Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El tratamiento de las infecciones nosocomiales se complica más cada día, debido a que los agentes etiológicos que las causan son principalmente bacterias multiresistentes. Dado que la resistencia está codificada por genes, es necesario conocer y actualizar sus frecuencias, lo que permitiría guiar el control de la resistencia antimicrobiana en recintos hospitalarios. Actualmente, para la detección de estos genes se utiliza principalmente la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR), la que requiere de controles positivos para la adecuada interpretación de sus resultados. Por ello, el objetivo de este estudio fue obtener controles positivos para dos genes de resistencia a tetraciclinas: tet(A) y tet(B) a partir dos cepas bacterianas resistentes a tetraciclinas: Pseudomonas aeruginosa y Pantoea agglomerans, detectando estos genes mediante PCR, secuenciándolos y comparando su identidad nucleotídica con datos del GenBank®. Los resultados obtenidos, mediante el programa Clustal W indican para tet(B) porcentajes de identidad nucleotídica mayores al 90%, mientras que para tet(A) fueron inferiores (78,79 y 83%). En consecuencia, se confirmó la presencia del gen tet(B) en las cepas estudiadas siendo factible su utilización como controles positivos, no siendo posible la obtención de cepas controles para tet(A)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-02-18Bitstream added on 2014-06-13T20:55:06Z : No. of bitstreams: 1 abla_ms_me_araca.pdf: 2846240 bytes, checksum: ffaac15bbba1c9145b215abe25edad01 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O presente estudo analisou o processo de reparo ósseo em cavidades ósseas experimentais realizadas em tíbias de coelho, quando implantado partículas de enxerto ósseo homógeno, tratadas com solução de tetraciclina. Foram realizadas análises histológicas e submetidas a tratamento estatístico após histometria. Os resultados mostraram que não houve, estatisticamente, diferenças significantes entre o grupo controle onde não houve nenhuma implantação, e o grupo tratado utilizando a tetraciclina. O processo de reparo ocorreu de maneira similar em ambos os grupos. Não houve reabsorção completa dos fragmentos ósseos implantados, permanecendo até o período estudado de 30 dias pós-operatórios. / The aim of the present study was to evaluate the bone repair process in experimental bone cavities which were realized in rabbit tibias when particles of homogenous bone graft were implanted and treated with tetracycline. Histolological analysis were carried out and undergone a statistical treatment after HISTOMETRIA. The results showed that the hydrochloric tetracycline didnþt interfered on the bone graft performance, which was used on the treatment of experimental bone defects. There wasnþt histological evidence of the decalcifier action of tetracycline; it could be the medicine exposion time of the bone graft. Evaluating the statistical results; it was observed that the tetracycline didnþt interfered on bone repair process, moreover its presence doesnþt cause delay or any significant interference that changes the healing process.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Programa de Pós-graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T01:47:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / A interação e clivagem de DNA por pequenas moléculas atraí grande atenção por parte da biotecnologia e biologia molecular, pois oferece novas ferramentas para a manipulação de ácidos nucléicos. Com esse propósito, o presente trabalho teve como objetivo investigar a interação e a clivagem de DNA (ao abrigo de luz e sob luz UV-A) por dois novos complexos de cobre(II) derivados do antibiótico tetraciclina e doxiciclina e do ligante heterocíclico 1,10-fenantrolina. Ambos os complexos Cu(dox)(phen) e Cu(tc)(phen) mostraram-se capazes de clivar DNA plasmidial em condições brandas de pH e temperatura e em concentrações na escala de micromolar, tanto ao abrigo da luz como sob luz UV-A. Nestas condições observou-se que os complexos foram capazes de provocar o surgimento de quebras-simples e também quebras-duplas na estrutura do DNA, sendo que estatisticamente, as quebras-duplas devem ser oriundas de quebras-simples não aleatórias. O mecanismo de clivagem mostrou-se dependente da geração de Espécies Reativas de Oxigênio. Os ensaios com T4 DNA ligase mostram que o DNA linearizado pelos complexos não pode ser ligado pela enzima, sugerindo também que o processo de clivagem deva ocorrer por um mecanismo oxidativo. Do ponto de vista cinético, os complexos ao abrigo de luz clivam o DNA rapidamente, diminuindo o tempo de meia-vida do DNA para menos de 20 minutos, o que sob luz UV-A, é menor que 30 segundos. Isso representa um aumento de quase 40 vezes na atividade de clivagem quando na presença de luz UV-A. Ambos os complexos mostraram depender da interação com o sulco maior do DNA para que o processo de clivagem ocorra. A titulação espectrofotométrica reforçou esta hipótese, indicando também que a constante de ligação dos complexos com o DNA é relativamente alta, embora muito menor se comparada à do brometo de etídio. Os ensaios de desnaturação térmica de DNA revelaram que os complexos ligam-se ao ácido nucléico mudando seu perfil de desnaturação em escala semelhante a de agentes não-intercalantes de DNA. Por fim, a espectroscopia de dicroísmo circular mostrou que ambos os complexos modificam a estrutura secundária do DNA, principalmente no que diz respeito ao empilhamento de bases do DNA.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-graduação em Odontologia / Made available in DSpace on 2012-10-23T17:51:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 249120.pdf: 4163991 bytes, checksum: e1a51764eebc35c01461ec93bbba7a11 (MD5) / A finalidade deste estudo foi avaliar os efeitos antimicrobianos e a biocompatibilidade da pasta endodôntica tripla preparada com tetraciclina (8mg), tiafenicol (26.67mg) e óxido de zinco (1.25mg) utilizada na Universidade Estadual de Londrina, Faculdade de Odontologia. Sete tipos de microorganismos (Bacilo cereus, Clostridium difficile, Escherichia coli, Fusobacterium nucleatum, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermis e C.albicans) obtidas da Coleção Americana de Cultura foram inoculadas no Agar e no caldo de carne de Mueller Hinton (laboratórios de Difco) e incubados a 35° C durante 24hs. Os cotonetes de algodão carregados com o caldo das bactérias ou fungos em suspensão (105-106 UFC/ml) foram inoculados nas placas de Agar de Muller Hinton que continham 5 furos (com diâmetro de 7.0 milímetros cortados dentro do gel do Agar). Cada um foi preenchido posteriormente, com as quantidades da pasta endodôntica e de seus componentes individuais dissolvidos em 50µl do dimetil sulfóxido (DMSO). O hidróxido de cálcio (8 mg dissolvido em 50µl de DMSO) foi testado também. Além disso, dois compostos foram testados concentrados, o tricresol formalina e o paramonoclorofenol canforado. O controle positivo foi considerado a tetraciclina o negativo o DMSO. As placas inoculadas com bactérias aeróbicas foram incubadas em 35ºC por 20 h na atmosfera normal. Aqueles inoculados às bactérias anaeróbicas foram incubados usando um sistema Anaeróbico de Gás Pak (Becton, Dickinson) em 35ºC para 72hs. Todos os materiais induziram zonas da inibição do crescimento. Óxido de Zinco e hidróxido de cálcio demonstraram a atividade antimicrobiana pequena. As zonas da inibição induzidas para o tricresol formalina e o paramonoclorofenol canforado eram similares àquela mostrada pela pasta endodôntica. Além da atividade antimicrobiana, pastas endodônticas com antibióticos devem ser biocompatíveis. A pasta e seus componentes foram implantados separadamente dentro de tubos de polietileno de 10 mm de comprimento e 1,3 mm de diâmetro, estéreis, no tecido subcutâneo de ratos com controle do experimento em intervalos de 3, 7, 15 e 30 dias. Em cada dia, 6 ratos foram utilizados, sendo 3 com implante das substâncias em quatro sítios localizados no dorso dos animais e 3 animais sham onde se implantou os tubos de polietileno vazios para observar-se a possibilidade de contribuição destes tubos em reação inflamatória desencadeada no tecido subconjuntivo. Os animais experimentais foram anestesiados intraperitonealmente com ketamina e xilazina (0,75ml/gr de peso). Foi realizada a tricotomia da região dorsal dos animais. Decorridos os períodos experimentais, os animais foram anestesiados com overdose do mesmo anestésico. Realizou-se biópsia excisional da área do implante, com até 10 mm de limite de segurança, seguindo um plano de cortes histológicos aleatórios e uniformemente isotrópicos, cortes conhecidos como ORIENTATOR dentro dos princípios da estereologia. Obteve-se então uma estimativa estatística da quantidade relativa de células inflamatórias presentes ou não dentro do sistema teste, obtendo-se como resultado a biocompatibilidade da pasta, sendo o óxido de zinco o elemento mais tóxico pela qualidade das células encontradas.

Made available in DSpace on 2015-01-26T13:21:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2000-06-16Bitstream added on 2015-01-26T13:30:29Z : No. of bitstreams: 1 000127963.pdf: 2973395 bytes, checksum: bf77aed8dd9ecaabebd918b848ba341a (MD5) / O objetivo deste estudo foi avaliar a influência da tetraciclina administrada a ratas prenhas no desenvolvimento hepático e renal de filhotes. Foram utilizadas quinze ratas sendo três controles e 12 tratadas. As ratas controle receberam injeções de solução fisiológica, enquanto as dos grupos experimentais foram tratadas com cloridrato de tetraciclina nas doses de 25, 50, 75 e 100mg/kg, via intraperitoneal, em dose única, no décimo dia da gestação. Os filhotes foram sacrificados ao nascer, com dez, vinte e trinta dias de vida. A análise histológica do fígado mostrou vacuolização, necrose, inflamação e dilatação sinusoidal principalmente em recém-nascidos. Mitoses, aumento precoce da população de células de Kupffer, hipertrofia de hepatócitos com maior síntese de glicogênio foram mais acentuadas nos filhotes com dez e vinte dias. No rim verificamos vacuolização tubular e necrose discretas, que ficaram mais evidentes nos recém-nascidos, e sinais de regeneração tubular aos dez e vinte dias. Os resultados sugerem que os órgãos estudados sofreram alterações morfológicas transitórias durante o desenvolvimento, mas revelaram indícios de regeneração ao longo do tempo / This study aims to evaluate the possible effects of tetracycline administered to pregnant rats on kidney and liver development of their offspring. Fifteen rats were used - three controls and twelve treated ones. The control group received saline injections while the experimental groups were administered tetracycline chlorhidrate in the doses of 25, 50, 75 and 100mglkg, intraperitoneally, in a single injection, on the tenth day of pregnancy. The sucking were sacrificed at birth and after ten, twenty and thirty days of life. The liver specimes showed vacuolizations, necrosis, inflammation and sinusoidal dilatations, more evident in the newborn. Mitosis, early increase of Kupffer cells population and hypertrophy of hepatocytes with greater synthesis of glycogen were present in the 10th and twentieth days of life. The kidney specimens showed slight tubular vacuolizations and necrosis, more prominent in the newbom, as well as signs of tubular regeneration at the tenth and twentieth days. These results suggest that the organs studied went through several transitory morphological changes during development but presented signs of regeneration along the first days of life

Orientador :Rosilene Fernandes da Rocha / Doutor

Orientador: Rosilene Fernandes da Rocha / Banca: Maria Rozeli de Souza Quirino / Banca: Carmelinda Schmidt Unterkircher / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a influência da tetraciclina administrada a ratas prenhas no desenvolvimento hepático e renal de filhotes. Foram utilizadas quinze ratas sendo três controles e 12 tratadas. As ratas controle receberam injeções de solução fisiológica, enquanto as dos grupos experimentais foram tratadas com cloridrato de tetraciclina nas doses de 25, 50, 75 e 100mg/kg, via intraperitoneal, em dose única, no décimo dia da gestação. Os filhotes foram sacrificados ao nascer, com dez, vinte e trinta dias de vida. A análise histológica do fígado mostrou vacuolização, necrose, inflamação e dilatação sinusoidal principalmente em recém-nascidos. Mitoses, aumento precoce da população de células de Kupffer, hipertrofia de hepatócitos com maior síntese de glicogênio foram mais acentuadas nos filhotes com dez e vinte dias. No rim verificamos vacuolização tubular e necrose discretas, que ficaram mais evidentes nos recém-nascidos, e sinais de regeneração tubular aos dez e vinte dias. Os resultados sugerem que os órgãos estudados sofreram alterações morfológicas transitórias durante o desenvolvimento, mas revelaram indícios de regeneração ao longo do tempo / Abstract: This study aims to evaluate the possible effects of tetracycline administered to pregnant rats on kidney and liver development of their offspring. Fifteen rats were used - three controls and twelve treated ones. The control group received saline injections while the experimental groups were administered tetracycline chlorhidrate in the doses of 25, 50, 75 and 100mglkg, intraperitoneally, in a single injection, on the tenth day of pregnancy. The sucking were sacrificed at birth and after ten, twenty and thirty days of life. The liver specimes showed vacuolizations, necrosis, inflammation and sinusoidal dilatations, more evident in the newborn. Mitosis, early increase of Kupffer cells population and hypertrophy of hepatocytes with greater synthesis of glycogen were present in the 10th and twentieth days of life. The kidney specimens showed slight tubular vacuolizations and necrosis, more prominent in the newbom, as well as signs of tubular regeneration at the tenth and twentieth days. These results suggest that the organs studied went through several transitory morphological changes during development but presented signs of regeneration along the first days of life / Mestre

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Las infecciones nosocomiales de origen bacteriano constituyen una preocupación constante y creciente tanto en el ámbito de la salud pública como en el de la salud animal, debido a que condicionan altas tasas de morbilidad y mortalidad. Entre los factores que explican esta condición, está el aumento de la resistencia bacteriana a los antibióticos, siendo cada vez más frecuente el fenómeno de multiresistencia en las cepas involucradas. Entre los antimicrobianos que han visto reducida su efectividad se encuentra el grupo de las tetraciclinas, fármacos de amplio espectro utilizados con diferentes fines terapéuticos. Las bacterias resistentes a estos antimicrobianos presentan genes denominados tet, describiéndose en la actualidad 43 de ellos que codifican, principalmente, proteínas de eflujo activo y proteínas de protección ribosomal. El objetivo de este trabajo fue la detección de cuatro genes de resistencia a tetraciclinas- tet(A) y tet(B), involucrados en la codificación de proteínas de eflujo y tet(M) y tet(O), involucrados en la codificación de proteínas de protección ribosomal- mediante la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR), en cepas bacterianas Gram negativas ambientales descritas como nosocomiales, previamente aisladas y caracterizadas en los años 2007 y 2008. La aplicación de esta técnica de biología molecular permitió detectar en cepas fenotípicamente resistentes mediante antibiograma por difusión en agar, al menos uno de los cuatro genes de resistencia a tetraciclinas. En un alto porcentaje de cepas con sensibilidad intermedia también se detectó al menos un gen de resistencia y en algunas cepas sensibles a tetraciclinas se obtuvo este mismo resultado. Los resultados de este trabajo señalan que la detección de genes tet complementaría la técnica del antibiograma de la Microbiología clásica en el estudio de la resistencia bacteriana a tetraciclinas

Tesis entregada a la Universidad De Chile en cumplimiento parcial de los requisitos para optar al grado de Magíster en Ciencias Biológicas. / El aumento en la aparición de microrganismos resistentes a los antibióticos es de gran preocupación en el ámbito de salud pública debido al aumento de la mortalidad y costos de tratamiento causado por las enfermedades que provocan. Se han detectado concentraciones de residuos de antibióticos sobre los niveles inhibitorios en aguas residuales, y los tratamientos actuales no son capaces de eliminar estos residuos. En relación con todo esto, los antibióticos de tipo tetraciclina son de gran interés debido a su alto uso, alto nivel de excreción y a su alta persistencia en el medio ambiente. Se ha reportado el uso de enzimas de tipo laccasa de hongos basidiomicetos para la oxidación de diferentes tetraciclinas mostrando distintas eficiencias. Sin embargo, las propiedades observadas aún están por debajo de lo requerido para una aplicación industrial y la optimización ha sido hasta ahora afrontada desde el ámbito de la Biocatálisis y no desde la Ingeniería de Enzimas. En este trabajo se estudió el uso de la laccasa del hongo ascomiceto Botrytis aclada expresada en P. pastoris para la oxidación de tetraciclinas, enzima que presenta una alta tolerancia a inhibición por iones cloruro y alta producción heteróloga. Se produjo y purificó la enzima y se probó su capacidad para oxidar oxitetraciclina e inactivar oxitetraciclina, clortetraciclina y tetraciclina. Bajo la hipótesis de que el sitio de unión de tetraciclinas corresponde al sitio canónico de las Laccasas y con la información disponible sobre el mecanismo catalítico, se modeló la interacción con estos 3 antibióticos y se calculó su energía de unión por métodos in silico. Además, las constantes de disociación de los distintos complejos fueron estudiadas in vitro mediante análisis de la inhibición competitiva ejercida por el antibiótico sobre la actividad de oxidación de ABTS de la laccasa. Observamos que la energía calculada correlaciona con la constante de disociación determinada para los tres antibióticos, mostrando una afinidad por Clortetraciclina > Tetraciclina > Oxitetraciclina. / The high apparition rate of antimicrobial resistant bacteria is of great concern for public health care due to the rise in mortality and the high cost associated to treat the illnesses caused by them. Antibiotic residual concentrations highly over the inhibitory levels have been detected in wastewaters. Now, wastewater treatment plants are not able to remove this kind of residues. In this matter, tetracycline antibiotics are of great concern due to their high use, high excretion rates and persistence in the environment. The use of Laccases from basidiomycetes for the oxidation of a variety of tetracyclines has been reported, showing variable performance. However, the observed oxidation rates are still under the required for industrial applications. Antibiotics removal has been optimized using approaches from the biocatalysis field and not from rational design enzyme engineer. In this work, we studied the use of laccase from Botrytis aclada, an ascomycete fungus, for the oxidation of tetracyclines. This enzyme shows high tolerance to chloride inhibition and high heterologous production rates. The enzyme was expressed and purified, and we proved its capacity to oxidase oxytetracycline and to inactivate oxytetracycline, and tetracycline. Having in mind the hypothesis that the binding site of tetracyclines is the canonical laccase active site, we modeled the interaction with those three antibiotics and calculated the energy of binding using in silico approaches. Also, we determined in vitro the dissociation constants of the complexes by analyzing inhibition kinetics using the antibiotic as a competitive inhibitor of the enzymatic ABTS oxidation. We observed a good correlation between the calculated Energy and the dissociation constants, showing higher affinity for Chlortetracycline > Tetracycline > Oxytetracycline. / CONICYT-PCHA/MagísterNacional/2016 – folio 22160435 y proyecto FONDEF-VIU16E0084. / Agosto 2019

Resumo: Os antibióticos, oxitetraciclina, tetraciclina, clorotetraciclina e doxiciclina, os estrógenos naturais, estrona, 17 β-estradiol, e o sintético 17 α-etiniletradiol tornaram-se objetos de estudo nos últimos anos devido aos impactos ambientais que podem causar, mesmo estando presentes em ambientes aquáticos em baixas concentrações provocando alterações biológicas através de diversos mecanismos de ação. Por este motivo, este trabalho teve como objetivo validar métodos para análise dessas substâncias em água superficial, água subterrânea e esgoto sanitário tratado. O método validado para análise de antibióticos baseou-se em cromatografia líquida com detector ultravioleta, foi utilizada extração em fase sólida com cartuchos Oásis-HLB, obtendo-se limites de quantificação de 6,5 ng L-1 para a oxitetraciclina e tetraciclina e 15 ng L-1 para clorotetraciclina e doxiciclina, em água superficial e água subterrânea, não foi possível a validação do método para esgoto sanitário tratado. A cromatografia líquida com detecção por fluorescência foi utilizada para a determinação dos estrógenos. A otimização do preparo das amostras foi obtida utilizando extração em fase sólida com cartuchos C18, o limite de quantificação para a estrona foi de 0,6 μg L-1 e de 6,25 ng L-1 para o 17 β-estradiol e 17 α-etinilestradiol, para as matrizes de água superficial, subterrânea e esgotos sanitário tratado. Os resultados referentes à validação do método mostraram níveis aceitáveis para a recuperação (entre 76 e 118%) e coeficiente de variação (entre 1 e 13%), o que atesta a exatidão e a precisão do mesmo para os níveis de concentração estudados, para todas as matrizes. No estudo em Campo Grande, as amostras de água superficial foram coletadas nos rios Lageado e Guariroba próximo aos pontos de captação do sistema de abastecimento público... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The antibiotics, oxytetracycline, tetracycline, chlortetracycline and doxycycline and the strogenes: naturals, estrone, 17β-estradiol, and the sinthetic 17 α-ethinylestradiol becaome object of study in the last years due to environmental impacts and serious health problems that they can cause, even when they are present in aquatic environment at low concentrations provoking biological changes though the several mechanisms of action. For this reason, this work had as goal certificate methods to analyze these chemicals in superficial water, subterranean water and treated sanitary drainage. The certificate method to antibiotic analyzes was based in liquid chromatography with ultraviolet detector, it was used extraction in solid phase with cartridge Oasis-HLB, obtaining with that limits to quantification of 6,5ng L-1 to the oxytetracycline and tetracycline and 15 ng L-1 and 6,25 ng L-1 to the 17 β-estradiol and 17 α-etinilestradiol, it was not possible the method validation for treated sanitary drainage. The liquid chromatographic with fluorescence detection was used to estrogens determination. The optimization os samples prepare was obtained using ecxtraction in solid phase with C18 cartridge, the limit of quantification to the estrone was 0,6 μg L-1 and 6,25 ng L-1 to the 17 β-estradiol and 17 α- ethinylestradiol, to the matrixes of subterranean water and treat sanitary drainage. In Campo Grande resource, the samples of capitation of superficial water were collected at the rivers Lageado and Guariroba next to the capitation places of public supplying system. Subterranean water samples and treated sanitary drainage were obtained at the campus of Universidade Federal de Mato Grosso do Sul. The results referring to the validation of the method shown acceptable levels to the recover (between 76 to 118%) and the variation coefficient (between 1 to 13%), these show... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Mary Rosa Rodrigues de Marchi / Coorientador: Nilva Ré Poppi / Banca: Maria Lúcia Ribeiro / Banca: Maria Lucia Arruda de Moura Campos / Banca: Marcia Cristina Bisinoti / Banca: Anne Helene Fostier / Doutor