Cette thèse s’inscrit dans le cadre de la thématique du Laboratoire de Pharmacognosie de l’UFR Pharmacie, au sein de l’Université de Bourgogne. Elle vise essentiellement la recherche de molécules d’origine végétale principalement des saponines biologiquement actives issues de la biodiversité tropicale. Dans ce contexte l’étude de plantes malgaches, Polycarpaea corymbosa Lamk. (CARYOPHYLLACEAE), Pittosporum verticillatum Bojer subsp. verticillatum (PITTOSPORACEAE), Solanum incanum L. et S. heteracanthum Dunal. (SOLANACEAE) a conduit à l’isolement de quinze glycosides naturels par les techniques de chromatographie solide-liquide, de chromatographie liquide à moyenne pression, de flash chromatographie, et de chromatographie liquide sous vide. Les structures ont été élucidées principalement par les techniques spectroscopiques de RMN-1D et -2D, et de spectrométrie de masse. Il s’agit de neuf saponines triterpéniques de type oléanane, parmi lesquelles sept sont des nouveaux composés naturels, ainsi que cinq saponines stéroïdiques de type spirostane et furostane, dont une nouvelle, et un glycoalcaloïde stéroïdique connu. Treize molécules isolées ont été testées en vue d’évaluer leurs activités cytotoxiques sur six lignées cellulaires cancéreuses humaine et animale. Nos résultats montrent que quatre d’entre elles possèdent une cytotoxicité significative sur les lignées HT-29, HCT 116, SW480, DU145, EMT6, et H9c2. / This thesis was carried out in the Laboratory of Pharmacognosy, in the Pharmacy section of the University of Burgundy. The principal theme of this laboratory is the research of natural compounds from tropical biodiversity, mainly saponins. In this context, the study of Malagasy plants, Polycarpaea corymbosa Lamk. (CARYOPHYLLACEAE), Pittosporum verticillatum Bojer subsp. verticillatum (PITTOSPORACEAE), Solanum incanum L. and S. heteracanthum Dunal. (SOLANACEAE) led to the isolation of fifteen natural glycosides by column chromatography, medium pressure liquid chromatography, flash chromatography, and vacuum liquid chromatography. The structures were elucidated mainly by the use of spectroscopic techniques, NMR-1D and -2D, and mass spectrometry. The compounds were characterized as nine triterpene saponins of the oleanane type, among them seven are new natural compounds, five steroid saponins of the spirostane or furostane type, among them one new, and one known steroid glycoalkaloid. Thirteen of compounds were tested for cytotoxicity against six human and animal cancer cell lines. Our results show that four of them have significant cytotoxicity on cell lines HT-29, HCT 116, SW480, DU145, EMT6, and H9c2.

Submitted by Ana Hilda Fonseca (anahilda@ufba.br) on 2016-09-15T15:28:18Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Caline Gomes Ferraz.pdf: 5892044 bytes, checksum: c69c009c9c27a1226b6cad92dfad11f6 (MD5) / Approved for entry into archive by Vanessa Reis (vanessa.jamile@ufba.br) on 2016-09-15T15:42:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação Caline Gomes Ferraz.pdf: 5892044 bytes, checksum: c69c009c9c27a1226b6cad92dfad11f6 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-15T15:42:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Caline Gomes Ferraz.pdf: 5892044 bytes, checksum: c69c009c9c27a1226b6cad92dfad11f6 (MD5) / Capes / O presente trabalho relata o estudo fotoquímico do extrato hexânico do caule de Clusia burle-marxii (Clusiaceae). O espécime foi coletado nas proximidades da Cachoeira do Fraga no município de Rio de Contas, Chapada Diamantina, Bahia. Do extrato hexânico do caule possibilitou o isolamento, identificação e determinação de algumas classes de metabólitos. Foram isolados dois triterpenos, quatro esteróides, dez benzofenonas e dez ésteres graxos. Estas substâncias foram obtidas por processos de fracionamento em coluna cromatográfica e cromatografia em camada delgada preparativa. Os triterpenos (Friedelina e Friedelinol), os esteróides (β- Sitosterol, Estigmast-5-eno-3β,7β-diol, Estigmast-5-eno-3β,7α-diol, Estigmast-7-en- 3β-ol-6-ona) e a benzofenona (Nemorosonol) foram identificadas por analises de RMN de 1H e RMN de 13 C, DEPT e por comparação com os dados descritos na literatura. Este procedimento foi usado para determinação estrutural do esteróide inédito Estigmast-7- en- 3β-ol-6-ona. Os ésteres graxos (Tetradeconoato de metila, Pentadeconoato de metila, Hexadecanoato de metila, Heptadecanoato de metila, Octadenoato de metila, Nonadeconoato de metila, Eicosanoato de metila e Docosonoato de metila) foram identificados após analise de EM. Para determinação estrutural da benzofenona inédita foram utlilizadas as técnicas de RMN de 1H e RMN de 13C, DEPT, HMBC, HSQC. / The present work described the phytochemistry study the wood hexane extracts studies of specie Clusia burle-marxii. The specie was collected nearby Cachoeira do Fraga in the Rio de Contas, Chapada Diamantina, Bahia, Brazil. The wood hexane extracts allowed the isolations, identification and structural determination of some metabolites class. Two triterpenes, four steroids, ten benzophenones, ten fatty esters. These substances were obtained by fractionation through preparative thin layer chromatographyc and chromatographyc column. The triterpenes ( Friedeline and Friedelinol), the steroids (β- Sitosterol, Stigmast-5-ene- 3β,7β-diol, Stigmast-5-ene-3β,7α-diol, and the benzophenone (Nemorosonol) were identified by 1H NMR and 13C NMR, DEPT analysis and comparson with the data from literature. This same procedure was used in the novel steroid Stigmast-7-en- 3β-ol-6- ona structural determination. The fatty esters (methyl tetradecanoate, methyl pentadecanoate, methyl hexadecanoate, methyl heptadecanoate, methyl octadecanoate, methyl nonadecanoate, methyl eicisanoate and methyl docosanoate) were identified by MS analysis. The structural determination of the new benzophenone was performed by NMR spectrocopyc techniques (1H NMR and 13C NMR, DEPT, HMBC, HMQC).

240f. / Submitted by Ana Hilda Fonseca (anahilda@ufba.br) on 2013-04-01T16:40:21Z No. of bitstreams: 1 teseErikaVersaoFinal.pdf: 196222025 bytes, checksum: 392c4cd58c8a5d154afc1f1036d99967 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Hilda Fonseca(anahilda@ufba.br) on 2013-04-24T17:20:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 teseErikaVersaoFinal.pdf: 196222025 bytes, checksum: 392c4cd58c8a5d154afc1f1036d99967 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-24T17:20:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 teseErikaVersaoFinal.pdf: 196222025 bytes, checksum: 392c4cd58c8a5d154afc1f1036d99967 (MD5) Previous issue date: 2011 / CNPq / Este trabalho descreve o estudo fitoquímico das fases hexânica, clorofórmica e acetato de etila obtidas do extrato metanólico de Erythroxylum rimosum, além da realização de testes de atividade biológicas (atividade antioxidante e o teste da letalidade da Artemia salina) com essas três fases. Descreve também o estudo fitoquímico com a fase clorofórmica obtida do extrato metanólico de E. betulaceum. A partir das folhas de E. rimosum foram isolados e identificados flavonóides tais como, quercetina, kaempferol-3-O-α-L-arabinofuranosídeo, catequina, epicatequina, quercetina-3-O-α-arabinofuranosídeo, quercetina-3-O-α-arabinopiranosídeo, quercetina-3-O-β-arabinopiranosídeo, quercetina-3β-glucopiranosídeo, kaempferol e quercetina-3-O-β-galactopiranosídeo. Foram ainda isolados e identificados nas folhas de E. rimosum, um alcalóide tropânico inédito (2β-acetoxi-3β,6α-dibenzoiloxitropano) e os ésteres de α-amirina e β-amirina, α-amirina, β- amirina e β-sitosterol. A partir do caule de E. betulaceum foram isolados 3-oxo (-)-manool, 3β-hidroxi (-)-manool e ent-2β,19- diidroxibeyer-15-en-1-one, bem como a vanilina. Estas substâncias foram isoladas através de métodos cromatográficos e a identificação estrutural foi realizada através da análise dos dados espectrométricos de RMN de 1H e de 13C uni- e bidimensional (DEPT, gHMQC, gHMBC, gCOSY 1H-1H, gTOCSY 1D, gNOESY 1D, HOMODEC), EM e IV, propriedades físicas (pf. e [α]D), e pela comparação desses dados com aqueles disponibilizados na literatura. / Salvador

Submitted by Ana Hilda Fonseca (anahilda@ufba.br) on 2013-04-03T14:46:18Z No. of bitstreams: 2 tese-Isley Fehlberg v1.pdf: 2026726 bytes, checksum: 5d2210e3344984bf208412e2419faae9 (MD5) Tese Isley Fehlberg Anexos.pdf: 28821560 bytes, checksum: 48517fb7676ccbd2c9605fcf24ff900c (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Hilda Fonseca(anahilda@ufba.br) on 2013-04-15T14:23:54Z (GMT) No. of bitstreams: 2 tese-Isley Fehlberg v1.pdf: 2026726 bytes, checksum: 5d2210e3344984bf208412e2419faae9 (MD5) Tese Isley Fehlberg Anexos.pdf: 28821560 bytes, checksum: 48517fb7676ccbd2c9605fcf24ff900c (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-15T14:23:54Z (GMT). No. of bitstreams: 2 tese-Isley Fehlberg v1.pdf: 2026726 bytes, checksum: 5d2210e3344984bf208412e2419faae9 (MD5) Tese Isley Fehlberg Anexos.pdf: 28821560 bytes, checksum: 48517fb7676ccbd2c9605fcf24ff900c (MD5) / CAPES / Os extratos etanólicos obtidos a partir das folhas e do caule de Myrcia guianensis foram particionados sequencialmente com hexano, diclorometano ou clorofórmio e acetato de etila. As fases em diclorometano e acetato de etila das folhas, bem como, as fases clorofórmica e hexânica do caule foram submetidas a vários procedimentos cromatográficos em coluna e em camada delgada preparativa. A partir da fase diclorometânica das folhas foram obtidos os sesquiterpenos 5-(6-metilheptan-2-ona)-biciclo-[3.1.0]-hexan-3-ona, 6-metil-5-(2-hidroxi-3-cloro-5-metilfenil)heptan-2-ona, 6-metil-5-(2-hidroxi-5-metilfenil)heptan-2-ona (sesquichamaenol) e oplopanona, sendo os dois primeiros inéditos. O estudo da fase acetato de etila resultou no isolamento do ácido gálico e dos flavonóides quercetina, quercitrina e guaijaverina. Da fase hexânica do caule foram isolados um sesquiterpeno aromático inédito do tipo cadinano, 7-hidroxi-5-isopropil-3,8-dimetil-2-metóxi-1,4-naftoquinona, e os esteróides β–sitosterol e seu derivado glicosilado, o daucosterol. A partir da fase clorofórmica foi isolada a lignana (-)-(8R,8’R)-9,9’-di-O-(E)-feruloil-secoisolariciresinol e sete triterpenos, sendo eles, ácido maslínico, ácido estáclico A e seu novo derivado p-cumárico, ácido 3β-trans-p-oxicumaroil-2α,23,29-triidroxi-olean-12-en-28-oico, ácido arjunólico e os derivados, ácido 3β-trans-p-oxicumaroil-2α,23-diidroxi-olean-12-en-28-oico, ácido 23-trans-p-oxicumaroil-2α,3β-diidroxi-olean-12-en-28-oico e o novo ácido 3β-trans-feruloil-2α,23-diidroxi-olean-12-en-28-oico. As estruturas destas substâncias foram determinadas e/ou identificadas por análises de Espectrometria no Infravermelho, Espectrometria de massas, RMN de 1H e 13C, DEPT 135º, HMBC, HMQC, COSY e NOESY. / Salvador

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The Lecythidaceae family consists of about 230 species, classified in some 10 genera. The species Cariniana domestica (Mart) Miers is one of several Jequitibá species, the oldest and millenary trees from Brazil. The present work developed studies with the aim of characterize the species when concerning to chemical aspects, in order to contribute to the knowledge improvement about Lecythidadeae family. The barks of C. domestica were collected in Tangará da Serra-MS. Exsiccate was archived as voucher specimen in the herbarium of Department of Biology at UFSM (SMDB 11818). Plant material was dried, crushed and powdered. The powder was submitted to hidroalcoolic maceration (7:3, v/v) and concentrated under reduced pressure. The remained aqueous extract was partitioned to obtain the fractions FCH2Cl2, F-AcOEt e F-BuOH. Chromatographic procedures led to the isolation of phytosterols (β-sitosterol + stigmasterol) and pentacyclic triterpenes (lupeol + β- amyrin), which were identified by means of spectroscopic (1H-NMR and 13C-NMR) and chromatographic (GC/MS and HPLC) methods. Additionally, the antioxidant capacity was evaluated by measuring its scavenging ability on DPPH and also using TBARS assay. Contents of total polyphenolic and flavonoid were measured as well as a chromatographic profile searching for phenolic substances was determined.. From F-CH2Cl2, DPPH assay revealed high scavenging ability with IC50 values that ranged from 6.5 ± 0.81 to 19.5 ± 1.32 μg/mL. IC50 values obtained with TBARS assay ranged from 11.11 ± 0.85 to 44.5 ± 2.31 μg/mL. Polyphenolic contents varied from 54.6 ± 0.33 to 309.3 ± 2.73 mg/g. Total flavonoid and condensed tannin contents varied from 12.0 ± 0.12 to 14.18 ± 0.1 and 131 ± 0.03 to 149.7 ± 0.22, respectively. HPLC analysis revealed the presence of gallic, caffeic and chlorogenic acids, as well as the flavonoids rutin, quercetin and kaempferol. The carotenoids lycopene and β- carotene were identified in dichloromethane fraction. The results revealed that the species C. domestica achieves antioxidant properties and the compounds identified for the first time for this species can be related to its popular uses. / A família Lecythidaceae consiste em cerca de 230 espécies, classificada em 10 gêneros. A espécie Cariniana domestica (Mart) Miers é uma das diversas espécies de Jequitibá, as árvores milenares mais antigas do Brasil. O presente estudo teve o objetivo de caracterizar quimicamente a espécie, visando contribuir para um maior conhecimento sobre a família Lecythidaceae. As cascas de C. domestica foram coletadas no município de Tangará da Serra-MS e o material foi catalogado sob o registro SMDB 11818 no departamento de Biologia da UFSM. O material vegetal foi seco, triturado e moído. O pó obtido foi submetido à maceração hidroalcóolica (7:3, v/v), seguindo-se de concentração em evaporador rotatório. A partição do extrato aquoso remanescente originou as frações F-CH2Cl2, F-AcOEt e F-BuOH. Os procedimentos cromatográficos de isolamento levaram à obtenção do fitoesteróis (β-sitosterol + estigmasterol) e triterpenos pentacíclicos (lupeol + β-amirina), os quais foram identificados por métodos espectroscópicos (1H-RMN e 13C-RMN) e cromatográficos (CG/EM e CLAE). Adicionalmente, foi avaliada a capacidade antioxidante frente ao radical DPPH, bem como utilizando o método do TBARS. Foram ainda realizadas dosagens investigativas quanto ao teor de polifenóis totais e flavonóides e um perfil cromatográfico para identificação de alguns compostos fenólicos também foi traçado. Os ensaios com o radical DPPH revelaram elevada capacidade seqüestradora de radicais livres, sendo que os valores de IC50 obtidos variaram de 6,5 ± 0,81 a 19,5 ± 1,32 μg/mL. No ensaio do TBARS, os valores de IC50 obtidos variaram de 11,11 ± 0,85 a 44,5 ± 2,31. A determinação de polifenóis totais revelou um teor variável de 54,6 ± 0,33 a 309,3 ± 2,73 mg/g. As determinações de flavonóides totais e taninos condensados variaram de 12,0 ± 0,12 a 14,18 ± 0,1 mg/g e 131 ± 0,03 a 149,7 ± 0,22, respectivamente. A análise por CLAE revelou a presença dos ácidos gálico, caféico e clorogênico, além dos flavonóides rutina, quercetina e campferol. Na fração diclorometano foram identificados os carotenóides licopeno e β-caroteno. Os resultados obtidos demonstram que a espécie C. domestica apresenta propriedades antioxidantes e os compostos identificados pela primeira vez para esta espécie podem estar relacionados com seus usos populares.

Submitted by JUHAN AUGUSTO SCARDELATO PEREIRA null (juhan_01@yahoo.com.br) on 2017-05-02T14:37:47Z No. of bitstreams: 1 TESE - Juhan.pdf: 6743117 bytes, checksum: 50e774d88c707774b6f0ab9bbb9969f8 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-05-03T20:25:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pereira_jas_dr_arafcf.pdf: 6743117 bytes, checksum: 50e774d88c707774b6f0ab9bbb9969f8 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-03T20:25:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pereira_jas_dr_arafcf.pdf: 6743117 bytes, checksum: 50e774d88c707774b6f0ab9bbb9969f8 (MD5) Previous issue date: 2017-03-31 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Cordia verbenacea DC. pertence à família Boraginaceae, a qual contém aproximadamente 100 gêneros com mais de 2.000 espécies. Ocorre ao longo de todo litoral brasileiro, sendo comum na Floresta Tropical Atlântica e possuindo vários nomes populares, sendo o mais comum erva-baleeira. É utilizada tradicionalmente para tratar vários processos inflamatórios. O laboratório Aché® desenvolveu um medicamento fitoterápico anti-inflamatório tópico à base do óleo essencial de C. verbenacea (Acheflan®) e a espécie está presente no Formulário Nacional de Fitoterápicos da Farmacopeia Brasileira. Considerando a relevância de estudos de variabilidade química para espécies medicinais e a ausência destes dados na literatura para C. verbenacea propomos realizar um estudo da dinâmica do metabolismo da espécie focado nas variações sazonal, circadiana e populacional. As folhas de C. verbenacea foram coletadas, secas, trituradas e submetidas à maceração com etanol (1:15 m/v). Posteriormente, foi realizada uma extração em fase sólida com o extrato etanólico seco obtendo-se 10 frações, as quais foram analisadas por CCD e CLAE-UV. A fração 4.1 foi escolhida para cromatografia em coluna originando 120 subfrações, das quais três estavam semipurificadas. Utilizando a técnica de CLAE preparativa foram purificadas quatro substâncias, sendo três obtidas com mais de 95 % de pureza (CLAE-UV). As substâncias foram analisadas por técnicas espectrométricas (UV, IV e RMN), sendo identificados os triterpenos cordialina A e cis-cordialina A e dois flavonoides, 4’,5-diidroxi-2’,3,5’,6,7-pentametoxiflavona ou 2’,5-diidroxi-4’,3,5’,6,7-pentametoxiflavona e a artemetina. Um método por CLAE-DAD foi desenvolvido e aplicado na análise dos extratos etanólicos dos estudos populacional, circadiano e sazonal, incluindo a obtenção de seus perfis cromatográficos e a quantificação das substâncias purificadas. Os estudos populacional, circadiano e sazonal evidenciaram diferenças quantitativas em relação as substâncias majoritárias após a análise cromatográfica, sendo a substância diidroxipentametoxiflavona encontrada em maior quantidade no espécimen 13II4 do estudo populacional, já no estudo circadiano o horário das 04:30 h apresentou maior rendimento e no estudo sazonal maior tendência de produção deste flavonoide no período de janeiro a março de 2015/2016, enquanto que para os triterpenos o espécimen 3IV1 apresentou maior rendimento no estudo populacional e os espécimens 2II5 e 3II5 maior rendimento no estudos circadiano e sazonal, sendo os períodos de março a maio de 2015 e janeiro a março de 2016 os de maior tendência de produção desses triterpenos. A análise quimiométrica evidenciou uma diferença quantitativa dos metabólitos não voláteis entre os espécimens. A análise estatística utilizando ANOVA evidenciou que o rendimento do extrato e o teor dos triterpenos e flavonoide são afetados pelos períodos do ano. Foram obtidos os óleos essenciais dos 27 espécimens do estudo populacional e dos sete espécimens dos estudos circadiano e sazonal. O teor de óleo essencial na droga vegetal e sua coloração (amarelo claro, amarelo, esverdeado e azul) variaram entre os espécimens analisados. A análise por CCD também evidenciou diferenças significativas entre eles. Os dados obtidos por CCD dos 27 espécimens do estudo populacional foram utilizados em análises por PCA e HCA, observando-se agrupamento dos espécimes de óleo de cor azul/esverdeados em relação aos demais óleos de cor amarela. Esses agrupamentos também foram verificados nas PCA e HCA obtidas com dados por CG-EM, evidenciando que a amostra do óleo essencial do espécimen 13I5 possui maior tendência de produção do trans-cariofileno e do α-humuleno. Os óleos de cor azul/esverdeados evidenciaram a presença de três substâncias específicas: elemeno, camazuleno e espatulenol. A análise estatística utilizando ANOVA evidenciou que o rendimento do óleo essencial e o teor de seus componentes são afetados pelos períodos do ano, mas não pelo ritmo circadiano. / Cordia verbenacea DC. belongs to the Boraginaceae family which contains about 100 genera with more than 2,000 species. C. verbenacea is popularly named erva-baleeira and occurs throughout the Brazilian coast including the Atlantic Rainforest. It is traditionally used to treat various inflammatory processes and was employed by Aché® laboratory for the development of Acheflan®, an anti-inflammatory topical medicine containing the essential oil of C. verbenacea. Considering the relevance of chemical variability studies for medicinal plants we propose to develop a study of the metabolism dynamics focused on seasonal, circadian and population variations. The leaves of C. verbenacea were collected, dried, crushed and macerated with ethanol (1:15 m/v). The solid phase extraction with ethanolic extract yielded 10 fractions which were analyzed by TLC and HPLC. Fraction 4.1 was selected for column chromatography yielding 120 subfractions. Four compounds were isolated using preparative HPLC-UV and three compounds presented high purity (≤95 %; HPLC-UV) and were analyzed by spectrophotometric techniques (UV, IR, NMR). Compounds were identified as the triterpenes cordialin A and cis-cordialin A and the flavonoides 4',5-dihydroxy-2',3,5',6,7-pentametoxiflavone or 2',5-dihydroxy-4',3,5',6,7-pentametoxiflavone and artemetin. An HPLC-DAD method was developed for the analysis of the ethanolic extract. The ethanolic extracts of seasonal, circadian and population studies were analyzed by HPLC-DAD. All these studies showed quantitative differences in relation to the majority compounds, being the substance dihydroxypentamethoxyflavone found in a larger quantity in specimen 13II4 of the population study, already in the circadian study the time of 04:30 h had a higher yield and in the seasonal study a greater trend of production of this flavonoid in the period from january to march of 2015/2016, while for the triterpenes the specimen 3IV1 presented higher yield in the population study and the specimens 2II5 and 3II5 greater yield in the circadian and seasonal studies, being the periods of march to may of 2015 and january to march of 2016 the ones of greater tendency of production of these triterpenes. The statistical analysis using ANOVA showed that the yield of the extract and the content of triterpenes and flavonoid were affected by the periods of the year. Essential oils were obtained from the 27 specimens from the population study and the seven specimens from the circadian and seasonal studies. The essential oil content in the plant drug and its color (light yellow, yellow, green and blue) differed among the specimens. The TLC analysis also showed significant differences among the oils. Data obtained by TLC analyzes of the 27 specimens of the population study were used in PCA and HCA analyzes that showed two groups of oils - blue / green oil specimens and yellow color oil specimens. These clusters were also verified in PCA and HCA obtained with GC-MS data, evidencing that the sample of the 13I5 of the specimen has a greater trend of production of trans-caryophyllene and α-humulene. The blue/green oils showed the presence of 3 specific compounds: elemene, camazulene and spatulenol. The statistical analysis using ANOVA showed that the yield of the essential oil and the content of its components were affected by the periods of the year, but not by circadian rythm. / FAPESP: 2013/24298-9

Made available in DSpace on 2015-05-14T13:00:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2908035 bytes, checksum: 4dbd755d009a041e3acce2fdd866be83 (MD5) Previous issue date: 2011-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The species Combretum fruticosum (Loefl.) Stuntz belongs to the Combretaceae family and is popularly known as pente de macaco or mufumbo , it´s a neotropical plant, which can be found from Mexico until Argentina. This work describes the isolation and structural identification of a few chemical constituents of Combretum fruticosum (Loefl.) Stuntz aerial parts, with the objective of increasing the chemotaxonomic knowledge of the genus Combretum, as well as the family Combretaceae, besides doing biological studies with the isolated substances from this species. The phytochemical study of the Combretum fruticosum (Loefl.) Stuntz aerial parts led to the isolation of the compounds α-amyrin and β-amyrin (CF1), betulinic acid (CF2), α-spinasterol (CF3), spinasterol glycoside acetate (CF4), 132- hydroxy-(132-S)-phaeophytin-a (CF5) and 24-methylene cycloartanyl phydroxycinnamate (CF6). All of them reported for the first time on the genus, except for CF2. These compounds were identified by analysis of data obtained from spectroscopic methods such as infrared and NMR of 1H and 13C, with the aid of two dimensional techniques, besides comparison with literature data. On the biological study of Combretum fruticosum (Loefl.) Stuntz an evaluation of the antimicrobial activity from its crude extract has been made by the essay on agar diffusion against the bacteria and fungi Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Candida parapsilosis, Candida albicans, Candida krusei and Candida glabrata, which demonstrated antimicrobial activity against the fungus Candida krusei and the bacteria Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus and Enterococcus faecalis. Besides this essay, the evaluation of antitumoral activity in vitro with the substances CF1, CF2, CF3 and CF4 against Sarcoma 180 and K562 cells has been made, which did not show any citotoxic activity on concentrations until 200 μg/mL. / A espécie Combretum fruticosum (Loefl.) Stuntz , pertence a família Combretaceae e é conhecia popularmente por pente de macaco ou mofumbo ; é uma planta neotropical, que ocorre desde o México até a Argentina. O presente trabalho descreve o isolamento e identificação estrutural de alguns constituintes químicos das partes aéreas de Combretum fruticosum (Loefl.) Stuntz, com o objetivo de ampliar o conhecimento quimiotaxonômico do gênero Combretum, bem como da família Combretaceae; além de realizar estudos biológicos com as substâncias isoladas desta espécie. O estudo fitoquímico das partes aéreas de Combretum fruticosum (Loefl.) Stuntz levou ao isolamento das substâncias α-amirina e β-amirina (CF1), ácido betulínico (CF2), α-espinasterol (CF3), espinasterol glicosilado acetilado (CF4), 132-hidroxi-(132-S)-feoftina A (CF5) e o 24-metileno cicloartanil phidroxicinamato (CF6).Todos relatados pela primeira vez no gênero com exceção de CF2. Estes compostos foram identificados através da análise de dados obtidos por métodos como Infravermelho, RMN de 1H e 13C uni e bidimensionais, além de comparação com valores da literatura. No estudo biológico de Combretum fruticosum (Loefl.) Stuntz. realizou-se a avaliação da atividade antimicrobiana do extrato etanólico bruto através do ensaio de difusão em Agar frente as bactérias e fungos: Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Candida parapsilosis, Candida albicans, Candida krusei e Candida glabrata, onde demonstrou-se atividade antimicrobiana contra o fungo Candida krusei e contra as bactérias Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus e Enterococcus faecalis. Além deste ensaio, também foi realizada a avaliação da atividade antitumoral in vitro das substâncias CF1, CF2, CF3 e CF4 frente as células da linhagem Sarcoma 180 e K562, onde observou-se ausência de atividade citotóxica em concentrações até 200 μg/mL.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Neste trabalho à descrito o isolamento dos constituintes quÃmicos micromoleculares das folhas, talos e raÃzes de Combretum fruticosum (Combretaceae), popularmente conhecida como âescova-de-macaco-alaranjadaâ. O estudo fitoquÃmico da espÃcie, empregando mÃtodos cromatogrÃficos em coluna gravitacional e cromatografia liquida de alta eficiÃncia, permitiu o isolamento de nove constituintes quÃmicos pertencentes a diferentes classes estruturais: trÃs triterpenos de esqueleto oleanano identificados como Ãcido malÃnico, Ãcido oleanÃlico e Ãcido arjunÃlico, duas lignanas denominadas (-) trachelogenina e vladinol F, uma misturas dos esterÃides β-sitosterol e estigmasterol incluindo suas respectivas formas glicosiladas, uma lactona aromÃtica Ãcido 4â-O-Acetil-3â,3,4-tri-O-metilelÃgico e o flavonÃide apigenina 8-C-β-D-glicosÃdeo. A determinaÃÃo estrutural das substÃncias foi realizada atravÃs do uso de tÃcnicas espectromÃtricas como: infravermelho (IV), espectrometria de massa (EM e EM-IES) e ressonÃncia magnÃtica nuclear de hidrogÃnio (RMN 1H) e carbono-13 (RMN 13C), incluindo tÃcnicas bidimensionais (COSY, HSQC e HMBC) e comparaÃÃo com dados descritos na literatura. / This work describe the isolation of the chemical constituents from leaves, stems and roots of Combretum fruticosum (Combretaceae), popularly known as âescova-de-macaco-alaranjadaâ. The phytochemical studies, using chromatographic methods such as gravity column chromatography over silica gel and high performance liquid chromatography (HPLC), allowed the isolation and characterization of nine chemical constituents belonging to different structural class: three oleanane triterpenes identified as malinic acid, oleanolic acid and arjunolic acid; two lignans named (-)-trachelogenin and vladinol, the mixture of β-sitosterol e stigmasterol, including its glucoside forms, a aromatic lactone 4â-O-acetyl-3â,3,4-tri-O-methylelagic and the flavonoid apigenin 8-C-β-D-glucoside. The structural determination was realized by spectrometric techniques such as: infrared (IR), mass spectrometry (EM and EM-IES), and magnetic resonance of hydrogen (1H NMR) and carbon-13 (13C NMR), including bidimensional techniques (COSY, HSQC e HMBC) and comparison with literature

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / This work describes the phytochemical investigation of Hamelia patens (Rubiaceae) native from Guaramiranga montain, CearÃ, Brazil. Sucessive chromatographic treatment of the ethanol extract of leaves led to the isolation of the pentaciclic oxindole alkaloids pteropodine, isopteropodine, palmirine, and the new isopalmirine, besides the flavonoid kaempferol l-3-α-O-rhamnopyranosyl-(1-6)-β-D-galactopyranoside. The study of the ethanol extract of the stems led to the isolation of the steroids β-sitosterol and stigmasterol as mixture, stigmast-4-en-3,6-dione, and the triterpene ursolic acid. The ethanol extract of the trunk yielded vanillic acid and the β-sitosterol and stigmasterol glucosilated. The isolation of the chemical constituents were performed by the use of chromatographic techniques, including flash cromatography, thin layer crohromatography, preparative crhomatography, and preparative high performance liquid chromatography (HPLC). The strucutral charactherization were performed by the use of infrared, mass spectrometry and nuclear magnetic resonance, including one (1H NMR, 13C NMR and DEPT 135) and two-bidimensional pulse sequences (HMBC, HSQC, COSY e NOESY), and comparison with literature data. / Neste trabalho foi realizado a investigaÃÃo fitoquÃmica de Hamelia patens (Rubiaceae) nativa da Serra de Guaramiranga-CE. A realizaÃÃo de sucessivos tratamentos cromatogrÃficos a partir do extrato etanÃlico das folhas possibilitou o isolamento dos alcalÃides oxindÃlicos pentacÃclicos pteropodina, isopteropodina e palmirina, jà citados na literatura para a espÃcie, do alcalÃide isopalmirina de carÃter inÃdito na literatura, alÃm do flavonÃide canferol-3-O-α-L-rhamnopiranosil-(1→6)-β-D-galactopiranosÃdeo. O estudo do extrato etanÃlico dos talos possibilitou o isolamento dos esterÃides β-sitosterol e estigmasterol como mistura, do estigmast-4-en-3,6-diona, alÃm do triterpeno Ãcido ursÃlico. A partir do extrato etanÃlico do caule foram obtidos o Ãcido vanÃlico e a mistura de esterÃides β-sitosterol e estigmasterol glicosilados. Para o isolamento dos metabÃlitos secundÃrios foram empregadas tÃcnicas cromatogrÃficas convencionais como cromatografia em camada delgada, cromatografia filtrante, cromatografia flash, cromatografia preparativa e Cromatografia LÃquida de Alta EficiÃncia (CLAE). A caracterizaÃÃo estrutural dos compostos isolados foi realizada atravÃs de tÃcnicas espectroscÃpicas como infravermelho, espectrometria de massas e ressonÃncia magnÃtica nuclear, incluindo tÃcnicas uni (RMN 1H e RMN 13C e DEPT 135) e bidimensionais (HMBC, HSQC, COSY e NOESY), alÃm de comparaÃÃo com dados descritos na literatura.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Protium heptaphyllum March (Burseraceae), a medicinal plant commonly found in the Amazon and in the Northeast regions of Brazil, releases an oil-resin rich in pentacyclic triterpenes, such as the binary mixture of alpha- and beta- amyrin, that manifests antiinflamatory, antinociceptive and gastroprotective properties. This work was aimed to evaluate the antinociceptive effect of the alpha- and beta- amyrin mixture in the cyclophosphamide (400 mg/kg), acetic acid (0,6%, 10mL/kg, i.p.) and mustard oil-induced visceral nociception models in mice and to establish the likely mechanism(s) of action. In the cyclophosphamide-induced visceral pain model, pretreatment of mice with triterpene mixture at the oral doses of 10, 30 and 100 mg/kg significantly reduced (p<0.001) the pain-related behavioral expression time (59,7; 75,5 e 92,3%, respectively, versus the cyclophosphamide-treated group 12,25 +/- 2,98 min) in a dose-dependent manner. Suppression of visceral painârelated behaviors was also evidenced to the triterpenoid mixture (10 mg/kg) in the intraperitoneal acetic acid- and intracolonically injected mustard oil-induced test models of visceral nociception 50,4% e 61,1%, respectively compared to the acetic acid-treated group (42,33 +/- 3,78 abdominal constrictions/20 min) in the writhing test and to the control in the mustard oil (0,75%, 50 mcL/animal) experiment (39,28 +/- 3,26). In these tests, the maximal suppression of visceral pain was observed at 10 mg/kg. The possible mechanisms involved in the antinociceptive action of alpha- and beta- amyrin (10 mg/kg) were analyzed in the mustard oil-induced visceral pain model. In the evaluation of the opioid receptor involvement, both the triterpene mixture and morphine (5 mg/kg, s.c.) effectively inhibited (p<0.001) the number of pain-related behaviors, which could be significantly reversed by pretreatment of animals with an opioid antagonist naloxona (2mg/kg, i.p.), suggesting the opioid participation in the alpha- and beta- amyrin mechanism of action. In the study of the alpha2-adrenoreceptor involvement, the triterpene mixture as well as clonidine (0.1 mg/kg, i.p.), a known alpha2 agonist, inhibited (p<0.001) the nociceptive behavioral expression. However, when the animals were pretreated with yohimbine, an alpha2-adrenoreceptor antagonist, only the inhibitory action of clonidine was reversed, suggesting the non-participation of alpha2- adrenoreceptor in the antinociceptive action of alpha- and beta- amyrin. In the evaluation of TRPV1 receptor involvement, mice pretreated with either the alpha- and beta- amyrin, ruthenium red, a TRPV1 non-competitive antagonist, (3 mg/kg, s.c.) or their combination induced a significant and similar inhibition (p<0.001) of the number of nociceptive behaviors. The degree of inhibition with no potentiation or antagonism suggests that alpha- and beta- amyrin may act as a TRPV1 non-competitive antagonist, like ruthenium red. In order to evaluate a possible sedative, motor impairment and motor incoordination effects related to alpha- and beta- amyrin, the penthobarbitone-induced sleeping time, open-field and rota-rod tests were performanced, respectively. The data indicated that the treatment of animals with the alpha- and beta- amyrin mixture (10 mg/kg) was unable to cause sedation, motor impairment or motor incoordination effects (p>0.05), being even able to reverse (p<0.05) a mustard oil-induced motor impairment in the open field test. The results taken together strongly suggest the therapeutic potential of alpha- and beta- amyrin in oblitering visceral nociception through the mechanisms that involve the opioids and TRPV1 receptors. / O Protium heptaphyllum March. (Burseraceae), uma planta medicinal encontrada na regiÃo AmazÃnica e Nordeste do Brasil, produz uma resina rica em triterpenos pentacÃclicos, como a mistura binÃria alpha- e beta- amirina, que apresentam atividade antiinflamatÃria, gastroprotetora e antinociceptiva. Este trabalho objetivou investigar a atividade antinociceptiva de alpha- e beta- amirina em modelos de dor visceral induzida por ciclofosfamida, Ãcido acÃtico e Ãleo de mostrada em camundongos, alÃm dos possÃveis mecanismos de aÃÃo envolvidos. No modelo de nocicepÃÃo visceral induzida por ciclofosfamida (400 mg/kg, i.p.), a mistura de triterpenos nas doses de 10, 30 e 100 mg/kg, v.o., reduziu (p<0,001) de forma dose-dependente o tempo de expressÃo dos comportamentos relacionados à dor visceral (59,7; 75,5 e 92,3%, respectivamente, versus o controle ciclofosfamida 12,25 +/- 2,98 min). Realizou-se o estudo nos modelos de contorÃÃes abdominais induzidas por Ãcido acÃtico (0,6%, 10mL/kg, i.p.) e dor visceral induzida por Ãleo de mostarda (0,75%, 50 mcL/animal) intracolÃnico. Os resultados indicaram uma inibiÃÃo do nÃmero de comportamentos de dor expressos pelos animais, sendo o maior nÃvel de inibiÃÃo (p<0,001) encontrado na dose de 10 mg/kg da alpha- e beta- amirina 50,4% e 61,1% comparados respectivamente ao controle Ãcido acÃtico (42,33 +/- 3,78 contorÃÃes/20min) no teste de contorÃÃes abdominais e ao controle Ãleo de mostarda (39,28 +/- 3,26) no modelo de dor visceral por Ãleo de mostarda. Para o estudo do possÃvel mecanismo de aÃÃo de alpha- e beta- amirina foi utilizada a dose de 10 mg/kg da mistura de triterpenos no modelo de nocicepÃÃo por Ãleo de mostarda. Na avaliaÃÃo da participaÃÃo do sistema opiÃide, a mistura dos triterpenos e a morfina (5 mg/kg, s.c.) inibiram significativamente (p<0,001) o nÃmero de comportamentos de dor expressos, havendo uma reversÃo da antinocicepÃÃo (p<0,05) quando prÃ-tratados com naloxona (2 mg/kg, i.p.), sugerindo a participaÃÃo opiÃide no mecanismo da alpha- e beta- amirina. No estudo do envolvimento do sistema adrenÃrgico, a mistura de triterpenos e a clonidina (0,1 mg/kg, i.p.), um agonista alpha2-adrenÃrgico, inibiram (p<0,001) a expressÃo dos comportamentos nociceptivos. PorÃm, com o prÃ-tratamento com ioimbina, um antagonista alpha2, houve reversÃo (p<0,05) da antinocicepÃÃo induzida pela clonidina, mas nÃo da alpha- e beta- amirina, sugerindo o nÃo envolvimento deste receptor na antinocicepÃÃo da mistura de triterpenos. No estudo do envolvimento do receptor TRPV1, o prÃ-tratamento dos animais com alpha- e beta- amirina, vermelho de rutÃnio (3 mg/kg, s.c.), um antagonista nÃo competitivo deste receptor, ou com a combinaÃÃo da mistura de triterpenos com vermelho de rutÃnio, houve uma inibiÃÃo (p<0,001) semelhante, para todos os tratamentos, dos comportamentos de dor. A nÃo potencializaÃÃo, ou antagonismo, do efeito antinociceptivo de alpha- e beta- amirina pelo vermelho de rutÃnio sugere que a mistura atue como um antagonista nÃo-competitivo TRPV1. Para avaliar a existÃncia de um efeito sedativo, de um impedimento locomotor ou de uma incoordenaÃÃo motora, foram utilizados os testes do tempo de sono induzido por pentobarbital, teste do campo aberto e o teste do rota rod, respectivamente. Os dados indicaram que o tratamento com a mistura de triterpenos (10 mg/kg) nÃo induziu (p>0,05) sedaÃÃo, impedimento locomotor ou incoordenaÃÃo motora nos animais, sendo ainda capaz de reverter (p<0,05) o impedimento locomotor induzido pelo Ãleo de mostarda no teste do campo aberto. Em conjunto os dados revelaram a efetividade da mistura de alpha- e beta- amirina em modelos de nocicepÃÃo visceral possivelmente envolvendo receptores opiÃides e TRPV1.