315 f. / Submitted by Cynthia Nascimento (cyngabe@ufba.br) on 2013-02-25T16:25:03Z No. of bitstreams: 1 Antonio Marcos Pereira Brotas - tese.pdf: 13302736 bytes, checksum: 494d2eafd389d8a2cc596834d3a0ced7 (MD5) / Approved for entry into archive by Alda Lima da Silva(sivalda@ufba.br) on 2013-02-25T16:28:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Antonio Marcos Pereira Brotas - tese.pdf: 13302736 bytes, checksum: 494d2eafd389d8a2cc596834d3a0ced7 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-02-25T16:28:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Antonio Marcos Pereira Brotas - tese.pdf: 13302736 bytes, checksum: 494d2eafd389d8a2cc596834d3a0ced7 (MD5) / A presente pesquisa identifica e analisa os quadros acionados na cobertura realizada pelas revistas Veja, Isto É, Carta Capital e Época acerca da controvérsia sobre as células-tronco embrionárias, que teve maior exposição pública em função do julgamento da Ação Direta de Inconstitucionalidade (ADIN 3150) pelo Supremo Tribunal Federal. Parte-se da premissa de que, em situação de controvérsia, a publicização de quadros sobre a ciência e a tecnologia é ampliada, permitindo a sinalização de elementos ordinários da produção científica. Esses, geralmente, ficam submersos, quando vigora o modelo de cobertura jornalística centrado nos resultados de experimentos. Defendeu-se que a produção do conhecimento científico não é desconectada do social e, por isso, a rede heterogênea que os cientistas precisam formar para estabilizar seus fatos fica mais exposta, em época de controvérsia. A translação de interesse entre cientistas e os diversos agentes desta rede é fator indispensável para que ocorra esta estabilização. Rejeitou-se a compreensão do jornalismo, enquanto simples categoria de divulgação científica, por considerar esta classificação redutora das possibilidades do jornalismo em expor os diversos quadros da ciência e da tecnologia. Realizou-se então a análise qualitativa de quadros, tomados como pacotes interpretativos que expõe percepções marcadamente culturais sobre a ciência. A análise confirmou a hegemonia do quadro progresso, reiterando sua força cultural na definição da ciência. Os quadros político, ético e incerteza técnica também foram acionados. Identificou-se que a combinação entre o quadro progresso e os demais foi a forma mais recorrente de abordagem jornalística da controvérsia. Pesquisadores, jornalistas e pacientes apresentaram-se como os principais agentes atuantes no debate público, reforçando o quadro progresso, mesmo na presença dos quadros incerteza técnica e ético. O reforço do progresso deu-se também porque os opositores do uso de embrião humano nas pesquisas foram silenciados pelas revistas. Relevante ainda é o fato de a maior visibilidade de quadros da ciência ofertar pistas para a identificação de elementos da produção científica na cobertura. Demonstrou-se, todavia, que a exposição das ações dos cientistas nesta rede heterogênea de produção, não representou verdadeira oposição ao quadro progresso. Defendeu-se que exposição dos quadros pelo jornalismo mostrou-se efetiva justamente por ser o jornalismo um componente importante desta rede. A estabilização dos fatos científicos, em tempo de controvérsia, passa pelo jornalismo, visto como espaço relevante de construção e/ou difusão de quadros que reforçam, alimentam e/ou renovam a cultura científica contemporânea. / Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Comunicação. Salvador-Ba, 2011.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T07:44:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 290783.pdf: 23573020 bytes, checksum: 869ade48f72cd79f4dd6fe58a46ff16e (MD5) / A crista neural (CN) é uma estrutura transiente presente durante o desenvolvimento embrionário de vertebrados, sendo composta por um grupo de células originadas a partir das margens dorsais das pregas neurais durante o processo de neurulação. Os processos de migração e especificação das células da CN permitem classificá-las ao longo de todo eixo ântero-posterior do embrião: cranial, cardíaca, truncal e caudal; sendo que, cada região terá seus derivados específicos. Células da CN são células progenitoras altamente multipotentes que contribuem extensivamente para o desenvolvimento dos vertebrados dando origem a vários tipos celulares. Durante a neurulação, os progenitores originais da CN irão desaparecer junto com seu habitat inicial. Porém, mais tarde, locais como o dente aparecem como nichos tardios de progenitores oligopotentes derivados da CN, para manutenção e reparo destas estruturas, em vertebrados adultos. Neste trabalho, investigou-se in vitro a possibilidade de a polpa dental (PD) humana ser um possível nicho de CT/progenitoras da CN, sua característica mesenquimal e seu potencial de diferenciação e proliferação celular através de indução e análises fenotípicas das células da PD. A caracterizacão das células da PD como células-tronco mesenquimais foi observada, pelo potencial de diferenciação para fenótipos mesodermais (osteócitos, adipócitos e células de músculo liso), pela presença dos marcadores para CD73, CD90 e CD105 e ausência de CD45, avaliado por citometria de fluxo. As células da PD apresentam-se positivas para alguns marcadores de células-tronco embrionária (OCT4)e de células-tronco da CN (Snail, nestina), e negativas para outros (nanog; e p75e SOX 10, respectivamente) avaliado por RT-PCR e imunocitoquímica. Os resultados demonstraram ainda, que as células de PD apresentam potencial de diferenciação neural pois foram positivas por RT-PCR e imunocitoquímica para marcadores precoces de neuronio (-Tubulina III e Neurofilamento M) e de células gliais (P0), porém não apresentam os marcadores neuronais e gliais mais tardios (Periferina e GFAP, respectivamente). Todos os resultados foram semelhantes quando as células eram cultivas em meio padrão e o meio da CN. Em conjunto, os resultados sugerem que as células de PD utilizadas neste trabalho são células tronco mesenquimais. As células de PD apresentam ainda características de células da CN, avaliado pela presença dos marcadores Snail e nestina e pelo potencial de diferenciação em fenótipos derivados da CN como neuronal, glial e muscular liso. / The neural crest (NC) is a transient structure of vertebrate development, originated at the dorsal margin of the neural folds during neurulation. The NC are classified along the antero-posterior axis of the embryo in cranial, cardiac, truncal and caudal. Each region has its specific derivatives. NC correspond to a collection of highly multipotent progenitors that contribute extensively to the development of vertebrates and give rise to various cell types. During neurulation, the original progenitors of the NC will disappear along with their original habitat. However, in adult vertebrates, oligopotent NC progenitors appear as clusters in tissues such as the teeth, for maintenance and repair of these structures. In this study, we investigated the human dental pulp (DP) as a possible niche of NC stem cells (SC)/ progenitor cells. We also analyze their in vitro, potential for mesenchymal and neural differentiation, and proliferation. The results shown that DP cells could be characterized as mesenchymal SC by the presence of CD73, CD90 and CD105 and absence of CD45 in addition to their potential to differentiate in adipogenic and osteogenic mesenchymal phenotypes. Moreover, DP cells show the embryonic stem cell marker such as OCT4, and NC markers such as SNAIL and nestin, although there are negative for others (nanog and p75, SOX10, respectively). Taken together, the results demonstrate that DP cells are in fact mesenquimal stem cells, and also have some properties of NC cells such as the presence of the cell markers, SNAIL and nestin, and neural and smooth muscle differentiation potendial.

CARVALHO, Marcelo Alexandre. Estudo funcional das vias auditivas periféricas e centrais em pacientes com acromegalia. 2012. 35 f. Dissertação (Mestrado em Saúde Pública) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2012. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-04-29T15:35:40Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_macarvalho.pdf: 445649 bytes, checksum: 26ea8881b94352350bf83900f81dc84f (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-04-29T16:30:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_macarvalho.pdf: 445649 bytes, checksum: 26ea8881b94352350bf83900f81dc84f (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-29T16:30:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_macarvalho.pdf: 445649 bytes, checksum: 26ea8881b94352350bf83900f81dc84f (MD5) Previous issue date: 2012 / Acromegaly is a rare endocrine disease. Few studies have evaluated its association with hearing loss (HL) or disturbance in conduction of the auditory neural impulse. The results are conflicting. The aim is to evaluate central and peripheral auditory transmission in acromegalic patients. Besides, to evaluate the prevalence and characteristics of HL in patients with acromegaly. A cross-sectional study was carried out on 36 patients with acromegaly in a specialized ambulatory in Fortaleza-Ceará. Patients with abnormal otoscopy, family history of hearing loss, use of ototoxic drugs or occupational noise exposure were excluded. Initially, the group was evaluated by pure tone audiometry. HL was considered when pure tone average was > 25 DBHL for low frequencies (250, 500, 1000 e 2000 Hz) or high frequencies (3000, 4000, 6000 e 8000 Hz). The whole group was divided in: acromegaly with HL (Acro HL) and without HL (AcroNHL) and compared in regards to hormonal levels and metabolic parameters. Additionally that group of patients with acromegaly was divided into 2 subgroups: with (n=16) and without (n=20) diabetes mellitus/impaired glucose tolerance (DM/IGT). The results were compared among these subgroups and a control group (n=20) regarding the brainstem auditory evoked potentials (BAEP) parameters.Kolmogorov-Smirnov test was used to evaluate the normality of distribution when necessary. Qui-quadrado, Student t test and Pearson correlation coefficient were carried out. The level of statistical significance chosen was at p<0.05 (statistical package for social sciences-SPSS 12.0). Among 36 patients evaluated, 14 (38,9%) showed sensorioneural HL (Acro HL), being 9 bilateral and 5 unilateral cases. No one had mixed or conductive HL. The prevalence of diabetes/impaired glucose tolerance was similar between the groups. The frequencies 250, 3000, 4000, 6000 and 8000 Hz were the most affected and with a similar pattern in both ears. The group with acromegaly showed a prolonged peak I latency in the right ear in comparison to the control group (p=0,007), with no difference regarding the interpeak intervals in any sides. This pattern was the same when comparing the DM/IGT subgroup to controls. Also, we found a prolonged peak I latency in the right ear in relation to the left ear in the group with acromegaly.In conclusion, a high prevalence of sensorineural HL was shown in patients with acromegaly. Nevertheless, no correlation was observed between this dysfunction and clinical or metabolic characteristics of the disease. Patients with acromegaly associated with DM/IGT showed a delayed neural impulse in the auditory nerve unilaterally in the right side, evidencing a non-homogenous neuropathic effect of the carbohydrate metabolism disturbances on the auditory nerve. / Acromegalia é uma doença endócrina rara. Poucos estudos avaliaram sua associação com deficiência auditiva (DA) ou distúrbios de condução do impulso neural auditivo.Osresultados são conflitantes. O objetivo é avaliar a transmissão auditiva central e periférica em pacientes com acromegalia. Além disso, avaliar a prevalência e características da DA em pacientes com acromegalia. Foi feito um estudo transversal com 36 pacientes com acromegalia de um ambulatório especializado em Fortaleza-Ceará. Foram excluídos pacientes com otoscopia anormal ou com história familiar de deficiência auditiva, uso de ototóxicos ou exposição a ruído ocupacional. Inicialmente, o grupo foi avaliado por meio de audiometria tonal limiar. Considerou-se deficiência auditiva (DA) quando a média dos tons puros foi > 25DbNA para baixas freqüências (250, 500, 1000 e 2000 Hz) ou altas freqüências (3000, 4000, 6000 e 8000 Hz).O grupo foi dividido em: acromegalia com DA (Acro DA) e sem DA (Acro NDA) e comparados quanto aos níveis hormonais e parâmetros metabólicos. Posteriormente, este grupo de pacientes com acromegalia foi dividido em 2 subgrupos: com (n=16) e sem (n=20) diabetes ou intolerância à glicose de jejum (DM/IGJ). Os resultados foram comparados entre os subgrupos e grupo controle (n=20) quantos aos parâmetros dos potenciais evocados auditivos de tronco encefálico (PEATE). Para avaliar a normalidade da distribuição foi utilizado o teste de Kolmogorov-Smirnov quando necessário. Utilizou-se os testes qui-quadrado, t de Student e coeficiente de correlação de Pearson. O nível de significância estatística escolhido foi p<0.05 (statistical package for social sciences-SPSS 12.0). Dos 36 pacientes estudados, 14 (38,9%) mostraram DA sensorioneural (Acro DA), sendo em 9 casos bilateral e 5 unilateral. Nenhum apresentou DA mista ou condutiva. A prevalência de DM/IGJ foi similar entre os grupos. As frequências de 250, 3000, 4000, 6000 e 8000 Hz foram as mais afetadas e com padrão similar em ambos os lados.O grupo com acromegalia apresentou latência da onda I em orelha direita aumentada em comparação ao grupo controle (p=0,007), sem diferença quanto aos intervalos interpicos em nenhum dos lados. Esse padrão foi o mesmo quando se comparou o subgrupo com DM/IGJ com o controle.Também houve aumento da latência da onda I na orelha direita em relação à orelha esquerda no grupo com acromegalia. Em conclusão, mostrou-se uma elevada prevalência de DA sensorioneural em pacientes com acromegalia.No entanto, não se observou relação dessa deficiência com características clínicas e metabólicas da doença.Pacientes com acromegalia associada DM/IGJ mostraram um retardo no impulso neural no nervo auditivo unilateralmente à direita, evidenciando um efeito neuropático não homogêneo dos distúrbios do metabolismo dos carboidratos sobre o nervo auditivo.

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2012 / Bibliografia: f. 38-44 / Introdução: O tratamento definitivo da endometriose profunda ainda não está bem estabelecido. Diversos estudos experimentais vêm sendo desenvolvidos com o intuito de estabelecer novas perspectivas terapêuticas. Objetivos: Analisar o efeito das células-tro / Introduction: The definitive treatment of deep endometriosis is not yet well established. Several experimental studies have been conducted with the aim of establishing new therapeutic perspectives. Objectives: To analyze the effect of stem cells in bone m

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2005 / Inclui bibliografia / Introdução. As células-tronco mesenquimais (CTM) são células encontradas na medula óssea. Tais células têm ocupado posição de destaque na pesquisa clínica, podendo ser utilizadas em transplante celular, pois possuem o potencial de regeneração tissular. Pr

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2008 / Bibliografia: f. 389-417 / O presente trabalho tem por objetivo avaliar criticamente o modo pelo qual o Direito Brasileiro trata das pesquisas com células-tronco embrionárias, à luz do acúmulo e das experiências desenvolvidas no marco do Direito Internacional e Comparado. Analisara / This paper has for objective to do a critical evaluation in the way as the Brazilian Law treats the embryonic stem cells researches, considering the experiences developed in the mark of the International and Compared Law. The juridical aspects were analyz

COSTA, José Jackson do Nascimento. Expressão de marcadores de células germinativas e de oócitos em fibroblastos bovinos tratados com 5-aza-citidina e em células-tronco adultas cultivadas in vitro na presença de BMP-2, BMP-4 ou fluido folicular. 2016. 207 f. Tese (Doutorado em Biotecnologia)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2016-08-31T20:28:44Z No. of bitstreams: 1 2016_tese_jjncosta.pdf: 2424368 bytes, checksum: 8fb10f9a05f8f2bc642ce3964eb960d3 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2016-08-31T20:29:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_tese_jjncosta.pdf: 2424368 bytes, checksum: 8fb10f9a05f8f2bc642ce3964eb960d3 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-31T20:29:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_tese_jjncosta.pdf: 2424368 bytes, checksum: 8fb10f9a05f8f2bc642ce3964eb960d3 (MD5) Previous issue date: 2016 / This study aimed to investigate the effect of 5-Aza-cytidine during induction of pluripotency, and evaluate the effects of culture in medium containing BMP-2, BMP-4 or follicular fluid in the differentiation of fibroblasts in primordias germ cells (CGP) and oocytes (stage 1). Furthermore, isolation of stem cells from the bovine ovarian epithelium and evaluate the effects of BMP-2, BMP-4 or follicular fluid on the differentiation of these stem cells into structures similar to oocytes (stage 2). In phase 1, fibroblasts were treated with 0.5, 1.0 or 2.0 μM of 5-Aza for 18, 36 or 72 h. Morphology cell viability and gene expression (OCT-4, NANOG, SOX2 and REX), were assessed, for the selection of the concentration/time more efficient. The fibroblasts were then cultured in medium supplemented with 10 ng/mL BMP-2 or 10 ng/mL BMP-4 or 5% bovine follicular fluid by 7 or 14 days. Subsequently, evaluation of the morphology and cell viability was taken, and gene expression (VASA, DAZL, c-Kit, SCP3, ZPA and GDF-9). For phase 2, the stem cells of ovarian surface were isolated, expanded, grown in differentiation medium containing 50 ng/mL BMP-2 or 50 ng/mL BMP-4, or BMP-2+BMP-4 or 5% bovine follicular fluid for 14 days. Morphological characteristics, cell viability and expression of alkaline phosphatase and gene expression (VASA, DAZL, C-KIT, SCP3, ZPA and GDF-9), were evaluated. The gene expression results were analyzed using ANOVA followed by Kruskal-Wallis test (P <0.05). In stage 1, the culture with 2.0 μM of 5-Aza for 72 h caused changes in morphology and cell proliferation rate, and significantly increased the expression of pluripotency factors. The culture in medium containing BMP-2, BMP-4 or follicular fluid for 7 or 14 days, altered cellular morphology, and expression of specific genes for stem cells and oocytes. In stage 2, the ovarian stem cells expressed pluripotent genes, and after culture, this cells showed morphologic characteristics similar to PGC and oocytes, including the expression of alkaline phosphatase, and the expression of specific genes for PCG and oocytes. In conclusion, the present study describes the possibility of conversion of the skin fibroblasts and stem cells from ovarian surface of the bovine, in oocyte-like cells, similar oocyte cells, through the cell reprogramming process associated with the supplementation of BMP-2, BMP- 4 and follicular fluid. / Este estudo teve como objetivo investigar o efeito da 5-Aza-citidina durante a indução da pluripotência, e avaliar os efeitos do cultivo em meio contendo BMP-2, BMP-4 ou fluido folicular na diferenciação de fibroblastos em células germinativas primordias (CGP) e oócitos (fase 1). Além disso, isolar células-tronco do epitélio ovariano de bovinos e avaliar os efeitos da BMP-2, BMP-4 ou fluido folicular sobre a diferenciação destas células-tronco em estruturas semelhantes a oócitos (fase 2). Na fase 1, os fibroblastos foram tratados com 0.5, 1,0 ou 2.0 μM de 5-Aza por 18, 36 ou 72 h. Foi avaliada a morfologia, viabilidade celular e a expressão gênica (OCT-4, NANOG, REX e SOX2), para a seleção da concentração/tempo mais eficientes. Os fibroblastos foram então cultivados em meio suplementado com 10 ng/mL de BMP-2, ou 10 ng/mL de BMP-4 ou 5% de fluido folicular bovino, por 7 ou 14 dias. Posteriormente, foi feita a avaliação da morfologia e viabilidade celular, e expressão gênica (VASA, DAZL, C-KIT, SCP3, ZPA e GDF-9). Para a fase 2, as células-tronco da superfície ovariana foram isoladas, expandidas, cultivadas em meio de diferenciação contendo as 50 ng/mL de BMP-2, ou 50 ng/mL de BMP-4, ou BMP-2+BMP-4 ou 5% de fluido folicular bovino por 14 dias. Foram avaliadas as características morfológicas, viabilidade celular, e expressão da fosfatase alcalina e expressão gênica (VASA, DAZL, C-KIT, SCP3, ZPA e GDF-9). Os resultados de expressão gênica foram analisados usando ANOVA seguido pelo Teste de Kruskal Wallis (P<0,05). Na fase 1, o cultivo com 2.0 μM de 5-Aza por 72 h provocou mudanças na morfologia e na taxa de proliferação celular, e aumentou significativamente a expressão de fatores de pluripotência. Já o cultivo em meio contendo BMP-2, BMP-4 ou fluido folicular, durante 7 ou 14 dias, alterou a morfologia celular, e a expressão de genes específicos para células germinativas e oócitos. Na fase 2, as células-tronco do ovário expressaram genes de pluripotência e após o cultivo, as células apresentaram características morfológicas que se assemelhavam a CGP e a células semelhantes a oócitos, incluindo a expressão da fosfatase alcalina e a expressão de genes específicos de células germinativas e oócitos. Em conclusão, o presente estudo descreve a possibilidade de converter os fibroblastos da pele de bovinos e células-tronco da superfície ovariana, em células semelhantes a oócitos, através do processo de reprogramação celular, associado à suplementação do meio com BMP-2, BMP-4 e fluido folicular.

ALVES, Markênia Kélia Santos. Identificação de alterações moleculares associadas à expressão de CD133, CXCR4, CD44 E OLIG2 e metilação em promotor de CDKN2A em tumores astrocíticos. 2014. 89 f. Tese (Doutorado em biotecnologia)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2014. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-09-09T12:10:33Z No. of bitstreams: 1 2014_tese_mksalves.pdf: 2238362 bytes, checksum: f1bbe27ba89548ddbbd8b206939190d7 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2016-09-27T17:42:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_tese_mksalves.pdf: 2238362 bytes, checksum: f1bbe27ba89548ddbbd8b206939190d7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-27T17:42:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_tese_mksalves.pdf: 2238362 bytes, checksum: f1bbe27ba89548ddbbd8b206939190d7 (MD5) Previous issue date: 2014 / Currently, the concept that tumors are cell populations organized in a hierarchically heterogenous way in which stem-cells are relevantly important as these cells have the capacity of self-renew and of generating cell lineages in different phases of differentiation. So that, the identification of stem-cell components is essential to tumorigenesis understanding. Althought neural cell lineage markers have been identified, the association among these markers and neurological tumors is still scarce, and taking in consideration the astrocytomas, the association assessements are verified mainly regarding the glioblastomas. Among these stem cell markers, CD133, CXCR4 and CD44 are related to the glioma formation, migration and growth; on the other hand, OLIG2 is involved in cell destination. So far there are no studies evaluating all these markers together and their relationship to tumor grades. Additionally, specific epigenetic alterations, specially promoter methylation, have been widelly identified in these tumors, leading to gene inativation, mostly involving CDKN2A (p16INK4A protein), a tumor suppressor. Althought this mechanism is pointed as this gene main inactivator, there are still controvertial questions regarding the astrocytomas. In order to evaluate these questions, the present study aimed to determine CDKN2A pattern of methylation and expression and their association to clinicalpathological parameters, and if the presence of progenitor/stem-cells, taking CD133, CXCR4, CD44 and OLIG2 expression in consideration, could define subpopulations of cells which might be used as prognostic markers. So, in a series of 93 astrocytomas of different malignity grades, the expression of CD133, CXCR4, CD44, OLIG2 and p16INK4A was analysed by the imunohistochemistry technique, and the CDKN2A methylation status was assessed by methylation specific PCR (MS-PCR). The data was then associated to tumor grades, localization and other clinicalpathological parameters. The statistic analyses were made using X 2 test, Fisher's exact test, Spearman's correlation, kmeans groupment and principal component analyses, using p<0.05 as statistically significance. The imunopositivity of OLIG2 was predominant (73.1%), followed by CXCR4 (60.2%), CD44 (55.9%) and CD133 (45.2%). The correlation and groupment analyses defined two different population subtypes, a CXCR4(+)CD133(+)CD44(+) subtype and a OLIG2(+) subtype. CXCR4(+)CD133(+)CD44(+) tumors became more frequent as malignity grew. In grade IV, this subtype was significantly more frequent (p=0.008), being also in diffuse tumors. Additionally, CXCR4(+) and CD133(+) tumors were preferentially located in brain hemisferes and in the ventricles, and mostly in aged >30 patients. On the other side, OLIG2(+) tumors were associated to the cerebellum, which is the pylocitic tumor preferential localization. A strong negative correlation between nuclear and cytoplasmatic imunopositivity and promoter methylation in CDKN2A was observed. Also, a negative significant correlation between methylated CDKN2A and patient's age was found; moreover, feminine patients presented a higher frequency of methylated CDKN2A. In conclusion, the presence of stemcell subpopulations in astrocytomas indicates tumoral progression, in which CXCR4, CD133 and CD44 may be potentially used together as prognostic markers. The association between tumor localization and patient's age also corroborates these findings. Additionally, the CDKN2A inactivation by promoter methylation is a frequent event in astrocytomas and it is associated to patient's age and gender. / Tumores são populações celulares heterogêneas hierarquicamente organizadas, cujas células-tronco possuem importância relevante desde que são células com a capacidade de se renovarem e de gerarem linhagens em fases diferentes. Dada a sua importância, a identificação de componentes de células-tronco é essencial para o entendimento da tumorigênese. Apesar de marcadores de linhagem neural terem sido identificados, a associação destes marcadores com os tumores cerebrais ainda é escassa e nos astrocitomas são relacionados principalmente aos glioblastomas. Entre esses marcadores de células-tronco,CD133, CXCR4 e CD44 são relacionados à formação do glioma, migração e crescimento; por outro lado, OLIG2 é envolvido no destino celular. Não existem estudos, até essa data, que avaliam todos esses marcadores juntos e sua relação com grau tumoral. Adicionalmente, alterações epigenéticas específicas, especialmente a metilação em promotor, tem sido identificadas nestes tumores, levando a inativação de genes, com destaque o CDKN2A (proteína p16INK4A), um supressor tumoral. Apesar de esse mecanismo ser apontado como o principal inativador desse gene, em astrocitomas ainda existem questões controversas. Para avaliar essas questões, este estudo objetivou determinar a expressão e padrão de metilação em promotor de CDKN2A e sua associação com parâmetros clinico-patológicos e se a presença de células-tronco/progenitoras, considerando a expressão de CD133, CXCR4, CD44 e OLIG2 poderia definir subpopulações de células que podem ser usadas como marcadores prognósticos. Para isso, em uma série de 93 astrocitomas de diferentes graus de malignidade, foram estudadas a expressão dos marcadores CD133, CXCR4, CD44, OLIG2 e p16INK4A, detectada pela técnica de imunohistoquímica, e o padrão de metilação em promotor de CDKN2A, por PCR específico para metilação (PCR-MS). Os dados foram então associados com grau tumoral, localização e outros parâmetros clinico-patológicos. As análises estatísticas foram realizadas usando o teste do X2, teste exato de Fisher, correlação de Spearman, agrupamento de k-means e análise de componentes principais, com diferenças consideradas significantes com p<0.05. A imunomarcação de OLIG2 mostrou a frequência maior de positividade (73,1%), seguido por CXCR4 (60,2%), CD44 (55,9%) e CD133 (45,2%). Análises de correlação e agrupamento definiram dois subtipos de população de acordo com os marcadores estudados, um subtipo CXCR4(+)CD133(+)CD44(+) e outro OLIG2(+). Tumores CD133, CXCR4 e CD44 positivos aumentaram de acordo com malignidade. No grau IV, este subtipo de tumores [CD133(+)CXCR4(+)CD44(+)] foi significantemente mais frequente (p=0,008) e também nos tumores difusos. Adicionalmente, tumores com CXCR4(+) e CD133(+) foram preferencialmente localizados nos hemisférios cerebrais e nos ventrículos, e a maioria nos pacientes com idade ≥ 30 anos. Por outro lado, tumores OLIG2(+) foram associados com o cerebelo, que é a localização preferencial do astrocitoma pilocítico. Uma forte correlação negativa entre imunomarcação nuclear e citoplasmática e metilação em promotor de CDKN2A foi encontrada. Além do mais, uma correlação negativa significante entre metilação em promotor de CDKN2A e idade foi observada e pacientes do sexo feminino tiveram uma maior frequência significante de CDKN2A metilado em promotor que o sexo masculino. Em conclusão, a presença de subpopulações de células-tronco em astrocitomas é indicativa de progressão tumoral, cujos marcadores CXCR4, CD133 e CD44 podem ser potencialmente usados em conjunto como marcadores prognósticos. A associação com localização do tumor e idade também corroboram esses achados. Adicionalmente, a inativação de CDKN2A por metilação em promotor é um evento frequente em astrocitomas e é relacionada à idade e sexo dos pacientes.

DUARTE, F. B. Estudo molecular do gene TP53 e da expressão da proteína p53 nas características prognósticas de pacientes com síndrome mielodisplásica de baixo risco. 2016. 82 f. Tese (Doutorado em Cirurgia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-10-26T17:13:43Z No. of bitstreams: 1 2016_tese_fbduarte.pdf: 1545841 bytes, checksum: 5d8f0dd94203aa2a3a11afaa5c32fc96 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-10-26T17:13:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_tese_fbduarte.pdf: 1545841 bytes, checksum: 5d8f0dd94203aa2a3a11afaa5c32fc96 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-26T17:13:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_tese_fbduarte.pdf: 1545841 bytes, checksum: 5d8f0dd94203aa2a3a11afaa5c32fc96 (MD5) Previous issue date: 2016-10-11 / The Myelodysplastic Syndrome (MDS) comprises a heterogeneous group of clonal diseases with complex pathogenesis, involving several phases and factors. TP53 gene mutations have been involved in progenitor cell homeostasis alterations with an impact on relevant functions in the development of neoplasms, such as genomic integrity maintenance, cell cycle regulation, apoptosis and inflammatory response. The aim of the study was to investigate the impact of the p53 protein expression, TP53 gene mutations and the R72P polymorphism on patients with low-risk MDS, associating them with clinical markers and prognostic scores and their applicability as an additional criterion to support hematopoietic stem cell transplantation (HSCT) indication. This is an analytical and prospective study involving 73 patients, of both genders, stratified as low risk, followed at the Outpatient Clinic of Walter Cantídio University Hospital (HUWC) from February 2012 to August 2016. The p53 protein expression was assessed by immunohistochemistry, whereas the mutations and the R72P polymorphism were analyzed by direct sequencing. The statistical analysis used the GraphPad Prism 5.0 software and the significance level was set at p <0.05. Of the 73 patients who participated in the study, 20 (27.4%) were positive for the p53 protein expression. In the group with p53 expression, there was a significant reduction in hemoglobin and hematocrit levels, with increased frequency of fibrosis, hypercellularity and CD34 positivity in megakaryocytes. Of the 73 patients, 35 were screened for mutations in the TP53 gene and R72P polymorphism. Two mutations were identified in the study population, with a frequency of 5.7%. A nonsense mutation was identified for the first time in MDS in a female patient and a missense mutation, not yet reported in the literature, in a male patient. As for the R72P polymorphism, there was a predominance of the G allele and the GG genotype. All patients with "heterozygous" (CG) genotype were males. There was no association between mutations, polymorphism genotypes and clinical and prognostic parameters. During the study follow-up, two patients had indication for hematopoietic stem cell transplantation. One of them was positive for p53 in 40% of granulocytic precursors and died six months after the diagnosis. The second, who was negative for p53 expression and TP53 mutation, was submitted to HSCT and is in a stable condition. The results showed that p53 expression can influence clinical evolution and is associated with poor prognosis even in low-risk patients, reflecting the complexity of MDS and providing subsidies for further studies aiming to clarify the impact of the TP53 gene and the protein expression on the disease origin, progression and its therapeutic management, including HSCT. / A Síndrome Mielodisplásica (SMD) compreende um conjunto heterogêneo de doenças clonais com a patogênese complexa, que envolve várias etapas e fatores. As mutações no gene TP53 têm sido implicadas em alterações na homeostase de células progenitoras, com impacto em funções relevantes no desenvolvimento de neoplasias, como manutenção da integridade genômica, regulação do ciclo celular, apoptose e resposta inflamatória. O objetivo do estudo foi investigar o impacto da expressão da proteína p53, mutações no gene TP53 e do polimorfismo R72P em pacientes com SMD de baixo risco associando-os aos marcadores clínicos e com escores prognósticos e a sua aplicabilidade como critério adicional para auxiliar a indicação do TCTH. Trata-se de um estudo analítico e prospectivo envolvendo 73 pacientes, de ambos os sexos estratificados como de baixo risco, em acompanhamento no ambulatório do Hospital Universitário Walter Cantídio (HUWC), no período de fevereiro de 2012 a agosto de 2016. A expressão da proteína p53 foi avaliada por imunohistoquímica, as mutações e o polimorfismo R72P foram analisados por sequenciamento direto. A análise estatística utilizou o programa GraphPad Prism 5.0 e considerou o nível de significância do p<0,05. Dos 73 pacientes que participaram do estudo, 20 (27,4%) foram positivos para a expressão da proteína p53. No grupo com expressão de p53 houve significativa redução dos níveis de hemoglobina e hematócrito com aumento da frequência de fibrose, hipercelularidade e positividade CD34 em megacariócitos. Dos 73 pacientes, 35 foram analisados quanto a pesquisa da mutação do TP53 e do polimorfismo R72P. Foram identificadas duas mutações na população em estudo, com uma frequência de 5,7%. Uma mutação nonsense foi identificada pela primeira vez na SMD, em um paciente do sexo feminino e uma mutação missense, ainda não descrita na literatura, em um paciente do sexo masculino. Quanto ao polimorfismo R72P, houve uma predominância do alelo G e do genótipo GG. Todos os pacientes com o genótipo “heterozigoto” (CG) foram do sexo masculino. Não houve associação entre as mutações, os genótipos do polimorfismo e as variáveis clínicas e de prognóstico. Durante o seguimento do estudo, dois pacientes apresentaram indicação para o transplante de células tronco hematopoiéticas. Um deles foi positivo para p53 em 40% dos precursores granulocíticos e foi a óbito seis meses após o diagnóstico. O segundo, negativo para a expressão de p53 e mutação TP53, foi submetido ao TCTH, e encontra-se estável. Os resultados mostraram que a expressão de p53 pode influenciar evolução clínica e está associada a pior prognóstico, mesmo em pacientes de baixo risco refletindo a complexidade da SMD e fornecendo subsídios para novos estudos, a fim de esclarecer o impacto do gene TP53 e da expressão da proteína na origem, na progressão da doença e na conduta terapêutica, incluindo o TCTH.

A associação das células-tronco (CT) com os biomateriais prometem ser os protagonistas para o futuro da medicina regenerativa no tratamento de lesões de tecidos e órgãos. No presente trabalho, as células-tronco foram cultivadas em matrizes construídas pela técnica de electrospinning, usando o polímero poli-D,L-ácido láctico (PDLLA) associado ou não à biomassa da microalga Spirulina (PDLLA/Sp), que possui componentes bioativos de interesse para a engenharia de tecidos (ET). As análises físico-químicas realizadas foram a avaliação da morfologia, do diâmetro das fibras, da degradabilidade, da rugosidade, do teor de solvente residual, do ângulo de contato com água, entre outros. A adesão e a proliferação celular, bem como a citotoxicidade do biomaterial também foram avaliados. As nanofibras obtidas apresentaram-se sem beads e com características semelhantes às da matriz extracelular natural (MEC) em termos de propriedades mecânicas e topográficas. Nos testes biológicos, verificou-se que as CTs aderiram mais e tiveram maior viabilidade nos scaffolds de PDLLA/Sp, quando comparado com as matrizes de nanofibras de PDLLA. Ambos os biomateriais mostraram-se atóxicos para as CTs. Pode-se concluir que as matrizes desenvolvidas neste trabalho apresentam as características necessárias de um novo biomaterial adequado para uso na ET. / The association of stem cells (SCs) with biomaterials promises to be the protagonist for future regenerative medicine in the treatment of tissue and organ lesions. Stem cells were cultivated in scaffolds constructed by the electrospinning technique, using poly-D,L-lactic acid (PDLLA) associated or not with Spirulina biomass (PDLLA/Sp), which has bioactive components of interest for tissue engineering (TE). Physicochemical analyses were performed, such as morphology, fiber diameter, degradability, residual solvent, roughness, contact angle with water, among others. SC adhesion and proliferation and scaffold cytotoxicity were also evaluated. Nanofibers without beads and with characteristics similar to the natural extracellular matrix (ECM) in terms of mechanical and topographical properties were obtained. In biological tests it was found that SCs adhered more and had greater viability in the PDLLA/Sp molds, when compared to the PDLLA scaffolds. The scaffolds were shown to be atoxic for the SCs. It can be concluded that the scaffolds developed in this work have the characteristics to be a new biomaterial suitable for use in TE.