CORDEIRO, L. R. Reiki como cuidado de enfermagem em pessoas com ansiedade no âmbito da estratégia da família. 2016. 150 f. Dissertação (Mestrado em Saúde da Família) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-09-02T11:58:12Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_lrcordeiro.pdf: 2174356 bytes, checksum: 0ebee6f93b47d95b4e12fd21e38f2a3d (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-09-02T11:58:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_lrcordeiro.pdf: 2174356 bytes, checksum: 0ebee6f93b47d95b4e12fd21e38f2a3d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-02T11:58:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_lrcordeiro.pdf: 2174356 bytes, checksum: 0ebee6f93b47d95b4e12fd21e38f2a3d (MD5) Previous issue date: 2016-07-14 / This study aimed to analyze the contribution of Reiki as a proposal of nursing care for people with anxiety in the Family Health Strategy, which was approved by the Ethics Committee of the Federal University of Ceará in Opinion No. 1233393. It was held at a Desk Health in Fortaleza, Ceará, during the work activities of the author, who is Reiki master. The methodology used was quantitative, descriptive and intervention, had 56 patients who received treatment with Reiki. The data collection protocol contained sociodemographic characteristics, feelings during application of Reiki and numerical information of a biofeedback device, connected by a sensor to the patient and the computer. participants' reports were obtained on their perception of anxiety, feelings during the intervention and descriptions of care with Reiki. Data were compiled in Microsoft Word 2007, Microsoft Excel 2007, IBM SPSS Statistics Base version 19, applied the t test, chi-square, Wilcoxon and Fisher. Most participants 82.6% were female, more than half 60.5% were Catholic and 79.1% were aged 20-60 years. They were 82.6% with anxiety of participants who described physical, emotional and mental symptomatology. Intervention with Reiki as nursing care, along with the teaching of breathing technique promoted: increased state of cardiac coherence, whose average increased nine (before) to 31 (after), or the heart rate entered into synchrony and resonance with the breathing rhythm, with self-regulation of SNA, with increased variability interval of heart rate variability (HRV), providing greater relaxation and therefore breathing less tense and physiological and lower average heart rate, which went from 77bpm (before) to 73bpm (after); there was satisfaction, well-being, relaxation and reducing stress levels; no influence on the functional health and neurocognitive states, stimulus spirituality, as well as improved self-control and social relationships, from which one can conclude that Reiki is a simple therapy, but complete for increased quality of life. The results demonstrate the importance of integrating Integrative and Complementary Practices in the Family Health Strategy in Brazil. / Este estudo teve a finalidade de analisar a contribuição do Reiki como proposta de cuidado de enfermagem em pessoas com ansiedade na Estratégia Saúde da Família, tendo sido aprovado pelo Comitê de Ética da Universidade Federal do Ceará pelo parecer n° 1233393. Foi realizado em um Posto de Saúde em Fortaleza-Ceará, durante as atividades laborais da autora, que é mestre de Reiki. A metodologia utilizada foi quantitativa, descritiva e de intervenção, teve 56 pacientes que receberam tratamento com Reiki. O protocolo de coleta dos dados continha características sociodemográficas, sensações durante a aplicação de Reiki e informações numéricas de um aparelho de biofeedback, ligado por um sensor ao paciente e ao computador. Foram obtidos relatos dos participantes sobre sua percepção de ansiedade, sensações durante a intervenção e descrições sobre do cuidado com Reiki. Os dados foram compilados no Microsoft Word 2007, Microsoft Excel 2007, IBM® SPSS® Statistics Base versão 19, aplicou-se os testes T, qui-quadrado, Wilcoxon e Fisher. A maioria dos participantes 82,6% era do sexo feminino, mais da metade 60,5% eram católicas e 79,1% estavam na faixa etária de 20 a 60 anos. Estavam com ansiedade 82,6% dos participantes que descreveram sintomatologias físicas, emocionais e mentais. A intervenção com Reiki, como cuidado de enfermagem, junto com o ensino da técnica de respiração, promoveu: aumento do estado de coerência cardíaca, cuja média aumentou de nove (antes) para 31 (após), ou seja, o ritmo cardíaco entrou em sincronia e ressonância com o ritmo respiratório, havendo auto-regulação do SNA, com aumento do intervalo de tempo da Variabilidade da Frequência Cardíaca (VFC), proporcionando maior relaxamento e consequentemente respiração menos tensa e fisiológica e redução da média Frequência Cardíaca, que passou de 77bpm (antes) para 73bpm (depois); verificou-se satisfação, bem estar, relaxamento e redução dos níveis de estresse; houve influência na saúde funcional e nos estados neurocognitivos, estímulo a espiritualidade, além de melhora no autocontrole e nas relações sociais, de onde se pode concluir que o Reiki é uma terapia simples, porém completa para o aumento da qualidade de vida. Os resultados demonstram a importância da inserção das Práticas Integrativas e Complementares na Estratégia Saúde da Família no Brasil.

Dissertação de Mestrado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, da Universidade do Extremo Sul Catarinense - UNESC, para obtenção do título de Mestre em Ciências da Saúde. / A esquizofrenia é um transtorno neuropsiquiátrico crônico de fisiopatologia pouco conhecida, debilitante e de consequências muito graves. As teorias sobre a doença versam principalmente sobre uma desregulação em um ou mais sistemas de neurotransmissores, sendo que a progressão do transtorno acarreta na presença de danos oxidativos a proteínas e lipídeos de membrana desencadeados pelo desbalanço das enzimas antioxidante que combatem o estresse oxidativo muito presente neste transtorno. A presença de marcadores inflamatórios durante o desenvolvimento da esquizofrenia também indica a possibilidade de que o distúrbio seja inicialmente uma doença inflamatória. Para o tratamento os medicamentos antipsicóticos têm sido o método utilizado ao longo dos anos. Entretanto, a eficácia tardia do tratamento e os efeitos colaterais levam ao abandono dos pacientes ao uso dos antipsicóticos. Estudos tem demonstrado que o ácido ascórbico possui efeitos neuroprotetores, atuando também na síntese de neurotransmissores e ainda possui grande poder antioxidante, sendo por isso seu estudo de grande interesse para novas estratégias terapêuticas no transtorno esquizofrênico. O objetivo desse trabalho foi avaliar a suplementação do ácido ascórbico em um modelo animal de esquizofrenia. Foram avaliados parâmetros comportamentais tais como (discriminação olfatória, interação social e inibição por Pré-pulso), danos oxidativos as membranas através da avaliação das proteínas carboniladas, grupo sulfidrilas, glutationa e as TBARS, atividade das enzimas antioxidantes (SOD-CAT-GPx) e também citocinas envolvidas na inflamação IL-1β, IL-10. Foram utilizados 96 ratos Wistar com 60 dias de vida, os quais tiveram suplementação com ácido ascórbico nas doses de 0,1, 1 e 10 mg/kg ou salina durante 14 dias, via gavagem orogástrica. Posteriormente, 4 grupos (12 ratos por grupo) receberam administração de cetamina (25mg/kg) e 4 grupos receberam salina, via intraperitoneal, do 9º-15º dia de experimento. Após 30 minutos da última administração de cetamina/salina realizou-se os testes comportamentais, em seguida os animais foram decapitados por guilhotina e imediatamente as estruturas cerebrais retiradas (bulbo, córtex pré-frontal, estriado e hipocampo). Pode-se concluir que a suplementação de ácido ascórbico neste modelo animal de esquizofrenia induzido por cetamina foi capaz de prevenir danos oxidativos a lipídeos e proteínas. Além disso, foi observada também uma prevenção na perda sensório motora, além de manter as enzimas antioxidantes e citocinas pró e anti-inflamatórias dentro de parametros fisiológicos. Estes resultados mostram que o ácido ascórbico pode ser um importante alvo terapêutico na esquizofrenia podendo auxiliar na melhora da qualidade de vida do paciente esquizofrênico.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013 / Associação Fundo de Incentivo à Psicofarmacologia (AFIP) / O estresse constitui-se como um desvio da homeostase, podendo contribuir para o desenvolvimento de uma serie de sintomas que podem representar um prejuizo a Saúde do idoso. Esta crescente parcela da populacao mundial tem procurado praticas integrativas e complementares como o Reiki, tecnica de imposicao de maos, para o controle de doencas cronicas e melhora do bem estar. Com o objetivo de avaliar se a terapeutica Reiki poderia produzir alteracoes psicofisiologicas e de qualidade de vida em idosos com sintomas de estresse este estudo, que durou oito semanas, mensurou em um grupo de voluntarios que receberam Reiki e um grupo que recebeu um tratamento Placebo, respostas psicologicas como niveis de estresse, ansiedade, depressao, percepcoes de tensao e bem estar, qualidade de vida, alem de respostas fisiologicas como temperatura periferica, tensao muscular e condutancia eletrica da pele. O conjunto dos resultados obtidos sugere que a terapeutica Reiki produz alteracoes psicofisiologicas e de qualidade de vida em idosos compativeis com uma reducao significativa de estresse / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:49Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-07-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Objetivos: Comparar a efetividade e tolerância da sinovectomia radioisotópica realizada pelo 90Y e pelo 153SmPHYP associados ao HT no tratamento de sinovite crônica de joelhos em pacientes com artrite reumatoide (AR). Material e Métodos: 84 pacientes com AR (90 joelhos) com sinovite crônica de joelhos participaram de um estudo controlado, randomizado, duplo-cego. Os pacientes foram randomizados para receber infiltração do joelho guiada por fluoroscopia com 5 mCi de Ítrio-90 associado a 40 mg de hexacetonide de triancinolona (HT) (grupoY/HT) ou 15 mCi de Samário-153 hidroxiapatita associado a 40 mg de hexacetonide de triancinolona (grupo Sm/HT) ou 40 mg de hexacetonide de triancinolona isolada (grupo HT). Foram realizadas avaliações “cegas” dos pacientes no tempo inicial (T0), após uma (T1), quatro (T4), 12 (T12), 32 (T32), e 48 (T48) semanas da intervenção através dos seguintes instrumentos de avaliação: escala visual analógica (EVA) de dor e edema, rigidez matinal, amplitude de movimento, circunferência do joelho, Escala Visual Analógica de Melhora (EVAM) segundo o paciente e o avaliador, porcentagem de melhora segundo o paciente, questionário de avaliação funcional HAQ, questionário genérico de qualidade de vida SF-36, questionário de avaliação funcional Lequesne de joelho, consumo diário de diclofenaco e de prednisona, número de telefonemas para médico, número de idas ao hospital, número de efeitos adversos. Resultados: a amostra foi homogênea no tempo inicial e houve três perdas antes da intervenção. Houve diferença estatística entre os grupos apenas para a variável EVA de dor (p=0,022*), a favor do grupo Y/HT em relação ao grupo Sm/HT (p=0,025*) em T1 e em relação ao grupo HT (p=0,026*) em T48. O grupo Sm/HT apresentou mais efeitos adversos (p=0,042*) e o grupo HT apresentou mais efeitos adversos não relacionados com o procedimento (0,012*). Para outras variáveis não houve diferença entre os grupos. Conclusão: a sinovectomia radioisotópica do 90Y associado ao HT apresentou melhor resposta do que a do 153SmPHYP associado ao HT e do que a do HT isolado apenas em relação à dor. / Objectives. The aim of the present study was to investigate effectiveness of and tolerance to Yttrium-90 and Samarium-153-particulate hydroxyapatite radiation synovectomy in patients with rheumatoid arthritis (RA) and chronic knee synovitis. Methods. Eight-four patients (90 knees) with chronic knee synovitis and RA (according to the American College of Rheumatology criteria) participated in a controlled double-blinded trial. Patients were randomized to receive an intra-articular injection with either 5 mCi Yttrium-90 plus 40 mg of triamcinolone hexacetonide (Y/TH Group), 15 mCi Samarium-153-particulate hydroxyapatite plus 40 mg of triamcinolone hexacetonide (Sm/TH Group) or 40 mg triamcinolone hexacetonide alone (Control Group). Blinded examination at baseline (T0), one (T1), four (T4), 12 (T12), 32 (T32) and 48 (T48) weeks post-intervention was performed on all patients and included a visual analog scale (VAS) for joint pain and swelling, morning stiffness, range of motion, knee circumference, Likert scale, percentage of improvement, Stanford Health Assessment Questionnaire (HAQ), SF-36 Questionnaire, Lequesne index, use of non-steroidal anti-inflammatory drugs, use of oral corticosteroids, events and adverse effects, calls to the physician and hospital visits. Results. The sample was homogeneous at T0 and there were three withdrawals prior to the injections. No differences were found between groups for most variables. Regarding the variable pain (VAS), there was a significantly better response in the Y/TH Group versus the Sm/TH Group at T1 (p = 0.025*) and versus TH alone at T48 (p = 0.026*). The Sm/TH group exhibited more adverse effects (p = 0.042*), but these were mild and transitory. No severe adverse effects were reported during the follow up. Conclusion. With regard to pain, Yttrium-90 radiosynovectomy associated to TH provided better results than Samarium-153-particulate hydroxyapatite radiosynovectomy associated to TH as well as a better response than chemical synovectomy with TH alone. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Filosofia e Ciências Humanas, Programa de Pós-Graduação em Psicologia, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2015-02-05T20:15:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 328323.pdf: 4210748 bytes, checksum: 601e3a9d30043788b21d004d74997056 (MD5) Previous issue date: 2014 / O descontrole do sistema nervoso autônomo está na base de um número significativo de doenças e de disfunções psicofisiológicas, como o estresse crônico. O controle indireto do sistema nervoso autônomo tem se mostrado possível por meio de técnicas como a respiração controlada e a meditação mindfulness. Contudo, não foi encontrado na literatura um trabalho que combinasse, em um único protocolo de intervenção, as duas técnicas (respiração controlada e meditação mindfulness) e mensurasse esse efeito sobre a variabilidade da frequência cardíaca. Desta forma, nesta tese, investiga-se qual é o efeito da combinação da respiração controlada e da meditação mindfulness sobre a variabilidade da frequência cardíaca; em que são comparados à variabilidade da frequência cardíaca antes, durante e depois da intervenção com as técnicas. Três etapas são realizadas para responder às questões centrais: 1) Qual é o efeito da meditação mindfulness sobre a variabilidade da frequência cardíaca? 2) Qual é o efeito da respiração controlada sobre a variabilidade da frequência cardíaca? 3) Qual é o efeito da respiração controlada e da meditação mindfulness sobre a variabilidade da frequência cardíaca? Para cada etapa, participaram 40 indivíduos divididos em G1 (grupo experientes) e G2 (grupo não experientes). Além das medidas fisiológicas coletadas por meio do monitor cardíaco Polar ? RS 800®, foram coletadas também medidas psicológicas por meio da Escala de Estresse Percebido e da Escala de Humor de Brums. Como resultado da primeira etapa, é possível afirmar que, por meio da intervenção com a meditação mindfulness, ocorreu uma melhoria do estresse percebido e da maior parte das variáveis de G1 e G2 relacionadas aos estados de humor e da variabilidade da frequência cardíaca. Como resultado da segunda etapa, pode-se afirmar que, por meio da intervenção com a respiração controlada, ocorreu uma melhora do estresse percebido e dos estados de humor em G1 e G2. Contudo, com relação à variabilidade da frequência cardíaca, houve um incremento desta mesma em G1, o que não foi observado em G2. Como resultado da terceira etapa, que corresponde ao resultado central desta tese, observa-se, por meio da intervenção do protocolo que combina respiração controlada e meditação mindfulness, um efeito paradoxal sobre a variabilidade da frequência cardíaca, podendo, mediante a observação no periodograma de um "pico ressonante", ser indicado para o aumento da capacidade de atenção em sujeitos experientes.<br> / Abstract : The lack of control of the autonomic nervous system is the basis of a substantial number of illnesses and psychophysiological disorders such as chronic stress. The indirect control of the autonomic nervous system has been shown to be possible by means of techniques such as controlled breathing and mindfulness meditation. However, it was not found in the literature a work that combines, in a single intervention protocol, the two techniques (controlled breathing and mindfulness meditation) and measured this effect on heart rate variability. Therefore, this thesis investigates what is the effect of the combination of controlled breathing and mindfulness meditation on the heart rate variability; in which are compared the heart rate variability before, during and after the intervention with the techniques. Three stages are performed to answer the central questions: 1) What is the effect of mindfulness meditation on the heart rate variability? 2) What is the effect of controlled breathing on heart rate variability? 3) What is the effect of controlled breathing and mindfulness meditation on heart rate variability. For each stage participated 40 subjects divided into G1 (experienced group) and G2 (non-experienced group). Besides the physiological measurements collected by the Polar heart monitor - RS 800 ® psychological measures was collected through Perceived Stress Scale and Brums Mood Scale. As a result of the first stage it is possible to say that, through the intervention with mindfulness meditation occurred an improvement in perceived stress and most of the G1 and G2 variables related to mood states and heart rate variability. As a result of the second stage can be affirmed that, through the intervention with controlled breathing, there was an improvement in perceived stress and mood states in G1 and G2. However, in relation to heart rate variability occurred an increment in G1, which was not observed in G2. As a result of the third stage, which corresponds to the central result of this thesis, it is observed through the intervention protocol that combines controlled breathing and mindfulness meditation a paradoxical effect on heart rate variability, that may, by noticing a "resonant peak" in the periodogram, be indicated to increases the attention capacity in experienced subjects.

Made available in DSpace on 2014-12-05T18:36:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) luciana_miranda_ipec_mest_2011.pdf: 2273487 bytes, checksum: 2458e3ceb6d02fad0808bbad9e7f3bd5 (MD5) Previous issue date: 2014-10-07 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas, Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os antimoniais pentavalentes representam a principal opção para tratamento das leishmanioses, sendo utilizado no Brasil, o antimoniato de meglumina (Glucantime\F0D2). A variabilidade da resposta ao tratamento pode estar condicionada a fatores relacionados ao hospedeiro, aos parasitas ou mesmo aos esquemas terapêuticos empregados. Neste estudo, avaliamos amostras de Leishmania (Viannia) braziliensis em ensaios in vitro quanto à sensibilidade ao antimoniato de meglumina. Foram comparadas as DL50 observadas, tanto para formas promastigotas quanto para formas amastigotas, de amostras isoladas no momento do diagnóstico antes do tratamento (amostra A) e de amostras isoladas após o primeiro ciclo de tratamento (amostra B). Sete pares de amostras (A e B) foram selecionados, sendo quatro isolados de pacientes com falha terapêutica e três de pacientes com reativação. As formas promastigotas foram expostas a concentrações de antimoniato de meglumina entre 3,955 \03BCg e 8,1 mg/mL e avaliadas após 24 e 48 horas de exposição. As formas amastigotas, em macrófagos murinos, foram expostas a concentrações de 20, 40 e 80 \03BCg/mL de antimoniato de meglumina, cuja cinética de infecção foi avaliada em intervalos de 0, 24, 48 e 72 horas, baseada em dois parâmetros: percentual de células infectadas e número médio de amastigotas por macrófago Todas as amostras B de formas promastigotas apresentaram valores da DL50 superiores aos obtidos com as amostras A, exceto para as amostras de um paciente. Nos ensaios com formas amastigotas, as amostras B apresentaram valores da DL50 mais elevados que a amostra A em 4 casos, com aumentos que variaram de 17 a 20% em 3 pacientes e de 100% em um caso. Nos demais pacientes, os valores da DL50 de A e B foram semelhantes. Dos sete pacientes estudados, um abandonou o tratamento e seis apresentaram cura, após retratamento, pelo uso da Anfotericina B (4 casos) ou antimoniato de meglumina (2 casos). Não foi possível correlacionar os resultados obtidos neste estudo com a clínica ou a resposta ao tratamento. É possível que outros fatores relacionados aos pacientes, tais como a condição imunológica e a resposta frente à infecção possam influenciar na resposta à terapêutica antimonial / Pentavalent antimonials are the first drug of choice for leishmaniasis treatment and in Brazil meglumine antimoniate (Gl u cantime  ) is used. The variability of the re sponse to treatment may be conditioned to factors related to the host, the parasites or even the therapeutic plan. In this study we assessed the susceptibility to meglumine antimoniate of samples of Leishmania (Viannia) braziliensis in in vitro tests. We compared the DL 50 of both promastigote and amastigote forms of samples isolated at diagnosis before treatment (sample A ) and samples isolated after the first cycle of treatment (sample B ). Seven pairs of samples ( A and B ) were selected, four isolated from patients with treatment failure and three from patients with reactivation. The promastigote forms were exposed to meglumine antimoniate concentrations between 3,955 μg and 8,1 mg/mL and were assessed after 24 and 48 hours of exposition. The amastigotes, in murine macrophages, were exposed to concentrations of 20, 40 and 80 μg/mL of meglumine antimoniate, and the infection kinetics was assessed at time intervals of 0, 24, 48 and 72 hours, through two parameters: percentage of infected cells and average numbe r of amastigotes per macrophage. All B samples of promastigotes presented DL 50 values higher than those obtained with A samples, except for one patient. In tests with amastigotes, the B samples showed higher DL 50 values than sample A in 4 cases, with incr eases ranging from 17 to 20% in 3 patients and 100% increase in one case. In other patients, DL 50 values of A and B were similar. One of the seven patients studied abandoned treatment and six were clinically healed after retreatment with Anphotericin B (4 cases) or meglumine antimoniate (2 cases). It was not possible to correlate the results of this study with the clinics or response to treatment. It is possible that other patient related factors such as immunological condition or response to infection may influence the response to antimonial treatment

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-15T18:38:01Z No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_FlaviaFernandaBubulaCouto.pdf: 1019436 bytes, checksum: 5193b8188e8f866ddd717bb135bc3fee (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-15T18:38:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_FlaviaFernandaBubulaCouto.pdf: 1019436 bytes, checksum: 5193b8188e8f866ddd717bb135bc3fee (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-15T18:38:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_FlaviaFernandaBubulaCouto.pdf: 1019436 bytes, checksum: 5193b8188e8f866ddd717bb135bc3fee (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-15T18:38:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_FlaviaFernandaBubulaCouto.pdf: 1019436 bytes, checksum: 5193b8188e8f866ddd717bb135bc3fee (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / Atualmente, a droga utilizada no tratamento da esquistossomose é o praziquantel (PZQ). Alguns casos de isolados de S. mansoni resistentes ao PZQ no campo e em laboratório já foram relatados. Estes relatos refletem uma parcela ínfima do problema real, devido às dificuldades para a comprovação dessa resistência em condições de laboratório. Recentemente, nosso grupo conseguiu induzir resistência, em laboratório, a uma cepa de S. mansoni, utilizando sucessivos tratamentos com PZQ em B. glabrata infectadas com o S. mansoni (cepa LE-PZQ). Diante disso, este trabalho teve como objetivo geral avaliar a resistência/ suscetibilidade da cepa LEPZQ ao longo de seu desenvolvimento no hospedeiro vertebrado bem como avaliar a ação do PZQ em cercárias sensíveis e resistentes ao PZQ a fim obter um teste rápido para detecção de resistência e, por fim, estudar o envolvimento das proteínas SMDR2, SmMRP1 e SmMVP na resistência do S. mansoni ao PZQ. Para isso, camundongos infectados com a cepa LE-PZQ ou com a cepa suscetível (LE) foram tratados com PZQ após 2, 6, 16, 23 e 45 dias de infecção. Os resultados mostraram maior recuperação de vermes da cepa resistente tratadas com PZQ após 16 e 23 dias de infecção em comparação com a cepa LE. Outro objetivo do nosso estudo foi avaliar a perda da cauda de cercárias LE e LE-PZQ após 1 e 2 horas de contato com o PZQ em diferentes concentrações. Cercárias LE-PZQ apresentaram uma perda da cauda estatisticamente menor após exposição nas diferentes concentrações de PZQ por 1 ou 2 horas. Artigos sobre resistência à multidrogas (MDR) têm sido importantes para estudo de resistência em diversos organismos. Por isso, investigamos os níveis de RNA de SMDR2 e SMRP1 por qRT-PCR. SMDR2 mostrou níveis maiores em fêmeas quando comparados com machos e vermes em pares na cepa LE. Na cepa LE-PZQ, vermes fêmeas apresentaram níveis maiores quando comparados apenas com vermes machos. Quando comparadas as duas cepas, a resistente apresentou níveis estatisticamente maiores em machos, fêmeas e vermes em pares. SmMRP1 demonstrou expressão significativamente maior em machos e machos e fêmeas nas duas cepas quando comparados com fêmeas. Na comparação entre a cepa sensível e a resistente, a LE-PZQ apresentou maiores níveis de expressão em machos e vermes em pares. Investigamos também os níveis de RNA e proteínas de SmMVP. Foi possível observar que SmMVP está diferencialmente expressa entre machos, fêmeas e vermes em pares quando comparados entre si em cada cepa e quando compara-se cepa sensível e resistente. / Currently, the drug of choice in schistosomiasis treatment is Praziquantel (PZQ). Some cases of S. mansoni resistant strains to PZQ in field and laboratory have been already reported. These cases reports reflect a small parcel of the real problem due to the difficulty to prove this resistance in laboratory conditions. Recently, our group induced resistance in a S. mansoni strain using successive PZQ treatments in B. glabrata infected, under laboratory conditions (LE-PZQ strain). Thus, this work aimed to evaluate the resistance/ susceptibility of the LE-PZQ strain during its development in the vertebrate host as well as to evaluate the PZQ action in susceptible and resistant cercarie in order to obtain a rapid test to detect resistance, and lastly to study the involvement of SMDR, SmMRP1 and SmMVP proteins in the S. mansoni resistance to PZQ. For that, mice were infected with LE-PZQ strain or susceptible strain (LE) and treated with PZQ after 2, 6, 16, 23 and 45 days of infection. The results showed a bigger worm recovery when it was treated after 16 and 23 days of the infection when compared with susceptible strain. We also aimed to evaluate tail loss of LE and LE-PZQ cercarie after exposure to PZQ for 1 or 2 hours in different concentrations. LE-PZQ cercarie showed a statistically smaller tail loss after PZQ exposure in all concentrations for 1 or 2 hours. Works about multidrug resistance (MDR) have been important to studies of resistance in several organisms. Therefore, we investigated levels of RNA for SMDR2, SmMRP1 and SmMVP using RT-PCR. Females showed high levels of expression when compared to males and paired worms in the LE strain. In the LE-PZQ strain, female worms showed high levels of expression only when compared to male worms. When compared both strains, the resistant showed high levels of expression in males, females and paired worms. SmMRP1 showed upregulated in males and paired worms in both strains when compared to females. In the susceptible and resistant strain comparison, LE-PZQ strain showed high levels of expression in male and paired worms. We investigated also RNA and proteins levels for SmMVP. It was possible to observe that SmMVP was found differentially expressed in adult males and females from the susceptible strain.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-16T17:33:23Z No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_LídiaMariadeAndrade.pdf: 11453373 bytes, checksum: 44afceab2d00fc571d9eff405707ed38 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-16T17:33:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_LídiaMariadeAndrade.pdf: 11453373 bytes, checksum: 44afceab2d00fc571d9eff405707ed38 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-16T17:33:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_LídiaMariadeAndrade.pdf: 11453373 bytes, checksum: 44afceab2d00fc571d9eff405707ed38 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-16T17:33:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_LídiaMariadeAndrade.pdf: 11453373 bytes, checksum: 44afceab2d00fc571d9eff405707ed38 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / A radioterapia é uma modalidade importante para tratar o câncer de Cabeça e Pescoço, no entanto falhas do tratamento já foram observadas e recorrência da doença é comum. Novas abordagens para melhorar os efeitos benéficos de radioterapia têm sido desenvolvidas e terapia gênica surge como uma ferramenta importante para atingir esse objetivo. Apesar de modelos in vitro serem úteis para entender os efeitos da radiação em níveis celulares um modelo mais próximo ao esquema de irradiação clínica, que permita reproduzir irradiação diária, é necessário. Sinais de cálcio no núcleo têm demonstrado desempenhar um papel crucial em células de mamíferos por regularem a expressão de genes envolvidos na proliferação celular, e ja foi também demonstrado que o tamponamento de Ca2+ nuclear prejudica o crescimento das células cancerosas in vitro, bem como in vivo. O objetivo deste estudo foi desenvolver um protocolo in vitro que simulava radioterapia de cabeça e pescoço de acordo com parâmetros clínicos e investigar o papel do tamponamento de Ca2+ nuclear para aumentar o efeito antitumoral de raios-X em carcinoma de células escamosas humano. Para estes fins, células da linhagem celular A431 foram submetidas a dose acumulada de 10Gy de raios- X, em esquema de fracionamento diário de doses, (XRCd10Gy) ou em associação com o tamponamento de Ca2+ nuclear (Ca2+n). Análise do ciclo celular, ensaio de proliferação, a quantificação de lesões de DNA nuclear /mitocondriail, expressão de ADAM-17, a expressão de EGFR e fração de sobrevivência foram investigadas. Nosso modelo forneceu irradiações uniformes à monocamada de células, minimizando as incertezas, independente da posição dos frascos dentro de campo de irradiação, Todos os frascos receberam 100 ± 2% da dose calculada total. Descobrimos que XRCd10Gy induziu apenas 4,3 ± 0,3% de morte celular (SubG1), indicando radiorresistência. Após o tamponamento de Ca2+n a proliferação de células A431 diminuiu significativamente (p < 0,001) em comparação com o controle. Análise do ciclo celular mostraram que a associação do tamponamento Ca2+ n com XRCd10Gy aumentou a percentagem de células A431 em G2/M (35,7 ± 2,5 %), sem danos de DNA nucleares/mitocondrial aparentes. No entanto, o tamponamento de Ca2+n preveniu significativamente (p < 0,05) o aumento da expressão de ADAM -17 e a ativação do EGFR, induzidas por irradiação. Além disso, a terapia de associação diminui significativamente a formação de colônias das celulas A431 (91 ± 0,4 %), mesmo com cerca de metade da dose cumulativa. Os efeitos dos bloqueadores de integrina 4B4 e cRGD sobre a migração de células do melanoma humano da linhagem MV3 foram investigados, em cultivo celular 3D, mostrando que além de alterar a morfologia celular, o bloqueio das subunidades de integrina β1 e αvβ3 reduziram o índice de alongamento celular (3.8 ± 0.6 AU) quando comparado com o controle não tratado (8.5 ± 1.7 AU, p<0,001), bem como a velocidade média de migração 0.1 ± 0.06μm/minuto comparado ao controle não tratado 0.5 ± 0.1μm/minuto (p<0,001). Juntos, estes resultados contribuem para o desenvolvimento de nova estratégia de radioterapia para o tumor da cabeça e pescoço, com a combinação da terapia gênica e radiação ionizante, permitindo reduzir a exposição celular aos raios-X. / Radiotherapy is one important modality to treat Head and Neck cancer, however treatment failure has been observed and recurrence disease is common. New approaches to improve beneficial radiotherapy effects have been developed and gene therapy arises as an important tool to achieve this aim. Although in vitro models are useful to understand radiation effects at cellular levels one model more close to clinical irradiation schedule that allows reproduce daily irradiation is needed. Calcium signals in the nucleus have been demonstrated to play a crucial role in mammalian cells regulating the expression of genes involved in cell proliferation, and it also was demonstrated that the buffering of nuclear Ca2+ impairs the growth of cancer cells in vitro as well as in vivo. The aim of this study was to develop an in vitro protocol that simulated head and neck radiotherapy according to clinical parameters and investigate the role of nuclear Ca2+ buffering to enhance the antitumor effect of X-rays on Human Squamous Cell Carcinoma. For these purposes A431 cell line was submitted to 10Gy cumulative X-rays therapy alone (XRCd10Gy) or in association with nuclear Ca2+ buffering protocol (Ca2+n). Cell cycle analysis, proliferation assay, quantification of nuclear/mitochondrial DNA lesions, ADAM- 17, EGFR expression and survival fraction were investigated. Our model provided uniform irradiations to monolayer cells, minimizing uncertainties since independent of the flasks position inside irradiation field, all flasks received 100±2% of the total calculated dose. We found that XRCd10Gy induced only 4.3±0.3% of cell death (SubG1), indicating radioresistance. Upon Ca2+n buffering, A431 cell proliferation decreased significantly (p<0.001) as compared to control. Cell cycle analysis showed that association of Ca2+n buffering with XRCd10Gy increased the percentage of A431 cells at G2/M (35.7±2.5%) with no apparent nuclear/mitochondrial DNA damages. Nonetheless, Ca2+ n buffering significantly (p<0.05) prevented the increase in ADAM-17 expression and EGFR activation induced by irradiation. Furthermore, the association therapy significantly decreases the A431colony formation (91±0.4%), even using approximately half of the cumulative dose. The effects of Integrins blockage on human melanoma cell MV3 were investigated using 3D cell culture. There were phenotype alterations after blockage of β1 e αvβ3 integrins subunits using 4B4 and cRGD even reduction of elongation index (3.8 ± 0.6 AU) compared to untreated cells (8.5 ± 1.7 AU, p<0.001) as well as migration average speed was decreased 0.1 ± 0.06μm/minute after integrins blockage compared to untreated cells 0.5 ± 0.1μm/minute (p<0.001).Together, these findings contribute to the development of novel radiotherapy strategy to head and neck tumor, combining gene therapy with ionizing radiation, allowing reducing X-rays irradiation exposure

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-11-20T16:44:55Z No. of bitstreams: 1 Tunes.pdf: 27891545 bytes, checksum: 4feb76814de1de7da1d4a476de6f2134 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-11-20T16:45:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tunes.pdf: 27891545 bytes, checksum: 4feb76814de1de7da1d4a476de6f2134 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-20T16:45:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tunes.pdf: 27891545 bytes, checksum: 4feb76814de1de7da1d4a476de6f2134 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Rene Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / No Brasil, a doença de Chagas e as leishmanioses têm importante impacto na saúde pública. Os fármacos usados no tratamento dessas enfermidades apresentam limitações que tornam necessária a busca por novas alternativas terapêuticas. Nesse sentido, no presente estudo foram selecionados sete produtos naturais bioativos (PNB) e um derivado de produto natural (dPNB) e suas atividades tripanocida e leishmanicida foram determinadas e/ou confirmadas. A eleuterine, a tiofenonaftoquinona (TNQ) e a aurentiacina foram descritas como leishmanicidas pela primeira vez, sendo suas atividades antiamastigota de 99, 99 e 98 %, respectivamente. O lapachol, a chalcona 1 e a chalcona 2 tiveram o efeito leishmanicida confirmado com atividade de 85, 99 e 99 %, respectivavente. Nenhuma substância foi considerada ativa no modelo de T. cruzi utilizado. Devido às quantidades de substâncias disponíveis, apenas o lapachol e a TNQ tiveram seus mecanismos de ação leishmanicida estudados. As concentrações inibitórias de 50% (CI50) da TNQ foram inferiores àquelas do lapachol em promastigotas (2 e 25 μM), amastigotas recuperadas de lesão (22 e 224 μM) e amastigotas intracelulares (7,4 e 84 μM). A razão entre a CI50 em amastigotas intracelulares e macrófagos foi utilizada para o cálculo do índice de seletividade, sendo este 3,8 para o lapachol e 7,7 para a TNQ. Os PNB e dPNB leishmanicida foram avaliados quanto à atividade inibitória da enzima tripanotiona redutase (TR), sendo que nenhum foi capaz de inibir a enzima. Os efeitos induzidos por TNQ e lapachol sobre a atividade mitocondrial de promastigotas foram avaliados por citometria de fluxo e respirometria. O tratamento com lapachol induziu perda do potencial de membrana mitocondrial e reduziu o consumo de oxigênio pelos parasitos. Por sua vez, a TNQ não alterou esses parâmetros. Análises de microscopia eletrônica de transmissão mostraram que o tratamento com lapachol ou TNQ induziu danos no complexo de Golgi e na bolsa flagelar, formação de vesículas e perfil de autofagia. O lapachol, mas não a TNQ, também induziu alterações ultraestruturais nas mitocôndrias das promastigotas. Em conjunto, os resultados permitem propor que a mitocôndria seja um importante alvo celular para o lapachol. Uma vez que a TNQ não causou alterações na mitocôndria dos parasitos, mas induziu danos em outras organelas, pode-se propor que seu mecanismo de ação esteja relacionado à indução de estresse oxidativo. Este trabalho reforça a importância dos PNB na descoberta de novas substâncias bioativas, as quais podem ser objeto de estudos de mecanismos de ação, a fim de se expandir o conhecimento disponível para o processo de desenvolvimento de novos fármacos usados para o tratamento de endemias que afligem milhões de pessoas como as leishmanioses e a doença de Chagas. / In Brazil, Chagas disease and leishmaniasis cause great impact on public health. The drugs currently used to treat these diseases have limitations that make necessary the search for new therapeutic alternatives. In this context, seven bioactive natural products (BNP) and one derivative (BNPd) were selected for investigations. Their trypanocidal and leishmanicidal activities were detected or confirmed. Eleutherine, naphthothiophenquinone (TNQ) and aurentiacin had their leishmanicidal activity described for the first time in this study, reducing almost 100% of the parasites growth. Lapachol, chalcone 1 and chalcone 2 had their leishmanicidal activity confirmed. None were active on T. cruzi intracellular amastigote and trypomastigote model. Because of the available amounts of compounds, only lapachol and TNQ had their leishmanicidal mechanism of action studied. The inhibitory concentrations of 50% of the parasite growth (IC50) induced by TNQ were inferior of that of lapachol in promastigotes (2 μM and 25 μM), lesion derived amastigotes (22 μM and 224 μM) and intracellular amastigotes (7.4 μM and 84 μM). The ratio between the IC50 on macrophages and intracellular amastigotes was used to calculate the selectivity index, lapachol’s was 3.8 and TNQ’s was 7.7. The leishmanicidal BNP and BNPd were evaluated as to their ability to inhibit trypanothione reductase (TR) and none of the compounds were able to inhibit the enzyme. The effects induced by the compounds on promastigotes mitochondrial activity were assessed using flow citometry and respirometry. Treatment using lapachol induced loss of mitochondrial membrane potential and reduced oxygen consumption by the parasites. On the other hand, TNQ did not alter those parameters. Transmission electron microscopy showed that lapachol and TNQ induced damage to the Golgi complex, flagellar pocket, formation of vesicles and autophagy profile. Lapachol, but not TNQ, induced ultrastrucutral alterations on promastigotes mitochondria. These results suggest that mitochondria are an important target for lapachol. As TNQ did not alter the parasites mitochondrial function or structure, but induced important ultrastructural alterations in other organelles, we can assume that its mechanism of action could be related to induction of oxidative stress. The present work reinforces the importance of BNP in the discovery of new active compounds that can be used for mechanism of action studies, contributing to the knowledge required for drug development to treat diseases that afflict millions of people worldwide such as leishmaniasis and Chagas diseases

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-11-23T13:09:21Z No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_ClariceCarvalhoAlves.pdf: 3366605 bytes, checksum: 500faa250a99b7c383180d2bec4de2e8 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-11-23T13:09:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_ClariceCarvalhoAlves.pdf: 3366605 bytes, checksum: 500faa250a99b7c383180d2bec4de2e8 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-23T13:09:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_ClariceCarvalhoAlves.pdf: 3366605 bytes, checksum: 500faa250a99b7c383180d2bec4de2e8 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brazil / O desenvolvimento de uma vacina para a esquistossomose, juntamente com a quimioterapia, seria de grande impacto para o controle e eliminação da doença. Nesse sentido, vários antígenos do parasito já foram testados a fim de avaliar a capacidade dos mesmos em induzirem proteção contra a infecção pelo Schistosoma mansoni. Porém, apesar de alguns antígenos apresentarem bons resultados na proteção contra a infecção, esses nunca foram testados em modelos experimentais previamente expostos a antígenos do parasito. No caso da esquistossomose, isso seria importante já que os moradores de áreas endêmicas, população alvo de uma vacina para a doença, passam por repetidas infecções ao longo de suas vidas. Diante dessa necessidade, duas proteínas de tegumento de Schistosoma mansoni, Sm22.6 e Sm29, merecem destaque já que têm sido associadas à resistência à infecção e reinfeção em moradores de áreas endêmicas, e por terem induzido proteção parcial em ensaios envolvendo a imunização de camundongos C57BL/6 naïve. Portanto, este trabalho objetivou avaliar a habilidade das proteínas recombinantes, Sm22.6 e Sm29, em induzirem proteção em animais BALB/c que já tenham sido previamente infectados e tratados. Nós também avaliamos a capacidade das proteínas Sm22.6r e Sm29r em induzirem proteção em camundongos BALB/c naïve, já que nos trabalhos anteriores essas foram testadas em animais da linhagem C57BL/6. Nossos resultados demonstraram que, diferentemente dos trabalhos anteriores, a imunização de animais BALB/c naïve com Sm22.6r ou Sm29r não foi capaz de induzir proteção. Apesar disso, através de um ensaio de imunofluorescência, foi possível observar que os anticorpos produzidos, em resposta à imunização com Sm22.6r ou Sm29r, foram capazes de reconhecer a forma nativa dessas proteínas, na superfície do parasito. A imunização de animais, infectados e tratados, com Sm22.6r+Freund, embora tenha desencadeado uma resposta imune robusta, também não foi capaz de conferir imunidade protetora. Por outro lado, camundongos, infectados/tratados, imunizados com Sm29r+Freund apresentaram significativa redução da carga parasitária (proteção de 26%-48%) após três doses da vacina. Esta formulação vacinal induziu uma produção significativa das citocinas IL-2, IFN-γ, IL-17 e IL-4; uma resposta humoral vigorosa com produção de IgG, IgG1, IgG2a e IgE específicos; e um aumento significativo no percentual de células TCD4+ de memória central. Os adjuvantes Alum e MPL também foram formulados juntamente com a Sm29r. Os resultados demonstraram que somente a formulação vacinal Sm29r+Alum foi capaz de conferir proteção (29%-37%), desencadeando uma produção significativa de IL-2, IL-17 e IL-10, e um aumento do percentual de células TCD4+ produtoras de IFN-γ. Além disso, esses animais apresentaram níveis significativos de anticorpos específicos IgG, IgG1, IgG2a e IgE e um aumento significativo no percentual de células B de memória. Nossos resultados confirmam o papel imunoprotetor da proteína Sm29r, reforçando seu potencial como candidata vacinal. / The development of a vaccine against schistosomiasis together with chemotherapy would have a great impact in the disease control and elimination. In this sense, several parasite antigens have been tested in order to assess its ability to induce protection against Schistosoma mansoni infection. Despite the great results observed after mice immunization with those antigens, they have never been tested in mice previously exposed to the parasite antigens. In the case of schistosomiasis, this is an important assessment to be done, since the residents of endemic areas, target population of a schistosomiasis vaccine, are exposed to several infections through life. In this context, two parasite tegument proteins, Sm22.6 and Sm29, are promising candidates, that have been associated with resistance to infection and reinfection in individuals living in endemic areas, and also induce partial protection against schistosomiasis in immunization trials using C57BL/6 naïve mice. Therefore, this work aimed to evaluate Sm22.6r and Sm29r ability to induce protection in BALB/c mice previously infected with S. mansoni and treated with Praziquantel. We also evaluated the Sm22.6r and Sm29r ability to induce protection in BALB/c naïve mice, since, previous studies were performed in C57BL/6 strain. Unlike previous works, our results showed that neither immunization with Sm29r nor immunization with Sm22.6r induced reduction in parasite burden in BALB/c naïve mice. Nevertheless, an immunofluorescence staining assay demonstrated that antibodies produced in response to mice immunization with rSm22.6 or rSm29 were able to recognize the native proteins in the parasite surface. In infected and treated mice, the immunization with Sm22.6r plus Freund failed to induce protection, despite the robust immune response observed. In the other hand, infected and treated mice, immunized with Sm29r+Freund, presented a significant reduction in parasite burden (26%- 48% of protection). This immunization trial induced a significant production of IL-2, IFN-γ, IL-17 and IL-4 cytokines; a vigorous humoral response with a production of increased levels of specific IgG, IgG1, IgG2a and IgE antibodies; and a significant increase in the percentage of TCD4+ memory cells. Sm29r were also formulated with Alum and MPL adjuvants. The results of trials using these formulations demonstrated that only Sm29r+Alum vaccine formulation was able to confer protection (29%-37%), inducing a significant production of IL-2, IL-17 and IL-10 cytokines, and an increase in the percentage of TCD4+ IFN-γ + cells. Moreover, these animals produced higher levels of specific IgG, IgG1, IgG2a and IgE, and a significant increase in the percentage of B memory cells. Our results demonstrated that Sm29r retains its ability to induce protection in previously infected/treated mice, reinforcing its potential as a vaccine candidate.