 de bovinos portadores de actinomicose (n=2), actinobacilose (n=1), fasciolose (n=1) diagnosticados em matadouro e de bovinos infectados experimentalmente com Anaplasma marginale (n=3), Babesia sp. (n=2) e infecção mista por Anaplasma marginale e Babesia bovis (n=1). Foram empregados os antígenos total e vesicular de larva de Taenia crassiceps e total, de escólex e de membrana de larva de Taenia solium no teste ELISA, após prévia caracterização em eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) sob gradiente 5 a 20%. Após a realização de ensaios de avaliação do desempenho do teste em duas etapas, sempre considerando o critério da amplitude da diferença entre densidades ópticas de soros-controle positivos e negativos, foram obtidos os resultados que se seguem. A concentração de 1 µg de antígeno por orifício foi a que proporcionou, na maioria das vezes, a maior diferenciação entre soros positivos e negativos com todos os cinco antígenos estudados. As diluições 1:25 de soros e 1: 5.000 de conjugado também foram as que se destacaram, à exceção do antígeno de líquido vesicular de larva de T. crassiceps, que teve melhor desempenho quando o conjugado foi diluído a 1:2.500 vezes. O leite desnatado foi a melhor substância bloqueadora dos sítios reativos remanescentes da placa. Embora os antígenos de larva de T. solium tenham proporcionado valores mais elevados de sensibilidade, os antígenos de larva de T. crassiceps também mostraram bom desempenho no diagnóstico de cisticercose bovina. A escolha de diferentes grupos de soroscontrole para o cálculo do ponto de corte interferiu de forma expressiva no desempenho do teste ELISA. Pode-se concluir que o teste ELISA para detecção de anticorpos apresenta deficiências no diagnóstico de animais destinados ao abate, em virtude de sua baixa sensibilidade (5 a 32%) para diferentes antígenos, quando se consideram soros de animais com infecção natural, geralmente discreta. No entanto, no caso de animais infectados experimentalmente, a sensibilidade se mostrou elevada, 75 a 90%, para diferentes antígenos. O teste ainda pode ser considerado útil na diferenciação entre a cisticercose e outras doenças, devido às suas elevadas taxas de especificidade (81 a 100%).

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Around 50 million people in the world are infected by the teniasis-cysticercosis complex. Therefore, biological factors involved in the host susceptibility to parasitary diseases should be investigated due to the relevance of these infections in public health both in Brazil and in the world. As demonstrated by the literature, Interleukin-4, the main Th2 cytokine, has an important role in the immune response against parasites. The aim of this study was to evaluate the role of this cytokine in the subcutaneous cysticercosis pathogenesis through the comparison of the inflammatory responses in conventional BALB/C mice infection and in Interleukin-4 deficient BALB/C mice (IL-4 KO). An experimental model of subcutaneous infection with Taenia crassiceps cysticerci was used and macroscopic and microscopic parameters of the injury, cytokines profiles in splenocytes cultures from the infected animals from both types of BALB/c mice were evaluated to compare the local and systemic inflammatory response to the infection. During the experimental days the development of the chronic granulomatous inflammatory response was observed in the conventional animals with presence of macrophagic and lymphoplasmocytic inflammatory infiltrate and in the IL-4-KO animals with macrophages and polymorphonuclear cells in the inflammatory infiltrate. Conventional animals presented a mixed immune response pattern with an initial increase of IFNγ, which a Th1 cytokine, and evolved to chronicity with predominance of Th2 response and presence of IL-10 which modulates the immune response and favors the parasite infection. In the IL-4-KO animals it was possible to observe a partial destruction of the parasites in the first days of infection with increase in the Interferon gamma (IFNγ) production which is part of a Th1 accentuated response also the co-expression of IL-10 in these animals inhibited the accentuated Th1 response and contributed to the persistence of the infection. Fibrosis and tissue repair were not compromised in these animals. Furthermore, infected IL-4-KO animals presented a spontaneous production of IL-13 in higher concentrations than the conventional animals at 30 days of infection which contributed to the role of the Th2 immune response against the infection. The IL-4 deficiency directed the inflammation towards a greater microbicidal potential, partial destruction of the parasites in the first days of infection and significant reduction of eosinophils. / As parasitoses, consideradas endêmicas em países em desenvolvimento, são um problema relevante de saúde pública. Cerca de 50 milhões de indivíduos no mundo estão infectados pelo complexo teníase-cisticercose. Portanto, fatores biológicos envolvidos na suscetibilidade do hospedeiro frente às parasitoses devem ser investigados, dada a relevância dessas infecções para a saúde pública no Brasil e no mundo. Como demonstrado na literatura, a Interleucina-4, principal citocina da resposta Th2, tem um importante papel na resposta imune contra parasitos. O objetivo deste estudo foi avaliar a participação desta citocina na patogênese da cisticercose subcutânea comparando-se a resposta inflamatória resultante da infecção em camundongos BALB/c convencionais e BALB/c deficientes para o gene da Interleucina-4 (IL-4-KO). Utilizando um modelo experimental de infecção no subcutâneo com cisticercos de Taenia crassiceps, foram avaliados parâmetros macroscópicos e microscópicos da lesão e perfil de citocinas em cultura de esplenócitos dos animais, visando caracterizar e comparar a resposta inflamatória local e sistêmica na infecção. Observou-se durante os dias experimentais o desenvolvimento de resposta inflamatória crônica granulomatosa nos animais convencionais com presença de infiltrado inflamatório macrofágico e linfoplasmocitário, e nos IL-4-KO, macrofágico e polimorfonuclear. Animais convencionais apresentaram um padrão de resposta misto, com produção inicial aumentada de Interferon gama (IFNγ) - resposta Th1, que evoluiu para a cronicidade com uma resposta Th2 predominante e presença de IL-10, modulando a resposta inflamatória e favorecendo a instalação do parasito. Nos animais IL-4-KO observou-se destruição parcial dos parasitos já nos primeiros dias de infecção, com aumento da produção de IFNγ, resposta Th1 mais acentuada; a co-expressão de IL-10 nesses animais inibiu a resposta Th1 acentuada e contribuiu para persistência da infecção. Fibrose e reparação tecidual não estiveram comprometidas durante os dias experimentais. Além disso, animais IL-4-KO infectados apresentaram produção espontânea de IL-13 maior que os convencionais aos 30 dias de infecção, contribuindo para participação da resposta Th2 na infecção. A deficiência de IL-4 direcionou a inflamação para um maior potencial microbicida, destruição parcial dos parasitos já nos primeiros dias de infecção, e redução significativa de eosinófilos.